JPH03504864A - 増進された広域殺菌剤として用いる新規バクテリオシン組成物および微生物感染症の予防並びに治療法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 増進された広域殺菌剤として用いる新規バクテリオシン組成物および微生物感染 症の予防並びに治療法発明の背景 本発明は増進された広域殺菌剤として用いるバクテリオシン組成物および微生物 感染症の予防曲びに治療法に関する。

バクテリオシン、例えばりソスタフィン（ＩｙｓｏｓＬａｐｈｉｎ　）およびナ イシンは細菌の産生ずるタンパクであり、該細菌の系統の種に密接に関連した細 菌の育成を阻害し、かつしばしば死に至らしめる。リソスタフィンは実際に既知 のスタフィロコッカス属（ＳＬａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ）に属するすべての種 を溶菌し、かつ殺すバクテリオシンの一つである。しかし、これは他の属の細菌 に対しては不活性である。公知の文献に捷って育生したスタフィロコッカス　シ ミ二ランス（ＳＬａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　　５ｉｓｕｌａｎｓ）　　（Ｎ　 ＲＲＬ　　Ｂ−２６２８）の培養濾液から単離したりソスタフィンはスタフィロ コッカスの細胞壁中に見られるペプチドグリカンのポリグリシン架橋を開裂する エンドペプチダーゼである。リソスタフィン産生を誘起する条件下で育生された Ｓ、シミ二ランスの培養物はバクテリオシンに対し免疫性であり、一方リソスタ フィンを産生じない条件下で成長させた同じ培養物はバクテリオシンに感受性を もリソスタフィンは天然産のバクテリオシンであり、初めてシンドラ−およびシ ュハート（Ｓｃｈｉｎｄｌｅｒ　＆　５ｃｈｕｌ＋ａｒｄＬ）により単離分泌さ れるものである。Ｓ、スタフィロコッカスによるリソスタフィンの産生は以前に １９６６年１０月１１日付発行のＵＳＰＮｎ３．２７８．３７８に、およびブＤ シーディングズ・オブ・ザ・ナショナルアカデミ−・オブ・サイエンスズ（１’ ｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｒ　ＬｈｃＮａｔｉｏｎａｌ　　Ａｃａｄｅｍｙ　　 ｏｒ　　５ｃｉｅｎｃｅｓ　　）　　、　　１　９　　Ｇ　　４　、５　１　　 ％　ｐｐ、　　　S１４ −４２１に記載されている。リンスタフインを生産する唯一の微生物Ｓ、スタフ ィロリディカス（ＮＲＲＬ　　Ｂ−２６２８＞は最近°スローン（Ｓｌｏａｎ　 ）等によってＳ、シミ二ランスの生物種であると同定された（Ｉｎｔ、Ｊ、Ｓｙ ｓｔｅｍ、　［１ａｃＬｅｒｉｏ１．、　１９８２．３２、ｐｐ、１７０−１７ ４）。名称Ｓ、スタフィロリティカスは承認された細菌名リスト（静ｐｒｏｖｅ ｄ　Ｌｉ５ｔ　ｏｒ　ＢａｃＬｅｒｉａｌ　Ｎａｍｅｓ）には載っていないので 、このリソスタフィン産生微生物は新めてＳ、シミ二ランスとして命名された。

以前、リソスタフィンの作用をペニシリンおよび他の抗生物質により増強し得る ことが示された。これについては、１９８８年４月２８日付出願のブラックバー ン（［１Ｉａｃｋｂｕｒｎ）　　等による係属中の米国特許出願筒１８８．１８ ３号を参照のこと。

しばしばペプチド抗生物質き呼ばれるナイシンはまったく不都合なしにバクテリ オシンと呼ばれている。ナイシンは自然界では細菌ストレプトコッカス　ラクテ ィス（ＳＬｒｅｐＬｏｃｏｃｃｕｓ　１ａｃＬｉｓ）の様々な菌株により産生さ れている。これは、ボツリヌス食中毒の原因として知られるクロストリジウム（ ＣＩｏｓＬｒｉｄｉｕ−）属の菌株を起源とする胞子を含む、グラム陽性バチル スのある種の菌株の芽胞の生長を阻止するのに用いられる食品保存剤である。ナ イシンの諸特性の概説はバースト（Ｉｌｕｒｓｔ　）のアトパンスズ　インアプ ライド　マイクロバイオロジー（＾ｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ　八ｐｐｌｉｅｄ　Ｍ ｉｃｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ　）　、１９８１２７、ｐｐ、８５−１２３にみられ る。この刊行物にはナイシンについて一般的に知られている事柄が記載されてい る。ストレプトコッカス　ラクティスの産生ずるナイシンはナイサプリン（Ｎｉ ｓａｐｌ　ｉｎ　：商標）　（アブリン＆パレット社＜Ａｐｌｉｎ　＆　Ｂａｒ ｒｅｌ　Ｌｔｄ、）　、英国、ドーセット）なる粗製剤として市販されている。

ナイシンはランチオニン含有ペプチド群に属する。この群にはズブチリス（ｓｕ ｂｔｉｌｉｎ＞　、エビデルミン（ｅｐｉｄｅｒｍｉｎ　）　、シンナマイシン （ｃｉｎｎａｍｙｃｉｎ）　、デュラマイシン（ｄｕｒａｍｙｃｉｎ　）　、ア ンコベニン（ａｎｃｏｖａｎｉｎ　）およびｌ’ｅρ５も含まれる。これらのバ クテリオシンペプチド類は夫々異る微生物によって産生される。しかし、Ｂ、ズ ブチリス（Ｄ、５ｕｂＬｉｌｉｓ）のいくつかの培養物から得られるズブチリス およびスタフィロコッカス　エビデルミゾイス＜５Ｌａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ 　　ｅｐｉｄｅｒｓｉｄｉｓ）　　のいくつかの培養物から得られるエビデルミ ンはナイシンと極めて類似する分子構造をもつ（／Ｘ−スト、ｐｐ、８５−８６ ；およびシュネル等、ネイチャー（Ｎａｔｕｒｅ）で有効であると考えられる。

ナイシンはプロセスチーズ、および酪農製品の保存剤として有効に利用されてい る。プロセスチーズ製品でのナイシンの利用は最近の特許の課題となっている。

例えば、ＵＳＰ第４．５８４．１９９号および４，５９７．９７２号参照。ある 種のグラム陽性細菌の芽胞の生長を阻止するだめのナイシンの利用は充分に証明 されている。

これについては、ティラー（Ｔａｙｌｏｒ）のＵＳＰ第５．５８４．１９９号お よび同第４．５９７．９７２号、ツアイ＆サンディンＣＴｓａｉ　＆遺伝子の接 合による転移（Ｃｏｎｊｕｇａｌ　Ｔｒａｎｓｆｅｒ　ｏｒ　Ｎ１５ｉｎ　ｒ’ ｌａｓ＋５ｉｄＧｅｎｅｓ　ｆｒｏｍ　　５ｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　　Ｉａ ｃＬｉｓ　７９６２　ｔｏ　　ＬｅｕｃｏｎｏｓＬｏｃｄｅｘＬｒａｎｉｃｕａ ＋　　１８１　）’、アプライド　アンド　エンバイロンメンタル　マイクロバ イオロジ″″″（八ｐｐｌｉｅｄ　ａｎｄεｎｖｉｒｏｎｍｏｎｔａｌ　Ｍｉｃ ｒｏ−ｂｉｏｌｏｇｙ）、１９８７、ｐ、　３５２　；“天然保存剤（Ａ　Ｎａ ｔｕｒａｌ　Ｐｒｅｓｅｒ−ｖａｔｉｖｅ）”、フード　エンジニアリング　イ ンタナショナル（Ｆｏｏｄ［ｉｎ３ｉｎｅｅｒｉｎｇ　１ｎＬｅｒｎａＬｉｏｎ ａｌ）、ｌ９８７、ｐｐ、３７−３８；“フォーカス　オン　ナイシン（Ｆｏｃ ｕｓ　ｏｎ　Ｎ１５ｉｎ）”、フード　マニュファクチ＋　　（Ｆｏｏｄ　Ｍａ ｎｕｆａｃｔｕｒｅ）、１９８７、ρ、６３を参照のこと。

ナイシンはしばしば自然にミルクおよびチーズ中に低濃度で存在することが見出 されている。また、ヒトに対してまったく非毒性かつ非アレルギー性であると考 えられている。ナイシンは最近、ＦＤＡにより殺菌チーズスプレッド、殺菌プロ セスチーズスプレッドおよび殺菌チーズスプレッドまたは殺菌プロセスチーズス プレッドと果物、野菜または肉との組合せなどの直接食品成分として安全である ことが認められた。ナイシンはタンパクであるから、摂取食物中のあらゆる残基 は消化酵素により即座に分解される。

食品保存剤きしてのナイシンの一般的な採用は、バクテリオシンとしてのナイシ ンの活性が該ナイシンの起源である細菌種に密接に関連したグラム陽性細菌のみ に制限されるという教示によって限定されてしまう。その上、ナイシンはダラム 陰性バクテリアに対して殺菌活性をもつことはこれまで明らかにされていなかっ た。様々なグラム陽性およびダラム陰性菌のために食品が汚染されかつ腐敗する ので、ナイシンが食品保存剤として限られた菌種のみに採用されることは驚くに 値しない。更に、これまでのナイシンのバクテリオシンとしての限られた活性の 故に、その食品分野以外での用途は示されていなかった。

最近になって、ナイシンと非殺菌剤、例えばキレート剤および界面活性剤とを含 む組成物が広範囲のダラム陰性菌種に対し殺菌活性を有し、かつ広範囲のグラム 陽性細菌種に対し高い活性をもつことが立証された。例えば、この増強された殺 菌剤に感受性であることが示されたグラム陽性細菌はサルモネラ　ティフィミリ 旦＜Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ　　ｔｙｐｈｉａ＋ｉｒｉｕｍ）、大腸菌（Ｉｉｓｃ ｌ＋ｅｒｉｃｈｉａ　　ｃｏｌｉ）、ｂａｃｉｌｌｕｓ　　ａｃＬｉｎｏｍｙｃ ｅＬｅｓｃｏｗ＋１Ｌａｎｓ）である。この増強された殺菌びコリネ型細菌であ る。これについては係属中のブラックバーン（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ）等の、米国 特許出願Ｎｎ２０９．８６１　　（１９８８年６月２２日出願）のＣＩＰ出願で ある、“増強された広域殺菌剤として用いるナイシン組成物”と題する米国特許 出願を参照のこと。

この文献を本発明の参考文献とする。

発明の概要 リソスタフィンおよびナイシンなどのバクテリオシンの活性がこれら２種のバク テリオシンを組合せることにより著しく増進され、しかもその活性の全体として の有効範囲並びに速効性が増大し得ることを今や見出した。リソスタフィンとナ イシンとを含むこの新規なバクテリオシン組成物の特性は、またナイシンおよび リソスタフィン活性を高めかつその有効範囲を拡大するキレート剤および／また は界面活性剤の添加によって更に高められる。

本発明の新規なバクテリオシン組成物はすべてリソスタフィンとナイシンとを含 む（以下″組成物９という）、このバクテリオシン組成物は適当な担体、例えば 溶媒または適当な液体、固体またはコロイド状マトリックスなどに溶解または懸 濁すると、増進された広域殺菌剤（以下“殺菌剤“という）となる、この新規な 殺菌剤はりソスタフィンをス　フィロコツカスに対する殺菌剤とし有効であるの に十分な量で含み、かつナイシンはスタフィロコンカス属に対するリソスタフィ ンの殺菌作用を増進するのに十分な量で存在する。他の組成物はりソスタフィン 、ナイシンおよびキレート剤を含み、また界面活性剤を含んでいてもよい、この 組成物を担体中に配合すると新規な殺菌剤が得られ、ここでリソスタフィンとナ イシンとは上記リソスタフィン／ナイシン組成物におけると同様の濃度範囲で存 在し、またキレート剤はグラム陽性およびグラム陰性細菌両者に対するナイシン の殺菌作用を増強するのに十分な量で存在する。更に別の組成物はりソスタフィ ンとナイシンと界面活性剤とを含む、この組成物を担体に配合すると新規な殺菌 剤が得られ、ここで該界面活性剤はナイシンおよびリンスタフインのグラム陽性 細菌に対する殺菌作用を強めるのに十分な量で存在する。

これらの組成物は、直接または担体と共に、細菌による汚染並びに感染の治療お よび予防のために使用され、その際該組成物を適当な溶媒に溶解もしくは適当な マトリックスに懸濁して、感染領域に適用するか、あるいは該組成物を別の組成 物に加えて感染を摸滅かつ予防する。

多くの化学的消毒剤は食品および多くの医学的用途において使用するには余りに 腐食性が強いか、さもなくば毒性が強すぎ、大部分の抗生物質は余りに作用が遅 くて消毒剤として使用できず、かつこのような用途に伴う可能性のある後天的抗 生物質耐性の危険性があるために食品に添加することは承認されない０本発明の 新規殺菌剤は非腐食性かつ無毒であり食品並びに開放側に対して用いるのに適し ており、抗生物質耐性菌に対して有効であり、しかも分裂中のもしくは分裂して いない細菌に対して速効性であって、消毒剤としても有用である。

本発明の組成物または殺菌剤は、感染症の治療、制用包帯、外科用インブラント 材用のコーティングまたは軟こうに配分でき並びに他の薬剤処理、例えば鼻点滴 注入、口内洗浄、消毒用ブラシ、ハンカチ、ローシランなどにも配合できる。こ の殺菌剤は医療器具などの洗浄並びに腐食性の、さもなくば有毒の残留物を与え る恐れのある故に化学的殺菌剤の使用がはばかれる、かつ環境の消毒が望まれる ような種々の状況において使用できる。この広域殺菌剤は、特に食品関連用途、 例えば肉、特に鳥肉、卵、チーズ、および魚もしくは食品包装並びに取扱い器具 の処理、並びに原料、加工食品および飲料の病原体およびその他の微生物である 腐敗菌による汚染の抑制および予防に適している。

多くの広域殺菌剤（これらは複雑な有機物の存在によって弱化する）の活性とは 違って、本発明のバクテリオシン組成物および殺菌剤はミルクまたは血清などの 有機物の存在下でも有効である。

ｌユ坐韮員呈翌ユ 、　本発明の組成物はりソスタフィンとナイシン；リソスタフィンとナイシンと キレート剤；またはりソスタフィンと、ナイシンと、キレート剤と界面活性剤と を含む、増進された広域殺菌剤を得るためには、該組成物を適当な溶媒に熔解ま たは適当なマトリックスに懸濁する。適当な担体、例えば水性溶媒またはバッフ ァーに溶解もしくは適当なマトリックスに懸濁された、リソスタフィン、ナイシ ン、キレート剤および／または界面活性剤を含む組成物は、グラム陰性およびダ ラム陰性細菌両者に対して広域かつ速効性殺菌活性をもつと思われる。

好ましくは、本発明の組成物は液状担体に溶解するか、あるいは液状、コロイド 状またはポリマーマトリックス中に＠濁され、この際リソスタフィンはこの殺菌 剤中に０．１〜１００μｇ／ｍ＋の範囲で存在し、かつ０．１〜３００μｇ　／ 　ｍ　１の範囲でバタテリオシンであるナイシンを存在せしめることによりリソ スタフィンの効果は増強され、得られる殺菌剤はりソスタフィンを単独で用いた 場合よりも一層ス　フ　ロコーカスに対する殺菌作用が高い。

このような新規殺菌剤の総体的な殺菌活性は、該殺菌剤中のナイシンが、ブラン クバーン（Ｂｌａｃｋｂｕｒｎ　）等の１増進された広域殺菌剤として用いるナ イシン組成物（Ｎｉｓｉｎ　Ｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｕｓｅａｓ　 Ｅｎｈａｎｃｅｄ、　Ｂｒｏａｄ　Ｒａｎｇｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｃｉｄｅｓ）　 ”と題する係属中の特許出願で教示されているように、キレート剤により増強さ れた場合には更に一層広い範囲のグラム陰性およびグラム陽性菌種両者に対して より高い効果をもたらすものと考えられる。リソスタフィン、ナイシンおよびキ レート剤の組合せは、上記ブランクバーン等の出願に教示されているように、界 面活性剤の添加によって広域殺菌活性を獲得するはずである。

例えば、ナイシンはＥＤＴＡなどのキレート剤を０．１〜２０．０−Ｈの範囲で 添加することにより、広範囲のグラム陰性細菌に対し活性化され、かつ増強され る。ＥＤＴＡの存在下で、ナイシンはグラム陰性微生物に対し抗菌活性をもち、 かつそのグラム陰性細菌に対する活性は増強され、また広いｐＨ範囲に亘り広範 囲のグラム陰性細菌に対して活性となる。更に、殺菌剤中に０．０１〜１．０％ の範囲での界面活性剤の存在はナイシンのグラム陰性細菌に対する有効性を改善 する。適当な非イオン性界面活性剤はポリオキシアルキルフェノール類（例えば 、ＴｒｉｔｏｎＸ　−１００）　、ポリオキシアルキルソルビタン類（例えば、 Ｔｗｅｅｎｓ）およびグリセリド類（例えば、モノラウリンおよびジオレエート 類）を含むが、これらに制限されない。適当なイオン性界面活性剤は乳化剤、脂 肪酸、四級化合物並びにアニオン性界面活性剤（例えば、ドデシル硫酸ナトリウ ム）および両性界面活性剤、例えばコカミドプロピルベタインなどであるが、こ れらに制限されない。

本発明の殺菌剤の適当な担体は、一般に知られている水性バッファーを含むがこ れに制限されない０本発明の新規組成物の懸濁用の適当なマトリックスは有機溶 媒、コロイド懸濁液およびこの殺菌剤と相容性のポリマーを含むが、これらに制 限されない。

本発明で使用するりソスタフィンは５ニー乞ユ」−Σ７７、を液体培地中で育生 する醗酵法で作ることができる。このような醗酵技術は米国特許第３，２７８， ３７８号およびブロシーディンクズオブザナシッナルアカデミーオブサイエンス ズ（Ｐｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓ　ｏｆ　ｔｈｅＮａｔｉｏｎａｌ　Ａｃａｄｅｓ＋ ｙ　ｏｆ　５ｃｉｅｎｃｅｓ　）　−１９６４％　５１　ｓ　ｐｐ、　　４１４ −４２１に記載されている。また、醗酵技術によるリソスタフィンの生産に関す る種々の改良がなされており、例えば米国特許第３．３９８，０５６号および同 第３．５９４，２８４号に記載されている。後の２つの文献は培地およびインキ ュベージ５ン技術の改良を記載しており、これにより醗酵によるリソスタフィン の産生が促進され、かつ改善され得る。

更に、リソスタフィンは組換え微生物、例えば大腸菌、乙天上ス　ズブチリスお よびバチルススフエリカス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ　＄ｇ視）属の菌株によって生成 し得る。リソスタフィンに対する遺子をコード化する組換えプラスミドにより形 質転換された微生物からりソスタフィンを得る方法は米国特許出願第０３４．４ ６４号に十分に記載されている（この出願は米国特許出願第８５２．４０７号の ＣＩＰ出願である）。これら２つの特許出願を本発明の参考文献とする。好まし くは、リソスタフィンは、リソスタフィンの合成を行う組換えプラスミドを含む ロ、スフエリカス株００から得られる。これは、スタフィロコッカスに基く免疫 原性不純物を実質土倉まないリソスタフィンの高濃度での生産をもたらし、かつ リンスタフインの精製を容易にする。というのは、リソスタフィンは直接成育培 地中に蓄積されるからである。プラスミドｐＨｃ１６−ＩＬまたはｐＲＯＪ６（ ｉ４９−ＩＬを含むＢ、スフエリカス形質転換体はこの目的にとって特に適して いることがわかったが、他の菌株もリソスタフィン源として有用である。これら のプラスミドについては、上記の係属中の特許出願に十分に記載されている。

指数増殖期にＳ、シミコランスによって産生されたりソスタフィンは、先ず不活 性な先駆体として分泌され、静止期に産生されるプロテアーゼにより細胞外で処 理されて成熟活性バタテリオシンとなる。リソスタフィンの天然生産とは逆に、 米国特許出願第０３４．４６４号に記載されたようなり、スフエリカスの組換え 株によって産生されるリソスタフィンは指数増殖期に成熟活性タンパクとして細 胞外蓄積される。

ナイシンはアブリン＆パレット社（Ａｐｌｉｎ　＆口ａｒｒｅｔＬ、　ＬＬｄ、 、ド−セット、イングランド）からナイサブリン（Ｎｉｓａｐｌｉｎ　：商標） なる粗製々剤として市場から入手できる。また、ナイシンは旦しブトコγカス　 ラクティス（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　Ｉａｃｔｉｓ）の培養物から天然産 ナインンとして単離し、次いで公知の方法でナイシンを濃縮することによって得 ることも＝Ｊ能である。ストレプトコツカス属の他の菌株を用いてナイシンを得 る方法も報告されている。

例えば、ゴンザレツ（Ｇｏｎｚａｌｅｚ）等の１９８７年１２月２９日付発行の 米国特許第４，７１６，１１５号参照。組換えＤＮＡによりナイシンを生産する ことも可能であるはずである。ナイシンはランチオニン含有バタテリオシン群の 一員である。構造上の類似性の故に、他のランチオニン含有バタテリオシンも同 様に、リソスタフィンとの組合せにおいてナイシンと同様に有効であると考えら れる。

以下の非限定的実施例は本発明を更に説明し、かつ本発明の新規な増強された広 域殺菌剤の有効性を実証する。ナイシン活性の程度並びに範囲は、またキレート 剤によって増進され、かつリソスタフィン、ナイシンおよびキレート剤からなる 組成物もリソスタフィンおよびナイシンのみの組成物と比較して増強された殺菌 活性をもつ新規殺菌剤を与えよう。

・　−以下の実施例におけるすべてのテストは３７℃で行った０本発明の増進さ れた広域殺菌剤の有効性は、この殺菌剤で処理した後生存している細菌の割合で 表した殺菌活性を測定することにより決定した。一般に、懸濁液１　ｍｌ当たり 標的菌株１０７細胞を本発明の新規殺菌剤と共に特定の時間インキュベートした 後、細菌を２分間遠心することにより集めた。細菌ベレットをレスキューパフフ ァー（ここではファージ（Ｐｈａｇ＠）バッファーと呼ぶ（５０ｍＭ　Ｔｒｉｓ 　−ＨＣＩバッファー、ｐＨ７，８，１ｍＭ　Ｍｇ５Ｏａ　、４ｓＭ　ＣａＣ］ ｘ　、０．１　Ｍ　ＮａＣ１および０．１％ゼラチン〕）で殺菌剤がなくなるま で洗浄し、ファージバッファーに再懸濁し、徐々に希釈し、懸濁バクテリア１０ ０μｌを栄養寒天平板上に展開した。生存バクテリアを、３７℃にて２４〜４８ 時間インキュベートした後にコロニー形成単位（ＣＦ　Ｕ）を数えることによっ て測定した。

本発明の有効な殺菌剤は細菌の初期生菌数の０．１％未満が生存できるような殺 菌剤である。

実施例１：Ｉソスタフィンとナイシン スタフィロコ７力ス　オーレウス細胞をミルクに懸濁し、様々な濃度のりソスタ フィン、ナイシンまたはりソスタフィンとナイシンとの組合せのミルク液と共に ３７℃にて２時間インキュベートした。これら殺菌剤の殺菌効率は上述のように して生存細菌の割合を測定することにより評価した。この実験の結果を第１表に 示す。

第１表ニス　フィロコンカス　オーレウスに対するリソスタフィン、ナイシンお よびその組合せの殺菌活性 ％生存率　２時間１ ａ本初期生菌数：　５　Ｘ　１０’　　ｃｆｕ／ｓｌナイシンのみを含むミルク 溶液は殆どスタフィロコッカスに対する殺菌活性をもたない、リソスタフィンの みのミルク液は多エオーレウスに対して殺菌性であり、かつ１．０μｇ／ｓ＋１ の濃度において主線膜数において、対数表示で５以上の減少をもたらし得る。リ ソスタフィンをナイシンのミルク液と結合した場合、新規な殺菌剤となる組成物 が得られ、かくしてこの殺菌剤の殺菌活性は各バクテリオシン単独の場合よりも 有意かつ驚く程優れている。

また、これらの単なる相加的効果よりも高い活性をもつ。このことは、第１表に 示したりソスタフィンの限界濃度（０，１μｇ／請１）において最もよく示され ている。かくして、リソスタフィンの用途がその利用し得る活性によって制限さ れた場合には、適当な担体中、ここではミルク中のナイシンとリソスタフィンと を含むバクテリオシン組成物が増強された広域殺菌剤を与えるものと期待できる 。

実施例２：リソスタフイン＋ナイシン＋ＥＤＴＡ＋界面活性剤ｉＪ２表のデータ は、リソスタフィン、ナイシン、ＥＤＴＡおよびモノグリセリド界面活性剤を含 む組成物の、ミルク（＊雑な食品媒体）中でのＳ、オーレウスおよびＳ、アガラ クテイアエに対する新規な殺菌能力を示す。以前に、低濃度のＥＤＴＡはナイシ ンの活性を増大するが、高濃度のＥＤＴＡはナイシンの活性を阻害することが示 された。これについては、ブラックバーン等の係属中の特許出願参照。ミルク中 では、高濃度のＥＤＴＡは本発明のバクテリオシン組成物の殺菌活性を余り阻害 しない。

イン、ナイシン、ＥＤ’ｒＡおよびモノグリセリドの殺菌活性Ｎ：ナイシンμｇ ／ｓｅｌ；Ｌ：リソスタフインμｇ／ｍｌ；ＭＬ：モノラウリン Ｅ　：　５０＠Ｍ　ＥＤＴＡ含有 ａ：杢エオーレウス初期生菌数１．ｌＸ１０’細胞／−１゜ｂ：！ｉｉ、アガラ クティアエ初期生菌数：６．６Ｘ１０’ｌｌ胞／−１゜Ｃ：バクテリオシンまた はモノグリセリドを含まない。

１、事件の表示　　　平成２年特許願第５０４７９８号（ＰＣＴ／ＵＳ　９０１ ０１０５３） ３、補正をする者 事件との関係　　出願人 ４、代理人 ５、補正命令の日付　　自　　　発 国際調査報告 国際調査報告

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １．リンスタフィンとランチオニン含有バクテリオシンとを含む組成物。 ２．該ランチオニン含有バクテリオシンがナイシン、ズブチリン、５エピデルミ ン、シソナマイシン、デコラマイシン、アンコベニンおよびＰｅｐ５からなる群 から選ばれる請求の範囲第１項記載の組成物。 ３．更にキレート剤を含む請求の範囲第２項記載の組成物。 ４．界面活性剤を含む請求の範囲第３項記載の組成物。 １０５．該キレート剤がアルキルジアミンテトラ酢酸ＣａＥＤＴＡ、Ｎａ２Ｃａ ＥＤＴＡ、ＥＧＴＡおよびクエン酸塩からなる群から選ばれる請求の範囲第３項 記載の組成物。 ６．該アルキルジアミンテトラ酢酸がＥＤＴＡである請求の範囲第５項記載の組 成物。 １５７．該界面活性剤がトライトン、ツイーン、グリセリド・乳化剤、脂肪酸、 四級化合物、両性およびアニオン性界面活性剤からなる群から選ばれる請求の範 囲第４項記載の組成物。 ８．担体、リソスタフィンおよびランチオニン含有バクテリオシンを含む増進さ れた広域殺菌剤。 ２０９．該ランチオニン含有バクテリオシンがナイシン、ズブチリン、エピデル ミン、シンナマイシン、デコラマイシン、アンコベニンおよびＰｅｐ５からなる 群から選ばれる請求の範囲第８項記載の増進された広域殺菌剤。 １０．キレート剤を含む請求の範囲第９項記載の増進された広域殺２５菌剤。 １１．界面活性剤を含む請求の範囲第９項記載の増進された広域殺菌剤。 １２．該リンスタフィンおよび該ランチオニン含有バクテリオシンが、殺菌剤が スタフィロコッカス属およびグラム陽性細菌に対して高い活性をもつに十分な量 で存在する請求の範囲第８項記載の増進された広域殺菌剤。 １３．該リンスタフィン、該ランチオニン含有バクテリオシンおよび該キレート 剤が、該殺菌剤がスタフィロコッカス属に対し、かつグラム陰性およびグラム陽 性細菌からなる群から選はれる少なくとも一種の細菌に対して高い活性をもつに 十分な量で存在する請求の範囲第１０項記載の増進された広域殺菌剤。 １４．該界面活性剤が、該殺菌剤がスタフィロコッカス属、およびグラム陰性お よびグラム陽性細菌からなる群から選ばれる少なくとも１種に対して高い活性を もつに十分な量で存在する請求の範囲第１１項記載の増進された広域殺菌剤。 １５．該キレート剤がアルキルジアミンテトラ酢酸、ＥＧＴＡおよびクエン酸塩 からなる群から遊ばれる請求の範囲第１０項記載の増進された広域殺菌剤。 １６．該アルキルジアミンテトラ酢酸がＥＤＴＡである請求の範囲第１５項記載 の増進された広域殺菌剤。 １７．該界面活性剤がトライトン、ツイーン、グリセリド、脂肪酸、乳化剤、四 級化合物、両性およびアニオン性界面活性剤からなる群から選ばれる請求の範囲 第１１項記載の増進された広域殺菌剤。 １８．該グラム陰性標的細菌がサルモネラティフィムリウム（Ｓａｌｍｏｎｅｌ ｌａ　ｔｙｐｈｉｍｕｒｉｕｍ）、大腸菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａ　ｃｏｌｉ ）、クレブシエラニューモニアエ（Ｋｌｅｂｓｉｅｌｌａ　ｐｎｅｕｍｏｎｉａ ｅ）、シュードモナスアエルギノーザ（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ　ａｅｒｕｇｉ ｎｏｓａ）、バクテリオイデスジンジバリス（Ｂａｃｔｅｒｉｏｉｄｅｓ　ｇｉ ｎｇｉｖａｌｉｓ）およびアクチノバチルスアクチノマイセテスコミタンス（Ａ ｃｔｉｎｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｌｉｎｏｍｙｃｅｌｃｓｃｏｍｉｌａｎｓ） からなる群から選ばれる請求の範囲第１３項記載の増進された広域殺菌剤。 １９．害グラム陽性標的細菌が芽胞形成バチルス、スタフィロコッカスオーレウ ス（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃｕｓ　ａｕｒｅｕｓ）、ストレプトコッカスミュ ータンス（Ｓｔｒｅｐｌｏｃｏｃｃｕｓ　ｍｕｌａｎｓ）、リステリアモノサイ トゲネス（Ｌｉｓｌｅｒｉａ　ｍｏｎｏｃｙｌｏｇｅｎｅｓ）、ストレプコッカ スアガラクティアエ（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ　ａｇａｌａｃｌｉａｅ）お よびコリネ型細菌からなる群から選ばれる請求の範囲第１３項記載の増進された 広域殺菌剤。 ２０．リンスタフィンの該有効濃度が約０．１〜１００μｇ／ｍｌであり、かつ ナイシンの濃度が約０．１〜３００μｇ／ｍｌである請求の範囲第９項記載の増 進された広域殺菌剤。 ２１．該リソスタフィンの濃度が約０．１〜１００μｇ／ｍ１であり、該ランチ オニン含有バクテリオシンの濃度が約０．１〜３００μｇ／ｍｌであり、かつ該 キレート剤の濃度が約０．１ｍＭ〜２０ｍＭである請求の範囲第１０項記載の増 進された広域殺菌剤。 ２２．該界面活性剤の濃度が最終容積の約０．０１％〜１．０％である請求の範 囲第１１項記載の増進された広域殺菌剤。