JPH0355119B2 - - Google Patents
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Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
〔産業上の利用分野〕
本発明は分析素子に関し、更に詳しくは、過酸
化水素、特にピルビン酸にピルビン酸オキシダー
ゼを作用させることにより生成した過酸化水素を
検出、定量する分析素子に関する。 〔従来技術〕 従来、過酸化水素又は過酸化水素を生成する物
質を測定する方法は、多くの開発がなされてきた
が、それらは大別して、溶液内で反応が行われる
反応系と固相担体内で行われる反応系の二種類に
分けることができる。溶液系における分析反応
（以下ウエツト・ケミストリイーと略す）は用手
法と呼ばれる全く機械を用いない分析方法から自
動分析機器まで幅広く知られている。特に臨床化
学の分野においてはその進歩が著しく、近年種種
の臨床検査用自動定量分析機器が病院の臨床検査
室に導入されている。 上記ウエツト・ケミストリイーにおける過酸化
水素を生成する物質を検出する反応系としては、
グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼを酵
素として用い、色原体としてα−ナフトール及び
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ−フエニレンジアミン硫酸
塩等を用いる反応が知られており、更には、特開
昭55−13068号公報に示されているように、各種
のトランスアミナーゼを基質に作用させ直接ピル
ビン酸を生成させるか、あるいは他の酵素が関与
する化学反応又は酵素が関与しない化学反応を介
してピルビン酸を生成させ、生成したピルビン酸
にピルビン酸オキシダーゼとペルオキシダーゼを
含む過酸化水素検出呈色指示薬組成物とを作用さ
せて比色法によりピルビン酸を測定するトランス
アミナーゼ活性定量法が知られている。 上記方法は、水溶液中で一連の化学反応を進行
させる方法で、精密な秤量や煩雑な水溶液の取扱
いを必要とし、熟練した操作技術が要求されると
共に分析操作にばく大な時間が必要であるという
大きな欠点を有する。 これに対して固相の分析反応（以下、ドライ・
ケミストリイーと略す）を用いる分析法も広範に
用いられているが、これらは紙等に試薬を含浸
させた形で提供される。 上記の紙は、例えば米国特許第3050373号あ
るいは同第3061523号各明細書等に記載されてい
るように紙のごとき吸水性繊維質担体に試薬溶
液を含浸させ、乾燥させて作られるものである。
これらは一般に分析試験紙又は単に試験片と呼称
されるもので、上記の試験片上に流体試料を滴下
するか、又は流体試料中へ試験片を浸漬させ試験
片の色変化又は濃度変化を肉眼判定か、又は反射
濃度計により測定し、流体試料中の特定成分の濃
度レベルを決定するものである。 これらの試験片は、その取扱いが簡便であり、
且つ直ちに結果が得られるので有用ではあるが、
その構成上から半定量又は定性分析の領域にとど
まつている。 一方、上述のごとき従来の分析方法に対して操
作性の簡便なドライ・ケミストリイーを用い、そ
の上高い定量性を有する多層分析素子が知られて
いる。例えば特公昭53−21677号、特開昭55−
164356号、同57−125847号、同57−197466号及び
同58−90167号各公報等に上記多層分析素子が記
載されている。 更にペルオキシダーゼが触媒し、あるいは関与
する過酸化水素を比色法により定量するための多
層分析素子も種種提案されている。例えば特開昭
49−53888号、同51−40191号、同53−131089号、
同54−29700号、同55−124499号各公報に記載さ
れたものなどが挙げられる。しかし、トランスア
ミナーゼ等の微量の活性しか持たないものを測定
するためには、酵素反応が充分に進行し、生成し
た色素が高い吸光度を持ち、試薬及び生成した色
素が測定するまでは、泳動や拡散により移動を起
さないことが必要となつてくる。特開昭57−
144996号公報に記載された多層分析素子では、上
記酵素反応が進行し、生成した色素等の泳動や拡
散に対して不充分であるばかりか、生成した色素
の吸光度という点に関しても不充分であり、トラ
ンスアミナーゼ等の微量活性測定においては、よ
り高い吸光度を持つた色素を生成させることによ
り識別能の上昇が必須となつてくる。 また、ペルオキシダーゼの保存安定性について
も問題がある。分析素子を長時間保存した場合、
その保存安定性は、精密さを必要とする分析素子
において欠くことのできない性質であり、保存安
定性の面からみて更に満足な分析素子の開発が望
まれている。 〔発明の目的〕 本発明は、前記した従来技術の問題点を解消す
るためになされたものであり、その第１の目的
は、ピルビン酸オキシダーゼの経時変化による失
活を低減させ、保存性を維持させることにある。
また第２の目的は、過酸化水素を生成する物質を
定量するための分析素子を提供することにある。
更に第３の目的は、試料を滴下した際に、試料中
の物質が触媒となつて起る酵素反応を円滑に進行
させることにある。更にまた第４の目的は、試薬
及び生成した色素の移動を起さない分析素子を提
供することにある。そして本発明の第５の目的
は、高い吸光度を有する色素を生成させることに
より、識別能つまり定量感度が向上した分析素子
を提供することにある。 〔発明の構成〕 本発明を概説すれば、本発明は過酸化水素分析
素子に関する発明であつて、支持体上に、ピルビ
ン酸オキシダーゼを含有する層を有する過酸化水
素分析素子において、カプラーとして耐拡散性カ
プラーを使用し、且つ水数が６〜13の物質を使用
したことを特徴とする。 本発明者等は、前記した従来公知のピルビン酸
オキシダーゼ、カプラー、水素供与体、及びペル
オキシダーゼ作用を持つ物質を含有する過酸化水
素分析素子の欠点、特に保存安定性を改良するた
め鋭意検討を行つた結果、本発明を完成させたも
のである。 まず、本発明で使用する耐拡散性カプラーにつ
いて説明すると、従来公知のものは拡散性である
点で本発明と異なる。耐拡散性カプラーは、従来
公知のカプラーを耐拡散性としたものであり、そ
の例には耐拡散性としたピラゾロン系、ナフトー
ル系、フエノール系、又はアシルアセトアミド系
化合物がある。 本発明で使用する耐拡散性ピラゾロン系化合物
は、ピラゾロン系化合物を耐拡散性にしておくこ
とができる大きさ及び立体配置を有する基（以
下、バラスト基と称す）をピラゾリン核上に置換
したピラゾロン系化合物であつて、芳香族第１級
アミン化合物の酸化体とカツプリングして色素を
生成しうる化合物である。 該バラスト基としては、炭素原子数８以上を有
する有機基が好ましく、ポリマー鎖であつてもよ
い。 該耐拡散性ピラゾロン系化合物としては、ピラ
ゾリン核上に該バラスト基を有する化合物であつ
て、該ピラゾリン核の４−位が置換されていない
化合物又は４−位に置換基を有する場合には、該
置換基は該ピラゾロン系化合物が芳香族第１級ア
ミン化合物の酸化体とカツプリング反応する際に
離脱しうる基（以下、離脱基と称する）、若しく
は原子（以下、離脱原子と称する）である化合物
が挙げられる。 該バラスト基の存在により、ピラゾロン系化合
物の耐拡散化が可能となり、本発明の目的を達成
することができる。 該バラスト基が離脱基であつてもよく、生成す
る色素は、カツプリング反応による分子量増加に
より、拡散性を小さくできる。しかしながら生成
する色素を充分に耐拡散化するという点で特に好
ましいのは、該バラスト基が離脱基でない場合で
ある。 本発明において有利に用いられる耐拡散性ピラ
ゾロン系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びR′1は１価の有機基又は原子を表
し、Ｚは水素原子、離脱基又は離脱原子を表し、
R1，R′1及びＺの少なくとも１つはバラスト基で
ある。 Ｚで表される離脱原子としては、ハロゲン原子
例えば、塩素原子、臭素原子が挙げられる。 Ｚで示される離脱基としては、例えば−OR2、
−OCOR2、−OSO2R2、−SR2、−OCONHR2、−
OSO2NHR2、
化水素、特にピルビン酸にピルビン酸オキシダー
ゼを作用させることにより生成した過酸化水素を
検出、定量する分析素子に関する。 〔従来技術〕 従来、過酸化水素又は過酸化水素を生成する物
質を測定する方法は、多くの開発がなされてきた
が、それらは大別して、溶液内で反応が行われる
反応系と固相担体内で行われる反応系の二種類に
分けることができる。溶液系における分析反応
（以下ウエツト・ケミストリイーと略す）は用手
法と呼ばれる全く機械を用いない分析方法から自
動分析機器まで幅広く知られている。特に臨床化
学の分野においてはその進歩が著しく、近年種種
の臨床検査用自動定量分析機器が病院の臨床検査
室に導入されている。 上記ウエツト・ケミストリイーにおける過酸化
水素を生成する物質を検出する反応系としては、
グルコースオキシダーゼ、ペルオキシダーゼを酵
素として用い、色原体としてα−ナフトール及び
Ｎ，Ｎ−ジメチル−ｐ−フエニレンジアミン硫酸
塩等を用いる反応が知られており、更には、特開
昭55−13068号公報に示されているように、各種
のトランスアミナーゼを基質に作用させ直接ピル
ビン酸を生成させるか、あるいは他の酵素が関与
する化学反応又は酵素が関与しない化学反応を介
してピルビン酸を生成させ、生成したピルビン酸
にピルビン酸オキシダーゼとペルオキシダーゼを
含む過酸化水素検出呈色指示薬組成物とを作用さ
せて比色法によりピルビン酸を測定するトランス
アミナーゼ活性定量法が知られている。 上記方法は、水溶液中で一連の化学反応を進行
させる方法で、精密な秤量や煩雑な水溶液の取扱
いを必要とし、熟練した操作技術が要求されると
共に分析操作にばく大な時間が必要であるという
大きな欠点を有する。 これに対して固相の分析反応（以下、ドライ・
ケミストリイーと略す）を用いる分析法も広範に
用いられているが、これらは紙等に試薬を含浸
させた形で提供される。 上記の紙は、例えば米国特許第3050373号あ
るいは同第3061523号各明細書等に記載されてい
るように紙のごとき吸水性繊維質担体に試薬溶
液を含浸させ、乾燥させて作られるものである。
これらは一般に分析試験紙又は単に試験片と呼称
されるもので、上記の試験片上に流体試料を滴下
するか、又は流体試料中へ試験片を浸漬させ試験
片の色変化又は濃度変化を肉眼判定か、又は反射
濃度計により測定し、流体試料中の特定成分の濃
度レベルを決定するものである。 これらの試験片は、その取扱いが簡便であり、
且つ直ちに結果が得られるので有用ではあるが、
その構成上から半定量又は定性分析の領域にとど
まつている。 一方、上述のごとき従来の分析方法に対して操
作性の簡便なドライ・ケミストリイーを用い、そ
の上高い定量性を有する多層分析素子が知られて
いる。例えば特公昭53−21677号、特開昭55−
164356号、同57−125847号、同57−197466号及び
同58−90167号各公報等に上記多層分析素子が記
載されている。 更にペルオキシダーゼが触媒し、あるいは関与
する過酸化水素を比色法により定量するための多
層分析素子も種種提案されている。例えば特開昭
49−53888号、同51−40191号、同53−131089号、
同54−29700号、同55−124499号各公報に記載さ
れたものなどが挙げられる。しかし、トランスア
ミナーゼ等の微量の活性しか持たないものを測定
するためには、酵素反応が充分に進行し、生成し
た色素が高い吸光度を持ち、試薬及び生成した色
素が測定するまでは、泳動や拡散により移動を起
さないことが必要となつてくる。特開昭57−
144996号公報に記載された多層分析素子では、上
記酵素反応が進行し、生成した色素等の泳動や拡
散に対して不充分であるばかりか、生成した色素
の吸光度という点に関しても不充分であり、トラ
ンスアミナーゼ等の微量活性測定においては、よ
り高い吸光度を持つた色素を生成させることによ
り識別能の上昇が必須となつてくる。 また、ペルオキシダーゼの保存安定性について
も問題がある。分析素子を長時間保存した場合、
その保存安定性は、精密さを必要とする分析素子
において欠くことのできない性質であり、保存安
定性の面からみて更に満足な分析素子の開発が望
まれている。 〔発明の目的〕 本発明は、前記した従来技術の問題点を解消す
るためになされたものであり、その第１の目的
は、ピルビン酸オキシダーゼの経時変化による失
活を低減させ、保存性を維持させることにある。
また第２の目的は、過酸化水素を生成する物質を
定量するための分析素子を提供することにある。
更に第３の目的は、試料を滴下した際に、試料中
の物質が触媒となつて起る酵素反応を円滑に進行
させることにある。更にまた第４の目的は、試薬
及び生成した色素の移動を起さない分析素子を提
供することにある。そして本発明の第５の目的
は、高い吸光度を有する色素を生成させることに
より、識別能つまり定量感度が向上した分析素子
を提供することにある。 〔発明の構成〕 本発明を概説すれば、本発明は過酸化水素分析
素子に関する発明であつて、支持体上に、ピルビ
ン酸オキシダーゼを含有する層を有する過酸化水
素分析素子において、カプラーとして耐拡散性カ
プラーを使用し、且つ水数が６〜13の物質を使用
したことを特徴とする。 本発明者等は、前記した従来公知のピルビン酸
オキシダーゼ、カプラー、水素供与体、及びペル
オキシダーゼ作用を持つ物質を含有する過酸化水
素分析素子の欠点、特に保存安定性を改良するた
め鋭意検討を行つた結果、本発明を完成させたも
のである。 まず、本発明で使用する耐拡散性カプラーにつ
いて説明すると、従来公知のものは拡散性である
点で本発明と異なる。耐拡散性カプラーは、従来
公知のカプラーを耐拡散性としたものであり、そ
の例には耐拡散性としたピラゾロン系、ナフトー
ル系、フエノール系、又はアシルアセトアミド系
化合物がある。 本発明で使用する耐拡散性ピラゾロン系化合物
は、ピラゾロン系化合物を耐拡散性にしておくこ
とができる大きさ及び立体配置を有する基（以
下、バラスト基と称す）をピラゾリン核上に置換
したピラゾロン系化合物であつて、芳香族第１級
アミン化合物の酸化体とカツプリングして色素を
生成しうる化合物である。 該バラスト基としては、炭素原子数８以上を有
する有機基が好ましく、ポリマー鎖であつてもよ
い。 該耐拡散性ピラゾロン系化合物としては、ピラ
ゾリン核上に該バラスト基を有する化合物であつ
て、該ピラゾリン核の４−位が置換されていない
化合物又は４−位に置換基を有する場合には、該
置換基は該ピラゾロン系化合物が芳香族第１級ア
ミン化合物の酸化体とカツプリング反応する際に
離脱しうる基（以下、離脱基と称する）、若しく
は原子（以下、離脱原子と称する）である化合物
が挙げられる。 該バラスト基の存在により、ピラゾロン系化合
物の耐拡散化が可能となり、本発明の目的を達成
することができる。 該バラスト基が離脱基であつてもよく、生成す
る色素は、カツプリング反応による分子量増加に
より、拡散性を小さくできる。しかしながら生成
する色素を充分に耐拡散化するという点で特に好
ましいのは、該バラスト基が離脱基でない場合で
ある。 本発明において有利に用いられる耐拡散性ピラ
ゾロン系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びR′1は１価の有機基又は原子を表
し、Ｚは水素原子、離脱基又は離脱原子を表し、
R1，R′1及びＺの少なくとも１つはバラスト基で
ある。 Ｚで表される離脱原子としては、ハロゲン原子
例えば、塩素原子、臭素原子が挙げられる。 Ｚで示される離脱基としては、例えば−OR2、
−OCOR2、−OSO2R2、−SR2、−OCONHR2、−
OSO2NHR2、
【式】
【式】−SCNが挙げられる。ここ
にR2及びR3は水素原子、脂肪族炭化水素残基、
脂環式化合物残基、アリール基又はヘテロ環残基
を表す。 R1及びR′1は一般式〔〕におけるR1及びR′1
と同義であり、Ｒは水素原子又はフエニル基を表
す。 該フエニル基は置換基を有していてもよく、該
置換基としては、例えば、塩素原子のごときハロ
ゲン原子が挙げられる。 R1及びR′1で表される原子としては水素原子が
挙げられる。 R1及びR′1で表される一価の有機基としては、
例えば、脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残
基、ヘテロ環残基、アリール基、−SCN、−OR4、
−OCOR4、−OSO2R4、−SR4、−OCONHR4、−
OSO2NHR4、
脂環式化合物残基、アリール基又はヘテロ環残基
を表す。 R1及びR′1は一般式〔〕におけるR1及びR′1
と同義であり、Ｒは水素原子又はフエニル基を表
す。 該フエニル基は置換基を有していてもよく、該
置換基としては、例えば、塩素原子のごときハロ
ゲン原子が挙げられる。 R1及びR′1で表される原子としては水素原子が
挙げられる。 R1及びR′1で表される一価の有機基としては、
例えば、脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残
基、ヘテロ環残基、アリール基、−SCN、−OR4、
−OCOR4、−OSO2R4、−SR4、−OCONHR4、−
OSO2NHR4、
【式】
【式】
【式】挙げられる。
ここにR4及びR5は水素原子、脂肪族炭化水素
残基、脂環式化合物残基、アリール基又はヘテロ
環残基を表す。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表される 脂肪族炭化水素残基としては飽和のもの不飽和
のもののいずれでもよく、また直鎖のもの、分岐
のもののいずれでもよい。そして好ましくはアル
キル基（例えばメチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、
イソブチル基、ドデシル基、オクタデシル基の各
基）アルケニル基（例えばアリル基、オクテニル
基等の各基）である。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表される脂環
式化合物残基としては５又は６員のもの、例えば
シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられ
る。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表されるヘテ
ロ環残基としてはピリジニル基、パラジニル基、
ピリダジニル基、キノリル基、ピロリジル基、チ
エニル基、ピペリジル基、ピロリル基、ピロリニ
ル基、テトラゾリル基、チアジニル基、イソダゾ
リル基、モルホリノ基、フリル基、オキサゾリル
基、チアゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベン
ゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基等の各基
が代表的である。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表されるアリ
ール基としてはフエニル基、ナフチル基が代表的
である。 以上のR1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表され
る脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリ
ール基、及びヘテロ環残基は置換基を有していて
もよい。 かかる置換基としては、例えばハロゲン原子
（例えば塩素原子、フツ素原子）、ニトロ基、シア
ノ基、水酸基、ケト基、カルボキシル基、スルホ
基、アミノ基（例えば、アミノ、アルキルアミ
ノ、ジアルキルアミノ、アニリノ、Ｎ−アルキル
アニリノ）、アルキル基（例えば、メチル、プロ
ピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、オクタデシ
ル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルアルキ
ル）、アルケニル基、アリール基（例えば、フエ
ニル、トリル、アセチルアミノフエニル、４−ラ
ウロイルアミノフエニル、エトキシフエニル）ヘ
テロ環残基、アルコキシ基（例えば、エトキシ、
メトキシ、テトラデシルオキシ）、アリールオキ
シ基（例えば、フエノキシ、２，４−ジ−ｔ−ペ
ンチルフエノキシ、ｐ−ｔ−ブチルフエノキシ、
４−ドデシルオキシフエノキシ、４−ヒドロキシ
−３−ｔ−ｎ−ブチルフエノキシ、４−ヒドロキ
シ−３−ｎ−ブチルフエノキシ）、アリールチオ
基、アミド基（例えば、アセトアミド、メタンス
ルホンアミド、ｐ−ドデシルベンゼンスルホンア
ミド）、カルバモイル基（例えば、Ｎ−ｐ−カル
ボキシメトキシフエニルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−
ジヘキシルカルバモイル、Ｎ−ベンジルカルバモ
イル、Ｎ−エチルカルバモイル、Ｎ−メトキシエ
チルカルバモイル）、スルフアモイル基（例えば、
Ｎ，Ｎ−ジエチルスルフアモイル）、アルキルス
ルホニル基、アリールスルホニル基（例えば、ベ
ンゼンスルホニル、ｍ−クロロベンゼンスルホニ
ル）、アシル基（例えば、アセチル、ｐ−クロロ
ベンゾイル、ベンゾイル）、アシルオキシ基（例
えば、アセチルオキシ、ｍ−クロロベンゾイルオ
キシ）、アシルオキシカルボニル基（例えば、ア
セチルオキシカルボニル）、アルコキシカルボニ
ル基（例えば、Ｎ−メトキシエチルカルバモイル
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メト
キシカルボニル、２，２，２−トリメチルエトキ
シカルボニル）、アリールオキシカルボニル基
（例えば、フエノキシカルボニル、ｐ−ニトロフ
エノキシカルボニル）、アリールチオカルボニル
基（例えば、フエニルチオカルボニル）、イミド
基（例えば、スクシンイミド、オクタデシルスク
シンイミド）が挙げられる。 パラスト基としては、炭素原子数８以上のもの
が好ましく、ポリマー鎖であつてもよいが、通常
は炭素原子数８〜36である。一般式〔〕におい
ては、R1及びR′1の少なくとも１つがバラスト基
であることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される化合物のうち、好
ましいものは、下記一般式〔〕で示される化合
物である。 一般式〔〕： 式中、R1及びＺはそれぞれ一般式〔〕にお
けるR1及びＺと同義である。 Ｑは前記のR′1におけるごときアルキル基若し
くはアリール基である。 Ｗは
残基、脂環式化合物残基、アリール基又はヘテロ
環残基を表す。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表される 脂肪族炭化水素残基としては飽和のもの不飽和
のもののいずれでもよく、また直鎖のもの、分岐
のもののいずれでもよい。そして好ましくはアル
キル基（例えばメチル基、エチル基、プロピル
基、イソプロピル基、ブチル基、ｔ−ブチル基、
イソブチル基、ドデシル基、オクタデシル基の各
基）アルケニル基（例えばアリル基、オクテニル
基等の各基）である。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表される脂環
式化合物残基としては５又は６員のもの、例えば
シクロペンチル基、シクロヘキシル基が挙げられ
る。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表されるヘテ
ロ環残基としてはピリジニル基、パラジニル基、
ピリダジニル基、キノリル基、ピロリジル基、チ
エニル基、ピペリジル基、ピロリル基、ピロリニ
ル基、テトラゾリル基、チアジニル基、イソダゾ
リル基、モルホリノ基、フリル基、オキサゾリル
基、チアゾリル基、ベンゾイミダゾリル基、ベン
ゾオキサゾリル基、ベンゾチアゾリル基等の各基
が代表的である。 R1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表されるアリ
ール基としてはフエニル基、ナフチル基が代表的
である。 以上のR1、R′1、R2、R3、R4及びR5で表され
る脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリ
ール基、及びヘテロ環残基は置換基を有していて
もよい。 かかる置換基としては、例えばハロゲン原子
（例えば塩素原子、フツ素原子）、ニトロ基、シア
ノ基、水酸基、ケト基、カルボキシル基、スルホ
基、アミノ基（例えば、アミノ、アルキルアミ
ノ、ジアルキルアミノ、アニリノ、Ｎ−アルキル
アニリノ）、アルキル基（例えば、メチル、プロ
ピル、イソプロピル、ｔ−ブチル、オクタデシ
ル、シアノアルキル、ハロアルキル、アルアルキ
ル）、アルケニル基、アリール基（例えば、フエ
ニル、トリル、アセチルアミノフエニル、４−ラ
ウロイルアミノフエニル、エトキシフエニル）ヘ
テロ環残基、アルコキシ基（例えば、エトキシ、
メトキシ、テトラデシルオキシ）、アリールオキ
シ基（例えば、フエノキシ、２，４−ジ−ｔ−ペ
ンチルフエノキシ、ｐ−ｔ−ブチルフエノキシ、
４−ドデシルオキシフエノキシ、４−ヒドロキシ
−３−ｔ−ｎ−ブチルフエノキシ、４−ヒドロキ
シ−３−ｎ−ブチルフエノキシ）、アリールチオ
基、アミド基（例えば、アセトアミド、メタンス
ルホンアミド、ｐ−ドデシルベンゼンスルホンア
ミド）、カルバモイル基（例えば、Ｎ−ｐ−カル
ボキシメトキシフエニルカルバモイル、Ｎ，Ｎ−
ジヘキシルカルバモイル、Ｎ−ベンジルカルバモ
イル、Ｎ−エチルカルバモイル、Ｎ−メトキシエ
チルカルバモイル）、スルフアモイル基（例えば、
Ｎ，Ｎ−ジエチルスルフアモイル）、アルキルス
ルホニル基、アリールスルホニル基（例えば、ベ
ンゼンスルホニル、ｍ−クロロベンゼンスルホニ
ル）、アシル基（例えば、アセチル、ｐ−クロロ
ベンゾイル、ベンゾイル）、アシルオキシ基（例
えば、アセチルオキシ、ｍ−クロロベンゾイルオ
キシ）、アシルオキシカルボニル基（例えば、ア
セチルオキシカルボニル）、アルコキシカルボニ
ル基（例えば、Ｎ−メトキシエチルカルバモイル
メトキシカルボニル、エトキシカルボニル、メト
キシカルボニル、２，２，２−トリメチルエトキ
シカルボニル）、アリールオキシカルボニル基
（例えば、フエノキシカルボニル、ｐ−ニトロフ
エノキシカルボニル）、アリールチオカルボニル
基（例えば、フエニルチオカルボニル）、イミド
基（例えば、スクシンイミド、オクタデシルスク
シンイミド）が挙げられる。 パラスト基としては、炭素原子数８以上のもの
が好ましく、ポリマー鎖であつてもよいが、通常
は炭素原子数８〜36である。一般式〔〕におい
ては、R1及びR′1の少なくとも１つがバラスト基
であることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される化合物のうち、好
ましいものは、下記一般式〔〕で示される化合
物である。 一般式〔〕： 式中、R1及びＺはそれぞれ一般式〔〕にお
けるR1及びＺと同義である。 Ｑは前記のR′1におけるごときアルキル基若し
くはアリール基である。 Ｗは
【式】又は
【式】
【式】又は
【式】又
は
【式】若しくは−NHCO−又は−
CONH−であり、Y1及びY2はそれぞれ水素原
子、ハロゲン原子、各各１〜10個の炭素原子を有
するアルキル基若しくはアルコキシ基であり、Ｂ
は水素原子若しくは１〜10個の炭素原子を有する
アルキル基であり、Ｄは−NHCO−、−CONH
−、−NHSO2−、−SO2NH−、
子、ハロゲン原子、各各１〜10個の炭素原子を有
するアルキル基若しくはアルコキシ基であり、Ｂ
は水素原子若しくは１〜10個の炭素原子を有する
アルキル基であり、Ｄは−NHCO−、−CONH
−、−NHSO2−、−SO2NH−、
【式】又は
【式】若しくは
【式】又は
【式】であ
り、A′及びA″はそれぞれ単なる結合手、−Ｏ−、
−Ｓ−、−SO2−若しくは−NR′−であり、R′は
水素原子、１〜10個の炭素原子を有するアルキル
基、アリール基若しくはアシル基であり、R″は
１〜20個の炭素原子を有するアルキル基である。
Ｑ、Y1、Y2、Ｂ、R′及びR″で表されるアルキル
基、並びにＱ、R′1で表されるアリール基は、置
換基を有していてもよい。 かかる置換基としては、前記一般式〔〕にお
けるR′1が有していてもよい置換基として挙げた
ものが挙げられる。 代表的な具体例としては、特開昭57−94656号
公報に記載された化合物等が挙げられる。 本発明で有用な耐拡散性ナフトール系化合物
は、ナフトール系化合物を耐拡散性にすることが
できるバラスト基がナフタレン核上に結合したナ
フトール系化合物であつて、芳香族第１級アミン
化合物の酸化体とカツプリングして色素を生成し
うる化合物である。 バラスト基については既述と同義である。 該耐拡散性ナフトール系化合物としては、ナフ
タレン核上に該バラスト基を有するα−ナフトー
ル系化合物であつて、水酸基の２−位及び４−位
のいずれか一つが置換されている化合物、又は２
−位及び４−位のすべてが置換基を有する場合に
は、該置換基の少なくとも１つが離脱基若しくは
離脱原子である化合物が挙げられる。 該耐拡散性ナフトール系化合物の中でも好まし
いのは水酸基の４−位が置換されていない、又は
離脱基若しくは離脱原子で置換されているα−ナ
フトール系化合物であつて、上記カツプリング反
応により離脱しないバラスト基をナフタレン核上
に有する耐拡散性ナフトール系化合物である。 本発明において有利に用いられる耐拡散性ナフ
トール系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びＺは式と同義であり、ｋは０〜
６の整数であり、R1及びＺの少なくとも１つは
バラスト基である。ｋが２〜６の場合、各R1は
同一又は異なつていてよく、また、２つのR1が
該ナフタレン環上の隣接する位置に結合した場合
には、該２つのR1は結合して該ナフタレン環に
融合した非芳香族環を形成してもよい。 前述の２つのR1が結合して形成するナフタレ
ン環に融合する非芳香族環としては５又は６員の
もの例えばシクロペンタン環、シクロヘキサン
環、シクロヘキセン環が挙げられる。 以上のR1、R2、R3、R4及びR5で表される脂肪
族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリール
基、ヘテロ環残基、並びに前述の２つのR1が結
合して形成する非芳香族環は置換基を有していて
もよい。かかる置換基の例としては既述のものが
挙げられるが、その他に１−ヒドロキシナフチル
基でもよい。 前記式〔〕においては、R1の少なくとも１
つがバラスト基であること、またｋは１〜５であ
ることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される本発明に係る化合
物のうち、好ましいものは下記一般式〔〕で示
される化合物である。 一般式〔〕： 式中、R1及びＺはそれぞれ前記一般式〔〕
におけるR1及びＺと同義であり、その例として
は同じ原子及び基を挙げることができる。 R6は水素原子、脂肪族炭化水素残基、脂環式
化合物残基、アリール基又はヘテロ環残基を表
す。 R7は脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残基、
アリール基、ヘテロ環残基、アシル基及び−SO2
−R′6基又はカルバモイル基を表す。 ｌは１〜５の整数である。ｌが２〜５の場合、
各R1は同一でも異なつていてもよい。 R1、Ｚ及び
−Ｓ−、−SO2−若しくは−NR′−であり、R′は
水素原子、１〜10個の炭素原子を有するアルキル
基、アリール基若しくはアシル基であり、R″は
１〜20個の炭素原子を有するアルキル基である。
Ｑ、Y1、Y2、Ｂ、R′及びR″で表されるアルキル
基、並びにＱ、R′1で表されるアリール基は、置
換基を有していてもよい。 かかる置換基としては、前記一般式〔〕にお
けるR′1が有していてもよい置換基として挙げた
ものが挙げられる。 代表的な具体例としては、特開昭57−94656号
公報に記載された化合物等が挙げられる。 本発明で有用な耐拡散性ナフトール系化合物
は、ナフトール系化合物を耐拡散性にすることが
できるバラスト基がナフタレン核上に結合したナ
フトール系化合物であつて、芳香族第１級アミン
化合物の酸化体とカツプリングして色素を生成し
うる化合物である。 バラスト基については既述と同義である。 該耐拡散性ナフトール系化合物としては、ナフ
タレン核上に該バラスト基を有するα−ナフトー
ル系化合物であつて、水酸基の２−位及び４−位
のいずれか一つが置換されている化合物、又は２
−位及び４−位のすべてが置換基を有する場合に
は、該置換基の少なくとも１つが離脱基若しくは
離脱原子である化合物が挙げられる。 該耐拡散性ナフトール系化合物の中でも好まし
いのは水酸基の４−位が置換されていない、又は
離脱基若しくは離脱原子で置換されているα−ナ
フトール系化合物であつて、上記カツプリング反
応により離脱しないバラスト基をナフタレン核上
に有する耐拡散性ナフトール系化合物である。 本発明において有利に用いられる耐拡散性ナフ
トール系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びＺは式と同義であり、ｋは０〜
６の整数であり、R1及びＺの少なくとも１つは
バラスト基である。ｋが２〜６の場合、各R1は
同一又は異なつていてよく、また、２つのR1が
該ナフタレン環上の隣接する位置に結合した場合
には、該２つのR1は結合して該ナフタレン環に
融合した非芳香族環を形成してもよい。 前述の２つのR1が結合して形成するナフタレ
ン環に融合する非芳香族環としては５又は６員の
もの例えばシクロペンタン環、シクロヘキサン
環、シクロヘキセン環が挙げられる。 以上のR1、R2、R3、R4及びR5で表される脂肪
族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリール
基、ヘテロ環残基、並びに前述の２つのR1が結
合して形成する非芳香族環は置換基を有していて
もよい。かかる置換基の例としては既述のものが
挙げられるが、その他に１−ヒドロキシナフチル
基でもよい。 前記式〔〕においては、R1の少なくとも１
つがバラスト基であること、またｋは１〜５であ
ることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される本発明に係る化合
物のうち、好ましいものは下記一般式〔〕で示
される化合物である。 一般式〔〕： 式中、R1及びＺはそれぞれ前記一般式〔〕
におけるR1及びＺと同義であり、その例として
は同じ原子及び基を挙げることができる。 R6は水素原子、脂肪族炭化水素残基、脂環式
化合物残基、アリール基又はヘテロ環残基を表
す。 R7は脂肪族炭化水素残基、脂環式化合物残基、
アリール基、ヘテロ環残基、アシル基及び−SO2
−R′6基又はカルバモイル基を表す。 ｌは１〜５の整数である。ｌが２〜５の場合、
各R1は同一でも異なつていてもよい。 R1、Ｚ及び
【式】の少なくとも１つは
バラスト基である。
R1としては、ハロゲン原子、アルキル基、ア
リール基、アシル基、
リール基、アシル基、
【式】及び−
SO2R9が好ましい。
ここにR8は水素原子又はアルキル基を表し、
R′6及びR9はアルキル基又はアリール基を表す。
これらの中でもR1としてはハロゲン原子、アル
キル基、
R′6及びR9はアルキル基又はアリール基を表す。
これらの中でもR1としてはハロゲン原子、アル
キル基、
【式】が好ましい。
該ハロゲン原子としては、塩素原子、臭素原子
が好ましい。 R1、R′6、R8及びR9で表されるアルキル基とし
ては、前述のR1で表されるアルキル基として挙
げたものが挙げられる。R1で表されるアルキル
基としては炭素原子数１〜８のもの（例えば、メ
チル、トリフルオロメチル、ジフルオロフエニル
メチル）が好ましく、中でもメチル基が好まし
い。 R8としては水素原子又は炭素原子数１又は２
のアルキル基が好ましく、特に水素原子又はメチ
ル基が好ましい。 R9及びR′6で表されるアリール基としては前述
のR5で表されるアリール基として挙げたものが
挙げられる。 R1、R′6、R9として表される上記アルキル基、
アリール基は置換基を有していてもよく、その例
としては前述のR1、R2、R3、R4及びR5で表わさ
れるアルキル基、アリール基の置換基として挙げ
たものが挙げられる。 R6としては、水素原子又は炭素原子数１〜18
のアルキル基が好ましい。 R7としては、アルキル基又はアリール基が好
ましい。 R7で表されるアルキル基、アリール基として
は前述のR4として挙げたものが挙げられ、更に
置換基を有していてもよい。 該置換基としては前述のR4として挙げたアル
キル基、アリール基の置換基として挙げたものが
挙げられる。 Ｚとしては、水素原子、−Ｏ−R12、−
NHSO2R13が好ましく、特に水素原子が好まし
い。 ここにR12及びR13はアルキル基又はアリール
基を表す。 このアルキル基及びアリール基としては、前述
のR2として挙げたものが挙げられ、更に前述の
R2の置換基として挙げたものを置換基として有
していてもよい。 一般式〔〕においては、基R1及び
が好ましい。 R1、R′6、R8及びR9で表されるアルキル基とし
ては、前述のR1で表されるアルキル基として挙
げたものが挙げられる。R1で表されるアルキル
基としては炭素原子数１〜８のもの（例えば、メ
チル、トリフルオロメチル、ジフルオロフエニル
メチル）が好ましく、中でもメチル基が好まし
い。 R8としては水素原子又は炭素原子数１又は２
のアルキル基が好ましく、特に水素原子又はメチ
ル基が好ましい。 R9及びR′6で表されるアリール基としては前述
のR5で表されるアリール基として挙げたものが
挙げられる。 R1、R′6、R9として表される上記アルキル基、
アリール基は置換基を有していてもよく、その例
としては前述のR1、R2、R3、R4及びR5で表わさ
れるアルキル基、アリール基の置換基として挙げ
たものが挙げられる。 R6としては、水素原子又は炭素原子数１〜18
のアルキル基が好ましい。 R7としては、アルキル基又はアリール基が好
ましい。 R7で表されるアルキル基、アリール基として
は前述のR4として挙げたものが挙げられ、更に
置換基を有していてもよい。 該置換基としては前述のR4として挙げたアル
キル基、アリール基の置換基として挙げたものが
挙げられる。 Ｚとしては、水素原子、−Ｏ−R12、−
NHSO2R13が好ましく、特に水素原子が好まし
い。 ここにR12及びR13はアルキル基又はアリール
基を表す。 このアルキル基及びアリール基としては、前述
のR2として挙げたものが挙げられ、更に前述の
R2の置換基として挙げたものを置換基として有
していてもよい。 一般式〔〕においては、基R1及び
【式】の少なくとも１つがバラスト基で
あることが好ましい。
本発明で使用する耐拡散性ナフトール系化合物
の具体的な例としては、特開昭57−94655号公報
に記載された化合物等が挙げられる。 本発明で有用な耐拡散性フエノール系化合物
は、フエノール系化合物を耐拡散性にすることが
できるバラスト基がベンゼン核上に結合したフエ
ノール系化合物であつて、芳香族第１級アミン化
合物の酸化体とカツプリングして色素を生成しう
る化合物である。 バラスト基については既述と同義である。 該耐拡散性フエノール系化合物としては、ベン
ゼン核上に該バラスト基を有するフエノール系化
合物であつて、水酸基のｏ−位及びｐ−位の少な
くとも１つが置換されていない化合物、又はｏ−
位及びｐ−位のすべてが置換基を有する場合に
は、該置換基の少なくとも１つが離脱基若しくは
離脱原子である化合物が挙げられる。 該耐拡散性フエノール系化合物の中でも好まし
いのは水酸基のｐ−位が置換されていない、又は
離脱基若しくは離脱原子で置換されているフエノ
ール系化合物であつて、上記カツプリング反応に
より離脱しないバラスト基をベンゼン核上に有す
る耐拡散性フエノール系化合物である。 本発明において有利に用いられる耐拡散性フエ
ノール系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びＺは一般式〔〕と同義であり、
ｍは０〜４の整数であり、R1及びＺの少なくと
も１つはバラスト基である。ｍが２〜４の場合、
各R1は同一又は異なつていてもよく、また、２
つのR1が該ベンゼン環上の隣接する位置に結合
した場合には、該２つのR1は結合して該ベンゼ
ン環に融合した非芳香族環を形成してもよい。 前述の２つのR1が結合して形成するベンゼン
環に融合する非芳香族環としては５又は６員のも
の例えばシクロペンタン環、シクロヘキサン環、
シクロヘキセン環が挙げられる。 以上のR1、R2、R3、R4及びR5で表される脂肪
族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリール
基、ヘテロ環残基、並びに前述の２つのR1が結
合して形成する非芳香族環は置換基を有していて
もよい。かかる置換基の例としては既述のものが
挙げられるが、その地に１−ヒドロキシフエニル
基でもよい。 前記式〔〕においては、R1の少なくとも１
つがバラスト基であること、またｍは１〜３であ
ることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される本発明に係る化合
物のうち、好ましいものは下記一般式〔〕で示
される化合物である。 一般式〔〕： 式中、R1、R6、R7及びＺは式〔〕における
と同義であり、ｎは０〜３の整数であり、ｎが２
又は３の場合、各R1は同一でも異なつていても
よい。 R7としては、−CO−R11で示される基が好まし
い。ここにR11はアルキル基又はアリール基を表
す。 R11で表されるアルキル基、アリール基として
は前述のR4として挙げたものが挙げられ、更に
置換基を有していてもよい。 該置換基としては前述のR4として挙げたアル
キル基、アリール基の置換基として挙げたものが
挙げられる。 Ｚとしては、水素原子、ハロゲン原子、−Ｏ−
R12、−Ｏ−CO−R13が好ましい。 ここにR12及びR13はアルキル基又はアリール
基を表す。 このアルキル基及びアリール基としては、前述
のR2として挙げたものが挙げられ、更に前述の
R2の置換基として挙げたものを置換基として有
していてもよい。 ｎは０〜２、特に１又は２が好ましい。 本発明で使用する、耐拡散性フエノール系化合
物の具体的な例としては、特開昭57−94653号公
報に記載された化合物等が挙げられる。 本発明に有用な耐拡散性アシルアセトアミド系
化合物は、該アシルアセトアミド化合物を耐拡散
性にしておくことができるバラスト基を有するア
シルアセトアミド化合物であつて、芳香族第１級
アミン化合物の酸化体とカツプリングして色素を
生成しうる化合物である。 本発明の化合物としては下記一般式〔〕で示
されるものが有用である。 一般式〔〕： 式中、R1、R′1及びＺは式〔〕と同義であ
り、R″1は水素原子、脂肪族炭化水素残基、脂環
式化合物残基、ヘテロ環残基又はアリール基を表
し、R1、R′1、R″1及びＺの少なくとも１つはバ
ラスト基である。 Ｚで表される離脱基としては、例えば−OR2、
−OCOR2、−OSO2R2、−SR2、−OCONHR2、−
OSO2NHR2、
の具体的な例としては、特開昭57−94655号公報
に記載された化合物等が挙げられる。 本発明で有用な耐拡散性フエノール系化合物
は、フエノール系化合物を耐拡散性にすることが
できるバラスト基がベンゼン核上に結合したフエ
ノール系化合物であつて、芳香族第１級アミン化
合物の酸化体とカツプリングして色素を生成しう
る化合物である。 バラスト基については既述と同義である。 該耐拡散性フエノール系化合物としては、ベン
ゼン核上に該バラスト基を有するフエノール系化
合物であつて、水酸基のｏ−位及びｐ−位の少な
くとも１つが置換されていない化合物、又はｏ−
位及びｐ−位のすべてが置換基を有する場合に
は、該置換基の少なくとも１つが離脱基若しくは
離脱原子である化合物が挙げられる。 該耐拡散性フエノール系化合物の中でも好まし
いのは水酸基のｐ−位が置換されていない、又は
離脱基若しくは離脱原子で置換されているフエノ
ール系化合物であつて、上記カツプリング反応に
より離脱しないバラスト基をベンゼン核上に有す
る耐拡散性フエノール系化合物である。 本発明において有利に用いられる耐拡散性フエ
ノール系化合物は次の一般式〔〕で示すことが
できる。 一般式〔〕： 式中R1及びＺは一般式〔〕と同義であり、
ｍは０〜４の整数であり、R1及びＺの少なくと
も１つはバラスト基である。ｍが２〜４の場合、
各R1は同一又は異なつていてもよく、また、２
つのR1が該ベンゼン環上の隣接する位置に結合
した場合には、該２つのR1は結合して該ベンゼ
ン環に融合した非芳香族環を形成してもよい。 前述の２つのR1が結合して形成するベンゼン
環に融合する非芳香族環としては５又は６員のも
の例えばシクロペンタン環、シクロヘキサン環、
シクロヘキセン環が挙げられる。 以上のR1、R2、R3、R4及びR5で表される脂肪
族炭化水素残基、脂環式化合物残基、アリール
基、ヘテロ環残基、並びに前述の２つのR1が結
合して形成する非芳香族環は置換基を有していて
もよい。かかる置換基の例としては既述のものが
挙げられるが、その地に１−ヒドロキシフエニル
基でもよい。 前記式〔〕においては、R1の少なくとも１
つがバラスト基であること、またｍは１〜３であ
ることが好ましい。 前記一般式〔〕で示される本発明に係る化合
物のうち、好ましいものは下記一般式〔〕で示
される化合物である。 一般式〔〕： 式中、R1、R6、R7及びＺは式〔〕における
と同義であり、ｎは０〜３の整数であり、ｎが２
又は３の場合、各R1は同一でも異なつていても
よい。 R7としては、−CO−R11で示される基が好まし
い。ここにR11はアルキル基又はアリール基を表
す。 R11で表されるアルキル基、アリール基として
は前述のR4として挙げたものが挙げられ、更に
置換基を有していてもよい。 該置換基としては前述のR4として挙げたアル
キル基、アリール基の置換基として挙げたものが
挙げられる。 Ｚとしては、水素原子、ハロゲン原子、−Ｏ−
R12、−Ｏ−CO−R13が好ましい。 ここにR12及びR13はアルキル基又はアリール
基を表す。 このアルキル基及びアリール基としては、前述
のR2として挙げたものが挙げられ、更に前述の
R2の置換基として挙げたものを置換基として有
していてもよい。 ｎは０〜２、特に１又は２が好ましい。 本発明で使用する、耐拡散性フエノール系化合
物の具体的な例としては、特開昭57−94653号公
報に記載された化合物等が挙げられる。 本発明に有用な耐拡散性アシルアセトアミド系
化合物は、該アシルアセトアミド化合物を耐拡散
性にしておくことができるバラスト基を有するア
シルアセトアミド化合物であつて、芳香族第１級
アミン化合物の酸化体とカツプリングして色素を
生成しうる化合物である。 本発明の化合物としては下記一般式〔〕で示
されるものが有用である。 一般式〔〕： 式中、R1、R′1及びＺは式〔〕と同義であ
り、R″1は水素原子、脂肪族炭化水素残基、脂環
式化合物残基、ヘテロ環残基又はアリール基を表
し、R1、R′1、R″1及びＺの少なくとも１つはバ
ラスト基である。 Ｚで表される離脱基としては、例えば−OR2、
−OCOR2、−OSO2R2、−SR2、−OCONHR2、−
OSO2NHR2、
【式】
以下、本発明を更に詳細に説明すべく実施例を
示すが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。 実施例 １ 膜厚約180μｍの透明な下引き済みポリエチレ
ンテレフタレート支持体上に表１に示す組成で本
発明の試薬層１〜９及び比較の試薬層をそれぞれ
乾燥膜厚35μｍになるように設け、次いで本発明
試薬層及び比較試薬層上に、表２に示す組成の展
開層を設け、表３に示す本発明分析素子（試料番
号１〜９）及び比較分析素子（試料番号１〜３）
を作成した。 なお、本発明分析素子で使用した９種の耐拡散
性カプラーの既述の例示化合物の番号は、１から
順番に−１、−19、−27、−28、−
29、−５、−20、−１、−18である。 これらの試料に、400IU／のGPT活性を含む
血清10μをスポツトし、次いで37℃で10分間保
温後サクラデンシトメーターPDA−65（小西六写
真工業社製）を用いて、発色スポツトの中心部と
周辺部の反射濃度を10回測定した。その平均値を
表４に示す。
示すが、本発明はこれらにより何ら限定されるも
のではない。 実施例 １ 膜厚約180μｍの透明な下引き済みポリエチレ
ンテレフタレート支持体上に表１に示す組成で本
発明の試薬層１〜９及び比較の試薬層をそれぞれ
乾燥膜厚35μｍになるように設け、次いで本発明
試薬層及び比較試薬層上に、表２に示す組成の展
開層を設け、表３に示す本発明分析素子（試料番
号１〜９）及び比較分析素子（試料番号１〜３）
を作成した。 なお、本発明分析素子で使用した９種の耐拡散
性カプラーの既述の例示化合物の番号は、１から
順番に−１、−19、−27、−28、−
29、−５、−20、−１、−18である。 これらの試料に、400IU／のGPT活性を含む
血清10μをスポツトし、次いで37℃で10分間保
温後サクラデンシトメーターPDA−65（小西六写
真工業社製）を用いて、発色スポツトの中心部と
周辺部の反射濃度を10回測定した。その平均値を
表４に示す。
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
【表】
この結果から、比較試料の発色スポツトでは、
リンギングと呼ばれる好ましくない色素の片寄り
現象が観察されるが本発明の試料は均一な発色で
ありリンギングが認められず、色素の片寄り現象
が観察されない。 実施例 ２ 実施例１で作成した本発明分析素子にユニキヤ
ツトGPT（中外製薬社製）で15I.U／、53I.U／
、215I.U／、400I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様にし
て発色スポツトを測定した。結果を表５に示す。
リンギングと呼ばれる好ましくない色素の片寄り
現象が観察されるが本発明の試料は均一な発色で
ありリンギングが認められず、色素の片寄り現象
が観察されない。 実施例 ２ 実施例１で作成した本発明分析素子にユニキヤ
ツトGPT（中外製薬社製）で15I.U／、53I.U／
、215I.U／、400I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様にし
て発色スポツトを測定した。結果を表５に示す。
【表】
上記結果より本発明の分析素子は血清滴下によ
る発色濃度において、比較の分析素子に対してよ
り高い濃度差が確認され、より高い識別能を持つ
ことが明らかである。 実施例 ３ Ｌ−アラニンをアスパラギン酸8.3ｇ／m2に代
え、オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ5000ユニツ
トを加えた以外は実施例１と同一組成を持つ
GOT測定用分析素子−10〜−18及び比較の分析
素子４〜６を作成し、GOT活性既知のGOT含有
血清10μをスポツトし、実施例１及び実施例２
と同様な操作で発色スポツトの中心部及び各活性
値を有する血清滴下時の反射濃度を測定した。そ
の結果実施例１と同様、発色は均一であり、実施
例２と同様、比較の分析素子に比べて良好な検量
線が得られた。 実施例 ４ Ｌ−アラニン、α−ケトグルタル酸の代りに乳
酸を10ｇ／m2加えた以外は実施例１と同一組成を
持つLDH測定用分析素子（19〜27）及び比較の
分析素子（７〜９）を作成し、LDH活性既知の
LDH含有生理食塩水10μをスポツトし、実施例
１及び実施例２と同様な操作で発色スポツトの中
心部及び各活性値を有する血清滴下時の反射濃度
を測定した。その結果実施例１と同様、発色は均
一であり、実施例２と同様、比較分析素子に比べ
て良好な検量線が得られた。 実施例 ５ 実施例１で作成した本発明の分析素子（試料番
号２、４、８）に高沸点有機溶媒としてフタル酸
ジ−ｎ−ブチルエステル（水数8.00）、フタル酸
ジ−ｎ−オクチルエステル（水数6.34）、Ｎ−ｎ
−ドデシル−２−ピロリドン（水数10.45）、Ｎ−
オレイル−２−ピロリドン（水数8.90）、ラウリ
ン酸ジ−ｎ−ブチルアミド（水数7.08）、リン酸
トリ（2′−メチルフエニル）エステル（水数
8.48）を用いて本発明の分析素子28〜33を作成し
た。 更にリン酸ジメチルエチルエステル（水数13
超）を用いて同様に作成した分析素子及び高沸点
有機溶媒を加えないで作成した分析素子を比較の
分析素子10〜15とした。（表６）
る発色濃度において、比較の分析素子に対してよ
り高い濃度差が確認され、より高い識別能を持つ
ことが明らかである。 実施例 ３ Ｌ−アラニンをアスパラギン酸8.3ｇ／m2に代
え、オキザロ酢酸デカルボキシラーゼ5000ユニツ
トを加えた以外は実施例１と同一組成を持つ
GOT測定用分析素子−10〜−18及び比較の分析
素子４〜６を作成し、GOT活性既知のGOT含有
血清10μをスポツトし、実施例１及び実施例２
と同様な操作で発色スポツトの中心部及び各活性
値を有する血清滴下時の反射濃度を測定した。そ
の結果実施例１と同様、発色は均一であり、実施
例２と同様、比較の分析素子に比べて良好な検量
線が得られた。 実施例 ４ Ｌ−アラニン、α−ケトグルタル酸の代りに乳
酸を10ｇ／m2加えた以外は実施例１と同一組成を
持つLDH測定用分析素子（19〜27）及び比較の
分析素子（７〜９）を作成し、LDH活性既知の
LDH含有生理食塩水10μをスポツトし、実施例
１及び実施例２と同様な操作で発色スポツトの中
心部及び各活性値を有する血清滴下時の反射濃度
を測定した。その結果実施例１と同様、発色は均
一であり、実施例２と同様、比較分析素子に比べ
て良好な検量線が得られた。 実施例 ５ 実施例１で作成した本発明の分析素子（試料番
号２、４、８）に高沸点有機溶媒としてフタル酸
ジ−ｎ−ブチルエステル（水数8.00）、フタル酸
ジ−ｎ−オクチルエステル（水数6.34）、Ｎ−ｎ
−ドデシル−２−ピロリドン（水数10.45）、Ｎ−
オレイル−２−ピロリドン（水数8.90）、ラウリ
ン酸ジ−ｎ−ブチルアミド（水数7.08）、リン酸
トリ（2′−メチルフエニル）エステル（水数
8.48）を用いて本発明の分析素子28〜33を作成し
た。 更にリン酸ジメチルエチルエステル（水数13
超）を用いて同様に作成した分析素子及び高沸点
有機溶媒を加えないで作成した分析素子を比較の
分析素子10〜15とした。（表６）
【表】
【表】
これらの分析素子にユニキツトGPT（中外製薬
社製）で15I.U／、215I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様に37
℃で10分間保温した後にλnaxが580nｍのフイルタ
ーを用いて支持体側から反射濃度を測定した。結
果を表７に示す。
社製）で15I.U／、215I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様に37
℃で10分間保温した後にλnaxが580nｍのフイルタ
ーを用いて支持体側から反射濃度を測定した。結
果を表７に示す。
【表】
【表】
上記結果より水数６〜13の高沸点有機溶媒を用
いた場合には21日間保存後も即日と変らず良好な
検量線が得られた。 実施例 ６ 実施例３のGOT測定用分析素子−10〜−18及
びＬ−アラニンをアスパラギン酸8.3ｇ／m2に代
えた以外は実施例５と同一組成を持つGOT測定
用比較分析素子（試料番号16〜21）を作成し、実
施例５と同様に保存性を確認した。その結果、本
発明の分析素子は実施例５と同様、21日間保存後
も即日と変らず良好な検量線が得られた。 実施例 ７ 実施例４のLDH分析素子（19〜27）及びＬ−
アラニンとα−ケトグルタル酸を乳酸に代えた以
外は実施例５と同一組成を持つLDH用比較分析
素子を作成し、保存性を確認した。 その結果、本発明の分析素子は実施例５と同
様、21日間保存後も即日と変らず良好な検量線が
得られた。 実施例 ８ 実施例１において、耐拡散性カプラーとして、
例示化合物の番号−２で表されるα−ベンゾイ
ル−２−クロロ−５−〔γ−（２，４−ジ−ｔ−ペ
ンチルフエノキシ）ブタンアミド〕アセトアニリ
ドを4.1×10-2モルと、表１中の化合物Ｎ−ｎ−
ドデシル−２−ピロリドンを4.1×10-2モルを用
いて、本発明の分析素子34を作成した。 表４に示した「中心と周辺部の反射濃度差」は
0.012であつた。 実施例 ９ 実施例８で作成した本発明分析素子34を、実施
例２に記載のように使用した。その反射光学濃度
を、下記表８に示す。
いた場合には21日間保存後も即日と変らず良好な
検量線が得られた。 実施例 ６ 実施例３のGOT測定用分析素子−10〜−18及
びＬ−アラニンをアスパラギン酸8.3ｇ／m2に代
えた以外は実施例５と同一組成を持つGOT測定
用比較分析素子（試料番号16〜21）を作成し、実
施例５と同様に保存性を確認した。その結果、本
発明の分析素子は実施例５と同様、21日間保存後
も即日と変らず良好な検量線が得られた。 実施例 ７ 実施例４のLDH分析素子（19〜27）及びＬ−
アラニンとα−ケトグルタル酸を乳酸に代えた以
外は実施例５と同一組成を持つLDH用比較分析
素子を作成し、保存性を確認した。 その結果、本発明の分析素子は実施例５と同
様、21日間保存後も即日と変らず良好な検量線が
得られた。 実施例 ８ 実施例１において、耐拡散性カプラーとして、
例示化合物の番号−２で表されるα−ベンゾイ
ル−２−クロロ−５−〔γ−（２，４−ジ−ｔ−ペ
ンチルフエノキシ）ブタンアミド〕アセトアニリ
ドを4.1×10-2モルと、表１中の化合物Ｎ−ｎ−
ドデシル−２−ピロリドンを4.1×10-2モルを用
いて、本発明の分析素子34を作成した。 表４に示した「中心と周辺部の反射濃度差」は
0.012であつた。 実施例 ９ 実施例８で作成した本発明分析素子34を、実施
例２に記載のように使用した。その反射光学濃度
を、下記表８に示す。
【表】
実施例 10
実施例８で作成した本発明分析素子34を、実施
例３に記載のように使用して本発明の分析素子35
を、また実施例４に記載のように使用して本発明
の分析素子36を作成した。いずれも各例と同等の
結果が得られた。 実施例 11 実施例８で使用した番号−２の化合物を使用
して、実施例５と同様にして、本発明の分析素子
37及び38、比較の分析素子16及び17を作成した。
その組成のうち、表６と異なる下段の部分を下記
表９に示す。
例３に記載のように使用して本発明の分析素子35
を、また実施例４に記載のように使用して本発明
の分析素子36を作成した。いずれも各例と同等の
結果が得られた。 実施例 11 実施例８で使用した番号−２の化合物を使用
して、実施例５と同様にして、本発明の分析素子
37及び38、比較の分析素子16及び17を作成した。
その組成のうち、表６と異なる下段の部分を下記
表９に示す。
【表】
これらの分析素子にユニツトGPT（中外製薬社
製）で15I.U／、215I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様に37
℃で10分間保温した後にλnaxが450nｍのフイルタ
ーを用いて支持体側から反射濃度を測定した。結
果を表10に示す。
製）で15I.U／、215I.U／、690I.U／の
GPT活性を有することを確認したGPT含有生理
食塩水10μをスポツトし、実施例１と同様に37
℃で10分間保温した後にλnaxが450nｍのフイルタ
ーを用いて支持体側から反射濃度を測定した。結
果を表10に示す。
本発明の分析素子は、ピルビン酸オキシダーゼ
の経時変化による失活を低減させ、保存性を向上
でき、分析時の酵素反応が円滑に進行し、試薬及
び生成した色素の移動を起さず、また高い吸光度
を有する色素を生成するため、識別能つまり定量
感度が向上するなど格別顕著な効果を持つてい
る。
の経時変化による失活を低減させ、保存性を向上
でき、分析時の酵素反応が円滑に進行し、試薬及
び生成した色素の移動を起さず、また高い吸光度
を有する色素を生成するため、識別能つまり定量
感度が向上するなど格別顕著な効果を持つてい
る。
Claims (1)
- １ 支持体上に、ピルビン酸オキシダーゼを含有
する層を有する過酸化水素分析素子において、カ
プラーとして耐拡散性カプラーを使用し、且つ水
数が６〜13の物質を使用したことを特徴とする過
酸化水素分析素子。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15314983A JPS6047696A (ja) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | 過酸化水素分析素子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP15314983A JPS6047696A (ja) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | 過酸化水素分析素子 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6047696A JPS6047696A (ja) | 1985-03-15 |
| JPH0355119B2 true JPH0355119B2 (ja) | 1991-08-22 |
Family
ID=15556087
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP15314983A Granted JPS6047696A (ja) | 1983-08-24 | 1983-08-24 | 過酸化水素分析素子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6047696A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2058705A1 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-13 | Canon Kabushiki Kaisha | Toner and image forming process |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS6060861U (ja) * | 1983-06-01 | 1985-04-27 | 佐々木 浩一 | 単一画像で錯視的に立体感覚受画像を与えるテレビ受像用ブラウン管の構造 |
| JPS625239A (ja) * | 1985-07-01 | 1987-01-12 | Konishiroku Photo Ind Co Ltd | ハロゲン化銀写真感光材料 |
-
1983
- 1983-08-24 JP JP15314983A patent/JPS6047696A/ja active Granted
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2058705A1 (en) | 2007-11-08 | 2009-05-13 | Canon Kabushiki Kaisha | Toner and image forming process |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6047696A (ja) | 1985-03-15 |
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