JPH0379990B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0379990B2 JPH0379990B2 JP58120594A JP12059483A JPH0379990B2 JP H0379990 B2 JPH0379990 B2 JP H0379990B2 JP 58120594 A JP58120594 A JP 58120594A JP 12059483 A JP12059483 A JP 12059483A JP H0379990 B2 JPH0379990 B2 JP H0379990B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- alanine
- acid
- solution
- crystals
- aspartic acid
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬ−アラニン結晶の取得方法に関し、
更に詳しくは、夾雑物としてフマル酸、Ｌ−リン
ゴ酸及びＬ−アスパラギン酸の各アンモニウム塩
を含有する粗Ｌ−アラニン溶液から、簡便な手段
で高純度Ｌ−アラニン結晶を取得する方法に関す
る。
更に詳しくは、夾雑物としてフマル酸、Ｌ−リン
ゴ酸及びＬ−アスパラギン酸の各アンモニウム塩
を含有する粗Ｌ−アラニン溶液から、簡便な手段
で高純度Ｌ−アラニン結晶を取得する方法に関す
る。
Ｌ−アラニンの工業的製法としては、フマル酸
とアンモニアを出発原料として、アスパルターゼ
活性を有する微生物を用いてＬ−アスパラギン酸
を製造した後、又は同時にＬ−アスパラギン酸−
β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物を用
いてＬ−アラニンを製造する方法が知られてお
り、この方法はＬ−アスパラギン酸の晶析分離操
作が省略できるなどの点から効率の良い方法とい
われている。更に最近では上記酵素反応を固定化
微生物を用いて行なうと、微生物菌体の培養原料
および種々のタンパク質などの不純物が酵素反応
終了液中に含まれてこず、そのため該酵素反応終
了液から効率よくＬ−アラニンが得られることが
知られている。この様に固定化微生物を用いるＬ
−アラニンの製法は優れた方法であるが、上記ア
スパルターゼ活性を有する微生物はフマラーゼ活
性も同時に有しているため、これを用いる酵素反
応においては、フマル酸からＬ−リンゴ酸への転
換反応も同時に起こる。また、フマル酸からＬ−
アスパラギン酸を製造する反応には反応平衡があ
り、出発原料のフマル酸が残存することになる。
更にＬ−アスパラギン酸からＬ−アラニンを製造
する反応においてもＬ−アスパラギン酸を100％
反応させることはできず、Ｌ−アスパラギン酸が
残存し、しかも該反応においては二酸化炭素が副
生し、これが原料のアンモニアと反応し炭酸アン
モニウムが生成する。すなわち、前記の固定化微
生物を用いるＬ−アラニンの製造方法において
も、該酵素反応終了液中には目的物Ｌ−アラニン
の他に、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラ
ギン酸（これらの酸は強酸であるためそのアンモ
ニウム塩の形で）や、炭酸アンモニウムなどの夾
雑物が含まれている。このため従来、この様な夾
雑物を含有するＬ−アラニン溶液から、高純度の
Ｌ−アラニン結晶を得る方法としては、該溶液を
イオン交換樹脂で処理し、Ｌ−アラニン相当区分
を分画した後、濃縮、晶析を行なうか、あるいは
一旦粗Ｌ−アラニン結晶として分離した後、再結
晶を行うなどの煩雑な精製分離操作を必要として
おり、工業的には必ずしも満足しうるものではな
かつた。
とアンモニアを出発原料として、アスパルターゼ
活性を有する微生物を用いてＬ−アスパラギン酸
を製造した後、又は同時にＬ−アスパラギン酸−
β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物を用
いてＬ−アラニンを製造する方法が知られてお
り、この方法はＬ−アスパラギン酸の晶析分離操
作が省略できるなどの点から効率の良い方法とい
われている。更に最近では上記酵素反応を固定化
微生物を用いて行なうと、微生物菌体の培養原料
および種々のタンパク質などの不純物が酵素反応
終了液中に含まれてこず、そのため該酵素反応終
了液から効率よくＬ−アラニンが得られることが
知られている。この様に固定化微生物を用いるＬ
−アラニンの製法は優れた方法であるが、上記ア
スパルターゼ活性を有する微生物はフマラーゼ活
性も同時に有しているため、これを用いる酵素反
応においては、フマル酸からＬ−リンゴ酸への転
換反応も同時に起こる。また、フマル酸からＬ−
アスパラギン酸を製造する反応には反応平衡があ
り、出発原料のフマル酸が残存することになる。
更にＬ−アスパラギン酸からＬ−アラニンを製造
する反応においてもＬ−アスパラギン酸を100％
反応させることはできず、Ｌ−アスパラギン酸が
残存し、しかも該反応においては二酸化炭素が副
生し、これが原料のアンモニアと反応し炭酸アン
モニウムが生成する。すなわち、前記の固定化微
生物を用いるＬ−アラニンの製造方法において
も、該酵素反応終了液中には目的物Ｌ−アラニン
の他に、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラ
ギン酸（これらの酸は強酸であるためそのアンモ
ニウム塩の形で）や、炭酸アンモニウムなどの夾
雑物が含まれている。このため従来、この様な夾
雑物を含有するＬ−アラニン溶液から、高純度の
Ｌ−アラニン結晶を得る方法としては、該溶液を
イオン交換樹脂で処理し、Ｌ−アラニン相当区分
を分画した後、濃縮、晶析を行なうか、あるいは
一旦粗Ｌ−アラニン結晶として分離した後、再結
晶を行うなどの煩雑な精製分離操作を必要として
おり、工業的には必ずしも満足しうるものではな
かつた。
本発明者らは上記課題に関し鋭意研究した結
果、上記の如き、夾雑物としてフマル酸、Ｌ−リ
ンゴ酸、及びＬ−アスパラギン酸の各アンモニウ
ム塩を含有する粗Ｌ−アラニン溶液からＬ−アラ
ニン結晶を取得するに際し、該粗Ｌ−アラニン溶
液中にアルカリ金属を存在させることにより、簡
便な操作でＬ−アラニン高純度結晶を高収率で取
得できることを見い出し本発明を完成した。すな
わち、本発明は、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、及び
Ｌ−アスパラギン酸の各アンモニウム塩を夾雑物
として含有する粗Ｌ−アラニン溶液からＬ−アラ
ニン結晶を取得するに際し、該粗Ｌ−アラニン溶
液中に共存するフマル酸、Ｌ−リンゴ酸、及びＬ
−アスパラギン酸の総量に対し約0.5〜1.5当量の
アルカリ金属を存在させて濃縮した後、晶析を行
うことを特徴とするＬ−アラニン結晶の取得方法
である。
果、上記の如き、夾雑物としてフマル酸、Ｌ−リ
ンゴ酸、及びＬ−アスパラギン酸の各アンモニウ
ム塩を含有する粗Ｌ−アラニン溶液からＬ−アラ
ニン結晶を取得するに際し、該粗Ｌ−アラニン溶
液中にアルカリ金属を存在させることにより、簡
便な操作でＬ−アラニン高純度結晶を高収率で取
得できることを見い出し本発明を完成した。すな
わち、本発明は、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、及び
Ｌ−アスパラギン酸の各アンモニウム塩を夾雑物
として含有する粗Ｌ−アラニン溶液からＬ−アラ
ニン結晶を取得するに際し、該粗Ｌ−アラニン溶
液中に共存するフマル酸、Ｌ−リンゴ酸、及びＬ
−アスパラギン酸の総量に対し約0.5〜1.5当量の
アルカリ金属を存在させて濃縮した後、晶析を行
うことを特徴とするＬ−アラニン結晶の取得方法
である。
本発明に用いる粗Ｌ−アラニン溶液は例えば前
記した如く、フマル酸とアンモニアを基質として
固定化酵素反応させる公知の方法により得ること
ができる。例えば、アスパルターゼ活性を有する
微生物菌体もしくはその処理物およびＬ−アスパ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する
微生物菌体もしくはその処理物をそれぞれ公知の
方法（例えばカラギーナンゲル包括法、ポリアク
リルアミドゲル包括法など）で固定化して得られ
た固定化物を用いて酵素反応させることにより容
易に製造することができる。アスパルターゼ活性
を有する微生物としては該活性を有するものであ
ればいずれも用いることができ例えばエシエリシ
ア・コリ（ATCC−11303）を、又Ｌ−アスパラ
ギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微
生物としては該活性を有するものであればいずれ
も用いることができ例えばシユードモナス・ダク
ネー（IAM−1152）を好適に用いることができ
る。
記した如く、フマル酸とアンモニアを基質として
固定化酵素反応させる公知の方法により得ること
ができる。例えば、アスパルターゼ活性を有する
微生物菌体もしくはその処理物およびＬ−アスパ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する
微生物菌体もしくはその処理物をそれぞれ公知の
方法（例えばカラギーナンゲル包括法、ポリアク
リルアミドゲル包括法など）で固定化して得られ
た固定化物を用いて酵素反応させることにより容
易に製造することができる。アスパルターゼ活性
を有する微生物としては該活性を有するものであ
ればいずれも用いることができ例えばエシエリシ
ア・コリ（ATCC−11303）を、又Ｌ−アスパラ
ギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微
生物としては該活性を有するものであればいずれ
も用いることができ例えばシユードモナス・ダク
ネー（IAM−1152）を好適に用いることができ
る。
上記の如き酵素反応により得られる粗Ｌ−アラ
ニン溶液中に存在させるアルカリ金属としては、
例えばナトリウム、カリウムの如きアルカリ金属
が好適に挙げられ、それらは例えば水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウムの如き水酸化アルカリ金
属、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムの如きアルカ
リ金属炭酸塩あるいは炭酸水素ナトリウム、炭酸
水素カリウムの如きアルカリ金属炭酸水素塩とし
て供給するのが好ましい。該アルカリ金属の添加
量は粗Ｌ−アラニン溶液中に共存する夾雑物、す
なわち、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラ
ギン酸の総量に対して0.5当量以上、好ましくは
１〜1.5当量であるのが好ましい。これらアルカ
リ金属化合物は、酵素反応終了後の粗Ｌ−アラニ
ン溶液中へ添加するのが良いが、基質調製時ある
いはＬ−アスパラギン酸への転換酵素反応終了時
にあらかじめ、この量に応じ添加してもよい。ま
た、基質調製時に添加する場合はフマル酸ナトリ
ウム、フマル酸カリウムの如きフマル酸アルカリ
金属塩の形で、Ｌ−アスパラギン酸への転換酵素
反応終了時に添加する場合は、Ｌ−アスパラギン
酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸カリウムの如
きＬ−アスパラギン酸アルカリ金属塩の形で供給
することもできる。
ニン溶液中に存在させるアルカリ金属としては、
例えばナトリウム、カリウムの如きアルカリ金属
が好適に挙げられ、それらは例えば水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウムの如き水酸化アルカリ金
属、炭酸ナトリウム、炭酸カリウムの如きアルカ
リ金属炭酸塩あるいは炭酸水素ナトリウム、炭酸
水素カリウムの如きアルカリ金属炭酸水素塩とし
て供給するのが好ましい。該アルカリ金属の添加
量は粗Ｌ−アラニン溶液中に共存する夾雑物、す
なわち、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラ
ギン酸の総量に対して0.5当量以上、好ましくは
１〜1.5当量であるのが好ましい。これらアルカ
リ金属化合物は、酵素反応終了後の粗Ｌ−アラニ
ン溶液中へ添加するのが良いが、基質調製時ある
いはＬ−アスパラギン酸への転換酵素反応終了時
にあらかじめ、この量に応じ添加してもよい。ま
た、基質調製時に添加する場合はフマル酸ナトリ
ウム、フマル酸カリウムの如きフマル酸アルカリ
金属塩の形で、Ｌ−アスパラギン酸への転換酵素
反応終了時に添加する場合は、Ｌ−アスパラギン
酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギン酸カリウムの如
きＬ−アスパラギン酸アルカリ金属塩の形で供給
することもできる。
アルカリ金属を存在させた粗Ｌ−アラニン溶液
からＬ−アラニン結晶を取得するに当つては、例
えば該溶液を活性炭処理したのち濃縮し、次いで
Ｌ−アラニン結晶を晶析させることにより行なう
ことができる。
からＬ−アラニン結晶を取得するに当つては、例
えば該溶液を活性炭処理したのち濃縮し、次いで
Ｌ−アラニン結晶を晶析させることにより行なう
ことができる。
活性炭処理は、溶液中に含まれる固体粒子や微
生物菌体に由来する発熱性物質（パイロジエン）
を除去するものであり、この操作を効率よく行な
うためには、加温下（約80℃〜約60℃）で行なう
のが好ましい。処理時間は、約10〜20分間で充分
である。この活性炭処理は、粗Ｌ−アラニン溶液
に直接実施してもよいが、最初にＬ−アラニン溶
液をある程度濃縮した後に行なつてもよい。
生物菌体に由来する発熱性物質（パイロジエン）
を除去するものであり、この操作を効率よく行な
うためには、加温下（約80℃〜約60℃）で行なう
のが好ましい。処理時間は、約10〜20分間で充分
である。この活性炭処理は、粗Ｌ−アラニン溶液
に直接実施してもよいが、最初にＬ−アラニン溶
液をある程度濃縮した後に行なつてもよい。
濃縮操作は溶液中に含まれるアンモニアの除去
を目的とするものであり、該濃縮操作はＬ−アラ
ニンのラセミ化や分解を避けるため比較的低温
（約80℃以下、好ましくは約60℃以下）で減圧状
態で行なうのが好ましい。尚、アルカリ金属を存
在させて濃縮する本発明方法によれば、溶液がア
ルカリ性となつているため、溶液中に含有されて
いるアンモニウムイオン（NH4 +）は溶存アンモ
ニア（NH3）の形に変換され、この濃縮操作に
おいてアンモニアの除去が効率良く行なえる。
を目的とするものであり、該濃縮操作はＬ−アラ
ニンのラセミ化や分解を避けるため比較的低温
（約80℃以下、好ましくは約60℃以下）で減圧状
態で行なうのが好ましい。尚、アルカリ金属を存
在させて濃縮する本発明方法によれば、溶液がア
ルカリ性となつているため、溶液中に含有されて
いるアンモニウムイオン（NH4 +）は溶存アンモ
ニア（NH3）の形に変換され、この濃縮操作に
おいてアンモニアの除去が効率良く行なえる。
上記の如き濃縮操作を付したＬ−アラニン溶液
からＬ−アラニン結晶を晶析させるには、該溶液
を更に濃縮するか、あるいは冷却するか又はメタ
ノール、エタノールの如き水性溶媒を添加するな
どにより容易に実施できる。これらの操作は、ア
ミノ酸の晶析に通常用いられる方法によつて行な
うことができる。尚、晶析操作時の液性は、目的
物の収率に影響を与えるため、必要ならば晶析系
の液性をPH5.0〜9.0、好ましくは6.0〜8.0に調整
して晶析するのが好ましい。PH調整には、塩酸、
酢酸、硫酸、などを使用することができる。
からＬ−アラニン結晶を晶析させるには、該溶液
を更に濃縮するか、あるいは冷却するか又はメタ
ノール、エタノールの如き水性溶媒を添加するな
どにより容易に実施できる。これらの操作は、ア
ミノ酸の晶析に通常用いられる方法によつて行な
うことができる。尚、晶析操作時の液性は、目的
物の収率に影響を与えるため、必要ならば晶析系
の液性をPH5.0〜9.0、好ましくは6.0〜8.0に調整
して晶析するのが好ましい。PH調整には、塩酸、
酢酸、硫酸、などを使用することができる。
上記の如き本発明方法によれば、フマル酸、Ｌ
−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸などの夾雑物を
含まず、またパイロジエンの混入も認められず更
に、アンモニウム含量の低い極めて高純度のＬ−
アラニン結晶を、再結晶操作やイオン交換樹脂処
理などの煩雑な操作を行なうことなく、非常に簡
便な操作で収率良く得ることができる。尚、本発
明方法で得られるＬ−アラニン結晶は前述の如く
夾雑物やパイロジエンを含んでいないのでそのま
ま医療用（例えば輸液用原末）として使用でき
る。
−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸などの夾雑物を
含まず、またパイロジエンの混入も認められず更
に、アンモニウム含量の低い極めて高純度のＬ−
アラニン結晶を、再結晶操作やイオン交換樹脂処
理などの煩雑な操作を行なうことなく、非常に簡
便な操作で収率良く得ることができる。尚、本発
明方法で得られるＬ−アラニン結晶は前述の如く
夾雑物やパイロジエンを含んでいないのでそのま
ま医療用（例えば輸液用原末）として使用でき
る。
従つて本発明方法はＬ−アラニン高純度結晶の
工業的製法として優れた方法である。
工業的製法として優れた方法である。
以下に実施例を挙げて更に本発明を詳しく説明
する。
する。
実施例 １
後述の参考例２で得られるＬ−アラニン溶液
（Ｌ−アラニン1.4モル、フマル酸28ミリモル、Ｌ
−リンゴ酸52ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸15ミ
リモルおよび炭酸アンモニウムを含有）１に、
水酸化カリウム170ミリモルおよび活性炭「雪Ａ」
（藤沢薬品工業株式会社製の活性炭）２ｇを添加
し、60℃で20分間加熱した後、活性炭を分離す
る。ろ液を減圧濃縮し、液量を約180mlとした後、
15℃に冷却する（該例却液のPH：8.0）。析出結晶
をろ取し、少量の含水メタノールにて洗浄後乾燥
することによりＬ−アラニン結晶114.9ｇを得る。
収率92.1％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸（注１）；検出されず Ｌ−リンゴ酸（注１）；検出されず Ｌ−アスパラギン酸（注２）；検出されず 発熱性物質（注３）；認めず（0.05°、0.10°、
0.15°） アンモニウム含量（注４）；9ppm 注１：細管式等速電気泳動分析法（島津製1P−
2A型）により分析。検出限界0.01％ 注２：高速液体クロマトグラフにより分析。検出
限界0.005％ 注３：家兎法によりＬ−アラニン５％溶液を10
mg／Kgの条件で実施。他の条件は「日本薬局方
第10版」に準拠した。
（Ｌ−アラニン1.4モル、フマル酸28ミリモル、Ｌ
−リンゴ酸52ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸15ミ
リモルおよび炭酸アンモニウムを含有）１に、
水酸化カリウム170ミリモルおよび活性炭「雪Ａ」
（藤沢薬品工業株式会社製の活性炭）２ｇを添加
し、60℃で20分間加熱した後、活性炭を分離す
る。ろ液を減圧濃縮し、液量を約180mlとした後、
15℃に冷却する（該例却液のPH：8.0）。析出結晶
をろ取し、少量の含水メタノールにて洗浄後乾燥
することによりＬ−アラニン結晶114.9ｇを得る。
収率92.1％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸（注１）；検出されず Ｌ−リンゴ酸（注１）；検出されず Ｌ−アスパラギン酸（注２）；検出されず 発熱性物質（注３）；認めず（0.05°、0.10°、
0.15°） アンモニウム含量（注４）；9ppm 注１：細管式等速電気泳動分析法（島津製1P−
2A型）により分析。検出限界0.01％ 注２：高速液体クロマトグラフにより分析。検出
限界0.005％ 注３：家兎法によりＬ−アラニン５％溶液を10
mg／Kgの条件で実施。他の条件は「日本薬局方
第10版」に準拠した。
注４：インドフエノール法により分析。
実施例 ２
後述の参考例２で得られるＬ−アラニン溶液
（Ｌ−アラニン1.41モル、フマル酸29ミリモル、
Ｌ−リンゴ酸53ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸２
ミリモルおよび炭酸アンモニウム含有）１に水
酸化カリウム0.2モルを加え、以下実施例１と同
条件で活性炭処理および減圧濃縮を行ない、全量
約200mlとした後、15℃に冷却する。（該冷却液の
PH9.6）。次に濃塩酸で溶液のPHを7.6に調節し更
に約１時間静置する。析出結晶をろ取し少量の含
水メタノールで洗浄後乾燥することによりＬ−ア
ラニン結晶113.7ｇを得る。収率90.5％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（0.20°、0.15°、0.10°） アンモニウム含量；11ppm 実施例 ３ 基質溶液として10-3Mの塩化マグネシウムおよ
び0.08Mのフマル酸ジカリウムを含む1.25Mフマ
ル酸アンモニウム水溶液を用い後述の参考例２−
(3)と同様にして酵素反応を行ない、Ｌ−アラニン
溶液（Ｌ−アラニン1.26モル／、フマル酸13.5
ミリモル／、Ｌ−リンゴ酸49.4ミリモル／、
Ｌ−アスパラギン酸1.5ミリモル／および炭酸
アンモニウムを含有）を得る。該Ｌ−アラニン溶
液2.2に活性炭「雪Ａ」４ｇを添加し、80℃で
10分間加熱した後活性炭を分離する。ろ液を減圧
濃縮し全量を約280mlとした後15℃に冷却する
（該冷却液のPH：9.0）。析出結晶をろ取し、少量
の含水メタノールで洗浄後乾燥することにより、
Ｌ−アラニン結晶228.7ｇを得る。収率92.4％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（0.10°、0.20°、0.00°） アンモニウム含量；10ppm 参考例 １ アルカリ金属を使用しない例で、得られる目的
物の純度が大きく影響されることを示す。
（Ｌ−アラニン1.41モル、フマル酸29ミリモル、
Ｌ−リンゴ酸53ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸２
ミリモルおよび炭酸アンモニウム含有）１に水
酸化カリウム0.2モルを加え、以下実施例１と同
条件で活性炭処理および減圧濃縮を行ない、全量
約200mlとした後、15℃に冷却する。（該冷却液の
PH9.6）。次に濃塩酸で溶液のPHを7.6に調節し更
に約１時間静置する。析出結晶をろ取し少量の含
水メタノールで洗浄後乾燥することによりＬ−ア
ラニン結晶113.7ｇを得る。収率90.5％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（0.20°、0.15°、0.10°） アンモニウム含量；11ppm 実施例 ３ 基質溶液として10-3Mの塩化マグネシウムおよ
び0.08Mのフマル酸ジカリウムを含む1.25Mフマ
ル酸アンモニウム水溶液を用い後述の参考例２−
(3)と同様にして酵素反応を行ない、Ｌ−アラニン
溶液（Ｌ−アラニン1.26モル／、フマル酸13.5
ミリモル／、Ｌ−リンゴ酸49.4ミリモル／、
Ｌ−アスパラギン酸1.5ミリモル／および炭酸
アンモニウムを含有）を得る。該Ｌ−アラニン溶
液2.2に活性炭「雪Ａ」４ｇを添加し、80℃で
10分間加熱した後活性炭を分離する。ろ液を減圧
濃縮し全量を約280mlとした後15℃に冷却する
（該冷却液のPH：9.0）。析出結晶をろ取し、少量
の含水メタノールで洗浄後乾燥することにより、
Ｌ−アラニン結晶228.7ｇを得る。収率92.4％ 〔α〕20 D＋14.8°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（0.10°、0.20°、0.00°） アンモニウム含量；10ppm 参考例 １ アルカリ金属を使用しない例で、得られる目的
物の純度が大きく影響されることを示す。
実施例１で使用したものと同様のＬ−アラニン
溶液１に活性炭「雪Ａ」２ｇを添加し、60℃で
20分間加熱した後活性炭を分離する。ろ液を減圧
濃縮し全量を約200mlとした後15℃に冷却する
（該冷却液のPH：5.6）。析出結晶をろ取し少量の
含水メタノールで洗浄後乾燥することにより、Ｌ
−アラニン結晶110.6ｇを得る。収率88.7％ 〔α〕20 D＋14.7°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；0.04％ Ｌ−リンゴ酸；0.02％ Ｌ−アスパラギン酸；0.013％ アンモニウム含量；164ppm 本品は、本発明方法により得られる結晶に比
べ、夾雑物の混入があり、しかもアンモニウム含
量は約10倍以上高い。
溶液１に活性炭「雪Ａ」２ｇを添加し、60℃で
20分間加熱した後活性炭を分離する。ろ液を減圧
濃縮し全量を約200mlとした後15℃に冷却する
（該冷却液のPH：5.6）。析出結晶をろ取し少量の
含水メタノールで洗浄後乾燥することにより、Ｌ
−アラニン結晶110.6ｇを得る。収率88.7％ 〔α〕20 D＋14.7°（Ｃ＝10、6N−HCl） フマル酸；0.04％ Ｌ−リンゴ酸；0.02％ Ｌ−アスパラギン酸；0.013％ アンモニウム含量；164ppm 本品は、本発明方法により得られる結晶に比
べ、夾雑物の混入があり、しかもアンモニウム含
量は約10倍以上高い。
参考例 ２
（固定化菌体を用いるＬ−アラニンの製造）
(1) アスパルターゼ活性を有する固定化菌体の調
製 コーンスチープリカー２％、ミースト２％、
フマル酸1.14％、フマル酸ジアンモニウム0.5
％、第一リン酸カリウム0.2％および硫酸マグ
ネシウム0.05％を含む培地（PH7.0）100mlを
500ml容坂口フラスコに入れ、これにエシエリ
シア・コリ（ATCC−11303）を植菌する。30
℃で16時間振とう培養した後、遠心分離するこ
とによりエシエリシア・コリ菌体23ｇ（湿重
量）を得る。
製 コーンスチープリカー２％、ミースト２％、
フマル酸1.14％、フマル酸ジアンモニウム0.5
％、第一リン酸カリウム0.2％および硫酸マグ
ネシウム0.05％を含む培地（PH7.0）100mlを
500ml容坂口フラスコに入れ、これにエシエリ
シア・コリ（ATCC−11303）を植菌する。30
℃で16時間振とう培養した後、遠心分離するこ
とによりエシエリシア・コリ菌体23ｇ（湿重
量）を得る。
別にゲニユーゲルWG（コペンハーゲンペク
チンフアクトリー社製のカラギーナン）６ｇを
45℃の温水129mlに溶解しカラギーナン水溶液
を調製し、この溶液に上記で得たエシエリシ
ア・コリ菌体23ｇを生理食塩水23mlにけん濁し
たものを40℃にて添加混合する。混合液を４℃
に冷却し30分放置し生成したゲルを１辺が約３
mmの立方体に成型する。得られた成型ゲルをＬ
−アスパラギン酸10ミリモルおよび塩化カリウ
ム２％を含む水溶液400ml中に浸漬し37℃で24
時間放置する。生成ゲルを分離し２％塩化カリ
ウム水溶液で洗浄することにより固定化エシエ
リシア・コリ菌体180ｇ（浸重量）を得る。
チンフアクトリー社製のカラギーナン）６ｇを
45℃の温水129mlに溶解しカラギーナン水溶液
を調製し、この溶液に上記で得たエシエリシ
ア・コリ菌体23ｇを生理食塩水23mlにけん濁し
たものを40℃にて添加混合する。混合液を４℃
に冷却し30分放置し生成したゲルを１辺が約３
mmの立方体に成型する。得られた成型ゲルをＬ
−アスパラギン酸10ミリモルおよび塩化カリウ
ム２％を含む水溶液400ml中に浸漬し37℃で24
時間放置する。生成ゲルを分離し２％塩化カリ
ウム水溶液で洗浄することにより固定化エシエ
リシア・コリ菌体180ｇ（浸重量）を得る。
(2) Ｌ−アスパラギン酸−β−デカルボキシラー
ゼ活性を有する固定化菌体の調製 グルタミン酸ナトリウム3.2％、ミースト0.5
％、第一リン酸カリウム0.05％および硫酸マグ
ネシウム0.01％を含む培地（PH7.3）を500ml容
坂口フラスコに１本当り120mlづつ10本に入れ、
これにシエードモナス・ダクネー（IAM−
1152）を植菌する。30℃で24時間振とう培養し
た後、遠心分離することによりシユードモナ
ス・ダクネー菌体20ｇ（湿重量）を得る。
ゼ活性を有する固定化菌体の調製 グルタミン酸ナトリウム3.2％、ミースト0.5
％、第一リン酸カリウム0.05％および硫酸マグ
ネシウム0.01％を含む培地（PH7.3）を500ml容
坂口フラスコに１本当り120mlづつ10本に入れ、
これにシエードモナス・ダクネー（IAM−
1152）を植菌する。30℃で24時間振とう培養し
た後、遠心分離することによりシユードモナ
ス・ダクネー菌体20ｇ（湿重量）を得る。
別にゲニユーゲルWG4.03ｇを50℃の温水85
mlに溶解しカラギーナン水溶液を調製し、この
溶液に上記で得たシユードモナス・ダクネー菌
体20ｇを生理食塩水20mlにけん濁したものを45
℃にて添加混合する。混合液を４℃に冷却し30
分放置し生成するゲルを１辺が約３mmの立方体
に成型することにより固定化シユードモナス・
ダクネー菌体130ｇ（浸重量）を得る。
mlに溶解しカラギーナン水溶液を調製し、この
溶液に上記で得たシユードモナス・ダクネー菌
体20ｇを生理食塩水20mlにけん濁したものを45
℃にて添加混合する。混合液を４℃に冷却し30
分放置し生成するゲルを１辺が約３mmの立方体
に成型することにより固定化シユードモナス・
ダクネー菌体130ｇ（浸重量）を得る。
(3) 酵素反応
(1)で得た固定化菌体40ｇを外とう管付カラム
（内径1.6cm、長さ19cm）に充填する。これに、
10-3Mの塩化マグネシウムを含む1.5Mフマル
酸アンモニウム水溶液（1.5Mのフマル酸とア
ンモニアでPH8.5の溶液を調整）を37℃にて20
ml／hrの流速で導通した。この流出液にＬ−ア
スパラギン酸結晶を添加することによりPH6.0
〜6.5に調製し、該溶液に10-4Mのピリドキサ
ールリン酸を添加する。この溶液を(2)で得た固
定化菌体120ｇを充填した、外とう管付カラム
（内径2.1cm、長さ34.8cm）の下部より37℃にて
上向に向つて20ml／hrの流速で導通する。流出
液を集めることによりＬ−アラニン含有酵素反
応終了液を得る。
（内径1.6cm、長さ19cm）に充填する。これに、
10-3Mの塩化マグネシウムを含む1.5Mフマル
酸アンモニウム水溶液（1.5Mのフマル酸とア
ンモニアでPH8.5の溶液を調整）を37℃にて20
ml／hrの流速で導通した。この流出液にＬ−ア
スパラギン酸結晶を添加することによりPH6.0
〜6.5に調製し、該溶液に10-4Mのピリドキサ
ールリン酸を添加する。この溶液を(2)で得た固
定化菌体120ｇを充填した、外とう管付カラム
（内径2.1cm、長さ34.8cm）の下部より37℃にて
上向に向つて20ml／hrの流速で導通する。流出
液を集めることによりＬ−アラニン含有酵素反
応終了液を得る。
Claims (1)
- １ フマル酸、Ｌ−リンゴ酸及びＬ−アスパラギ
ン酸の各アンモニウム塩を夾雑物として含有する
粗Ｌ−アラニン溶液からＬ−アラニン結晶を取得
するに際し、該粗Ｌ−アラニン溶液中に共存する
フマル酸、Ｌ−リンゴ酸及びＬ−アスパラギン酸
の総量に対し約0.5〜1.5当量のアルカリ金属を存
在させて濃縮した後、晶析を行うことを特徴とす
る高純度Ｌ−アラニン結晶の取得方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12059483A JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12059483A JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6012994A JPS6012994A (ja) | 1985-01-23 |
| JPH0379990B2 true JPH0379990B2 (ja) | 1991-12-20 |
Family
ID=14790123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12059483A Granted JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6012994A (ja) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5327792A (en) * | 1976-08-25 | 1978-03-15 | Hitachi Ltd | Fuel and control rod supporter |
| JPS568691A (en) * | 1979-07-03 | 1981-01-29 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Method and apparatus for continuous production of l-alanine |
| CA1178909A (en) * | 1980-09-17 | 1984-12-04 | Murray C. Fusee | Process for production of l-alanine using immobilized microorganisms |
-
1983
- 1983-07-01 JP JP12059483A patent/JPS6012994A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS6012994A (ja) | 1985-01-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK148018B (da) | Fremgangsmaade til fremstilling af l-phenylglycin og d-phenylglycinamid eller d-phenylglycin | |
| FR2459285A1 (fr) | Procede microbiologique pour la production d'une solution aqueuse d'acrylamide fortement concentree | |
| NL8304496A (nl) | Werkwijze voor het isoleren van l-aminozuren. | |
| JP4361641B2 (ja) | 光学活性アミノ酸と光学活性アミノ酸アミドの分離回収方法 | |
| JPS60217897A (ja) | 乳酸の分離精製方法 | |
| JPH0379990B2 (ja) | ||
| JPS59118735A (ja) | Ｌ−リンゴ酸の純粋な水溶液の製法 | |
| JP4548756B2 (ja) | アミノ酸アミドの精製法 | |
| JP2804005B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JPH0229075B2 (ja) | Toriputofuannoshosekiho | |
| JP2804004B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JP3014194B2 (ja) | トリプトファンの単離法 | |
| JP2951785B2 (ja) | Ｌ−フェニルアラニンの晶析方法 | |
| JP3776160B2 (ja) | Ｄ−パントテン酸カルシウムの製造法 | |
| JPH0471906B2 (ja) | ||
| KR860001821B1 (ko) | L-아미노산의 단리 방법 | |
| JPH0489479A (ja) | 光学活性トリプトファンの回収方法 | |
| JP3704770B2 (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JPS63214188A (ja) | γ−アミノ酪酸の製造方法 | |
| CN105506016A (zh) | 酶法生产dl-天冬氨酸的方法 | |
| JPH10337195A (ja) | Ｌ−アスパラギン酸のアルカリ金属塩又はアルカリ土類金属塩水溶液の製造法 | |
| JP2575403B2 (ja) | Ｌ−トリプトファンの製造方法 | |
| JPS6225353B2 (ja) | ||
| JPH09163993A (ja) | Ｌ−アスパラギン酸の製造方法 | |
| JP2000169434A (ja) | （ｓ，ｓ）−アルキレンジアミン−ｎ，ｎ’−ジコハク酸の製造方法 |