JPH0365944B2 - - Google Patents
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- JPH0365944B2 JPH0365944B2 JP57002181A JP218182A JPH0365944B2 JP H0365944 B2 JPH0365944 B2 JP H0365944B2 JP 57002181 A JP57002181 A JP 57002181A JP 218182 A JP218182 A JP 218182A JP H0365944 B2 JPH0365944 B2 JP H0365944B2
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- C07H17/04—Heterocyclic radicals containing only oxygen as ring hetero atoms
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
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Description
【発明の詳細な説明】
本発明は、新規なマクロリド化合物を製造する
微生物及びその製法に係る。以下、本発明の微生
物により製造されるマクロリド化合物をも含め、
本発明の詳細を述べる。 本発明はマクロリド系（macrolide family）
の新規抗生物質にも関する。更に特定的には、本
発明は式 を有するエリスロノリドＢ（erythronolide Ｂ）、
即ちエリスロマイシンＡ（erythomycin Ａ）の生
合成前駆体である天然基質及び式 を有するエリスロノリドＡ、及び式 を有するエリスロノリドＡオキシムの如き半合成
基質から出発して得られる新規なマクロリド抗生
物質（macrolide antibiotics）に関する。 本発明の他の目的はオレアンドマイシンの生産
菌（producer）であるストレプトマイセスアン
チビオチクス（Streptomyces antibioticus）
ATCC11891から変異誘発性処理（muta−genic
treatment）により得られるストレプトマイセス
アンチビオクス（Streptomyces antibioticus）
ATCC31771番（ブタペスト条約上の寄託に基づ
く）である新規な微生物である。 ストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC11891は半
合成基質（エリスロノリドＡオキシム）（Le
Mahieu et al，J.Antib.，1976，(7)，728）
を使用することができるが、エリスロマイシンの
微生物生産菌及びそれらの変異体（mutants）を
使用して適当な量の従つて経済的に実行可能なコ
ストでの直接醗酵によつて得ることができる基質
である前記エリスロノライドＢを使用することは
できないことが知られている。 他方、エリスロマイシンが酸性環境において高
度に不安定であり、それによりその投与はエステ
ル及び／又は塩の形態で行なわれなければならな
い。エステル及び／又は塩はたとえ安定性を改良
するとしても、肝毒性（hepatic toxicity）、低
い耐性（tolerability）等の如き治療学的観点か
ら好ましくない且つ都合の悪い活性成分の良く知
られた性質を与える。オレアンドマイシンそれ自
体はその高い毒性が知られている。 本発明の主な目的はエリスロマイシンの活性と
同様な活性を有するがこの抗生物質の前記欠点の
ない、且つ酸性環境において特に安定で、毒性エ
ステル及び／又は塩に頼る必要なく投与すること
ができる新規抗生物質を提供することである。 本発明の他の目的は、天然及び半合成基質、特
にエリスロノリドＢを使用することができる新規
な微生物から出発してこれらの抗生物質を得る方
法を提供することである。 本発明の他の目的は、エリスロマイシン及び同
様な抗生物質の作用に鋭敏な病原菌（germ）及
びバクテリアにより誘発された病気の処置に対す
る抗生物質活性を有する組成物を提供することで
ある。 これらの目的は新規なマクロリド抗生物質及び
それ自体公知の方法で実施される醗酵のため、エ
リスロノリドＢ、エリスロノリドＡ及びエリスロ
ノリドＡオキシムの内から選ばれた基質及び醗酵
菌（fermentation agent）としてストレプトマ
イセスアンチバイオチクスATCC31771を使用す
ることを特徴とする本発明に従う関連した製造方
法によつて達成される。 本発明の他の特徴は前記醗酵菌（fermenta−
tion agent）即ち紫外線により254nmの放射最大
値及び胞子の約99.6％を殺す如き投与量での変異
誘発性処理によりストレプトマイセスアンチビオ
チクスATCC11891から導かれるストレプトマイ
セスアンチバイオチクスATCC31771であつて、
該所望の微生物はオレアンドマイシンを生産する
能力がないことを更に特徴とする醗酵菌の製造に
ある。 本発明の新規なマクロリド抗生物質をもつと詳
細に考察することによつて、それらを製造するた
めの基質及びクロマトグラフイー分析の特性に基
づいて以後区別して特徴づけることによる（出願
人の参照番号を括弧内に示す）。 １ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリス
ロノリドＢ： それは本発明の微生物によつてエリスロノリ
ドＢから得られる。薄層クロマトグラフイーに
よる分析（TLC）によればオレアンドマイシ
ンに関する0.8のRst及びエリスロマイシンＡに
関する0.75のRstを有する。アニスアルデヒド
試薬を使用することによつて（この試薬によれ
ばオレアンドマイシンはスミレ色を呈し、エリ
スロマイシンＡは褐色を呈する）この抗生物質
は紫色を呈する。HPLC（高圧液相クロマトグ
ラフイー）下にP15148に相当するピークはエ
リスロマイシンＡに関する保持時間0.69とオレ
アンドマイシンに関する保持時間1.08を有す
る。 ２ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−エリスロノリドＢ（P15149）。
これはエリスロノリドＢの醗酵によつても得ら
れ、そしてオレアンドマイシンに関する0.9の
RSt及びエリスロマイシンＡに関する0.85のRSt
を有する。アニスアルデヒド試験において、そ
れはスミレ色である。HPLCによればP15149
に相当するピークはエリスロマイシンＡに関す
る保持時間0.79及びオレアンドマイシンに関す
る保持時間1.22を有する。 ３ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−15−ヒドロキシエリスロノリド
Ｂ（P15150）。これは基質としてエリスロノリ
ドＢからストレプトマイセスアンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771に
よる醗酵によつて得られそしてオレアンドマイ
シンに関する0.47のRstとエリスロマイシンＡ
に関する0.44のRstを有する。アニスアルデヒ
ド試験において、それは紫色である。HPLCに
よればP15150に対応するピークはエリスロマ
イシンＡに関する保持時間0.52及びオレアンド
マイシンに関する保持時間0.80を有する。 ４ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−（8R）−８，19−エポキシエリ
スロノリドＢ（P15153）。これは本発明の微生
物による醗酵によつてエリスロノリドＢから得
られる。薄層クロマトグラフイー分析（TLC）
によればオレアンドマイシンに関する0.8のRst
及びエリスロマイシンＡに関する0.75のRstを
有する。アニスアルデヒド試薬を使用すること
によつてこの抗生物質はスミレ色を呈する。
HPLCによれば、P15153に対応するピークは
エリスロマイシンＡに関する保持時間0.64及び
オレアンドマイシンに関する保持時間0.99を有
する。醗酵の100hrs後且つ単離前にエリスロノ
リドＢから混合物として得られる上記４種の抗
生物質に対して、エリスロマイシンＡの活性と
して表わされた全抗生物質活性（total
antibiotic activity）は約120−150mcg／mlで
ある。 ５ P15151。これはエリスロノリドＡのストレ
プトマイセスアンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）による醗酵から
得られ、そしてオレアンドマイシンに関する
0.88のRst及びエリスロマイシンＡに関する0.8
のRstを有する。醗酵の90時間の後培養ブロス
の分析から、エリスロマイシンＡの活性として
表わして約70mcg／mlの抗生物質活性が見出さ
れる。 ６ P15152。これはエリスロノリドＡオキシム
から得られ、そしてオレアンドマイシンに関す
る0.47のRf及びエリスロマイシンＡに関する
0.44のRfを有する。 インキユペーシヨンの90時間後培養ブロスの分
析から、約50mcg／ml（エリスロマイシンＡの活
性として表わして）の全抗生物質活性が検出る。
しかしながら、かかる活性はP15152とJ.Antib.
（1976），29，728に記載された抗生物質である付
随して生産される他の抗生物質の混合物に起因す
る。 本発明に従つて生産される新規なマクロリド抗
生物質の説明に戻ると、それらはすべてエリスロ
マイシンのそれと同様な静菌スペクトル（bacte
−riostatic spectrum）及び酸性環境での安定性
により特徴づけられ、それにより経口経路による
その直接の投与がエステル及び／又は塩に依存す
ることなく前記した欠点と問題を示すことなく可
能である。上記のことは下記表１により確められ
る。表１には静菌力（bacteriostatic power）を示
すMIC値が報告され、表２によれば、酸性環境で
の安定性値が与えられる。制限する意味にとるべ
きではないが、本発明のマクロリド抗生物質のよ
り大なる安定性は抗生物質の分子における中性糖
オレアンドロース（J.Antib.（1976）(7)，
728）の存在に帰することができると思われる。 下記実施例は制限する意味ではなく、ストレプ
トマイセスアンチビオチクス（Streptomyces
antibioticus）ATCC31771の製造及び本発明の新
規な抗生物質の製造を説明する。 実施例 １ 変異ストレプトマイセス アンチビオチクス
（mutant Streptomyces antibisticus）
ATCC31771の製造。 オレアンドマイミンの生産菌であるストレプト
マイセスアンチビオチクス（Streptomyces
antibioticus）ATCC11891の胞子の懸濁液を胞子
の約99.6％を殺すような線量（約エルグ／平方セ
ンチメートル）における紫外線（254nmの最大放
射）による変異誘発性処理に付した。生存する胞
子を栄養媒体上に接種し、そして得られるコロニ
ーをエー・ケルナー（A.Kelner）（1949）J.Bact.
57，73.に記載の方法を使用して分析してそれら
がオレアンドマイシンを生産する能力のないこと
を調べた。 次いでオレアンドマイシン合成においてブロツ
クされた変異菌（生存する生物の約２％）を、基
質エリスロノリドＢ、エリスロノリドＡ及びエリ
スロノリドＡオキシムを認識し、且つ抗生物質活
性を有する新規な化合物に転化することができる
能力に関して分析した。 実施例 ２ 抗生物質３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デソサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリスロ
ノリドＢ（P15148）、３−Ｏ−オレアンドロシル
−５−Ｏ−デソサミニル−エリスロノリドＢ
（P15149）、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ
−デソサミニル−（8R）−８，19−エポキシ−エ
リスロノリドＢ（P15153）及び３−Ｏ−オレアン
ドロシル−５−Ｏ−デソサミニル−15−ヒドロキ
シエリスロノリドＢ（P15150）の製造。 方法 Ａ 変異ストレプトマイセス アンチビオチクス
（mutant Streptomyces antibioticus）
ATCC31771を下記培地の寒天添加培養スラント
（agarized culture slants）上に保持する。 【表】 一つのスラントからの胞子量を500ml三角フラ
スコに接種する。それは下記組成を有する培養培
地50mlを含有する。 【表】 フラスコを回転式シエーカー上で220rpmにて
24時間28℃でインキユベートする。この時間の
後、前記培地５リツトルを含有する10リツトルの
ガラス醗酵槽（fermentor）にこの培養物15mls
を接種する。醗酵槽を800rpm撹拌下に且つ
0.6v／ｖ／分の空気流で16時間28℃でインキユベ
ートする。この期間の終りに、上記培養物3.5リ
ツトルを下記培地100リツトルを含有する200リツ
トル鋼製醗酵槽に接種するために使用する。 【表】 250rpm撹拌及び1v.v／分の通気で28℃でイン
キユベーシヨンを行なう。 32時間の増殖の後培養物にエリスロノリドB75
ｇを加え、そして更に68時間インキユベーシヨン
を続ける。この時間の終りに、培養ブロスの試料
を過し、そして等容量のCH2Cl2でPH8.5にて抽
出する。 抽出物をCH2Cl2：95％メタノール：濃水酸化
アンモニウム（90：10：１）の系で２時間展開さ
れたシリカゲルプレート上のTLCにより分析す
る。 このプレートによつて、ミクロコツカスルテウ
ス（Micrococcus luteus）（Sarcina lutea）
ATCC9341に対してバイオオートグラフイーを実
施し、或いは別法としてプレートにアニスアルデ
ヒド試薬（メタノール：氷酢酸：濃硫酸、85：
10：５の混合物中のアニスアルデヒド0.5％ｖ／
ｖ）を噴霧し、そして５分間120℃に加熱するこ
とができる。 上記醗酵条件下に且つエリスロノリドＢの使用
に平行して、抗生物質活性を有しそして参照番号
P15148，P15149，P15150及びP15153により示さ
れた４種の新規な物質を生産する。TLCによれ
ばこれらの物質はオレアンドマイシンに関する、
0.8，0.9，0.47及び0.8のRst値を示す。エリスロマ
イシンに関するこれらのRst値は0.75，0.85，0.44
及び0.75である。 アニスアルデヒド試薬を使用することによつ
て、生成物P15148，P15150及びP15153は紫色を
呈し、これに対してP15149はスミレ色である
（オレアンドマイシンはスミレ色であり、これに
対してエリスロマイシンは褐色である）。 有機抽出物の試料はHPLC下でも制御される。
このためにそれを乾固するまで蒸発し、アセトニ
トリルで採取し、そしてカラムに注入する
（RP8μｍ25cm：移動相／0.01MPH７リン酸塩緩衝
液及びアセトニトリル（36：64）：流れ２ml／
分：カラム温度40℃）。新規物質P15149，P15150
及びP15153に対して0.69，0.79，0.52及び0.64の
エリスロマイシンＡに関する保持時間及びオレア
ンドマイシンに関して1.08，1.22，0.80及び0.99
の保持時間でピークが検出される。 醗酵の100時間後、エリスロマイシンＡの活性
として表わして全抗生物質活性は約120〜
150mcg／mlである。 撹拌は空気供給を中止することによつて最小に
減じられ、温度は15℃に降下する。 方法 Ｂ ストレプトマイセスエリスレウス
（Streptomyces erythreus）NRRL2338は1970年
８月13日のドイツ公開出願（German open
application）（OS）1900647に記載の条件に従つ
て製造される。 培養ブロスに醗酵の144時間後４％ｖ／vn−プ
ロパノールを加えることによつてエリスロノリド
Ｂ約500mcg／ml及び痕跡量のエリスロマイシン
（20mcg／mlより少ない）が得られる。 この時点で培養物を遠心分離し、そして透明な
上澄液を過により無菌化する（sterilized）。 ストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771の増
殖する培養物は方法Ａに記載の方法に従つて製造
される。第二の増殖経過（grow−ing passage）
は、方法Ａの培養培地50mlsを含有する第二の
500ml三角フラスコに増殖している培養物１mlを
接種することによつて同じ条件下に実施される。
第二増殖培養物1.0mlsで下記培養培地30mlsを含
有する500ml三角フラスコを接種する。 【表】 【表】 フラスコを回転式シエーカー上で250rpmで28
℃にてインキユベートする。32時間のインキユベ
ーシヨンの後フラスコに前記した透明な上澄液10
mlを加え、インキユベーシヨンを更に64時間続け
る。 培養物を方法Ａに記載の方法に従つて分析す
る。約30mcg／mlの全抗生物質活性（エリスロマ
イシンＡの活性として表わして）が得られる；
HPLCによれば４種の新規な抗生物質P15148，
P15149，P15150及びP15153及び痕跡量のエリス
ロマイシンＡの存在が検出される。 エリスロノリドＢを含有する液の添加を行な
わない対照フラスコにおいて、抗生物質活性は存
在しない。 実施例 ３ 抗生物質３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デソサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリスロ
ノリドＢ（P15148）、３−Ｏ−オレアンドロシル
−５−Ｏ−デソサミニルエリスロノリドＢ
（P15149）、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ
−デソサミニル−（8R）−８，19−エポキシエリ
スロノリドＢ（P15153）及び３−Ｏ−オレアンド
ロシル−５−Ｏ−15−ヒドロキシエリスロノリド
Ｂ（P15150）の精製。 実施例２（方法Ａ）に記載の最終醗酵混合物に
10％ｗ／ｖ ZnSO4溶液30及び２％ｗ／ｖ
NaOH水溶液30を撹拌下に加える。過助剤
の添加後、固形分をフイルターケーキ上の固体の
連続洗浄の後真空下に回転式フイルタによる二重
過（bi filtration）により除去する。 洗浄された固体は廃棄され、そして過の終り
に透明な過150を回収する。 次いで液を、水と混和しない適当な溶媒によ
るその後の抽出を促進するために15−25％ｗ／ｖ
の量で加えられたNaCl，Na2SO4、（NH4）2SO4
等の如き適当な塩で塩析し、液のPHはたとえば
リン酸又は酢酸の如き希酸によつて5.4乃至6.2に
調整される。 この操作によつて、不活性固体は沈殿し、次い
で過より除去する。 酢酸ブチル、クロロホルム、メチルイソブチル
ケトン、塩化メチレン又はジクロロエタンの如き
水と混和しない適当な溶媒を20％ｖ／ｖ乃至50％
ｖ／ｖの割合で透明な液と連続的に操作する遠
心分離抽出装置によつて接触させる。操作は二回
繰り返しそして有機層を一緒にする。一緒にした
有機相は、主としてP15149を含有する。水性相
には、有機相から完全に抽出されないP15148，
P15150，P15153及び残留P15149が存在する。有
機相（約100）を低温で真空下に約10リツトル
の容量に蒸留する。 激しい撹拌下に、約4.0のPHの10-4M酢酸塩緩
衝液３を加え、次いで相を分離させる。操作を
三回繰返し、終にはすべてのP15149が水性相に
存在し、多くの不純物を含有する溶媒は廃棄され
る。 一緒にした水性相は希釈したNaOHで約8.0の
PHに到らしめ、次いでメチルエチルケトン又は酢
酸ブチルの如き有機溶媒３画分で３回抽出す
る。水相をすて、有機相を一緒にしそして無水
Na2SO4上にて乾燥する。 乾燥した溶液を低温で真空下に500mlの容量に
蒸留する。 約40℃に加熱されたヘキサン又は石油エーテル
の如き非極性溶媒５に上記濃縮された液500ml
を加える。添加は約１時間で完了する。 添加の終りに加熱を停止しそして混合物をゆつ
くりと＋５℃に冷却する。 その温度で約２時間放置した後、約18℃で既に
始まるP15149の沈殿は完了する。 白色且つふわふわした（fluffy）沈殿を過
し、溶媒で洗浄し、乾燥して、HPLC分析で85％
の純度を示すP15149 4.2ｇを得る。 分析的に純粋な試料を得るために、N.L
Oleinick，J.Biol.Chem.，Vol.244，N゜3、
page727（1969）に示された方法に従つてシリカ
ゲルによるカラムクロマトグラフイーによつて固
体を更に精製することが必要である。 ３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−デオキサ
ミニル−エリスロノリドＢ（15149）を含有する25
−80画分を一緒にし、50℃で真空下に蒸発乾固
し、アセトン−ｎ−ヘキサンから結晶化して下記
特性を有する1.835ｇのP15149を得る。 融点：128−131℃ 〔α〕20 D−68.2゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）290nm（ε59.8）；IR（KBr）3490，1720，
1700（シヨルダー）、1460，1380，1335，1275，
1250（シヨルダー）、1180，1160，1140，1105，
1075，1050，1000，945，920，890，830cm-1（第
１図）。 C38H65NO12に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C61.43；H9.30；N1.99 観測値（％）：C61.34；H9.38；N2.05 P15148，P15150，P15153及びP15149を含有す
る水性相（完全には抽出されない）を希NaOH
でアルカリ性とし、等容量のCH2Cl2で数回抽出
する。各抽出の前に水性相のPHを９にする。
TLC及びHPLC制御によつて、抗生物質P15150
（水相に他のものより溶解性が高い）のみを含有
する抽出物と、まだP15148，P15149，P15150及
びP15153を一緒に含有する抽出物を分けること
が可能である。 P15150のみを含有する有機相を一緒にし、真空
下に50℃で乾固するまで蒸発して下記の化学的及
び物理的特性を有する3.4ｇのP15150を得る。 〔α〕22 D−55゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタノ
ール）288nm（ε42）；IR（KBr）3460，1715，
1700（シヨルダー）、1455，1375，1330，1300，
1270，1255，1240，1170，1105，1070，1045，
1000，990，980，940，915，885，825cm-1（第２
図）対応する塩酸塩は融点160−163℃（アセト
ン）を有する。 C38H65NO13・HClに対応する分析は下記の結果
を与える： 計算値（％）：C57.17；H8.80；N1.85；Cl4.69 観測値（％）：C56.92；H8.77；N1.91；Cl4.59 まだP15150及び残りの抗生物質を含有する他
の有機相を50℃で真空下に蒸発乾固し、得られる
残留物を前記N.L.Oleinickの方法に従つてシリカ
ゲルカラムで精製する。 この方法に示された溶媒による溶出を実施する
ことによつて、P15149（画分52〜110）、P15148
（画分130〜185）、P15153（画分260〜450）のみを
含有する画分を集める。TLC及びHPLC制御か
ら、溶出された画分はもはやP15153を含有しな
いと思われれば溶出溶媒を変える。イソプロピル
アルコール−アセトン（１：1.5）を溶出するこ
とによつて抗生物質P15150のみを含有する画分
を集める。画分52−110を一緒にし、そして真空
下に50℃で蒸発乾固して３−Ｏ−オレアンドロシ
ル−５−Ｏ−デオキサミニル−エリスロノリドＢ
（P15149）0.425ｇが得られ、このものはアセトン
−ｎ−ヘキサンからの結晶化後先に単離した
P15149に対して報告された特性に等しい化学的
及び物理的特性を示す。 画分130−185を一緒にし、50℃にて真空下に蒸
発乾固して、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−デ
オキサミニル−（8S）−８−ヒドロキシ−エリス
ロノリドＢ（P15148）3.2ｇが得られ、これはアセ
トンから結晶化させた後 融点204−206℃ 〔α〕20 D−48.35゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）280nm（ε39.2）IR（KBr）3590，3520，
3440（ブロード）、3280（ブロード）、1725，1455，
1380，1365，1305，1280，1270，1260，1175，
1155，1095，1060，1050，1020，1005，970，
935，915，885，875，820cm-1（第３図）により特
徴づけられる。 C36H65NO13に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C60.06；H9.10；N1.94 観測値（％）：C60.12；H8.93；N1.92 画分260−450を一緒にし、真空下に50℃で蒸発
乾固し、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−デ
オキサミニル−（8S）−８，19−エポキシ−エリ
スロノリドＢ（P15153）の10.3ｇを得、これはア
セトン／ｎ−ヘキサンからの結晶化の後、下記の
化学的及び物理的特性を有する： 融点125−130℃ 〔α〕20 D−27.7゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）294nm（ε32.7）IR（KBr）3485，1720，
1460，1380，1330，1305，1270，1170，1140，
1110，1075，1050，1000，930，920，890，830cm
-1（第４図） C36H63NO13に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C60.23；H8.85；N1.95 観測値（％）：C60.12；H8.75；N1.79 集められた画分をイソプロピルアルコール−ア
セトン（１：1.5）と共に真空下に蒸発しその後
アセトン／ｎ−ヘキサンから結晶化すると同じ前
記した特性をする15.4ｇのP15150が得られる。 実施例 ４ 抗生物質P15151の製造 実施例２に記載の方法に従つてフラスコ内に製
造されたストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771の醗
酵培養物に、J.Med.Chem.，（1974）、17，953に
記載の方法に従つてエリスロマイシンＡから出発
して製造されたエリスロノリドA15mgを30時間の
インキユベーシヨンの後加える。更に60時間のイ
ンキユベーシヨンの後、培養ブロスを実施例２に
記載の如くして分析しそして約70mcg／ml（エリ
スロマイシンＡの活性として表わして）の抗生物
質活性が見出される。TLC分析によれば、エリ
スロマイシンＡに関して0.8のRfとオレアンドマ
イシンに関して0.88のRfを有するP15151が見出
される。 これの化合物は抗生物質P15148，P15149，
P15150及びP15153とは更に異なつている。 実施例 ５ 抗生物質P15152の製造 実施例４に記載の方法に従つて製造されたスト
レプトマイセス アンチビオチクス（Strepto−
myces antibioticus）ATCC31771の培養を含有
するフラスコに、J.Med.，Chem.（1974）、17，
953に記載の方法に従つて化学的に製造されたエ
リスロノリドＡオキシム15mgを30時間のインキユ
ベーシヨンの後加える。 更に60時間のインキユベーシヨンの後、培養ブ
ロスを実施例２に記載の如くして分析し、約
50mcg／ml（エリスロマイシンＡの活性として表
わして）の全抗生物質活性が示される。TLC分
析によれば、二種の活性物質が見出され、その一
つはJ.AnTib.（1976）、29、728（オレアンドマイ
シンに関するRf0.73）に記載のものと同じであ
り、これに対し第二の活性物質は新規であり、オ
レアンドマイシンに関してRf0.47及びエリスロマ
イシンＡに関して0.44のRfを有する参照番号
P15152により示される。 本発明の範囲内でマクロリド抗生物質の新規な
又は既に知られた前駆体の分子に酸性環境におけ
る安定性を与え、従つて経口経路による投与を容
易にする作用因子（agent）としての意味を有す
るオレアンドロースを導入することに関するスト
レプトマイセス アンチビオチクス（Strepto−
myces antibioticus）ATCC31771の他の可能な
使用も意図されることが指摘されるべきである。 【表】 【表】 ＊＊ ペリシリン耐性
【表】 【表】 減時間を表わす。
微生物及びその製法に係る。以下、本発明の微生
物により製造されるマクロリド化合物をも含め、
本発明の詳細を述べる。 本発明はマクロリド系（macrolide family）
の新規抗生物質にも関する。更に特定的には、本
発明は式 を有するエリスロノリドＢ（erythronolide Ｂ）、
即ちエリスロマイシンＡ（erythomycin Ａ）の生
合成前駆体である天然基質及び式 を有するエリスロノリドＡ、及び式 を有するエリスロノリドＡオキシムの如き半合成
基質から出発して得られる新規なマクロリド抗生
物質（macrolide antibiotics）に関する。 本発明の他の目的はオレアンドマイシンの生産
菌（producer）であるストレプトマイセスアン
チビオチクス（Streptomyces antibioticus）
ATCC11891から変異誘発性処理（muta−genic
treatment）により得られるストレプトマイセス
アンチビオクス（Streptomyces antibioticus）
ATCC31771番（ブタペスト条約上の寄託に基づ
く）である新規な微生物である。 ストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC11891は半
合成基質（エリスロノリドＡオキシム）（Le
Mahieu et al，J.Antib.，1976，(7)，728）
を使用することができるが、エリスロマイシンの
微生物生産菌及びそれらの変異体（mutants）を
使用して適当な量の従つて経済的に実行可能なコ
ストでの直接醗酵によつて得ることができる基質
である前記エリスロノライドＢを使用することは
できないことが知られている。 他方、エリスロマイシンが酸性環境において高
度に不安定であり、それによりその投与はエステ
ル及び／又は塩の形態で行なわれなければならな
い。エステル及び／又は塩はたとえ安定性を改良
するとしても、肝毒性（hepatic toxicity）、低
い耐性（tolerability）等の如き治療学的観点か
ら好ましくない且つ都合の悪い活性成分の良く知
られた性質を与える。オレアンドマイシンそれ自
体はその高い毒性が知られている。 本発明の主な目的はエリスロマイシンの活性と
同様な活性を有するがこの抗生物質の前記欠点の
ない、且つ酸性環境において特に安定で、毒性エ
ステル及び／又は塩に頼る必要なく投与すること
ができる新規抗生物質を提供することである。 本発明の他の目的は、天然及び半合成基質、特
にエリスロノリドＢを使用することができる新規
な微生物から出発してこれらの抗生物質を得る方
法を提供することである。 本発明の他の目的は、エリスロマイシン及び同
様な抗生物質の作用に鋭敏な病原菌（germ）及
びバクテリアにより誘発された病気の処置に対す
る抗生物質活性を有する組成物を提供することで
ある。 これらの目的は新規なマクロリド抗生物質及び
それ自体公知の方法で実施される醗酵のため、エ
リスロノリドＢ、エリスロノリドＡ及びエリスロ
ノリドＡオキシムの内から選ばれた基質及び醗酵
菌（fermentation agent）としてストレプトマ
イセスアンチバイオチクスATCC31771を使用す
ることを特徴とする本発明に従う関連した製造方
法によつて達成される。 本発明の他の特徴は前記醗酵菌（fermenta−
tion agent）即ち紫外線により254nmの放射最大
値及び胞子の約99.6％を殺す如き投与量での変異
誘発性処理によりストレプトマイセスアンチビオ
チクスATCC11891から導かれるストレプトマイ
セスアンチバイオチクスATCC31771であつて、
該所望の微生物はオレアンドマイシンを生産する
能力がないことを更に特徴とする醗酵菌の製造に
ある。 本発明の新規なマクロリド抗生物質をもつと詳
細に考察することによつて、それらを製造するた
めの基質及びクロマトグラフイー分析の特性に基
づいて以後区別して特徴づけることによる（出願
人の参照番号を括弧内に示す）。 １ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリス
ロノリドＢ： それは本発明の微生物によつてエリスロノリ
ドＢから得られる。薄層クロマトグラフイーに
よる分析（TLC）によればオレアンドマイシ
ンに関する0.8のRst及びエリスロマイシンＡに
関する0.75のRstを有する。アニスアルデヒド
試薬を使用することによつて（この試薬によれ
ばオレアンドマイシンはスミレ色を呈し、エリ
スロマイシンＡは褐色を呈する）この抗生物質
は紫色を呈する。HPLC（高圧液相クロマトグ
ラフイー）下にP15148に相当するピークはエ
リスロマイシンＡに関する保持時間0.69とオレ
アンドマイシンに関する保持時間1.08を有す
る。 ２ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−エリスロノリドＢ（P15149）。
これはエリスロノリドＢの醗酵によつても得ら
れ、そしてオレアンドマイシンに関する0.9の
RSt及びエリスロマイシンＡに関する0.85のRSt
を有する。アニスアルデヒド試験において、そ
れはスミレ色である。HPLCによればP15149
に相当するピークはエリスロマイシンＡに関す
る保持時間0.79及びオレアンドマイシンに関す
る保持時間1.22を有する。 ３ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−15−ヒドロキシエリスロノリド
Ｂ（P15150）。これは基質としてエリスロノリ
ドＢからストレプトマイセスアンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771に
よる醗酵によつて得られそしてオレアンドマイ
シンに関する0.47のRstとエリスロマイシンＡ
に関する0.44のRstを有する。アニスアルデヒ
ド試験において、それは紫色である。HPLCに
よればP15150に対応するピークはエリスロマ
イシンＡに関する保持時間0.52及びオレアンド
マイシンに関する保持時間0.80を有する。 ４ 式 を有する３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デリサミニル−（8R）−８，19−エポキシエリ
スロノリドＢ（P15153）。これは本発明の微生
物による醗酵によつてエリスロノリドＢから得
られる。薄層クロマトグラフイー分析（TLC）
によればオレアンドマイシンに関する0.8のRst
及びエリスロマイシンＡに関する0.75のRstを
有する。アニスアルデヒド試薬を使用すること
によつてこの抗生物質はスミレ色を呈する。
HPLCによれば、P15153に対応するピークは
エリスロマイシンＡに関する保持時間0.64及び
オレアンドマイシンに関する保持時間0.99を有
する。醗酵の100hrs後且つ単離前にエリスロノ
リドＢから混合物として得られる上記４種の抗
生物質に対して、エリスロマイシンＡの活性と
して表わされた全抗生物質活性（total
antibiotic activity）は約120−150mcg／mlで
ある。 ５ P15151。これはエリスロノリドＡのストレ
プトマイセスアンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）による醗酵から
得られ、そしてオレアンドマイシンに関する
0.88のRst及びエリスロマイシンＡに関する0.8
のRstを有する。醗酵の90時間の後培養ブロス
の分析から、エリスロマイシンＡの活性として
表わして約70mcg／mlの抗生物質活性が見出さ
れる。 ６ P15152。これはエリスロノリドＡオキシム
から得られ、そしてオレアンドマイシンに関す
る0.47のRf及びエリスロマイシンＡに関する
0.44のRfを有する。 インキユペーシヨンの90時間後培養ブロスの分
析から、約50mcg／ml（エリスロマイシンＡの活
性として表わして）の全抗生物質活性が検出る。
しかしながら、かかる活性はP15152とJ.Antib.
（1976），29，728に記載された抗生物質である付
随して生産される他の抗生物質の混合物に起因す
る。 本発明に従つて生産される新規なマクロリド抗
生物質の説明に戻ると、それらはすべてエリスロ
マイシンのそれと同様な静菌スペクトル（bacte
−riostatic spectrum）及び酸性環境での安定性
により特徴づけられ、それにより経口経路による
その直接の投与がエステル及び／又は塩に依存す
ることなく前記した欠点と問題を示すことなく可
能である。上記のことは下記表１により確められ
る。表１には静菌力（bacteriostatic power）を示
すMIC値が報告され、表２によれば、酸性環境で
の安定性値が与えられる。制限する意味にとるべ
きではないが、本発明のマクロリド抗生物質のよ
り大なる安定性は抗生物質の分子における中性糖
オレアンドロース（J.Antib.（1976）(7)，
728）の存在に帰することができると思われる。 下記実施例は制限する意味ではなく、ストレプ
トマイセスアンチビオチクス（Streptomyces
antibioticus）ATCC31771の製造及び本発明の新
規な抗生物質の製造を説明する。 実施例 １ 変異ストレプトマイセス アンチビオチクス
（mutant Streptomyces antibisticus）
ATCC31771の製造。 オレアンドマイミンの生産菌であるストレプト
マイセスアンチビオチクス（Streptomyces
antibioticus）ATCC11891の胞子の懸濁液を胞子
の約99.6％を殺すような線量（約エルグ／平方セ
ンチメートル）における紫外線（254nmの最大放
射）による変異誘発性処理に付した。生存する胞
子を栄養媒体上に接種し、そして得られるコロニ
ーをエー・ケルナー（A.Kelner）（1949）J.Bact.
57，73.に記載の方法を使用して分析してそれら
がオレアンドマイシンを生産する能力のないこと
を調べた。 次いでオレアンドマイシン合成においてブロツ
クされた変異菌（生存する生物の約２％）を、基
質エリスロノリドＢ、エリスロノリドＡ及びエリ
スロノリドＡオキシムを認識し、且つ抗生物質活
性を有する新規な化合物に転化することができる
能力に関して分析した。 実施例 ２ 抗生物質３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デソサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリスロ
ノリドＢ（P15148）、３−Ｏ−オレアンドロシル
−５−Ｏ−デソサミニル−エリスロノリドＢ
（P15149）、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ
−デソサミニル−（8R）−８，19−エポキシ−エ
リスロノリドＢ（P15153）及び３−Ｏ−オレアン
ドロシル−５−Ｏ−デソサミニル−15−ヒドロキ
シエリスロノリドＢ（P15150）の製造。 方法 Ａ 変異ストレプトマイセス アンチビオチクス
（mutant Streptomyces antibioticus）
ATCC31771を下記培地の寒天添加培養スラント
（agarized culture slants）上に保持する。 【表】 一つのスラントからの胞子量を500ml三角フラ
スコに接種する。それは下記組成を有する培養培
地50mlを含有する。 【表】 フラスコを回転式シエーカー上で220rpmにて
24時間28℃でインキユベートする。この時間の
後、前記培地５リツトルを含有する10リツトルの
ガラス醗酵槽（fermentor）にこの培養物15mls
を接種する。醗酵槽を800rpm撹拌下に且つ
0.6v／ｖ／分の空気流で16時間28℃でインキユベ
ートする。この期間の終りに、上記培養物3.5リ
ツトルを下記培地100リツトルを含有する200リツ
トル鋼製醗酵槽に接種するために使用する。 【表】 250rpm撹拌及び1v.v／分の通気で28℃でイン
キユベーシヨンを行なう。 32時間の増殖の後培養物にエリスロノリドB75
ｇを加え、そして更に68時間インキユベーシヨン
を続ける。この時間の終りに、培養ブロスの試料
を過し、そして等容量のCH2Cl2でPH8.5にて抽
出する。 抽出物をCH2Cl2：95％メタノール：濃水酸化
アンモニウム（90：10：１）の系で２時間展開さ
れたシリカゲルプレート上のTLCにより分析す
る。 このプレートによつて、ミクロコツカスルテウ
ス（Micrococcus luteus）（Sarcina lutea）
ATCC9341に対してバイオオートグラフイーを実
施し、或いは別法としてプレートにアニスアルデ
ヒド試薬（メタノール：氷酢酸：濃硫酸、85：
10：５の混合物中のアニスアルデヒド0.5％ｖ／
ｖ）を噴霧し、そして５分間120℃に加熱するこ
とができる。 上記醗酵条件下に且つエリスロノリドＢの使用
に平行して、抗生物質活性を有しそして参照番号
P15148，P15149，P15150及びP15153により示さ
れた４種の新規な物質を生産する。TLCによれ
ばこれらの物質はオレアンドマイシンに関する、
0.8，0.9，0.47及び0.8のRst値を示す。エリスロマ
イシンに関するこれらのRst値は0.75，0.85，0.44
及び0.75である。 アニスアルデヒド試薬を使用することによつ
て、生成物P15148，P15150及びP15153は紫色を
呈し、これに対してP15149はスミレ色である
（オレアンドマイシンはスミレ色であり、これに
対してエリスロマイシンは褐色である）。 有機抽出物の試料はHPLC下でも制御される。
このためにそれを乾固するまで蒸発し、アセトニ
トリルで採取し、そしてカラムに注入する
（RP8μｍ25cm：移動相／0.01MPH７リン酸塩緩衝
液及びアセトニトリル（36：64）：流れ２ml／
分：カラム温度40℃）。新規物質P15149，P15150
及びP15153に対して0.69，0.79，0.52及び0.64の
エリスロマイシンＡに関する保持時間及びオレア
ンドマイシンに関して1.08，1.22，0.80及び0.99
の保持時間でピークが検出される。 醗酵の100時間後、エリスロマイシンＡの活性
として表わして全抗生物質活性は約120〜
150mcg／mlである。 撹拌は空気供給を中止することによつて最小に
減じられ、温度は15℃に降下する。 方法 Ｂ ストレプトマイセスエリスレウス
（Streptomyces erythreus）NRRL2338は1970年
８月13日のドイツ公開出願（German open
application）（OS）1900647に記載の条件に従つ
て製造される。 培養ブロスに醗酵の144時間後４％ｖ／vn−プ
ロパノールを加えることによつてエリスロノリド
Ｂ約500mcg／ml及び痕跡量のエリスロマイシン
（20mcg／mlより少ない）が得られる。 この時点で培養物を遠心分離し、そして透明な
上澄液を過により無菌化する（sterilized）。 ストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771の増
殖する培養物は方法Ａに記載の方法に従つて製造
される。第二の増殖経過（grow−ing passage）
は、方法Ａの培養培地50mlsを含有する第二の
500ml三角フラスコに増殖している培養物１mlを
接種することによつて同じ条件下に実施される。
第二増殖培養物1.0mlsで下記培養培地30mlsを含
有する500ml三角フラスコを接種する。 【表】 【表】 フラスコを回転式シエーカー上で250rpmで28
℃にてインキユベートする。32時間のインキユベ
ーシヨンの後フラスコに前記した透明な上澄液10
mlを加え、インキユベーシヨンを更に64時間続け
る。 培養物を方法Ａに記載の方法に従つて分析す
る。約30mcg／mlの全抗生物質活性（エリスロマ
イシンＡの活性として表わして）が得られる；
HPLCによれば４種の新規な抗生物質P15148，
P15149，P15150及びP15153及び痕跡量のエリス
ロマイシンＡの存在が検出される。 エリスロノリドＢを含有する液の添加を行な
わない対照フラスコにおいて、抗生物質活性は存
在しない。 実施例 ３ 抗生物質３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−
デソサミニル−（8S）−８−ヒドロキシエリスロ
ノリドＢ（P15148）、３−Ｏ−オレアンドロシル
−５−Ｏ−デソサミニルエリスロノリドＢ
（P15149）、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ
−デソサミニル−（8R）−８，19−エポキシエリ
スロノリドＢ（P15153）及び３−Ｏ−オレアンド
ロシル−５−Ｏ−15−ヒドロキシエリスロノリド
Ｂ（P15150）の精製。 実施例２（方法Ａ）に記載の最終醗酵混合物に
10％ｗ／ｖ ZnSO4溶液30及び２％ｗ／ｖ
NaOH水溶液30を撹拌下に加える。過助剤
の添加後、固形分をフイルターケーキ上の固体の
連続洗浄の後真空下に回転式フイルタによる二重
過（bi filtration）により除去する。 洗浄された固体は廃棄され、そして過の終り
に透明な過150を回収する。 次いで液を、水と混和しない適当な溶媒によ
るその後の抽出を促進するために15−25％ｗ／ｖ
の量で加えられたNaCl，Na2SO4、（NH4）2SO4
等の如き適当な塩で塩析し、液のPHはたとえば
リン酸又は酢酸の如き希酸によつて5.4乃至6.2に
調整される。 この操作によつて、不活性固体は沈殿し、次い
で過より除去する。 酢酸ブチル、クロロホルム、メチルイソブチル
ケトン、塩化メチレン又はジクロロエタンの如き
水と混和しない適当な溶媒を20％ｖ／ｖ乃至50％
ｖ／ｖの割合で透明な液と連続的に操作する遠
心分離抽出装置によつて接触させる。操作は二回
繰り返しそして有機層を一緒にする。一緒にした
有機相は、主としてP15149を含有する。水性相
には、有機相から完全に抽出されないP15148，
P15150，P15153及び残留P15149が存在する。有
機相（約100）を低温で真空下に約10リツトル
の容量に蒸留する。 激しい撹拌下に、約4.0のPHの10-4M酢酸塩緩
衝液３を加え、次いで相を分離させる。操作を
三回繰返し、終にはすべてのP15149が水性相に
存在し、多くの不純物を含有する溶媒は廃棄され
る。 一緒にした水性相は希釈したNaOHで約8.0の
PHに到らしめ、次いでメチルエチルケトン又は酢
酸ブチルの如き有機溶媒３画分で３回抽出す
る。水相をすて、有機相を一緒にしそして無水
Na2SO4上にて乾燥する。 乾燥した溶液を低温で真空下に500mlの容量に
蒸留する。 約40℃に加熱されたヘキサン又は石油エーテル
の如き非極性溶媒５に上記濃縮された液500ml
を加える。添加は約１時間で完了する。 添加の終りに加熱を停止しそして混合物をゆつ
くりと＋５℃に冷却する。 その温度で約２時間放置した後、約18℃で既に
始まるP15149の沈殿は完了する。 白色且つふわふわした（fluffy）沈殿を過
し、溶媒で洗浄し、乾燥して、HPLC分析で85％
の純度を示すP15149 4.2ｇを得る。 分析的に純粋な試料を得るために、N.L
Oleinick，J.Biol.Chem.，Vol.244，N゜3、
page727（1969）に示された方法に従つてシリカ
ゲルによるカラムクロマトグラフイーによつて固
体を更に精製することが必要である。 ３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−デオキサ
ミニル−エリスロノリドＢ（15149）を含有する25
−80画分を一緒にし、50℃で真空下に蒸発乾固
し、アセトン−ｎ−ヘキサンから結晶化して下記
特性を有する1.835ｇのP15149を得る。 融点：128−131℃ 〔α〕20 D−68.2゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）290nm（ε59.8）；IR（KBr）3490，1720，
1700（シヨルダー）、1460，1380，1335，1275，
1250（シヨルダー）、1180，1160，1140，1105，
1075，1050，1000，945，920，890，830cm-1（第
１図）。 C38H65NO12に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C61.43；H9.30；N1.99 観測値（％）：C61.34；H9.38；N2.05 P15148，P15150，P15153及びP15149を含有す
る水性相（完全には抽出されない）を希NaOH
でアルカリ性とし、等容量のCH2Cl2で数回抽出
する。各抽出の前に水性相のPHを９にする。
TLC及びHPLC制御によつて、抗生物質P15150
（水相に他のものより溶解性が高い）のみを含有
する抽出物と、まだP15148，P15149，P15150及
びP15153を一緒に含有する抽出物を分けること
が可能である。 P15150のみを含有する有機相を一緒にし、真空
下に50℃で乾固するまで蒸発して下記の化学的及
び物理的特性を有する3.4ｇのP15150を得る。 〔α〕22 D−55゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタノ
ール）288nm（ε42）；IR（KBr）3460，1715，
1700（シヨルダー）、1455，1375，1330，1300，
1270，1255，1240，1170，1105，1070，1045，
1000，990，980，940，915，885，825cm-1（第２
図）対応する塩酸塩は融点160−163℃（アセト
ン）を有する。 C38H65NO13・HClに対応する分析は下記の結果
を与える： 計算値（％）：C57.17；H8.80；N1.85；Cl4.69 観測値（％）：C56.92；H8.77；N1.91；Cl4.59 まだP15150及び残りの抗生物質を含有する他
の有機相を50℃で真空下に蒸発乾固し、得られる
残留物を前記N.L.Oleinickの方法に従つてシリカ
ゲルカラムで精製する。 この方法に示された溶媒による溶出を実施する
ことによつて、P15149（画分52〜110）、P15148
（画分130〜185）、P15153（画分260〜450）のみを
含有する画分を集める。TLC及びHPLC制御か
ら、溶出された画分はもはやP15153を含有しな
いと思われれば溶出溶媒を変える。イソプロピル
アルコール−アセトン（１：1.5）を溶出するこ
とによつて抗生物質P15150のみを含有する画分
を集める。画分52−110を一緒にし、そして真空
下に50℃で蒸発乾固して３−Ｏ−オレアンドロシ
ル−５−Ｏ−デオキサミニル−エリスロノリドＢ
（P15149）0.425ｇが得られ、このものはアセトン
−ｎ−ヘキサンからの結晶化後先に単離した
P15149に対して報告された特性に等しい化学的
及び物理的特性を示す。 画分130−185を一緒にし、50℃にて真空下に蒸
発乾固して、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−デ
オキサミニル−（8S）−８−ヒドロキシ−エリス
ロノリドＢ（P15148）3.2ｇが得られ、これはアセ
トンから結晶化させた後 融点204−206℃ 〔α〕20 D−48.35゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）280nm（ε39.2）IR（KBr）3590，3520，
3440（ブロード）、3280（ブロード）、1725，1455，
1380，1365，1305，1280，1270，1260，1175，
1155，1095，1060，1050，1020，1005，970，
935，915，885，875，820cm-1（第３図）により特
徴づけられる。 C36H65NO13に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C60.06；H9.10；N1.94 観測値（％）：C60.12；H8.93；N1.92 画分260−450を一緒にし、真空下に50℃で蒸発
乾固し、３−Ｏ−オレアンドロシル−５−Ｏ−デ
オキサミニル−（8S）−８，19−エポキシ−エリ
スロノリドＢ（P15153）の10.3ｇを得、これはア
セトン／ｎ−ヘキサンからの結晶化の後、下記の
化学的及び物理的特性を有する： 融点125−130℃ 〔α〕20 D−27.7゜（メタノール中Ｃ＝１）；UV（メタ
ノール）294nm（ε32.7）IR（KBr）3485，1720，
1460，1380，1330，1305，1270，1170，1140，
1110，1075，1050，1000，930，920，890，830cm
-1（第４図） C36H63NO13に対する分析は下記の値を与える： 計算値（％）：C60.23；H8.85；N1.95 観測値（％）：C60.12；H8.75；N1.79 集められた画分をイソプロピルアルコール−ア
セトン（１：1.5）と共に真空下に蒸発しその後
アセトン／ｎ−ヘキサンから結晶化すると同じ前
記した特性をする15.4ｇのP15150が得られる。 実施例 ４ 抗生物質P15151の製造 実施例２に記載の方法に従つてフラスコ内に製
造されたストレプトマイセス アンチビオチクス
（Streptomyces antibioticus）ATCC31771の醗
酵培養物に、J.Med.Chem.，（1974）、17，953に
記載の方法に従つてエリスロマイシンＡから出発
して製造されたエリスロノリドA15mgを30時間の
インキユベーシヨンの後加える。更に60時間のイ
ンキユベーシヨンの後、培養ブロスを実施例２に
記載の如くして分析しそして約70mcg／ml（エリ
スロマイシンＡの活性として表わして）の抗生物
質活性が見出される。TLC分析によれば、エリ
スロマイシンＡに関して0.8のRfとオレアンドマ
イシンに関して0.88のRfを有するP15151が見出
される。 これの化合物は抗生物質P15148，P15149，
P15150及びP15153とは更に異なつている。 実施例 ５ 抗生物質P15152の製造 実施例４に記載の方法に従つて製造されたスト
レプトマイセス アンチビオチクス（Strepto−
myces antibioticus）ATCC31771の培養を含有
するフラスコに、J.Med.，Chem.（1974）、17，
953に記載の方法に従つて化学的に製造されたエ
リスロノリドＡオキシム15mgを30時間のインキユ
ベーシヨンの後加える。 更に60時間のインキユベーシヨンの後、培養ブ
ロスを実施例２に記載の如くして分析し、約
50mcg／ml（エリスロマイシンＡの活性として表
わして）の全抗生物質活性が示される。TLC分
析によれば、二種の活性物質が見出され、その一
つはJ.AnTib.（1976）、29、728（オレアンドマイ
シンに関するRf0.73）に記載のものと同じであ
り、これに対し第二の活性物質は新規であり、オ
レアンドマイシンに関してRf0.47及びエリスロマ
イシンＡに関して0.44のRfを有する参照番号
P15152により示される。 本発明の範囲内でマクロリド抗生物質の新規な
又は既に知られた前駆体の分子に酸性環境におけ
る安定性を与え、従つて経口経路による投与を容
易にする作用因子（agent）としての意味を有す
るオレアンドロースを導入することに関するスト
レプトマイセス アンチビオチクス（Strepto−
myces antibioticus）ATCC31771の他の可能な
使用も意図されることが指摘されるべきである。 【表】 【表】 ＊＊ ペリシリン耐性
【表】 【表】 減時間を表わす。
第１図は実施例３において得られたP15149の
IRスペクトルを示す図、第２図は実施例３にお
いて得られたP15150のIRスペクトルを示す図、
第３図は実施例３において得られたP15148のIR
スペクトルを示す図、第４図は実施例３において
得られたP15153のIRスペクトルを示す図である。
IRスペクトルを示す図、第２図は実施例３にお
いて得られたP15150のIRスペクトルを示す図、
第３図は実施例３において得られたP15148のIR
スペクトルを示す図、第４図は実施例３において
得られたP15153のIRスペクトルを示す図である。
Claims (1)
- １ オレアンドマイシンを生産する能力のないこ
とによつて特徴づけられたマクロリド抗生物質の
生産菌としてのストレプトマイセスアンチビオチ
クスATCC31771。
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