JPH0360839B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

ソマトスタチンは構造 を有し、環状ドデカペプチドを含有するテトラデ
カペプチドであり、生育ホルモンの放出を阻害
し、インシユリンおよびグルカゴンの放出を阻害
し、胃液の分泌を減少させるという性質を有す
る。 ソマトスタチンは、生体内において、なかんず
くアミノペプチダーゼおよびカルボキシペプチダ
ーゼによつて不活性化されるので、それ自身の作
用は短時間しか持続しない。作用時間が短いとい
うこの問題は、皮下注射すると徐々に放出される
低溶解性のソマトスタチンの誘導体を調製すると
いうことによつて当業界においては既に部分的に
は解決されている。しかし、ひとたび溶解する
と、この誘導体は、ソマトスタチン自身よりもア
ミノペプチダーゼおよびカルボキシペプチダーゼ
による不活化に対しより安定ではない。ソマトス
タチンの不安定性を解決する他の試みは、より小
さい環を形成し、配位的に制約を受けた類縁体を
調製することであつた。 本発明は、なかんずく環を形成しているアミノ
酸のうちの７個が１個のＤ−アミノ酸によつて置
換され、環外のアミノ酸の両方が除去されたソマ
トスタチンの誘導体である環状ヘキサペプチドを
供給するものである。この環状ヘキサペプチド
は、Ｄ−レトロ配位という改質された形をとつて
いる。残りのアミノ酸の置換および反応について
も更に記述される。この環状ヘキサペプチドは、
グルカゴン、生育ホルモンおよびインシユリンの
放出を阻害し、胃酸の分泌を阻害する。より詳細
には本化合物は、胃液の分泌のレベルに影響する
ことなく、あるいはインシユリンとグルカゴンの
分泌のレベルに影響することなく、生育ホルモン
の放出を選択的に阻害する。或いは本化合物は、
胃酸の分泌を阻害する場合もある。従つて、本化
合物はソマトスタチンよりもより選択的な生物活
性を有する。本化合物の環状ヘキサペプチド構造
により、ソマトスタチンよりも活性が長続きす
る。本発明の環状ヘキサペプチドは、巨端症、糖
尿病、糖尿性網膜症、および消化性潰瘍の治療に
有用である。 従つて、Ｄ−レトロ環状ヘキサペプチドソマト
スタチン類縁体を記載することが本発明の１目的
である。更にもう１つの目的は、そのようなＤ−
レトロヘキサペプチドの調製方法を記載すること
である。更に他の目的は、巨端症、糖尿性網膜症
および消化性潰瘍を治療するための、そのような
化合物の使用に関しての記載をすることである。
更に他の目的は以下の記載から明らかとなるであ
ろう。 本発明の化合物は、以下の構造式 によつて最も良く了解される。 式中、R₁はベンジルであり、 R₂はベンジルまたはｐ−ヒドロキシベンジル
であり、 R₃は３−インドリルメチルまたは置換３−イ
ンドリルメチル（置換基は低級アルキル、低級ア
ルコキシまたはハロゲンである）であり、 R₄はイソプロピルまたは１−ヒドロキシエチ
ルであり、 R₅はメチルまたはエチルであり、および印
（＊）をつけてある２個の不整中心は、両者が同
一でなければＤまたはＬのどちらでもよい。一
方、他の不整中心はＤである。 術語“低級アルキル”は、本出願中において
は、１−５の炭素原子を有する直鎖または分枝鎖
のアルキル基を表わすことを意図している。その
ようなものの例として、メチル、エチル、プロピ
ル、イソプロピル、ブチル、２級−ブチル、ペン
チル等が挙げられる。 術語“低級アルコオキシ”は、直鎖または分枝
鎖の１−５の炭素原子から成るアルコオキシ基を
含有することを意図している。そのようなアルコ
オキシ基の例として、メトキシ、エトキシ、プロ
ポキシ、イソプロポキシ、ブトキシ、３級−ブト
キシ、ペントキシ等が挙げられる。 術語“ハロゲン”または“ハロ”は弗素、塩
素、臭素、沃素を含めることを意図している。 当業界に精通している人にとつて、R₁および
R₂がベンジルであり、R₃がインドリルメチルで
あり、R₄が１−ヒドロキシエチルの場合、ソマ
トスタチンの７，８，９，10および11のアミノ酸
（−Phe−Trp−Lys−Thr−Phe−）はＤ−レト
ロ型であり、ソマトスタチンの11−位がＮ−メチ
ル−Ｄ−フエニルアラニンで表わされる２級アミ
ノ酸を含有し、R₅がメチルである場合、Ｄ−ア
ラニンで表わされるソマトスタチンの６−位のア
ミノ酸がソマトスタチンの残りのアミノ酸の代り
となつているということが理解されるであろう。
従つて、上述の置換基の定義を用いると、以下の
代表的なソマトスタチンの環状ヘキサペプチド類
縁体が形成される。 本発明の環状ヘキサペプチドの好ましい具体例
は、上述の式において R₁とR₂は上で定義した通りであり、 R₃は３−インドリルメチルであり、 R₄はヒドロキシエチルまたはイソプロピルで
あり、 R₅はメチルまたはエチルのものである。 これら好ましい化合物には、以下のものが含ま
れる。 シクロ−（Ｄ−Abu−Ｎ−Me−Ｄ−Phe−Ｄ−
Val−Ｌ−Lys−Ｄ−Trp−Ｄ−Tyr） シクロ−（Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−Phe−Ｄ−
Thr−Ｌ−Lys−Ｄ−Trp−Ｄ−Phe） シクロ−（Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−Phe−Ｄ−
Val−Ｌ−Lys−Ｄ−Trp−Ｄ−Phe） シクロ−（Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−Phe−Ｄ−
Thr−Ｄ−Lys−Ｌ−Trp−Ｄ−Phe） 本出願において、アミノ酸成分、或る種の好ま
しい保護基、試薬および溶媒に対して省略記号が
用いられている。それらの省略記号の意味は表
に示してある。

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】

【表】 本発明に従つて、新規Ｄ−レトロ環状ヘキサペ
プチドソマトスタチン類縁体は、相当する直鎖ペ
プチドの環化によつて調製される。直鎖ペプチド
は固相連続合成法を用いて調製される。従つて、
本発明の環状ヘキサペプチドソマトスタチン類縁
体の調製方法は、ａ）アミノ酸を １ H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH，R₄CH
（NH₂）COOH， R₁CH（NHCH₃）COOH，R₅CH（NH₂）
COOH， R₂CH（NH₂）COOH，R₃C^*Ｈ（NH₂）
COOH， ２ R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
COOH， R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
COOH， R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH，H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ
（NH₂）COOH， ３ R₁CH（NHCH₃）COOH，R₅CH（NH₂）
COOH， R₂CH（NH₂）COOH，R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH，R₄CH
（NH₂）COOH， ４ R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
COOH， R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH，H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ
（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
COOH， ５ R₂CH（NH₂）COOH，R₃C^*Ｈ（NH₂）
COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH，R₄CH
（NH₂）COOH， R₁CH（NHCH₃）COOH，R₅CH（NH₂）
COOH，又は ６ R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH，H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ
（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
COOH， R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
COOH， （R₁，R₂，R₃，R₄，R₅及び印（＊）は前述
の定義と同じである。） のいづれかの順序に固相法により結合して、固相
樹脂に結合し保護した直鎖状ペプチドを調整し、
ｂ）Ｎ−末端アミノ基を選択的に脱保護し、ｃ）
樹脂から直鎖状ペプチドを除去し、ｄ）直鎖ペプ
チドを環化剤で処理し、アミド結合を形成させる
ことによつて環状ヘキサペプチドを得、ｅ）側鎖
の保護基を除去することから成る。 樹脂上で直鎖状ペプチドを調製する場合、直鎖
ペプチド中のアミド酸配列が、所望するソマトス
タチン類縁体のものに相当するならば、どのアミ
ノ酸をＣ−末端に選ぶかは一般的に言つて重要で
はない。直鎖ペプチドがひとたび環化すれば、ど
のアミノ酸が直鎖ペプチドのＣ−末端に位置して
いたかもはや決定できなくなる。 直鎖ペプチドは環化されるから、ペプチド鎖の
最初にどのアミノ酸を選ぶかは一般的に重要では
ないが、他のアミノ酸よりもあるアミノ酸を好ま
しいとする因子が存在することもある。例えば、
TrpはBOC基を除去したときに形成されるｔ−
ブチルカルボニウムイオンと反応し得る。従つ
て、直鎖ペプチドのＮ−末端にTrpを導入する反
応順序を選択する場合、Trpは最後に付加せざる
を得なくなり、それによつてｔ−ブチルカルボニ
ウムイオンとの接触機会をできるだけ少なくす
る。例えば、ペプチド中に２個のインドールを含
有する部分が存在する場合、この型の選択が常に
可能になるわけではない。しかし、ペプチド反応
順序を計画する場合、そのような反応性を考慮に
入れなければならない。 固相法による直鎖ペプチドの合成は、クロロメ
チル化樹脂上で段階的に行なう。この樹脂は、ス
チレンを１−２％のジビニルベンゼンと共重合さ
せることによつて調製した合成樹脂の細かいビー
ズ（直径20−70ミクロン）から成つている。樹脂
中のベンゼン環はクロロメチルメチルエーテルと
塩化スズを用いるフリーデルクラフト反応によつ
てクロロメチル化される。フリーデルクラフト反
応は樹脂が１ｇ当り0.5ないし５ミリモルの塩素
を含むようになるまで継続する。 直鎖ペプチドのＣ−末端に選ばれたアミノ酸
は、そのアミノ保護誘導体に変換する。選択した
Ｃ−末端アミノ酸のカルボキシル基を不溶性の重
合した樹脂担体と共有結合によつて、例えばクロ
ロメチル−置換ポリスチレン−ジビニルベンゼン
樹脂中に存在する、樹脂と結合した塩化ベンジル
のカルボン酸エステルとして結合させる。アミノ
保護基を除去した後、次の結合順序のアミノ酸の
アミノ保護誘導体を、ジシクロヘキシルカルボジ
イミドのような縮合剤と共に添加する。アミノ酸
反応物は、例えばONpエステル、アミノ酸アジ
ドのようなカルボキシ−活性化アミノ酸の形にし
て利用される。脱保護化および引き続いてのアミ
ノ酸の付加は、所望する直鎖ペプチドが形成され
るまで行なう。 保護基の選択は、部分的には特定の縮合条件、
部分的には反応に用いるアミノ酸及びペプチド成
分によつて決定される。 通常採用されるアミノ−保護基には、当業界周
知のもの、例えばベンジルオキシ−カルボニル
（カルボベンゾキシ）、Ｐ−メトキシカルボベンゾ
キシ、ｐ−ニトロカルボベンゾキシ、ｔ−ブチル
オキシカルボニル等のウレタン保護置換基が含ま
れる。当該アミノ酸のカルボキシ末端において反
応を行なうアミノ酸中のアミノ基を保護するため
には、ｔ−ブチルオキシカルボニル（BOC）を
利用するのが好ましい。BOC保護基は、そのよ
うな縮合反応の後に、また次の反応に移る前に、
比較的緩和な酸の作用（例えばトリフロロ酢酸、
酢酸エチル中の塩化水素）によつて容易に除去さ
れる。 ThrおよびSerのOH基は、BZl基によつて保護
することが可能であり、Lysのε−アミノ基は、
INOC基または２−クロロベンジルオキシカルボ
ニル（２−Cl−CBZ）基によつて保護すること
が可能である。Lysの場合、ε−アミノ基を２−
Cl−CBZ基によつて保護することが好ましい。
何故ならば、直鎖ペプチドが環化した後、この保
護基はHF処理によつてBZl基と同時に除去され
るからである。INOC基はHFによつて除去され
ず、更にZnで処理することを必要とする。どち
らの基も、BOC保護基を除去するために使用す
るTFAによつて影響されない。直鎖ペプチドが
環化した後、２−Cl−CBZおよびBZlのような保
護基はHFの処理によつて除去される。 固相樹脂上で直鎖ペプチドが形成された後この
ペプチドは当業界周知の種々の方法によつて樹脂
から除去することが可能である。例えば、ペプチ
ドはヒドラジンによつて樹脂から開裂させること
が可能であり、従つてペプチドヒドラジドを直接
形成させ、これをアジドを経由して所望する環状
ペプチドに環化することが可能である。ヒドラジ
ドは、その場で亜硝酸を生成する試薬との反応に
よつて相当するアジドに変換される。この目的に
適した試薬には、塩酸、リン酸などの強酸の存在
下における亜硝酸低級アルキル（例えば、亜硝酸
ｔ−ブチル、亜硝酸イソアミル）またはアルカリ
金属亜硝酸塩（例えば、亜硝酸ナトリウム、亜硝
酸カリウム）が含まれる。この反応は水及び／或
いはジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラ
ン、ジオキサン、クロロホルム、塩化メチレン等
の非水溶媒の存在下、−40℃から＋20℃までの範
囲の温度で実行される。別法として、トリエチル
アミン等の有機塩基の存在下、メタノール等の低
級アルコールで処理することによつてペプチドを
樹脂から除去することが可能であり、この場合、
直鎖ペプチドの相当する低級アルコールエステル
が生成する。生成したエステルはヒドラジドに変
換し、次いでアジドを経由して所望する環状ペプ
チドに環化する。本発明における樹脂からペプチ
ドを解裂させる好ましい方法は、ヒドラジンを使
用することである。 表が示すように、本発明の所望する環状ペプ
チドを調製するための１つの好ましい全操作方法
は、固相樹脂上で直鎖ペプチドを段階的に合成す
ることである。より詳細には、 を調製する方法において、N〓−保護アミノ酸N〓
−BOC−（N〓−２−Cl−CBZ−Ｄ−Lys）のカル
ボキシ末端を不溶性の重合樹脂担体に、樹脂と結
合した塩化ベンジルのカルボン酸エステルとして
共有結合的に固定する。Ｄ−Lysの樹脂への固定
が完了したら、保護基BOCをCH₂Cl₂中のTFAで
処理することによつて除去する。これに続くアミ
ノ酸をBOC−アミノ酸の形にし、DCCIを縮合剤
として用い、或いはONp等の活性エステルを用
いて結合させる。所望する直鎖ペプチドを調製し
たら、Ｎ−末端アミノ基を選択的に除去し、ペプ
チドをヒドラジン処理によつて樹脂からはずす。
生成した直鎖ペプチドヒドラジンはＮ−末端アミ
ノ基が脱保護され、次のアミノ酸配列を有する。 これを酸性PH中の亜硝酸イソアミルで処理し
て、相当するアジドを形成させる。このアジド溶
液を溶媒でうすめ、有機塩基で中和する。直鎖ペ
プチドは環化して を形成する。環化反応中、PHを検査し、有機塩基
を加えることによつて中性に保つ。有機溶媒中の
“PH”は、反応溶液の少量を湿らせた狭い範囲の
PH試験紙によつて決定する。 直鎖ペプチドが環化した後、保護基２−Cl−
CBZおよびOBzlをアニソールの存在下、HFで処
理することによつて除去する。得られた粗環状ペ
プチドをクロマトグラフイー、好ましくは、シリ
カゲルのカラムクロマトグラフイーによつて精製
する。溶出溶媒は一般的に有機溶媒、またはその
混合物であり、精製すべき物質を薄層クロマトグ
ラフイーを用いて分析することによつて選択す
る。

【表】 ↓

【表】 ↓
DMF〓トリエチルアミン

【表】 以下の実施例は、本発明を実行するために使用
する方法を例示したものである。これら実施例は
例示を目的としたものであつて、何らの制限をも
うけるものではないということが理解さるべきで
ある。 実施例 １ Ｌ−Trp−Ｄ−Phe−Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−
Phe−（OBzl）Ｄ−Thr−（２−Cl−Cbz）−Ｄ
−Lys−OCH₂φ−樹脂の調製 BOC−２−Cl−CBZ−Ｄ−Lys（8.28ｇ、20ミ
リモル）とCs₂CO₃（3.25ｇ、10ミリモル）を12ml
のH₂Oおよび24mlのEtOHの混合液に溶解する。
真空中で溶媒を除去する。残渣をDMF（２×40
ml）と共に真空中で蒸発乾涸する。この残渣に80
mlのDMFおよび25ｇの２％架橋メリーフイール
ド樹脂（0.96ミリモル塩素／ｇ）を加える。反応
容器をロータリーエバポレーター上50℃で一晩回
転させる。更に80mlのDMFを加え、反応を更に
３時間続ける。過により樹脂を分離し、以下の
溶媒で洗う。 ２×250mlのメタノール−水（１：１） ２×250mlの水 250mlのDMF 250mlのメタノール 250mlのDMF 樹脂を250mlのCH₂Cl₂に懸濁し、樹脂が表面に
まで達した後にCH₂Cl₂を流出させる（４回）こ
とによつて微粒子を除去する。樹脂を２×250ml
のメタノールで洗い、真空中で一晩乾燥すると、
樹脂１ｇ当り0.5ミリモルの２−Cl−Cbz−Ｄ−
Lysを含有する30.35ｇのBOC−（２−Cl−Cbz）−
Ｄ−Lys−OCH₂φ−樹脂が得られる。 所望するBOC−ヘキサペプチド−Ｏ−CH₂φ−
樹脂が得られるまで表およびの方法に従い、
BOC−２−Cl−Cbz−Ｄ−Lys−Ｏ−CH₂φ−樹
脂を、塩化メチレン中の25％TFAによる２回の
脱保護化し（２分および25分）要求される順序で
の2.5当量のBOC−アミノ酸を用いる処理を行う。 各段階においてDCCIを唯一のカツプリングと
して使用する。 各アミノ酸のカツプリングは円滑に進行する。
縮合を各々の段階で繰り返すときに最良の収率が
得られる。カツプリングを繰り返す場合、最初の
２回のクロロホルムによる洗浄、脱保護段階、そ
れに続く３回のクロロホルムの洗浄をすべて省略
し、１回のクロロホルムによる洗浄によつて置き
かえる。 カツプリング反応は塩化メチレン、新しく脱ガ
スしたDMFまたはこれら２つの溶媒の混合液中
で行う。Ｎ−末端アミノ基は各段階毎にBOC基
によつて保護し、Thrの水酸基はBzlによつて、
Lysのε−アミノ基は２−Cl−CBZによつて保護
する。 所望するBOC−ヘキサペプチド−０−CH₂φ−
樹脂が得られた時、Ｎ−末端BOC基を、表に
示した末端脱保護方法によつて除去する。

【表】

【表】

【表】 表，およびの操作が完了した後、保護し
たヘキサペプチド−OCH₂−φ−樹脂を一晩乾燥
する。重量5.33ｇである。 実施例 ２ Ｌ−Trp−Ｄ−Phe−Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−
Phe−（OBzl−Ｄ−Thr−（2Cl−Cbz）DLys−
NHNH２の調製 実施例１からの樹脂のすべてを、メタノールと
ヒドラジンの１：１混合物50mlと合せ、室温で１
時間撹拌する。不溶性の樹脂を去し、溶液を蒸
発させてメタノールおよびヒドラジンを除去す
る。残渣を一晩高減圧下におき、すべての揮発物
の物質を除く。残渣を水で処理し、過し、真空
中P₂O₅で乾燥すると1.636ｇが得られるので、こ
れをそのまま次の段階に使用する。 実施例 ３ Ｌ−Trp−Ｄ−Phe−Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−
Phe−（OBzl）−Ｄ−Thr−（２−Cl−Cbz）−Ｄ
−Lys−N₃の調製 実施例２からの乾燥した物質を、窒素雰囲気下
において脱ガスしたジメチルホルムアミドと合
せ、−15℃に冷却し、５当量のテトラヒドロフラ
ン（1.4ml）中の5.32Nの塩化水素を加える。この
溶液を−25℃に冷却し、ジメチルホルムアミド中
の亜硝酸イソアミルの１：10混合物５mlを澱粉／
KI試験が陽性になるまで少しずつ加える。反応
の完了は薄層クロマトグラフイーおよびヒドラジ
ン出発物質の消失によつて追跡する。 実施例 ４ シクロ（Ｌ−Trp−Ｄ−Phe−Ｄ−Ala−Ｎ−
Me−Ｄ−Phe−（OBzl）Ｄ−Thr−（２−Cl−
CBZ）−Ｄ−Lys）の調製 実施例３のアジド化合物を単離することなく−
50℃に予冷し、トリエチルアミンでPH８に調節し
た脱ガスしたジメチルホルムアミドに加え、この
反応混合物をフリーザー中、24時間保存する。約
14時間後、もし必要ならばPHを８に再調節し、こ
の混合物を５℃で16時間保存する。薄層クロマト
グラフイーは反応が完了したことを示す。この混
合物を濃縮乾涸し、150mlの３：１ジメチルホル
ムアミド／水混合物に溶かし、陰イオン−陽イオ
ン交換樹脂の混合物で１時間処理する。混合物を
過し、真空中で濃縮乾涸して油とし、残渣を３
mlの酢酸エチルに溶かし、32mlのエーテルを徐々
に加えて沈澱を生じさせる。溶液部分をデカント
によつて除き、残渣を石油エーテルで処理すると
固型物が得られる。これをエーテル−石油エーテ
ル（１：１）で洗い、乾燥すると1.36ｇの環状ヘ
キサペプチドが得られる。 実施例 ５ シクロ（Ｌ−Trp−Ｄ−Phe−Ｄ−Ala−Ｎ−
Me−Ｄ−Phe−Ｄ−Thr−Ｄ−Lys）の調製 実施例４の1.36ｇの保護した環状ヘキサペプチ
ドを、テフロンで被覆した容器中２mlのアニソー
ルと混合する。次いでこの容器を空にし、ドライ
アイス／アセトン浴の温度において、液体フツ化
水素30mlを入れる。温度を０℃に上げ１時間撹拌
を続ける。フツ化水素を蒸発させ、スラリーが形
成されるまで残渣を真空中に放置する。このスラ
リーを酢酸エチルで処理するとガム状の沈澱物が
生成する。ガムを25mlのエーテルで処理し、50ml
の石油エーテルを加えると1.09ｇの固型物が得ら
れる。この粉末を400ｇのシリカゲル上にのせ、
クロロホルム−メタノール−濃アンモニア水（80
−20−２）で溶出し、22mlずつの分画とする。分
画40−60を合わせ、濃縮すると300mgの生成物が
得られる。 上述の方法に従い、実施例１の方法のアミノ酸
の順序および種類を変えることにより、本発明の
他の環状ヘキサペプチドが得られる。 本発明の環状ヘキサペプチドソマトスタチン類
縁体について、トリプシン消化の試験を行つて、
次の半減期が得られた。そして、これらの半減期
は本発明の化合物が消化系に対して安定であるこ
とを示している。なお、比較的長い半減期又は
“反応なし”はインビボ状態で比較的高い安定性
を示す。

【表】 本発明の環状ヘキサペプチドであるソマトスタ
チンの類縁体を試験管内で生育ホルモンの阻害に
ついて試験し、ソマトスタチンの効果と比較し
た。試験は次のように行つた。 ネズミの唾液腺を、ValeおよびGrantの‘
hypophysiopic物質に対する試験管内の唾液腺ホ
ルモンの分泌試験（In vitro Pituitary
Hormone Secretion Assay for Hypophysiopic
Substance）’，Method in Enjymology 37巻、
Ｏ‘Malley，B.W，およびHardman，J.G.編
（アカデミツクプレス、ニユーヨーク）５−93頁
（1975年）の操作法に従つて単離した。 “４日培養した後に細胞を洗い、ソマトスタチ
ン類縁体の濃度を順々に変えた、或いはソマトス
タチンを含有しないDulbecco−改質イーグル培
地中で４時間培養する。次いで培地を集め、生育
ホルモンをネズミの生育ホルモン用の二重抗体ラ
ジオイムノアツセイによつて決定する。” 本発明のいくつかの化合物に対する試験結果を
以下に記載する。ソマトスタチンに対する結果を
第１番に記し、その任意の値を１としてある。本
発明の化合物に対する結果は、ソマトスタチンの
効果の倍数または分数として与えられている。表
に示した本発明の最初の化合物は、実施例１−５
で調製した化合物である。しかしこの化合物は、
ソマトスタチン中のアミノ酸配列と同じになるよ
うに少し変えて書かれている。

【表】 ソマトスタチンの類縁体である本発明の環状ヘ
キサペプチドの胃液に対する効果は以下の方法で
決定した。 慢性瘻（fislula）の犬において、ペンタガスト
リンによつて喚起された胃液の分泌に対する阻害
を化合物について試験した。慢性胃瘻の雌のビー
グル犬にペンタガストリン（2.5μｇ／Kg／時、静
中、−60ないし120分）を与え、瘻排管によつて胃
液排出物を集める。試料を30分毎に、液量（ml）
および滴定し得る酸（ミリ当量／）（0.01Nの
NaOHによつてPH７に滴定する）について分析
する。排出された酸の全量（ミリ当量）を排出液
量および酸濃度の積として計算する。試験化合物
は０から60分間一定の割合で注入する。データは
同じ動物における偽薬投与に対する全酸排出量の
パーセント変化で一般に表されている。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 式 を有する化合物。 〔式中、 R₁はベンジルであり、 R₂はベンジルまたはｐ−ヒドロキシベンジ
   ルであり、 R₃は３−インドリルメチルまたは置換３−
   インドリルメチル（置換基は低級アルキル、低
   級アルコキシまたはハロゲンである）であり、 R₄はイソプロピルまたは１−ヒドロキシエ
   チルであり、 R₅はメチルまたはエチルであり、および印
   （＊）をつけてある２個の不整中心は、両者が
   同一でなければＤまたはＬのどちらでもよく、
   一方、他の不整中心はＤである。〕 ２ R₃は３−インドリルメチルであり、 R₄はヒドロキシエチルであり、 R₅はメチルである特許請求の範囲第１項記
   載の化合物。 ３ シクロ（Ｄ−Ala−Ｎ−Me−Ｄ−Phe−Ｄ
   −Thr−Ｄ−Lys−Ｌ−Trp−Ｄ−Phe） 〔ただし、Ｎ−Me−Ｄ−PheはＮ−メチル
   −フエニルアラニンを表わす。〕 である特許請求の範囲第１項記載の化合物。 ４ 式 を有する化合物 〔式中、 R₁はベンジルであり、 R₂はベンジルまたはｐ−ヒドロキシベンジ
   ルであり、 R₃は３−インドリルメチルまたは置換３−
   インドリルメチル（置換基は低級アルキル、低
   級アルコキシまたはハロゲンである）であり、 R₄はイソプロピルまたは１−ヒドロキシエ
   チルであり、 R₅はメチルまたはエチルであり、および印
   （＊）をつけてある２個の不整中心は、両者が
   同一でなければＤまたはＬのどちらでもよく、
   一方、他の不整中心はＤである。〕を製造する
   方法において、 ａ アミノ酸を １ H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
   COOH， R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
   COOH， R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH， ２ R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
   COOH， R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
   COOH， R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， ３ R₁CH（NHCH₃）COOH，R₅CH（NH₂）
   COOH， R₂CH（NH₂）COOH，R₃C^*Ｈ（NH₂）
   COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH， ４ R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
   COOH， R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
   COOH， ５ R₂CH（NH₂）COOH，R₃C^*Ｈ（NH₂）
   COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
   COOH， R₅CH（NH₂）COOH，又は ６ R₃C^*Ｈ（NH₂）COOH， H₂N（CH₂）₄C^*Ｈ（NH₂）COOH， R₄CH（NH₂）COOH，R₁CH（NHCH₃）
   COOH， R₅CH（NH₂）COOH，R₂CH（NH₂）
   COOH， （R₁，R₂，R₃，R₄，R₅及び印（＊）は前
   記の定義と同じである。） のいづれかの順序に固相法により結合して、固相
   樹脂に結合し保護した直鎖状ペプチドを調整し、 ｂ Ｎ−末端アミノ基を選択的に脱保護し、 ｃ 樹脂から直鎖状ペプチドを除去し、 ｄ この直鎖状ペプチドを環化剤で処理して、所
   望する環状ヘキサペプチドのアミド結合を形成
   し、 ｅ 側鎖の保護基を除去する ことを含む方法。 ５ 段階ｃ）が直鎖状ペプチド樹脂をヒドラジン
   で処理してヒドラジドを形成することから成る特
   許請求の範囲第４項記載の方法。 ６ 環化段階が、その場で亜硝酸を形成する試薬
   によつてヒドラジドを処理して、３級アミンの存
   在下に所望する環状ヘキサペプチドに環化するア
   ジドを製造することから成る特許請求の範囲第４
   項記載の方法。