JPH0365954B2

JPH0365954B2 -

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Publication number: JPH0365954B2
Application number: JP9830281A
Authority: JP
Priority date: 1981-06-26
Filing date: 1981-06-26
Publication date: 1991-10-15
Also published as: JPS58895A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は酵素又は微生物を用いてＬ−トリプト
フアンを製造する際に生成する反応および精製に
係る阻害物質を有効に除去する改良されたＬ−ト
リプトフアンの製造方法に関する。Ｌ−トリプトフアンは、必須アミノ酸の１種と
して、医薬品、栄養強化剤、催眠導入剤および飼
料への添加剤などの広に用途に有用である。従来
Ｌ−トリプトフアンを得る方法としては化学合成
法、発酵法および酵素法などの多くの方法が提示
されているが、化学合成法による場合は生成物が
ラセミ体である為光学分割が必要であり、Ｌ−ト
リプトフアンを直接生成する発酵法および酵素法
が注目されている。本発明者らは、インドールおよびセリンを原料
としてトリプトフアンシンセターゼ、トリプトフ
アナーゼおよびこれらを酵素源としての生産菌を
用いた酵素法による反応を検討していた処、反応
液又は粗結晶液の反応系への反復使用によつて
Ｌ−トリプトフアンの蓄積濃度が著しく低下する
という現象を確認し、反応の経過に伴ない反応を
阻害する物質が副生すると考えざるを得ないこと
を認めた。而して反応阻害物質のこのような副生
は、Ｌ−トリプトフアンの反応溶液における高濃
度蓄積及び原料の有効利用の上で大きな障害とな
る為、この不純物の除去方法について鋭意検討を
行つた。当初、種々の単一処理による該不純物の
除去方法について試行したが有効な手段は見出せ
ず、種々の処理を組合わせる方法を検討していた
処、驚くべき事に単一処理では殆んど効果の認め
られなかつた処理の組合わせである本発明の方法
により、粗結晶液を反復使用しても当初の反応
と殆んど変らないＬ−トリプトフアンの蓄積濃度
を再現し、相剰的な不純物の除去効果を確認して
本発明の端緒を得、更に検討を進めた結果、本発
明提示の方法で除去される不純物は、微生物や酵
素を用いた場合に固有な現象であり、微生物から
の分泌物、失活した酵素、副反応生成物、暗褐色
色素（フミン質等を含めた着色物質）、および微
生物並びに酵素に由来するコロイド性蛋白質、脂
肪等の有機コロイド物質などが反応または複合し
て形成されているものとの判断に至り、当初反応
の系に限らず、他の酵素法あるいは発酵法にも幅
広く応用出来る処理法である事が判明した。一方、一般的にアミノ酸の結晶は不純物の存在
により晶出の際に成長阻害を受け易い事が知られ
ているが、本発明者らは、前記反応により得た粗
結晶の精製についても検討を行つた処、該反応で
副生する不純物は、目的物であるＬ−トリプトフ
アンの晶出時に同時に析出又は結晶に吸着付着す
るなど目的物に随伴し易い挙動を示し、結晶の成
長性だけでなく、結晶の形状不良、着色、除去し
にくい悪臭の付着等の現象を伴ない、このような
性状の結晶は再結晶などの通常の方法では容易に
精製効果が得られない事を確認した。本発明者らは、本発明の方法による反応系に於
ける不純物の相剰的除去効果に注目し、前記反応
により得られるＬ−トリプトフアンの回収および
精製に係る工程液についても本発明の方法を実施
した処、前記Ｌ−トリプトフアンと類似した挙動
を示す不純物が反応液の場合と同様に除去され、
分離取得される結晶の成長性、形状、着色度およ
び付着悪臭は大幅に改良され、そのまゝでも飼料
添加剤程度の用途に合致する品質のものが得られ
更に再結晶などの通常の方法で容易に高度精製品
を得る事が出来る事が確認された。また、本発明の方法を実施しない場合、結晶を
分離取得した後の液中には溶解度でのＬ−トリ
プトフアンを含有するほか不純物も含有する為、
該液の反復使用は分離結晶の品質低下を招く
が、本発明の方法を実施した後に得られる精結晶
（一次）液は、粗結晶の溶解工程に戻し反復使
用しても分離結晶の品質低下は殆んど認められ
ず、回収および精製工程での品質維持、回収率な
どの面でも非常な有効処理方法である事が確認さ
れ、本発明を完成するに至つた。即ち、本発明は(1)発酵法または酵素法によりＬ
−トリプトフアンを製造するに際し、反応液また
は回収および精製に係る工程液に対し、非イオン
交換性の多孔質性樹脂による接液処理および限外
過膜による過処理する事を特徴とするＬ−ト
リプトフアンの製造方法であり、この方法を実施
する事により、酵素又は微生物を用いてＬ−トリ
プトフアンを得る場合の反応時に生ずる不純物に
よつてもたらさせる、反応液又は粗結晶液の反
復使用時に於ける反応阻害物質およびＬ−トリプ
トフアン結晶の分離取得時に於ける結晶性、品質
に係る阻害物質を除去することが可能であり、本
発明の属する技術分野における幅広い有用性を有
するものである。本発明で称するＬ−トリプトフアンを製造する
ための発酵法には、糖質およびアンモニアを出発
物質とする直接発酵法とアントラニル酸又はイン
ドールまでを化学合成し、これと糖質およびアン
モニアを出発物質とする間接発酵法とがある。本発明で称する酵素法には、インドールおよび
セリン又はインドールおよびピルビン酸、アンモ
ニアを出発物質とし、トリプトフアンシンセター
ゼ又はトリプトフアナーゼなどの酵素の働らきで
Ｌ−トリプトフアンを得る方法があり、この際使
用する酵素は精製品に限らず粗製品、酵素源とし
ての微生物、培養液、培養液などの状態でも使
用され、要するに目的とする反応を進行させ得る
ものであればよい。本発明で称するＬ−トリプトフアンの反応液と
は、前記発酵法による発酵液、前記酵素法による
合成反応液を意味し、具体的には、 (イ) 反応終了後Ｌ−トリプトフアンが溶解度以下
の濃度にある液またはその除菌液、 (ロ) 反応終了後Ｌ−トリプトフアンを溶解度以上
に含有し、析出するＬ−トリプトフアンの結晶
を水で希釈又は酸あるいはアルカリを加えて溶
解した液またはその除菌液、などの状態にあるものを示し、本発明で称するＬ
−トリプトフアンの回収および精製に係る工程液
とは、具体的には前記反応液の反応終了時および
PH調整又は濃縮などの操作により析出したＬ−ト
リプトフアンのスラリーから結晶分離をした際
の、 (ハ) 粗結晶液またはその除菌液、 (ニ) 粗結晶に溶解度以下になるように水を加え、
または酸あるいはアルカリを加えてPHを変動さ
せる事により溶解した液またはその除菌液、など或はこれらの状態から誘導された状態にある
ものを示す。本発明で称する非イオン交換性の多孔質性樹脂
とは、ジビニルベンゼンを架橋剤としたポリスチ
レン又はポリアクリルエステルを樹脂母体とし、
巨大網状構造を持つた均一な孔径を有する多孔性
樹脂で、極めて大きな比表面を有するものであり
市販のものとしてはアンバーライトXAD−２，
４，７，８等（商品名：ローム．アンド．ハウス
社）、ダイヤイオンHP−10，20，30，40，50等
（商品名：三菱化成社）、レバチツトOC1031（商品
名：バイエル社）などがある。本発明で称する限外過膜とは、種々のポリマ
ーを特殊な製膜法を用いて製造し、分子量分画の
機能を持たせたもので、ポリマーとしては、セル
ロース系、ポリアミド系、ポリイミド系、ポリベ
ンツイミダゾール系、ポリアクリロニトリル系、
ポリスルホン系、テフロン系などが代表的であり
分画分子量としては500〜200000の範囲で種々の
分画機能のものがあり、限外過膜としての形状
としては平膜、中空繊維、スパイラル型、管状型
などのものが市販され、例えば旭化成社HH、
HC、HIシリーズ（商品名、以下省略）、バイオ
エンジニヤリング社Ｇシリーズ、ダイセル社
DUY、DUCシリーズ、東洋紙社UH、UK、
UPシリーズ、湯浅電池社EDシリーズ、米・アミ
コン社UM、PM、XMシリーズ、米・ドルーオ
リバー社IOPOR−AP、BP、XP、GP、FPシリ
ーズ、米・ミリポア社PSAC Pelliconシリーズ、
米・レイパク社ROPAK−UFシリーズ、西独・
ヘキスト社UFCA、UFPA、デンマーク・DDS
社FS、GRシリーズ、等があげられる。本発明の方法を実施する場合の処理順序には特
に限定はないが、限外過膜への不純物汚染によ
る機能変化、処理効果の維持性（ライフ）を重点
的に配慮すれば、非イオン交換性の多孔質性樹脂
による接液処理を先に実施する方が好ましい。また、本発明の方法を実施する前の液に於いて
も、通常既知の遠心沈降、過などの方法で微生
物や沈澱物を除去しておいた方が操作上からは好
ましい。尚、本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂に
よる接液処理に類似した例として、従来Ｌ−トリ
プトフアンなどの芳香族アミノ酸の吸着性を利用
して、脂肪族アミノ酸や無機塩類との分離を行つ
たり、または５−ヒドロキシ−Ｌ−トリプトフア
ンなどのＬ−トリプトフアン誘導体とＬ−トリプ
トフアンとの吸着性の差を利用して分離する等の
方法が知られているが、これらの例はＬ−トリプ
トフアンを非イオン交換性の多孔質性樹脂に一度
吸着させてから、回収すべき種々の溶出剤を用い
て溶出回収を行うものであり、本発明に於ける処
理ではＬ−トリプトフアンを吸着させる事による
分離は必要でなく、対象液はただカラム通液又は
撹拌しながらの接液を行う丈でよい。本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂による
接液処理を実施する際の液温は、該樹脂の耐熱性
許容範囲から選択されるが、通常は５〜60℃の範
囲であり、またその際のPHは強酸性から強塩基
まで広範囲に亘つて実施可能で特に制限はなく、
対象液中のＬ−トリプトフアンを溶解させうる条
件及び本発明の組み合わせた処理で用いる後述の
限外過膜の材質等による指定の条件範囲とから
選択して同じ条件にしておいた方が操作上からは
好ましいと言える。また、本発明の非イオン交換性の多孔質性樹脂
による処理を行う際の該樹脂の使用形態としては
対象液中に懸濁撹拌しても、カラムに充填通液し
てもよいが、後者の方が効率、操作の上から好ま
しい。カラムに充填通液する際の通液速度は、通
常SV＝１〜10で好ましくは３〜７の範囲であり
該樹脂量に対する処理液量比は通常１〜100、好
ましくは５〜50の範囲である。また、本発明の処理を行つた後の非イオン交換
性の多孔質性樹脂は、希酸、希アルカリ及びアセ
トン、メタノール、エタノール、イソプロピルア
ルコール、ブタノールなどの有機溶剤またはアセ
トン／水＝50/50などのごとき水混合物などを接
液させる事で容易に再生され、反復使用可能とな
り、経済的にも工業上十分実施可能である。本発明の限外過膜による過処理を実施する
際の液条件、特にPH条件は、該過膜を構成す
る樹脂による指定の範囲があり、その範囲で実施
すればよく、その際の温度は通常５〜80℃、好ま
しくは10〜40℃程度で指定されている。また限外過膜による過処理を実施する際の
処理条件も膜の形態、物理的強度などにより指定
されており、その範囲で実施すればよい。この
過処理の終点に至る濃縮度は、対象とする液中に
含有する除去すべき成分の量によつて決まり、例
えば使用する限外過膜に対して指定されている
圧力上限を超えなければ実質的過処理が不能に
なつた時点を処理終了点と見倣すことが可能であ
り、更にＬ−トリプトフアンの回収率を上げる為
には上記過処理による濃縮液を再希釈した後、
再過処理する事により可能である。本発明の方法である二つの処理を組み合わせて
行う事により前記反応液の場合には、１次回反応時への効率的反復使用が可能とな
り、２濃縮またはPH調整により高品質の結晶が製
造可能となり容易に高度精製品へ導く事が出
来、前記粗結晶液の場合には、３次回反応時への効率的反復使用が可能とな
り、前記粗結晶溶解液の場合には、４濃縮またはPH調整により高品質の結晶が入
手可能となり容易に高度精製品へ導く事が出
来、さらに５（一次）精結晶液は次回粗結晶溶解液とし
て次回（一次）精結晶の実質品質低下をきたす
事なく反復使用出来、容易に高度精製品へ導く
事が出来る、などの処理効果を得る事が出来る。尚、前記２），４），５）で得られる（一次）精
結晶は、水又は有機溶媒あるいは水／有機溶媒を
用いた再結晶を行うだけで十分な高度精製品とす
る事が出来る。以下の実施例により本発明を具体的に説明する
が、これらは何ら本発明を限定するものではな
い。尚、以下の実施例に使用した微生物の培養は、
下記の培地を用いて30の培養器でPH＝7.0、温
度35℃で行ない、培養終了後、遠心沈降器を用い
て集菌し、−25℃の冷凍庫内に凍結保存し、使用
直前に室温下に解凍して使用した。（培地の重量％濃度組成）肉エキス１％、ペプトン0.5％、酵母エキス0.1
％、KH₂PO₄0.2％また、以下の実施例に於けるＬ−トリプトフア
ンの分析は、高速流体クロマトグラフイーによつ
て行つた。対照例１Ｌ−セリン2.1％、硫安2.5％、ピリドキサル−
5′−リン酸（以下PLPと略記）0.01％、
Na₂SO₃0.1％及び前記解凍したトリプトフアンシ
ンセターゼ生産菌であるエシエルヒア・コリー
（以下Ｅ・coliと略記）MT−10232（微工研菌寄
号）の培養菌体0.5％（乾燥菌体基準）を入れ、
KOH水溶液でPH＝8.5に調整した仕込液３を
撹拌しながら35℃でPHを8.5に保ち、インドール
を分割添加しながら反応を行つた処、Ｌ−トリプ
トフアンとして30.2ｇ／の蓄積濃度で反応の進
行が停止してしまつた。この反応液を冷蔵庫で一
晩冷却後、遠心沈降により沈澱物および菌体を除
去し、得られた上澄液から2.5を採つて次のよ
うな操作を行つた。尚、上澄液中のＬ−トリプト
フアン濃度は13ｇ／であつた。Ｌ−セリン濃度を2.1％となるよう調整し、
PLP0.1ｇ、Na₂SO₃1ｇを加え、前記Ｅ・coli
MT−10232を0.5％（乾燥基準）となるように加
えて、前記と同様な方法で反応を行つた処、Ｌ−
トリプトフアンとして25.7ｇ／の蓄積濃度で反
応が停止してしまつた。次に前記と同様な操作で
得られた上澄液２について行つた次回の反応は
更に蓄積濃度が低く、Ｌ−トリプトフアンとして
19.6ｇ／で停止してしまつた。対照例２前記対照例１で行つた３回の反復反応により得
られた沈澱物および菌体の全湿時重量は約436ｇ
で、この中のＬ−トリプトフアンの濃度は22％
（96ｇ）であつた。このうち200ｇを500mlの水に懸濁し、6N−
NaOHでPHを10.5に調整してＬ−トリプトフアン
を溶解した後、全液量を750mlにし、遠心沈降に
より除菌した。この際、沈澱した菌を100mlの水
で洗浄した。除菌液及び洗浄液約810mlを約700ml
に濃縮した後、酢酸でPH6.0に調整して結晶を析
出させ、撹拌下氷水浴で５℃まで冷却した。３時
間撹拌を続行した後、静置した処、結晶は非常に
細かく（顕微鏡写真にて観察した処、径は５〜
25μで５〜10μの範囲のものが多い。）、浮上する
結晶と沈澱する結晶が認められた。スラリーの
まゝ今度は80℃で１時間加温した後、放置徐冷し
て結晶の成長を試みた。結果は、顕微鏡写真で二
次凝集は認められたものの個々の結晶の粒径は余
り変らない上に、容器の底には球状の析出物にＬ
−トリプトフアンの結晶が付着した沈澱物が認め
られ、過、水洗により得られた結晶は湿時約55
ｇ（含水率50.5％）で黄褐色に着色し、若干のイ
ンドール臭及び微生物由来の悪臭を伴なうもので
あつた。この結晶を湿時のまゝ800mlの水／メタノール
＝50／50（容量比）混合液中に懸濁し、60℃で加
温溶解した処、浮游物が認められたので紙（東
洋紙社NO2）により熱時過した。液を撹
拌下室温まで徐冷した後、氷水で５℃まで冷却
し、結晶粒径を前記と同様に観察した処、平均約
50μ程度に成長していたが、過、水／メタノー
ル洗浄した後の結晶は湿時約27ｇ（含液率約40
％）で、黄褐色の着色がなお認められた。この結
晶を暗所で風乾した後、乾燥器内55℃で乾燥する
過程での乾燥器の臭気を調べた処、インドール臭
は消えていたが、微生物由来の臭気はなお認めら
れた。実施例１前記対照例１と同様な組成および操作を最初の
仕込液量10スケールで行つた処、反復反応の終
了時に於けるＬ−トリプトフアンの蓄積濃度は１
回目31.0ｇ／、２回目25.3ｇ／、３回目20.1
ｇ／であつた。３回目の反応終了後、遠心沈降により沈澱物お
よび菌体を除いて得た上澄液中のＬ−トリプトフ
アン濃度は12.4ｇ／で、液量は約5.7であつ
た。この液を用いて以下の比較実験を行つた。比較実験１（無処理）：前記上澄液を１採り、液中のＬ−セリン濃度
を2.1％になるよう調整した後、PLP0.05ｇ、
Na₂SO₃0.5ｇ及びＥ・coli MT−10232の培養菌
体を0.5％（乾燥菌体基準）となるように入れ
KOH水溶液でPH8.5に再調整した。比較実験２（接液処理）：前記上澄液を1.5採り、150mlの非イオン交換
性の多孔質樹脂であるレバチツトOC1031のカラ
ムにSV＝４で通液する。この際、初期のカラム
充填液として200mlを除いた。この処理液から１
を採り、比較実験１と同様に組成の調整を行つ
た。尚、この際液中のＬ−トリプトフアン濃度が
11.8ｇ／となつていたので、0.6ｇのＬ−トリ
プトフアンも加えた。比較実験３（限外過処理）前記上澄液を1.5採り、デンマークDDS社限
外過膜FS60PP（分画分子量30.000）を小型加圧
過器で使用し過を行ない、窒素ガスによる加
圧が８Kg／cm²Ｇに到達するまでに1.3の過液
を得た。この過液から１を採り、比較実験１
と同様に組成の調整を行つた。比較実験４（ブランク）：Ｌ−セリン21ｇ、PLP0.1ｇ、Na₂SO₃1ｇ及び
Ｌ−トリプトフアン12.4ｇを水900mlに入れ、
KOHでPHを8.5にした後更に水を加えて１と
し、これにＥ・coli MT−10232の培養菌体を0.5
％（乾燥菌体基準）となるように入れ再度KOH
でPHを8.5に調整した。本発明の例：前記上澄液の残り1.71を前記比較例２と同様
に150mlのレバチツトOC1031カラムに通液し初期
充填液分及びカラム残液を除いて約1.5とし、
次いで比較実験３と同様にFS60PP膜による過
を行ない、約1.3の両処理をした液を得た。こ
の処理液１を採り比較例１と同様に組成の調整
を行つた。尚、この際比較実験２と同様にＬ−ト
リプトフアンを0.8ｇ加えた。以上５例の反応は、前記対照例１の１回目の反
応と同様、撹拌下35℃でPHを8.5に保ちながらイ
ンドールを分割添加しながら行つた。結果を下記
表１に示した。

【表】実施例２前記実施例１で行つた３回の反復反応で、遠心
沈降により得た沈澱物及び菌体を用いて以下の実
験を行つた。尚、該沈降物中のＬ−トリプトフアンの濃度は
23.1％であつた。比較実験５：沈降物200ｇ（Ｌ−トリプトフアン46.2ｇ）を
水600mlに懸濁し、6N−NaOH水溶液でPHを10.5
に調整溶解した後、全液量を750mlとし遠心沈降
により除菌し、沈降した菌を再度100mlの水に懸
濁後遠心沈降を行ない、除菌液及び洗浄液を合わ
せて約750mlに減圧で濃縮した。この液を酢酸で
PH6.0に調整し、結晶を析出させ撹拌下氷水浴で
５℃まで冷却した。比較実験６：比較実験５と同様にして除菌及び洗浄の合液を
得た後、ダイヤイオンHP−10の50mlのカラムを
SV＝５で通液し、カラム洗浄液を合わせ約１
の液を減圧で濃縮し約750mlとし、以下は比較実
験５と同様に処理した。比較実験７：比較実験５と同様にして除菌及び洗浄の合液を
得た液、デンマークDDS社GR61PP（分画分子量
22.000）膜を用いて小型加圧過器で窒素ガス圧
８Kg／cm²Ｇで過を行なつた。この際濃縮側約50mlに到達した処で希釈水約
200mlを追加した。全透過液量約１を減圧で濃
縮し、約750mlとした後は比較例５と同様に処理
した。本発明の例：比較実験５と同様にして除菌及び洗浄の合液を
得た後、ダイヤイオンHP−10 50mlのカラムを
SV＝５で通液し、カラム洗浄液を合わせ約１
の液をデンマークDDS社GR61PP膜で過を行
ない、比較例７と同様濃縮側の希釈による回収液
を合わせ約1.2の液を減圧で濃縮し約750mlとし
た。以下は比較実験５と同様に処理を行つた。以上の実験に関する結果を下記表２にまとめ
た。尚、評価の方法は前記対照例２に記載の方法
と同様にして行つた。

【表】 ※ 濾液には菌体由来臭があるが、結晶は水洗する
ことで容易に臭気は除去できた。
また、前記実施例２に於ける本発明の例の結晶
を除いた液を次回精製のための溶解用液に用い
る循環使用を更に３回（計４回）行なつた。この
際ダイヤイオンHP−10のカラムはメタノール
250ml／回で再生使用した。前記４回目の精製による結晶も「飼料及び飼料
添加物の規格等に関する省令」（昭和54年農林水
産省令第47号）にすべて合格していた。また、前記表２本発明の例の水／メタノール再
結晶品は、第十改正日本薬局方による規格に合格
していた。実施例３ピルビン酸ナトリウム３％、酢酸アンモニウム
３％、PLP0.01％、Na₂SO₃0.1％を含有し、PHを
KOH水溶液で8.5に調整した３の液にトリプト
フアナーゼ生産菌であるＥ・coli（Ａ，Ｔ，Ｃ，
Ｃ NO27325）の培養菌体を0.5％（乾燥菌体基
準）となるように入れ、撹拌下35℃でPH＝8.5に
保ちながらインドールを分割添加し反応を行つ
た。30時間後、Ｌ−トリプトフアン濃度が約20
ｇ／付近で反応の進行が停止してしまつたの
で、KOH水溶液でPH＝9.5とした後、遠心沈降に
より除菌及び菌体洗浄を行ない約3.5の液とし、
次のような操作を行なつた。１レバチツトOC1031（前出）300mlのカラム通
液２ FS60PP（前出）による限外過３減圧濃縮（約１まで）４酢酸による等電点晶析（PH＝6.0）以上のようにして得た結晶は、水／イソプロパ
ノール＝50／50（容量比）で１回の再結晶を行う
ことで、第十改正日本薬局方規格に合格した。実施例４実施例１と同様な組成および操作で反復反応を
行つた。反応終了時のＬ−トリプトフアンの蓄積
濃度は、一回目31.5ｇ／、二回目24.9ｇ／、
三回目19.7ｇ／であつた。３回目の反応液に水を加え、撹拌により析出し
たＬ−トリプトフアン結晶を溶解した。菌体が分散した状態の溶解液を、150mlの非イ
オン交換性多孔質樹脂のレバチツトOC1031カラ
ムにSV＝５で通液した。菌体はカラム充填樹脂
によりろ過除去された。次いで、実施例１と同様
にFS60PP膜によるろ過を行つた。処理液のＬ−
トリプトフアン濃度は分析の結果、11.7ｇ／で
あつた。処理液を１採り、比較実験１と同様に組成の
調整を行い、反応を撹拌下35℃でPHを8.5に保ち
ながらインドールを分割添加して行つた。反応終了時のＬ−トリプトフアン蓄積濃度は、
30.1ｇ／であつた。実施例５別途実施例１と同様な組成および操作で反復反
応を行つて、遠心沈降により得た菌体を含む沈澱
物について以下の実験を行つた。なお、Ｌ−トリ
プトフアンの濃度は24.1％であつた。沈降物100ｇを50℃で温水２で撹拌し、Ｌ−
トリプトフアンの結晶を溶解した。菌体が分散し
た状態の溶解液を実施例２と同様な処理を行つ
た。菌体はカラム充填樹脂によりろ過工程で除去
された。処理液を約500mlまで減圧で濃縮し、析
出した結晶をろ過分別した。水洗して得られた結
晶は、実施例２と同様農林水産省令の規格に合格
していた。

Claims

【特許請求の範囲】１発酵法または酵素法によりＬ−トリプトフア
ンを製造するに際し、反応液または回収および精
製に係る工程液に対して非イオン交換性の多孔質
性樹脂による接液処理および限外過膜による
過処理する事を特徴とするＬ−トリプトフアンの
製造方法。２反応液から粗結晶を分離した後の液に対し
て非イオン交換性の多孔質性樹脂による接液処理
および限外過膜による過処理を行ない、次い
で処理液を反応に反復使用する特許請求の範囲第
１項記載の方法。３反応液から得た粗結晶を溶解した液に対し
て、非イオン交換性の多孔質性樹脂による接液処
理および限外過膜による過処理を行ない、次
いで結晶を析出分離して得た液を粗結晶の溶解
に反復使用する特許請求の範囲第１項記載の方
法。