JPH03504599A - 酵素的分割系およびこの系において有用な化合物およびその製造 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

酵素的分割系およびこの系において有用な化合物およびその製造 関連出願の記載 本出願は、１９８９年１月２４日に発行された米国特許第４、８００．１６２号 の部分継続出願である。 １．０序論 本発明は物質の新規な合成物およびその製造方法に関し、この合成物がエステル のラセミ混合物の水性酵素的分割反応において使用される、増大した水溶性を有 するエステルであるものに関する。ラセミ混合物の別個のキラル異性体を製造す ることの重要性は、しばしば異なった生物学的活性を有する異性体を分離するこ とにある。本発明の水溶性エステルに関する特別の意義は、エステルがその水溶 性を増大させる基によって誘導されること、および水性環境下において仲介され る、本発明の新規な酵素的分割方法によるその反応性である。 エステルの著名なラセミ混合物の酵素的分割反応を促進するための本発明の新規 な方法は、抽出相が存在しない均一な水性反応系、および、抽出相が存在する多 相分散抽出反応に関係する。多相分散抽出反応において、抽出相は、分割反応生 成物（ラセミ混合物の立体異性体の１つ）を他の立体異性体から分離する役目を 果たす。エステルの著名なラセミ混合物の均一な酵素的分割を促進するための本 発明の新規な方法は、さらに、酵素が（１）水相において、（２）膜と関連して 、または（３）水相中および膜に関連する、のいずれかの状態に置かれ、水性の エステル相は膜の一面に接触しており、かつ、有機抽出相は膜の他の面と接触す るものである、抽出膜リアクターに関係する。抽出相は分割した反応生成物を取 り出すのに役立つ。 ２．０　　発明の背景 酵素的分割手法は長いこと知られており、特に、予備的規模てラセミ混合物を分 離するために利用されている。 ２．１　　光学的に純粋であることの意義立体化学的に純粋であることは医薬分 野において極めて重要であり、最も多く処方される薬品のうち１２個がキラリテ ィーを示す。その良い例はナプロキセン、即ち、　（＋）−Ｓ−２−（６−メド キシー２−ナフチル）プロパン酸であり、これは、例えば関節炎の治療において 使用される非ステロイド性抗炎症活性を有する２−ア４ノールプロパン酸類の最 も重要な２個のうち１つである。この例において、この薬品のＳ（＋）鏡像体は そのＲ（−）の対応物よりも２８倍も治療効果が強いことが知られている。キラ ル医薬品のその他の例はベーターブロッカ−の一群により与えられる：プロブラ ノロールのＬ−形はそのＤ−鏡像体よりも１００倍以上効力かあることが知られ ている。 通常の有機合成手法による不斉中心をもつ化合物の合成は、一般的にラセミ混合 物を生じ、この混合物は、混合物中の成る種の立体異性体が生物学的にまたは機 能的に不活性になりがちであるから、全体として、相対的に低い比生物活性を有 することとなる。結果として、有効量を得るためには、より多量の物質が使用さ れなければならず、かつ、その製造コストは、立体化学的に“不適当な”同時生 成、すなわち不活性な成分のために増大する。場合によっては、ある種の異性体 は単に不活性である以上に、実際に心身に有害であるかもしれない。 ２．２　　光学的に純粋な化合物を得るための慣用手段通常の化学的反応により 製造されるラセミ混合物を分割するための一般的アプローチが大いに必要とされ ており、多くのアプローチが使用されてきた。ここで使用される　゛°ラセミ混 合物”という用語は、第１および第２の立体異性体はを任意の比率で有する混合 物をいい、この第１および第２の立体異性体は反射的対称（ｒｅｆｌｅｃｔｉｖ ｅ　ｓｙｍｍｅｔｒｙ）のいかなる要素をも有しない鏡像体である。さらに、こ こで使用される“分割”という用語は、上述のように、ラセミ混合物を２個の生 成物混合物へ変換することに言及することを意図しており、２個の生成物混合物 における２個の上述の立体異性体の割合は出発ラセミ混合物とは異なり、かつ、 互いに異なるもので、割合は一方においてより大きく、必然的に他方においてよ り小さいものである。さらに、これらの生成物混合物のそれぞれにおいて、ｌま たは複数の新規化合物が存在しうるものであり、生成物混合のそれぞれは鏡像体 である第１および第２の立体異性体を有しており、この新規化合物の一つの立体 異性体の割合は、−の生成物混合物において、他の生成物混合物におけるよりも 一層大きいものである。“分割された”という用語は、分割可能であって、光学 的に活性な生成物質を得るために上述の分割工程が行われた任意の化合物の量に 言及することを意図する。最後に、ここで使用される“立体特異的”および“立 体選択的”という用語は、同じ意味である。 広く使用されている方法は、所望の化合物をラセミ混合物から選択的に沈澱させ ることである。例えば、ヨシ才力等（米国特許第３．８７９．４５１号明細書） は、（±）−シス−および（±）−トランス−菊酸の混合物を光学的に活性な芳 香族アミンで処理し、（±）−シス−および（±）−トランス−菊酸のアミン塩 を結晶化により回収した。ナプロキセンのＳ（＋）−鏡像体は、シンコニジン、 グルカミン、またはＮ−メチルグルカミン等のアミン分割剤により形成されたジ アステレオマー塩の立体選択的な結晶化により得ることができる［Ｈａｒｒｉｓ ｏｎ。 Ｌ　Ｔ、等、Ｊ、　Ｍｅｄ、　Ｃｈｅｍ、、　１３：２０３（１９７０）；　Ｆ ｅ１ｄｅｒ、　Ｅ。 等、英国特許出願２０２５９６８Ａ　（１９８０）］。 上述の方法ではラセミ混合物を成功裏に分割できた。 なぜならば、光学的に純粋な反応体による混合物の処理は最初のラセミ化合物と は異なる物理的特性を有するジアステレオマーを与えたからである。このように 分別結晶または他の物理的手段は、ジアステレオマー化合物を分離するために使 用しつる。 ジアステレオマーの分離は、クロマトグラフィーによっても実施しつる。例えば 、Ｐｏ１ｌｏｃｋ等は、ガスクロマトグラフィーによりジアステレオマーアミノ 酸を分割した［Ｊ、　Ｇａｓ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ、　３：１７４（１９６ ５）］。Ｍｉｋｅｓ等は、ジアステレオマージペプチドを分割するために液体ク ロマトグラフィーを使用した［Ｊ、　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒ。 １１２：２０５（１９７６）］。 ２．３　　不均一混合物中における親油性化合物の酵素触媒生物学的変換 不均一反応系において、アルコール、カルボン酸、エステル、アミドおよびアミ ンを含む多くの種類の親油性有機化合物の生物学的変換のために、種々の酵素が 使用されてきた。特に、酵素による生物学的変換は、著名な化合物の立体選択的 合成を触媒するのに有用であることが示されている。 ２．３．１　　非立体選択的反応 多くの場合、大規模な工業的生物学的変換において酵素触媒を利用するための生 化学技術者の試みは、水溶性基質を含有する水性反応系において酵素を使用する ことに焦点が当てられた。グルコース異性化酵素によるグルコースのフルクトー スへの変換は、そのような例である。しかしながら、酵素は親油性（すなわち、 水にほとんど溶けない）の基質の生物変換においても使用される。例えば、構造 的に複雑な医薬化合物および農薬の多くは、酵素的生物学的変換の第１の候補で ある。特に、このような複雑な分子は、しばしばキラルである。不都合なことに は、これらの複雑な分子の多くは極めて低い水溶性を示し、かかる水溶性に乏し い基質を均一な水溶液中で通常の固定化酵素バイオリアクターに供給することは 、幾つかの理由により、一般的には非実用的である。一方では、希薄な反応系を 扱うための大きさの酵素リアクターは過度に大きくなり、かかる希薄な水性工程 流からの生物学的生成物の回収および濃縮はひどく高価であることがしばしば判 明するであろう。従来のアプローチの幾つかは、水混和性の共溶媒の使用を含む 水不溶性基質の酵素触媒による変換をより効率的に行うこと［タナ力、Ａおよび Ｓ。 フクイ、“有機溶媒の存在下における固定した生触媒による親油性化合物の生物 学的変換”　１４９−１７６頁、Ｅｎｚｙｍｅｓ　ａｎｄ　Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚ ｅｄ　Ｃｅ１ｌｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ。 Ａ、　　１．　　Ｌａ５ｋｉｎ、　　ｅｄ、、　　Ｂｅｎｊａｍｉｎ／ＣｕＣｕ ｍｍ１ｎ　ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ、、　　Ｍｅｎｌｏ　Ｐａｒｋ、　　ＣＡ 　（１９８５）；　Ｋ１１ｂａｎｏｖ、　　Ａ、　　Ｍ、　　ｅｔａｌ、、　Ｂ ｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、　１９：１３５１　（１９７７）］　 、および、多相系における水にほとんど溶けない基質の酵素触媒による生物学的 変換の実施［Ｌｉ１ｌｙ、　Ｍ、、　Ｊ、　Ｃｈｅｍ。 Ｔｅｃｈ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、、　３２：１６２　（１９８２）；　Ｃａ ｒｒｅａ、　Ｇ、。 Ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　２：１０２　（１８８４）］の ために検討がなされてきた。しかしながら、１９８９年１月２４日発行の米国特 許第４　、８００．１６２号に記載されているように、これらのアプローチのい ずれにも問題がある。 多相バイオ触媒反応の他の例は、トリグリセリド（例えば、オリーブ油）の脂肪 酸への酵素的加水分解［Ｌｉｎｆｉｃｌｄ、　Ｗ、　Ｍ、　ｅｔ　ａｌ、、　Ｊ ＡＯＣＳ、　６１：］９１　（１９８４）］、および、アルケンからの光学的に 活性なエポキシド（例えば、１．２−エポキシオクタン）の微生物学的製造［ｖ ａｎｄｅｒ　Ｍｅｅｒ、　Ｃｈｅｍ、　Ｅｎｇ、　Ｓｃｉ、、　４１：６０７　 （１９８６）］である。 ２　、３．２　　立体特異的分割 この問題に対して述べられている分別結晶法はすべて、適当な光学的に純粋な試 薬の利用性に依存しているが、かかる試薬はしばしば利用できず、また、さもな ければ、それらの使用は極めて高価である。他のアプローチにより、酵素的分割 方法が開発された。加水分解酵素（特にリパーゼ、プロテアーゼ、およびキモト リプシンのようなエステラーゼ）、脱離酵素および酸化還元酵素（例えば、アミ ノ酸オキシダーゼおよびアルコールレダクターゼ）を含む、多くの異なった種類 に属する酵素が、予備的規模において立体異性体の分割のために使用されてきた 。一般的に言って、分割に於いて使用される酵素は、広範囲の“非天然型”基質 の反応を触媒しつるようにするため、理想的には広範囲の基質特異性を示すべき であり、そして、他のものを除外して一つの異性体の反応を触媒するための高度 な立体選択性を示すべきである。 加水分解酵素（例えば、リパーゼ、プロテアーゼおよびエステラーゼ）は、分割 において使用するための一層魅力のある酵素である。というのは、それらは合理 的なコストで商業的に入手でき、それらは高価な補助因子を必要とせず、そして 、それらのいくつかは有機溶媒に対して合理的な耐性を示すからである。さらに 、キラル化学はしばしばキラル炭素をもつアルコール、カルボン酸、エステル、 アミドおよびアミンに関連し、そしてカルボン酸加水分解酵素は、かかる種の反 応のための立体選択的な触媒として好ましい選択である［Ｃａｍｂｏｕ、　Ｂ、 およびＡ、　Ｍ、　Ｋ１１ｂａｎｏｖ、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ。 Ｂｉｏｅｎｇ、、　２６：１４４９（１９８４））。 多くの医薬および農薬は水中において極めて低い溶解性を示し、その結果、上述 のとおり、かかる化合物の酵素仲介の光学的分割の多くは、多相反応条件で実行 された１つのかかる例に於て、ＣａｍｂｏｕおよびＫｌ　１ｂａｎｏｖは、除草 剤の誘導体である２−（ｐ−クロロフェノキシ）プロパン酸のリパーゼ仲介の分 割を検討した［Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、　２６：１４４９（ １９８４）］。彼らは、酵母リパーゼ（キャンディダ・シリンドラセア、Ｃａｎ ｄｉｄａ　Ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ）が、ラセミ酸の単純エステル（例えば、メ チルエステル）の加水分解を触媒するために使用されたとき、（Ｒ，５）−２− （ｐ−クロロフェノキシ）プロパン酸の分割において高度に立体特異的であるこ とを見い出した。これらのエステルは実質的に水不溶性であるので、分割操作は 、３個の別個の相が存在する多相反応系：即ち、ラセミ反応体エステル、水性緩 衝液、および固定化酵素を含む有機相中で必然的に行われる。 さらに、酵素的処理は、アミノ酸エステルのラセミ混合物の分割にも利用されて いる。５ｔａｕｆｆｅｒはＮ−アシル−Ｄ、　Ｌ−メチオニンエステルを微生物 由来のプロテアーゼで処理し、次いで、反応混合物から酸生成物を分離すること により光学的に純粋なＮ−アシル−し−メチオニンを製造した（米国特許第３　 、９６３．５７３号明細書）。同様に、Ｂａｕｅｒは、Ｎ−アシル−Ｄ、　Ｌ− フェニルアラニンエステルのラセミ混合物にセリンプロテアーゼを作用させ、影 響を受けなかったＮ−アシル−Ｄ−フェニルアラニンエステルを分離し、そして 、Ｎ−アシルおよびエステル基を除去することにより、光学的に純粋なり一フェ ニルアラニンエステルを製造した（米国特許第４．２６２．０９２号明細書）　 ｏ　ＣｌｅｍｅｎｔおよびＰｏｔｔｅｒはフェニルアラニンを分割するためにキ モトリプシンを使用し、そして、Ｍａｔｔａ等は医薬の３−（３，４−ジヒドロ キシフェニル）アラニンの前駆体、即ち、ドーパの分割において同じ酵素を使用 した［Ｊ。 Ｏｒｇ、　Ｃｈｅｍ、、　３９：２２９１（１９７４）］。 キモトリプシンによるアミノ酸分割は、最初にアシルおよびエステル誘導体を常 法により形成し、次いで、ラセミ混合物を酵素的加水分解にかけることから成る 。 水溶性の乏しい不活性り一エステルは、一般的には、有機溶媒での選択的な抽出 によって、よりいっそう水溶性のＮ−アシル化Ｌ−アミノ酸生成物から分離され る。遊離のし−およびＤ−アミノ酸は所望ならば（例えば、酸加水分解により） 回収することができ、そして、所望でない異性体はラセミ化されそして再循環さ れる。あるいはまた酵素からの反応生成物の分離は、遠心分離により除去可能で あるかまたはラセミ混合物を通過させる。カラムに充填しうる固相支持体に酵素 を付着させることにより容易にされてきた。Ｍａｔｓｏｎは、Ｎ−アセチル−Ｄ 、　Ｌ−チロシンエチルエステルの水性ラセミ混合物中でＬ−アミノ酸エステル 結合を選択的に開裂させるために、膜上に固定したキモトリプシンを使用した。 ５ｃｏｌｌａｒ等は、Ｄ、　Ｌ−スレオニンの予備的規模の分割において酸ホス ファターゼを用いた［Ｂｉｏｔｅｃｈ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、　２７：２４７　（ １９８５）］。 追加の例は、光学的に精製された医薬の製造のために使用される酵素仲介分割の 技術水準を提供しつる。 例えば、一定の光学的に純粋なり一アミノ酸（特に、フェニルグリシンおよび４ −ヒドロキシフェニルグリシン等のＤ−アリールグリシン）は、半合成ペニシリ ンおよびセファロスポリンの製造において側鎖として使用される。５ｃｈｕｔｔ 　ｅｔ　ａｌ等は、光学的に精製されたＤ−アミノ酸を得る目的で、非極性Ｎ− アシル−Ｄ、　Ｌ−アミノ酸エステルのラセミ混合物に対して、二相系において サブチリシンの加水分解を行なった［Ｂｉｏｔｅｃｎｏｌ。 Ｂｉｏｅｎｇ、、　２７：４２０　（１９８５））。 より詳細には、イブプロフェンおよびナプロキセンの微生物学的または酵素仲介 分割も提供される。しかしなから、これらの例では、水と非混和性の酵素反応体 を用いる。結果として、水溶性酵素による分割に対する反応の感受性は、所望さ れるよりも小さい。 Ｓ、　　ＩｒｉｕｃｈｉｊｉｍａおよびＡ、ｋｅｉｙｕは、Ａｇｒｉ、　Ｂｉｏ 、　Ｃｈｅｍ、。 ４５、１３８９　（１９８１）において、無傷の微生物を使用することにより　 （±）−２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパン酸のメチルエステルを部 分的に分割した。 残念なことに、変換の割合は極めて低かった（基質の１６．３％が変換された） 。というのは、細胞内の酵素濃度は低く、乾燥した細胞の量（４００■）は（± ）−基質（１６０■）より多かったからである。従って、この方法は所望の目的 を達成できなかった。 他の文献において、微生物に由来する酵素がナプロキセンとイブプロフェンのエ ステルを分割するために使用された。Ｃ，Ｊ、　Ｃ，Ｊ、　Ｓｉｈ等は、Ｔｅｔ ｒａｈｅｄｒＯｎＬｅｔｔｅｒｓ、　２７（１６）、　１７６３−１７６６　（ １９８６）において、イブプロフェンとナプロキセンのエステルは微生物由来の リパーゼを使用して、立体特異的に分割しうることを記載している。使用された 特定のエステルは、メチル、エチル、ｎ−ブチル、ｎ−ペンチル、ｎ−ヘキシル 、ｎ　−ヘプチル、ｎ−オクチル、２−クロロエチル、シアノメチルおよび２− ニトロプロピルである。Ｃ，Ｊ、　Ｓｉｈの欧州特許第０．２２７．０７８号Ａ Ｉにおいて、イブプロフェンとナプロキセンエステルは、種々の微生物からのリ パーゼで分割された。Ｓｉｈは、エステル基は“好ましくは炭素原子数１から１ ２を有する直鎖状、分枝状、または環式アルキル基であり、これは適宜フェニル 、または、ｌあるいは複数の電子吸引性置換基、例えばハロゲン、ニトロ、シア ノ、水酸基、０１〜４−アルコキシ、０１〜４−アルキルチオ。または−Ｃ（０ ）Ｒ’で置換されてもよいものであり、ここでＲ′はＣ１〜４−アルコキシ、０ ３〜６−シクロアルコキシ、フェノキシ、ベンジルオキシ、ＮＲ”Ｒ２［Ｒ”と Ｒ３は独立に水素、０１〜４−アルキル、０３〜６−シクロアルキル、または窒 素原子とともに５または６員環を形成し、この環は０．　ＮＨ，または、Ｎ−（ Ｃ１〜４アルキル）から選ばれる複素基を適宜含有する］、または−〇Ｍ、　　 ここでＭはアルカリ金属である・・・・［第３頁１”と開示しているが、しかし ながら、Ｓｉｈはメチル、ｎ−ブチル、ｎ−ヘキシル、ｎ−オクチル、ｎ−ドデ シル、ベンジル、２−クロロエチル、２，２．２−トリクロエチル、シアノメチ ル、２−ニトロプロピル、２−ブロモエチル、カルボエトキシメチル、メトキシ メチル、２−フルオロエチルおよび２．２．２−トリフルオロエチルエステルの 使用を記載しているのみである。Ｊ。 Ｍａｉｅｒ等は、西独国特許第３　、３４５．６６０号公開明細書中で酵素調製 物を使用するナプロキセンの“低級アルキル”エステルの立体特異的な分割を記 載している。 “低級アルキル′という語は、Ｃ１から０４のアルキル基を意味する。これらの 文献で共通するのは、水性媒質中で酵素調製物による分割のための、水不溶性を 示すエステルの使用である。それゆえ、酵素的変換は、本質的に不均一であった 。 フィリップ等（Ｐｈｉ　１ｌｉｐｓ）は、欧州特許第２０５．２１５号において 、２−置換プロパンを立体選択的に酸化するために微生物由来の酵素を使用する 、イブプロフェンおよびナプロキセンの他の製法を記載しており、この方法にお いて、プロパンの末端メチル基の１個が相応のカルボン酸基に酸化されている。 立体特異的酸化は、酸化されたプロパンの２位においてＳ−配位の製造を促進す る。しかしながら、この立体特異的酸化は、結果的にはイブプロフェンまたはナ プロキセンの水非混和性エステルの従前から知られている酵素的立体特異的分割 とは区別される。 残念なことに、従来の著名な多相／不均一反応系は、幾つかの欠点、特に工業的 規模において幾つかの欠点を有している。例えば、スケールアップおよび信頼性 の問題は、しばしば、分散物および乳化液の処理と関連しており、そして、操作 およびｐＨコントロール（特に加水分解反応において）は実施上困難である。さ らに、生成物を回収する前に相は分離されなければならず、そして水相に於いて 水溶性に乏しい基質の拡散に関連して、過剰の相間物質移動抵抗がしばしばみら れる。 このように、酵素により触媒される変換の効率的な実施のためには、よりすぐれ たりアクタ−のデザインおよび方法が必要である。加えて、不均一反応系におけ るキラルのカルボン酸エステルの水不溶性エステルの酵素的分割に関連するこれ らの欠点の多（は、もし工ステル誘導体の水溶性を実質的に増大できれば、減す ることができ、または、消失させることができよう。 ３．０　　発明の概要 この発明は、新規な物質の合成物およびそれらの新規な製造方法に関する。これ らの化合物の重要性は、エステルの水溶性を高める置換基で誘導された新規なラ セミエステルの水性酵素的および均一分割を実施する際に有用であるという点に 存する。本発明の新規に製造されたラセミエステルは、その水溶性を高めるため に、スルフェート、スルホネート、ホスフェートおよび第４級アミン置換基で誘 導される。 本発明は、さらに、これらのラセミエステルの水性酵素的分割を行う新規な方法 に関し、この分割は５つの方法で分割が実施される。ｌの方法に於いて、分割は 酵素およびラセミエステルを水相に置くことにより実施され、この際、エステル の鏡像体の１つは優先的および立体特異的に脱エステル化される。他の方法に於 いて、分割は酵素およびラセミエステルを水相に置き、さらに、この水相を有機 相と接触させることにより実施される。エステルの鏡像体の１つの優先的かつ立 体特異的な脱エステル化が生じ、脱エステル化反応によるキラル酸生成物は有機 相中に抽出される。他の３つの方法に於いては、ラセミ混合物は、膜の一方の面 と接触する水相に置かれ、この膜の他の面は有機相に接触しており、そして、優 先的かつ立体特異的な分割は、この膜装置を使用し、酵素は（１）水相に置く、 （２）膜と関連して置く、または（３）水相および膜と関連して置くのいずれか により実施される；この際、脱エステル化反応のキラル酸生成物は膜の他の面で 有機相中に抽出される。 ４、

【図面の簡単な説明】

本発明は以下に記載する発明の詳細な説明および図面を参照することにより、一 層容易に理解しつるであろう。 第１図は増大した水溶性をもつエステルのラセミ混合物を分割するための方法に 関する概略図であり、ここで、膜の一方の面への水流により供給された混合物は 、１）水相にある、２）膜と関連する、または３）水相にありそして膜と関連す る、のいずれかの酵素により立体特異的に加水分解され、そして、このようにし て製造された光学的に富化した有機酸は膜の他の側に供給される共流（Ｃｏｃｕ ｒｒｅｎｔ）の有機プロセス流により回収され；そして加水分解されない光学的 に富化したエステルは水流に保持される。 第２図は水溶性の高められたエステルのラセミ混合物を分割する方法についての 概略図であり、ここで、水流中で膜の一方の側に供給された混合物は、１）水相 中にある、２）膜と関連して存在する、または３）水相中および膜と関連して存 在する酵素により立体特異的に加水分解され、そして、こうして製造された光学 的に富化した有機酸は膜の他の側に供給された向流の有機プロセス流により回収 され：そして、加水分解されない光学的に富化したエステルは水流中に保持され る。 第３図は、酵素が膜と関連して存在する反応工程における種々の有機溶解性およ び水溶性の関連物の相分配挙動に加えて拡散および反応流を図示する目的のため の、有機および水性プロセス流と共に、第１図および第２図に記載した抽出膜リ アクタープロセス中の膜を示す概略の断面図である。 第４図は、酵素が水相中および膜と関連して存在する反応工程における種々の有 機溶解性および水溶性の関連物の相分配挙動に加えて、拡散および反応流を図示 する目的のための、有機および水性プロセス流と共に、第１図および第２図に記 載した抽出膜リアクタープロセス中の膜を示す概略の断面図である。 第５図は、酵素が水相中に存在する反応工程における種々の有機溶解性および水 溶性の関連物の相分配挙動に加えて、拡散および反応流を図示す流目的のための 、有機および水性プロセス流とともに、第１図および第２図に記載した抽出膜リ アクタープロセス中の膜を示す概略の断面図である。 第６図は、慣用の分散相の多相バイオリアクター操作における３個の相の配置を 示す。 第７図は、本発明の多相分散抽出反応における２個の相の配置を示す。 第８図は、酵素は不整、水溶性かつ微孔性の中空繊維膜内に可逆的に含有される 。本発明の好ましい態様についての概略図であり、第９図は、装置へ供給され、 および装置から回収される有機相および水相の供給流並びに生成物流の存在する 中空繊維抽出酵素膜リアクターの概略図である。 第１Ｏ図は水相の原料流による水溶性エステルのラセミ混合物の供給および水相 ならびに有機相の生成物流により回収により、右のそれぞれは生成物抑制反応の ためにそれぞれ、相対的に非反応のＳ−エステルとＲ−酸に富んでいるものであ るが、第９図のりアクタ−においてキラルＲ−酸の光学分割がどのように達成さ れるかを示しており、ここで、有機流および水流中に含まれる物質は光学的に精 製されており、そして立体化学的に反対の配位を示すものである。 第１ｆ図は、一度で光学的の精製された生成物を製造するための集積された酵素 的分割／反応／再循環リアクタープロセスの例を示しており、ここで分割は反応 性の異性体であるＲ−生成物から反応性のより小さいＳ−反応体を分離するため に実施され、この場合、より反応性の小さい異性体はより反応性の小さい異性体 生成物を得るために別個のりアクタ−において反応させることができる。加えて 、酵素リアクターからの生成物流はラセミ化した後で再循環させることができる 。 第１２図は、膜抽出装置に結合する抽出膜リアクターを示す。第１０図に示され るように、育機相生成物流はＲ−酸に富んでいる。この流れは、リアクター水性 流よりも高いｐｌで水流と接触する。Ｒ−酸はこの水溶液に抽出され、そして、 酸を含有しない有機流は抽出膜リアクターに再循環される。 第１３図は、Ｒ−選択性酵素を使用する光学的に精製されたイブプロフェンを製 造するための抽出酵素膜リアクタープロセスを示しており、ここで、イブプロフ ェンの水溶性エステル誘導体にラセミ混合物は水溶液にてリアクターに供給され 、分割されたＲ−酸生成物は有機流を介してリアクターから回収され、そして、 反応性のＲ酸生成物はラセミ化され、次いでエステル化リアクター送られ、さら に酵素リアクターに再循環させる。未反応の（Ｓ）−エステル反応体は所望のＳ −イブプロフェン酸生成物へ化学的に加水分解される。 ５．０　発明の詳細な説明 本発明の目的は、ｌ）均一な水性反応系、２）多相分散抽出反応、および３）抽 出膜リアクターに含まれる水溶液中において、分割基質、好ましくは酵素基質と して使用するための、実質的にいっそう水溶性であるエステルを提供することで ある。より詳細には、酵素が実用的な活性および立体選択性をもって作用し、増 大した水溶性のエステル誘導体の利用により酵素的分割の利益が実質的に受けら れるのは、イブプロフェンおよびナプロキセンの２個のキラル化合物である。そ れゆえ、本発明の態様は、イブプロフェンおよびナプロキセンのエステルを包含 する、一層水と混和性のエステルである物質の合成物並びにそれらの製造に関す る。 エステルの水混和性エステルは、イオン性種でエステル部分を誘導体化すること により助長される（第１表）。エステル部分のスルホネート、スルフェート、ホ スフェートおよび第４級アミン誘導体は、本発明の好ましい態様である。 本発明の他の目的は、１）均一な水性反応系、２）多相分散抽出反応系、および ３）抽出膜リアクターに含まれる水溶液において、好ましくは酵素的手段により 基質の分割を実施することである。 （本頁以下余白） 第１表 イブプロフェン、ナプロキセンおよび２−クロロプロパン酸１の種々のエステル の溶解性 高度にイオン性の基で誘導体化された新規エステル１０　　　２．１８Ｍ　　イ ブプロフェンの２−（Ｎ、　Ｎ、　Ｎ−）リメチルアンモニウムメチルエス チルのヨーヅド塩 １　　　１．６６Ｍ　　イブプロフェンのスルホメチルエステルのナトリウム塩 ４　　　１．１３Ｍ　　イブブロンフェンのスルホブチルエステルのカリウム塩 ８　　１２．１ｍＭ　　ナプロキセンのスルホエチルエステルのカリウム塩 １２　　　１．６１Ｍ　　ナプロキセンの３−（Ｎ、　Ｎ、　Ｎ−）リメチルン アンモニウム）プロピル エステルのメチル硫酸塩 高度にイオン性の基をもたないエステル誘導体１０ｍＭ　　イブプロフェンの２ −（Ｎ、　Ｎ−ジメチルアミノ）エチルエステル ０、１８ｍＭ　　イブプロフェンのメトキシエチルエステル １８　０．１−０．２ｍＭ　　ナプロキセンのメチルエステル１９　　　０．４ ｍＭ　　イブプロフェンのトリフルオロエチルエステル ’　ｐＨ７（５０ｍＭリン酸緩衝液）および温室で、２６２ｎｍにおける飽和溶 液の吸収により測定。 ５．１　酵素仲介の立体化学的分割系において使用するためのエステルおよびそ の製造 一般的に言って、本発明の好ましい態様は分割方法で使用するための新規な物質 の合成物に関し、これは次式（Ｉ）の化合物に属する。 Ｒ” 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシおよびハロゲ ンから成る群より選ばれ、Ｒはアルキルおよびアリールから成る群から選ばれ、 Ｒ”は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから成る群から選ば れ、Ｙｌは第４級アミン、無機酸およびその酸付加塩から成る群から選ばれるも のであ本発明の他の態様は次の化合物である：ｌ）保護されたヒドロキシはアル キル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシル、 ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルからなる群より選ばれる保護基で保護 されている：２）保護されたチオールはアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバ モイルから成る群より選択された保護基で保護されている；３）アリールオキシ 基は４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチル−４− クロロフェノキシから成る群より選ばれる；そして４）ハロゲンは塩素および臭 素から成る群より選ばれる。 本発明における化合物のエステル基の他の具体的なン、ここで、２はアルキルお よびアリールから選ばれ、その第４級アミンの対応イオンはハライド、カルボキ シレート、無機ポリアトミックイオン、メチルスルフェート、トシレート、メシ レートおよびトリフルオロメチルスルフォネートから選ばれる：　　２）　−３ Ｏ３Ｈ。 −０Ｓ（ｈＨおよび一０ＰＪ２よりなる群から選択される無機酸、３）　−ＳＯ ，−、−０３Ｏ，−、−０ＰＯ３−Ｈおよび一０ＰＯ８−より成る陰イオン性種 から成る群、および、アルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニウムより 成る陽イオン性種から成る群から選択された無機酸の塩、ここで、アルカリ金属 はナトリウムおよびカリウムであり、アルカリ土類金属はマグネシウムおよびカ ルシウムであり、そして、アンモニウム種は、Ｑが水素、アルキルおよであるア ンモニウム種。 本発明の他の態様は次の化合物を含む：ｌ）Ｒ’は４−イソブチルフェニルであ り、Ｒ”が水素である；およびａ）　Ｒは炭素原子４個までのアルキルであり、 Ｙｌは式−８Ｏ８−の無機酸の塩である：ｂ）Ｒはプロピルであり、Ｙｌは式− ０８０３−の無機酸の塩である；ｃ）Ｒはエチルであり、Ｙｌは式−０ＰＯ５− または−〇ＰＯ，−Ｈの無機酸のの第４級アミンの塩であり、モしてＺはメチル である；２）Ｒｏは６−メドキシー２−ナフチルであり、Ｒ“は水素である；そ してａ）　Ｒは炭素原子３個までのアルキルであり、そしてＹｌは式−３Ｏ！− の無機酸の塩である：そしてｂ）　Ｒは２または３個の炭素原子のアルキルでＺ はメチルである；３）Ｒｏは塩素、臭素から成る群より選ばれるハロゲンであり 、Ｒ“は水素であり：Ｒはプロピルであり、そしてＹｌは式−８Ｏ１−の無機酸 の塩である；４）Ｒ’はメチルであり、Ｒ“はアセチルおよびベンゾイルから成 る群より選ばれる保護基で保護されたチオールであり；Ｒはメチルであり、そし てＹｌは式−８０３−の無機酸の塩である；５）Ｒ”はベンジルであり、Ｒｏは ヒドロキシ、保護されたヒドロキシおよびノーロゲンからなる群より選ばれ、ハ ロゲンは塩素および臭素から選ばれる；そして６）　Ｒ”は水素であり、Ｒｏは ４−クロロフェノキシであり；Ｒはメチルであり、そしてＹｌは式−５ＯＩ−の 無機酸の塩である。 新規な物質の合成物を製造するために、種々の方法が使用された。 本発明の他の好ましい態様は、次式（ＩＩ）Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよび）＼ロゲンから成る群より選ばれるものであり、Ｒ”は水素、 ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれるものであ り、Ｒはアルキルであり、Ｙ２は一３Ｏ＊Ｈおよびその塩である〕のエステル化 合物を製造する方法に関し、 ａ）次式（Ｉ［）の化合物 Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよび）１０ゲンから成る群より選ばれ、そして、Ｒ“は水素、ベン ジル、保護されたチオールおよびチオールである〕を塩基と反応させて、式（Ｉ ）の化合物のカルボキシルイオンを形成させ、 ｂ）工程ａ）で形成された式（ＩＩＩ）の化合物の上記カルボキシルイオンをヒ ドロキシアルキルスルホン酸スルトンと反応させ、そしてＣ）工程ｂ）で形成さ れた式（ＩＩ）の化合物を分離することから成るものであり、このことにより式 （ＩＩ）の化合物のスルホアルキルエステルが製造される。 本発明の方法の他の態様は次の化合物を含む：１）保護されたヒドロキシルは、 アルキル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシ ル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルから成る群から選ばれた保護基で 保護される：２）保護されたチオールは、アセチル、ベンゾイル、およびチオカ ルバモイルから成る群から選ばれた保護基で保護される；３）アリールオキシ基 は４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチル−４−ク ロロフェノキシから成る群から選ばれる；そして４）ハロゲンは塩素および臭素 から成る群より選ばれる。 この方法の他の態様は、無機塩基がアルカリおよびアルカリ土類の水酸化物およ びカルボネートから成る群より選ばれるものである、無機および有機塩基から成 る群から選ばれる工程ａ）の塩基を含む。 この方法は、また、有機相で実施される反応を具体化し、この有機相はメタノー ル、メチルイソブチルケトン、２−プロパツールおよびそれらの混合物から成る 群から選ばれる。 この方法は、濾過により実施される工程Ｃ）の分離を具体化する。 この方法は、また、次の化合物の製造法を具体化する：ｌ）Ｒ’は４−イソブチ ルフェニルであり、Ｒｏは水素であるもの；ａ）反応はヒドロキシアルキルスル ホン酸スルトン、ｌ、３−プロパンスルトンを使用するメチルイソブチルケトン 中で約１時間行う、または、ｂ）反応はヒドロキシアルキルスルホン酸スルトン 、１．４−ブタンスルトンを使用する沸騰２−プロパツール中で約２時間行う： ２）Ｒ’が６−メドキシー２−ナフチルであり、Ｒ”が水素であるもの：反応は 、ヒドロキシアルキルスルホン酸スルトン、１．３−プロパンスルトンを使用す る、約２０％メタノールと約８０９６メチルイソブチルケトン溶液から成る溶液 中で約１４時間行う；そして３）Ｒｏが塩素であり、Ｒｏが水素であるもの：反 応はヒドロキシアルキルスルホン酸スルトン、１．３−プロパンスルトンを使用 するメチルイソブチルケトン中で約１４時間行う。 本発明の他の態様では、次式（Ｉ［） Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれるものであり、Ｒ”は水素、ベ ンジル、保護されたチオールおよびチオールから成る群から選ばれ、Ｒはアリー ルおよびアルキルから成る群より選ばれ、Ｙ２は−ＳＯ３Ｈおよびその塩である 〕のエステル化合物の製法が記載され、この方法はａ）式（Ｉ［） Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれ、そして、Ｒ”は水素、ベンジ ル、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれる〕の化合物をト リフルオロ酢酸中でヒドロキシアルキルおよびヒドロキシアリールスルホン酸塩 から成る群から選ばれる化合物と混合し、 ｂ）トリフルオロ酢酸無水物を工程ａ）の上記混合物に添加し、そして Ｃ）工程ｂ）で形成された式■の化合物を単離すること、 からなるものであり、このことにより、スルホネートで誘導体化された式■の化 合物のエステルを製造するための他の方法が提供される。 本発明の方法の他の態様は、次の化合物を含む：１）保護された水酸基はアルキ ル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシル、ベ ンジル、メシル、トリチルおよびトシルより成る群から選ばれた保護基で保護さ れている；２）保護されたチオールはアセチル、ベンゾイルおよびチオカルボモ イルから成る群より選ばれる保護基で保護されている；３）アリールオキシ基は ４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチル−４−クロ ロフェノキシである；そして４）ハロゲンは塩素および臭素から選ばれる。 この方法は、次の化合物の製造を具体化する：ｌ）Ｒｏが４−イソブチルフェニ ルであり、Ｒ”は水素であり、そして工程ａ）のヒドロキシアルキルスルホン酸 塩はホルムアルデヒドビスルフィトナトリウムおよびイセチオン酸のナトリウム 塩から成る群より選ばれるものであり、Ｒ”が水素であり、そして、工程ａ）の ヒドロキシアルキルスルホン酸塩はホルムアルデヒドビスルフィトナトリウムで ある。 本発明の好ましい態様は、次式（Ｉ［）Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成るグループより選ばれ、Ｒ”は水素、ベンジル 、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアリールおよ びアルキルから成る群より選ばれ、そしてＹ２は一５ＯｓＨおよびその塩である 〕のエステル化合物を製造するための方法に関し、この方法はａ）式（ＩＩＩ） の化合物 Ｒｏ ここで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された 水酸基およびハロゲンから成る群より選ばれ、そして、Ｒｏは水素、ベンジル、 保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれる、を溶液中で無機の 酸クロリドと混合して、式（Ｉ［）の化合物の酸クロリドを生成させ、 ｂ）工程ａ）の式■の化合物から生成した上記酸クロリドを、ヒドロキシアルキ ルおよびヒドロキシアリールスルホン酸塩から成る群より選ばれる化合物と反応 させ、そして、 Ｃ）工程ｂ）で形成された式■の化合物を単離する、ことから成り、これにより スルホネートで誘導体化されたエステルを製造するための第３の方法が提供され る。 この方法において、工程ａ）の無機酸のクロリドは、チオニルクロリド、三塩化 リンおよび五塩化リンから成る群より選ばれる。 本発明の方法の他の態様は、次の化合物に関する：ｌ）保護された水酸基はアル キル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシル、 ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルから成る群より選ばれる；２）保護さ れたチオールはアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから成る群より選 ばれる保護基である；３）アリールオキシ基は４−ヒドロキシフェノキシ、４− クロロフェノキシおよび２−メチル−４−クロロフェノキシより成る群から選ば れる；そして４）ハロゲンは塩素および臭素から選ばれる。 この方法は、また、次の化合物の製造を具体化する：１）Ｒ’はイソブチルフェ ニルであり、Ｒｏは水素であり、工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸の塩 はホルムアルデヒドビスルフィトナトリウムである：３）Ｒｏはメチルであり、 Ｒ“はアセチルおよびベンゾイルから成る群より選ばれた保護基で保護されたチ オールであり、工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸の塩はナトリウムホル ムアルデヒドビスルフィトである、そして４）Ｒｏは４−クロロフェノキシであ り、Ｒ“は水素であり、そして工程ｂ）のヒドロキシルキルスルホン酸の塩はナ トリウムホルムアルデヒドビスルフィトである。 本発明の態様は、また、式（ＩＶ）のエステル化合物の Ｒｏ 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された 水酸基およびハロゲンから成る群より選ばれ、Ｒ“は水素、ベンジル、保護され たチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアルキルおよびアリール から成る群より選ばれ、Ｙ３は−０３（ｈＨおよびその塩である〕を製造するた めの方法に関し、これは、 ａ）式（ｖ） Ｒ。 ここで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびノ＼ロゲンから成る群より選ばれ、Ｒ”は水素、ベンジル、保 護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアルキルおよびア リールから成る群より選ばれ、そしてＹ４は水酸基である、の化合物を溶液中で スルホン化剤と反応させ、そして、 ｂ）工程ａ）で生じた式■の化合物を単離することから成るものであり、こうし て、スルフェートで誘導体化されたエステルが得られる。 この発明の方法の他の態様は、次の化合物を含む＝１）保護された水酸基は、ア ルキル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシル 、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルから選ばれた保護基で保護される； ２）保護されたチオールはアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから成 る群より選ばれた保護基で保護されている；３）アリールオキシ基は、４−ヒド ロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび４−メチル−４−クロロフェノ キシから成る群より選ばれる；そして４）ノ１０ゲンは塩素および臭素から成る 群より選ばれる。 この方法は、クロロスルホン酸およびＳＯｌから成る群より選ばれる工程ａ）の スルホン化剤の使用を含む。 この方法は、また、化合物の製造を具体化する：Ｒ゛は６−メドキシー２−ナフ チルおよび２−（４−イソブチルフェニル）から成る群より選ばれ、そして、Ｒ ”は水素である。この方法において、Ｒはプロピルである。 この発明の他の態様は一式（ＶＩ） Ｒｏ 〔ここで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護され たヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれる基であり、Ｒｏは水素、ベ ンジル、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアルキ ルおよびアリールから成る群より選ばれ、そしてｙｓは一０ＰＯ，Ｈ，およびそ の塩である〕のエステル化合物の製造を開示するものであり、これは：ａ）次式 （Ｖ） Ｒｏ 〔こごで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護され たヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれ、Ｒ”は水素、ベンジル、保 護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアルキルおよびア リールから成る群より選ばれ、そしてＹ４はヒドロキシである〕の化合物を溶液 中でホスホリル化剤またはその誘導体と反応させ、そして、ｂ）工程ａ）で生成 した式■の化合物を単離することから成り、そのことにより、リン酸により誘導 体化されたエステルが得られる。 この発明の他の態様は、次の化合物である＝１）保護されたヒドロキシはアルキ ル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシル、ベ ンジル、メシル、トリチルおよびトシルから成る群より選択された保護基で保護 される；２）保護されたチオールは、アセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモ イルから成る群より選ばれた保護基で保護される；３）アリールオキシ基は４− ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチル−４−クロフェ ノキシから成る群より選ばれる：そして４）ハロゲンは塩素および臭素から選ば れる。 その方法は、また、次の化合物の製造を具体化する：Ｒ°は６−メドキシー２− ナフチルおよび４−イソブチルフェノキシから成る群より選ばれ、そして、Ｒ“ は水素である。この方法において、Ｒはエチルである。 この発明のさらに他の態様において、式（■）Ｒｏ 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれ、Ｒ“は水素、ベンジル、保護 されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれ、Ｒはアルキルおよびアリ ールから成る群より選ばれ、Ｙ＠は−ＮＺ、およびその塩であり、そして、２は アリールおよびアルキルから選ばれる〕のエステル化合物の製造が開示され、こ れは、 ａ）式（ＩＩ）化合物 Ｒｏ ここで　Ｒ１はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選ばれ、そしてＲ”は水素、ベンジル 、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれる、を無機酸の酸ク ロリドと反応させて式■の化合物の酸クロリドを形成させ、 ｂ）工程ａ）の式■の化合物の上記生成した酸クロリドを単離し、 Ｃ）工程ｂ）の酸クロリドをＺ、Ｎ−アルカノールと混合してエステルを形成さ せ、 ｄ）工程Ｃ）の式（ＩＩＩ）の化合物の生成したエステルを単離し、 ｅ）工程ｄ）の式■の化合物の上記エステルをアルキル化剤と反応させ、そして ｆ）工程ｅ）で形成された式■の化合物を単離することから成り、これにより第 ４級アミンで誘導されたエステルが得られる。 この方法は、チオニルクロリド、三塩化リンおよび五塩化リンから成る群から選 ばれる工程ａ）の無機酸クロリドの使用、および、アルキルハライド、硫酸ジア ルキルおよびスルホン酸アルキルエステルから成る群から選ばれるアルキル化剤 の使用を含む。 本発明の方法の他の態様は、次の化合物に関する：１）保護されたヒドロシキは アルキル、カルボネート、アルキルカルボネート、アリールカルボネート、アシ ル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルから成る群より選ばれた保護基で 保護されている；２）保護されたチオールは、アセチル、ベンゾイルおよびチオ カルバモイルから成る群より選択される保護基で保護されている；アリールオキ シ基は４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチル−４ −クロロフェノキシから成る群より選ばれる；そして４）ハロゲンは塩素または 臭素から選択される。 この方法は、また、次の化合物の製造を具体化する：１）Ｒ’が４−イソブチル フェニルであり、Ｒ“は水素であり、そして、２２Ｎ−アルカノールは２−（Ｎ 、Ｎ−ジメチルアミノ）エタノールである；そして２）Ｒｏは６−メドキシー２ −ナフチルであり、Ｒ”は水素であり、そして、Ｚ、Ｎ−アルカノールは２−（ Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）エタノールおよび３−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）プ ロパツールから成る群より選ばれる。 ５．２　エステル分割反応 この化合物の利用性はラセミのカルボン酸（例えば、イブプロフェンまたはナプ ロキセン）の分割時における有用性で示され、これは均一な水溶液中でカンポン 酸の一層水溶性のエステル誘導体のラセミ混合物を、エステルの立体異性体の少 なくとも１つの加水分解において活性および立体選択性を示す酵素と効率的に接 触させることにより達成される。 イブプロフェンおよびナプロキセン、および多くの医薬、香料、および賦香剤、 農薬（例えば、殺虫剤および除草剤）を含む他のキラル化合物を含む光学的に活 性な有機酸の酵素的分割が本発明において開示される。以下の方法は、反応が効 率的な態様で行われ、かつ、生成物が反応体から明確に分離されるような条件下 で操作することができる。ラセミ混合物のキラル特性に依存して、こうして得ら れる生成物は光学的に純粋な化合物、または、特定の異性体の形態に実質的に富 んだ物質を含有する。 ５．２．１　　均一な水性反応系 均−な水性反応系工程の場合には、均一な水性反応系工程に供給されるラセミ原 料混合物中の立体異性体は、有機溶解性とは異なって、典型的には、優先的に水 溶性であろう。従って、均一な水性反応系工程の反応体を含有する相は、有機性 というよりはむしろ水性であろう。均一の水性反応系中で形成されるキラル酵素 反応生成物は、実質的に有機溶解性であり、または、水溶性というよりは、ずっ と有機溶解性であり、この結果、大抵の場合には、分割に引き続いて生成物が有 機相に分配されるのを促進する。 ラセミ混合物を分割して、次式（Ｉｎ）Ｒｏ 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選択され、そして、Ｒ“は水素、ベン ジル、保護されたチオールおよびチオールから成る群から選択される〕の化合物 の分割された調製物を製造するためのこの発明の１つ態様は、 ａ）次式（Ｉ） Ｒ。 〔式中、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群より選択され、Ｒはアルキルおよびアリー ルから成る群から選択され、Ｒ“は水素、ベンジル、保護されたチオールおよび チオールから成る群から選択され、そして、Ｙｌは第４級アミン、無機酸および その塩である〕のエステル化合物のラセミ混合物（これは少くとも第１および第 ２の立体異性体を有する）、および酵素を流体中に供給し、（この酵素は第１の 立体異性体を変化した化学的組成を有する式■の生成物の分割された調製物へ変 える反応を触媒するものであり、このことにより、式（Ｉ）のエステル化合物の ラセミ混合物を酵素的に分割する）、そして ｂ）上記流体から式■の生成物である分割された調製物を分離することから成る 。 均一な水性反応系工程の操作において、少くとも１種の優先的に水溶性で有機不 溶性の反応体（例えば、ラセミ混合物中の立体異性体）は、水相においてリアク ターに供給される。水に担持された反応体は、次いで酵素に出会い、この酵素は おそらく他の共同反応体に関連して、生成物へのその変換を触媒する。こうして 製造された反応生成物の少くとも１つは、有機相で存意の溶解性を示すことがで き、実際に示すことが好ましい。この種は、反応体ラセミ混合物から分割生成物 を分離する分離工程で使用するための水と非混和性の有機相に優先的に分配され るだろう。 有機溶解性の反応生成物の有機相への選択的分配により、酵素的反応系は反応体 または生成物種の分離を促進する。このように、均一の水性反応系工程は立体化 学的に精製されたまたは光学的に富化した生成物をラセミおよび光学的に不活性 の混合物から効率的に製造するために使用することができる。より詳細には、こ の方法は、イブプロフェンおよびナプロキセンのようなエステルおよび他のキラ ル化合物（これらの化合物において酵素が１つの異性体を化学的に区別しつる光 学的に活性な化合物へ変換する反応を立体選択的に触媒しうる）を含む水溶性キ ラル有機エステルのラセミ混合物の立体選択的合成または分割のための均一な水 性反応系において上記プロセスを利用することに関する。 ５．２．２　　抽出反応系 多くの酵素触媒は、酵素がさらされる反応生成物の濃度が余りに高くなりすぎる と、被害をこうむる。一方において、成る反応生成物は酵素に対して毒性となり 、可逆的または非可逆的な不活性化、または、さらに変性をもたらすことがある 。他方では、酵素はしばしば生成物の阻害をうけ、ここで反応生成物の知覚しつ る濃度の存在は、触媒された生成の速度を遅くする。 このフィードバックおよび動的阻害は生物学的系において高度に望ましいもので ある。なぜならば、これが酵素反応生成物の量および濃度を限定するコントロー ルメカニズムを提供するからである；しかしながら高濃度で大量の生成物を必要 とする、酵素の工業的応用においては、フィードバック阻害のこの現象は解決さ れるべき問題であり、減じられまたは回避されるべきものである。 抽出反応スキーム（例えば、抽出反応のための膜リアクター“（Ｍｅｍｂｒａｎ ｅ　Ｒｅａｃｔｏｓ　ｆｏｒ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｕｅ　Ｒｅａｃ−ｔｉｏｎｓ） “と名づけられた、１９８９年１月２４日に発行された米国特許第４　、８００ ．１６２号明細書、および、　“多相膜リアクターにおける触媒固定のための方 法および装置（Ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　Ａｐｐａｒａｔｕｓ　ｆｏｒ　Ｃａｔａ ｌｙｉｔ　Ｃｏｎｔａｉｎｍｅｎｔｉｎ　Ｍｕｌｔｉｆｈａｓｅ　Ｍｅｍｌｒａ ｎｅ　Ｒｅａｃｔｏｒ　Ｓｙｓｔｅｍｓ）”と名づけられた、１９８９年１月３ 日に発行された米国特許第４７９５゜７０４号および継続中の米国特許出願第９ １２．５９５号において提供されたように）、ここにおいて、阻害生成物はそれ が形成されるや否や反応帯域から除去され、それにより酵素触媒の近傍において その濃度を最少にする試みがなされるスキームは、阻害生成物濃度の望ましくな い効果を取り扱うための一つの戦略を表わす。原則的に、生成物を反応混合物と 混和しない溶媒に抽出し、そのことにより生成物を触媒から分離するか、または 、生成物を半透性膜を通して選択的に通過させることにより、阻害生成物を反応 帯域から選択的に除去できる。前者の場合、水溶性反応体および酵素触媒を水性 の反応相に溶解させる特別の例において、水性の反応相を有する反応容器中に水 に非混和性の有機溶媒を分散させることができる。もし水と非混和性の溶媒が、 生成物は有機相に分配され、一方、未転換の反応体は分配されないように、選択 される場合には、選択的な生成物の除去が達成され、そして、酵素の生成物阻害 は減じられるだろう。 ５．２．２．１　　多相分散抽出反応 この発明において、著名の新規化合物の酵素反応生成物（例えば、イブプロフェ ン酸）が酵素に対して阻害である場合には、分割は有利には、阻害生成物のため の水に混和しない有機抽出溶媒を有する水性の反応体／酵素溶液から成る多相分 散物中で実施される、この態様において、酵素とラセミの基質（即ち、イブプロ フェンの水溶性エステル誘導体のラセミ混合物）は、水性の反応相において互い に効果的に接触し、一方、阻害生成物は、同時に選択的に抽出剤中に回収される （第７図）。真の結果は、水相（例えば、ラセミの原料混合物中のより反応性の 小さいエステル）中において立体化学的に富んだイブプロフェンの異性体の製造 か効果的になされ、そして、有機抽出相においては反対の異性体が効果的に製造 される。 多相分散抽出反応工程の場合には、多相分散抽出反応工程に送られるラセミの原 料混合物中の立体異性体は、典型的には、有機溶解性とは反対に優先的に水溶性 である。したがって、多相分散抽出反応工程の反応体含有相は、有機性であるよ りは、むしろ水性である。 多相分散抽出反応において形成されるキラル酵素反応生成物は、典型的には、実 質的に有機溶解性であり、または、水溶性というよりはむしろ、ずっと有機溶解 性であり、従って、この生成物は大部分が有機相に分配されるであろう。 それゆえ、ラセミ混合物を分割して式（ＩＩＩ）Ｒ。 〔ここで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護され たヒドロキシおよびハロゲンから成る群から選ばれ、そしてＲ”は水素、ベンジ ル、保護されたチオールおよびチオールから成る群より選ばれる〕の化合物の分 割された調製物を製造するための本発明の第２の態様は、次のものから成る：ａ ）次式（Ｉ） Ｒ。 二こで、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシ、保護された ヒドロキシおよびハロゲンから成る群から選ばれ、Ｒはアルキル、アリールから 成る群から選ばれ、Ｒ“は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオール より成る群から選ばれ、そしてＹｌは第４級アミン、無機酸およびその塩から成 る群より選ばれる〕の化合物のラセミ混合物であって、少くとも第１および第２ の立体異性体を有するものおよび酵素（これは第１の立体異性体を変化した化学 的組織を有する式■の生成物に変える反応を触媒する）を第１の流体に供給する ことによって、式（Ｉ）のエステル化合物のラセミ混合物を酵素的に分割し、そ してｂ）上記第１の流体に実質的に非混和性の第２の流体を同時に供給し、そし て、第１の流体と第２の流体を接触させ： このことより、上記の第１の流体のラセミ混合物が分割されて、工程ａ）の式■ の生成物かつ主に第２の流体へ拡散し、その結果、上記の第２の流体は主に式■ の生成物の分割された調製物を含み、そして、上記の第１の流体は主に式■の第 ２の立体異性体を含有する。 多相分散抽出反応工程の操作においては、少°くとも１種の優先的に水溶性で有 機不溶性の反応体（例えば、ラセミ混合物中の立体異性体）は水相としてリアク ターに供給される。この水媒介性の反応体は、ついで、酵素とぶつかり、この酵 素は、他の共反応体と関連して生成物への変換を立体選択的に触媒する。こうし て製造される少くとも一種の反応生成物は、有機相において有意な溶解性を示す であろう。こうして、この種は水性／有機性の界面に拡散し、これは、リアクタ ーから回収するために、優先的に、水に非混和性の有機プロセスへ分配されるで あろう。 多相分散抽出反応の有機プロセス相に有機溶解性で抑制性の反応生成物が選択的 に回収されるために、酵素反応系は一層生産的である。この態様において、多相 分散抽出反応工程は、反応生成物の抑制的性質が従前の酵素的分割手法の効果的 操作を妨げるような状態においてさえも、ラセミの、光学的に不活性の原料混合 物から立体化学的に精製または光学的に富んだ生成物を効率的に製造するのに使 用しつる。より詳細には、この発明は、イブプロフェンおよびナプロキセンのよ うなエステル、および他のキラル化合物（これらの化合物において、酵素が１の 異性体を化学的に区別しうる光学的に活性な化合物へ変換するための反応を立体 選択的に触媒しつる）を含む水溶性キラル育機エステルのラセミ混合物の立体選 択的な合成または分割のための、多相分散抽出反応において上記プロセスを使用 することに関する。 ５　、２．２．２．抽出的膜リアクター１９８９年１月２４日発行の米国特許第 ４　、８００．１６２号（すなわち、多相／抽出的膜リアクターの特許）におい て、ラセミ混合物の分割のための、および光学活性有機酸の酵素的分割のための 方法および装置が明らかにされている。さらに、立体選択的反応が説明されてい るがこれは、酵素を含有する多相で、抽出的膜バイオリアクター、多相溶媒系、 および膜リアクター作動条件（反応が能率的に行われ、生成物が反応物質から明 瞭に単離されるような）を用いて行われた。 本発明の抽出的膜リアクタープロセスにおける膜は、一般に多孔性で親水性の（ すなわち、水に湿潤性の）膜からなり、様々な方法により膜内に、または−また はそれ以上の膜表面上に、適当な酵素を取り込ませることによって、膜を反応に 適するように活性化することができる。この膜の一方の表面は、第一プロセスの 水流、フィード水流に接触して存在し、この水流は一般に水溶性または水混和性 の酵素基質を含有する。一般にこの水性フィード水流は、反応物質を、これらの 反応物質の水溶性エステル誘導体の形で含有するであろう。さらに、酵素は膜そ れ自体の中にある必要はなく、水層に存在してもよい。 同時に、酵素的に活性な膜の第二の表面は、水−非混和性の有機溶媒水流と接触 し、この水流は反応ゾーンや酵素の近傍から阻害性生成物を除去する働きをする 。正しく働いている場合、水相／有機相境界は、水混和性有機生成物水流に接し た水に湿潤性の酵素活性化膜表面にあり、実質的に水性の環境は、親水性で水に 湿潤性の膜および／または水性フィード水流混合物中で酵素が機能するために供 される。こうして、２つの流入（即ち、フィード）用および２つの流出（即ち、 生成物）用の水流が膜リアクターモジュールに供給あるいはそれから除かれ、従 って、膜リアクターモジュールには必然的に２つの入口と２つの出口が配置され るであろう。これらの口のうち１対の入口／出口は有機相のプロセス流の供給お よび回収に当てられ、一方他の１対は水性のプロセス流の供給および除去に供さ れるだろう。 親水性あるいは水湿潤性膜については、この有機プロセス流は膜の反対側の表面 で接触している水性プロセス流に比べて少し陽圧下におかれるほうがよい。こう して生じた膜の両側での小さな有機一対一水の圧力差は水性プロセス流の一部の 膜を通過する限外濾過的流出を妨げるのに役立つ。同時に、プロセスをこのよう に操作することによって、膜と接触するとき膜表面において働く毛管力によって 有機相が水湿潤性の酵素膜の細孔に侵入するのを妨げるであろう。 １９８９年１月２４日発行の米国特許第４．８００．１６２号の抽出的膜リアク タープロセスはラセミ混合物の分割およびキラルでない前駆体からのキラルな生 成物の酵素的合成において有用である。このプロセスの実施態様はそれほど高濃 度でない生成物によって酵素反応が反応速度論的に阻害される状況において特に 適している。 特に、抽出的膜リアクターは生成物によって阻害されるフィードバック−制御酵 素によって触媒される生物変換に伴う低い変換および触媒生産性の限界を解決す る。 抽出的膜リアクタープロセスの酵素活性化膜は一般に親水性で微多孔性であり、 実質的に非混和性の水性および有機プロセス流をともなう相反する両側に接する ことになる。したがって、抽出的膜リアクタープロセスに於ける酵素活性化膜は 、これらの非混和性プロセス流を分離するのみならずそれらの間に高−表面積接 触を提供するためにも機能する。 抽出的膜リアクタープロセスの場合には、酵素活性化膜に供給されるラセミフィ ード混合物中の立体異性体は、一般に有機溶媒可溶性に対立するものとして選択 的に水溶性である。したがって、抽出的膜リアクタープロセスに供給されるフィ ード流は、有機性よりむしろ水性となる。抽出的膜リアクタープロセスで生じる キラルな酵素反応生成物は、一般に実質的に有機溶媒可溶性または少なくとも水 溶性であるよりは有機溶媒に可溶性であるので、生成物はその大部分が有機プロ セス流に分配され、その流れによってリアクターから運び出されるであろう。 本発明の化合物を用いた本発明に於いて実施される三つの新規方法に於いて、相 分離膜が抽出的膜リアクタースキームに利用され、ここに於いて、阻害性反応生 成物は酵素および出発時にはラセミ体であった水溶性エステル誘導体の混合物を 含有する水性反応相から除去される。これらの新規方法に於ける酵素含有水性反 応相は、酵素が１）水層に存在し、２）膜に結合し、または３）水層に存在しか つ膜に結合する様な状況に関わる。ある特定の生成物はある物質の水溶性エステ ル誘導体の加水分解を有効にそして立体選択的に触媒することのできるある特定 の酵素に対して阻害的であることが知られているため、適当な膜を介して行われ る抽出的反応によって反応効率を劇的に改善することができる。親水性であり且 つ疎水性の膜、そして活性でなく　（即ち酵素を排除する）かつ酵素で活性化さ れる膜、をこの方法の実施に際してこのように用いることができる。 第一の方法は、構造式（ＩＩＩ）の化合物の分割標品を生じるためにラセミ混合 物を分割するための方法に関する。 ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒ”は水素、ベンジル、およびチオール からなる一群から選択される。本方法は以下を含んでなる： Ａ６構造式（Ｉ）のエステル化合物のラセミ混合物を酵素的に分割すること、 Ｒｏ ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒはアルキルおよびアリールからなる一 群から選択され、Ｒ”は水素、ベンジル、およびチオールからなる一群から選択 され、そしてＹｌは第４級アミン、無機酸およびその塩からなる一群から選択さ れる。この分割は、第一の流体中に、少なくとも第一および第二の立体異性体を 有する構造式Ｉの化合物のラセミ混合物を酵素活性化膜の片側に供給することに よって行われる。ここにおいて、当該の膜を活性化する当該酵素は第一の立体異 性体の反応を触媒し、変化した化学構造を有する構造式■の生成物の分割された 標品を生じる。 ｂ、実質的に上記第一流体に非混和性の第二流体を当該の酵素活性化膜の反対側 に同時に供給すること。 以上によって、上記第一流体の上記ラセミ混合物は、ステップａ）の構造式■の 当該生成物を用いて分割され、主として当該の酵素活性化膜から上記第二流体中 に拡散する。その結果、上記第二流体は主に構造式■の当該産物の分割標品を包 含し、上記第一流体は主として構造式■の第二の立体異性体を包含する。 膜の使用に関する第二の方法に於いて、この方法は、構造式（ＩＩＩ）の化合物 の分割標品を生じるためにラセミ混合物を分割するための方法に関する。 Ｒ。 ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒｏは水素、ベンジル、およびチオール からなる一群から選択される。本方法は以下を含んでなる： ａ、構造式（Ｉ）のエステル化合物のラセミ混合物を酵素的に分割すること、 ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒはアルキルおよびアリールからなる一 群から選択され、Ｒ”は水素、ベンジル、およびチオールからなる一群から選択 され、そしてＹ】は第４級アミン、無機酸およびその塩からなる一群から選択さ れる。この分割は、第一の流体中に、少なくとも第一および第二の立体異性体を 有する構造式Ｉの化合物のラセミ混合物を供給し、酵素を第−流体中の膜の片側 に供給することによって行われる。ここにおいて、当該の酵素は第一の立体異性 体の反応を触媒し、変化した化学、構造を有する構造式■の生成物の分割された 標品を生じる。 ｂ、実質的に上記第一流体に非混和性の第二流体を当該の膜の反対側に同時に供 給すること。 以上によって、上記第一流体の上記ラセミ混合物は、ステップａ）の構造式■の 当該生成物を用いて分割され、主として当該の膜から上記第二流体中に拡散する 。 その結果、上記第二流体は主に構造式■の当該産物の分割標品を包含し、上記第 一流体は主として構造式■の第二の立体異性体を包含する。 第三の方法は、構造式（Ｉ［）の化合物の分割標品を生じるためにラセミ混合物 を分割するための方法に関する。 Ｒｏ ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒ”は水素、ベンジル、およびチオール からなる一群から選択される。本方法は以下を含んでなる： ａ、構造式（Ｉ）のエステル化合物のラセミ混合物を酵素的に分割すること、 Ｒ。 ここにおいて、Ｒｏはアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシルおよ びハロゲンからなる一群から選択され、Ｒはアルキルおよびアリールからなる一 群から選択され、Ｒ”は水素、ベンジル、およびチオールからなる一群から選択 され、そしてＹｌは第４級アミン、無機酸およびその塩からなる一群から選択さ れる。この分割は、第一の流体中に、少なくとも第一および第二の立体異性体を 有する構造式Ｉの化合物のラセミ混合物を供給し、酵素を上記第−流体中の酵素 活性化膜の片側に供給することによって行われる。ここにおいて、上記第−流体 中の当該酵素および当該の膜を活性化する当該酵素はいずれも第一の立体異性体 の反応を触媒し、変化した化学構造を有する構造式■の生成物の分割された標品 を生じる。 ｂ、実質的に上記第一流体に非混和性の第二流体を当該の酵素活性化膜の反対側 に同時に供給すること。 以上によって、上記第一流体の上記ラセミ混合物は、ステップＡ）の構造式■の 当該生成物を用いて分割され、主として当該の酵素活性化膜から上記第二流体中 に拡散する。その結果、上記第二流体は主に構造式■の当該産物の分割標品を包 含し、上記第一流体は主として構造式Ｉの第二の立体異性体を包含する。 抽出的膜リアクタープロセスの作動に於いて、少なくとも一つの主として水溶性 で有機溶媒には不溶性の反応物質（例えば、ラセミ混合物中の立体異性体）か水 性フィード流によって酵素活性化膜に供給される。 次に、このような水系で運ばれる反応物質は親水性、水湿潤性膜内に拡散し、そ こに於いてその物質はおそらく他のともに反応する物質との関連に於いて、その 物質の生成物への変換を立体選択的に触媒する酵素と出会う。このようにして生 産された反応生成物の少なくとも一つは、有機相に有意な溶解性を示すてあろう 。 したがって、この分子種は有機相に接した酵素活性化膜表面にある水相／有機相 界面に拡散し、そこに於いて、その生成物は反応物質からの連続した除去のため に水−非混和性プロセス流に主に分配されるであろう（第９図）。 有機溶媒可溶性で阻害的な反応生成物を抽出的膜リアクタープロセスの有機プロ セス水流に選択的に除去することによって、酵素反応系は生産性が高まる。この ようにして、反応が生成物に阻害されるという性質が先行技術の酵素的分割法の 能率的な実施を妨げるような状況に於いてさえ、ラセミおよび光学不活性フィー ド混合物から立体化学的に純粋なあるいは光学的に濃縮された生成物を能率的に 生産するために、抽出的酵素膜リアクタープロセスを利用することができる。 もっと特定すると、本方法は抽出的酵素膜リアクターに於ける、水溶性キラル有 機エステルの立体選択的合成またはラセミ化合物の分割のための上記プロセスの 使用に関する。このエステルはイブプロフェンやナプロキセンおよび他のキラル な化合物のエステルを包含する。ここにおいて膜はある異性体を化学的に異なる 光学活性化合物に変換する反応を立体選択的に触媒することのできる酵素を支持 し、捕らえ、またはそうでなければ含有する。 ５　、２．３．反応および分割プロセスパラメーター酵素が、合成された、また は分割を受けた分子が結合できる不斉の触媒活性部位を含有する限り、その酵素 は立体選択的触媒作用の役割によく適している。このような酵素活性部位はそれ 自体不斉であるので、そのために与えられたセラミ物質の二つの鏡像体が区別さ れて酵素活性部位の作用をうけることができる。 たとえば、エステルおよびアミド化学官能基の加水分解または合成を有効に触媒 する多くの酵素がある。これらの酵素のすべてではないが多くは、ｔｈｅＲｅｃ ｏｍｍｅｎｄａｔｉｏｎｓ　ｏｏｆ　ｔｈｅ　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　ｏｎ　Ｂ ｉｏｃｈｅｍｃａｌＮｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅ、　Ｅｋｓｅｖｉｅｒ、　Ａｍｓ ｔｅｒｄａｍ、　Ｔｈｅ　Ｎｏｍｅｎｃｌａｔｕｒｅａｎｄ　Ｃ１ａｓｓｉｆｉ ｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｎｚｙｍｅｓ　（１９７２）　ｐ、　１７−２２に定義 されるように加水分解酵素または脱離酵素として知られる二つの主要クラスの酵 素のいずれか一方に属する。ここで用いられるような後に一連の番号の続くＥ、 　Ｃ，という用語は、ｔｈｅ　Ｃｏｍｍ１ｓｓｉｏｎ　Ｒｅｃｏｍｍｅｎｄａｔ ｉｏｎｓに準じて酵素の分類への帰属を与える。 このような酵素の特別の例は、セリン、チオールおよびカルボン酸プロテアーゼ 、中性微生物メタロプロテアーゼ、ほかの微生物プロテアーゼおよび哺乳動物ペ プチダーゼを包含するがそれらに限定されない。別のクラスの酵素からの特定の 例は、脂肪酸エステラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，１）、アリールエステルヒ ドロラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，２）、トリアジルグリセロールアシルヒド ロラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１，３）、およびエステルおよびアミド結合を切 断することが知られている他の酵素を包含するがそれらに限定されない。 例えば、一般的に望ましいプロテアーゼはＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓｓｐおよびＢ ａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ、起源のアルカリプロテアーゼを包含するがそれらに限定 されず；望ましいエステラーゼはブタ肝臓エステラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１ ，１）を包含するがそれに限定されない；そして望ましいリパーゼはＣａｎｄｉ ｄａ　Ｃｙｌｉｎｄｒａｃｅａ　（Ｃ，ｒｕｇｏｓａとしても知られる）（Ｅ、 　Ｃ，３，１，１，３）起源のリパーゼを包含するがそれに限定されない。容易 に利用可能で、高い立体選択性を有し、基質の範囲が広範であるためこれらが望 ましい。 他のプロテアーゼは、いずれもウシおよびブタ膵臓から単離されたα−キモトリ プシン（Ｅ、　Ｃ，３，４，２１，１）およびトリプシン（Ｅ、　Ｃ，３，４， ２１，４）のような動物起源のセリンプロテアーゼ；植物起源のセリンプロテア ーゼ；ペプシン（Ｅ、Ｃ９３，４，２３，１）、キモシン（Ｅ、　Ｃ，３，４， ２３，４）およびカルボキシペプチダーゼＡ（Ｅ、Ｃ，３，４，１，１）のよう な動物起源のカルボン酸プロテアーゼ；一般にズブチリシン（Ｅ、　Ｃ，３，４ ，２１，１４）に属すが、天然に存在する種および遺伝的に操作された種を包含 する様々な微生物から単離された微生物起源のセリンプロテアーゼ、このような 微生物にはＢａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓａｍｙｌ ｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　Ａｍｙｌｏｓａｃｃｈａｒ ｉｃｕｓおよびＢａｃｉｌｌｕｓ　ｌｉｃｈｅｎｉｆｏｒｍｉｓがある；　Ａｓ ｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅおよびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｆｌａｖｕ ｓのようなＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　Ｓｐ。 起源のセリンプロテアーゼ、これらはズブチリシンとして分類されるがアスペル ギルスアルカリプロテアーゼとも呼ばれる；Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚ ａｅ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ　ｓｐ、。 およびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　Ｇｒｉｓｅｕｓのような様々な起源から単離 された微生物メタロ−中性プロテアーゼ（Ｅ。 Ｃ，３，４，２４，４）およびＡｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ、　Ｂａｃｉｌｌｕｓ、 　Ｍｕｃｏｒ。 Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ、　Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ、　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ、　 ５ａｒｒａｔｉａ。 ５ｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ、５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ、　Ｓｔｒｅｐｔ ｏｍｙｃｅｓおよびＴｒｉｔｉｒａｃｈｉｕｍ属のような起源から単離された他 の微生物プロテアーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，４，２３，６）を包含するがそれらに限 定されない。哺乳動物血液、膵臓、膵臓、顎下線、および胃腸粘膜から単離され たプロテアーゼも使用できる。 ほかのリパーゼは、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、　Ｐｓｅ ｕ−ｄｏｍｏｎａｓ　ｆｌｏｕｅｒｃｅｎｓ、　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　Ａｒｒｈｉ ｚｕｓ、　Ｒｈｉｚｏｐｕｓｄｅｌｅｍａｒ、　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ｎｉｖｅｕ ｓｍ　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓ　ｏｒｙｚａｅ、　Ｒｈ１ｚｏｐｕｓｊａｐｏｎｉｃｕ ｓ、　Ｃｈｒｏｍｏｂａｋｕｔｅｒｉｕｍ　ｖｉｓｃｏｓｕｍ、　Ｇｅｏｔｒｉ ｃｈｉｕｍｃａｎｄｉｕｍ、　Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｎｉｇｅｒ、　Ａｓｐ ｅｒｇｉｌｌｕｓ　５ｏｊａｅ。 Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ　ｏｒｙｚａｅ、　Ｍｕｃｏｒ　ｍ１ｅｈｅｉ、　Ａｃ ｈｒｏｒｕｏｂａｃｔｅｒｌｉｐｏｌｙｔｉｃｕｍ、　Ａｌｃａｌｉｇｅｎｅｓ 　ｓｐ、、　Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、およびＣａｎｄｉｄａ　１ｉｐ ｏｌｙｔｉｃａのような微生物から単離されたものを包含するがそれらに限定さ れない。様々な哺乳動物種由来の膵リパーゼおよび小麦胚芽から得られたリパー ゼも用いることができる。哺乳動物起源の他のエステラーゼはカルボキシエステ ラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１゜１）、カルボキシペプチダーゼＡ　（Ｅ、　Ｃ ，３，４，１７，１）、アセチルコリンエステラーゼ（Ｅ、　Ｃ，３，１，１， ７）、ペプシン（Ｅ。 Ｃ，３，４，２３，１）　、およびトリプシン（Ｅ、　Ｃ，３，４，２１，４） を含有するがそれらに限定されない。他の微生物源はＢａｃｉｌｌｕｓ　ｔｈｅ ｒｍｏｐｒｏｔｅｏｌｙｔｉｃｕｓ　（サーモリシンに関する）、Ｂａｃｉｌｌ ｕｓａｍｙｌｏｌｉｑｕｅｆａｃｉｅｎｓおよびＳｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓｇｒ ｉｓｅｕｓ、ならびにＰａｐａｙａ　Ｓｐ、から得られたパパイン（Ｅ、　Ｃ， ３，４，２２，２）を包含する。 起源に応じて、リパーゼおよびエステラーゼは約２から約１０までの作用ｐＨ範 囲を有し、至適ｐＨは一般に５．０から８．５の間にある。大半の酵素の温度範 囲は約１５から７０℃までであり、通常酵素は約２０−４５℃の範囲で最も有効 に機能する。 単離精製された酵素の他に、酵素活性は幾分減少するが、細胞抽出物、細胞溶解 物、部分精製酵素単離物および完全な細胞といった比較的不純なそして／または 不均一な酵素標品を用いて本発明のプロセスを行うこともできることを銘記すべ きである。常法；たとえば、共有結合、吸着、マトリクス捕捉、イオン−交換、 またはマイクロカプセル化によって、酵素を固相の膜板外の支持体に固定化する こともできる。実際、生存可能であれ不可能であれ、完全な細胞内に含まれる酵 素を本発明の実施に際して使用することもでき、したがって、ここで用いられる 「酵素」という用語はこれらすべての形の生物触媒酵素を広く包含することを意 味するものとする。 特に、キラルな化合物およびその前駆体または誘導体を本発明のプロセスによっ て調製することが望ましく、ここにおいて化学合成鏡像体のラセミ混合物の酵素 的分割は以下を包含するがそれらに限定されない；ナプロキセンまたは２−（６ −メドキシー２−ナフチル）プロピオン酸；イブプロフェンまたは２−（４−イ ソブチルフェニル）プロピオン酸：ケトプロフェンまたは２−（３−ベンゾイル フェニル）プロピオン酸；フルルビプロフェンまたは２−（２−フロロ−４−ビ フェニリル）プロピオン酸；２−クロロプロピオン酸および２−ブロモプロピオ ン酸のような２−ハロプロピオン酸；２−（４−クロロフェノキシ）プロピオン 酸、２−（２−メチル−４−クロロフェノキシ）プロピオン酸、２−（４−ヒド ロキシフェノキシ）プロピオン酸のような２−アリールオキシプロピオン酸；２ −メチル−３−チオールプロピオン酸およびそのチオール保護誘導体、２−ヒド ロキシ−４−フェニル酪酸およびそのヒドロキシ保護誘導体；２−ブロモ−４− フェニル酪酸のような２−ハロー４−フェニル酪酸；およびそれらのエステル。 多くの特定の反応物質および生成物の化学的性質（例えば官能基の性質）は、上 記の反応区分、反応、および生成物の一部のリストから明白であろう。これらの 反応が以下のようなりラスに分類されることが上記リストから理解されよう：水 溶性で、実質的に有機溶媒−不溶性の反応物質を水溶性および／または有機溶媒 可溶性のいずれかの生成物分子種に変換する。このようなタイプの反応は、それ ぞれ水性で均一の抽出的分散および抽出的膜リアクタープロセスでの処理に特に 適している。多相分散および膜に基づく抽出反応プロセスは、生成物分子種が有 機溶媒可溶性で、酵素に対して阻害的である場合には特に好適であろう。反応の 一例として、水溶性のエステルを上記のプロセスで酸に加水分解することができ 、当該の酸は水相のｐＨ１有機溶媒の性質、および当該の酸の分配挙動に応じて 主として水溶性であるかまたは有機溶媒可溶性であるかのいずれかである。対応 して同時に生成するアルコール産物は一般に主として水相に可溶性である。この 場合、未反応のエステル異性体も水相に残存し、一方有機溶媒は酸膜エステル化 産物が酵素に対して阻害的である場合にはその産物を除去するため使用されるこ とができる。 水性で均一な抽出的分散、または抽出的膜プロセスに於て、立体選択的酵素反応 は必要な化学的誘導体のラセミ型を反応物質混合物として用いて行うことができ る。特に、エステル誘導体ラセミ混合物の求める産物への立体選択的、酵素的加 水分解によって、エステルのラセミ混合物の酵素的分割を行うことができる。 とりわけ、使用するエステル誘導体は酵素活性および誘導体に対する立体選択性 を最大にするのみならずエステル誘導体の水溶解性を適当に調整するよう選択さ れる。分割プロセスに有用なイブプロフェンおよびナプロキセンのような酸のエ ステル誘導体は構造式（Ｉ）で表される化合物を包含するがそれに限定されない 、ここにおいてＹｌの基は−５（ｈ−（スルホン酸エステル）、−０３Ｏ，−（ 硫酸エステル）、−０ＰＯ２−（リン酸エステル）、アミン）であり、Ｚはメチ ル基であるがメチル基に限定されない。 あるいはまた、新規方法は以下のような化合物の利用を包含する：ｌ）ここにお いて、水酸基はアルキル、炭酸、炭酸アルキル、炭酸アリール、アシル、ペンシ ル、メシル、トリチルおよびトシル基からなる一群から選択された保護基を用い て誘導体化される；２）チオールはアセチル、ベンゾイル、およびチオカルバモ イル基からなる一群から選択された保護基を用いて誘導体化される；３）アリー ルオキシ基は４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシおよび２−メチ ル−４−クロロフェノキシ基からなる一群から選択される；および４）ハロゲン は塩素および臭素からなる一群から選択される。 このようなキラルな酸のエステル誘導体を、水性で均一な抽出的分散または抽出 的膜リアクタープロセスに直接そのラセミ混合物をフィードすることによって、 直接分割することができる。 水性均一反応プロセスに於て、これは化合物を使用するための一方法であるが、 ラセミ反応物質混合物および酵素は一般に水溶液として反応物質容器に入れられ る（例えば、連続攪拌タンクリアクターまたは充填ベッドリアクター）。反応物 質は、ｐＨ制御、攪拌、およびバッチ式、半連続または連続式のいずれかでの容 器への流入および放出のためのパルプ調節およびパイプ調節のための方法を随意 に提供される。ひとたび酵素反応が、望ましい程度の完了まで進行したならば、 求める異性体産物（すなわち、未変換エステル反応物質および加水分解反応の酸 性生成物）を常法により酵素および相互に分離することができる。 あるいはまた、膜リアクタープロセスに於て、これは化合物を使用するための方 法であるが、ラセミ反応物質混合物および酵素は水溶液として流入される。反応 物質は、ｐＨ制御、攪拌、およびバッチ式、半連続または連続式のいずれかでの 容器への流入および放出のためのバルブ調節およびパイプ調節のための方法を随 意に提供される。ひとたび酵素反応が、望ましい程度の完了まで進行したならば 、求める異性体産物（すなわち、未変換エステル反応物質および加水分解反応の 酸性生成物）を膜の両側に接する分かれた水相および有機相中で相互に分離する 。有機相は阻害的な反応生成物を水相の反応系から抽出する働きをする。水性で 均一な抽出的分散または膜リアクタープロセスに於いて鍵となる反応物質および 生成物の溶解性の相違は、比較的水溶性で荷電した官能基〔例えばエステル（ス ルホン酸基、硫酸基、リン酸基、または第４級アミン基によって誘導体化された ）〕の、有機相により容易に抽出されやすいもっと非極性でそして／または荷電 の少ない官能基（例えば、より弱いカルボン酸）への変換に起因すると思われる 。 必ずしもそうとは限らないが一般に、分配係数、即ち相平衡での水相分子濃度に 対する有機相濃度の比、または水相対有機相の濃度比、は主要反応物質および生 成物について２以上であり、抽出的分散および抽出的膜リアクタープロセスの最 適な実施のためには主要物質の分配比は約１０以上が望ましい。強酸の塩である ような反応物質（例えば、スルホン酸、硫酸、およびリン酸エステル誘導体）に ついては、分配係数はｌ）Ｈにたいして感受性でなく、これらの化合物の有機相 溶解度はきわめて低い。しかしながら、カルボン酸反応産物の分配係数は、少な くともその酸のｐＫａ値付近または以上のｐＨ値についてはｐＨに依存する。理 想的な環境のもとでは、分配係数比は２０またはそれ以上になり得るが、そのこ とが非常に効率的な反応物質の作動および反応物質／生成物立体異性体分離に導 く。しかしそのような著しい溶解度の相違は本発明の実施のために必要ではない 。 水相および有機相に於ける反応物質および生成物の実際の溶解度が、抽出的分散 および抽出的リアクタープロセスの実施態様を存する本発明の実施にとって重要 である。というのは、水への溶解度が増強された反応物質は、水を介した分割を 受は易いからである。本発明の望ましい実施態様の反応物質の増大した溶解度を 第１表に示す。 阻害的反応生成物の抽出に有用であるとされる溶媒は、ヘキサン、シクロヘキサ ン、キシレンおよびトルエンのような脂肪族もしくは芳香族炭化水素類、塩化メ チレンおよびクロロホルムのような塩素系溶媒、アミルアルコール、オクタツー ルおよびデカノールのような水非混和性アルコール類、酢酸アミルおよび酢酸ブ チルを含むエステル類、ｔ−ブチルメチルエーテルのようなエーテル類、そして メチルイソブチルケトンのようなケトン類を含むかこれに限定されない。抽出的 分散あるいは抽出的膜リアクタープロセスにおいである溶媒を選択する際、重要 な考慮すべき点としては、その膜素材および酵素との適合性の他、毒性、粘性、 溶解および混和の性質そして他の反応構成物からの容易な分離の可能性が含まれ る。 新規な多相−分散抽出的反応プロセス法において、ラセミ反応混合物および酵素 は水溶液として再び反応容器（例えば、連続攪拌タンクリアクター、パックドペ ッドリアクター、流動−ペッドリアクターあるいは溶媒抽出操作において水相と 有機相とを接触させるために用いられる他のタイプの装置とに注がれる。この方 法では、ある有機溶媒もまた反応容器に加えられ、水相と有機相には激しい攪拌 による高い表面接触と機械的攪拌による分散とがもたらされ、同時に有機溶媒は 水性反応相から阻害的反応生成物を抽出する。反応の後に、水相と有機相とは常 法によって分離され、そして水溶性および脂溶性のそれぞれの立体異性体はこれ らの二つの相から単離される。 抽出的膜リアクター法に於いては、有機溶媒も反応に用いられ、水相全体および 有機相全体は膜を隔てて相互に分離されることになる。このように水相および有 機相が分離されるので、それぞれ水溶性および有機溶媒可溶性の立体異性体をこ れらの二相から単離することができる。 さらに、本発明の方法は、限外濾過、透析、透析濾過、沈澱、およびイオン−交 換の一群から選択される方法によって当該の第−流体中に残存する立体異性体か ら酵素を分離することを含んでなる。 上記の様々なプロセスの方法に於いて、ひとたび酵素反応が起こると、水相（ま たは抽出的反応プロセスの場合には第一流体）は酵素並びに未反応（第二）立体 異性体を含有する。一般に、新規方法のプロセスは酵素−未変換異性体分離のた めの方法を包含する。限外濾過、透析濾過、透析、沈澱、または吸着のような当 業者に公知の技法によって、異性体溶液から酵素を除去することができる。化学 的方法または環境を変化させる方法（例えば、塩の添加、温度低下、またはｐＨ 調整）により異性体の水溶解度を変化させることによって、未変換の異性体を酵 素から分離することができる。約２０から８０°Ｃまでの温度および約１０から 約１４までのｐＨ範囲で起こる非酵素的加水分解反応によって、酵素と反応しな い異性体を化学的に変換し、対応するキラルな酸を生じることができる。ひとた び分離か完了すると、酵素を反応容器にリサイクルして、単離された異性体をさ らに処理することができる。 多相分散抽出的反応プロセスの実施に際して、二つのプロセス溶液相、一方は水 性（すなわち第一流体）および他方は水に混和しない有機の液体または溶液（す なわち第二流体）を接触させる。さらに、鍵となる反応物質が水溶性であり、阻 害的なまたは不安定な有機溶媒可溶性反応生成物を有機溶媒中で抽出することに よって除去することが望ましい多相分散抽出反応系では、水相と接触した有機相 を十分に分散させることが望ましい。このように実施すると迅速で能率的な生成 物の水性酵素反応相からの除去が容易になる。このようにして、酵素反応の収率 および生産性は向上する。 分散の詳細は、生成物純度、反応物質の変換、相分離およびｐＨ制御を包含する 多相分散抽出反応プロセス実施の多数の二次的態様に影響を与えつる。物質の局 所の濃度勾配に応じた、そしてそれらの水相／有機相分配挙動に符号した拡散プ ロセスによって、反応物質が相に入り、生成物がその相からでる。 反応容器（例えば連続攪拌タンクリアクター）の温度は、酵素活性および安定性 に最適な範囲に維持され、溶液ｐＨも同様である。一方のまたは両方の反応相で の連続処理の作動がそれを決定する場合には（例えば、立体異性体のラセミ混合 物中で求める異性体の化学反応を行い、その異性体をプロセスにリサイクルする こと、または酵素と反応しないエステルを化学的に加水分解して対応するキラル な酸を回収すること）、相の温度、ｐＨ１および他の性質を効率よく酵素が機能 するために必要な範囲外で連続処理作動に合わせて調整することができる。この 場合、こういった相を多相分散抽出反応それ自体にフィードバックする前にもと の温度およびｐＨ条件に戻すことができる。 追加の処理ステップ（例えば、分割プロセスの反復使用、ラセミ混合液のリサイ クルおよび未変換反応物質および／または生成物の精製）は、分割プロセスの効 率、およびそこで生産されたキラルな生成物の化学的、立体化学的純度を向上さ せることができる。たとえば、光学分割された産物を有機相で多相分散抽出リア クターから除去する場合（例えば、イブプロフェンまたはナプロキセン）、この 有機処理相をポンプで保持タンクに送り、有機溶液から酸を除去するために塩基 性溶液で処理することができ、その有機溶媒をリサイクルすることができる。あ るいはまた、生成物を有機流体から分離し、揮発性有機溶媒の蒸発およびそれに 伴う分割された酸生成物の結晶化によって精製することができる。さらに、キラ ルな産物をラセミ化し、出発時のラセミ型立体異性体混合物に戻し、分割プロセ スにラセミ混合物として再導入することができる。 光学的に純粋な存機溶媒可溶性生成物を純粋な有機液体の形でまたは揮発性有機 溶媒の溶液として有機処理相に於て抽出リアクターから分離する場合、その生成 物を蒸留または溶媒蒸発によってさらに精製することができる。 水溶性反応物質のラセミ混合物の分割への本発明の適用に於て、支持マトリクス 上または内に、および／または水相中に、含有され、またはそうでなければ固定 化された酵素は、フィード混合物中に存在する特定の光学異性体のすべてではな いが一つまたはそれ以上の生物変換に於て、最大の立体選択性を示すよう選択さ れる。実質的により水溶性の異性体を少なくとも一つの実質的により有機溶媒可 溶性の反応生成物に変換する反応は、酵素によって触媒され、この水−不溶性生 成物は、比較的高い光学純度を有する状態で有機相に抽出される。同時に、フィ ード異性体混合物は立体選択的酵素のためのよりよい基質として働く特定の光学 異性体については空になり、そしてこのようにして水相は同時に光学的に精製さ れ、有機相産物分子種とは反対の立体配置を持つ非反応性異性体を濃縮する。 最終結果としては、ＲおよびＳ光学異性体の水相混合物は二つの相に分離され、 一方は（即ち有機生成物相）は有機相に存在する変換された親油性異性体である 酵素反応産物を含有し、他方もとの水相は反対の立体化学的配置を有する比較的 水溶性の反応物質を含有する。このように、ＲおよびＳ光学異性体の混合物を含 有するフィード相は処理されてその結果二つの［産物」相が結果として生じる。 その一方はＲ（またはＳ）配置を有する物質を濃縮し、他方はＳ（またはＲ）配 置を持つ物質が濃縮される。求める鏡像体生成物の全体を通しての収率は、分離 された相の一方のラセミ化および続いてそれを分割プロセスにリサイクルするこ とによってさらに高められる可能性がある。 キラルなエステルの立体化学的精製のための多相分散抽出反応の実施に際して、 プロテアーゼ酵素を水相（一般に低濃度バッファーを含有する）に用いることが 望ましく、その水相はまた反応物質エステルの水溶性立体異性体のラセミ混合物 を含有するが、次にその水相を有機相と接触させる。有機酸は作用ｐＨで有機溶 液にある程度の溶解度を示すので、また水溶性エステルの溶解度の特徴が正確に その反対であるので、光学的に精製された生成物の酸を有機相に於て多相分散抽 出反応から分離することができる。一方、ラセミ体エステル水性フィード相の比 較的非反応性の立体異性体はおちに水相に残存することになる。生成物の除去は 、反応物質と生成物の間の最適分配選択性を与えるような有機溶媒を用いてリア クターを作動させることによって、容易になる。 一方、「正しい」（即ち生物学的に活性な）立体化学的配置を有するのが酵素反 応性の低いエステルである場合、プロセスの水相から回収しそれから単離するこ とができる；そしてもし求めるものがこの異性体の酸型であるならば、光学的に 精製されたエステルを、立体化学的純度を実質的に変化させることなしに化学的 に加水分解し、求める産物として光学的に純粋な酸を生じることができる。ある いはまた、未反応の立体異性体を含有する水相を除去し、立体異性体をラセミ化 し、ラセミ化した立体異性体混合物を水相に再導入することができる。他方、求 める立体化学的配置を有する物質がなくなりそれによって不必要な物質が濃縮さ れた有機相中のカルボン酸生成物は、ラセミ化条件にかける前または後に必要な らば再びエステル化し、その後そのラセミ混合物をプロセスにリサイクルするこ とができる。一方、「正しい」立体化学的配置を有するのが酵素的に反応性の高 いエステルである場合には、求める生成物は光学的に精製された酸の形で見いだ されるである。 したがって、上記の多相分散抽出反応プロセスは、有機相に接触したＲおよびＳ エステルの水相混合物を二相に分離することができ、水相は親水性エステルの未 変換立体異性体を含有し、有機相はその反対の立体配置を有する比較的有機溶媒 可溶性の酸立体異性体を含有する。この方法に於て、ＲおよびＳの両方の混合物 を含有する水性フィード相は処理されて、二つの「生成物」相を結果として生じ る。一方はＲ配置の物質が濃縮され、他方はＳ配置の物質が濃縮される。したが って、もし酵素がエステルのＲ型に対して活性であるならば、そしてもしＳ−異 性体が求める産物であるならば、ここでその産物をＳ−エステルの形で水性処理 相から回収することになる；Ｓ−酸を化学的加水分解後に回収することができる 。しかしながら、もし必要なものがＲ−異性体であるならば、この立体化学的配 置を有する物質を有機処理相から単離することができる。 新規化合物を用いた新規抽出的膜リアクタープロセスの実施に適した酵素−活性 化膜は、い（つかの考え、もろちん化学的性質、形態、および酵素活性化の方法 を考慮して選択される。これらのうちの第一にかんしては、膜の材質は、反応系 のいかなる成分によっても、特に有機反応物質、生成物および／または溶媒によ って、有害に（たとえば膨張したり、化学的に侵される）ならないようなもので なければならない。無機材料（例えばセラミックス）を含んでなる膜を本発明の 実施に使用することができるが、ポリマー膜が望ましい実施態様に相当する。特 に耐溶媒性ポリマーから作られた膜は、本方法によく適合する。本発明の実施の ために適した膜に加工することのできる一般的なポリマーの材質は、再生セルロ ース、セルロースのエステル（そして特に部分的な酢酸および硝酸エステルが望 ましい）、ポリアクリロニトリルおよびそのコポリマー（特に、アクリルアミド 、アクリル酸、アクリル酸エステルおよび／またはメタクリル酸の機能性を取り 込んだコポリマーを包含するがそれらに限定されない親水性のもの）、ポリウレ タン−含有コポリマー、ポリアリールスルホンおよびポリアールエーテルスルホ ン（ポリビトロキシエーテル、ポリエチレングリコール、ポリビニルアルコール 、ポリカプロラクトンおよびポリエピハロゲノヒドリンのような親水性コポリマ ーをともなうポリスルホン、ポリエーテルスルホンおよびそれらの混合を包含す る）、フッ化ポリビニリデン、ポリテトラフロロエチレン、ポリビニルアルコー ル、脂肪族および芳香族ポリアミド、ポリイミド、ポリエーテルイミド、ポリエ ステル、ポリカーボネート、ポリプロピレンおよびポリ塩化ビニルのようなポリ オレフィン、ポリベンズイミダゾールおよびポリベンズイミダシロンを包含する がそれらに限定されない。 酵素活性化膜の酵素成分は一般に主として水性の環境で最も有効に機能する。こ のような理由から、酵素反応が膜内で行われることになる場合には、膜は水−湿 潤性または親水性であることか望ましい。、上記膜ポリマーのあるものは本来親 水性である（例えば、セルロースを主成分とする物質、多くのポリアクリロニト リルコポリマーおよびポリアミド）。しかしながら、本来は親水性でないもので あっても、適当な化学的または物理的表面処理によって（例えば、親水性官能基 の誘導体化または付加による、あるいは単に適当な界面活性剤との接触による） 、疎水性ポリマーの細孔の壁面を親水性物質でコーティングすることによって、 または単に非対称性の微小多孔性膜の細孔容積を高度含水ゲルの形で親水性酵素 で満たすことによって、この新規方法による実施に適合させることができる。 酸素支持体としての使用に適した膜はいくつかの形態的特徴のうち一つを示すこ とができる。特に、そのような膜は微量濾過プロセスで一般に用いられるタイプ の微小多孔性の膜であってもよく、ここに於て、孔径は一般に数百ミクロンから 数ミクロンまでの範囲で、細孔の排除容積は数パーセントから９０％およびそれ 以上までの範囲にわたる。このような微小多孔性の膜は等方性であってよく　（ すなわち一方の外表面から他方まで孔径に有意な変化はない）、またはある程度 の異方性を示すこともある。限外濾過膜も本方法の実施に有用である。それらは 一般に高度に非対称性で、約１から２０ｎｍの範囲の有効孔径を持つ非常に薄い 表面層によって特徴付けられ、その表面層はそれより非常に厚いかより多孔性の 、もっと非常に大きな細孔を含んでなる基体領域の上にある。さらに、ゲル−タ イプの透析膜（例えば、血液透析に用いられるタイプの再生セルロース膜）も、 酵素か膜表面に存在する場合には、使用することができる。外表面への酵素の共 有結合によって、または片側の表面に動的酵素ゲル−分極「二次膜」層の形成に よって、このような膜を表面−活性化することができる。 さらに、そのような膜は非常に微小多孔性であり、比較的厚く、排除容積が大き く、微細な多孔性の海綿状基体領域によって特徴付けられるが、片側の外表面に 限外濾過型の表面層を有する。このような膜の形状は大量の酵素を載せることを 可能にし、過ヨウ素酸酵素置換を容易にする。このような形態を持つ表面層のあ る微小濾過膜の利用を酵素を用いた膜の活性化方法に関連して以下に述べる。 この新規方法の抽出的膜リアクターの実施態様に用いられる膜の形態は、二次的 な要件であり、フラットシート状、直径の大きなチューブ状、および様々な直径 のホローファイバー状のあらゆる膜を使用できる（第８図）。膜モジュールは二 つの入口と二つの出口を有することが必須であるので、平板シート状の膜をネジ 式のカートリッジに装填するためにはプレート−アンド−フレームまたはカセッ ト−タイプの枠が望ましい。−・方、チューブ状またはホローファイバー膜は円 筒形のマルチチューブやマルチファイバー膜モジュールに能率的に装填され、そ の構築物はシェル−アンド−チューブ交換器に類似する。ホローファイバーモジ ュールの形の膜によって、広い面積の膜をしっかりと無駄なく装填することがで きる。 膜相内への酵素の含有、捕捉、または固定化によって、膜からの、そして水性ま たは有機溶媒プロセス流のいずれかへの、酵素の漏出をほぼ防ぐことができる。 酵素の取り込みに適した方法は、非対称な（すなわち表面層のある）、微小多孔 性膜構造の細孔の空隙への含有、膜の細孔壁面への吸着、膜細孔内のポリマー性 ゲル中へのカプセル化または捕捉、膜の細孔壁面への共有結合および細孔の空隙 内のもしくは膜の細孔壁面に吸着した酵素の架橋結合を含むがこれらに限定され ない。さらに、酵素は粒子、固相支持体および固定化された酵素が水性流体と接 触できるようなものに固定化することもできる。 さらに詳しくは、膜を酵素によって活性化するための多くの別法が存在する。最 も簡単な方法は、主体触媒を非膜性支持体に付着させるために開発された多くの 従来の酵素固定化の化学による酵素の膜の外面あるいは内面（即ち細孔壁）への 共有結合を含む。［Ｚａｂｏｒｓｋｙ。 ０、Ｒ，、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｅｎｚｙｍｅｓ、　ＣＲＣＰｒｅｓｓ、　 Ｃ１ｅｖｅｌａｎｄ。 ＯＨ（１９７３）；　Ｗｅｅｔａｌ、　Ｈ，Ｈ，、Ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄ　Ｅ ｎｚｙｍｅｓ。 Ａｎｔｉｇｅｎｓ、　Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ、　ａｎｄ　Ｐｅｐｔｉｄｅｓ　Ｅ ｎｚｙｍｏｌｏｇｙ。 第１巻、　Ｍａｒｃｅｌ　ｄｅｋｋｅｒ、　Ｎ、Ｙ、、（１９７５）；　Ｅｍｅ ｒｙ、　Ａ、　　ら。 Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ、　Ｂｉｏｅｎｇ、、　１６：１３５９　（１９７４）参 照１゜酵素は多孔性膜と架橋結合させたり　［Ｔｈｏｍａｓ、　Ｄ、およびＳ。 Ｒ，Ｃａｐｌａｎ、　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　５ｅｐａｒａｔｉｏｎ　Ｐｒｏｃｅｓ ｓｅｓ、　ｐｐ、３５１−３９８．　Ｐ、　Ｍｅａｒｅｓ編、　Ｅｌｓｅｖｉｅ ｒ、　Ａｍｓｔｅｒｄａｍ　（１９７６）］、膜ゲル中に捕捉したり［Ｂｌａｅ ｄｅ、　Ｗ、Ｊ、ら、　Ａｎａｌ、　Ｃｈｅｍ、。 ４４：２０３０　（１９７２）］　、カプセル化させたりあるいはイオン交換性 あるいは他の特異的あるいは非特異的蛋白−表面相互作用によって膜上あるいは 膜内部に吸着させたりすることもできる。この方法の実行においである場合には 上記の技術と組み合わせることによって、この方法が効率的になることもまた予 測できる。例えば、酵素をまず膜の外面あるいは細孔表面に吸着させ、続いて吸 着した酵素層を適切に架橋結合することによってさらに積極的に固定することも できる。 さらに、ここに参考として包含されている１９８９年１月３日発行の米国特許第 ４　、７９５．７０４号および１９８６年ｌＯ月１日および１９８８年１２月１ ９日にそれぞれ提出された同時係属出願である米国特許第９１２．５９５号およ び２６５．１７１号に記載された表面層のある微多孔性の膜に酵素は可逆的に内 蔵されてもよい。図８に示したこのような膜構造は、通常の膜リアクター操作条 件下では交差することができないような２つの境界の間に酵素を捕捉することか できる。これら２つの障壁は（１）高分子酵素が膜の多孔性内部構造からそれと 接触する水性プロセス流へと移行および漏出するのを妨げるのに十分に小さい細 孔を内蔵する酵素活性化膜の「表面」あるいは表層および（２）はとんどの酵素 の有機溶媒に対する非溶解性によって、酵素が有機プロセス流へと分配されてそ の結果膜から漏れ出ることを妨げている反対側の膜表面上の水／有機相境界から なる。このような膜は酵素の水溶液を通過させる限外濾過によって酵素によって 活性化させることができる。同時にこの方法により多孔性膜に取り込まれる活性 化酵素が非常に多く装填される。この酵素活性化法の更なる利点はその可逆性で ある。即ち、脱活性化された酵素は逆流操作によって簡単に除去することができ 、これによって定期的な酵素触媒の補給が容易になる。加えて、この分割法は前 記の一次流体中の残余の立体異性体を酵素から限外濾過、透析、透析濾過、沈澱 およびイオン交換からなる一群から選択された方法によって分離することを更に 包含する。 抽出的膜リアクタープロセスに用いられる膜を酵素活性化するための他の優先さ れる方法としては、例えば血液透析および血液濾過において用いられるタイプの 限外濾過あるいはゲル−タイプ膜の表面上での動的な酵素−ゲル−分極化膜の形 成か期待される。再生セルロースあるいは親水性ポリアクリルロニトリル基材ポ リマーおよびコポリマーからなる透析／限外濾過膜が特に望ましい。このような 膜は微細な多孔性でありそれ故に水透過性であるが、ここでの使用に適した膜の 有効な表面孔径は酵素を通すには小さすぎる。しかしながら、水性酵素溶液を膜 を通して限外濾過し、そうして膜フィルムまたは線維の片方の表面上に濃縮され た酵素ゲル層を堆積させるという単純な方法によって、このような膜を酵素で有 効にコーティングすることができるということが、示されている［Ｋｅｒｋｈｏ ｆ、　Ｐ、１．Ａ、Ｍ、ら、Ｅｎｚｙｍａｔｉｃ　Ｈｙｄｒｏｌｙｓｉｓ　ｏｆ 　Ｌｉｐｉｄｓ　ｉｎ　ａＭｅｍｂｒａｎｅ　　Ｒｅａｃｔｏｒ″、ｔｈｅ　Ｉ ｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ＭｅｍｂｒａｎｅＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　Ｓｙｍｐ ｏｓｉｕｍ、　Ｌｕｎｄ、　Ｓｗｅｄｅｎ、　Ｍａｙ　２８−３０゜１９８５で 提出されたポスター；　Ｍｏ１ｉｎａｒｉ、　Ｒ，およびＥ。 Ｄｒｉｏｌｉ、　Ｐｒｏｃ、　Ｎａｔ、　Ｃｏｎｇｒ、　Ｉｎｄ、　Ｃｈｅｍ、 　Ｄｉｖ、　Ｓｃｉ、。 ５ｉｅｎａ、　Ｊｕｎｅ、　１０−２５．１９８５］　、もし有機プロセス流が このようにして活性化された膜の表面に接触するように連続して供給されるなら ば、酵素が有機溶媒に可溶性であると認められない限りは、酵素ゲル層は膜表面 のもとの場所に残存する傾向がある。この方法の改善策として、本発明者らは酵 素タンパク質を化学的に架橋結合することによって、酵素表面層または［動的に 形成された膜」をさらに安定化した。 加えて、新規方法は、膜に結合した酵素を存するよりむしろ膜構造の外側で酵素 的分割を媒介するこのような膜を用いた抽出的膜リアクターに関する。さらに、 また別の抽出的膜リアクターに於いては、酵素は水相にあってもよく、水相は酵 素分割を最大にするために膜に会合し、そして会合しない。 とりわけ、上記の最後の分割方法、ここで分割は膜に会合したそして会合しない 水相中で生じるが、この方法に於いて、作動の一方法は酵素を水相（第一流体） に溶解することによって行われる。この実施態様に於いて、膜の水−湿潤性部分 は酵素溶液に近づくことができる。細かい海綿状マトリクスを持つ微小多孔性膜 、または高分子量カットオフの限外濾過膜（即ち酵素の分子量またはサイズより 大きなカットオフを有する）は、酵素が水性流体とともに膜にはいることを可能 にする。酵素反応は水性第一流体中で起こり、その水流は膜表面を通って循環し く即ち流体は膜に会合しない）、そして膜内部に存在する水溶液中を循環する（ 即ち流体は膜に会合する）。 水性第一流体が酵素を含有する場合、そしてそこに於いて当該酵素が反応を触媒 する場合、酵素は様々な作用様式によって膜にはいることを拒まれる。作用の一 様式は、大きさによる排除である。再生セルロースのような隙間のない、ゲル状 の透析膜は、タンパク質や酵素のような巨大分子を受は入れない。低分子量カッ トオフの限外濾過膜（即ちカットオフが酵素の分子量または大きさより低い）も また酵素を膜内部から排除する。最後にもう一つの作用様式は溶解度である。 疎水性膜は主として有機相によって湿潤している。はとんど水に非混和性の有機 溶媒中では酵素の溶解度が低いために、酵素は膜内部から排除される。有機溶媒 −湿潤性の膜は、水−湿潤性の親水性膜とは反対の方法で作動されなければなら ず、その結果小さな水一対一存機圧力差が膜を横切って常時維持される。この圧 力差は有機相が膜を通って限外濾過的に流出することを防ぐ働きをする。 このような様々なプロセスの方法に於いて、酵素反応がひとたび始まると、水流 （または抽出的反応プロセスの場合は第一流体）は、酵素並びに未反応（第二） 立体異性体を含有する。一般に、新規方法のプロセスは酵素／未変換異性体の分 離のための方法を包含する。 異性体溶液からの酵素の除去を当業者に公知の技法によって行うことかできる； たとえば、限外濾過、透析濾過、透析、沈澱、または吸着。化学的方法または環 境を変える方法（たとえば、塩の添加、温度低下、またはｐＨ調整）によって異 性体の水溶解度を変化させることにより、未変換の異性体を酵素から分離するこ とができる。約２０から８０°Ｃまての温度、および約ＩＯから約１４までのｐ Ｈ範囲で生じる非酵素的加水分解反応によって、酵素−不活性異性体を化学的に 変換して対応するキラルな酸を生じることかできる。ひとたび分離が完了したな らば、酵素を反応容器にリサイクルし、単離された異性体をさらに処理すること ができる。 抽出的膜リアクタープロセスの作動に際して、二つのプロセス溶液、一方は水性 （または第一流体）および他方は水−非混和性有機液体または溶液（または第二 流体）からなる、が、随意に酵素活性化され得る膜に接触して供給される。通常 、酵素活性化膜は親水性であり、従って接触する水相によって湿潤しているが、 これは酵素が一般に有機溶媒中よりは水性の環境においてより有効であるためで ある。実際膜が水に湿潤しているばあいには、膜の両側の流体の流れは、わずか に異なる圧力で維持されるのが望ましく、その結果小さな圧力差が膜を横切って 存在し、有機相はより大きな圧力を保持する（例えば、背圧制御装置、またはな んらかの他の圧力制御装置による）。 このように作動させるとき、水相／有機相の境界は膜の有機プロセス流に接する 側の表面にあり、この位置は安定している。膜を通っての水溶液の限外濾過は、 それに対抗する圧力差によって阻まれる（すなわち、有機相一対一水相）が、膜 の親水性によって、膜が主に水相によって湿潤していることは確かである。有機 相一対一水相の圧力差の大きさに関する主な制約（機械的な膜の強度の要求以外 の）は、その圧力差か非湿潤性有機相による膜孔の浸透に関する侵入圧を越えな いことである。上記侵入圧Ｐを以下のようなＹｏｕｎｇ−ＬａＰｌａｃｅの式か ら計算することができる：Ｐ　＝　（２ｘ　γ／Ｒｐｏｒｅ）　ｘ　ｃｏｓθこ こで、γは有機および水相間の表面張力てあり、Ｒｐｏｒｅは有効孔半径であり 、そしてθは膜基材およびそれに接触する二つの流体間の三相接触角度である。 一般に、適当に作動する圧力の窓を提供し、相を分離するものとしての役割に於 いて膜の安定した作動を確実にするために：膜の孔径は、侵入圧が少なくとも数 ｐｓｉ、望ましくは最低１０ｐｓｉであるように選択される。 膜を通り抜けて流れる水性および有機流体の容量測定流速は、約２から約１０倍 まで変化する。 （本頁以下余白） 初期の反応体を抽出膜リアクターモジュールに運び、場合により酵素活性化した 膜と接触させる供給流は、水性または水混和性である。供給流の流量は、主要反 応体（例えば、ラセミ供給混合物中の立体異性体の一つ）の酵素変換の所望の程 度を得るように調節されることが好ましい。膜の反対側の有機流の流量は、有機 可溶性の酵素反応物の一種以上を適当な濃度で抜き取れるように調節されること が好ましい。 主要反応体が水溶性であり、阻害性のもしくは不安定な有機可溶性反応生成物を 有機溶媒に抽出することによりそれを除去することが望まれる抽出膜リアクター 系では、酵素活性化した膜を通過した有機プロセス流を比較的に高速で流すこと が望まれることがある。 このような操作は酵素反応帯域からの生成物の迅速かつ有効な除去を容易にする 。何となれば、有機流の高流量は、低い生成物濃度に変化するからである。この ようにして、酵素反応の収率および生産性が改良される。同様の考慮事項が、多 相分散抽出リアクター法に当てはまる。 また、有機プロセス流の流量と水性プロセス流の流量との間の関係が、そのプロ セスから取り出される生成物の立体化学的純度に重要な効果を与える。水性プロ セス流および有機プロセス流の流れは、並流（第１図を参照のこと）または向流 （第２図を参照のこと）のいずれであってもよく、抽出リアクター法は、バッチ 式（また、所望により、一方または両方のプロセス流の循環で行なわれてもよい ）、連続式、または半バッチ式のいずれで操作されてもよい。流れ形態の詳細は 、生成物の純度、反応体の転化率、相分離およびｐｌ調節を含む、抽出リアクタ ー法の性能の幾つかの二次的な特徴に影響し得る。有機プロセス流または水性プ ロセス流の流れを酵素活性化した膜を通して送ることは望ましくない。それより むしろ、これらの不混和性のプロセス流の対流が膜の外表面を通過して送られる ことが好ましい。反応体および生成物の局所濃度勾配に応答し、かつそれらの水 性／有機分配挙動に合致する拡散プロセスにより、反応体は酵素活性化した膜に 入れられ、生成物はその膜から出される。 反応容器（例えば、連続攪拌タンクリアクターまたは膜モジュール）の温度並び にそれに供給される水性プロセス流および有機プロセス流の温度は、酸素活性お よび安定性に最適の範囲内に保たれ、溶液のｐＨも同様である。膜リアクターを 出る生成物流の一方または両方に関する次いでの処理操作がそのこと（例えば、 立体異性体のラセミ混合物中の所望の異性体の化学反応を行なって工程へのそれ の循環を可能にすること、または酵素不活性エステルを化学的に加水分解して相 当するキラル酸を回収すること）を指示する場合には、プロセス流の温度、ｐＨ および、その他の性質は有効な酵素操作に必要とされる範囲の外で調節されても よい。 この場合には、このような流れは膜リアクターそのものに戻される前にそれらの もとのｐＨおよび温度の条件に戻されてもよい。 付加的な処理工程（例えば、分割法の反覆適用、ラセミ混合液の循環（第１Ｏ図 を参照のこと）並びに未変換反応体および／または生成物の精製）は分割法の効 率、並びにその中で生成されたキラル生成物の化学的純度および立体化学的純度 を改良し得る。例えば、光学分割生成物が有機溶液（例えば、イブプロフェンま たはナプロキセン）として多相分散りアクタ−または膜抽出リアクターを出る場 合には、この有機プロセス流は保持タンクにポンプ輸送され、有機溶液から酸を 除去するために塩基性溶液で処理され、有機溶媒は循環し得る（第１２図を参照 のこと）。また、生成物は有機液体から分離され、揮発性有機溶媒の蒸発および それに伴なう分割酸生成物の結晶化により精製されてもよい。加えて、キラル生 成物はラセミ化でき、出発ラセミ立体異性体混合物の形態に逆に変換でき、この 生成されたラセミ混合物を膜に再導入してもどすことができる。光学的に精製さ れた有機可溶性生成物が清浄な有機液体の形態で、または揮発性有機溶媒中の溶 液として抽出リアクターを出る場合には、生成物は蒸留または溶媒蒸発により更 に精製されてもよい。本発明を第３図〜第５図に示されるような水溶性反応体の ラセミ混合物の分割に適用するに際して、膜中もしくは膜の上に含有され、また はそうでなければ固定化され、かつ／または水性プロセス流中に含有される酵素 は、供給混合物中に存在する特別な光学異性体の全部ではないとしても一つ以上 の生物変換に最高の立体選択性を示すように選ばれる。実質的により一層水溶性 の異性体から実質的により一層有機可溶性の少なくとも一種の反応生成物への反 応は、酵素により触媒作用を受け、この水不溶性の生成物は、次いで、比較的に 高い光学純度の状態で有機プロセス流中に取り出される。 同時に、供給異性体の混合物は、立体選択的な酵素の一層良好な基質として利用 できる特別な光学異性体を減少され、このようにして、流出する水性相供給流は 同時に光学的に精製され、有機相生成物種の立体配置と反対の立体配置をもつ非 反応性異性体に富化される。 正味の結果は、Ｒ光学異性体とＳ光学異性体との水相混合物が二つのプロセス流 に分離されることであり、その一つは有機供給流中に存在する酵素反応の変換さ れた親油性の異性体生成物を含み、一方、もとの水性流は反対の立体化学配置を 有する比較的水溶性の反応体を含む。このようにしてＲ光学異性体およびＳ光学 異性体の両方の混合物を含む供給流は二つの“生成物・流が生じるように処理さ れ、その生成物流の一つはＲ（またはＳ）配置をもつ物質に富化され、一方、そ の別の生成物流はＳ（またはＲ）配置をもつ物質に富化される。生成物の所望の 鏡像体の全収率は、流出流の一つ中の物質をラセミ化し、第１１図および第１３ 図に示されるような分割法の入口にそれを循環することにより更に増大し得る。 キラルエステルの立体化学的精製のための抽出膜の実施に際し、プロテアーゼ酵 素は膜中および／またはそれと接触する水相中に閉じ込められることが好ましく 、前記の膜の対向する面は、第１図〜第５図に示されるように、反応体エステル の水溶性立体異性体のラセミ混合物および有機溶媒を含む水性溶液（典型的に低 濃度の緩衝液を含む）の流れにより接触される。有機酸は操作ｐＨで有機溶液中 の若干の溶解性を示すので、かつ水溶性エステルの溶解特性は正反対であるので 、光学的に精製された生成物の酸は有機プロセス流中で抽出膜リアクターから運 び去ることができ、一方、ラセミエステル供給混合物の比較的に非反応性の立体 異性体は水性流中に選択的に残存する。生成物の除去は、反応体と生成物との間 に最適の分配選択性を与える有機溶媒を用いてリアクターを操作することにより 容易にされる。 一方、“正しい”　（即ち、生物活性の）立体化学配置をもつものが、より一層 酵素反応性の低いエステルである場合には、それは水性相中で工程から取り出さ れ、それから単離し得る。所望されるものがこの異性体の酸形態である場合には 、光学的に精製されたエステルは、実質的にその立体化学的純度を変えないで、 化学的に加水分解されて、所望の生成物として光学的に精製された酸を生成し得 る。また、非反応性の立体異性体を含む水相は膜から除去でき、立体異性体をラ セミ化し、水相中のラセミ化立体異性体混合物を膜に再導入し得る。その間、油 相中のカルボン酸生成物は所望の立体化学配置を有する物質を減少され、それに より望ましくない物質に富化され、方法に循環する前に、ラセミ化条件に暴露さ れる前、または次いでに、必要により再エステル化されてもよい。一方“正しい ”立体化学配置をもつものがより一層酵素反応性のエステルである場合には、所 望の生成物は光学的に精製された酸の形態で認められる。 こうして、上記の抽出膜リアクター法は、ＲエステルおよびＳエステルの水相混 合物を二つのプロセス流に分離し、水性流はもとの供給流中に存在する親水性エ ステルの未変換の立体異性体を含み、有機流は反応の立体化学配置を有する比較 的に油溶性の酸異性体を含む。このようにしてＲエステルおよびＳエステルの両 方の混合物を含む供給流は、二つの“生成物”流が生じるように処理され、その うちの一つはＲ配置を有する物質に富化され、一方、その別のものはＳ配置を有 する物質に富化される。酵素が第１３図に示されるようにエステルのＲ形態に対 して活性であり、かつＳ−異性体が所望の生成物である場合には、それはＳ−エ ステルの形態で流出する水性プロセス流から回収される。Ｓ−酸は化学的加水分 解後に回収し得る。必要とされるものがＲ−異性体である場合には、この立体化 学配置を有する物質は有機プロセス流から単離し得る。 第３図〜第５図は、キラル中心が酸部分にある、ラセミエステルおよび酸の分割 のための特別な抽出酵素膜リアクター法を示す。これらの酵素膜リアクターの操 作の上記の説明および以下の実施例は、立体化学的に純粋な化合物の製造に於け る本発明の化合物の潜在的な適用の広がりを示唆することのみを意味し、それら は本発明の範囲について何ら限定するものではなく、またこれらの多相の抽出膜 リアクター法に意図される操作の方式を何ら限定するものではない。 均一水性反応および多相分散抽出反応系の操作の上記の説明並びに以下の実施例 の説明は、立体化学的に純粋な化合物の製造に於ける本発明の潜在的な適用の広 がりを示唆することのみを意味し、それらは本発明の範囲を何ら限定するもので はなく、またこれらの方法に意図される操作の方法を何ら限定するものではない 。 ６．０　　実施例 本発明の実施例およびその要素は、以下のとおりである。本明細書に使用される 文字“Ｕ”単独または接頭辞としての“Ｕ”は、“マイクロ”を意味する。 本明細書に使用される“アルキル”という用語は、直鎖状および分枝鎖状アルキ ル部分の両方を含む。 ６．１　　水溶性エステルおよび水不溶性エステルの合成以下の合成の結果は、 実施例６．１．１〜６．１．１２に関して第２表中に要約される。 実施例６．１．１　　方法ＡＩ　　２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸 の４−スルホメチル エステルのナトリウム塩（化合物ｌ） の調製 トリフルオロ酢酸１２５ｍｔ’を含むビーカーに、２−（４−イソブチルフェニ ル）プロパン酸（１０３ｇ、　０．５モル）および重亜硫酸ナトリウムホルムア ルデヒド（６７ｇ、０．５モル）を添加した。この混合物を攪拌し、無水トリフ ルオロ酢酸（１０５ｇ、　０．５モル）を一度に添加した。混合物を温め、反応 体が迅速に溶解した。３０分後、曇った溶液をガラスフリットで濾過し、濾液を 減圧下で蒸発させた。残渣を水に溶解し、沈殿した少量の未反応の２−（４−イ ソブチルフェニル）プロパン酸をヘキサンによる抽出により除去した。次いで、 水性の濾液を塩化ナトリウムで飽和して所望の生成物を生成し、白色固体として 分離した。この物質を濾過により単離し、乾燥して化合物１　１３０ｇを収率８ １％で生成した。 第２表 １　２−（４−イソブチルフェ　　　Ａ１　　　８１％ニル）プロパン酸の４− ス ルホメチルエステルのナト　　　Ｂ１　　６８％リウム塩 ２　２−（４−イソブチルフエ　　　Ａ２　　７６％ニル）プロパン酸の２−ス ルホエチルエステルのナト リウム塩 ３　２−（４−イソブチルフエ　　　Ｃ１８２％ニル）プロパン酸の３−ス ルホプロピルエステルのカ リウム塩 ４　２−（４−イソブチルフエ　　　０２　　７４％ニル）プロパン酸の４−ス ルホブチルエステルのカリ ウム塩 第２表（続き） 化　合　物　　　　　調製の方法　　収率５　２−（４−イソブチルフエ　　　 Ｄ　　　　　１２％ニル）プロパン酸の２−ヒ ドロキシエチルエステルの リン酸エステルのジナトリ ラム塩 ６　２−（４−イソブチルフエ　　　Ｅ　　　　　４２％ニル）プロパン酸の３ −ヒ ドロキシプロピルの硫酸エ ステルのカリウム塩 ７　２−（６−メドキシー２−　　　　Ｃ３２５％ナフチル）プロパン酸の３ 一スルホプロピルエステル のカリウム塩 ８　２−（６−メドキシー２−　　　８２　　　６９％ナフチル）プロパン酸の ２ −スルホエチルエステルの カリウム塩 ９　２−（６−メドキシー２−　　　　Ａ３　　　２９％ナフチル）プロパン酸 のス ルホメチルエステルのナト リウム塩 第２表（続き） 化　合　物　　　　　調製の方法　　収率１０２−（４−イソブチルフェ　　　 Ｆｌ　　　　２３％ニル）プロパン酸の２−　（Ｎ。 Ｎ、Ｎ−）リメチルアンモニ ラム）エチルエステルのヨ ウ化物塩 １１２−（６−メドキシー２−　　　　Ｆ２　　　６６％ナフチル）プロパン酸 の２ −（Ｎ、　Ｎ、　Ｎ−トリメチルア ンモニウム）エチルエステ ルのメチル硫酸塩 １２２−（６−メドキシー２−　　　　Ｆ３　　８０．９％ナフチル）プロパン 酸の３ −（Ｎ、　Ｎ、　Ｎ−トリメチルア ンモニウム）プロピルニス テルのメチル硫酸塩 １３２−クロロプロパン酸の３　　　　Ｃ４４０％−スルホプロピルエステル のカリウム塩 １４　　Ｄ−（−）−３−３−アセ　　　Ｂ３　　４３％チルチオ−２−メチル プロ パン酸のスルホメチルニス テルのカリウム塩 第２表（続き） 化　合　物　　　　　調製の方法　　収率１５　　Ｌ−（＋）−３−３−アセ　 　　Ｂ４　　７６％チルチオ−２−メチルプロ パン酸のスルホメチルニス テルのカリウム塩 １６　　（±’）　−３−３−ベンシイ　　　Ｂ５　　８８％ルチルー２−メチ ルプロパ ン酸のスルホメチルエステ ルのカリウム塩 １７２−（４−クロロフェノキ　　　８６　　　２０％シ）プロパン酸のスルホ ノ チルエステルのナトリウム 塩 １８２−（６−メドキシー２−　　　８７　　　　−ナフチル）プロパン酸のメ チルエステルのナトリウム 酸 １９２−（４−イソプチルフエ　　　Ｂ８　　９５％ニル）プロパン酸の２，２ ゜ ２−トリフルオロエチルエ ステル ２０２−クロロプロパン酸のす　　　０　　　　９５％クチルエステル 実施例６．１．２　　方法Ｂｌ　　２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸 の４−スルホメチル エステルのナトリウム塩（化合物ｌ） の調製 イブプロフェン（２０，６ｇ、　０．１モル）および塩化チオニル（１１，９〜 １３．１ｇ、０．１〜０．１１モル）を、ジメチルホルムアミド２滴を添加して 、またはそれを添加せずに、−緒に攪拌した。塩化水素および二酸化硫黄の発生 が止まるまで、混合物を４５°Ｃで温め、次いで、周囲温度で１〜１６時間以上 放置した。次いで、反応混合物をベンゼン１３−で希釈しく必ずしも希釈しなく てもよい）、Ｒｏｔｏｖａｐ（回転蒸発器）で減圧下で溶媒物質および過剰の塩 化チオニルを除去することができる。こうして調製された淡黄色の液体のアシル クロリドを、更に精製しないで、次の工程に使用した。 重亜硫酸ナトリウムホルムアルデヒド（１３，４ｇ、　０．１モル）を０℃のピ リジン５０ｒｎｌ中で攪拌し、アシルクロリドをその混合物中に徐々に滴下した 。添加が完結した後、反応混合物を室温で１時間攪拌した。過剰のピリジンを減 圧下で除去し、次いで、残渣を水に溶解した。ｐＨ２に酸性化した後、沈澱した イブプロフェンをジエチルエーテルによる抽出により除去した。透明な水層を３ ００−に希釈し、スルホメチルエステルを塩化ナトリウム７５ｇの添加により沈 殿させた。固体エステルを濾過により単離し、乾燥してエステル２２ｇ（収率６ ８％）を純粋な白色の固体として得た。 酵素加水分解を受ける前に、このエステルを水に溶解し、塩化ナトリウムの添加 によりそれを再沈することにより更にそれを精製した。再結晶によるこの付加的 な精製は、この物質からつくられた分割イブプロフェンの極限の鏡像体過剰を改 良することがわかった。 実施例６　、１．３　　方法Ａ２２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の ２−スルホエチル エステルのナトリウム酸（化合物２） の調製 方法Ａ１の操作に従ったが以下が例外であった。重亜硫酸ナトリウムホルムアミ ドに代えて、当量のイセチオン酸のナトリウム塩を使用した。水性濾液を、水に 溶解したわずかに過剰の塩化バリウムで処理して所望の生成物のバリウム塩を沈 殿させた。そのバリウム塩を、１当量の硫酸ナトリウムを含む溶液中で温めるこ とにより可溶性のナトリウム塩に変換した。硫酸バリウムの沈殿を遠心分離によ り除去して化合物２のナトリウム塩の溶液を収率７６％で得た。 実施例６．１．４　　方法Ｃ１２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の３ −スルホプロピ ルエステルのカリウム塩（化合物３） の調製 メチルイソブチルケトン３００ｍｔ’中の２−（４−イソブチルフェニル）プロ パン酸（３０，９ｇ、　０．１５モル）の溶液に、粉末水酸化カリウム（８５％ にＯ８９，９ｇ、　０．１５モル）を添加した。全部の水酸化カリウムを溶解す るまで、この混合物を攪拌し、次いで、１．３−プロパンスルトン（１８，３ｇ 、　０．１５モル）を一度に全部添加した。 わずかに発熱性の反応が始まり、これを冷却しないで進行させた。１時間後、得 られた固体塊を砕き、固体を濾過により単離した。この固体を沸騰メタノール３ ００１ｄに溶解した。溶液を濾過して少量の固体を除去し、濾液を温かい２−プ ロパツールで曇点まで処理した。冷却後、化合物３が白色の板状体として結晶化 した。生成物を濾過により単離し、２−プロパツール中５０％の冷メタノールで １回洗浄し、乾燥した。化合物３の収量は４５ｇ（収率８２％）であった。 実施例６．１．５　方法Ｃ２２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の４− スルホニルエ ステルのカリウム塩（化合物４）の調 製 反応を沸騰２−プロパツール中で２時間行い、ｌ。 ３−プロパンスルトンを１．４−ブタンスルトンに代えた以外は、方法ＣＩの操 作に従った。化合物４の収率は７４％であった。 実施例６　、１．６　　方法Ｄ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の２ −ヒドロキシエチ ルエステルのリン酸エステルのニナト リウム塩（化合物５）の調製 ポリリン酸（８０ｇ、　　１当量）および２−（４−イソブチルフェニル）プロ ピオネートの２−ヒドロキシエチルエステル（２５ｇ、０．１当量）を−緒に混 合し、１００℃で１０分間攪拌した。冷却後、混合物を水１ｆ！に溶解し、ｐＨ を水酸化ナトリウム水溶液の添加により６に調節した。塩化ナトリウムを添加し てリン酸塩を粘着性の固体として沈殿させた。この物質を遠心分離により単離し た。２回目の溶解／沈殿は、アセトン中ですり砕いた後、白色の固体として生成 物４．６ｇを与えた。化合物５の全収率は１２％であった。 実施例６．１．７　　方法Ｅ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の３− ヒドロキシエス テルの硫酸エステルのカリウム塩（化 合物６）の調製 ２−（４−イソブチルフェニル）プロパン酸の３−ヒドロキシプロピルエステル （１３，３ｇ、０．０５モル）を、ピリジン（７，９ｇ、　０．１モル）を含む 塩化メチレン１００ｉに溶解した。、０℃に冷却後、塩化メチレン５０−中に溶 解したクロロスルホン酸（５，８３ｇ、　０．０５モル）を攪拌しながら滴下し た。０℃で１時間後、塩化メチレンを減圧下でストリッピングした。得られた油 をテトラヒドロフラン中で攪拌してピリジン塩酸塩を沈殿させ、これを濾過によ り除去した。テトラヒドロフランを減圧下に蒸発させ、残渣をメタノールに溶解 した。ｐＨを、メタノールに溶解した水酸化カリウムの添加により７に調節した 。この溶液を濾過して少量の固体を除去し、再度減圧下に蒸発させた。残渣を水 に溶解し、生成物を塩化ナトリウムの添加により塩析した。固体を遠心分離によ り単離した。水性溶液から２回目の塩析は、ろう状の固体８ｇを与え、これは４ ２％の収率に相当した。 実施例６　、１．８　　方法Ｃ３２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパン 酸の３−スルホプ ロピルエステルのカリウム塩（化合物 ７）の調製 下記の例外でもって、方法Ｃ１の操作に従った。溶媒を２０％メタノールおよび ８０％メチルイソブチルケトンに代え、反応を一夜進行させた。粗固体を水に溶 解し、混合物から未反応のナプロキセンを酢酸エチルで抽出し、塩化ナトリウム の添加により溶液から生成物を塩析することにより、生成物を塩析した。化合物 ７の収率は２５％であった。 実施例６　、１．９　　方法Ｂ２　２−（６−ノドキシ−２−ナフチル）プロパ ン酸の２−スルホエ チルエステルのカリウム塩（化合物８）の調製 塩化メチレン２００〜２５〇−中の２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパ ン酸（２３ｇ、０．１モル）のスラリーを塩化チオニル（１１，９ｇ、　０．１ モル）およびジメチルホルムアミド０．１−で処理した。この混合物を１〜２時 間還流させ、室温で一夜放置して淡黄色の溶液を得た。次いで、塩化メチレンを で減圧下に除去して粘稠な黄色の油（これは固化し得る）を残した。 上からの酸塩化物をテトラヒドロフラン５０ｒｎｌに溶解した。その溶液を０° Ｃのピリジン３０〇−中のイセチオン酸のナトリウム塩の混合物に攪拌しながら 滴下した。 ０℃で１時間攪拌した後、ピリジンを減圧下に除去し、残渣を水３００−に溶解 した。濃塩酸を用いて、ｐＨを１〜２に調節し、未反応の２−（６−メドキシー ２−ナフチル）プロパン酸を酢酸エチルによる抽出により除去した。水性抽出液 を塩化ナトリウムで処理して生成物を沈殿させた。このようにして回収した生成 物２５ｇは収率６９％に相当する。 実施例６　、１．１０　　方法Ａ３　２−（６−ノドキシ−２−ナフチル）プロ パン酸のスルホメ チルエステルのナトリウム塩（化合 物９）の調製 未反応のナプロキセンを塩化メチレンによる抽出により除去した以外は、方法Ａ Ｉの操作に従った。化合物９の収率は２９％であった。 実施例６　、１．１１　　方法Ｆｌ　　２−（４−イソブチルフェニル）プロパ ン酸の２−（Ｎ、　Ｎ、　Ｎ−トリメチルアンモニウム）エチル エステルのヨウ化物塩（化合物１０） の調製 反応体の量を５倍に増加した以外は、方法Ｂｌのようにしてイブプロフェンアシ ルクロリドを調製した。 次に、上記のアシルクロリド（５７，５ｄ、０．２５モル）を、テトラヒドロフ ラン２００ｍ１中の２．０当量（０，５モル）の２−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ ）エタノールの冷却し激しく攪拌した溶液に徐々に滴下して添加した。添加は約 １時間で完結し、次いで、反応液を更に１時間攪拌した。反応混合物を水５０〇 −中に注ぎ、ジエチルエーテル２５０ｍｊで３回抽出した。合わせた有機層をＩ ＮのＮａＯＨ（３回、１００ｍｔ’）、水（３００ｙＪ）、飽和ＮａＣｌ溶液（ ３００ｍｌ＞で洗浄し、次いで、Ｍｇ５Ｏ＜で乾燥させた。減圧下のエーテルの 蒸発は、はぼ定量的な収量（７０，０ｇ）の透明な淡黄色の油を残した。 最後に、テトラヒドロフラン２０−で希釈したヨードメタン（１２，５ｍｌ、　 ０．２モル）を、テトラヒドロフラン３００　ｍｌ中のイブプロフェンの上記エ ステル（５６ｇ、　０．２モル）の溶液に徐々に滴下して添加した。添加は３０ 分で完結し、反応液を更に２時間攪拌した。減圧下のテトラヒドロフランの蒸発 は、黄色のガム（８４ｇ、収率的１００％）を残した。これを４°Ｃの水で再結 晶して所望のイブプロフェンエステル（化合物１０）を淡黄色のわずかに吸湿性 の粉末を残した。この生成物を遠心分離により回収し、減圧下に乾燥して、イブ プロフェン酸出発原料からの全収率２３％で生成物１９．５ｇを生成した。 実施例６　、１．１２　　方法Ｆ２２−（６−ノドキシ−２−ナフチル）プロパ ン酸の２−（Ｎ。 Ｎ、　Ｎ−トリメチルアンモニウム）エチルエステルのメチル硫酸塩（化合 物１１）の調製 ２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパン酸の酸塩化物を、方法Ｂ２のよう にして調製した。 その酸塩化物をテトラヒドロフラン５〇−中に溶解し、テトラヒドロフラン１０ 〇−中の２−（Ｎ、Ｎ−ジメチルアミノ）エタノール（２，０当量、１８．０ｒ ＩＬｌ）の溶液に滴下して添加し、反応フラスコを水浴中で冷却した。添加は２ ０分で完結し、反応液を周囲温度で更に１時間攪拌した。テトラヒドロフランを Ｒｏｔｖａｐで除去し、粘稠な残渣をＩＮのＮａＯＨ中に注ぎ、ジエチルエーテ ル（３Ｘ２００ｒｎｌ）で抽出した。合わせた有機層を水（２Ｘ３００−）で洗 浄し、ＫａＣＯｓで乾燥させた。蒸発は、Ｎ、　Ｎ−ジメチルエタノールアミン エステルを淡黄色の油（回収量２０．０　ｇ、収率６６％）として残した。 上記のエステルの全部を２−プロパツール１００ｍｊ’に溶解し、これにジメチ ル硫酸６．２ｒｎｌを添加した。反応混合物を１５分間還流させ、周囲温度に冷 却し、アルコールをＲＯｔＶａｐで除去して、四級アンモニウム塩を粘稠な淡黄 色の油として残した。これは−８０℃で冷却してガラスにすることができた。 実施例６　、１．１３　　方法Ｆ３２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパ ン酸の３−（Ｎ。 Ｎ、Ｎ−）リメチルアンモニウム）プ ロピルエステルのメチル硫酸塩化合 物１２）の調製 ２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパン酸の酸塩化物を、方法Ｂ２のよう にして調製した。 上記からの酸塩化物をテトラヒドロフラン５０艷に溶解し、０℃のテトラヒドロ フラン２００−に溶解した３−（Ｎ、　Ｎ−ジメチルアミノ）プロパツール（２ ０，６ｇ、　０゜２モル）の溶液中に攪拌しながら滴下した。添加後、得られた スラリーを室温で１時間攪拌し、それらをストリッピングした。残渣を飽和Ｎａ ＨＣＯ＊溶液５００ｍ１で振とうし、油状沈殿物を酢酸エチル中に取り、ストリ ッピングして、２７ｇの収量（収率８５．６％）のナプロキセンの３−（Ｎ、Ｎ −ジメチルアミノ）プロピルエステルを淡黄色の油として得る。 上記からの粗エステル１２．６ｇ　（０，０４モル）を２−プロパツール５０ｒ ＩＬｌに溶解し、ジメチル硫酸（５，０４ｇ。 ３、７８ｄ、０．０４モル）で処理した。この溶液を還流させ、ＨｚＯに添加さ れたアリコートが約１５分後に透明な溶液を生じるまで、還流を保った。まだ熱 い間に、酢酸エチル５０ｒｎｌを添加し、この溶液を氷で冷却して、所望の四級 アンモニウムエステルを白色粉末として結晶化させた。これを濾過により単離し 、酢酸エチルで洗浄し、次いでペンテンで洗浄して、収量１６．７ｇ　（収率８ ０．９％）で化合物１２を得た。 実施例６　、１．１４　　方法Ｃ４２−クロロプロパン酸の３−スルホプロピル エステルのカリ ウム塩（化合物１３）の調製 下記のこと以外は、Ｃ１の操作に従った。メチルイソブチルケトン２００ｍ１お よびメタノール５０ｍｊ’中の２−クロロプロパン酸（１０，８ｇ、０．１０モ ル）の溶液に粉末の水酸化カリウム（８５％ＫＯ３６，６ｇ、０．１０モル）を 添加した。この混合物を、水酸化カリウム全部か溶解されるまで攪拌し、次いで 、１．　３−プロパンスルトン（１２，２ｇ、　０．１０モル）を一度に全部添 加した。わずかに発熱性の反応が開始し、これを冷却しないで進行させた。反応 を一夜進行させた後、得られた固体の塊を砕き、濾過により固体を単離した。こ の固体を沸騰メタノール７５ｒｎｌに溶解した。溶液を濾過して少量の固体を除 去し、濾液を温かい２−プロパツールで曇点まで処理した。冷却後２−クロロプ ロパン酸のスルホプロピルのナトリウム塩が白色粉末として結晶化した。生成物 を濾過により単離し、冷２−プロパツールで１回洗浄し、ジエチルエーテルでも う一度洗浄し、次いで、乾燥させた。生成物の収量は１０．８ｇ　（収率４０％ ）であった。 実施例６．１．１５　　方法Ｂ３　　Ｄ−（−）−３−３−アセチルチオ−２− メチルプロパン酸 のスルホメチルエステルのカリウム 塩（化合物１４）の調製 下記のこと以外は、Ｂ１の操作に従った。Ｄ−（−）−８−３−アセチルチオ− ２−メチルプロパン酸（１，６２ｇ、０．０１モル）および塩化チオニル（１， １９ｇ、　０．０１モル）をジメチルホルムアミド１滴と一緒に攪拌した。 混合物を、塩化水素および二酸化硫黄の発生が止むまで、室温に保ち、次いで、 １時間以上室温に保った。 こうして調製された淡黄色の液体のアシルクロリドを、更に精製しないで次の工 程に使用した。 重亜硫酸ナトリウムホルムアミド（１，４７ｇ、０．０１１モル）を０°Ｃのピ リジン５ｙｄ中で攪拌し、アシルクロリドをその混合物中に徐々に滴下した。添 加が完結した後、反応混合物を室温で２時間攪拌し、その間に混合物が凝固した 。ジエチルエーテルを添加して生成物を沈殿させ、これを濾過により回収し、乾 燥した。粗物質を熱飽和ＫＣＩ溶液で再結晶した。生成物の収量は１．２ｇ（収 率４３％）であった。 実施例６　、１．１６　　方法Ｂ４　　Ｌ−（＋）−３−３−アセチルチオ−２ −メチルプロパン酸 のスルホメチルエステルのカリウム 塩（化合物１５）の調製 以下のこと以外は、Ｂ３の操作に従った。Ｌ−（＋）−８−３−アセチルチオ− ２−メチルプロパン酸を使用した。生成物の収量は２．１ｇ（収率７６％）であ った。 実施例６　、１．１７　　方法Ｂ５　　（±’）−３−３−ベンゾイルチオ−２ −メチルプロパン酸の スルホメチルエステルのカリウム塩 （化合物１６）の調製 以下のこと以外は、Ｂｌの操作に従った。ラセミ体の５−３−ベンゾイルチオ− ２−メチルプロパン酸（１１，２ｇ、　０．０５モル）および塩化チオニル（５ ，９５ｇ、　０゜０５モル）を、ジメチルホルムアミド１滴と一緒に攪拌した。 混合物を、塩化水素および二酸化硫黄の発生が止むまで、室温に保ち、次いで、 ５０℃に１５分間加熱した。こうして調製された淡黄色の液体のアシルクロリド を、更に精製しないで次の工程に使用した。 （本頁以下余白） 塩化アシルを混合物にゆっくりと滴下するにつれて、ホルムアルデヒド亜硫酸水 素ナトリウム（７，４ｇｍ、　０．０５５ｍｏｌ）を０°Ｃでピリジン２５−中 で攪拌した。添加完了後、反応混合物を室温で１時間攪拌した。過剰のピリジン を真空上除去し、次いで残分をジエチルエーテルを用いて粉砕した。残留固体を 熱水２５ｍ７’に溶解し、熱飽和ＫＣＩ溶液５０−で処理した。この混合物を冷 却し、その物質を白色固体として晶出する。生成物を濾過によって単離し、ｌ容 量の水および２容量の飽和ＫＣＩ溶液で２度洗浄し、次いで乾燥して、１５ｇｍ すなわち８８％の生成物を得た。 実施例６．１．１８　：　２−（４−クロロフェノキシ）プロパノン酸のスルホ メチルエステルのナトリ ウム塩（化合物１７）の調製法８６ Ｂｌの方法を、次のように改良して進行した。２−（４−クロロフェノキシ）プ ロパノン酸のラセミ体３２．０ｇ　（０，１５ｍｏｌ）を、塩化チオニル５０− およびジメチルホルムアミド０．５ｒｎｌ中に溶解した。得られた混合物を２時 間還流し、過剰の塩化チオニルを減圧下ロートパップ（Ｒｏｔｏｖａｐ）で除去 して、いくらかのジメチルホルムアミドを含んでいる淡黄色油（約３６ｇ）を残 した。この生成物を、ピリジン７５ｒｎ１中にホルムアルデヒド亜硫酸水素ナト リウム付加物４０．２ｇ（０，３ｍｏ１．２．０当量）を溶解した溶液の激しく 攪拌したものに滴加した。添加中、反応混合物を水浴中で冷却した。２０分後、 添加を完了して、水浴を取り除いた。反応混合物を室温で１時間攪拌し、過剰の ピリジンを減圧下ロートパップで除去した。残留物を熱ＭｅＯＨ３００ｍｊ’中 に取り、濾過し、晶出せしめた。濾過によって固体結晶物質を集め、ジエチルエ ーテルで洗浄して、オフホワイトの結晶物質９．２ｇ（収率２０％）を残した。 実施例６．１．１９　：　２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパノン酸の メチルエチル（化合物１８）の調製法Ｂ７ 方法Ｂｌの手順を、次の点を除去して追打した。イセチオン酸のナトリウム塩の 代りに、メタノールを使用した。反応およびピリジンの除去に次いで、残留物を クロロホルム３００ｒｒＬｌ中に溶解し、それをＮａＨＣＯ２の飽和溶液１００ −で洗浄し、最後にＭｇ５Ｏｚで乾燥した。次いで、有機相を蒸発せしめた。 実ｍ例６．１．２０　：　２−　（４−イソブチルフェニル）プロパノン酸の２ ．２．２−）リフルオロエチルエステル（化合物１９）の調製法Ｂ８反応体の量 を１２．５倍に増加したことを除いて、イブプロフェン塩化アシルを、方法Ｂｌ におけるように調製した。 次いで、得られた淡黄色液体の粗イブプロフェンの酸塩化物を、ピリジン１６０ −中に２．２．２−）リフルオロエタノール１２７１ｎｌ（１，４当量）を溶解 した溶液に滴加した。この溶液は水浴内で冷却されていた。粗イブプロフェン酸 塩化物の添加を２時間で完了せしめ、その後水浴を取り除き、反応混合物を追加 の時間攪拌した。次いで、２ＮＨＣ１１ｆを反応混合物に添加し、得られた混合 物をクロロホルム２００ｍｔ’で４回抽出した。 有機相を合せて、水（２００ｄ）で３回、飽和ＮａＣ１溶液（２００−）で１回 逆洗し、ＭｇＳＯ４で乾燥した。クロロホルムの減圧蒸発により、イブプロフェ ンの２．２．２−）リフルオロエチルエステル、化合物１９．３４１ｇｍが淡黄 色液体として残された。これは総数率９５％であった。 実施例６．１．２１　：　２−クロロプロパノン酸のオクチルエステル（化合物 ２０）の調製法Ｇ ｎ−オクタノール１３０ｇｍ（１，０ｍｏｌ）と塩化２−クロロプロピオニル１ ２７ｇｍ（１，０ｍｏｌ）とをピリジン２４０ｍ１およびテトラヒドロフラン５ 〇−中で反応させることによって、２−クロロプロピオン酸オクチルエステルの ラセミ体を調製した。反応を２４時間行ない、その後溶液をＩ　Ｎ　ＨＣＩ　１ ００−および蒸留水１００ｍ１で洗浄した。エーテル５００ｍｊ’を添加し、次 いでＮａＨＣＯ２の飽和溶液（３Ｘ５００ｍ７７）およびＮａＣ１の飽和溶液（ ５００ｒＩＬｌ）で洗浄した。有機相を最後にＭｇ５Ｏａで乾燥した。得られた ２−クロロプロピオン酸オクチルエステルの総重量は２４８ｇｍであっ６．２　 　水溶性および水不溶性エステルのラセミ混合物の酵素による分割反応の特異性 ならびに活性実施例６．２．１．１−６．２．１．１７．６．２．１．２０−６ ．２．１．２１゜６、２．１．２３−６．２．１．２８．６．２．２．７および ６．　Ｚ　３．１−６．２゜３．５において使用した酵素は全て、ミズリー州セ ントルイスのシグマ化学社（Ｓｉｇｍａ　Ｃｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、）から商業 的に入手可能なプロテアーゼであった。これらのプロテアーゼは、シグマ社のナ ンバリング系を用いて各実施例中でリストされている。これらを以下要約するニ ブロチアーゼ■：　“サブチロペプチダーゼ（Ｓｕｂｔｉｌｏ−ｐｅｐｔｉｄａ ｓｅ　Ａ）”、製品Ｐ−５３８０（またサブチリシンカールスベルグ（ｓｕｂｔ ｉｌｉｓｉｎ　Ｃａｒｌｓｂｅｒｇ）としても知られている〕 プロテアーゼＸＩＶ　：ストレプトミセス・グリセウス（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃ ｅｓ　ｇｒｉｓｅｕｓ）由来、製品Ｐ−５１４７プロテアーゼＸＶＩ　：枯草菌 （Ｂａｃｉｌｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）由来、製品Ｐ−８７７５ プロテアーゼｘｘｍ　：アスペルギルスオリゼ（Ａｓｐｅｒ−ｇｉｌｌｕｓ　ｏ ｒｙｚａｅ、　　−１−ホンコウジカビ）由来、製品Ｐ−４０３２ プロテアーゼｘＸ■：“ナガーゼ（Ｎａｇａｒｓｅ）”、製品Ｐ−４７８９プロ テアーゼＸＸＩＶ　：細菌性プロテアーゼ、製品Ｐ−８０３８プロチーム（Ｐｒ ｏｘｙｍｅ）　６と称される追加のプロテアーゼ酵素が、大野酵素＠Ｊ（Ａｍａ ｎｏ　Ｅｎｚｙｍｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から得られ、以下記載する実施 例６．２．１．１８−６．２．１９゜６、２．１．２２．　６．２．１．２９− ６．　Ｚ　１．３０および６．２．２．１−６．２゜２．４において使用された 。実施例６，２１．１１では豚肝臓エステラーゼを使用した；この酵素は、シグ マ化学社から得られ、製品Ｅ−３１２８と称されていた。実施例６．２．。 ２．５−６．２．２．６については、ジエンチーム社（ＧｅｎｚｙｍｅＣｏｒｐ ｏｒａｔｉｏｎ）から得られたカンジダ（Ｃａｎｄｉｄａ）リパーゼを使用した 。最後に実施例６．２．　Ｚ　７では、シグマ化学社から得られたカンジダリパ ーゼ製品Ｌ−１７５４を使用した。 種々の水溶性および水不溶性エステルを分割する際に使用される種々の酵素の要 約を第３表に示す。平明さのために、これらの酵素は、文字表示Ａ−Ｊでも表現 した。次の実施例で引用した種々の基質（化合物１〜２０）の化学式は、それら の合成手順（上記方法Ａ１〜Ｇ）に従い、第２表に要約されている。 （本頁以下余白） 第　　３　　表 分割試験の要約 ６．２．Ｌｌ　　　　　　　　　１　　　　　　　　　　　　人ＩＳｉｇｒｎａ 　　ＸＸＩ’ＩＩ　　（入）６．２．１．２　　　　２　　　　　　　Ａ２　　 　　５１ｇ１ａ　ＸＸＭＩ　（Ａ１６・２・トコ　　　　　　　　　　　コ　　 　　　　　　　　　　　　　ＣＩ　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＸＸＩＩ Ｉ　　（＾）６．２．１．４　　　　５　　　　　　　Ｃ２Ｓｉｇｍａ　ＸＸＩ ＩＩ　（Ａ）６．２．１．５　　　　　　　　　Ａ　　　　　　　　　　　　入 Ｉ　　　　　　　　Ｓｉｇｒｎａ　　ＶＩＩＩ　　（Ｂ）６．２．１．６　　　 　　　　　　Ａ　　　　　　　　　　　　ＡＩ　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　 ＸＶＩ　　（Ｃ）６．２．１．７　　　　　Ａ　　　　　　　ＡＬ　　　　　Ｓ ｉｇｍａ　ＸＸＶＩＩ　（ＤＪ６．２．１．８　　　　２　　　　　　　ＣＩ　 　　　　Ｓｉｇｍａ　ＸＸＩＩＩ　（Ａ）６．１１．９　　　　　　　　　　　 コ　　　　　　　　　　　　　　ＣＩ　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　Ｖｒ ＩＩ　　（Ｂ）６．２．１．ｌＯ２ＣＩ　　　　　５１ｇ１ａ　ＸＸＶＩＩ　（ Ｄ）６．２．１．１１　　　　２　　　　　　　ＣＩＳＣｌ５ｉ　ＰＬＥ　（Ｃ １６，２，１，１２ヱ　　　　　　　　　　　　入２　　　　　　　　　Ｓｉｇ 市ａ　　ＸＸＩＩＩ　（入）６．２．１．ミコ　　　　　　　　　　ヱ　　　　 　　　　　　　　　　　入２　　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＶＨＩ　　 （Ｂ１６．１１．１４　　　　４　　　　　　　Ｃ２ＳＬｇｍａ　ＶＩＩＩ　（ Ｂ）６．２．１．ｌＳ　　　　　４　　　　　　　Ｃ２Ｓｉｇｍａ　ＸＶＩ　’ （Ｃ１６，２，１，１６５Ｄ　　　　　Ｓｉｇｍａ　ＸＶＩ　（Ｃ１６，２，１ ，ｌ〕　　　　　　　　　１０　　　　　　　　　　　　　　ＦＩ　　　　　　 　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＸＸＩＨ（Ａ１６．２．１．１８　　　　１１　　　　 　　　Ｆ２　　　　　）、ｒｎａｎｏ　Ｐｒｏｚｙｒｎｅ　６　（Ｆ１６．２． １．１９　　　　　　　　　　　１２　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｆコ 　　　　　　　　　　　入ｒｂａｎｏ　　Ｐｒｏｚ凵{ｈｅ　　６　　（Ｆ１ ６．２．１．２０　　　　　　　　　　　　Ｚ　　　　　　　　　　　　　　　 　　　Ｃコ　　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＸＸＩＩh　　（Ａ） ６．２．１．２１　　　　　！　　　　　　　ＣＩ　　　　　Ｓｉｇｍａ　ＸＸ ＩＩＩ　（Ａ１６．２．１．２２　　　　　Ａ　　　　　　　ＡＩ　　　　　Ａ Ｊ？Ｉａｎｏ　Ｐｒｏｚｙｎｅ　６　（ＦＩ第　３　表（つづき） ６．２．１．２：Ｉ　　　　　　　　　　旦　　　　　　　　　　　　　　Ｂ２ 　　　　　　　　　　ｓｉｇｍａ　　ＸＸＩＩＩ　　（八）６．２．１．２４　 　　　６　　　　　　　Ｅ　　　　　ＳｉｇＴＩＩａ　ＸＸＸＨ（Ａ）６．２． １．２５　　　　　　　　　　　２　　　　　　　　　　　　　　　　　　ｋコ 　　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＸＸＭＩ　iλ） ６．２．Ｌ、２６　　　　１：ｌ　　　　　　　Ｃ４Ｓｉｇｍａ　ＶＩＩＩ　（ Ｂ）６．２．１．２７　　　　　　　　１６　　　　　　　　　　　　　　Ｂ５ 　　　　　　　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＶＩＩＩ　（Ｂ１６．２．１．２８　　　 　１６　　　　　　　Ｂ５　　　　　Ｓｉｇｒｎａ　ＸＸＩＨ（Ａ１６．２．１ ．２９　　　　１７　　　　　　　Ｂ６　　　　　辷ａｎｏ　Ｐｒｏｚｙｍｅ　 ６　（ｒ）６＋２．１．コＯＡ　　　　　　　　　　　　　　　９１　　　　　 　　　　　人二ａｎｏ　　Ｐｒｏｚｙｍａ　　６　　（ｒ）６．２．２．Ｉ　　 　　　Ａ　　　　　　　Ｂｌ　　　　　辷ａｎｏ　Ｐｒｏｚｙｍｅ　６　（Ｆ１ ６．２．２．２　　　　１　　　　　　　ＡＩ　　　　　Ａｒ−ａｎｏ　Ｐｒｏ ｚｙｍｅ　６　（Ｆ）６．２．２．コ　　　　　　　　Ａ　　　　　　　　　　 　　　ａｌ　　　　　　　　人ｍＪＬｎｏ　　Ｐｒ０Ｚ”ｆｍ＠　　６　　（Ｆ １６．２．２．４　　　　１　　　　　　　ＢＩ　　　　　Ａｍａｎｏ　Ｐｒｏ ｚｙｍ＠６　（ｒ）６．２．２．５　　　　　　　　　　　　１８　　　　　　 　　　　　　　　　　９フ　　　　　　　　　　　Ｇｅｎｚｙｍｅ　　Ｌｉｐａ 唐■@　（Ｇ） ６．２．２．６　　　　　　　　　　　１９　　　　　　　　　　　　　　　　 Ｂｌｌ　　　　　　　　　　　Ｇｅｎｚｙｍｅ　　Ｌｉｐａ唐■@　（Ｇ１ ６．２．２．）　　　　　　　　２０　　　　　　　　　　　　Ｇ　　　　　　 　　　Ｓｉｇｍａ　　Ｌｉｐａｓｅ　　（Ｍ１６．２．コ、コ　　　　　　　　 λｉ１５　　　　　　　　　ａコ、　　Ｂ４　　　　Ｓｉｇｍａ　　ＸＸＩＨ（ Ａ）６．２．コ、５　　　　　　　　　　　　　１４　　　１５　　　　　　　 　　　　　　Ｂ）、　　　Ｂ４　　　　　　５ｉｐａ　　ＸＸＶhＩ　　（０） さらに、本発明の抽出膜リアクター法、即ちナプロキセン、イブプロフェンおよ び２−クロロプロパノン酸のようなキラルのカルボン酸の水溶性エステル誘導体 が水性供給流れの成分として酵素リアクターに供給されている、の操作について は、米国特許第４．８００．１６２号（１９８９年１月２４日発行）に記載され ている別の分割スキームを参照することにより、さらに良く理解されよう。特に 、次の実施例６．２．２．５−６．２．２．７は、ナプロキセン、イブプロフェ ンおよび２−クロロプロパノン酸の水不溶性の簡単なエステル誘導体が多相の酵 素膜リアクター内でいかにして分割されつるかを示している。抽出リアクターに 水性供給溶液の形で供給される水溶性エステルを処理する本発明の方法と比較す る意味で次の３つの実施例を示す。これらは、水不溶性エステルが多相リアクタ ーに有機供給溶液の形でどのようにして供給されつるかを示している。 ６．２．１　　均質水性分割による酵素分割実施例６．２．１．ｌ　：ｐＨ７， ０で酵素Ａ１００■を使用する２−（４−イソブチルフェニル）プロパ ノン酸の４−スルホメチルエステル のナトリウム塩の均質水性分割 第４表に示されている基質／エステルの組合せを使用する水溶性イブプロフェン 誘導体の分割を明示している実施例６．　Ｚ　１．１−６．２．１．７において は、次の手順を追打した。この実施例の組は、水溶性スルホアルキル（またはス ルホン酸アルキル）エステルの同族列、すなわち、イブプロフェンのスルホメチ ル（１つの炭素）、スルホエチル（２つの炭素）、スルホプロピル（３つの炭素 ）およびスルホブチル（４つの炭素）エステル誘導体を使用するイブプロフェン 分割の有用性を明示している。 イブプロフェン基質エステル１　（スルホン酸メチル誘導体）ＩＯ，Ｏミリモル （ｍｍｏｌ）を、適切なカチオン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムま たカリウム）の０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）　１００−中に溶解した。 商業製剤としての酵素Ａ　ｔｏｏ■を、この溶液に直接添加し、そして反応混合 物に蓋をし、次いで、酵素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばらくの間 振盪した。次いで、反応混合物を、周囲温度（２０−２２℃）に２０時間静置し た。次いで、反応混合物を１容量の水および１容量の飽和ＮａＣｌ溶液で希釈し 、濃ＨＣＩの慎重な添加により１−２のｐＨまで酸性にし、そして次いで、ｌ容 量のメチル−ｔ−ブチルエーテルまたはジエチルエーテルで２回直ちに抽出した 。 有機相を合せて、ｌ容量の水で２回、ｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回逆洗し、 次いでＭｇ５Ｏａで乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され ；いかなる他の精製も行なわなかった。スルホアルキルイブプロフェンエステル のラセミ体をプロテアーゼ酵素Ａを用いて分割する結果の実施例は第４表に要約 されている。旋光度は、イブプロフェン酸生成物に対して、ＥｔＯＨ中で、ｃ＝ １．０の濃度で測定された。 ６．２．１．ｌ　　　　　（Ａ）　　　　　　！　　　　　　７８０　　　　　 　コア、９−５７．３”＞９９Ｒ６，２，１２（入）　　　　　　！　　　　　 　４６０　　　　　２２．３　　　　−５１２＠　　　　９１３　　　　　Ｒ６ ，２，１，３（Ａ）　　　　　　２　　　　　１０コ０　　　　　５０．０　　 　　　−４８．０’　　　　　８４．２　　　　　Ｐ。 ６．２．１．４　　　　　（入）　　　　　　４　　　　　　　Ｒ９０４コ、２ 　　　　　−５５．５’　　　　　９７．４　　　　　Ｒ６，２，１，６（ＣＩ 　　　　　　！　　　　　　５６０　　　　　２７．２　　　　　−４０．３’ 　　　　　７０．７　　　　　Ｆ。 ６．２．１．７　　　　　（Ｄ）　　　　　　１　　　　　　７００　　　　　 ３４．０　　　　　−２１．５”　　　　　）７．７　　　@　Ｒ 実施例６．２．１．２　：　ｐＨ７，０て酵素Ａ１００■を使用する２＝（４− イソブチルフェニル）プロパ ノン酸の２−スルホエチルエステル のナトリウム塩の均質水性分割 イブプロフェン基質エステル２（スルホン酸エチル誘導体）１０．０ミリモル（ ｍｍｏｌ）を適切なカチオン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムまたは カリウム）の０．２Ｍリン酸塩緩衝液（１）８７．０）　１００−中に溶解した 。 商業製剤としての酵素Ａ　１００■をこの溶液に直接添加し、反応混合物に蓋を し、次いで酵素製剤の全てが分散または溶解するまで、しばらくの間振盪した。 次いで、反応混合物を周囲温度（２０−２２℃）で２０時間静置した。次いで、 反応混合物を、ｌ容量の水およびｌ容量の飽和ＮａＣｌ溶液で希釈し、濃ＨＣＩ の慎重な添加によって１−２のｐＨまで酸性にし、そして次い！直ちに、１容量 のメチル−ｔ−ブチルエーテルまたはジエチルエーテルで２回抽出した。有機層 を合せて、１容量の水で２回、ｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回逆洗し、そして 次いでＭｇ５Ｏａで乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され 、いかなる他の精製も行なわれなかった。２のスルホアルキルイブプロフェンエ ステル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素Ａにより分割した結果の実施例は、第４表 に要約されている。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中で ｃ＝１．０濃度で測定した。 実施例６．２．１．３　：　ｐＨ７，０において酵素Ａ１００■を使用する２− （４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−スルホプロピル エステルのカリウム塩の均質水性分 割 イブプロフェン基質エステル３　（スルホン酸プロピル誘導体）１０．０ミリモ ル（ｍｍｏｌ）を、適切なカチオン（基質対イオンと同じであるべきナトリウム またはカリウム）の０．２Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７，０）　１００ｍｊ’中に溶 解した。市販製剤としての酵素Ａ１００■を、この溶液に直接添加し、反応混合 物に蓋をしそして次いで、酵素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばらく の間振盪した。次いで、反応混合物を、周囲温度（２０−２２”Ｃ）に２０時間 静置した。次いで、反応混合物を、ｌ容量の水および１容量の飽和ＮａＣｌ溶液 で希釈し、濃ＨＣＩの慎重な添加によって１−２のｐＨまで酸性にし、そして次 いで直ちに、１容量のメチル−ｔ−ブチルエーテルまたはジエチルエーテルで２ 回抽出した。有機層を合わせて、１容量の水で２回、ｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液 で１回逆洗し、そして次いでＭｇ５Ｏａで乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され 、いかなる他の精製も行なわれなかった。３のスルホアルキルイブプロフェンエ ステル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素Ａにより分割した結果の実施例を、第４表 に要約する。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中での度Ｃ ＝１．０で測定した。 実施例６．２．１．４　：　ｐＨ７，０において酵素Ａ　Ｉ００■を使用する２ −（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホブチルエ ステルのカリウム塩の均質水性分割 イブプロフェン基質エステル４　（スルホン酸ブチル誘導体）１０．０ミリモル （ｍｍｏｌ）を、適切なカチオン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムま たはカリウム）の０．２Ｍリン酸塩緩衝液（１）Ｒ７，０）　１００ｍｊ中に溶 解した。市販製剤としての酵素Ａ１００■を、この溶液に直接添加し、反応混合 物に蓋をし、そして次いで、酵素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばら くの間振盪した。次いで、反応混合物を、周囲温度（２０−２２”Ｃ）に２０時 間静置せしめた。次いで、反応混合物を、ｌ容量の水およびｌ容量の飽和ＮａＣ １溶液で希釈し、濃ＨＣＩの慎重な添加によって１−２のｐＨまで酸性にし、そ して次いで直ちに、１容量のメチル−ｔ−ブチルエーテルまたはジエチルエーテ ルで２回抽出した。有機層を合わせて、ｌ容量のメチル−ｔ−ブチルエーテルま たはジエチルエーテルで２回抽出した。有機層を合わせて、１容量の水で２回、 １容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回逆洗し、そして次いでＭｇＳＯ４で乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され 、いかなる他の精製も行われなかった。４のスルホアルキルイブブロフエンエス テル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素Ａにより分割した結果の実施例を第４表に要 約する。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中で、濃度ｃ＝ １．０で浜ｊ定した。 実施例６．２．１．５　：　ｐＨ７，０において酵素８１００■を使用する２− （４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホメチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 イブプロフェン基質エステル１　１０．０ミリモル（ｍｍｏｌ）を、適切なカチ オン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムまたはカリウム）の０．２Ｍリ ン酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）　１００ｍ／中に溶解した。市販製剤としての酵素 ８１００■を、この溶液に直接添加し、反応混合物に蓋をし、そして次いで、酵 素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばらくの間振盪した。次いて、反応 混合物を、周囲温度（２０−２２°Ｃ）に２０時間静置せしめた。 次いて、反応混合物を、１容量の水およびｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液で希釈し、 濃ＨＣＩの慎重な添加によって１−２のｐＨまて酸性にし、そして次いで直ちに 、ｌ容量のメチル−ｔ−ブチル　エーテルまたはジエチルエーテルで２回抽出し た。有機層を合わせて、ｌ容量の水で２回、１容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回洗 浄し、そして次いでＭｇ５Ｏ，て乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され 、いかなる他の精製も行われなかった。ｌのスルホアルキルイブプロフェンエス テル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素Ｂにより分割した結果の実施例を第４表に要 約する。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中で、濃度ｃ＝ １．０で測定した。 実施例６１１．６　：ｐＨ７，Ｏｔ：：おイテ酵素Ｃｌ００ｍｇを使用する２− （４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホメチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 イブプロフェン基質エステル１ｌＯ００ミリモル（ｍｍｏｌ）を、適切なカチオ ン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムまたはカリウム）の０．２Ｍリン 酸塩緩衝液（ｐＨ７，０）　１００ｒｎｌ中に溶解した。市販製剤としての酵素 ＣＩ００■を、この溶液に直接添加し、反応混合物に蓋をし、そして次いで、酵 素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばらくの間振盪した。次いて、反応 混合物を、周囲温度（２０−２２°Ｃ）に２０時間静置せしめた。 次いで、反応混合物を、１容量の水およびｌ容量の飽和ＮａＣｌ溶液で希釈し、 濃ＨＣＩの慎重な添加によって１−２のｐＨまで酸性にし、そして次いて直ちに 、ｌ容量のメチル−ｔ−ブチル　エーテルまたはジエチルエーテルで２回抽出し た。有機層を合わせて、゛１容量の水で２回、ｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回 逆洗し、そして次いでＭｇＳＯ４で乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され ：いかなる他の精製も行われなかった。１のスルホアルキルイブプロフェンエス テル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素Ｃにより分割した結果の実施例を第４表に要 約する。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中で、濃度ｃ＝ １．０で測定した。 実施例６．２．１．７：ｐＨ７，０において酵素Ｄ　１００■を使用する２−（ ４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホメチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 イブプロフェン基質エステル１　１０．０ミリモル（ｍｍｏｌ）を、適切なカチ オン（基質対イオンと同じであるべきナトリウムまたはカリウム）の０．２Ｍリ ン酸塩緩衝液（１）Ｈ７，０）　１００ｍ１中に溶解した。市販製剤としての酵 素Ｄ　１００■を、この溶液に直接添加し、反応混合物に蓋をし、そして次いで 、酵素製剤が全て分散しまたは溶解するまで、しばらくの間振盪した。次いで、 反応混合物を、周囲温度（２０−２２°Ｃ）に２０時間静置せしめた。 次いで、反応混合物を、１容量の水および１容量の飽和ＮａＣｌ溶液で希釈し、 ！ＭＣＩの慎重な添加によって１−２のＩ）Ｈまで酸性にし、そして次いで直ち に、１容量のメチル−ｔ−ブチル　エーテルまたはジエチルエーテルで２回抽出 した。有機層を合わせて、１容量の水で２回、ｌ容量の飽和ＮａＣ１溶液で１回 逆洗し、そして次いでＭｇ５Ｏｎで乾燥した。 減圧下でのエーテルの蒸発により、分割されたイブプロフェン酸生成物が残され ；いかなる他の精製も行われなかった。１のスルホアルキルイブプロフェンエス テル　ラセミ体をプロテアーゼ酵素りにより分割した結果の実施例を第４表に要 約する。イブプロフェン酸生成物についての旋光度を、ＥｔＯＨ中で、濃度ｃ＝ １．０で測定した。 実施例６．２．１．８　：　ｐＨ７，８において酵素Ａ　１５０■を使用する２ −（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−スルホプロピル エステルのカリウム塩の均質水性分 割 この実施例では、イブプロフェンエステル３　（スルホン酸プロピル誘導体）　 ０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，８の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１０〇−中 に溶解し、市販酵素Ａ製剤１５０■を添加した。次いで、反応を、実施例６．２ ゜１、１−６．２．１．７に記載したと同様にして行った。結果を第５表に要約 する。 実施例６．Ｚｌ、９：ｐ）１７．８において酵素８１５０■を使用する２−（４ −イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−スルホプロピル エステルのカリウム塩の均質水性分 割 この実施例では、イブプロフェンエステル３（スルホン酸プロピル誘導体）　０ ．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，８の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍ＃中 に溶解し、市販酵素Ｂ製剤１５０■を添加した。次いで、反応を、実施例６．２ １、１−６．２．１．７に記載したと同様にして行った。結果を第５表に要約す る。 実施例６．２．１．１０　：　Ｉ）８７．８において酵素Ｄ　１５０■を使用す る２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−スルホプロピル エステルのカリウム塩の均質水性分 割 この実施例では、イブプロフェンエステル３　（スルホン酸プロピル誘導体）　 ０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，８の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍ／ 中に溶解し、市販酵素り製剤１５０■を添加した。次いで、反応を、実施例６． ２゜１、１−６．２．１．７に記載したと同様にして行った。結果を第５表に要 約する。 （本頁以下余白） ６．２．１．ａ　　　　　（Ａ）　　　　　　３．　　　　９７０　　　　４７ ．１　　　　　−５５．７’　　　　　９？、７　　　　Ｒｇ、ｚ＋Ｌ、ｓ　　 　　　（！ｌ）　　　　　　２　　　　　７５０　　　　３６．４　　　　　− ５６．２”　　　　　９ｔ、６　　　　q ６，２，１，ＬＯ（Ｄ）　　　　　　ユ　　　　　６６０　　　　　コ２．０　 　　　−５１．９拳　　　　９！、Ｏｊｌ実施例６．２．１．１１　：　ｐＨ７ ，０において酵素Ｅ　３０ｍｇを使用する２−（４−イソブチルフェニル）プ ロパノン酸の３−スルホプロピルエ ステルのカリウム塩の均質水性分割 この実施例では、イブプロフェンエステルユ（スルホン酸プロピル誘導体）　０ ．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，８の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００−中に 溶層し、豚肝臓エステラーゼ（Ｅ）（シグマ社製、製品番号Ｅ−３１２８）　３ ０■を商業的に供給される液体製剤として添加した。次いで、反応を、実施例６ ．２．１．１−６．２．１．７に記載したと同様に行った。結果を第６表に要約 する。 実施例６．２．１．１２　：　ｐＨ７，０において酵素Ａ　１５０■を使用する ２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の２−スルホエチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 この実施例では、イブプロフェンエステル２　（カリウム塩の形のスルホン酸エ チルエステル）　０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム 緩衝液１２５ｍ１中に溶解し、酵素Ａｌ５０■を商業的に供給される製剤として 反応混合物に添加した。反応を１８時間進行せしめ、そして次いで、得られた生 成混合物を実施例６．２．１．１−６．２．１゜７に記載したと同様に試験した 。イブプロフェン分割の結果の例を第７表に要約する。 実施例６．２．１．１３　：　ｐＨ７，０において酵素８１５０■を使用する２ −（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の２−スルホエチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 この実施例では、イブプロフェンエステル２　（カリウム塩の形のスルホン酸エ チルエステル）　０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム 緩衝液１２５ｍｔ’中に溶解し、酵素Ｂ１５０■を商業的に供給される製剤とし て反応混合物に添加した。反応を１８時間進行せしめ、そして次いで、得られた 生成混合物を実施例６．２．１．１−６゜２、１．７に記載したと同様に試験し た。イブプロフェン分割の結果の実施例を第７表に要約する。 ６．２．Ｌ１２　　　　（λ）　　　　　ヱ　　　　　　７８０　　　　　３８ 　　　　　　　−５７．３”　　　　＞９９　　　　　　　q ６，２，１，１コ　　　　（Ｂ）　　　　　　Ｒｓｏｏ　　　　　　２４　　　 　　　　−５１．４”　　　　　９０．ＯＲ実施例６．２．１．１４　：　ｐＨ ７，０において酵素８１００■を使用する２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホブチルエ ステルのカリウム塩の均質水性分割 この実施例では、イブプロフェンエステル４　（スルホブチルエステル）　０． ０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００−中に溶 解した。次いで、商業的に供給される製剤として、酵素８１００■を添加し、ソ シテ反応ヲ、実施例６．２．１．１−６．２．１．７１：記載されたと同様に行 った。行われた分割の結果を第８表に要約する。 実施例６．２．１．１５　：　ｐＨ７，０において酵素ＣＩ００■を使用する２ −（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホブチルエ ステルのカリウム塩の均質水性分割 この実施例では、イブプロフェンエステル４　（スルホブチルエステル）　０． ０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍｊ’中 に溶解した。次いで、商業的に供給される製剤として、酵素ＣＩ００■を添加し 、そして反応を、実施例６．２．１．１−６．２．１．７に記載されたように処 理した。行われた分割の結果を第８表に要６．２．１．１４　　（Ｂ）　　　４ 　　４１０　　２０．０　　−５２．５’　　９２．Ｉ　　Ｒ６，２，Ｌ、１５ 　　（Ｃ）４　　４５０　　２２．０　　−３５．２’　　　６１．７　　Ｒ実 施例６．２．１．１６　：　ｐＨ７，０において酵素ＣＩ００■を使用する２− （４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の２−ヒドロキシエチ ルのリン酸エステルのジナトリウム 塩の均質水性分割 この実施例では、イブプロフェンエステル５　（リン酸エチルエステルのジナト リウム塩）　０．０１０ｍｏｌを、ＰＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝 液１００ｍ／中に溶解した。次いで、商業的に供給される製剤として、酵素Ｃｌ ００■を添加し、そして反応を、実施例６．２．１．１−６゜２、１．７に記載 と同様に行った。イブプロフェン分割の結果を第９表に要約する。 実施例６．２．１．１７　：　ｐＨ７，０において酵素Ａ　１００■を使用する ２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の２−（Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウム）エチルエステル のヨウ化物塩の均質水性分割 イブプロフェンのトリメチルアンモニウムエステルのヨウ化物塩（化合物１０） 　０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍ １中に溶解した。商業的に入手可能な製剤としての酵素Ａ１００■を添加し、そ して反応を、実施例６．２．１．１−６．　Ｚ　１．７に記載されたと同様にし て行った。イブプロフェン分割の結果を第１０表に要約する。 （本頁以下余白） 実施例６．２．１．１８　：　Ｉ）８７．０において酵素Ｆ　１００■を使用す る２−（６−メドキシー２−ナフチ ル）プロパノン酸の２−（Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリメチルアンモニウム）エチルエス テルの硫酸メチル塩の均質水性分割 ナプロキセンのエチル　トリメチルアンモニウムアルキルエステル（１１）のそ れぞれ１０ｍｍｏｌを、ｐＨ７，０の０、２Ｍ　ＮａＰＯ＜緩衝液１００ｒｎｌ 中に溶解しそしてプロテアーゼ（プロチームぐＰｒｏｚｙｍｅ　６））（Ｆ）１ ００ｍｇを添加した。酵素反応混合物に蓋をし、そして基質が全て溶解しかつ酵 素が完全に溶解しまたは分散するまで、しばらくの間振盪した。次いで、反応を ２５°Ｃで１８時間インキユベートシた。反応混合物を、濃ＭＣＩの慎重な添加 によって１−２のｐＨまで酸性にし、２容量の水で希釈しそしてエーテルで抽出 した（２　、Ｘ　２００ｍ１）。有機層を合わせて、水（２Ｘ３００ｄ）でそし て飽和ＮａＣ１溶液で１回逆洗し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。エーテルの蒸 発により、白色の固体が残された。結果を以下の第１１表に要約する。旋光度を 、ＣＨＣｌ！中でｃ＝１で測定した。 実施例６．２．１．１９　：　ｐＨ７，０において酵素Ｆ　１００■を使用する ２−（６−、メトキシ−２−ナフチル）プロパノン酸の２−（Ｎ、Ｎ、Ｎ−トリ メチルアンモニウム）プロピルエ ステルの硫酸メチル塩の均質水性分 割 ナプロキセンのプロピル　トリメチルアンモニウムアルキルエステルのそれぞれ （１２）　１０ｍｍｏｌを、ｐＨ７，０の０．２Ｍ　ＮａＰＯｉ緩衝液１００ｍ １中に溶解しそしてプロテアーゼ（プロチーム６０Ｆ）　１００■を添加した。 酵素反応混合物に蓋をし、そして基質が全て溶解しかつ酵素が完全に溶解しまた は分散するまで、しばらくの間振盪した。次いで、反応を２５℃で１８時間イン キュベートした。反応混合物を、濃ＨＣＩの慎重な添加によって１−２のｐＨま で酸性にし、２容量の水で希釈しそしてエーテルで抽出した（２Ｘ２０（Ｗ）。 有機層を合わせて、水（２Ｘ３００ｍ７７）でそして飽和ＮａＣ１溶液で１回逆 洗し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。エーテルの蒸発により、白色の固体が残さ れた。結果を以下の第１１表に要約する。 旋光度を、ＣＨＣｌ、中でｃ＝１で測定した。 （本頁以下余白） 実施例６．２．１．２０　：　ｐＨ７，８ｔ、：おイテ酵素Ａ　１５０ｍｇを使 用する２−（６−メドキシー２−ナフチ ル）プロパノン酸の３−スルホプロ ピルエステルのカリウム塩の均質性 分割 本実施例は、上記したようなイブプロフェンのエステルに類似するナプロキセン のエステルの分割を明示している。イブプロフェンの対応品はど水溶性ではない が、ナプロキセンのスルホン酸アルキルエステルもまだ酵素分割における基質と してかなりの有用性がある。特に、ナプロキセンのスルホプロピル　エステル（ 化合物７　）　０．０１０ｍｏｌを、ｐＨ７，８の０．２Ｍリン酸ナトリウム緩 衝液１２５ｍ１中に分散した。商業的に入手可能な製剤としてのプロテアーゼ（ Ｐｒｏｔｅａｓｅ）ＸＸＩＩｒ　（Ａ）　、１５０ｍｇを反応混合物に添加し、 反応容器に蓋をし、そして全不均質反応混合物をリスト作用式（ｗｒｉｓｔ−ａ ｃｔｉｏｎ）振盪機内で１８時間振盪した。次いで、反応を、固体物質が全て溶 解するまで、水で希釈し、そして次いで反応混合物を、濃ＨＣＩの慎重な添加に よって１−２のｐＨまで酸性にした。次いで、この混合物をジエチルエーテル２ ００−で２回抽出した。有機層を合わせて、ｌ容量の水で２回、ｌ容量の飽和Ｎ ａＣ１溶液で１回で逆洗し、そして有機相をＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧下のエ ーテルの蒸発により、分割されたナプロキセン酸が残された。 いかなるその上の精製も行われなかった。生成物の旋光度は、ＣＨＣｌ、中で、 濃度ｃ　＝１．０で測定された。この特別な基質／酵素の組み合わせを使用する ナプロキセン分割の結果を第１２表に要約する。 （本頁以下余白） 第１２表 ６．２．１．２０　　　（入）　　　　２　　　　２２０　　　　１０．７　　 　　−５１．９°　　　　ＩＢ、ＯＲ実施例６．２．１．２１　：　ｐＨ７，０ ｉ：おイテ酵素Ａ　１０００■を使用する２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−スルホプロピル エステルのカリウム塩の均質水性分 割 濃縮溶液、約ＩＭのイブプロフェンのスルホプロピルエステル（２−（４−イソ ブチルフェニル）プロパノン酸）（化合物３）を、最終緩衝液濃度が０．１Ｍリ ン酸カリウム（１）ｌ（７，０）であるように、４０−の最終容量を与えるのに 充分な緩衝液に該エステルのカリウム塩１４．６４■を加えることによって調製 した。アスベルギルスオリゼ菌由来のプロテアーゼ（Ａ）（シグマ化学社製、固 体１■当たり３．７単位のプロテアーゼＸＸＩ［［）　１．００ｇｍの添加によ って、反応を開始した。混合物を電磁撹拌棒で攪拌し、そして４．２２１Ｍの水 酸化ナトリウムを用いてｐＨを７．０に調節した。 室温で２３．９時間後に、２．７４１ｎｌの水酸化ナトリウムを添加した。エス テルのラセミ体の酸への２９％転化率を示している。濃ＨＣＩを用いて、混合物 をｐＨ１，５−２まで酸性にしてそして１００ｍ１容量のへキサンで抽出した。 ヘキサンをＭｇ５Ｏａで乾燥し、蒸発乾固し、約１．９　ｇｍの固体を得た。こ の物質の旋光度を、旋光針で測定したところ、［（Ｚ　］ｏ　−５５，５°（エ タノール中ｃ　＝１．０２において）の値を与えた。 実施例６．２．１．２２　：　９Ｈ７，０において酵素Ｆ１００■を使用する２ −（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の４−スルホメチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 イブプロフェンのスルホメチルエステル（化合物１）の溶液を、０．２Ｍリン酸 ナトリウム緩衝液（１）８７．０）　１００ｄに該エステルのナトリウム塩３． ２２ｇｍを添加して調製した。アスペルギルスオリゼ菌由来のプロテアーゼ（Ｆ ）（大野酵素■製、固体１■当り６０．０００単位のプロチーム６）１００■を 添加することによって、反応を開始した。 室温で２０時間後、溶液をｐＨ２まで酸性にし、そして３容量のジエチルエーテ ルで抽出した。水性相をその後の試験のために取っておく。エーテル相を２容量 の蒸留水、次いでｌ容量の飽和塩化ナトリウムで洗浄し、そして次いでＭｇ５Ｏ ａで乾燥し、その後蒸発乾固した。 回収された分割イブプロフェン生成物は白色粉末９３０■であり、エステルのラ セミ体から酸への転化率４５％を示していた。旋光度は、−０，５８０°（エタ ノール中Ｃ・ｌで測定した）であり、イブプロフェンのＲ異性体を示していた。 上記抽出からの水性相を３０分間ｐＨ１２まで上げて残りの未転化エステルを加 水分解した。ｐＨを２まで下げて、イブプロフェンを回収するための上記手順を 繰返した。 ９００■の白色粉末を単離した。転化率４３％を示した。 旋光度は＋０．５６６°であり（エタノール中、ｃ＝１で測定した）、イブプロ フェンのＳ異性体を示していた。 実施例６．２．１．２３　：　ｐｏ７．８において酵素Ａ１５０■を使用する２ −（６−メドキシー２−ナフチ ル）プロパノン酸の２−スルホエチ ルエステルのカリウム塩の均質水性 分割 ナプロキセンエステル８　（スルホン酸エチルエステルのカリウム塩）　０．Ｏ ｌＯｍｏｌを、ｐＨ７：８．において０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１２５− 中に分散した。商業的に入手可能な製剤としての酵素Ａ　１５０■を添加し、そ して反応を、実施例６．２．１．１に記載したように処理した。 酵素によるナプロキセン分割の結果を第１３表に要約する。 （本頁以下余白） 第１３表 実施例６．２．１．２４　：　ｐＨ７，０ニおイテ酵素Ａ　１００ｍｇを使用す る２−（４−イソブチルフェニル） プロパノン酸の３−ヒドロキシルプ ロピルエステルの硫酸エステルのカ リウム塩の均質水性分割 イブプロフェンエステル６　（化合物）のＯ，ＯｌＯｍｏｌをｐＨ７，０におけ る０、　２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液１００ｍ１中に溶解した。商業的に入手可 能な製剤としての酵素Ａ１００■を添加しそして反応を、実施例６．２．１、ｌ 　−６，２゜１．７で上記に記載したようにして行った。分割の結果を第１４表 に要約する。 ６．２．１．２４　　　　（入）　　　　　６　　　　　　Ｓｏｏ　　　　２４ ．３　　　　　−０．５ＳＯ’９６．５　　　　Ｒ実施例６．２．１．２５　： 　ｐＨ７，５において酵素Ａ　１００ｍｇを使用する２−（６−メドキシー２− ナフチ ル）プロパノン酸のスルホメチルエ ステルのナトリウム塩の均質水性分 割 ナプロキセンエステル９　（スルホメチル化合物）２．０ｇｍ（０，００５８ｍ ｏｌ）を、ｐＨ７，５における５０ｍＭリン酸ナトリウム緩衝液４００ｍ１中に 溶解した。反応に商業的に入手可能な製剤としてのプロテアーゼＸＸＩ［Ｉ　（ Ａ）１００ｍｇを添加した。酵素が溶解した後、反応混合物を２５°で１６時間 インキュベーションした。次いで、反応混合物を、濃ＨＣＩの慎重な滴加によっ てｐ）Ｉｔ−２まで酸性にし、そして次いでエーテルで抽出した（３　Ｘ　１５ ０ｍ１）。水性層は保留した。有機層を合せて、水で逆洗しく２Ｘ１００ｒｎＩ り、そしてこれらの水性洗液を予め保留された反応の水性層に添加した。次いで エーテル層を、プライン１００−で１回洗浄し、そしてＭｇＳＯ４で乾燥した。 エーテルの蒸発により、光学的に濃縮されたナプロキセン酸２４０■が残され、 これは化合物９の酵素による加水分解が転化率１８％まで進行したことを示して いる。この生成物は、ＣＨＣ１，中ｃ＝Ｈニーおイテ、−０，４１０’の旋光度 を有しており、ナプロキセンのＲ異性体が６１．２％の鏡像体過剰で存在してい ることを示している。 この試験（ｗｏｒｋ−ｕｐ）からの水性層を合せたものを、ｐＨ計で慎重に測定 して、ｐＨ１２まで塩基性にした。水溶液をこのＩ）Ｈでかつ周囲温度で３０分 間攪拌した。次いで、水溶液を、濃ＨＣＩの慎重な添加によって酸性にして、ｐ ｌを２の値まで下げた。次いで、この溶液をエーテルで抽出した（３　Ｘ　１５ ０ｍ１）。有機層を合せたものを、まず水で（２Ｘ　１００ｍｔ’）そしてブラ イン１００ｍｔ’で逆洗し、そしてその後エーテル相をＭｇＳＯ４で乾燥した。 エーテルの蒸発により、白色粉末４９０■が残った。この生成物は、ＣＨＣｌ５ 中ｃ＝１で、＋０．３０５°の旋光度を有しており、４５．５％鏡像体過剰で存 在するナプロキセンのＳ異性体を示していた。 実施例６．２．１．２６　：　Ｉ）Ｈ７，０において酵素８２０ｍｇを使用する ２−クロロプロパノン酸の３−ス ルホプロピルエステルのカリウム塩 の均質水性分割 クロロプロパノン酸のスルホプロピルエステル（１３）の溶液を、０．１Ｍリン 酸カリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　３０（Ｗに該エステルのカリウム塩８．０５ ｇｍを添加することによって調製した。サブチリシンプロテアーゼ（Ｂ）（シグ マ化学社製、プロテアーゼ■）２０■を添加して、反応を開始した。 滴定計（ｔｉｔｒｉｍｅｔｒｙ）によって測定した２５％転化後に、反応を中止 した。濃硫酸を用いて、溶液をｐＨ１，５まで酸性にし、そして３容量のｔ−プ チルメチルエーテルで抽出した。エーテルを４容量の飽和塩化ナトリウムで洗浄 し、Ｍｇ５Ｏａで乾燥し、そして次いで回転式蒸発器で溶媒を除去した。黄色液 体１．０７ｇｍを単離しそして滴定によって酸純度を試験し、化学純度８８．９ ％を得た。 液体の旋光度は＋０．０２２°（ｃ＝１．　クロロホルム）であり、クロロプロ パノン酸のＲ異性体を示していた。この酸の薄層クロマトグラフィーは、クロロ プロパン酸ラセミ体の標準品と類似の性質を示していた。 実施例６．２．１．２７　：　ｐＨ７，０において酵素Ｂ１００■を使用する（ ±）−３−３−ベンゾイルチオ −２−メチルプロパノン酸のスルホ メチルエステルのカリウム塩の均質 水性分割 エステル１６１０．０ｍｍｏｌを、ｐＨ７，０において０．２Ｍ　Ｎａ５ＰＯ４ 緩衝液１００−中に溶解し、そして商業的に入手可能な製剤としての酵素８１０ ０■をこの溶液に直接添加した。 反応混合物に蓋をし、そして酵素が全て分散し、溶解するまで、しばら（の間振 盪した。次いで、反応混合物を２５°Ｃで１８時間インキュベーションした。次 いて反応を、実施例６．２．１．１−６．２．１．７に記載したと同様にして行 った。その結果を第１５表に要約する。 実施例６．２．１．２８　：　ｐＨ７，０において酵素Ａ　１００■を使用する （±）−３−３−ベンゾイルチオ −２−メチルプロパノン酸のスルホ メチルエステルのカリウム塩の均質 水性分割 エステル１６１０．０ｍｍｏｌを、ｐＨ７，０における０、２Ｍ　ＮａｚＰＯ４ 緩衝液１００ｍ１中に溶解し、そして商業的に入手可能な製剤としての酵素Ａ　 １００■をこの溶液に直接添加した。 反応混合物に蓋をし、そして酵素が全て分散し、溶解するまで、しばらくの間振 盪した。次いで反応混合物を２５°Ｃで１８時間インキュベーションした。次い で反応を、実施例６．２．１．１−６．２．１．７について記載したように処置 した。その結果を第１５表に要約する。 実施例６．２．１．２９　：　ｐＨ７，０において酵素Ｆ　３５ｍｇを使用する ２−（４−クロロフェノキシ）プロ パノン酸のスルホメチルエステルの ナトリウム塩の均質水性分割 ２−（４−クロロフェキシ）プロパノン酸のスルホメチルエステル（１７）　１ ０ｍｍｏｌ（３，１９ｇｍ）を、ｐＨ７，０における０、２Ｍリン酸ナトリウム 緩衝液１００ｒｎＩ中に溶解した。商業的製剤プロチーム６としてのプロテアー ゼ酵素Ｆ３５ｍｇをこの水溶液に添加した。反応スラスコに蓋をし、そして酵素 が全て溶解しまたは分散するまで、しばらくの間振盪した。次いで、酵素反応混 合物を３０°Ｃで１時間インキュベーションし、その時点で、濃ＨＣＩの慎重な 添加によってｐＨ１−２まで酸性にした。得られた混合物を１容量の水で希釈し そしてジエチルエーテルで抽出した（２００ｍｊで２回）。エーテル層を合わせ そして水（２００−で２回）、飽和ＮａＣ１溶液（２００ｍｊ’）で逆洗し、次 いでＭｇＳＯ４で乾燥した。減圧下でのエーテルの蒸発により、オフホワイト固 体４５０ｍｇが残り、これは、反応が２２．５％完結まで進行したことを示して いる。この生成物は、ＥｔＯＨ中ｃ　＝１．０で、−０，０６３°の旋光度を有 していた。 実施例６．２．１．３０　：　ｐＨ７，０において酵素Ｆ　３ｇｍを使用して時 間をかけ過ぎた２−（４−イソブ チルフェニル）プロパノン酸の４− スルホメチルエステルのナトリウム 塩の均質水性分割 この対照実験では、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０＞　３２５ｙ ｄ中で、（１）の０．５Ｍエステル溶液を調製した。上記酵素（Ｆ）　３　ｇｍ を添加して、反応を開始した。 ｐＨを、８．２２Ｍ水酸化ナトリウムを用いて、７．０に調節した。３０℃で６ ．４９時間後、水酸化物６．６３ｍ１を添加した。 転化率３７．７％を示した。反応を一夜継続せしめ、２３．１時間後、水酸化ナ トリウム７、２　ｍｌの全量を添加した。 ４０．９％転化率を示した。時間の関数としてのこの転化率の結果を第１６表に 要約する。 第１６表 時間を越えた非対称分割 均質水反応システム ６．２．２　　抽出分散または膜リアクターにおける酵素分割 実施例６．２１１：抽出分散りアクタ−における非対称加水分解を経る２−（４ −イソブチル フェニル）プロパノン酸の４−スル ホメチルエステルのナトリウム塩の 分割 ０．２Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　１００ｍ１およびヘキサン１ ００ｍ１にイブプロフェンのスルホメチルエステルのナトリウム塩（９３％化学 純度）　３．３８ｇｍを添加することによって、イブプロフェンのスルホメチル エステルの溶液を調製した。この実施例では、妨害イブプロフェン酸が形成され るにつれて、それを抽出するために、反応容器内にヘキサンを分散した。アスペ ルギルスオリゼ菌由来のプロテアーゼ（大野酵素■製、プロチーム６、固体１■ 当たり６０．０００単位）１００■を添加して反応を開始した。 室温で３．５時間激しく攪拌した後、溶液をｐＨ２まで酸性にし、そして２容量 のヘキサンで抽出した。水性相は、その後の試験のために取っておいた。ヘキサ ン相をＭｇ５Ｏ＜で乾燥し、蒸発乾固した。かくして回収された分割イブプロフ ェン生成物は、白色粉末４９０ｍｇからなっており、２５％転化率を示していた 。旋光度は−０，５６８°（エタノール中、ｃ＝１．０１５）であり、イブプロ フェンのＲ異性体を示していた。 上記抽出からの水性相を、残りの未転化エステルを加水分解するために、１５時 間ｐＨ１２まで上げた。ｐＨをｐ１２まで下げ、イブプロフェンを回収するため の上記手順を繰返した。白色粉末１．１３ｇｍを単離した。旋光測定法によって 測定された旋光度は＋０．２０７°（エタノール中、ｃ　＝１．０３６）であり 、イブプロフェンのＳ異性体であることを示していた。 実施例６．２．２．２：抽出膜リアクター内での、膜と関連していない非対称加 水分解を経る２ （４−イソブチルフェニル）プロパノ ン酸の４−スルホメチルエステルの ナトリウム塩の分割 ・イブプロフェンの分割および回収を、最初に、一般的な条件でここで記載し、 次いで実験の条件および結果についてより詳細に記載する。 酵素による分割を、コープイス−ダウ（Ｃｏｒｄｉｓ−Ｄｏｗ）製のケン化セル ロースエステル透析繊維で作られた１、　９　ｒｄのあつらえの耐溶剤性膜モジ ュールからなる抽出膜リアクター内で行なった。モジュール内の繊維のルーメン （ｌｕｍｅｎ）または穴を通して、ヘキサンを再循環せしめた。シェル（ｓｈｅ ｌｌ）内の水溶液は酵素およびエステルを含んでいた。セルロース膜は水湿潤性 であるが、膜は高分子酵素（分子量１８．０００）を拒絶する。 従って、酵素はエステル水溶液中に残留する。イブプロフェン酸が形成させると 、これはへキサン相に抽出され、それによって酵素の活性に対する生成物（イブ プロフェン酸）の妨害の作用が減少する。 次いで酵素による加水分解の酸生成物を回収するために、限外濾過で使用される 型のポリアクリロニトリル中空繊維で作られた０、８５ｒｔｆのあつらえの耐溶 剤性膜モジュールである別の抽出膜モジユール内で、酸含有ヘキサン相からイブ プロフェン酸をストリッピングした。このモジュール内でヘキサンからイブプロ フェン酸を抽出するために使用した水性相は、ｐＨ９，５における０、　１Ｍ炭 酸ナトリウム緩衝液を含んでいた。所望とされるような８．２２Ｍ水酸化ナトリ ウムの添加によって、ｐＨをこの値に維持した。 特定の実験記録およびその結果を以下に要約する。 この実施例では、抽出膜リアクターモジュール内の水性流は、イブプロフェンの スルホメチルエステル（１）の溶液からなっていた。この溶液は、０．１Ｍリン 酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　１０１００Ｏに該エステル（７５％化学純 度）のナトリウム塩３２．５１ｇｍを添加することによって調製された。アルペ ルギルスオリゼ菌由来のプロテアーゼ（Ｆ）（大野酵素■製、プロチーム６、固 体１ｇｍ当たり６０．０００単位）２ｇｍを添加して、反応を開始した。反応の 進行は、ｐＨスタットを使用する自動滴定測定法によって進行された。 室温での６，３時間後に、水性相に８．２２Ｍの水酸化ナトリウム４，１３ｒＩ Ｌｌを添加した。エステルのラセミ体（化合物ｌ）のイブプロフェン酸への５０ ％転化率を示した。 次いで、ｐ）１９．５の溶液をｐＨ２まで酸性にし、そして２容量のｔ−ブチル メチルエーテルで抽出した。エーテル相を、最初に２容量の蒸留水で洗浄し、次 いでＭｇ５Ｏａで乾燥し、その後蒸発乾固した。分割されたイブプロフェン生成 物を、約６ｇｍの白色粉末として回収した。 回収された生成物の旋光度を旋光測定法によって測定した：実験的に測定された ［αＩＤの値は−５６，７°であり、　（エタノール中、ｃ　＝０．８１５で測 定した）、それによってイブプロフェンのＲ異性体であることが示される。試料 を、また、ベーカーボンド（Ｂａｋｅｒｂｏｎｄ）　ＤＮＢＰＧ（共有）カラム （４，６Ｘ２５０ｍｍ）を使用し、ナフタレンアミンによる誘導後２ｍｌ／分に おいて、移動相として９６．９％ヘキサン＝３．０％２−プロパツール＝０．１ ％アクリロニトリルを使用するキラルＨＰＬＣによっても分析した。検出器は、 ２２３ｎｍに設定されたＵＶ分光光度計であった。ＳおよびＲイブプロフェン酸 に対する保持時間は、それぞれ１８．５および２０．０分であった。このキラル ＨＰＬＣ手順によって決定されたようなこのＲイブプロフェン試料の光学純度ま たは鏡像体過剰は９９．３％であった（すなわち、Ｒイブプロフェンの鏡像体過 剰）。 ｐＨ７，０の水性相（抽出膜アリフタ−から回収されたような）を塩化ナトリウ ム２８０ｇｍと混合して、残りの未転化エステルを塩析した。エステルを濾過し 、飽和塩化ナトリウムで洗浄し、そして風乾した。このようにしてエステル１２ ．８ｇｍを回収した。このエステルの一部を、３０分間ｐＨを１２に上げて加水 分解した。次いで、ｐＨを２まで下げて、イブプロフェン酸の回収のための上記 手順を繰返した。白色粉末６８０ｍｇを単離した。旋光度（旋光測定法によって 測定した。）は、［αＩＤ　＝＋５７．４°（エタノール中、ｃ　＝１．２９） であり、イブブロフエンのＳ異性体を示していた。キラルＨＰＬＣによる分割生 成物の分析により、Ｓイブプロフェンの９８．９％鏡像体過剰が得られた。 実施例６．２．２．３：酵素活性化膜を備えた抽出膜リアクター内での、膜と関 連した非対称加 水分解を経る２−（４−イソブチル フェニル）プロパノン酸の４−スル ホメチルエステルのナトリウム塩の 分割 ポリアクリロニトリルの、微孔質の限外濾過型中空繊維で作られた１、　Ｏｒｒ ｔのへモフィルター（ｈｅｍｏｆｉｌｔｅｒ）（アサヒメディカル社（ＡＳＡＨ Ｉ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙ）、　ＰＡＮ−１５０）からなる抽出膜リ アクター内で、酵素による分割を行なった。酵素は、膜の孔内に固定された。モ ジュールのシェルを通して、シクロヘキサン（３５０−）を再循環した。ルーメ ン内の水溶液はエステルを含んでいた。イブプロフェン酸か形成されるにつれて 、この酸はシクロヘキサン相へ抽出された。酸の豊富な有機相か別のモジュール （ポリアクリロニトリルの限外濾過中空繊維で作られた０、８５ｒｒｒのあつら えの耐溶剤性膜モジュール）内でストリッピングされた。こ、のモジュールの水 性相は、ｐＨ９，５における０、１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液を含んでいる。８． ２２Ｍ水酸化ナトリウムを用いて、ｐＨを９．５に調節する。 一つの特別の場合においては、酵素の固定を次のように行なった。カンジダシリ ンドラセ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｃｙｌｉｎ−ｄｒａｃｅａ）由来のリパーゼ（メイ トウ産業＠（Ｍｅｉｔｏ　Ｓａｎｇｙ。 Ｃｏｍｐａｎｙ）製、リパーゼＤＦ、固体１ｇｍ当たり３６０．０００単位）３ ｇｍの溶液を、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　５００−中で 調製した。この酵素は、化合物１に対して不活性である。この酵素溶液をシェル からルーメン内へ限外濾過した。膜のルーメン側上の膜限外濾過スキン層（ｓｋ ｉｎ）によって、酵素を保持した。次いで、この酵素は、０．１Ｍリン酸ナトリ ウム緩衝液（ｐＨ７，０）中２、．５％グルタルアルデヒド溶液５００ｒｎｌを 再循環することによって活性化された。ある場合には、グルタルアルデヒドの半 分がリパーゼの遊離アミノ基に結合しそして残りのアルデヒドはさらなるカップ リングのためにフリーとなっていた。ダルタルアルデヒドのないモジュールをフ ラッシングした後、アスペルギルス　オリゼ由来のプロテアーゼ（Ｆ）（大野酵 素■製、プロチーム６、固体１ｇｍ当たり６０．０００単位）６ｇｍを含むリン 酸塩緩衝液３５０ｉを調製した。この溶液を、限外濾過により、シェルを通して ルーメンへと再循環した。酵素検定により、１８時間後にタンク（ｒｅｓｅｒｖ ｏｉｒ）からのプロテアーゼ活性の７０％消耗が測定され、これは膜内の活性化 リパーゼへのプロテアーゼの結合を示している。 水でのフラッシングにより、残留プロテアーゼ溶液を膜から除去した。 抽出膜リアクター内の水性流は、イブプロフェンのスルホメチルエステル（１） の溶液からなっており、この溶液は、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（１）８ ７．０）５００ｍｌ’に該エステルのナトリウム塩３２．３ｇｍを添加すること によって調製されていた。酵素活性化膜モジュールのルーメンを通る上記溶液の 再循環により、反応を開始した。反応の進行は、生成物の酸が中和されるにつれ て、炭酸塩タンク中の水酸化物消費によって追求された。 ２０″Ｃにおける１７時間後に、８．２Ｍ水酸化ナトリウム０．７６５−を添加 した。炭酸塩緩衝液をｐＨ２まで酸性にし、２容量のへキサンで抽出した。ヘキ サンをＭｇＳＯ４で乾燥し、その後蒸発乾固した。分割されたイブプロフェン生 成物を、白色粉末１．７６ｇｍとして回収した。光学純度を旋光測定法により決 定した；測定した旋光度は−０，２２７°（ｃ　＝１．０６．エタノール）であ り、それによってイブプロフェンのＲ異性体であることが示される。出発エステ ル中に存在している残留イブプロフェン　ラセミ体が、酵素によるイブプロフェ ン生成物の光学純度を減少した。 実施例６．２．２．４：抽出膜リアクター内での、膜と関連したまた膜と関連し ていない非対称 加水分解を経る２−（４−イソブチル フェニル）プロパノン酸の４−スル ホメチルエステルのナトリウム塩の 分割 まず、抽出膜リアクター実験を記載する。ポリアクリロニトリルの、スキン層を もった（ｓｋｉｎｎｅｄ）微孔質のまたは限外濾過型の中空繊維膜（セブラコー ル社（Ｓｅｐｒａｃｏｒ、　Ｉｎｃ、）によって作られた実験用繊維）で作られ た０、８５ｎｆのあつらえの耐溶剤性膜モジュールを使用して、リアクターモジ ュールを調製した。モジュールのシェルを通して、８０％シクロヘキサン：２０ ％トルエン混合物２５０−を再循環した。ルーメン内の水溶液（０，１Ｍリン酸 ナトリウム緩衝液）は、酵素およびエステルを含んでいた。ここで使用した限外 濾過型の膜は、プロテアーゼ酵素を拒絶しない；従って、酵素は、エステル溶液 中ならびに膜の孔内にも存する。イブプロフェン酸が形成されるにつれて、それ は有機相に抽出された。次いで、別の抽出膜モジュール（ポリアクリロニトリル の限外濾過型中空繊維膜で作られた０、８５ｒｒｒのあつらえの耐溶剤性膜モジ ュール）内で、酸の豊富な有機相をストリッピングした。このモジュールの水性 相は、ｐＨ９，５の０．１Ｍ炭酸ナトリウム緩衝液を含んでいた。８．２２Ｍ水 酸化ナトリウムを用いて、ｐＨを９．５に調節した。 ある特別の場合においては、０．１Ｍリン酸ナトリウム緩衝液（ｐＨ７，０）　 ３００−にイブプロフェンのスルホメチルエステルのナトリウム塩（１）（９３ ％化学純度）　４８．３ｇｍを添加して、０．５Ｍエステル溶液を調製した。ア スペルギルス　オリゼ菌由来のプロテアーゼ（Ｆ）（大野酵素■製、プロチーム ６、固体１ｇｍ当たり６０．０００単位）３ｇｍを上記エステル溶液に添加する ことにより、反応を開始した。３０℃で６．７５時間後、８．２２Ｍ水酸化ナト リウム、８、２０ｍ１を添加した。エステルラセミ体から酸への４８．３％転化 率が示され、また実施例６．２．１．３０の均質水性反応系において得られた生 産性（第１６表参照）よりも実質的に高い生産性が示された。 実施例６．２．２．５：多相バイオリアクター内での、非対称加水分解を経る２ −（６−メドキシ ー２−ナフチル）プロパノン酸のメ チルエステルの分割 ポリアクリロニトリルの限外濾過中空繊維（アサヒメディカル社製、ＰＡＮ−２ ００へモフィルター）で作られた０、８５ｒｒｉのあつらえの耐溶剤性膜モジュ ールを使用して、多相バイオリアクターを調製した。酵素（エンチームＧ）、す なわちカンジダシリンドラセから誘導されたリパーゼは、ジエンチーム社（Ｇｅ 口ｚｙｍｅ　Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ）から購入され、比活性１０．５００単位 ／ｍｇ（１単位は、３７℃かつｐＨ７，７における、１時間当たりの、オリーブ 油から遊離された脂肪酸１ｕｍｏｌである）を有していた。この酵素は、ナプロ キセン（２−（６−メドキシー２−ナフチル）プロパノン酸）のエステル類を立 体選択的に加水分解することが知られている。 リパーゼ３．０　ｇｍを蒸留水５００ｍｔ７中に溶解し；この溶液を、限外濾過 方式で、３０分間、シェルからルーメンへ再循環しそしてタンクへ戻した。次い で、タンクが空になるまで、限外濾液を集め、そしてその後メチルイソブチルケ トン（ＭＩＢＫ）を、シェル内へポンプ輸送しそして５−７　ｐｓｉｇシェル圧 で、４００−４５０ｍ／／分で再循環して、シェルから任意の残留酵素溶液を取 り除いた。 限外濾液の試料をトリアセチンで検定した。それは、出発溶液に比べて、５％よ り少ない酵素活性が残っていることを示していた。リン酸カリウム緩衝液（２５ ｍＭ。 ｐＨ８，５）　２０（Ｗを、３５０−４００ｍｌ１分で、シェルを通して再循環 した。 ナプロキセンラセミ体のメチルエステル（化合物１８）を、方法Ｂ７によって合 成した。このエステルの水への溶解度は概略０．１−０．２　ｍＭであり、また そのＭＩＢＫへの溶解度は約１，３Ｍである。固体ナプロキセンエステル４２ｇ ｍをＭｒＢＫにゆっくりと添加して、全有機容量が概略２２５ｍｊ’である最終 濃度０．７５Ｍを達成した。プリンクマンドシマット（Ｂｒｉｎｋｍａｎ　Ｄｏ ｓｉｍａｔ）　６６５　ｐＨ−スタットを使用して、ｐＨを０．２５Ｍ　ＮａＯ Ｈで８．５０±０．０１に調節した。 水性試料を定期的に取り出しそしてナプロキセン濃度を分光光度的に（ε２．。 ＝１２５０Ｍ−’）測定することによって、反応を監視した。最初の４５分間の 平均速度は３５ｕｍｏｌ／時間であった。次の３６時間の間の加水分解速度は、 ９−１４ｕｍｏｌ／時間の範囲内であった。 実施例６．Ｚ２．６：多相バイオリアクター内での非対称加水分解を経る２−（ ４−イソブチル フェニル）プロパノン酸の２．２．２ −トリフルオロエチルエステルの分 割 実施例６．２．２．５（ナプロキセン）に記載されたように、酵素を負荷する本 質的に同じ方式を用いて、リアクターを調製し、カンジダ由来リパーゼ（ジエン チーム社製のエンチームＧ）　３．０ｇｍを、シェルからルーメンへと限外濾過 した。次いで、蒸留水２−３１およびリン酸カリウム緩衝液（０，０１Ｍ、　ｐ Ｈ７，７）　Ｉ　Ｉ！を用いて、酵素を洗浄した。次いで、モジュールから排水 した。 イブプロフェン（２−（４−イソブチルフェニル）プロパノン酸）ラセミ体のト リフルオロエチルエステル（化合物１９）を、方法Ｂ８によって合成した。この エステルの水への溶解度は概略０．４　ｍＭである。液体イブプロフェンエステ ル２６５ｇｍを、リアクターのシェル内ヘボンブ輸送し、そして出口圧５−８　 ｐｓｉｇで、４０〇−４５０ｒｎＩ／分で再循環した。基質がすでに水不混和液 であるので、いかなる育機溶媒も必要とされなかった。 リン酸塩緩衝液を直ちにルーメン内へポンプ輸送しモして４００−４５０ｍ１／ 分で再循環した。水性物容量は約６５０−であり、そしてｐＨを１．ＯＭ　Ｎａ ＯＨで７．７±０．Ｏｌに調節した。 水酸化物滴定データに基づいて酸生産量を追求することにより、反応を監視した 。最初の６０分間の平均加水分解速度は１６０ｕｍｏｌ／分であった。７６分後 に水性緩衝液を交換しそして約２００艷のクロロホルムの存在下、濃ＨＣＩを用 いてｐＨ２，０まで酸性にした。飽和塩化ナトリウム溶液でクロロホルムを洗浄 しそして硫酸マグネシウムで乾燥した。イブプロフェン溶液を蒸発乾固しそして 粗イブプロフェン２．１３ｇｍを回収した。次の７６時間にわたっては、平均加 水分解速度は、滴定分析により測定された２１ｕｍｏｌ／分であった。これは、 酸への転化率的９８％に対応する。水性物タンク（ａｑｕｅｏｕｓ　ｒｅｓｅｒ −ｖｏｉｒ）は、この期間にわたって６回変え、約１５ｇｍのイブプロフェンが 得られた。この物質をヘキサンから再結晶した。この物質は５１−５３℃の融点 （Ｓ−イブプロフェンについての文献値は５０−５２°Ｃであり、またイブプロ フェン　ラセミ体の場合は７５−７７℃である）を存している。この物質の比旋 光度は［α］ｏ＝　＋５５．０°（Ｃ＝１．エタノール）であった。 実施例６．２．２．７：多相バイオリアクター内での非対称加水分解を経る２− クロロプロパノ ン酸のオクチルエステルの分割 水０．７５ｉ中にカンジダ由来リパーゼ（エンチームＨ９分子量１００．０００ 　；　シグマ化学社カタログ番号Ｌ１７５４）３０ｇｍを溶解しそして次いでこ の溶液を濾過して不溶性物質を除去することによって、酵素溶液を調製した。 ＰＡＮ−２００へモフィルター（アサヒメディカル社）からの異方性ポリアクリ ロニトリル（ＰＮＡ）中空繊維で作られた０、８５ｒｒｆのあつらえの耐溶剤性 膜モジユール内へ、酵素を負荷した。この膜の形態学は、この膜が５０．０００ よりも高い分子量を有する蛋白質の９０％拒絶率を特性とする非対称加水分解性 の内部スキン層をもった中空繊維として記載されつるようなものである。酵素溶 液を、シェル側からルーメン側へと循環しそして限外濾過方式で溶液タンクへ戻 した。負荷工程の間ずっと、シェル区画とルーメン区画との間の圧力差を、限外 濾過速度を調整することによって（通常２００　２０ｍ１／分の間）８ｐｓｉに 維持した。１時間でこの手順を完了せしめた。 リアクターへ酵素を負荷した後、シェル側での、２−クロロプロピオン酸オクチ ルエステルラセミ体（化合物２０）　２１０ｇｍ（０，９６ｍｏｌｅ）の再循環 を開始した。このエステルの水への溶解度は約１．２ｍＭである。再循環速度は ４００ｍ１１分であり、そしてシェル区画での平均圧力を、シェル側出口におけ る絞り弁を調整することによって６．５ｐＳｉに維持した。ルーメン側では、０ ．０５ＭＫ、ＰＯ，Ｉ　Ｉ！を、４００ｍ１１分の速度で再循環した。水性物タ ンクのｐＨを、ＩＭ　ＮａＯＨの添加によって７．０に維持した。リアクターを ６．８日の間連続運転した。 反応の進行および速度を、苛性アルカリの消費量を追求することによって監視し た。実験の始めにおいては、エステル加水分解の速度は１８６ｕｍｏｌｅｓ／分 であり、そしてその終わりには２５ｕｍｏｌｅｓ／分であった。最初のエステル の４１％が加水分解された時に、実験を停止させた。最終エステル混合物の旋光 度は、［αＩＤ＝−０，４１°（ｃ　＝５０．　ＣＨＣｌ２）であった。リアク ターへの最初のエステル基質はいかなる旋光度も存していなかった。 ６　、２．３　　酵素分割活性および特異性の決定実施例６．２．３．ｌ：５− ３−アセチルチオ−２−メチルプロパノン酸スルホメチルエステル の２つの鏡像体に対する酵素Ｂの活 性および特異性の決定 ５０ｍＭの濃度の上記エステルの１つの鏡像体および５゜ｍＭ　Ｎａ５ＰＯａ緩 衝液（ｐＨ７，６）を含んでいる溶液１５ｍ１をｐＨスタット装置を使用して観 測した。５０ｍＭ　ＮａｚＰ０４緩衝液＜９Ｈ７，６）中の商業的に入手可能な 製剤から作った酵素Ｂの５０ｍｇ／ｍｌ溶液を０．１ｍｊ添加した。エステル化 合物の両方の鏡像体の加水分解速度を、酵素に対して測定した。酵素に対する２ つの鏡像体についての２つの鏡像体加水分解速度の比率は、エステルのラセミ混 合物に対するその酵素の加水分解作用の立体特異性を示している。基質分子のア セチルチオエステル部分の加水分解に対するいかなる証拠も見い出されなかった 。結果を第１７表に要約する。 実施例６．２．３．２：５−３−アセチルチオ−２−メチルプロパノン酸スルホ メチルエステル の２つの鏡像体に対する酵素■の活 性および特異性の決定 ５０ｍＭの濃度の上記エステルの１つの鏡像体および５０ｍＭのＮａａＰＯａ緩 衝液（ｐＨ７，６）を含んでいる溶液１５ｍ１をｐＨスタット装置を使用して観 測した。５０ｍＭ　Ｎａ５ＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，６）中の商業的に入手可能な 製剤から作ったプロテアーゼ酵素Ｉの５０ｍｇ／−溶液０．１　ｍｌを添加した 。エステル化合物の両方の鏡像体の加水分解速度をプロテアーゼ酵素に対して測 定した。酵素に対する２つの鏡像体についての２つの鏡像体加水分解速度の比率 は、エステルのラセミ混合物に対するその酵素の加水分解作用の立体特異性を示 している。基質分子のアセチルチオエステル部分の加水分解についてのいがなる 証拠も見い出されなかった。結果を第１７表に要約する。 実施例６．２．３．３：５−３−アセチルチオ−２−メチルプロパノン酸スルホ メチルエステル の２つの鏡像体に対する酵素への活 性および特異性の決定 ５０ｍＭの濃度の上記エステルの１つの鏡像体および５０ｍＭのＮａａＰＯ４緩 衝液（ｐＨ７，６）を含んでいる溶液１５ｒＩＬｌを、ｐＨスタット装置を使用 して観測した。５０ｍＭ　ＮａｚＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，６）中の商業的に入手 可能な製剤から作った酵素Ａの５０ｍｇ／ｍｌ溶液０．１−を添加した。エステ ル化合物の両方の鏡像体の加水分解速度を酵素に対して測定した。酵素に対する ２つの鏡像体についての２つの鏡像体加水分解速度の比率は、エステルのラセミ 混合物に対するその酵素の加水分解作用の立体特異性を示している。基質分子の アセチルチオエステル部分の加水分解についてのいかなる証拠も見い出されなか った。結果を第１７表に要約する。 実施例６．２．３．４：Ｓ　−３−アセチルチオ−２−メチルプロパノン酸スル ホメチルエステル の２つの鏡像体に対する酵素Ｊの活 性および特異性の決定 ５０ｎｉＭの濃度の上記エステルの１つの鏡像体および５０ｍＭのＮａ５ＰＯ４ 緩衝液（ｐＨ７，６）を含んでいる溶液１５−を、９Ｈスタツト装置を使用して 観察した。５０ｍＭ　Ｎａ５ＰＯ４緩衝液（１）Ｈ７，６）中の商業的に入手可 能な製剤から作った酵素Ｊの５０ｍｇ／ｒｎｌ溶液０．１−を添加した。エステ ル化合物の両方の鏡像体の加水分解速度を、酵素に対して測定した。酵素に対す る２つの鏡像体についての２つの鏡像体加水分解速度の比率は、エステルのラセ ミ混合物に対するその酵素の加水分解作用の立体特異性を示している。基質分子 のアセチルチオエステル部分の加水分解についてのいかなる証拠も見い出されな かった。結果を第１７表に要約する。 実施例６．２．３．５：５−３−アセチルチオ−２−メチルプロパノン酸スルホ メチルエステル め２つの鏡像体に対する酵素りの活 性および特異性の決定 ５０ｍＭ濃度の上記エステルの１つの鏡像体および５０ｍＭのＮａ５ＰＯ４緩衝 液（ｐＨ７，６）を含んでいる溶液１５ｍ１’を、ｐＨスタット装置を使用して 観測した。５０ｍＭ　Ｎａ３ＰＯ４緩衝液（ｐＨ７，６）中の商業的に入手可能 な製剤から作った酵素りのｓｏｍｇ／ｍｊ’溶液０．１　ｍｌを添加した。エス テル化合物の両方の鏡像体の加水分解速度を、酵素に対して測定した。酵素に対 する２つの鏡像体についての２つの鏡像体加水分解速度の比率は、エステルのラ セミ混合物に対するその酵素の加水分解作用の立体特異性を示している。基質分 子のチオアセチルエステル部分の加水分解についてのいかなる証拠を見い出され なかった。結果を第１７表に要約する。 （本頁以下余白） １４表千３−５０４５９９　（５５） 第１７表 ６．２．３．１　　　　　　　　　　　（Ｂ）　　　　　　　　　　　　　１３ ５　　　　　　　　　　　６５　　　　　　　　　　２．１Ｇ、２．３．２　　 　　　　　　（Ｇ）　　　　　　　　　１０５　　　　　　　６３　　　　　　 １．７６．２．コ、コ　　　　　　　　　（Ａ）　　　　　　　　　　　　１２ 　　　　　　　　　　　Ｓ・コ　　　　　　２・コロ、２．３．４　　　　　　 　　　　（Ｈ）　　　　　　　　　　　６５　　　　　　　　６１　　　　　　 　　１．１６．２．コ、５　　　　　　　　　　（Ｄ）　　　　　　　　　　　 　２９　　　　　　　　　２７　　　　　　　　１．１本発明は、上記実験によ って、または使用されている反応体、溶媒、溶液、膜、触媒もしくは分割工程に よって、その範囲が制限されることを意図するものではない。なぜならば、使用 されているそれぞれは、単に発明の例示として意図されているにすぎないからで ある。さらに、請求の範囲記載の方法において利用されている物質組成または組 であって、本明細書中に記載されたものに機能的に均等であるいかなるものも、 本発明の範囲内にあるものと意図されている。実際に、本明細書中に示しかつ記 載したものに加えて、発明の種々の改良は、前記記載および添付の明細から当業 者に自明となるだろう。かかる改良は、添付の請求の範囲内に入るものと意図さ れている。 （本頁以下余白） 酵素的分割は、ｌ）膜と関連して（１）　、２）水相中で（ＩＩ）または、３） 膜と関連して水相中で：（Ｉ）および（ＩｒＬのいずれかにおいて行われる。 酵素的分割は、ｌ）膜と関連して（１）　、２）水相中で（１１）または、３） 膜と関連して水相中で（＋）および（１１）、のいずれかにおいて行われる。 育機／水泪境界 有機／水相境界 詩表千３−５０４５９９　（５７） ＦＩＧ、　９ （Ｒ−選択性酵素） 劇 緩衝液中の 国際調査報告 特表千３−５０４５９９　（５９）

Claims (308)

【特許請求の範囲】
1. １．下記の式（Ｉ） （Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルおよびアリールからなる群から選ばれ る基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから なる群から選ばれる基であり、Ｙ１は四級アミン、無機酸およびその塩からなる 群から選ばれる基である〕で示される化合物。
2. ２．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルからな る群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲１記載の化合物。
3. ３．保護されたヒドロキシルが、アルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲１記載の化合 物。
4. ４．Ｒ′が、塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲１記載の化合物。
5. ５．アリールオキシ基が、４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲１記載の化合物。
6. ６．四級アミンが、式−■Ｚ３（式中、Ｚはアルキルおよびアリール基から選ば れる）を有し、かつ四級アミンヘのカウンターイオンがハライド、カルボキシレ ート、無機ポリアトミックイオン、メチルスルフェート、トシレート、メシレー トおよびポリフルオロメチルスルホネートからなる群から選ばれる、請求の範囲 １記載の化合物。
7. ７．無機酸が−ＳＯ２Ｈ、−ＯＳＯ３Ｈおよび−ＯＰＯ３Ｈ２からなる群から選 ばれる、請求の範囲１記載の化合物。
8. ８．無機酸の塩が−ＳＯ３−、−ＯＳＯ３−、−ＯＰＯ３Ｈ−および−ＯＰＯ３ −からなる陰イオン種、およびアルカリ金属、アルカリ土類金属およびアンモニ ウムからなる陽イオン種から選ばれるる、請求の範囲１記載の化合物。
9. ９．アルカリ金属がナトリウムおよびカリウムからなる群から選ばれる、請求の 範囲８記載の化合物。
10. １０．アルカリ土類金属がマグネシウムおよびカルシウムからなる群から選ばれ る、請求の範囲８記載の化合物。
11. １１．アンモニウム種が式■Ｑ４、（式中、Ｑは水素および炭化水素からなる群 から選ばれる）を有する、請求の範囲８記載の化合物。
12. １２．炭化水素がアルキルおよびアリールからなる群から選ばれる、請求の範囲 １１記載の化合物。
13. １３．Ｒ′が４−イソブチルフェニルであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲 １記載の化合物。
14. １４．Ｒが４までの炭素原子を含むアルキルである、請求の範囲１３記載の化合 物。
15. １５．Ｙ１が式−ＳＯ３−の無機酸の塩である、請求の範囲１４記載の化合物。
16. １６．Ｒがプロピルであり、Ｙ１が、式−ＯＳＯ３−の無機酸の塩である、請求 の範囲１４記載の化合物。
17. １７．Ｒがエチルであり、Ｙ１が−ＯＰＯ３−および−ＯＰＯ３Ｈ−からなる群 から選ばれる式の無機酸の塩である、請求の範囲１３記載の化合物。
18. １８．Ｒがエチルであり、Ｙ１が、式−■Ｚ３の四級アミンの塩であり、Ｚがメ チルである、請求の範囲１３記載の化合物。
19. １９．Ｒ′が６−メトオキシ−２−ナフチルであり、Ｒ′′が水素である、請求 の範囲１記載の化合物。
20. ２０．Ｒが３までの炭素原子を含むアルキルである、請求の範囲１９記載の化合 物。
21. ２１．Ｙ１が式−ＳＯ２−の無機酸の塩である、請求の範囲２０記載の化合物。
22. ２２．Ｒは２から３までの炭素原子を含むアルキルであり、Ｙ１が式−■Ｚ３の 四級アミンの塩であり、Ｚがメチルである、請求の範囲１９記載の化合物。
23. ２３．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンであり、Ｒ′′が 水素である、請求の範囲１記載の化合物。
24. ２４．Ｒがプロピルであり、Ｙ１が式−ＳＯ３−の無機酸の塩である、請求の範 囲２３記載の化合物。
25. ２５．Ｒ′がメチルであり、Ｒ′′がアセチルおよびベンゾイルからなる群から 選ばれる保護基で誘導されるチオールである、請求の範囲１記載の化合物。
26. ２６．Ｒがメチルであり、Ｙ１が式−ＳＯ３−の無機酸の塩である、請求の範囲 ２５記載の化合物。
27. ２７．Ｒ′′がベンジルであり、Ｒ′がハロゲンおよびヒドロキシルからなる群 から選ばれる、請求の範囲１記載の化合物。
28. ２８．ハロゲンが塩素および臭素からなる群から選ばれる、請求の範囲２７記載 の化合物。
29. ２９．Ｒ′′が水素であり、Ｒ′が４−クロロフェノキシである、請求の範囲１ 記載の化合物。
30. ３０．Ｒがメチルであり、Ｙ１が式−ＳＯ２−の無機酸の塩である、請求の範囲 ２９記載の化合物。
31. ３１．ａ）下記の式（ＩＩＩ）の化合物を塩基と反応させて式（ＩＩＩ）の化合 物のカルボキシレートイオンを形成し、（ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があり ます▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保 護されたヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基であり、Ｒ′′ は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールからなる群から選ばれる 基である〕 ｂ）工程ａ）で形成された式ＩＩＩの化合物のカルボキシレートイオンをヒドロ キシアルキルスルホン酸サルトンと反応させ、そして ｃ）工程ｂ）で形成された式（ＩＩ）の化合物を単離することを包含する、下記 の式（ＩＩ） （ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリール オキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンから なる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールお よびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルであり、Ｙ２は− ＳＯ３Ｈまたはその塩である〕で示されるエステル化合物の製造方法。
32. ３２．保護されたチオールが、アセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルか らなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲３１記載の方法 。
33. ３３．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲３１記載の方法。
34. ３４．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲３１記載の方法。
35. ３５．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲３１記載の方 法。
36. ３６．塩基が無機および有機の塩基である、請求の範囲３１記載の方法。
37. ３７．無機塩基がアルカリ金属およびアルカリ土類ヒドロキシおよびカーボネー トからなる群から選ばれる、請求の範囲３６記載の方法。
38. ３８．Ｒ′が４−イソブチルフェニルであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲 ３１記載の方法。
39. ３９．ヒドロキシアルキルスルホン酸サルトンが１，３−プロパンサルトンであ る、請求の範囲３８記載の方法。
40. ４０．ヒドロキシアルキルスルホン酸サルトンが１，４−ブタンサルトンである 、請求の範囲３８記載の方法。
41. ４１．Ｒ′が６−メトオキシ−２−ナフチルであり、Ｒ′′が水素である、請求 の範囲３１記載の方法。
42. ４２．ヒドロキシアルキルスルホン酸サルトンが１，３−プロパンサルトンであ る、請求の範囲４１記載の方法。
43. ４３．Ｒ′が塩素であり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲３１記載の方法。
44. ４４．ヒドロキシアルキルスルホン酸サルトンが１，３−プロパンサルトンであ る、請求の範囲４３記載の方法。
45. ４５．反応がメチルイソブチルケトン中で行われる、請求の範囲４３記載の方法 。
46. ４６．ａ）トリフルオロ酢酸中で、下記の式（ＩＩＩ）（ＩＩＩ）▲数式、化学 式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒ ドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基 であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールからなる 群から選ばれる基である。〕の化合物をヒドロキシアルキルおよびヒドロキシア リールスルホン酸塩からなる群から選ばれる化合物と混合し、ｂ）工程ａ）の混 合物にトリフルオロ酢酸無水物を添加し、そして ｃ）工程ｂ）で形成された式（ＩＩ）の化合物を単離することを包含する、下記 の式（ＩＩ） （ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリール オキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンから なる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールお よびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアリールおよびアクリルか らなる群から選ばれる基であり、Ｙ２は−ＳＯ３Ｈまたはその塩である〕で示さ れるエステル化合物の製造方法。
47. ４７．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲４６記載の方 法。
48. ４８．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲４６記載の方法。
49. ４９．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲４６記載の方法。
50. ５０．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲４６記載の方法。
51. ５１．Ｒ′が４−イソブチルフェニルであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲 ４６記載の方法。
52. ５２．工程ａ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がナトリウムホルムアルデヒ ドビサルファイトおよびイセチオン酸ナトリウム塩からなる群から選ばれる、請 求の範囲５１記載の方法。
53. ５３．Ｒ１が６−メトオキシ−２−ナフチルであり、Ｒ′′が水素である、請求 の範囲４６記載の方法。
54. ５４．工程ａ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がナトリウムホルムアルデヒ ドビサルファイトである請求の範囲５３記載の方法。
55. ５５．ａ）下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリー ルオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンか らなる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオール およびチオールからなる群から選ばれる基である〕の化合物を無機酸クロライド と混合して溶液中で式（ＩＩＩ）の化合物の酸クロライドを形成し、 ｂ）工程ａ）で形成された式（ＩＩＩ）の化合物の酸クロライドをヒドロキシア ルキルおよびヒドロキシアリールスルホン酸塩からなる群から選ばれる化合物と 反応させる、そして ｃ）工程ｂ）で形成された式（ＩＩ）の化合物を単離することを包含する下記の 式（ＩＩ） （ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリール オキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンから なる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールお よびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアリールおよびアルキルか らなる群から選ばれる基であり、Ｙ２は−ＳＯ３Ｈまたはその塩である〕で示さ れるエステル化合物の製造方法。
56. ５６．工程ａ）で形成された無機酸クロライドがチオニルクロライド、三塩化リ ンおよび五塩化リンからなる群から選ばれる、請求の範囲５５記載の方法。
57. ５７．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲５５記載の方 法。
58. ５８．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲５５記載の方法。
59. ５９．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲５５記載の方法。
60. ６０．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲５５記載の方法。
61. ６１．Ｒ′が４−イソブチルフェニルであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲 ５５記載の方法。
62. ６２．工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がナトリウムホルムアルデヒ ドビサルファイトである、請求の範囲６１記載の方法。
63. ６３．Ｒ′が６−メトオキシ−２−ナフチルであり、Ｒ′′が水素である、請求 の範囲５５記載の方法。
64. ６４．工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がイセチオン酸ナトリウム塩 およびナトリウムホルムアルデヒドビサルファイトからなる群から選ばれる、請 求の範囲６３記載の方法。
65. ６５．Ｒ′がメチルであり、Ｒ′′がアセチルおよびベンゾイルからなる群から 選ばれる保護基で保護された保護チオールである、請求の範囲５５記載の化合物 。
66. ６６．工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がナトリウムホルムアルデヒ ドビサルファイトである、請求の範囲６６記載の方法。
67. ６７．Ｒ′が４−クロロフェノキシであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲６ ５記載の方法。
68. ６８．工程ｂ）のヒドロキシアルキルスルホン酸塩がナトリウムホルムアルデヒ ドビサルファイトである請求の範囲６７記載の方法。
69. ６９．ａ）下記の式（Ｖ） （Ｖ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよ びチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルおよびアリールから なる群から選ばれる基であり、Ｙ４は水素である〕の化合物を溶液中でスルホン 化剤と反応させ、そして ｂ）工程ａ）で形成された式（ＩＶ）の化合物を単離することを包含する下記の 式（ＩＶ） （ＩＶ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリール オキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンから なる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールお よびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアリールおよびアルキルか らなる群から選ばれる基であり、Ｙ３は−ＳＯ３Ｈまたはその塩である〕で示さ れるエステル化合物の製造方法。
70. ７０．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲６９記載の方 法。
71. ７１．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲６９記載の方法。
72. ７２．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲６９記載の方法。
73. ７３．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲６９記載の方法。
74. ７４．工程ａ）のスルホン化剤がクロロスルホン酸およびＳＯ３からなる群から 選ばれる、請求の範囲６９記載の方法。
75. ７５．Ｒ′′が水素であり、Ｒ′が２−（４−イソブチルフェニル）および６− メトキシ−２−ナフチルからなる群から選ばれる基である、請求の範囲６９記載 の方法。
76. ７６．Ｒがプロピルである、請求の範囲７５記載の方法。
77. ７７．ａ）下記の式（Ｖ）の化合物を溶液中でホスホリル化剤またはその誘導体 と反応させる工程（Ｖ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリ ール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよ びハロゲンからなる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護さ れたチオールおよびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルお よびアリールからなる群から選ばれる基であり、Ｙ４は水素である〕の化合物を 溶液中でホスホリル化剤またはその誘導体と反応させ、そしてｂ）工程ａ）で形 成された式（ＶＩ）の化合物を単離することを包含する下記の式（ＶＩ） （ＶＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリール オキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンから なる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールお よびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒはアリールおよびアルキルか らなる群から選ばれる基であり、Ｙ５は−ＯＰＯ３Ｈ２またはその塩である〕で 示されるエステル化合物の製造方法。
78. ７８．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲７７記載の方 法。
79. ７９．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲７７記載の方法。
80. ８０．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲７７記載の方法。
81. ８１．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲７７記載の方法。
82. ８２．Ｒ′′がＨであり、Ｒ′が６−メトキシ−２−ナフチルおよび４−イソブ チルフェニルからなる群から選ばれる基である、請求の範囲７７記載の方法。
83. ８３．Ｒがエチルである、請求の範囲８２記載の方法。
84. ８４．ａ）下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護され たヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素 、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールからなる群から選ばれる基であ る〕の化合物を無機酸の酸クロライドと反応させて式（ＩＩＩ）の酸クロライド を形成し、 ｂ）工程ａ）で形成された式（ＩＩＩ）の化合物の酸クロライドを単離し、 ｃ）工程ｂ）の酸クロライドを式Ｚ２Ｎ−Ｒ−ＯＨの化合物と混合してエステル を形成し、 ｄ）工程ｃ）で形成された式（ＩＩＩ）の化合物のエステルを単離し、 ｅ）工程ｄ）の式（ＩＩＩ）の化合物のエステルをアルキル化剤と反応させ、そ して ｆ）工程ｅ）で形成された式（ＶＩＩ）の化合物を単離することを包含する下記 の式（ＶＩＩ） （ＶＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、 Ｒ′はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロ キシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基であり、Ｒ′′は水素、ベンジ ル、保護されたチオールおよびチオールからなる群から選ばれる基であり、Ｒは アリールおよびアルキルからなる群から選ばれる基であり、Ｙ６は−■Ｚ３また はその塩であり、Ｚはアリールおよびアルキルからなる群から選ばれる基である 〕で示されるエステル化合物の製造方法。
85. ８５．工程ａ）の無機酸クロライドがチオニルクロライド、三塩化リンおよび五 塩化リンからなる群から選ばれる、請求の範囲８４記載の方法。
86. ８６．アルキル化剤がアルキルハライド、ジアルキルスルフェートおよびスルホ ン酸アルキルエステルからなる群から選ばれる、請求の範囲８４記載の工程ｅ） の方法。
87. ８７．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲８４記載の方 法。
88. ８８．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲８４記載の方法。
89. ８９．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフエノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲８４記載の方法。
90. ９０．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲８４記載の方法。
91. ９１．Ｒ′が４−イソブチルフェニルであり、Ｒ′′が水素である、請求の範囲 ８４記載の方法。
92. ９２．工程ｃ）のＺ２Ｎ−Ｒ−ＯＨが２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エタノー ルである、請求の範囲９１記載の工程ｃ）の方法。
93. ９３．Ｒ１が６−メトキシ−２−ナフチルであり、Ｒ′′が水素である、請求の 範囲８４記載の方法。
94. ９４．工程ｃ）のＺ２Ｎ−Ｒ−ＯＨが２−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）エタノー ルおよび３−（Ｎ，Ｎ−ジメチルアミノ）プロパノールからなる群から選ばれる 、請求の範囲９３記載の工程ｃ）の方法。
95. ９５．ａ）流体中に、少なくとも第１および第２の立体異性体を有する下記の式 （Ｉ） （Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルおよびアリールからなる群から選ばれ る基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから なる群から選ばれる基であり、Ｙ１は四級アミン、無機酸およびその塩からなる 群から選ばれる基である〕のエステル化合物のラセミ混合物および酵素（この酵 素は第１立体異性体が変化した化学的組成を有する後記の式（ＩＩＩ）の生成物 の分割された調製物になる反応を触媒する）を供給することにより、式（Ｉ）の 化合物のラセミ混合物を酵素的に分割し、そして ｂ）該流体から式（ＩＩＩ）の生成物の分割された調製物を単離することを包含 する、ラセミ混合物を分割して下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリー ルオキシ、アルキルヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基であ り、Ｒ′′は水素、ベンジルおよびチオールからなる群から選ばれる基である〕 で示される化合物の分割された調製物を生成する方法。
96. ９６．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルから なる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲９５記載の方法。
97. ９７．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネー ト、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシル からなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲９５記載の方 法。
98. ９８．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシお よび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請求 の範囲９５記載の方法。
99. ９９．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の範 囲９５記載の方法。
100. １００．流体が水溶液である、請求の範囲９５記載の方法。
101. １０１．工程ａ）の反応がエステル加水分解である、請求の範囲９５記載の方法 。
102. １０２．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有する、請 求の範囲９５記載の方法。
103. １０３．ラセミ混合物が、Ｓ位が保護された２−メチル−３−チオプロパン酸、 ２−アリールプロパン酸、２−アリールオキシプロパン酸、２−プロモ−４−フ ェニルブタン酸、２−ハロプロパン酸、２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸 およびそれらの保護されたヒドロキシルからなる群から選ばれる化合物を含有す る、請求の範囲９５記載の方法。
104. １０４．その酸部分がラセミ形である水混和性エステルの少なくとも２種の異性 体をラセミ混合物が含有する、請求の範囲９５記載の方法。
105. １０５．酵素が加水分解酵素である、請求の範囲９５記載の方法。
106. １０６．酵素がプロテアーゼ、エステラーゼおよびリパーゼからなる群から選ば れる、請求の範囲１０５記載の方法。
107. １０７．酵素が精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素および全細胞 からなる群から選ばれる形で供給される、請求の範囲９５記載の方法。
108. １０８．酵素が微生物に由来する、請求の範囲９５記載の方法。
109. １０９．酵素がバチルス、アスペルギルス、ムコール、ストレプトマイセス、ス タフィロコッカス、リゾープス、トリチラキウム、シュードモナスおよびセラチ アからなる群から選ばれる微生物に由来する、請求の範囲１０８記載の方法。
110. １１０．酵素がアスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼである、請求の 範囲１０９記載の方法。
111. １１１．アスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼがＡｍａｎｏＩｎｔｅ ｒｎａｔｉｏｎａｌＥｎｚｙｍｅのＰｒｏｚｙｍｅ６である、請求の範囲１１０ 記載の方法。
112. １１２．酵素がバチルス・スブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンスお よびバチルス・リケニホルミスからなる群から選ばれる微生物に由来するプロテ アーゼである、請求の範囲１０９記載の方法。
113. １１３．酵素が天然に存在する種および遺伝子操作された種からなる群から選ば れる微生物に由来するセリンプロテアーゼであるサブリシンである、請求の範囲 １０８記載の方法。
114. １１４．酵素が哺乳類に由来する、請求の範囲９５記載の方法。
115. １１５．酵素がブタ肝臓エステラーゼである、請求の範囲１１４記載の方法。
116. １１６．流体のｐＨが２から１０の範囲である、請求の範囲１００記載の方法。
117. １１７．反応が１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲９５記載の方法 。
118. １１８．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有しており 、キラル生成物がカルボン酸である、請求の範囲９５記載の方法。
119. １１９．工程ａ）の酵素が粒状固相支持体上に固定されており、該固定化酵素を 流体に接触させる、請求の範囲９５記載の方法。
120. １２０．流体が撹拌式タンク、充填床および流動床反応器からなる群から選ばれ る反応器内に収容される、請求の範囲１１９記載の方法。
121. １２１．限外濾過、透析、透析濾過、沈澱およびイオン交換からなる群から選ば れる方法により、流体中に残留する立体異性体から酵素を分離することをさらに 含有する、請求の範囲９５記載の方法。
122. １２２．流体から第２の立体異性体を単離し、この第２の立体異性体をラセミ化 し、そしてこのラセミ化された立体異性体を流体中に再導入することをさらに含 有する、請求の範囲９５記載の方法。
123. １２３．流体からキラル生成物を分離し、このキラル生成物をラセミ化し、この ラセミ化された生成物を化学的に変換して第１および第２の立体異性体の化学的 形となし、そしてこのラセミ化された立体異性体を流体中に再導入することをさ らに包含する、請求の範囲９５記載の方法。
124. １２４．ａ）第１の流体中に、少なくとも第１および第２の立体異性体を有する 下記の式（Ｉ） （Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれる基であり、Ｒはアルキルおよびアリールからなる群から選ばれ る基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから なる群から選ばれる基であり、Ｙ１は四級アミン、無機酸およびその塩からなる 群から選ばれる基である〕ラセミ混合物および酵素（この酵素は第１の立体異性 体が変化した化学的組成を有する後記の式（ＩＩＩ）の生成物の分割された調製 物になる反応を触媒する）を供給することにより、式（Ｉ）の化合物のラセミ混 合物を酵素的に分割し、そして ｂ）該第１の流体に実質的に非混和性の第２の流体を同時に供給し、そして該第 ２の流体を第１の流体と接触させることを包含し、これにより該第１の流体のラ セミ混合物が分割されて工程ａ）の式（ＩＩＩ）の生成物が該第２の流体中に優 先的に拡散し、従って該第２の流体が主として式（ＩＩＩ）の生成物の分割され た調製物を含有し、そして該第１の流体が主として式（Ｉ）の第２の立体異性体 を含有するように構成された、ラセミ混合物を分割して下記の式（ＩＩＩ）（Ｉ ＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれる基であり 、Ｒ′′は水素、ベンジルおよびチオールからなる群から選ばれる基である〕で 示される化合物の分割された調製物を生成する方法。
125. １２５．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルか らなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲１２４記載の化 合物。
126. １２６．保護されたヒドロキシルがアルキル、カーボネート、アルキルカーボネ ート、アリールカーボネート、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシ ルからなる群から選ばれる保護基により保護されている、請求の範囲１２４記載 の化合物。
127. １２７．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシ および２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる基である、請 求の範囲１２４記載の化合物。
128. １２８．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれるハロゲンである、請求の 範囲１２４記載の化合物。
129. １２９．第１の流体が水溶液であり、第２の流体が有機性溶液である請求の範囲 １２４記載の方法。
130. １３０．工程ａ）の反応がエステル加水分解である、請求の範囲１２４記載の方 法。
131. １３１．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の異性体を含有する、請求の 範囲１２４記載の方法。
132. １３２．ラセミ混合物が、Ｓ位が保護された２−メチル−３−チオプロパン酸、 ２−アリールプロパン酸、２−アリールオキシプロパン酸、２−ブロモ−４−フ ェニルブタン酸、２−ハロプロパン酸、２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸 およびそれらの保護されたヒドロキシルからなる群から選ばれる化合物を含有す る、請求の範囲１２４記載の方法。
133. １３３．その酸部分基がラセミ形である水混和性エステルの少なくとも２種の異 性体をラセミ混合物が含有する、請求の範囲１２４記載の方法。
134. １３４．酵素が加水分解酵素である、請求の範囲１２４記載の方法。
135. １３５．酵素がプロテアーゼ、エステラーゼ、およびリパーゼからなる群から選 ばれる、請求の範囲１３４記載の方法。
136. １３６．酵素が精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素および全細胞 からなる群から選ばれた形で供給される請求の範囲１２４記載の方法。
137. １３７．酵素が微生物に由来する、請求の範囲１２４記載の方法。
138. １３８．酵素がバチルス、アスペルギルス、ムコール、ストレプトマイセス、ス タフィロコッカス、リゾープス、トリチラキウム、シュードモナスおよびセラチ アからなる群から選ばれた微生物に由来する、請求の範囲１３７記載の方法。
139. １３９．酵素がアルペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼである、請求の 範囲１３８記載の方法。
140. １４０．アルペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼがＡｍａｎｏ　Ｉｎｔ ｅｍａｔｉｏｎａｌ　ＥｎｓｙｍｅのＰｒｏｚｙｍｅ６である、請求の範囲１３ ９記載の方法。
141. １４１．酵素がバチルス・スブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンスま たはバチルス・リケニホルミスからなる群から選ばれた微生物に由来するプロテ アーゼである、請求の範囲１３８記載の方法。
142. １４２．酵素が天然に存在する種および遺伝子操作された種からなる群から選ば れた微生物に由来するセリンプロテアーゼであるサブチリシンである、請求の範 囲１３７記載の方法。
143. １４３．酵素が哺乳類に由来する、請求の範囲１２４記載の方法。
144. １４４．酵素がブタ肝臓エステラーゼである、請求の範囲１４３記載の方法。
145. １４５．第１の流体のｐＨが約２から約１０のｐＨ範囲である、請求の範囲１２ ９記載の方法。
146. １４６．反応が約１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲１２４記載の 方法。
147. １４７．キラル生成物が、前記第１の流体よりも前記第２の流体に実質的により 可溶性がある、請求の範囲１２４記載の方法。
148. １４８．前記第１および第２の立体異性体が前記第２の流体よりも前記第１の流 体に実質的により可溶性がある、請求の範囲１２４記載の方法。
149. １４９．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有し、前記 キラル生成物がカルボン酸である、請求の範囲１２４記載の方法。
150. １５０．前記第２の流体から前記キラル生成物を分離することをさらに包含する 、請求の範囲１２４記載の方法。
151. １５１．前記第１の流体から前記第２の立体異性体を分離することをさらに包含 する、請求の範囲１２４記載の方法。
152. １５２．工程ａ）の酵素が粒状固相支持体上に固定されており、該固定化酵素を 流体に接触させる、請求の範囲１２４記載の方法。
153. １５３．流体が撹拌式タンク、充填床および流動床反応器からなる群から選ばれ た反応器中に収容される、請求の範囲１５２記載の方法。
154. １５４．前記第１および第２の流体を、機械的撹拌により一方の流体を他方中に 分散させる手段で高表面積接触させる、請求の範囲１２４記載の方法。
155. １５５．前記第１および第２の流体を溶媒抽出操作に用いられる型の装置中で接 触させる、請求の範囲１２４記載の方法。
156. １５６．酵素を前記第１の流体中の残存する立体異性体から、限外濾過、透析、 透析濾過、沈澱およびイオン交換からなる群から選ばれた方法により分離するこ とをさらに包含する、請求の範囲１２４記載の方法。
157. １５７．前記第１の流体から前記第１の立体異性体を減少させる、請求の範囲１ ２４記載の方法。
158. １５８．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を、前記第２の流体との接 触からはずし、該第２の立体異性体をラセミ化し、そして第１の流体中の該ラセ ミ化した立体異性体を該第２の流体と再接触させることをさらに包含する、請求 の範囲１２４記載の方法。
159. １５９．前記キラル生成物を含有する前記第２の流体を前記第１の流体との接触 からはずし、該キラル生成物をラセミ化させ、該ラセミ化生成物を前記第１およ び第２の立体異性体の化学的形に化学的に変化させ、該ラセミ化立体異性体を該 第１の流体に再導入し、そして該第１の流体を該第２の流体と再接触させること をさらに包含する、請求の範囲１２４記載の方法。
160. １６０．ａ）第１の流体中に、少なくとも第１および第２の立体異性体を有する 下記の式Ｉ （Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれた基であり、Ｒはアルキルおよびアリールからなる群から選ばれ た基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから なる群から選ばれた基であり、Ｙ１は四級アミン、無機酸およびその塩からなる 群から選ばれた基である〕のエステル化合物のラセミ混合物を、酵素活性化膜（ この膜を活性化する該酵素は第１の立体異性体が変化した化学的組成を有する後 記の式ＩＩＩの生成物の分割された調製物になる反応を触媒する）の片側に供給 することにより、式Ｉの化合物のラセミ混合物を酵素的に分割し、そしてｂ）該 第１の流体に実質的に非混和性の第２の流体を該酵素活性化膜の他方の側に同時 に供給することを包含し、 これにより、該第１の流体のラセミ混合物が分割されて工程ａ）の式ＩＩＩの生 成物が該酵素活性化膜から該第２の流体中に優先的に拡散し、従って該第２の流 体が主として式ＩＩＩの生成物の分割された調製物を含有し、そして該第１の流 体が主として式Ｉの第２の立体異性体を含有するように構成された、ラセミ混合 物を分割して下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリー ルオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンか らなる群から選ばれた基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオール およびチオールからなる群から選ばれた基である〕で示される化合物の分割され た調製物を生成する方法。
161. １６１．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルか らなる群から選ばれた保護基で保護されている、請求の範囲１６０記載の方法。
162. １６２．保護されたヒドロキシルがアルキル、炭酸塩、アルキル炭酸塩、アリー ル炭酸塩、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルからなる群から選 ばれた保護基で保護されている、請求の範囲１６０記載の方法。
163. １６３．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシ および２−メチル−４−クロロフエノキシからなる群から選ばれた基である、請 求の範囲１６０記載の方法。
164. １６４．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれたハロゲンである、請求の 範囲１６０記載の方法。
165. １６５．第１の流体が水溶液であり、第２の流体が有機性溶液である、請求の範 囲１６０記載の方法。
166. １６６．工程ａ）の反応がエステル加水分解である、請求の範囲１６０記載の方 法。
167. １６７．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の異性体を含有する、請求の 範囲１６０記載の方法。
168. １６８．ラセミ混合物が、Ｓ位が保護された２−メチル−３−チオプロパン酸、 ２−アリールプロパン酸、２−アリールオキシプロパン酸、２−ブロモ−４−フ ェニルブタン酸、２−ハロプロパン酸、２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン酸 およびそれらの保護されたヒドロキシルからなる群から選ばれた化合物を含有す る、請求の範囲１６０記載の方法。
169. １６９．その酸部分がラセミ形である水混和性エステルの少なくとも２種の立体 異性体をラセミ混合物が含有する、請求の範囲１６０記載の方法。
170. １７０．膜が親水性膜である、請求の範囲１６０記載の方法。
171. １７１．膜が疎水性膜である、請求の範囲１６０記載の方法。
172. １７２．膜が微孔性膜である、請求の範囲１６０記載の方法。
173. １７３．膜を活性化する酵素が加水分解酵素である、請求の範囲１６０記載の方 法。
174. １７４．膜を活性化する酵素がプロテアーゼ、エステアーゼおよびリパーゼから なる群から選ばれた、請求の範囲１７３記載の方法。
175. １７５．膜を活性化する酵素が該膜の表面に結合される、請求の範囲１６０記載 の方法。
176. １７６．膜を活性化する酵素が該膜の表面上にゲル層として付着される、請求の 範囲１６０記載の方法。
177. １７７．膜を活性化する酵素が該膜内に配置される、請求の範囲１６０記載の方 法。
178. １７８．膜を活性化する酵素が非対称の微孔性膜の孔空間中に含有される、請求 の範囲１６０記載の方法。
179. １７９．膜を活性化する酵素が該膜の孔壁表面上に吸着される、請求の範囲１６ ０記載の方法。
180. １８０．膜を活性化する酵素が該膜の孔内の重合体ゲル中に捕捉される、請求の 範囲１６０記載の方法。
181. １８１．膜を活性化する酵素が該膜の孔壁表面に共有結合される、請求の範囲１ ６０記載の方法。
182. １８２．膜を活性化する酵素が該膜の孔空間中で架橋される、請求の範囲１６０ 記載の方法。
183. １８３．膜を活性化する酵素が該膜の孔壁表面上で架橋される、請求の範囲１６ ０記載の方法。
184. １８４．酵素が精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素および全細胞 からなる群から選ばれた形で供給される、請求の範囲１６０記載の方法。
185. １８５．酵素が微生物に由来する、請求の範囲１６０記載の方法。
186. １８６．酵素が、バチルス、アルペルギルス、ムコール、ストレプトマイセス、 スタフィロコッカス、リゾープス、トリチラキウム、シュードモナスおよびセラ チアからなる群から選ばれた微生物に由来する、請求の範囲１８５記載の方法。
187. １８７．酵素がアスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼである、請求の 範囲１８６記載の方法。
188. １８８．アスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼがＡｍａｎｏ　Ｉｎｔ ｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　ＥｎｓｙｍｅのＰｒｏｚｙｍｅ６である、請求の範囲１ ８７記載の方法。
189. １８９．酵素がバチルス・スブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンスお よびバチルス・リケニホルミスからなる群から選ばれた微生物に由来するプロテ アーゼである、請求の範囲１８６記載の方法。
190. １９０．酵素が天然に存在する種および遺伝子操作した種からなる群から選ばれ た微生物に由来するセリンプロテアーゼであるサブチリシンである、請求の範囲 １８５記載の方法。
191. １９１．酵素が哺乳動物に由来する、請求の範囲１６０記載の方法。
192. １９２．酵素がブタ肝臓エステラーゼである、請求の範囲１９１記載の方法。
193. １９３．膜の形が平らなシート、中空繊維およびチューブからなる群から選ばれ た、請求の範囲１６０記載の方法。
194. １９４．膜がスキンを有する微孔性膜である請求の範囲１９３記載の方法。
195. １９５．膜が再生セルロース、セルロースのエステル、ポリアクリロニトリル、 ポリアクリロニトリル共重合体、ポリウレタン含有共重合体、ポリアリールスル ホン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリアリールスルホン混合物、ポリアリ ールエーテルスルホン混合物、ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチ レン、ポリビニルアルコール、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド、ポリイミ ド、ポリエーテルイミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリオレフィン、 ポリベンゾイミダゾールおよびポリベンゾイミダゾロンからなる群から選ばれた 物質から構成される、請求の範囲１６０記載の方法。
196. １９６．膜が親水性であり、第２の流体が有機性溶液であり、該有機性溶液が加 圧される、請求の範囲１６０記載の方法。
197. １９７．第１の流体のｐＨが約２から約１０のｐＨ範囲である、請求の範囲１６ ５記載の方法。
198. １９８．反応が約１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲１６０記載の 方法。
199. １９９．キラル生成物が前記第１の流体よりも前記第２の流体に実質的により可 溶性である、請求の範囲１６０記載の方法。
200. ２００．前記第１および第２の立体異性体が前記第２の流体よりも前記第１の流 体に実質的により可溶性である、請求の範囲１６０記載の方法。
201. ２０１．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有し、前記 キラル生成物がカルボン酸である、請求の範囲１６０記載の方法。
202. ２０２．前記キラル生成物を前記第２の流体から分離することをさらに包含する 、請求の範囲１６０記載の方法。
203. ２０３．前記第２の立体異性体を前記第１の流体から分離することをさらに包含 する、請求の範囲１６０記載の方法。
204. ２０４．前記第１の流動体から前記第１の立体異性体を減少させる、請求の範囲 １６０記載の方法。
205. ２０５．ラセミ混合物を膜に連続的に再循環させる、請求の範囲１６０記載の方 法。
206. ２０６．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記酵素活性化膜から取 り出し、該第２の立体異性体をラセミ化し、そして第１の流体中の該ラセミ化立 体異性体を該酵素活性化膜に再導入することをさらに包含する、請求の範囲１６ ０記載の方法。
207. ２０７．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記酵素活性化膜から取 り出し、そして立体化学的純度を実質的に変化させることなく第２の立体異性体 を化学的に変化させて前記生成物の化学的形にすることをさらに包含する、請求 の範囲１６０記載の方法。
208. ２０８．塩の添加および温度の低下からなる群から選ばれた工程により、第１の 流体から第２の立体異性体を取り出すことをさらに包含する、請求の範囲２０７ 記載の方法。
209. ２０９．前記化学的変化が約２０から８０℃の温度および約１０から約１４のｐ Ｈ範囲で行われる加水分解反応である、請求の範囲２０７記載の方法。
210. ２１０．前記キラル生成物を含有する前記第２の流体を酵素活性化膜から取り出 し、該キラル生成物をラセミ化し、該ラセミ化生成物を化学的に変化させて前記 第１および第２の立体異性体の化学的形となし、そして該第１の流体中の該ラセ ミ化立体異性体を該酵素活性化膜に再導入することをさらに包含する、請求の範 囲１６０記載の方法。
211. ２１１．ａ）第１の流体中に、少なくとも第１および第２の立体異性体を有する 下記の式Ｉ （Ｉ） ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護され たヒドロキシルおよびハロゲンからなる群から選ばれた基であり、Ｒはアルキル およびアリールからなる群から選ばれた基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保 護されたチオールおよびチオールからなる群から選ばれた基であり、Ｙ１は四級 アミン、無機酸およびその塩からなる群から選ばれた基である〕のエステル化合 物のラセミ混合物および該第１の流体中の酵素（この酵素は第１の立体異性体が 変化した化学的組成を有する後記の式ＩＩＩの生成物の分割された調製物になる 反応を触媒する）を、膜の片側に供給することにより、式Ｉの化合物のラセミ混 合物を酵素的に分割し、そして ｂ）該第１の流体に実質的に非混和性の第２の流体を該膜の反対側に同時に供給 することを包含し、これにより、該第１の流体のラセミ混合物が分割されて工程 ａ）の式ＩＩＩの生成物が該膜から該第２の流体中に優先的に拡散し、従って該 第２の流体が主として式ＩＩＩの生成物の分割された調製物を含有し、そして該 第１の流体が主として式Ｉの第２の立体異性体を含有するように構成された、ラ セミ混合物を分割して下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリー ルオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンか らなる群から選ばれた基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオール およびチオールからなる群から選ばれた基である〕で示される化合物の分割され た調製物を生成する方法。
212. ２１２．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルか らなる群から選ばれる保護基で保護されている、請求の範囲２１１記載の方法。
213. ２１３．保護されたヒドロキシルがアルキル、炭酸塩、アルキル炭酸塩、アリー ル炭酸塩、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルからなる群から選 ばれた保護基で保護されている、請求の範囲２１１記載の方法。
214. ２１４．アリールオキシグループが４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェ ノキシおよび２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれる、請求 の範囲２１１記載の方法。
215. ２１５．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選択されるハロゲンである、請求 の範囲２１１記載の方法。
216. ２１６．第１の流体が水溶液であり、第２の流体が有機性溶液である、請求の範 囲２１１記載の方法。
217. ２１７．工程ａ）の反応がエステル加水分解である、請求の範囲２１１記載の方 法。
218. ２１８．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の異性体を含有する、請求の 範囲２１１記載の方法。
219. ２１９．ラセミ混合物が、Ｓ−位が保護された２−メチル−３−チオプロパン酸 、２−アリールプロパン酸、２−アリールオキシプロパン酸、２−ブロモ−４− フェニルブタン酸、２−ハロプロパン酸および２−ヒドロキシ−４−フェニルブ タン酸およびそれらの保護されたヒドロキシルからなる群から選ばれる化合物を 含有する、請求の範囲２１１記載の方法。
220. ２２０．その酸部分がラセミ形である水溶性エステルの少なくとも２種の立体異 性体をラセミ混合物が含有する、請求の範囲２１１記載の方法。
221. ２２１．膜が親水性膜である、請求の範囲２１１記載の方法。
222. ２２２．膜が疎水性膜である、請求の範囲２１１記載の方法。
223. ２２３．膜が微孔性膜である、請求の範囲２１１記載の方法。
224. ２２４．酵素が加水分解酵素である、請求の範囲２１１記載の方法。
225. ２２５．酵素がプロテアーゼ、エステアーゼおよびリパーゼからなる群から選ば れた、請求の範囲２２４記載の方法。
226. ２２６．酵素が精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素および全細胞 からなる群から選ばれた形で供給される、請求の範囲２１１記載の方法。
227. ２２７．酵素が微生物に由来する、請求の範囲２１１記載の方法。
228. ２２８．酵素がバチルス、アスペルギルス、ムコール、ストレプトマイセス、ス タフィロコッカス、リゾープス、トリチラキウム、シュードモナスおよびセラチ アからなる群から選ばれた微生物に由来する、請求の範囲２２７記載の方法。
229. ２２９．酵素がアスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼである、請求の 範囲２２８記載の方法。
230. ２３０．アスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼがＡｍａｎｏ　Ｉｎｔ ｅｒｎａｔｉｏｎａＩ　ＥｎｓｙｍｅのＰｒｏｚｙｍｅ６である、請求の範囲２ ２９記載の方法。
231. ２３１．酵素がバチルス・スブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンスお よびバチルス・リケニホルミスからなる群から選ばれた微生物に由来するプロテ アーゼである、請求の範囲２２８記載の方法。
232. ２３２．酵素が天然に存在する種および遺伝子操作した種からなる群から選ばれ た微生物に由来するセリンプロテアーゼであるサブチリシンである、請求の範囲 ２２７記載の方法。
233. ２３３．酵素が哺乳動物に由来する、請求の範囲２１１記載の方法。
234. ２３４．酵素がブタ肝臓エステラーゼである、請求の範囲２３３記載の方法。
235. ２３５．膜の形が平らなシート、中空繊維およびチューブからなる群から選ばれ た、請求の範囲２１１記載の方法。
236. ２３６．膜がスキンを有する微孔性膜である、請求の範囲２１１記載の方法。
237. ２３７．膜が再生セルロース、セルロースのエステル、ポリアクリロニトリル、 ポリアクリロニトリル共重合体、ポリウレタン含有共重合体、ポリアリールスル ホン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリアリールスルホン混合物、ポリアリ ールエーテルスルホン混合物、ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチ レン、ポリビニルアルコール、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド、ポリイミ ド、ポリエーテルイミド、ポリエステル、ポリカーボネート、ポリオレフィン、 ポリベンゾイミダゾールおよびポリベンゾイミダゾロンからなる群から選ばれた 材料から構成される、請求の範囲２１１記載の方法。
238. ２３８．膜が親水性であり、第２の流体が有機性溶液であり、該有機性溶液が加 圧される、請求の範囲２１１記載の方法。
239. ２３９．前記第１の流体のｐＨが約２から約１０の範囲である、請求の範囲２１ ６記載の方法。
240. ２４０．反応が約１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲２１１記載の 方法。
241. ２４１．キラル生成物が前記第１の流体よりも前記第２の流体に実質的により可 溶性である、請求の範囲２１１記載の方法。
242. ２４２．前記第１および第２の立体異性体が前記第２の流体よりも前記第１の流 体に実質的により可溶性である、請求の範囲２１１記載の方法。
243. ２４３．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有し、前記 キラル生成物がカルボン酸である、請求の範囲２１１記載の方法。
244. ２４４．前記キラル産物を前記第２の流体から分離することをさらに包含する、 請求の範囲２１１記載の方法。
245. ２４５．前記第２の立体異性体を前記第１の流体から分離することをさらに包含 する、請求の範囲２１１記載の方法。
246. ２４６．前記第１の流体から前記第１の立体異性体を減少させる、請求の範囲２ １１記載の方法。
247. ２４７．ラセミ混合物を膜に連続的に再循環させる、請求の範囲２１１記載の方 法。
248. ２４８．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記膜から取り出し、前 記第２の立体異性体をラセミ化し、そして第１の流体中の該ラセミ化立体異性体 を該膜に再導入することをさらに包含する、請求の範囲２１１記載の方法。
249. ２４９．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記膜から取り出し、そ して立体化学的純度を実質的に変化させることなく、第２の立体異性体を化学的 に変化させて前記生成物の化学的形にすることをさらに包含する、請求の範囲２ １１記載の方法。
250. ２５０．塩の添加および温度の低下からなる群から選ばれた工程により第１の流 体から第２の立体異性体を取り出すことをさらに包含する、請求の範囲２４９記 載の方法。
251. ２５１．前記化学的変化が約２０から８０℃の温度および約１０から約１４のｐ Ｈ範囲で行われる加水分解反応である、請求の範囲２４９記載の方法。
252. ２５２．前記キラル生成物を含有する前記第２の流体を膜から取り出し、該キラ ル産物をラセミ化し、該ラセミ化生成物を化学的に変化させて前記第１および第 ２の立体異性体の化学的形となし、そして前記第１の流体中の該ラセミ化立体異 性体を該膜に再導入することをさらに包含する、請求の範囲２１１記載の方法。
253. ２５３．工程ａ）の酵素が粒状固相支持体上に固定されており、該固定化酵素を 流体と接触させる、請求の範囲２１１記載の方法。
254. ２５４．流体が撹拌式タンク、充填床および流動床反応器からなる群から選ばれ た反応器中に収容される、請求の範囲２５３記載の方法。
255. ２５５．酵素を前記第１の流体中の残存する立体異性体から限外濾過、透析、透 析濾過、沈澱およびイオン交換からなる群から選ばれた方法により分離すること をさらに包含する、請求の範囲２１１記載の方法。
256. ２５６．ａ）第１の流体中に、少なくとも第１および第２の立体異性体を有する 下記の式Ｉ （Ｉ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリールオ キシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンからな る群から選ばれた基であり、Ｒはアルキルおよびアリールからなる群から選ばれ た基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオールおよびチオールから なる群から選ばれた基であり、Ｙ１は四級アミン、無機酸およびその塩からなる 群から選ばれた基である〕のエステル化合物のラセミ混合物および第１の流体中 の酵素を、酵素活性化膜（該第１の流体中の酵素および該膜を活性化する酵素の 両方は第１の立体異性体が変化した化学的組成を有する後記の式ＩＩＩの生成物 の分割された調製物になる反応を触媒する）の片側に供給することにより、式Ｉ の化合物のラセミ混合物を酵素的に分割し、そしてｂ）該第１の流体に実質的に 非混和性の第２の流体を該酵素活性化膜の反対側に同時に供給することを包含し 、 これにより、該第１の流体のラセミ混合物が分割されて工程ａ）の式ＩＩＩの生 成物が該酵素活性化膜から該第２の流体中に優先的に拡散し、従って該第２の流 体が主として式ＩＩＩの生成物の分割された調製物を含有し、そして該第１の流 体が主として式Ｉの第２の立体異性体を含有するように構成された、ラセミ混合 物を分割して下記の式（ＩＩＩ） （ＩＩＩ）▲数式、化学式、表等があります▼〔式中、Ｒ′はアリール、アリー ルオキシ、アルキル、ヒドロキシル、保護されたヒドロキシルおよびハロゲンか らなる群から選ばれた基であり、Ｒ′′は水素、ベンジル、保護されたチオール およびチオールからなる群から選ばれた基である〕で示される化合物の分割され た調製物を生成する方法。
257. ２５７．保護されたチオールがアセチル、ベンゾイルおよびチオカルバモイルか らなる群から選ばれた保護基で保護されている、請求の範囲２５６記載の方法。
258. ２５８．保護されたヒドロキシがアルキル、炭酸塩、アルキル炭酸塩、アリール 炭酸塩、アシル、ベンジル、メシル、トリチルおよびトシルからなる群から選ば れた保護基で保護されている、請求の範囲２５６記載の方法。
259. ２５９．アリールオキシ基が４−ヒドロキシフェノキシ、４−クロロフェノキシ および２−メチル−４−クロロフェノキシからなる群から選ばれた、請求の範囲 ２５６記載の方法。
260. ２６０．Ｒ′が塩素および臭素からなる群から選ばれたハロゲンである、請求の 範囲２５６記載の方法。
261. ２６１．第１の流体が水溶液であり、第２の流体が有機性溶液である、請求の範 囲２５６記載の方法。
262. ２６２．工程ａ）の反応がエステル加水分解である、請求の範囲２５６記載の方 法。
263. ２６３．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有する、請 求の範囲２５６記載の方法。
264. ２６４．ラセミ混合物Ｓ−位が保護された２−メチル−３チオプロパン酸、２− アリールプロパン酸、２−アリールオキシプロパン酸、２−ブロモ−４−フェニ ルブタン酸、２−ハロプロパン酸、および２−ヒドロキシ−４−フェニルブタン 酸およびその保護されたヒドロキシルからなる群から選ばれた化合物を含有する 、請求の範囲２５６記載の方法。
265. ２６５．その酸部分がラセミ形である水混和性エステルの少なくとも２種の立体 異性体をラセミ混合物が含有する、請求の範囲２５６記載の方法。
266. ２６６．膜が親水性である、請求の範囲２５６記載の方法。
267. ２６７．膜が疎水性膜である、請求の範囲２５６記載の方法。
268. ２６８．膜が微孔性膜である、請求の範囲２５６記載の方法。
269. ２６９．酵素が加水分解酵素である、請求の範囲２５６記載の方法。
270. ２７０．酵素がプロテアーゼ、エステアーゼおよびリパーゼからなる群から選ば れた、請求の範囲２６９記載の方法。
271. ２７１．膜を活性化する酵素が該膜の表面に結合される、請求の範囲２５６記載 の方法。
272. ２７２．膜を活性する酵素が該膜の表面上にゲル層として付着される、請求の範 囲２５６記載の方法。
273. ２７３．膜を活性化する酵素が該膜内に配置される、請求の範囲２５６記載の方 法。
274. ２７４．膜を活性化する酵素が非対称の微孔性膜の孔空間中に含有される、請求 の範囲２５６記載の方法。
275. ２７５．膜を活性化する酵素が該膜の孔壁表面上に吸着される、請求の範囲２５ ６記載の方法。
276. ２７６．膜を活性化する酵素が該膜の孔内の重合体ゲルに捕捉される、請求の範 囲２５６記載の方法。
277. ２７７．膜を活性化する酵素が該膜の孔壁表面に共有結合される、請求の範囲２ ５６記載の方法。
278. ２７８．膜を活性化する酵素が該膜の孔空間中で架橋される、請求の範囲２５６ 記載の方法。
279. ２７９．膜を活性化する酵素が、該膜の孔壁表面上で架橋される、請求の範囲２ ５６記載の方法。
280. ２８０．酵素が精製酵素、細胞抽出物、細胞溶解物、部分精製酵素および全細胞 からなる群から選ばれた形で供給される、請求の範囲２５６記載の方法。
281. ２８１．酵素が微生物に由来する、請求の範囲２５６記載の方法。
282. ２８２．酵素がバチルス、アスペルギルス、ムコール、ストレプトマイセス、ス タフィロコッカス、リゾープス、トリチラキウム、シュードモナスおよびセラチ アからなる群から選ばれた微生物に由来する、請求の範囲２８１記載の方法。
283. ２８３．酵素がアスペルギルス・オリゼに由来するプロテアーゼである、請求の 範囲２８２記載の方法。
284. ２８４．アルペルギルス・オリゼに由来のプロテアーゼがＡｍａｎｏ　Ｉｎｔｅ ｒｎａｔｉｏｎａｌ　ＥｎｚｙｍｅのＰｒｏｚｙｍｅ６である、請求の範囲２８ ３記載の方法。
285. ２８５．前酵素がバチルス・スブチリス、バチルス・アミロリクエファシエンス およびバチルス・リケニホルミスからなる群から選ばれた微生物に由来するプロ テアーゼである、請求の範囲２８２記載の方法。
286. ２８６．酵素が天然に存在する種および遺伝子操作した種からなる群から選ばれ た微生物に由来するセリンプロテアーゼであるサブチリシンである、請求の範囲 ２８１記載の方法。
287. ２８７．酵素が哺乳動物に由来する、請求の範囲２５６記載の方法。
288. ２８８．酵素がブタ肝臓エステアーゼである、請求の範囲２８７記載の方法。
289. ２８９．膜の形が平らなシート、中空繊維およびチューブからなる群から選ばれ た請求の範囲２５６記載の方法。
290. ２９０．膜がスキンを有する微孔性膜である、請求の範囲２５６記載の方法。
291. ２９１．膜が再生セルロース、セルロースエステル、ポリアクリロニトリル、ポ リアクリロニトリル共重合体、ポリウレタン含有共重合体、ポリアリールスルホ ン、ポリアリールエーテルスルホン、ポリアリールスルホン混合物、ポリアリー ルエーテルスルホン混合物、ポリフッ化ビニリデン、ポリテトラフルオロエチレ ン、ポリビニルアルコール、脂肪族ポリアミド、芳香族ポリアミド、ポリイミド 、ポリエーテルイミド、ポリエステル・ポリカーボネート、ポリオレフィン、ポ リベンゾイミダゾールおよびポリベンゾイミダゾロンからなる群から選ばれた材 料から値成される、請求の範囲２５６記載の方法。
292. ２９２．膜が親水性であり、第２の流体が有機性溶液であり、該有機性溶液が加 圧される、請求の範囲２５６記載の方法。
293. ２９３．第１の流体のｐＨが約２から約１０の範囲である、請求の範囲２６１記 載の方法。
294. ２９４．反応が約１５℃から７０℃の温度で行われる、請求の範囲２５６記載の 方法。
295. ２９５．キラル生成物が前記第１の流体よりも前記第２の流体に実質的により可 溶性である、請求の範囲２５６記載の方法。
296. ２９６．前記第１および第２の立体異性体が前記第２の流体よりも前記第１の流 体に実質的により可溶性である、請求の範囲２５６記載の方法。
297. ２９７．ラセミ混合物がエステルの少なくとも２種の立体異性体を含有し、前記 キラル生成物がカルボン酸である、請求の範囲２５６記載の方法。
298. ２９８．前記キラル生成物を前記第２の流体から分離することをさらに包含する 、請求の範囲２５６記載の方法。
299. ２９９．前記第２の立体異性体を前記第１の流体から分離することをさらに包含 する、請求の範囲２５６記載の方法。
300. ３００．前記第１の流体から前記第１の立体異性体を減少させる、請求の範囲２ ５６記載の方法。
301. ３０１．ラセミ混合物を膜に連続的に再循環させる、請求の範囲２５６記載の方 法。
302. ３０２．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記酵素活性化膜から取 り出し、該第２の立体異性体をラセミ化し、そして第１の流体中の該ラセミ化立 体異性体を該酵素活性化膜に再導入することをさらに包含する、請求の範囲２５ ６記載の方法。
303. ３０３．第２の立体異性体を含有する前記第１の流体を前記酵素活性化膜から取 り出し、そして立体化学的純度を実質的に変化させることなく第２の立体異性体 を化学的に変化させて前記生成物にすることをさらに包含する、請求の範囲２５ ６記載の方法。
304. ３０４．塩の添加および温度の低下からなる群から選択した工程により、第１の 流体から第２の立体異性体を取り出ずことをさらに包含する、請求の範囲３０３ 記載の方法。
305. ３０５．前記化学的変化が約２０から８０℃の温度および約１０から約１４のＰ Ｈ範囲で行われる加水分解反応である、請求の範囲３０３記載の方法。
306. ３０６．前記キラル生成物を含有する前記第２の流体を酵素活性化膜から取り出 し、該キラル生成物をラセミ化し該ラセミ化生成物を化学的に変化させて前記第 １および第２の立体異性体の化学的形となし、そして前記第１の流体中の該ラセ ミ化立体異性体を該酵素活性膜に再導入することをさらに包含する、請求の範囲 ２５６記載の方法。
307. ３０７．前記酵素活性化膜を流れ過ぎる前記第１および第２の流体の容積流量が 約２から約１０のファクターだけ異なる、請求の範囲２５６記載の方法。
308. ３０８．酵素を前記第１の流体中の残存する立体異性体から限外濾過、透析、透 析濾過、沈澱およびイオン交換からなる群から選ばれた方法により分離すること をさらに包含する請求の範囲２５６記載の方法。