JPH03505164A - 生体外増殖のための方法及び装置並びに培養培地中での細胞の成長 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 生体外増殖のための方法及び装置 並びに培養培地中での細胞の生長 発明の背景 本発明は望まれるほとに高い細胞数まで動物細胞等の生細胞を増殖及び成長させ る生体外培養に間し、より特定的には生産規模の培養系を供給する高細胞数細胞 集団の製造のための方法及び装置に間する。

動物細胞の生体外培養は長い問種々の目的のために用いられてきており、近年、 確立されたまたは可能性ある治療及び／または診断用途のための細胞生産タンパ ク質を、タンパク賀生産天然動物細胞の培養またはかかる細胞から形成させたタ ンパク質生産ハイブリッドの培養または特定のタンパク質産物をコード化する外 因性遺伝子を用いて絹換えＤＮＡ技術により形質転換した動物宿主細胞の培養を 通して、生産し及び回収する手段として大きな注目な得またかなりの成績をなし 得た。

かかるプロセスにおいては大抵の場合、タンパク質についての生産要求及び／ま たはタンパク質の単位生産コストを低減させる要求に応える手段として比較的大 規模な培養系が望ましい０周知のごとく、かかる培養プロセスをごく少数の細胞 を用いて開始させることは経済的でなくまた一般に実行可能性に乏しい。従って 、生産培養系における生存力を確保し！ｉ胞生産タンパク質の経済的生産を与え る、生産培養系への細胞の初期接種量（ｉｎｉｔｉａｌｉｎｏｃｕｌｕｍ）を提 供するべく十分に高細胞数の均質な細胞集団（ｃｅｌｌ　ｍａｓｓ）　　をまず 別個に生産する。

この目的のために、少量の初期仕込細胞及び適当な量及びタイプの培養培地を組 織培！Ｉ　（Ｔ）フラスコ、撹拌フラスコ（ｓｐｉｎｎｅｒｆｌａｓｋ　）　、 回転ビン等の適当な少量容器中に、例えば細胞に酸素と二酸化炭素の混合物を供 給する適当なガス環境の存在下に導く。

この様にして適度に高い細胞数を直接生産できる場合には、細胞をついでフラス コまたはビンから取り出し、ついで、任意的に新たな培養培地への懸濁剤として 、生産培！Ｉ装置に導く、ここでの操作は困難で時開消費的でもフとも重要であ り、また接種物が全く汚染されないよう厳格に無菌状態で行われねばならない。

しばしば一般的なことであるが、小さなフラスコまたはビンで達成した細胞数の 増加は細胞を生産培！Ｉ装置に直接導入することを可能にするほど十分大でなく 、さらにかかるフラスコまたはビンはさらなる培地、成長及び増殖（ｇｒｏｗｔ ｈ　ａｎｄ　ｒｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ　）を収容するには小さすぎる。かかる 状況下では培地のさらなる導入及び増加した細胞数への成長及び増殖のために細 胞を適度により大なるフラスコまたはビンに移す、多くの細胞系に間し、生産培 養装置に導入できる十分に高い細胞数の生細胞集団を達成するためには、増加す るより大きな容量の容器への何回かの移送が必要となる。

１つの前増殖容器から別の前増殖容器及び最終的に生産培養装置への細胞集団の 各移送毎に、接種物の汚染の危険が存在する。

例えば移送の後期段階でかかる汚染が起こると、全プロセスを初めからやり直さ ねばならず、それによって生産培養装置に適した接種量を得るに要する時間及び コストが大巾に増加し、また生産されたタンパク質を回収するために細胞を培養 する特開及びコストが大巾に増加する。

本発明の第１の目的は、細胞の生存性を確保するための十分に小さな規模の出発 環境及び必要な増大する規模の環境を提供する条件下で、細胞を増殖させて生産 系に導入するのに適した細胞数にする手段を提供すること、及び移送汚染の危険 なしにかつ経済的及び時間節約的方式で結果として高細胞数集団を培養装置に導 入する手段を提供することである。

発明の概要 これらの及び明らかとなる他の目的は、細胞培養物と適合し得（すなわち生物的 に不活性な）、かつ気体（すなわち酸素及び二酸化炭素）透過性の柔軟性材料か ら形成した少なくとも２つの連続する培養サブ区画室（ｓｕｂ−ｃｏａ＋ｐａｒ ｔｍｅｎｔ　）であって、サブ区画室の内容物を、総括系またはサブ区画室への 侵入の必要性なしに、次の連続したサブ区画室に移送できるように次の連続した サブ区画室と少なくとも潜在的に（１ａｔｅｎｔ）直接もしくは閉接的に流体連 通している（ｂｅ　ｉｎ　ｆｌｕｉｄ　ｃｏ＋ｎ＋ｕｎｉｃａｔｉｏｎ　）各サ ブ区画室を提供する動物細胞培養方法及び装置の提供によって達成される。

操作においては、（例えば確立された細胞系からの）初期仕込みの細胞及び適度 の量の適当な培養培地を列（ｓｅｒｉｅｓ）の最初のサブ区画室に電画的に導入 する。サブ区画室の列を、（例えばインキュベーター中で）、サブ区画室材質の ガス透過性により各サブ区画室内に細胞の生存性、成長及び増殖に必要とされる ガス環境を提供するのに有効な適当なガス環境下に維持する。

一般に、最初の培養サブ区画室内の条件（例えば培地の量及び任意的に、利用し 得る表面積及び／または容量）は少量の初期仕込細胞がより大なる細胞数の集団 が生産されるよう成長及び増殖するのを助長するのに最適の条件を与えるような 条件である。この最初のサブ区画室で実際的細胞成長及び生存性の限界に達した ら、内容物（すなわち、細胞、培地）を次の連続したサブ区画室に移す。この次 のサブ区画室内では、そこに加えられている培地及び／またはより大なる利用可 能な表面積及び／または容量によって、最初のサブ区画室からの細胞集団は生存 力を保持しつつ細胞数でさらに増加するのに必要な条件を与えられる。１つの連 続したサブ区画室から次のサブ区画室への移送は、生産規模の培養系を最後の培 養サブ区画室から無菌的に供給するのに適するほどの高い細胞数の細胞集団が得 られるまで必要とされるままに引き続いてのサブ区画室に対し続けられる。

本発明によれば、１つの培養サブ区画室から次のサブ区画室への内容物の移送は 区画室を環境に開放する必要なしにまたはかかる暴露をさける細心の注意を要す ることなく無菌的に行える８本発明の１つのｎ様においては、サブ区画室同士を １つのサブ区画室からの内容物を次の連続したサブ区画室に移送できる適当な管 （ｔｕｂｉｎｇ）によフて接続する。一方、別のｎ様においては、１つの区画室 の適当な閉鎖（ｃｌｏｓｕｒｅ　）または締めっけ（ｃｌａ＋ｗｐｉｎｇ）によ ってサブ区画室を形成し、閉鎖手段の除去によって前のサブ区画の内容物のより 大なる連続するサブ区画室への移送が達成される。

１−咀 第１図は本発明の１つの態様による三サブ区画室培養系の側面図を示す。

第２図は本発明の別の態様による三サブ区画室培養系の側面図第３Ａ、３Ｂ及び ３０図は本発明の好ましい態様の培養系の側面図を示し、そこにおいては１つの 密閉室（ｅｎｃｌｏｓｕｒｅ　）が３つのサブ区画室に分けられており、引き続 いての膨張段階によって、適度に高い細胞数の細胞集団への細胞の増殖及び成長 が可能となりまたそのための便宜が図られる。

第４図は第３Ａ図の培養系の透視図（ｐｅｒｓｐｅｃｔｉｖｅ　ｖｉｅｗ）であ る。

魚朋ぶ」０［Ｒ１咀 第１図に示される本発明の最初のａ橿によると、管部分１１２及び１２２によ） て相互接続した３つの連続したサブ区画室１１Ｏ１１２０及び１３０よりなる培 養系が例示目的のために提供される。この例示の最初のサブ区画室として選ばれ たサブ区画室１１０はまた、それとて結合して、それを通して細胞及び培養培地 を導入でき、別個の細胞の接種のための接種口１０４を好ましくは有する入口管 １０６と連通した入口１０８を有する０区画室１３０はそれと付随して、細胞及 び培地を取り出すための出口管１３６と連通した出口１３８を有している。

管部分１１２と１２２（及び好ましくはさらに管部分１０４．１０６及び１３６ ）を形成するのに用いる材料はシリコンゴム等の生物的に不活性で殺菌し得、か つ（例えば適当に配置されたクランプ１１４及び１２４によ）て）圧縮してサブ 区画室１１０．１２０及び１３０間の渚連絡を必要となるまで防止し得る材料で ある。そのような材料による培養サブ区画室同士は締めつけまたは他の圧縮手段 が適切である場合には潜在的間接的な連通状態にある。

培養サブ区画室１１０．１２０及び１３０を形成する材料としてはサブ区画室の 内容物（細胞及び培地）をサブ区画室の外部操作、例えば圧搾によってそこから 移すことができるほど十分に柔軟性がある材料であって、固定源依存性動物細胞 （ａｎＣｈｏｒａｇｅ−ｄｅｐｅｎｄｅｎｔ　ａｎｉｍａｌ　ｃｅｌｌｓ）が含 まれている場合にはサブ区画室表面から細胞を移動させることを容易にする材料 を選ぶ。

サブ区画室用の囲い形成材料（ｅｎｃｌｏｓｉｎｇ−ｆｏｒ＋ｗｉｎｇ　ｍａｔ ｅｒｉａｌ）としてはまた（例えば照射、オートクレーブ等によって）殺菌し得 る材料を選ぶ。最後に、囲い形成材料としては、その内に培養系を配置し、動物 細胞培養において典型的に用いられるガス雰囲気（例えば９５％酸素、５％ＣＯ ２）透過性の材料を選ぶ、好ましくは、囲い形成材料としてはこれらのガスに対 し単位表面積あたり非常に高い透過性を有する材料を選ぶ、これらの要求はいく つかの柔軟性プラスチック及びゴム様材料、例えばシリコンゴム；フルオロ−エ チレン−プロピレン共重合体；及びエチレン単位のゴムオレフィン重合体の中心 ブロックとポリスチレン及びポリエチレン−酢酸ビニル柔軟剤の末端ブロックを 有するブロック共重合体とポリプロピレンより形成されるプラスチック（米国特 許４７１７６６８参照）によって満足され得る０本発明ではシリコンゴムシート 材の使用が好ましい。

サブ区画室１１０、！２０及び１３０は各々同じサイズ（内部表面積及び／また は容量）であってもよいし、必要に応じ順次より大きくなっていってもよいが、 いずれにせよ内容物の量が増加した場合その柔軟性が培養面積及び／または容量 の有効な膨張を可能にすることが認識されるべきである。

この態様の好ましい操作においては各サブ区画室１１０．１２０及び１３０に培 養培地を入れ、全系を殺菌し、適当なガス環境を有するインキュベーター中に配 置する。管部分を１１４．１２４及び１３４て締めつけ、細胞系からの初期仕込 細胞を管１０４．１０６を通してサブ区画室１１０に導く（管１０４．１０６は ついで必要に応じ締めつけてもよいし、またそれを通して細胞を注入できる栓ま たは隔壁を設けてもよい）、細胞はサブ区画室１１０内で、適当な量（例えば少 量）の培養培地の存在下及び、初期には比較的少数の細胞の成長及び生存性を最 適化する、細胞及び培地によって占有されるサブ区画室１１０の比較的小面積／ 容量内で成長し増殖する。細胞数が増加し、培地中の栄養物が消費されるにつれ て、サブ区画室１１０内の細胞は結果として密集しくｒｅａｃｈ　ｃｏｎｆｌｕ ｅｎｃｙ）　、さらなる培地及びさらに増殖するスペースを必要とするに至る。

この時点で、クランプ１１４を外し、ついでバッグ様サブ区画室１１０を操作し て（例えば圧搾して）その内容物を管部分１１２を通して、（生存及び増殖（ｇ ｒｏνｔｈ）の最適条件を提供するよう依然として制限されるが）新たな培地及 び面積が存在するサブ区画室１２０にポンプ移送または移送する。

必要とあれば、管部分１１２は移送後再締めっけし得る。サブ区画室１１０内に おけると同様に、サブ区画室１２０内で細胞を増殖密集させ、ついで（クランプ ２４の取外し後）管部分１２２を通して、生存力を維持した細胞数の継続した増 加のためのさらなる培地及び面積を与えるサブ区画室１３０に移送する。最後に 、生産規模の培！！装置への接種に適した細胞数の細胞集団が得られた時点で、 サブ区画室１３０からの細胞及び培地を管１３６を通して生産装置への適当な入 口に移送する。

第１図の系を用いる別の態様においては、各サブ区画室に最初から培養培地を供 給する必要はなく、各サブ区画室に適当な注入口を通して培養培地を加える（ま たは補給する）ことができる。

しかしながら、この操作様式は、培地負荷を行うサブ区画室に侵入する必要性は 汚染の危険を伴い得るので、各サブ区画室に培養培地を予め負荷する様式はど好 ましくはない。

明らかなごとく、この型式のサブ区画室培養系はいくつかのサブ区画室を含めて 及び管部分を接続して予め製作できる（ｂｅ　ｐｒｅ−ｍａｎｕｆａｃｔｕｒｅ ｄ　）　＊全部より少ない予め製作し配置したサブ区画室を用いて十分な細胞数 を達成できる場合には、ついて残りのサブ区画室を（例えばそれらを分離する（ ｄｉｓｃｏｎｎｅｃｔ）ことによって）バイパスして生産培１！装置の接種口に 直接移行するか、または必要でないサブ区画室中で培養を行う必要なしに残余の サブ区画室を通して系の最終出口へ移行することが可能である。

この後者の態様に間しては、′ＩＪ！ｊ２図の培養系が有利である。ここで培養 培地を予め充填したバッグ様サブ区画室２１０．２２０及び２３０は、すべて適 当に締めつけ得る共通の管部分２４０と連通した管部分２１２．２２２及び２３ ２によって潜在的間接的液体連通状態にある。第１図の系におけると同様に、サ ブ区画室２１０に導入した細胞を培地中で成長、増殖させ、ついで適当な締付け （例えば２３６）を有する管２１２．２４０及び２２２を通してサブ区画室２２ ０に（例えばサブ区画室の圧搾によって）移送する。サブ区画室２２０中で適当 な細胞数に達した場合には、管部分２３２を締めつけ、ついて区画室２２０の内 容物を圧搾によって系から出口へ向う管２４０に送り込むことによってサブ区画 室２３０を容易にバイパスさせ得る。

本発明の好ましい形態を第３Ａ−３Ｃ図及び第４図に示す。そこでは単一のバッ グ様密閉室を、サブ区画室が潜在的直接的液連通状態となるように、適当に締め つけることによって複数のサブ区画室が形成されている。好ましくは培養用の各 サブ区画室はそれ自身といずれかの前のサブ区画室とからなるが、別のより好ま しさの小さい態様では各サブ区画室はプロセス中別個なものとして維持し得る。

好ましい操作については、一般に数字３１０によって表わされる培養室は総括的 、全体的培養区画室を構成するバック様密閉室３２２（初めに製作された形態に ついて第３Ｃ図参照）を形成するように配置されたある長さの生物的に不活性で 、柔軟性があって、ガス透過性を有する材料３２０より構成される。

密閉室形成材料は、外部区分手段３２４を用いて総体培養区画室を、適用された 区分手段によって、区分手段が適切である場合あったとしてもごくわずかな液連 通しかそれらの間に存在しないように１つを他のものから分離する１以上の培養 サブ区画室（例えば３２６．３２８．３３０）に細分することができるほど十分 に柔軟性を有する。前の場合と同様、密閉室形成材料３２０としては（照射、オ ートクレーブ等によって）殺菌可能であり、ま・たその中に培養室を配置し典型 的には動物細胞培養で用いられるガス雰囲気に透過性である材料が選ばれる。

第３Ａ、３Ｂ及び３Ｃ図に示すごとく、全体の培養区画室３２２は細胞及び培養 培地を導入し、好ましくは別個の細胞接種用接種口３３６を有する管３３４と連 絡した開口３３２を備えている。

管３３４は培養区画室から最終細胞集団及び培地を引き出すために、例えば生産 培養装置への無菌導入のために用い得る。別法として分離引出し手段は別途講じ 得る。

分離クランプ３２４または他の適当な区分手段を全培養区画室の外部表面にそっ て１以上の適当な位置に適用してそれらの位置で密閉室形成材料をそれ自身に対 して圧縮し、それによって該培養区画室を、培養培地及び細胞がサブ区画室間を 実質上（好ましくは全く）通れないほどの外部圧力で、２以上の培養サブ区画室 （例えば３２６．３２８及び３３０）に分画する。

第３Ａ図に図示の目的で示すごとく、３つの初期培養サブ区画室３２６．３２８ 及び３３０を形成させるべく２つの分離クランプ３２４を用いる。利用し得る細 胞ストックの初期細胞数、細胞の成長特性、及び必要とされる最終細胞数によっ て、適当な数の培養サブ区画室を用意することができ、各サブ区画室は適当なサ イズ（例えば表面積、容量）に整えることができ、また各サブ区画室は同じサイ ズであっても先行するサブ区画室のサイズと異なるサイズであってもよい、＠３ Ａ図に示される本発明の代表的培養室においてはサブ区画室２６．２８及び３０ は約５０．５００及び１０１００Ｏの容量を有している。

操作にあたっては、第３Ａ図に示すごとく形成した培養室を殺菌しく管３３４及 び３３６の末端はクランプまたはゴム栓で閉鎖しである）、必要なガス環境を与 える適当な囲い（ｅｎｃｌｏｓｕｒｅ　）中に配置し、ついで管３３６中の栓ま たは隔壁（ｓｅｐｔｕ■）を通しての注入によって初期細胞懸濁液及び培養培地 を供給する。このようにして、細胞及び培養培地を初期成長及び増殖用サブ区画 室内に閉じ込めてそこでより高い細胞数を生じさせる。細胞数が増加し、培養培 地内の栄養分が消費されるにつれて、細胞は密集状態となる（ｒｅａｃｈ　ｃｏ ｎｆｌｕｅｎｃｙ）　ａこの段階で、サブ区画室３２６をサブ区画室３２８から 分離する分離クランプ３２４を開放してこれらのサブ区画室を液連通させ、１つ のより大なる培養サブ区画室３２Ｂ／３２Ｂ　（第３Ｂ図）とする、サブ区画室 ３２８に初めから存在する培養培地への接触によって（及び／または入口３３４ を通しての増加した培地の添加によって）、細胞は今や利用し得るより大なるサ ブ区画室３２Ｂ／３２Ｂにより！Ｉ胞数をさらに増加させることができる。密集 状態に達したら、最後の分離クランプ３２４を取り外してサブ区画室３３０をす でに合流させたサブ区画室３２６／３２８と液連通させて総合培養室３２２（第 ３Ｃ図）によって示される新たなより大なる培養スペースを形成させる。再び、 増加した量の新鮮培地への接触及び／またはかかる新鮮培地の添加によって、細 胞が利用し得るより大なる培養スペース及び培地は！ＩＮ！が細胞数をさらに増 加させることを可能にし、結果として生産培養装置へ細胞を導入するに適した細 胞数が得られる。これは好ましくは管３３４と生産培養装置への入口との間の無 菌的接続を形成し、ついで培養区画室３２２から細胞及び培地を該無菌接続を通 して生産培養装置へ移送することによって行う。

上記説明から明らかな如く、本発明は、段階的により大なる培養スペース及び／ または細胞数の連続した増加のための追加の新鮮培地を利用し得る培養スペース へ、系のｆ＃、ｗ状Ｂ　（ｓｔｅｒｉｌｉｔｙ）を侵す必要性なしに、及び、例 えば、精巧で高価な装置及び処理手順を用いなければ、１つのフラスコもしくは ローラービン（ｒｏｌｌｅｒ　ｂｏｔｔｌｅ　）と別のフラスコもしくはローラ ービンとの間の移送の際に起こり得る、移送中の汚染の危険なしに、細胞及び培 地を簡単かつ経済的に移送する手段を提供する。より重要なことは仮に汚染が起 こったとしてもプロセスの初期に確認できることである０例示目的のために例え ば第３図の態様について説明すると、有用な手段は、サブ区画室３２６をサブ区 画室３２８中に合流させた頃の時点で接種口３３６の小部分を取り除き、（培養 サブ区画室と液連通している）取り除いた部分中の液体及び細胞を汚染分析のた めに用いることである。何らかの理由によって培ａｍが汚染されている場合には 、引き続いての細胞の増殖のために実質的時間及び培地が消費される前の初期の 時点でプロセスを停止させることができる。汚染が発見されない場合は、引き続 いての１つのサブ区画室から次のサブ区画室への移送は無菌系の侵害なしに行わ れるので、さらなる汚染の機会は恐らく起こらないであろう。

第３図の培養系は、特に区分手段を密閉室表面に望まれる面積で適用して培養室 の総体サイズに拘わりなく望まれるサイズの区画室を形成し得るので、望まれる 総体サイズ及び形態に製作し得る。サブ区画室を個々的に使用する場合にはくす なわち、より大なるひと続きのサブ区画室に合流させないで使用する場合には） 、各サブ区画室を隣りのものより進行的に大きくすることが好ましい、系を前の サブ区画室を次のサブ区画室に合流させて操作する系の場合には、もとの個々の サブ区画室はすべて同じサイズであフても異なったサイズであってもよく、総体 系を通して進行的により大きくすることは必ずしも必要とされない。

ｔａｌ及び２図の態様については引き続く各サブ区画室が前のものより大なる容 量を有することは一般に好ましいが、必須ではない。

本発明を用いる代表的な培養系においては、各サブ区画室は約１１の培養培地を 含有し、細胞を約５−２０Ｘ１０’　ｅｅｌ　Ｉｓ／ｍｌの細胞密度で最初の区 画室に供給する（すなわち最初の区画室に５−２０Ｘ１０Ｔ！ｉｔ胞）、約４８ −９６時閑の増殖により、細胞密度は５−２０Ｘ１０’　ｅｅｌ　Ｉｓ／ｍｌに 増加する（すなわち、５−２０Ｘ１０”　！ｉ胞）、ついで、第１のサブ区画室 と第２のサブ区画室を分離する手段を取り除いて、第１のサブ区画室の内容物を 第２のサブ区画室にさらなる増殖のために移送する。

第２のサブ区画室はその結果２１の培地中５−２０Ｘ　１０＠　！ｉｔ胞〜のサ ブ区画室中の出発細胞密度を有する。引き続いての増殖及び次の区画室への移送 （一般に２４−７２時時間ｉりは生産培養系への接種のために適当な細胞数が達 成されるまで行う。

培養サブ区画室を画定するのに用いる囲い形成材料の厚さは材料の必要な柔軟性 及び透過性を達成するのに適したいかなる厚さでもよい、シリコーンゴムシート 材については約ｏ、ｏｏａ−ｏ。

１インチ（約０．０７６−約２．５Ｍ）の厚さが適当である。

本発明の培養室は成長し増殖するのに表面に付着する必要のない細胞の懸濁培養 に特に有用であるが、付着細胞を用いた場合に採用することも可能である。かか る場合には、密閉室形成材料の性質が、材料を軽くたたく等の操作を行うことに よってその内表面から細胞を追い出して、その結果細胞が移動し、次の合流した 培養サブ区画室でそれらに提供されたより大なる表面に再付着することを可能に する。この手段が有効でない場合には、拡張された成長表面に再付着させるため に細胞を移動する手段は一般にトリプシン処理に求められねばならないであろう 。

すでに述べた如く、本発明は、初期種ストックを、生産培養系にもっとも有効な 細胞数で該生産系に細胞を接種することを可能にする十分に高い細胞数に増殖す ることに、その大なる有用性を有する。このようにして、細胞系は生産培養系の 環境での生存性のための最高の機会を与えられ、該生産系における細胞集団が膨 張に集中してタンパク質の生産のための最適数に至るのにより少ない時間しか必 要とされない、しかしながら別法として、本発明の培養系を少量の細胞分泌タン パク質しか必要とされない場合のそれ自体小規模の生産培養として用いることが でき、また特定細胞系の成長特性及び／または特定細胞系の成長、増殖または分 泌上の種々のパラメーター（例えば培地、ガス濃度）の効果を研究するのにも用 いることができる。各場合において、本発明の培養系は１回以上の容器−容器移 送に訴える必要なしに生産、研究または観察に必要とされる点まで細胞数を増加 させることを可能にする。

本発明を特定の態様、構築材料、操作パラメーター等をもとに説明したが、これ らは本発明及びその基本的特徴を例示するものとして提示されたものであり、以 下の請求の範囲に規定する本発明の精神及び範囲を逸脱することなく種々の変法 が可能であることが理解されよう。

ＦＩＧ、　／ ＦＩＧ、　２ ｌＧ３８ Ｆ／θ３Ｃ

Claims (8)

【特許請求の範囲】
1. １．特定細胞数の出発生細胞からより大なる細胞数の生細胞集団団を与える、培 養培地存在下での細胞の生体外増殖及び成長のための装置であって、 酸素に透過性の柔軟性材料よりなり、細胞と培養培地の混合物を受け入れるよう に適合させた少なくとも２つの連続した培養サブ区画室であって、与えられたサ ブ区画室からの培養培地及び細胞を少なくとも次の連続したサブ区画室に無菌的 に移送できるように潜在的に液連通している培養サブ区画室；与えられたサブ区 画室と次の連続したサブ区画室との間の液分離を行う取外し可能な外部分離手段 ；予め定められた第１のサブ区画室に培養培地及び特定細胞数の生細胞集団を導 入する手段；及び与えられたサブ区画室から増加した細胞数の生細胞集団を取り 除く手段よりなる装置であって、 与えられたサブ区画室から次の連続したサブ区画室への細胞及び培養培地の移送 によって、かかる移送細胞を追加培養培地及び／または培養スペースを有する次 の連続したサブ区画室に供給し、そこで細胞数を増加させる装置。
2. ２．サブ区画室が１つのサブ区画室の出口から次の連続したサブ区画室の入口に 及ぶ圧縮性管によって潜在的液連通状態にあり、かつ、取外し可能な外部分離手 段が圧縮性管の外測の回りの取外し可能な圧縮クランプよりなる請求項１の装置 。
3. ３．サブ区画室が各サブ区画室から共通の圧縮性管部分に及ぶ圧縮性管によって 潜在的液連通状態にある請求項１の装置。
4. ４．連続したサブ区画室が、柔軟性酸素透過性材料から形成された単一のバッグ 様密閉室に沿って適当な長さで適用した取外し可能な外部区分手段によって形成 され、かつ取外し可能な外部分離手段が該取外し可能な外部区分手段よりなる請 求項１の装置。
5. ５．培養培地の存在下での細胞の生体外増殖及び成長のための容量増加可能な室 であって、 予め定められた表面積及び容量の密閉された総体的培養区画室を画定する柔軟性 酸素透過性材料；該密閉培養区画室を２以上の分離した密閉培養サブ区画室に分 けるために該密閉培養区画室の周囲に沿って取りつけた取外し可能な区分手段で あって、２つの培養サブ区画室の間の該取外し可能な区分手段の取外しによって 液が該分れたサブ区画室間で連通して細胞成長及び増殖のための培養スペースを 形成する区分手段；及び第１の密閉培養サブ区画室に初期充填の細胞及び培養培 地を導入する手段よりなる該室。
6. ６．培養培地中の細胞を生体外培養して特定細胞数の初期生細胞集団からより大 なる細胞数の生細胞集団を生産する方法であって、酸素に対する透過性及び柔軟 性を有する材料より構成され；１つの培養サブ区画室から少なくとも次の連続し た培養サブ区画室への細胞及び液体の無菌移送を可能にするような、次の連続し たサブ区画室との潜在的液連通状態にある少なくとも２つの連続した培養サブ区 画室よりなる培養装置を用意し、生体外細胞に適した酸素を含むガス環境に該装 置を配置し、第１のサブ区画室に培養培地及び特定細胞数の生細胞集団を導入し 、 生細胞集団の細胞数を増加させるために有効な条件を第１培養サブ区画室内で維 持し、 ついで増加した細胞数の生細胞集団及び培養培地を第１のサブ区画室から、追加 の培養培地及び／または培養スペースを備えた次の連続した培養サブ区画室に移 送し、該次の連続した培養サブ区画室内で生細胞集団の細胞数をさらに増加させ るのに有効な条件を維持し、ついで該次の連続した培養サブ区画室からさらに増 加した細胞数の生細胞集団を取り出す工程よりなる該方法。
7. ７．各連続した培養サブ区画室がそこに予め用意した培養培地を含有している請 求項６の方法。
8. ８．各次の連続した培養サブ区画室が前の培養サブ区画室より大なる体積容量を 有している請求項６の方法。