JPH03505156A - 血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地 - Google Patents

血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地

Info

Publication number
JPH03505156A
JPH03505156A JP1504957A JP50495789A JPH03505156A JP H03505156 A JPH03505156 A JP H03505156A JP 1504957 A JP1504957 A JP 1504957A JP 50495789 A JP50495789 A JP 50495789A JP H03505156 A JPH03505156 A JP H03505156A
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
plasma
blood
platelet lysate
cells
platelet
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
JP1504957A
Other languages
English (en)
Inventor
ホルムクビスト，オロフ
ウェスターマーク，ベングト
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Ellco Food AB
Original Assignee
Ellco Food AB
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ellco Food AB filed Critical Ellco Food AB
Publication of JPH03505156A publication Critical patent/JPH03505156A/ja
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
    • C12N5/10—Cells modified by introduction of foreign genetic material
    • C12N5/12—Fused cells, e.g. hybridomas
    • C12N5/16—Animal cells
    • C12N5/163—Animal cells one of the fusion partners being a B or a T lymphocyte
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/70—Undefined extracts
    • C12N2500/80—Undefined extracts from animals
    • C12N2500/84—Undefined extracts from animals from mammals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2500/00—Specific components of cell culture medium
    • C12N2500/90—Serum-free medium, which may still contain naturally-sourced components

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地 技術分野 本発明は、動物全血液からの血漿から得られる血小板溶解産物、血小板溶解産物 の調製法および血小板溶解産物を含む細胞培養培地に関する。
背景技術 国際的視点における屠殺産業の問題は、特に、屠殺血液の継続的な有益な市場を 見出すことである。多くの国で、血液は、血液の加工処理や用途の可能性の欠如 のために無駄な材料として廃棄さえされている０屠殺血液が利用されている場合 には、主に食料品や動物飼料への混ぜ物として用いられている。血液のヘモグロ ビン部分は、黒ソーセージなどの種々の血液製品に用いることができ、血漿部分 はシックナーやタンパク質濃厚冨化剤などとして用いることができる。それでも 、全ての屠殺血液について常に市場可能性があるわけではなく、したがって、新 たな用途の分野を見出すことは重要である。
バイオテクノロジーにおいては、生産および研究のための哺乳動物細胞や他の動 物細胞の培養がますます増加してくるに伴って、増殖培地の主要組成物の一つで ある牛胎児血清（ＦＣＳ）が制限因子になってくるというさらなる問題がある。
牛胎児血清（ＦＣＳ）は、屠殺された雌牛からの仔牛脂児から抽出される。また 、他の欠点もある。すなわち、ＦＣＳは高価であり、特定の細胞系を培養する場 合の品質がバッチ毎に著しく異なる。したがって、ＦＣＳに代わるものを開発す るために多大の努力が払われている。
本発明者らは、驚いたことに、血液の血漿部分の血小板画分が細胞培養のための 優れた作用物であって、特にハイブリドーマ細胞を培養する場合に、ＦＣＳの全 部または一部を置き換えることができることを見出した。
ＦＣＳの代替物を見出すための多様な試みがなされていることが知られている。
米国特許明細書第４．３５０，６８７号における目的は、腫瘍細胞の増殖を促進 する単一の簡単な明確に定義できる成分を生産することである。原材料はヒト血 液からの血小板であるが、これは旧式であフて臨床的使用に適さなくなってきた 。
この特許明細書には、また、血小板からの抽出物が３Ｔ３細胞、５Ｖ３Ｔ３！Ｉ Ｎ胞および形質転換させたマウス線維芽細胞の増殖を促進し得ることが述べられ ている。ＧｏｓｐａｄｏｒｏｗｉｔｚおよびＭｏｒａｎ　（Ａｎｎ、　Ｒｅｖ。
Ｂｉｏｃｈｅｗ、　４５　（１９７６）　５４０）は、３Ｔ３ｗ１胞のための細 胞分裂因子（ｍｉｔｏｇｅｎｉｃ　ｆａｃｔｏｒ）が血小板に存在しているであ ろうことを指摘した。
血小板抽出物は、また、ブタからの最初の培養（「無血清培地は培養されたブタ 顆粒膜細胞の増殖および分化を促進する（Ｓｅｒｕｍ−ｆｒｅｅ　＊ｅｄｉｕｓ ｗ　ｅｎｈａｎｃｅｓｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ 　ｏｆ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｐｉｇｇｒａｎｕｌｏｓａ　ｃｅｌｌｓ）Ｊ　、　 Ｂａｒａｎｏ　Ｊ　Ｌ　Ｓ、　Ｈａｍｍｏｎｄ　Ｊ　Ｍ、Ｍｉｌｔｏｎ　Ｓ：　 Ｅｎｄｏｃｒｉｎｏｌｏｇｙ　１１６　（１）、１９８５．５ｌ−５８）および 「皮膚体外移植Ｍ織（ｓｋｉｎ　ｅｘｐｌａｎｔｓ）　Ｊ　　（ｒ血小板因子に よるブタ皮膚体外移植組織からの表皮細胞成長の支持および刺激（Ｓｕｐｐｏｒ ｔ　ａｎｄ　ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆｅｐｉｄｅｒｍａｌ　ｃｅｌｌ　ｏ ｕｔｇｒｏｗｔｈ　ｆｒｏｗ＋　ｐｏｒｃｉｎｅｓ　５ｋｉｎｅｘｐｌａｎｔｓ 　ｂｙ　ｐｌａｔｅｌｅｔ　ｆａｃｔｏｒｓ）」、Ｈｅｂｄａ　ＰＡ。
Ａｌ５ｔａｄｔ　ＳＰ％）ｌｉｌｅｍａｎ讐Ｔ、　Ｅａｇｌｓｔｅｉｎ　Ｗ）ｌ ：　Ｂｒ、　Ｊ。
Ｄｅｒｍａｔｏｌ、　１９８６　Ｎｏｖ、、１１５（５）、５２９−４１）を刺 激することが知られている。
古典的理論によると、血小板の役割は、偏部で凝集して、栓を形成して、それら の成長因子および他のメゾイエイタの内容物を空にして、結合組織の成長を刺激 しおよび移動を刺激して傷を治癒して、血管新生を刺激するという。
さらなる試みが欧州特許明細書第０．１０４，８３１号に記載されている。ここ では、出発材料は屠殺場では通常廃棄物となる材料、すなわち「流血、半固体ゴ ム様集合体を合わせた組織汁」である。この生産物の有効性もまた、古典的理論 に従って応答すると期待され得る細胞、すなわち、ＷＩ−３８（ヒト線維芽細胞 ）、およびアフリカザル腎臓（形質転換された細胞）からの細胞系ＶｅｒＯにつ いて示されている。
これらの以前の試みは、全て、形質転換された細胞または血小板が古典的理論に 従って作用し得る細胞のいずれかに間するものである。
血小板が古典的理論によって示されたもの以外の役割を果たし得るという考えが 、最近示唆された（Ｐａｇｅ、Ｃ，Ｐ、　ＴＩＰＳ　９　（１９８８）　６６− ７１）。しかし、この報告のどこにも血小板またはそれらの内容物が免疫系から 得られた細胞の増殖および分裂を刺激することは示されていない。
発明の開示 本発明は、血小板抽出物が免疫系からの細胞、すなわちもとの二つの成分である Ｂ−細胞および白血病細胞がともに免疫系に由来するものであるハイブリドーマ 細胞、の増殖および分裂を刺激するという、意外な驚くべき結果に基づいている 。さらに、本発明による産生物中で培養されたハイブリドーマ細胞中でのモノク ローナル抗体の生産はハイブリドーマ細胞をＦＣ５中で培養する場合に得られる ものに充分に匹敵するかもしれないことが示されている。最後に、本発明は、血 小板産生物は多くの形質転換細胞においてはよく機能しないことを示し、このこ とは示される効果は形質転換細胞に対する血小板の一般的増殖促進効果ではあり 得ないことを示している。
よく知られたＦＣ５代替物は、種々の生長因子、および多くは例えばトランスフ ェリンおよびインスリンなど、を含む無血清合成培地である。ＦＣＳが用いられ る場合、添加量は通常１〜２０％であり、多くの場合は１０％（容量％）である 、残りの成分は、塩およびアミノ酸を含む栄養培地である。産業的規模では、無 血清培地が経済的理由からしばしば好まれる。
本発明の一つの目的は、成長した動物および幼若動物の動物全血液からの血漿か ら得られ、細胞培養培地中のＦＣＳの全部または一部の代替となり得る、濃縮血 小板溶解産物を提供することである。
本発明のさらなる目的は、該血小板溶解産物を調製する方法を提供することであ る。
本発明のさらなる目的は、該血小板溶解産物の調製法を提供することである。
本発明の他のさらなる目的は、該血小板溶解産物、従来の栄養培地および必要に 応じてＦＣＳを含む、細胞培養培地を提供することである。
本発明によると、屠殺動物からの全血液からの血漿から調製されることおよび主 に溶解血小板から成ることを特徴とする、細胞培養に用いる血小板溶解産物が提 供される。
さらに、凝固を防ぐためにクエン酸塩を加えた動物全血液からの血漿に由来し、 血漿は食品品質で約１〜３の溶血値を有する血小板溶解産物の調製法であって、 以下の特徴を有する、血小板溶解産物調製法を提供する。
ａ）該血漿を、血小板に冨むペーストを得るために遠心分離し、 ｂ）含まれる血小板の溶解および残留成分の凝固のために、もとの血漿中のクエ ン酸塩含量に間して等モル量のＣａ”を該ペーストに加えて、実質的に溶解血小 板からなる溶解物の清澄な明赤色液体および凝固物を得て、 Ｃ）該清澄な明赤色液体を無菌濾過して、ざらにｄ）このようにして得られる血 小板溶解産物を集める。
さらに、以下のものを含むことを特徴とする細胞培養培地、およびハイブリドー マ細胞の培養のためのその使用が提供される。
ａ）屠殺動物からの全血液からの血漿から調製され、主として溶解した血小板か ら成る、血小板溶解産物、ｂ）従来の栄養基質、および Ｃ）必要に応じて、子牛脂児血清。
本発明の対象となる動物としては、原則的には、必要量の血小板が無理なく集め られ得るものであれば、幼若のあるいは成長した全ての動物であり得る。好まし くは、経済的に有利であることから成長した動物からの血液が主に用いられる。
適当な動物の例としては、ウシ、ブタ、ヒツジまたはニワトリなどの屠殺動物お よび他の農場動物があげられる。好ましくは、ウシまたはブタ、最も有利にはウ シ、の全血液が用いられる。
本発明の細胞培養培地は、今日モノクローナル抗体の生産に用いられるハ・イブ リドーマ細胞の培養に特に有用であるようである。本発明の細胞培１ｉｔｓ地は 、全部または部分的に子牛脂児血清の代わりに用いることができる。
以下に、本発明の好ましい態様が詳細に記述される。
本発明の血小板溶解産物を調製するために、屠殺ウシまたはブタなどの動物から の全血液を用いる。動物は、健康であって、スウェーデンの規則およびＥＥＣお よび米国の規定に従って、食用目的の動物の獣医学的検査に定められた要求を満 たすべきである。
放血の後、血液を、直ちに、好ましくは１分間以内で約＋４℃に、冷却する。凝 固を防ぐためにクエン酸ナトリウムなどのクエン酸塩を加える。必要に応じて、 次いで、さらなる処理を行うまで冷却タンクに血液を貯蔵する。
次に、血液を細菌学的におよび官能面の双方から検査する。血液は、ナショナル ・フード・アトミニストレージョン（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｆｏｏｄ　Ａｄｍｉｎ ｉｓｔｒａｔｉｏｎ）による食用製品のための基準を満足することが好ましく、 ざらに、血液は、ＥＥＣおよび米国内の対応する規則を満足すべきである。経験 から、本発明者らは、血液中の細菌含量の適当な上限は以下の表１に示す通りで あることを見出した。官能的分析を次のようにして行う。
血液を嗅いで、血液が受容されるかどうかを経験によって決定する。
細菌学的試料を、好ましくは、全血液および分別した血漿の双方から採る。
裏１ 細菌学的許容限界 細菌数／１ 好気的細菌数　　　　　　　　　　＜　ｔｏｏ、ｏｏ。
（トリプトングルコース 抽出寒天、３０℃３日間） 熱安定性大腸菌　　　　　　　　　＜３００（ＶＧＲ−寒天、４４℃１日間） 亜テルル酸塩耐性腸球菌　　　　　＜３，０００（スランツーバートレイ （Ｓｌａｎｅｔｚ−Ｂａｒｔｌｅｙ）寒天、３７℃２日間） ＤＮＡ−陽性ブドウ球菌　　　　　　　＜３００（Ｂａｉｒｄ−Ｐａｒｋｅｒ寒 天、 ３７℃２日間） サルモネラ苗の出現　　　　　　　陰性（濃厚富化ブロス−５Ｓ寒天） 検査および分析の結果に基づいて、血液を用い得るかどうかを決定する。血液を 血漿と赤血球に分別する。
血液分離機が好ましく用いられるが、他の適当な従来の分離機も用い得る。常に 血液を冷却して、好ましくは約＋４℃で保持する。全血液から、分別した試料を 、血漿部分の溶血検定のために採る。溶血値は、溶解した赤血球量を測るもので ある。好ましい溶血値測定法は、目による検定で血漿の色を色チャートと比較す る方法である。このチャート上の色値は、表Ｈに示す通りである。色の測定は、 試料を試験管中で卓上遠心分離した後に行うのが適している。本発明の方法で用 いる血漿は、溶血値１〜３、好ましくは１〜２、より好ましくは１、を有してい る。
表１ ウシ血漿の色測定（写真） 溶血値　　Ｌ”（明度）　ａｏ（赤色塵）　ｂｏ（黄色度）１　　　　３５．４ ４　　　　１３．２０　　　　　３９−１２２　　　　２６．９８　　　　１８ ．８５　　　　　２６．１４３　　　　２１．５９　　　　２０．２７　　　　 　１６．５８４　　　　１？、９１　　　　２２．０９　　　　　１１．５４５ 　　　　１６．３２　　　　１９．８３　　　　　７．３５６　　　　１２．７ ４　　　　１５．４７　　　　　４．０９７　　　　１１．５２　　　　９．６ ９　　　　　１．６７８　　　　１１．５９　　　　６．５０　　　　　０．２ ３Ｌ”　＝明度：高値がより明るい ａ”　＝赤色度：高値がより赤い ｂ”　＝黄色度：高値がより黄色い １１＋ Ｈｕｎｔｅｒｌａｂ　　Ｃｏ１ｏｒ　　Ｑｕｅｓｔ色チャー）　：　ＣＩ　ＥＬ ＡＢ　（１９７６）発光体Ｄ６５．１０’標準観察。鏡検を除く。
測定口：直径６ｍｍ、白色背景 次いで、血漿から血小板画分を濃縮した。これは、好ましくは、血漿を先ず遠心 分離して約１００倍に濃縮して、次いで、この濃縮物をざらに第二の遠心分離に よって濃縮する。ここで濃縮された血小板の固体相が得られる。この固体相に例 えばＣａＣｌ２のかたちのＣａ２ゝイオンをもとの血漿のクエン酸濃度に対して 等モル量になるように加える。Ｃａ２ゝを加えることによって、プイプリノーゲ ン等の凝固が起きて血小板が溶解し、これによって清澄な明赤色液体が上部に生 じる。
この清澄な液体を無菌濾過すれば、血小板溶解産物が使用のために準備できる。
方法は、連続的方法、バッチ法またはこれらの組合せを用いることができる。必 要であれば、遠心分離工程、濾過工程または他の同様の工程などのいくつかの濃 縮工程を導入することができる。
本発明による血小板溶解産物は、主に、特に約９０〜１００容量％の、最も好ま しくは９５〜１００容量％の、溶解した血小板から成る。
本発明による細胞培養培地は、本発明の血小板溶解産物に加えて、塩などを含む 栄養培地、および必要に応じてＦＣＳを含む。栄養培地としては、例えばＳｉｇ ｍａ　Ｃｈｅｎ＋１ｃａｌ　Ｃｏｍｐａｎｙによフて出されたシグマカタログ中 に記述されているものなど適当な従来の栄養培地のいかなるものを用いてもよい 。
必要に応じて加えられるＦＣ５の量は限定的ではないが、要求および所望に応じ て選択される。経済的理由から、用いるＦＣ５の量を最小にすることがしばしば 望まれるが、他の種々の理由から添加が必要な場合もあるかもしれない。
本発明の利点および目的をざらに記述する目的で、多数の非限定的な例を以下に 示す。
全ての例において、本発明による血小板溶解産物は、「Ｓ」で表される。用いら れるＦＣ５はギプコ社から供給されたものである。
例１は、本発明による血小板溶解産物の好ましい調製法を示している。
例」− 屠殺ウシからの全血液からの血漿の分別のための連続的工程によって、約１トン の血漿が得られた。全血液の細菌学的検査によって次のような数値が得られた。
官能的および細菌学的分析は、受容される結果を示した。全血液からの血漿の収 率は約６０％である。したがって、得られた血漿量は約１．７トンの血液に相当 する。血漿は溶血値２を有した。＊菌学的検査によっても血漿が受容されること が見出された。
先ず、血漿をいわゆるバクトフヒュージ（ｂａｃｔｏｆｕｇｅ。
Ａｌｆａ　Ｌａｖａｌ型Ｄ３１８７Ｍ）中で１５分閏遠心分離した。５７３４ｇ の細胞に冨む血漿を得て、これをＭｉｓｔｒａ１６１中で４℃で９２５ｇで遠心 分離した。得られた白色から赤色のゲル様ペース）１２７ｇを集めた。
６３．５ｇの水をペーストに加えて（１：０．５、重量：重量、ペースト：水） 、混合物を冷蔵庫で４℃で１５分間保存した。１５分閏の後、１２７ｇの０．０ ２４Ｍ　ＣａＣ１２を加えて（血液中のクエン酸に間して等モル）、試料を直接 に１９００ｇでＭｉｓｔｒａｌＧｌ中で４℃で遠心分離した。
赤色から白色の上溝を集めて、二回目の１９００ｇの遠心分離後のペースト中に 含まれた液体と合わせた。
ペーストからの液体を、固定篩プレートを備えたブフナー濾斗にペーストを移し て全液体が抽出されるまでスプーンで攪拌する方法で抽出した。液体の全量は１ ７６ｇであった。
液体の全量（１７６ｇ）を、次いで、二つのミリポアフィルタ−を通して濾過し た。最初はミリボード（Ｍｉ　ｌ　ｌ　ｉｇｏｒｄ）　Ｔ　Ｐと呼ばれるフィル ター（カタログ番号ＣＷＳＳＯＯ４Ｔ４）、次いで滅菌フィルターミリパック（ ＭｉｌｌｉｐａｃｋＴ″２００１カタログ番号ＭＰＧＬ３０ＣＡ３）を通した。
濾過の前に、フィルターを蒸留水に浸漬した。全濾液は、１５７ｇであった。
濾過を０．５〜４バールの間で行った。最終産物である無菌液体を、滅菌ポリプ ロピレンフラスコＮａ１ｇｅ２１０６に濾過して入れて、フラスコを４℃で保存 した。
表■は、実験のサンプリング計画を表し、表■は表に記した分析部位における分 析の結果を示す。分析は、スウェーデン農業大学、獣医学部（Ｉｎ５ｔｉｔｕｔ ｅ　ｏｆＣＪｉｎｉｅａｌ　Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ、　Ｐ、帆Ｂｏｘ　７０３８． ７５００７Ｕｐｐｓａｌａ）で行った。
衷■ 分析のためのサンプリング計画 分析位置 全血液　　　　　　　　　　　　　　　　　１遠心分離 血ｇＪ２ バクトヒューデーション （Ｂａｃｔｏｆｕｇａｔｉｏｎ）　　　　　　’細胞に冨む血ｔｊＪ３ 遠心分離　９２５ｇ ペースト 溶解　Ｈ２Ｏ 遠心分９　１９００ｇ 上清　　　　　　　　　　　　　　　　　　５濾過 無菌産生物　　　　　　　　　　　　　　　６裏Ｎ 分析結果 分析位装置　血液白血球　血小板　　赤血球　　蛋白質粒子濃度　　粒子濃度　 粒子濃度　重量％ＸＩＯ’／Ｌ　　ＸＩＯ’ルＸ１０’２／Ｌ１　　　　５．８ 　　　　２９６　　　７．８５　　　１？、９２　　　０．３　　　　１５４　 　　０．０２　　　７．１方法は、収量および最終製品の質を上げるための、例 えば、さらなる遠心分離および濾過によって向上させ得ろ。また、遠心分離およ び濾過に匹敵し得て、例えばアフィニティー原理などに基づいた他の濃縮工程を 用いてもよい。
以下の例２および３は、ハイブリドーマ細胞を用し）る培養実験に関するもので 、栄養培地（ダルベ・ンコのミニマム培地、ギブコ社製）へのＦＣＳのみの添加 （比較の目的のため）をＦＣＳと本発明の血小板溶解産物との種々の割合での混 合物の添加と比較した。
ＦＣＳまたはＦＣ５＋Ｓの濃度を、細胞培養培地の全容量に対する容量％で示す 。
８Ｆ４ハイブリドーマ細胞を培！Ｉ（３７℃、８％Ｃ０２中）して、細胞を第２ ．３．４．５および６日にＢ１１ｒｋｅｒチヤンバー中で数えた。
細胞を、先ず、１％ＦＣ５＋１％Ｓ−添加物を含む培地で約２週間培養すること によって、Ｓ−添加物に適応させた。この実験は単一試料について行った。
細胞数／ＩＩＸ　Ｉ　Ｑ６ ＦＣＳ　　ＦＣＳ　　ＦＣＳ　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣ５＋５１０ Ｘ　　Ｉ！　　　５１　　１＋５Ｘ　　ｌ＋Ｈｌ＋０．２１８Ｆ４ハイブリドー マ 第２日　０．７２　０．３６　０．３８　０．５９　０．４０　０．４０第３日 　１．３Ｂ　　０．６１　０．６４　１．０６　０．７８　０．６２第４日　１ ．９３　０．９４　１．１２　１．５２　１．０４　０．９２第５日　２．８８ 　１．１１　１．２８　１．７２　１．３３　１．０８！！６日　２．５１　１ ．２２　１．５８　１．９８　１．２２　１．２６旌ユ ５Ｋ４Ｈハイブリドーマ細胞を培養して、例２と同様に数えた。
細胞数／ｍ１Ｘ１０６ ＦＣＳ　　　ＦＣＳ　　　ＦＣＳ　　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣＳ＋Ｓ　　ＦＣ５＋ ５１０！　　　１’Ｘ　　　　５Ｘ　　　　１＋５＄　　　１４１２　　１＋０ ．２＄５Ｋ４Ｎハイブリドーマ 第２日　０．８６　０，３０　０．５２　０．６１　０．４３　０．２７第３日 　２．７０　０．８２　１．５０　１．８３　１．２４　１．０６第４日　３． ５８　１．０６　１．９０　２．７２　２．００　１．４８第５８　３．３４　 １．４４　２．０５　２．５２　１．９７　１．７０第６日　２．２４　１．２ ６　１．５４　２．１１　１．０３　１．１８例２および３は、本発明の血小板 溶解産物がＦＣＳの優れた代替物であることを明示する。示されるように、１０ ％ＦＣ５との混合物は１％ＦＣ９と５％の本発明の血小板溶解産物との混合物で 実質的に代替することができる。
例４．５および６は、８Ｆ４ハイブリドーマ細胞を用いてのＦＣＳ、本発明の血 小板溶解産物（Ｓ）またはこれらの混合物を添加したダルベツコのミニマム培地 （ギプコ社ｉｌ）中における培養実験に間する。本発明の血小板溶解産物は、５ ６℃で３０分閏不活化したものおよび不活化しないものを用いた。細胞を、もと の濃度の５０，０００１１胞／１で細胞培養プレートに（例４および５）、また は細胞濃度を７５．０００ＩＩＩ胞／１にして培養フラスコ中に（例６）、位置 させた。
毘Ｌｌ ＦＣＳ　　　　ＦＣＳ　　　　　Ｓ　　　　　Ｓ　　　　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣ Ｓ＋Ｓ１０％　　　　１％　　　　　１５％　　　　５％　　　　１＋５＄　　 　１＋Ｈ第２日　（Ｌ２３２　０．０？２　０．１７７　０．１２０　０．２９ ０　０．９６０第３日　０．５９０　０．０８５　０．４３０　０．１９５　０ ．４６４　０．１８０第４日　１．２０５　０．１５５　０．６６５　０．３７ ５　０．９１５　０．２８５第５日　１．５１０　０．２５０　　Ｌ５２５　０ ．５１５　１．０４５　０．４８０第６日　１．３５５　０．３１５　１．５９ ０　０．６９５　０．９６５　０．２８０阻五 不活化されない５ ＦＣＳ　　　ＦＣＳ　　　Ｓ　　　　Ｓ　　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣＳ＋Ｓ１０％ 　　　１１　　１５％　　　５％　　　１＋５＄　　１＋Ｈ第１日　０．０５６ ０．０３７０−０６００．０３６０．０？２０．０６４第２日　０−２３０　０ ．０７６　０．２８０　０．１３０　０．２３０　０．１１２第３日　０．６８ ０　０−１００　０．４５０　０．２８０　０．４８５　０．２００第４日　０ ．９Ｂ５　０．１５５　０．６３０　０．３７０　０．８１５　０．２８０第５ 日　１．６９５　０．２０ＯＬ２９０　０．６７５　１．０２０　０．５９０第 ６日　１．４０５　０．２８０　１．３９０　０．７？５　０．９６５　０．４ ４５阻旦 フラスコ中での培養 ＦＣＳ　　ＦＣＳ　　ＦＣ５＋Ｓ　ＦＣ５＋Ｓ、　ＦＣ５＋Ｓ　ＦＣ５＋Ｓ　Ｆ Ｃ５＋Ｓ　ＦＣ５＋Ｓ１０％　　　１％　　　　１＋１５＊　　１＋５＊　　１ ＋Ｈ１４１５１＋５　　１＋１第４日　１．７６０．１９　１．４７　１．０？ 　０．４８１．６８１．０６０．５５第５日 第６日　２．５２０．３２　２．１？　　１．６８０．７３２．０１１．６４０ ．７６零）不活化されたもの 例４〜６から再び明らかなように、１％ＦＣＳ＋５％Ｓは、１０％ＦＣＳの代替 物として受容される。さらに、１５％ＳはｌＯ％ＦＣＳを完全に代替し得る。
さらに、Ｓの不活化は細胞の増殖に影響しないことが明かである。
阻１ ＦＣＳおよびＳ（不活化したもの）を用いた２Ｆ６ハイブリドーマ細胞の培養実 験、細胞をもとの濃度のｓｏ、ｏｏｏｍ胞／１で用いた。
ＦＣＳ　　　　ＦＣＳ　　　　　Ｓ　　　　　Ｓ　　　　　ＦＣ５＋Ｓ　　ＦＣ ５＋Ｓ１０％　　　　１％　　　　　１５：　　　　５Ｘ　　　　１＋５＄　　 　ｌ＋Ｈ第１日　０．０４９　０．０２７　０．０４２　０．０４４０．０５２ ０．０４０第２日　０．１７３　０．０４１　０−１３６　０．１０９　０．１ ５７　０．０９２第３日　０．４３３　０．０８９　０．３３９　０．２３２　 ０．３０１　０．１５６第４日　０．８９０　０．０９２　０．７０７　０．４ ０９　０．５８３　０．２３８第５日　１．４７３　０．１１１　１．３８６　 ０．６０２　０．９７５　０．４４０第６日　１．６６０　０．１５８　１．７ ？５　０．８１０　１．１３２　０．４１４この例もまた、１％ＦＣＳ＋５％Ｓ が実質的に１０％ＦＣＳを代替し得ることを示す。これは１５％Ｓに例８．９お よび１０は、ＦＣＳ、Ｓの各々およびそれらの混合物の異なる濃度におけるハイ ブリドーマ細胞からの抗体（Ａｂ）の生産に間する。
実験条件：ＥＬＩＳＡプレートを吸収剤によって精製した抗−マウス■ｇＧ抗体 （１０μｇ／ｌ）でコートして、ハイブリドーマ上清を連続希釈で加えた。結合 したマウス抗体を、ＡＬＰ−抱合抗−マウスＩｇＧおよび基質（バラニトロフェ ニール硫酸）を加えて検出した。実験は二重の試料を用いて行い、濃度の決定は 各々の試験毎にマウスＩｇＧコードパラレルの既知の標準との比較によって行っ た。
阻旦 異なる濃度のＦＣＳおよびＳを用いて培養した８Ｆ４ハイブリドーマ細胞からの 抗体の生産。第５日目の上溝を測定した。
試験　　）１ｙｂ／日　　ＦＣＳ　　　Ｓ　　　抗体の量（μｇ／ｌ）１　　　 ８Ｆ４５　　　１０％　　　−１０，６２２８Ｆ４５　　　１％　　　−３，２ ５３８Ｆ４５　　　　　　５％　　　　１０．００４　　　８Ｆ４５　　　１％ 　　　５１　　　１１．５０５　　　８Ｆ４５　　　１：　　　ＩＸ　　　　５ ．４７６　　　８Ｆ４５　　　１χ　０．２＄　　　　４．５３阻且 異なる濃度のＦＣＳおよびＳを用いて培養した８Ｆ４ハイブリドーマ細胞からの 抗体の生産。第６日目の上滑を測定した。
試験　　Ｈｙｂ／日　　ＦＣＳ　　　Ｓ　　　抗体の量（μ８／１）１　　　　 　８Ｆ４６　　　　　　Ｌｏｇ　　　　−６，２５２８Ｆ４６　　　　　１＄　 　　　−１，５６３８Ｆ４６　　　　　１％　　　　５＄ｉａ　　　　７．４４ ４　　　　　８Ｆ４６　　　　　　１％　　　　５Ｘｉａ　　　　８．１２５　 　　　８Ｆ４６　　　　　１Ｘ　　　　ｌＸ１ａ　　　　２．４４６　　　　８ Ｆ４６　　　　　１％　　　１５％　　　　　　ＥＬ１５７　　　　８Ｆ４６　 　　　　１＄　　　　５＄　　　　　　８．４４８　　　　８Ｆ４６　　　　　 １％　　　　１２　　　　　２．０６ｉａ＝　５６℃で３０分間不活化した。
試験は、ｌＯ％ＦＣＳを用いた培養に較べて、１％ＦＣＳ＋５％Ｓを用いた培養 においてやや高い抗体の生産を示す。
旌上旦 ＦＣＳおよびＳにおける５Ｋ４Ｈハイブリドーマ細胞からの抗体の生産。第５日 目の上溝を測定した。しかし、第３日目からの上溝も同様の傾向を示すが、全濃 度はより低い。
試験　　Ｈｙｂ／日　　ＦＣＳ　　　Ｓ　　　抗体の量（μｇ／ｍ１）Ｉ　　　 　　５Ｋ４）１５　　　　１０％　　　　−１３，７５２５に４Ｈ５１Ｘ　　　 　−９，６３ ３５に４Ｈ５−５！　　　　　１７．３１４　　　　５Ｋ４Ｈ５１Ｘ　　　　５ Ｘ　　　　　２０．７８５　　　５に４８５　　　１％　　　ＩＸ　　　　測定 不能６　　　　５に４８５　　　　１！　　　０．２＄　　　　１２．５０ＳＫ ４Ｈハイブリドーマはやや高い量の抗体を生産した。これによって、種々の場合 の前の観測と同様になる。ここでもまた、本発明による血小板溶解産物（Ｓ、５ ％）は、ＦＣＳのみの培養と比較して抗体の生産に好ましい影響を有するようで ある。
本発明の血小板溶解産物は成長した動物および幼若な動物のいずれの屠殺動物か らも得ることができることから、経済性および有効性の点から実質的な利点が得 られる。
したがって、驚いたことに、本発明の血小板溶解産物中でハイブリドーマ細胞は 最も満足すべきかたちで増殖して抗体を生産するようである。
異なるタイプの細胞は異なる特定の培養条件を必要とし、このことは、あるタイ プの細胞があるタイプの培地中で充分に増殖するかどうかを安全に決定すること は可能ではないことを意味する。
これを明らかにするために、種々の腫瘍細胞の実験的培養を、ＦＣＳおよび本発 明の血小板溶解産物（Ｓ）を加えた栄養培地中で行った。これらの実験は１、例 １１および１２で説明される通りである。
作ＬＬＬ ＨＬ−６０１１胞（ヒト前骨髄性白血病）を、栄養培地ＲＰＭＩ　１６４０　（ ギブコ社ｉり十抗生物質（ペニシリン５０１ｔＪ／ｍｌおよびストレプトマイシ ン５０μ８／１）および１０％ＦＣ５を含む懸濁培養中で培養した。
培養物を３７℃で５％Ｃｏ２の空気の加湿雰囲気下で培養した。！Ｉ胞が定常期 に達したときに、新たな培養（第一継代）を１０％の本発明の血小板溶解産物（ Ｓ）を用いて同様の条件下で行って、次いで第二継代をｌＯ％Ｓを用いて行フた 。細胞を、Ｂｊｒｋｅｒチャンバー中で数えた。結果は第１図に示される通りで ある０図中、白丸（０）は１０％ＦＣＳを用いた実験、黒丸（・）は１０％Ｓを 用いた第一継代、黒角（■）は１０％Ｓを用いた第二継代の実験を各々示す。全 ての点は、二つの測定値の平均値を表す。
結果は、本発明による血小板溶解産物がこのタイプのｍ瘍細胞を培養する培地と しては適していないことをかなり明確に示している。
肚上２ この実験では、Ｌ　］　２１００２１！　（ＤＬ−α−ジフルオロメチルオルニ チン耐性マウス白血病細胞系）を、例１１と同様の栄養培地にさらに５０μ門β −メルカプトエタノール村よび２０ｍＭα−ジフルオロメチルオルニチンを含む 懸濁培養液中で培養した。
結果は第２図に示される通りである０図中の記号は例１１と同様である。１０％ Ｓを用いる第一継代のみを行った。この細胞系でも、本発明による血小板溶解産 物の存在下で満足できる増殖は認められなかった。
本発明によると、このように、細胞培養のための血小板溶解産物が提供され、該 血小板溶解産物は牛胎児血清の全部または一部を置き換えることができ、したが って、培養培地の経済性および有用性がかなり改善される。
本発明によれば、さらに、動物全血液の新たな有益な用途が間かれる。
ＩＧ−１ 接種後日数 ＦＩＧ、２ Ｈ！稽後後Ｅｒ 数正書の翻訳文提出書（特許法第１８４条の８）平成　２　月　１０月　２６日 　− 特許庁長官　植　松　　　敏　殿　　　　　　　　　１１、　特許出願の表示 ＰＣＴ／ＳＥ　　８９１００２３２ ２、発明の名称 血小板溶解産物、そのａｉＩＩ法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地 ３、特許出願人 住　所　　スエーデン国ケブリンゲ、ボックス、１ｏ。
名　称　　　エル：、フード、アクチボラグ４、代理人 （郵便番号１００） 東京都千代田区丸の内三丁目２番３号 ５、　補正書の提出年月日 １９９０年　６　月　１９日 補正書の翻訳文提出書に添付の「請求の範囲」の補正は下記の通りです。
請求項１．　２．　３および８を削除。
浄書（内容に変更なし） 請求の範囲 １、　凝固を防ぐためにクエン酸塩を加えた動物全血からの血漿に由来する血小 板溶解産物の調製法であって、以下の特徴を有する、血小板溶解産物の調製法。
ａ）該血漿を、血小板に冨むペーストを得るために遠心分離し、 ｂ）含まれる血小板の溶解および残留成分の凝固のために、もとの血漿中のクエ ン酸塩含量に対して等モル量のＣａ”を該ペーストに加えて、溶解された血小板 から実質的になる溶解物の清澄な明赤色液体および凝固物を得て、 Ｃ）該清澄な明赤色液体を無菌濾過し、ｄ）このようにして得られる血小板溶解 産物を集める。
２、　血小板溶解産物が約９０〜ｌＯＯ容量％、最も好ましくは９５〜１００容 量％、の溶解した血小板から成る、請求項１に記載の製造法。
３、　該血漿が食品品質であって、溶血値ｌ〜３、好ましくは１〜２を有する、 請求項１または２に記載の製造法。
４、　工程ａ）において、約１００倍の濃度を得るために該血漿をバクトヒュー ジで遠心分離して、この濃縮物のさらなる濃縮を達成するために二回目の遠心分 離をする、請求項１〜３のいずれか１項に記載の製造法。
５、　以下のものを含むことを特徴とする細胞培養培地。
ａ）請求項１−４に記載の方法によフて調製された血小板溶解産物、 ｂ）従来の栄養基質、および Ｃ）必要に応じて、子牛胎児血清。
６、　ハイブリドーマ細胞の培養のための、請求項５に記載の細胞培養培地の使 用。
７、　該培養を請求項５に記載の培地中で行うことを特徴とする、ハイブリドー マ細胞の培養法。
手続補正書（方式） 平成　３年　８月２７８習 特許庁長官　　深　沢　　　亘　　毀 １　事件の表示 ３　補正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 工ルコ、フード、アクチボラグ ５　補正命令の日付 発送日　　平成　３年　７月　３０日 ６　補正の対象 ７　補正の内容 手続補正書（方式） ％式％ １　事件の表示 ３　補正をする者 事件との関係　　　　特許出願人 工ルコ、フード、アクチボラグ 発送日　　平成　３年　７月　３０日 ６　？１１正の対象 ７　補正の内容 国際調査報告 １＋ｔｌｆｆｉ１ｍ−＾−−−１１詐１１六〜−ＰＣＴ／ＳＥ８９１００２３２

Claims (11)

    【特許請求の範囲】
  1. １．動物全血液からの血漿から調製されて、主に溶解した血小板から成ることを 特徴とする、細胞培養に用いられる血液血小板溶解産物。
  2. ２．溶解した血小板が約９０〜１００容且％、最も好ましくは９５〜１００容量 ％、で含まれる、請求項１に記載の血液血小板溶解産物。
  3. ３．該血漿が食用品質であって、約１〜３、好ましくは１〜２の溶血値を有する ことを特徴とする、請求項１または２に記載の血液血小板溶解産物。
  4. ４．凝固を防ぐためにクエン酸塩を加えた動物全血からの血漿に由来する血小板 溶解産物の調製法であって、以下の特徴を有する、血小板溶解産物の調製法。 ａ）該血漿を、血小板に富むペーストを得るために遠心分離し、 ｂ）含まれる血小板の溶解および残留成分の凝固のために、もとの血漿中のクエ ン酸塩含量に対して等モル量のＣａ２＋を該ペーストに加えて、溶解された血小 板から実質的になる溶解物の清澄な明赤色液体および凝固物を得て、 ｃ）該清澄な明赤色液体を無菌濾過し、ｄ）このようにして得られる血小板溶解 産物を集める。
  5. ５．血小板溶解産物が約９０〜１００容量％、最も好ましくは９５〜１００容量 ％、の溶解した血小板から成る、請求項４に記載の製造法。
  6. ６．該血漿が食品品質であって、溶血値１〜３、好ましくは１〜２を有する、請 求項４または５に記載の製造法。
  7. ７．工程ａ）において、約１００倍の濃度を得るために該血漿をパクトヒユージ で遠心分離して、この濃縮物のさらなる濃縮を達成するために二回目の遠心分離 をする、請求項４〜６のいずれか１項に記載の製造法。
  8. ８．以下のものを含むことを特徴とする、細胞培養培地。 ａ）動物全血液からの血漿から調製され、主に溶解された血小板から成る、血小 板溶解産物、ｂ）従来の栄養基質、および ｃ）必要に応じて、子牛胎児血清。
  9. ９．以下のものを含むことを特徴とする、細胞培養培地。 ａ）請求項４〜７に記載の方法によって調製された血小板溶解産物、 ｂ）従来の栄養基質、および ｃ）必要に応じて、子牛胎児血清。
  10. １０．ハイブリドーマ細胞の培養のための、請求項８または９に記載の細胞培養 培地の使用。
  11. １１．該培養を請求項８または９に記載の培地中で行うことを特徴とする、ハイ ブリドーマ細胞の培養法。
JP1504957A 1988-04-26 1989-04-26 血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地 Pending JPH03505156A (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
SE8801537A SE8801537D0 (sv) 1988-04-26 1988-04-26 Cellodlingsmedium samt forfarande for dess framstellning
SE8801537-5 1988-04-26

Publications (1)

Publication Number Publication Date
JPH03505156A true JPH03505156A (ja) 1991-11-14

Family

ID=20372119

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP1504957A Pending JPH03505156A (ja) 1988-04-26 1989-04-26 血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地

Country Status (8)

Country Link
US (1) US5198357A (ja)
EP (1) EP0413727B1 (ja)
JP (1) JPH03505156A (ja)
AT (1) ATE107353T1 (ja)
AU (1) AU3539289A (ja)
DE (1) DE68916244T2 (ja)
SE (1) SE8801537D0 (ja)
WO (1) WO1989010398A1 (ja)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2025511281A (ja) * 2022-04-06 2025-04-15 上海我武幹細胞科技有限公司 血清代替品及びその調製方法と用途

Families Citing this family (70)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5723443A (en) * 1988-02-02 1998-03-03 Hankyu-Kyoei Bussan Co. Ltd. Lipid metabolism promoting agent and its use
JPH04198129A (ja) * 1990-11-28 1992-07-17 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 活性型ビタミンｄ↓３類含有組成物
JP3394262B2 (ja) * 1997-02-06 2003-04-07 セラセンス、インク． 小体積インビトロ被検体センサー
JP3521382B2 (ja) * 1997-02-27 2004-04-19 日本たばこ産業株式会社 細胞間接着及びシグナル伝達を媒介する細胞表面分子
DE19821060A1 (de) 1997-09-23 1999-04-15 Bundesrepublik Deutschland Let Ko-stimulierendes Polypeptid von T-Zellen, monoklonale Antikörper sowie die Herstellung und deren Verwendung
US7259247B1 (en) 1997-09-23 2007-08-21 Bundersrespublik Deutschaland Letztvertreten Durch Den Direktor Des Robert-Koch-Institutes Anti-human T-cell costimulating polypeptide monoclonal antibodies
AU2005235718B2 (en) 2004-04-23 2011-09-22 Bundesrepublik Deutschland Letztvertreten Durch Das Robert-Koch-Institut Vertreten Durch Seinen Prasidenten Method for the treatment of T cell mediated conditions by depletion of icos-positive cells in vivo
WO2006023911A2 (en) * 2004-08-20 2006-03-02 Alberto Gorrochategui Barrueta Biological tissue regenerative agent and method for preparing and using same
US8632970B2 (en) 2005-05-09 2014-01-21 Affymetrix, Inc. Multiplex capture of nucleic acids
US8628918B2 (en) * 2005-05-09 2014-01-14 Affymetrix, Inc. Multiplex capture of nucleic acids
WO2006124771A2 (en) * 2005-05-12 2006-11-23 Panomics, Inc. Multiplex branched-chain dna assays
ES2511218T5 (es) * 2005-06-20 2017-12-07 Advanced Cell Diagnostics, Inc. Kits y productos para detección de ácidos nucleicos en células individuales y para identificación de células raras en grandes poblaciones de células heterogéneas
SE528214C2 (sv) * 2005-06-23 2006-09-26 Proliff Ab Förfarande för framställning av blodplättslysat
WO2007044427A2 (en) * 2005-10-05 2007-04-19 Panomics, Inc. Detection of nucleic acids from whole blood
CA2640185A1 (en) * 2006-01-24 2007-08-02 Christopher J. Centeno Mesenchymal stem cell isolation and transplantation method and system to be used in a clinical setting
WO2008034803A1 (en) * 2006-09-18 2008-03-27 Medizinische Universität Graz Plasma-free platelet lysate for use as a supplement in cell cultures and for the preparation of cell therapeutics
US9095562B2 (en) 2007-07-05 2015-08-04 Regenerative Sciences, Inc. Methods and compositions for optimized expansion and implantation of mesenchymal stem cells
CN101945994A (zh) * 2007-12-19 2011-01-12 再生科学有限责任公司 促进干细胞移植和植入的组合物和方法
US20110052533A1 (en) * 2008-03-14 2011-03-03 Regenerative Sciences, Llc Compositions and Methods for Cartilage Repair
WO2010003057A2 (en) 2008-07-03 2010-01-07 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating cancer
ES2982461T3 (es) * 2008-09-16 2024-10-16 Mayo Found Medical Education & Res Composiciones que contienen contenido plaquetario
US20110245804A1 (en) 2008-12-05 2011-10-06 Regenerative Sciences, Llc Methods and Compositions to Facilitate Repair of Avascular Tissue
US20100168022A1 (en) * 2008-12-11 2010-07-01 Centeno Christopher J Use of In-Vitro Culture to Design or Test Personalized Treatment Regimens
US20110054929A1 (en) * 2009-09-01 2011-03-03 Cell Solutions Colorado Llc Stem Cell Marketplace
HUP0900603A2 (en) * 2009-09-25 2012-02-28 Biomarker Kft Cell culture medium
US9113950B2 (en) 2009-11-04 2015-08-25 Regenerative Sciences, Llc Therapeutic delivery device
CN104849472A (zh) 2010-10-21 2015-08-19 领先细胞医疗诊断有限公司 用于原位检测核酸的超灵敏方法
PT2707030T (pt) 2011-05-09 2020-05-22 Mayo Found Medical Education & Res Tratamentos de cancro
US9788539B2 (en) 2011-05-17 2017-10-17 Velico Medical, Inc. Platelet protection solution having beta-galactosidase and sialidase inhibitors
JP2014515352A (ja) 2011-05-17 2014-06-30 ベリコ メディカル インコーポレイティッド シアリダーゼ阻害剤を用いた血小板の保存の改善法
EP2540819A1 (en) * 2011-06-27 2013-01-02 Rheinisch-Westfälische Technische Hochschule Aachen (RWTH) Method for cultivating cells in platelet-lysate-containing medium
AU2012275562B2 (en) * 2011-06-27 2016-10-20 Children's Healthcare Of Atlanta, Inc. Compositions, uses, and preparation of platelet lysates
AU2012275335B2 (en) 2011-06-29 2017-04-20 Biorestorative Therapies, Inc. Brown fat cell compositions and methods
AU2012279995C1 (en) 2011-07-06 2019-10-24 Cell Therapy Limited Progenitor cells of mesodermal lineage
ITRM20110500A1 (it) * 2011-09-23 2013-03-24 Futura Stem Cells Sa Lisato piastrinico, usi di esso e metodo per la sua preparazione
CN112569259A (zh) 2011-11-23 2021-03-30 细胞治疗有限公司 血小板裂解物凝胶
US10413606B2 (en) 2012-10-01 2019-09-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for treating cancer with nanoparticle complexes of albumin-bound paclitaxel and anti-VEGF antibodies
EP2903430A1 (en) 2012-10-05 2015-08-12 Velico Medical, Inc. Platelet additive solution having a beta-galactosidase inhibitor
EP2733200A1 (en) 2012-11-15 2014-05-21 Biorigen International SA Cell culture supplements
KR20150113978A (ko) * 2013-01-28 2015-10-08 리제너러티브 사이언시즈, 엘엘씨 혈소판 용해 및 활성화를 위한 디바이스 및 방법
WO2014120886A1 (en) 2013-01-30 2014-08-07 Velico Medical, Inc. Platelet additive solution having a self-assembling hydrogel-forming peptide
AU2014253920B2 (en) 2013-04-19 2019-07-04 Biorestorative Therapies, Inc. Human brown adipose derived stem cells and uses
CN114392274A (zh) * 2013-08-27 2022-04-26 库克通用生物技术有限责任公司 可来源于血小板浓缩液的生物活性组合物及其制备和使用方法
US11891620B2 (en) 2014-05-16 2024-02-06 Mayo Foundation For Medical Education And Research Cell culture media compositions for primary cells
GB201410504D0 (en) 2014-06-12 2014-07-30 Cell Therapy Ltd Immuno-modulaltory progenitor (IMP) cell
US20160250351A1 (en) 2014-06-13 2016-09-01 Mayo Foundation For Medical Education And Research Treating Lymphomas
EP3834889A1 (en) 2014-06-16 2021-06-16 Mayo Foundation for Medical Education and Research Treating myelomas
US9446148B2 (en) 2014-10-06 2016-09-20 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-antibody compositions and methods of making and using the same
GB201513996D0 (en) 2015-08-07 2015-09-23 Cell Therapy Ltd Immuno-oncology mesodermal progenitor (IOMP) cell
TW201707725A (zh) 2015-08-18 2017-03-01 美國馬友醫藥教育研究基金會 載體－抗體組合物及其製造及使用方法
KR20170037379A (ko) * 2015-09-25 2017-04-04 (주)프로스테믹스 세포의 증식 촉진용 조성물 및 이를 포함하는 세포 배양용 배지
TW201713360A (en) 2015-10-06 2017-04-16 Mayo Foundation Methods of treating cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
DK3362462T3 (da) 2015-10-12 2021-10-11 Advanced Cell Diagnostics Inc In situ-detektion af nukleotidvarianter i prøver med højt støjniveau, og sammensætninger og fremgangsmåder relateret dertil
GB201518263D0 (en) 2015-10-15 2015-12-02 Oxford Bioelectronics Ltd Method
WO2017120501A1 (en) 2016-01-07 2017-07-13 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating cancer with interferon
WO2017139698A1 (en) 2016-02-12 2017-08-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Hematologic cancer treatments
EP3432928A4 (en) 2016-03-21 2019-11-20 Mayo Foundation for Medical Education and Research PROCESS FOR IMPROVING THE THERAPEUTIC INDEX FOR CHEMOTHERAPEUTIC
US11305020B2 (en) 2016-03-21 2022-04-19 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods for reducing toxicity of a chemotherapeutic drug
US10618969B2 (en) 2016-04-06 2020-04-14 Mayo Foundation For Medical Education And Research Carrier-binding agent compositions and methods of making and using the same
US20200325442A1 (en) 2016-06-02 2020-10-15 Pl Bioscience Gmbh Method for producing a platelet-lysate-containing gel
CA3035377A1 (en) 2016-09-01 2018-03-08 Mayo Foundation For Medical Education And Research Nanoparticle compositions for targeting t-cell cancers
CN109890419A (zh) 2016-09-01 2019-06-14 梅约医学教育与研究基金会 用于治疗癌症的载体-pd-l1结合剂组合物
EP3509643A1 (en) 2016-09-06 2019-07-17 Mayo Foundation for Medical Education and Research Paclitaxel-albumin-binding agent compositions and methods for using and making the same
WO2018048816A1 (en) 2016-09-06 2018-03-15 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating pd-l1 expressing cancer
US11590098B2 (en) 2016-09-06 2023-02-28 Mayo Foundation For Medical Education And Research Methods of treating triple-negative breast cancer using compositions of antibodies and carrier proteins
CN109468262A (zh) * 2018-10-30 2019-03-15 中国科学院苏州生物医学工程技术研究所 家畜血细胞制备动物细胞培养液的方法及其制得的动物细胞培养液的应用
JP7558952B2 (ja) 2019-01-15 2024-10-01 セル セラピー リミテッド 中胚葉キラー（ｍｋ）細胞
GB201900554D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Cell Therapy Ltd Mesodermal killer (mk) cell
CN110484497A (zh) * 2019-09-05 2019-11-22 中国人民解放军南部战区总医院 一种血小板裂解液及其制备方法和应用
US11951134B2 (en) 2019-09-30 2024-04-09 North Carolina State University Cationic platelet lysate compositions and related methods

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL8000527A (nl) * 1980-01-29 1981-08-17 Stichting Vrienden Van De Stic Werkwijze voor het bevorderen van hybridisatie van cellen in vitro en van de produktie en uitscheiding van stoffen, gevormd door dergelijke celhybriden, werkwijze voor het bevorderen van de produktie van monoclonale antilichamen in vitro door toepassing van een hybridomatechniek, alsmede endotheelcellen en/of supernatant van endotheelcellen.
US4350687A (en) * 1980-02-10 1982-09-21 Research Corporation Platelet derived cell growth factor
US4473552A (en) * 1981-03-16 1984-09-25 Jost Leonora I Anaerobic method for preserving whole blood, tissue and components containing living mammalian cells
US4987079A (en) * 1982-07-06 1991-01-22 Wilbur D. Smith Composition and method for in vitro cell culture
US4520107A (en) * 1982-09-28 1985-05-28 Polydex Chemicals Ltd. Tissue culture and cell growth-promoting material and its method of manufacture
US5045468A (en) * 1986-12-12 1991-09-03 Cell Enterprises, Inc. Protein-free culture medium which promotes hybridoma growth
NO162160C (no) * 1987-01-09 1989-11-15 Medi Cult As Serumfritt vekstmedium, samt anvendelse derav.
US4959308A (en) * 1987-08-27 1990-09-25 Board Of Regents, The University Of Texas System Immunoassay for antibodies binding platelets

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2025511281A (ja) * 2022-04-06 2025-04-15 上海我武幹細胞科技有限公司 血清代替品及びその調製方法と用途

Also Published As

Publication number Publication date
ATE107353T1 (de) 1994-07-15
DE68916244D1 (de) 1994-07-21
SE8801537D0 (sv) 1988-04-26
US5198357A (en) 1993-03-30
WO1989010398A1 (en) 1989-11-02
DE68916244T2 (de) 1995-02-09
EP0413727A1 (en) 1991-02-27
AU3539289A (en) 1989-11-24
EP0413727B1 (en) 1994-06-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JPH03505156A (ja) 血小板溶解産物、その調製法および該血小板溶解産物を含む細胞培養培地
KR102144593B1 (ko) 인간줄기세포 유래 엑소좀을 포함하는 세포 배양용 무혈청 배지 조성물
JPS60500400A (ja) 組織培養培地
CN111202751A (zh) 间充质干细胞在制备治疗类风湿性关节炎的产品中的应用
US20090023211A1 (en) Blood platelet lysate and method of producing the same
US4520107A (en) Tissue culture and cell growth-promoting material and its method of manufacture
KR20230077644A (ko) 도축 부산물에서 유래한 FBS(fetal bovine serum) 대체제 활용 배양육의 생산 방법
CN106701669A (zh) 临床治疗用间充质干细胞及其制备方法和用途
JPS63126897A (ja) 免疫抑制因子
CA1215335A (en) Tissue culture medium
CN113413398A (zh) 鱼卵提取物及其应用
Kannourakis et al. Evidence for interactions between monocytes and natural killer cells in the regulation of in vitro hemopoiesis.
EP0148770A2 (en) Composition for cell cultivation, production and use thereof
US20250002859A1 (en) Method for producing cultured meat by utilizing fbs substitute derived from butchery by-products
JPS60133886A (ja) 細胞生長培地成分の調製方法
US20260098243A1 (en) Dura mater-derived stem cells and method for producing the same
KR101538969B1 (ko) 감태 추출물을 포함하는 중간엽 줄기세포 배양용 배지 조성물
JPS62278979A (ja) 動物細胞の培養方法
JPS63129994A (ja) ヒト由来生理活性物質の製造法
RU2644248C2 (ru) Питательная среда плотная для культивирования и выращивания туляремийного микроба
JPH02135060A (ja) 乳質改善剤
JPS6030655B2 (ja) Ｃｓｆ産生腫瘍移植法を用いたｃｓｆの製造法
CN113943700A (zh) 一种牛血清外泌体用于干细胞培养的方法
Miller et al. Failure of Sulphanilamide to Inhibit Calcification of Bone
CN115992116A (zh) 一种多功能奶牛溶菌酶及其制备方法和应用