JPH0354463A - Dna断片等の検出システム - Google Patents

Dna断片等の検出システム

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JPH0354463A
JPH0354463A JP7733489A JP7733489A JPH0354463A JP H0354463 A JPH0354463 A JP H0354463A JP 7733489 A JP7733489 A JP 7733489A JP 7733489 A JP7733489 A JP 7733489A JP H0354463 A JPH0354463 A JP H0354463A
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JP
Japan
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rotor
reagent solution
filter
reaction
dna
Prior art date
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Pending
Application number
JP7733489A
Other languages
English (en)
Inventor
Masayoshi Momiyama
政慶 籾山
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Shinsangyo Kaihatsu KK
Aisin Corp
Original Assignee
Aisin Seiki Co Ltd
Shinsangyo Kaihatsu KK
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Publication date
Application filed by Aisin Seiki Co Ltd, Shinsangyo Kaihatsu KK filed Critical Aisin Seiki Co Ltd
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Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は,DNA診断等に用いられるDNA断片などを
,効果的に検出するための検出システムに関する. 〔従来技術] 近年,分子遺伝化学的手法の発展に伴って,種々の遺伝
病の病因や発症機構が,DNA診断で明らかにされてい
る。
このDNA診断は.従来,次のように行われている.即
ち.まず被検体であるヒト,動物等における末梢血,胎
児絨毛などを採取し,そのDNAを制限酵素により切断
する.そして アガロースゲル電気泳動法により.切断
されたDNA@片を分子量の順に分画する.次いで,ゲ
ル上の3i D NA断片を変性後,サザンプロット法
でニトロセルロースやナイロン製の担体フィルター(濾
紙)に転写(トランスファー)する. 一方.目的とする遺伝子に対応するDNA (又はRN
A)を標識したDNAブロープ(反応試薬液)を作威し
ておく.そして.上記担体フィルター上において,相補
的な塩基配列をもつ前記DNA断片と上記DNAプロー
ブとのハイブリッドを形成さセる.然る後,上記DNA
ブローブに相同なDNA断片を検出する.この検出は.
上記標識としての蛍光色素,酵素,放射性同位元素など
の呈色光,β線等を検出することにより行なう.(例え
ば,「実験医学J voj25, N(11 1.  
l 987.特開昭61−47564)。
しかして.本発明は,前記ハイブリッド形威後において
前記DNAプロープと相同なDNA断片を検出する際の
検出システムに関する.ところで,従来,DNA診断に
おける標識としては,前記のごとく,蛍光色素, Rl
 (放射性同位元素),酵素の呈色光などが使われてい
る.また.上記ハイブリッドの形成に当たっては,前記
担体フィルターを,袋状のパッケージ内において.前記
標識したDNAを含む反応試薬液と接触させる.また,
ハイブリッド形威後は,洗浄を行い,次いで.蛍光色素
,Rlはそのシグナルを,また酵素の場合は発色・発光
物質と反応させることにより,発生したシグナルを検出
する. (解決しようとするI題〕 ところで.従来の検出方法では,上記蛍光色素とDNA
断片との接触反応時間が短いと発光強度か弱くて十分な
検出ができない。一方.接触反応時間が長すぎると発光
強度が強《なりすぎ,ノイズも多くなり.正確な検出が
できなかった。それ故,従来は,適当と思われる接触反
応時間で,担体フィルターを蛍光色素溶液から引き上げ
て,検出していた。
また,一方では.一旦発光したものが時間と共に薄くな
るという,いわゆる褪色現象が生し,検出感度が低下し
てしまう。
また,従来は前記のごとく2ハイブリノド形成時に前記
反応試薬液をパッケージに入れて反応させるために1高
価な反応試薬液を多量必要としていた. 本発明はかかる従来の問題点に鑑み,DNA断片等から
発せられる光信号等を順次リアルタイムで検出すること
ができ.かつ反応試薬液量も少なくすることができる,
検出感度に優れた,DNA断片等の検出システムを提供
しようとするものである. 〔課題の解決手段〕 本発明において,DNA断片等の被検出物が固定された
担体フィルターを取り付けるローターと,反応試薬液を
入れて該反応試薬液中に上記ローターを浸漬させるため
の反応槽と,上記ローターを反応槽内において回転させ
るための駆動源と.上記DNA断片等の被検出物から発
せられる光1放射線等の信号を検出する検出器と,該検
出器からの信号を画像としてディスプレイ上に表示する
ための画像表示器とよりなることを特徴とするDNA断
片等の検出システムにある. しかして,上記被検出物としては,DNA,RNA,タ
ンパク等を制限酵素で切断したDNA断片,RNA断片
.タンパクなどがある.本発明において最も注目すべき
ことは,前記担体フィルターをローターの外周に貼着し
,該担体フィルターを反応槽中の反応試薬液.更には洗
浄液に浸漬すると共にローターを回転させ,担体フィル
ター上の被検出物から発せられる光信号等を順次検出器
により検出するようにしたことにある.上記ローターは
円筒状の外周面を有し.電気モ−ター等の駆動源によっ
て回転させられる。反応槽は,反応試薬液.洗浄液を入
れると共に,上記ローター上の担体フィルターを浸漬す
るためのものである.上記洗浄液は.通常3〜5種類を
用いる.そのため,反応槽は,上記反応試薬液,洗浄液
を供給又は排出するための液供給口を有することが望ま
しい(実施例参照)。
また,検出器は,DNA断片等から発せられる光,放射
線等の信号を検出するセンサーである。
該検出器は,反応槽中の担体フィルターに向けて反応槽
の背壁等に設ける。
また,画像表示器は上記検出信号に基づいて担体フィル
ター上のDNA断片の位置をディスプレイ上に表示する
ものである。また,該画像表示器には,必要に応して,
記録装置を設ける。更に上記検出器と画像表示器との間
には,検出器が検出した信号をデータとして取り扱うた
めに数値に変換する画像取込部と,そのデータを処理す
るデータ処理部を設ける。
また.上記検出器の近傍には,担体フィルター上のDN
A断片等を発光させるための光源と.該光を前記担体フ
ィルター上に向けて照射するための送光器を設けること
が好ましい.即ち.標識が生物発光,Rfの場合には上
記送光器は必要としないが,蛍光色素や酵素の場合には
送光器を必要とする. 〔作 用〕 本発明の検出システムにおいては,まずDNA断片等の
被検出物が固定された担体フィルターをローターの外周
に取り付ける.このとき2担体フィルターは,DNA断
片の分両方向がローターを周回するように配置する.次
いで,該ローターを.反応試薬液が入っている反応槽内
に装着すると共に回転させる. この回転により,担体フィルターは反応試薬液に浸漬さ
れ.担体フィルター上のDNA断片が反応試薬液と反応
してハイブリダイゼーシゴンを起こす.ハイブリッド形
威後,反応試薬液を排出し,洗浄液を入れ.担体フィル
ター上の相補結合していないDNAプロープを洗い落と
す.このようにして,3〜4種類の洗浄液で洗浄操作を
行なう.全洗浄を終了した後.検出用の酵素.蛍光色素
が入った溶液を入れ,DNA断片を発光させる.そして
,検出器により上記発光等の信号を検出し画像表示部に
表示させる。なお,上記操作の間,ローターは全て回転
している. それ故,担体フィルター上のDNA断片より発せられる
呈色光等の信号は常時連続して検出される.そのため,
蛍光色素を加えた後の発光状態が時間と共に強くなって
いく過程の状態も全て検出でき,いわゆるリアルタイム
処理の検出が行われる.それ故,最適発光状態をキャッ
チすることができ,正確なDNA断片検出を行なうこと
ができる. また,担体フィルター上のDNA断片から発せられる個
々の信号は,ローターの回転が1周するごとに検出器で
その都度検出されるため,全てのDNA断片からの信号
が多数回検出される。それ故,これら信号を積算すれば
信号とノイズの部分の差が広がり(S/N比の向上),
検出感度が向上ずる. また.反応槽中の反応試薬液は少量で済むのでコスト低
減となる。
〔効 果〕
したがって,本発明によれば,DNA断片等から発せら
れる光信号等を反応及び洗浄中にリアルタイムで検出す
ることができ,また反応試薬液やDNAブローブ等が少
なくなるうえに,ロータ回転により反応試薬液の撹拌と
共に検体間に高精度で高感度な検出システムを提供する
ことができる.〔実施例〕 本発明の実施例にかかる,DNA断片の検出システムに
つき,第1図ないし第5図を用いて説明する. 本例の検出システムは.第1図にその全体を示すごとく
.担体フィルター2を取り付けるローター1と,反応試
薬液30,或いは洗浄液を入れる反応槽3と,検出器4
5と.画像表示器としての画像表示部48と,光源41
とよりなる.上記ローター■は.第2図に示すごとく,
円筒状の本体10と,その両端に設けたシャフト11と
よりなる。該ローター1の外周には,その円周に沿って
担体フィルター2を,DNA断片21が分両方向となる
ように貼着する。
上記反応槽3は,第3図〜第5図に示すごとく反応試薬
液30を入れる底皿部31と.蓋部32とよりなり,両
者はヒンジ326で結合されている.また.蓋部32は
,取手325を有する.更に,上記底皿部31の下方に
は,反応試薬液30等を供給,排出するための液供給口
36を有する.また,底皿部31,蓋部32は半円状の
空洞311,321を有する(第5図)。また,底皿部
31の一端には.ローター1の回転用のモータ12を.
他端にはローター10の軸受37を設ける.また,第1
図に示すごとく,底皿部31内には,温度コントローラ
351に接続した温度制御用モジュール35を設ける. 次に,第4図,第5図に示すごとく,上記反応槽3の背
面部には.蓋32と底皿部31との間に抹出器45を設
ける.該検出器45は,第2図に示すごとく.ローター
lO上の担体フィルター2に向けて配設されている.該
検出器45は,担体フィルター2の全幅に及ぶ長さを有
し,その先端部に送光器411と画像センサ451とを
有している. しかして,第1図に示すごとく,上記送光器41lは光
′a41に光ファイバーにより接続し,一方画像センサ
451は,画像取込部46,データ処理部47.画像表
示部48に電気的に接続する.次に,上記装置を用いて
検出する方法につき説明する. まず,第1図に示すごとく,反応槽3の底皿部32内に
液供給口36より,反応試薬液溶液30を入れる.該反
応試薬液30は,前記ハイブリダイゼーシゴン反応を行
なう反応試薬液である.この反応試薬液中には,目的と
する遺伝子に対応するDNAと.後述する蛍光色素と反
応する中間物質が含まれている.次に.温度制橢モジュ
ール35により,反応試薬液30を一定温度(例えば.
65゜C,又は42゜Cなど)に加熱保持する.その後
,M部32を開げ3第l図〜第3図に示すごとく担体フ
ィルター2を貼着したローター1を.その両端のシャフ
ト11.11がモータ12.軸受37と連結するよう底
皿部32上に置く.これにより.ローター1と担体フィ
ルター2の下方が反応試薬液30に浸漬される. 次いで,モータ12によりローターlを回転させる.こ
れにより,担体フィルター2上のDNA断片21が反応
試薬液30と接触し,反応試薬液中の前記DNA及び中
間物質とDNA断片21との間でハイブリダイゼーショ
ン反応が起きる.そして.この反応が終わると洗浄工程
を行なう。この洗浄工程では.まず液供給口36より,
上記のハイプリダイゼーション用の反応試薬液を排出し
,新たに洗浄液を入れる.この洗浄は,塩濃度を徐々に
薄くシたものを用いて.4回行なう.上記各洗浄は,約
2時間当て行なう。
そして,上記,洗浄を全て終わってから,検出用の蛍光
色素の入った溶液を入れる.これにより上記蛍光色素と
前記ハイブリダイゼーシゴン時の中間物質とが反応し,
発光可能となる,この間,ローター1はモータ12によ
って常時回転している。
次いで.光源41より呈色発光し易い波長の光を送光器
411より,阻体フィルター2に向けて当てる。これに
より.担体フィルター2上のDNA断片21と結合した
前記蛍光色素がこの光によって励起され.発光色素が光
を出す. そこで,この光を,検出器45の画像センサー451に
より検出し,その情報を画像取込部46に送る.画像取
込部46では上記光信号の情報をデータに変換し,更に
データ処理部47で画像として処理し,ローター1の回
転によって担体フィルター2から順次繰り返し送られて
くるデータを積算する。そして,画像表示部48のディ
スプレイ上において,DNA断片21の状態が表示され
る. しかして,上記のローター1の回転,検出ないし表示操
作は,前記の反応開始時から.検出終了まで常時行われ
ている.そのため,標識としてR【を用いた場合には画
像表示部には,この間の全ての情報,即ち反応試薬液と
の反応過程におけるDNA断片2lの状態が連続して表
示され,更には記録される.一方.上記のごとく洗浄後
に蛍光物質を加えて発光させる場合は,この後に連続し
て上記検出がなされる.また.ハイブリダイゼーション
当初より蛍光を出す物質を結合させておいた場合には,
前記ハイプリダイゼーション中及びその洗浄後全てのと
きに上記検出ができる。
それ故.担体フィルター2上の状態をリアルタイムで処
理することができる.即ち.上記発光は,前記のごとく
,蛍光色素を入れた後には徐々に発光力を強めていくが
.本システムはこの変化過程を逐次検出できるためリア
ルタイムで検出できる.なお,従来は,前記のごとく,
蛍光色素溶液に担体フィルターを入れた後,適当な時間
後に蛍光色素溶液から担体フィルターを出して検出して
いたため,発光が不充分又は多すぎてノイズを拾ってし
まい検出精度が悪かった. また,本例においては.ローターが■回転する毎に,担
体フィルター上の情報が再度得られるので,何度も同じ
情報を繰り返し入手することができ,検出感度を上げる
ことができる. また,反応試薬液30は,反応槽3の底部に少量入れ,
これに回転する担体フィルター2を何度も浸漬して使用
することができるので,その量を少量とすることができ
る.
【図面の簡単な説明】
第1図〜第5図は実施例にかかる検出システムを示し第
1図はその全体図,第2図はローター及び検出器の斜視
図,第3図は反応槽の一部断面正面図,第4図は反応槽
の背面図,第5図は蓋を開けた状態の反応槽の平面図で
ある. l 2. 2 1. 3. 3 1. 4 5、 ローター 担体フィルター DNA断片, 反応槽, 底皿部, 検出器, 第1図 第2図 第4 図 第5帯

Claims (1)

    【特許請求の範囲】
  1. DNA断片等の被検出物が固定された担体フィルターを
    取り付けるローターと、反応試薬液を入れて該反応試薬
    液中に上記ローターを浸漬させるための反応槽と、上記
    ローターを反応槽内において回転させるための駆動源と
    、上記DNA断片等の被検出物から発せられる光、放射
    線等の信号を検出する検出器と、該検出器からの信号を
    画像としてディスプレイ上に表示するための画像表示器
    とよりなることを特徴とするDNA断片等の検出システ
    ム。
JP7733489A 1989-03-28 1989-03-28 Dna断片等の検出システム Pending JPH0354463A (ja)

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Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2009156285A (ja) * 2007-12-25 2009-07-16 Daifuku Co Ltd 棒状部材と被取付け板部との連結構造

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