JPS6012994A - Ｌ−アラニン結晶の取得方法 - Google Patents
Ｌ−アラニン結晶の取得方法Info
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- JPS6012994A JPS6012994A JP12059483A JP12059483A JPS6012994A JP S6012994 A JPS6012994 A JP S6012994A JP 12059483 A JP12059483 A JP 12059483A JP 12059483 A JP12059483 A JP 12059483A JP S6012994 A JPS6012994 A JP S6012994A
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- alanine
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- crystals
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はＬ−アラニン結晶の取得方法に関し、更に詳し
くは酵素反応終了液からＧ６便な手段で高純度Ｌ−アラ
ニン結晶を取得する方法に関する。
くは酵素反応終了液からＧ６便な手段で高純度Ｌ−アラ
ニン結晶を取得する方法に関する。
Ｌ−７ラニンの工業的製法としては、フマル酸とＴンモ
ニ了を出発原料として、アスパルターゼ活性を有する微
生物を用いてＬ−アスパラギン酸を製造した後、又は同
時にＬ−アスパラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性
を有する微生物を用いてＬ−アラニンを製造する方法が
知られており、この方法はＬ−アスパラギン酸の晶析分
離操作が省略できるなどの点から効率の良い方法といわ
れている。更に最近では上記酵素反応を固定化微生物を
用いて行なうと、微生物菌体の培養原料および種々のタ
ンパク質などの不純物が酵素反応終了液中に含まれてこ
ず、そのため該酵素反応終了液から効率よくＬ−アラニ
ンが得られることが知られている。この様に固定化微生
物を用いるＬ−アラニンの製法は優れた方法であるが、
上記アスパルターゼ活性を有する微生物及びＬ−７スバ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物
はフマラーゼ活性も同時に有しているためこれらを用い
る酵素反応においては、フマル酸からＬ−リンゴ酸への
転換反応も同時に起こる。又。
ニ了を出発原料として、アスパルターゼ活性を有する微
生物を用いてＬ−アスパラギン酸を製造した後、又は同
時にＬ−アスパラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性
を有する微生物を用いてＬ−アラニンを製造する方法が
知られており、この方法はＬ−アスパラギン酸の晶析分
離操作が省略できるなどの点から効率の良い方法といわ
れている。更に最近では上記酵素反応を固定化微生物を
用いて行なうと、微生物菌体の培養原料および種々のタ
ンパク質などの不純物が酵素反応終了液中に含まれてこ
ず、そのため該酵素反応終了液から効率よくＬ−アラニ
ンが得られることが知られている。この様に固定化微生
物を用いるＬ−アラニンの製法は優れた方法であるが、
上記アスパルターゼ活性を有する微生物及びＬ−７スバ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物
はフマラーゼ活性も同時に有しているためこれらを用い
る酵素反応においては、フマル酸からＬ−リンゴ酸への
転換反応も同時に起こる。又。
フマル酸からし一アスパラギン酸を製造する反応には反
応平衡があり、出発原料のフマル酸が残存することにな
る。更にはＬ−アスパラギン酸からＬ−アラニンを製造
する反応においてもＬ−アスパラギン酸を１００＜反応
させることはできず。
応平衡があり、出発原料のフマル酸が残存することにな
る。更にはＬ−アスパラギン酸からＬ−アラニンを製造
する反応においてもＬ−アスパラギン酸を１００＜反応
させることはできず。
Ｌ−アスパラギン酸が残存し、しかも該反応においては
二酸化炭素が副生じ、これが原料のアンモニアと反応し
炭酸アンモニウムが生成する。すなわち、前記の固定化
微生物を用いるＬ−アラニンの製造方法においても、該
酵素反応終了液中には目的物り一γラニンの池に、フマ
ル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸、炭酸アンモ
ニウムなどの夾雑物質か含まれている。このため従来・
該酵素反応終了液から高純度のＬ−アラニン結晶を得る
方法としては、酵素反応終了液をイオン交換樹脂で処理
し、１・−アラニン相当区分を分画した後、濃縮・晶析
を行なうか、あるいは−巨粗Ｌ−Ｔラニン結晶として分
離した後、再結晶を行なうなどの煩雑な精製分離操作を
必要としており、工業的には必ずしも満足しつるもので
はなかった。
二酸化炭素が副生じ、これが原料のアンモニアと反応し
炭酸アンモニウムが生成する。すなわち、前記の固定化
微生物を用いるＬ−アラニンの製造方法においても、該
酵素反応終了液中には目的物り一γラニンの池に、フマ
ル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸、炭酸アンモ
ニウムなどの夾雑物質か含まれている。このため従来・
該酵素反応終了液から高純度のＬ−アラニン結晶を得る
方法としては、酵素反応終了液をイオン交換樹脂で処理
し、１・−アラニン相当区分を分画した後、濃縮・晶析
を行なうか、あるいは−巨粗Ｌ−Ｔラニン結晶として分
離した後、再結晶を行なうなどの煩雑な精製分離操作を
必要としており、工業的には必ずしも満足しつるもので
はなかった。
本発明者らは上記課題に関し鋭意研究した結果酵素反応
終了液からＬ−アラニン結晶を取得するに際し、あらか
じめ該酵素反応終了液中にアルカリ金属を存在させるこ
とにより、簡便な操作でＬ−アラニン高純度結晶を高収
率で取得できることを見い出し本発明を完成した。すな
わち１本発明は、フマル酸とアンモニアを基質として、
固定化されたアスパルターゼ活性を有する微生物もしく
はその処理物および固定化されたＬ−アスパラギン酸−
β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物もしくはそ
の処理物を用いて酵素反応させて得られる酵素反応終了
液からＬ−アラニン結晶を取得するに際し、あらかじめ
該酵素反応終了液中にアルカリ金属を存在させておくこ
とを特徴とするＬ−アラニン結晶の取得方法で６４゜ 本発明に用いる酵素反応終了液は公知の方法により製造
することができる９例えば９アスパルターゼ活性を有す
る微生物菌体もしくはその処理物およびＬ−アスパラギ
ン酸−β−デカルボキシラ゛−ゼ活性を有する微生物菌
体もしくはその処理物をそれぞれ公知の方法（例えばカ
ラギーナンゲル包括法・ポリアクリルアミドゲル包括法
など］で固定化して得られた固定化物を用いて酵素反応
させることにより容易に製造することができる。アスパ
ルターゼ活性を有する微生物としては該活性を有するも
のであればいずれも用いることができ例えばニジエリシ
ア・コリ（ＡＴＣ（ニー１１３０３）を、又Ｌ−アスパ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物
としては該活性を有するものであればいずｎも用いるこ
とができ例えばシュードモナス・ダクネー（Ｉ ＡＭ−
１１５２］を好適に用いることができる。上記の如き酵
素反応終了液中に存在させるアルカリ金属としては、例
えばナトリウム、カリウムの如きアルカリ金属が好適に
挙げられ、それらは例えば水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウムの如き水酸化アルカリ金属、炭酸ナトリウム、炭
酸カリウムの如きアルカリ金属炭酸塩あるいは炭酸水素
ナトリウム・炭酸水素カリウムの如きアルカリ金属炭酸
水素塩として供給するのが好頂しい。これらアルカリ金
属化合物は９通常酵素反応終了液中へ添加するのが良い
が、基質調製時あるいはＬ−アスパラギン酸への転換酵
素反応終了時に添加してもよい。また。
終了液からＬ−アラニン結晶を取得するに際し、あらか
じめ該酵素反応終了液中にアルカリ金属を存在させるこ
とにより、簡便な操作でＬ−アラニン高純度結晶を高収
率で取得できることを見い出し本発明を完成した。すな
わち１本発明は、フマル酸とアンモニアを基質として、
固定化されたアスパルターゼ活性を有する微生物もしく
はその処理物および固定化されたＬ−アスパラギン酸−
β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物もしくはそ
の処理物を用いて酵素反応させて得られる酵素反応終了
液からＬ−アラニン結晶を取得するに際し、あらかじめ
該酵素反応終了液中にアルカリ金属を存在させておくこ
とを特徴とするＬ−アラニン結晶の取得方法で６４゜ 本発明に用いる酵素反応終了液は公知の方法により製造
することができる９例えば９アスパルターゼ活性を有す
る微生物菌体もしくはその処理物およびＬ−アスパラギ
ン酸−β−デカルボキシラ゛−ゼ活性を有する微生物菌
体もしくはその処理物をそれぞれ公知の方法（例えばカ
ラギーナンゲル包括法・ポリアクリルアミドゲル包括法
など］で固定化して得られた固定化物を用いて酵素反応
させることにより容易に製造することができる。アスパ
ルターゼ活性を有する微生物としては該活性を有するも
のであればいずれも用いることができ例えばニジエリシ
ア・コリ（ＡＴＣ（ニー１１３０３）を、又Ｌ−アスパ
ラギン酸−β−デカルボキシラーゼ活性を有する微生物
としては該活性を有するものであればいずｎも用いるこ
とができ例えばシュードモナス・ダクネー（Ｉ ＡＭ−
１１５２］を好適に用いることができる。上記の如き酵
素反応終了液中に存在させるアルカリ金属としては、例
えばナトリウム、カリウムの如きアルカリ金属が好適に
挙げられ、それらは例えば水酸化ナトリウム、水酸化カ
リウムの如き水酸化アルカリ金属、炭酸ナトリウム、炭
酸カリウムの如きアルカリ金属炭酸塩あるいは炭酸水素
ナトリウム・炭酸水素カリウムの如きアルカリ金属炭酸
水素塩として供給するのが好頂しい。これらアルカリ金
属化合物は９通常酵素反応終了液中へ添加するのが良い
が、基質調製時あるいはＬ−アスパラギン酸への転換酵
素反応終了時に添加してもよい。また。
基質調製時に添加する場合はフマル酸ナトリウム、フマ
ル酸カリウムの如きフマル酸アルカリ金属塩の形で、Ｌ
−アスパラギン酸への転換酵素反応終了時に添加する場
合は、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギ
ン酸カリウムの如ＡＬ−アスパラギン酸アルカリ金属塩
の形で供給することもできる。該アルカリ金属の添加は
は酵素反応終了液中に共存する夾雑物のうちの酸類（す
なわち、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸
）の総量に対して０．５当量以上、好ましくは１〜１．
５当量であるのが好ましい。
ル酸カリウムの如きフマル酸アルカリ金属塩の形で、Ｌ
−アスパラギン酸への転換酵素反応終了時に添加する場
合は、Ｌ−アスパラギン酸ナトリウム、Ｌ−アスパラギ
ン酸カリウムの如ＡＬ−アスパラギン酸アルカリ金属塩
の形で供給することもできる。該アルカリ金属の添加は
は酵素反応終了液中に共存する夾雑物のうちの酸類（す
なわち、フマル酸、Ｌ−リンゴ酸、Ｌ−アスパラギン酸
）の総量に対して０．５当量以上、好ましくは１〜１．
５当量であるのが好ましい。
アルカリ金属を存在させた酵素反射終了液からＬ−アラ
ニン結晶を取得するに当っては９例えば該溶液を活性炭
処理したのち濃縮し１次いでＬ−アラニン結晶を晶析さ
せることにより行うことができる。
ニン結晶を取得するに当っては９例えば該溶液を活性炭
処理したのち濃縮し１次いでＬ−アラニン結晶を晶析さ
せることにより行うことができる。
活性炭処理は、酵素反応終了液中に含まれる固体粒子や
微生物菌体に由来する発熱性物ｙＨパイロジエン】を除
去するものであり・この操作を効率ヨ（行なうためには
、加温下（約り０℃〜約６０℃）で行なうのが好ましい
。処理時間は約１０〜２０分間で充分である。この活性
炭処理は、Ｌ−γラニンｍＷに直接実施してもよいが、
最初にＬ−アラニン溶液をある程度濃縮した後に行って
もよい。
微生物菌体に由来する発熱性物ｙＨパイロジエン】を除
去するものであり・この操作を効率ヨ（行なうためには
、加温下（約り０℃〜約６０℃）で行なうのが好ましい
。処理時間は約１０〜２０分間で充分である。この活性
炭処理は、Ｌ−γラニンｍＷに直接実施してもよいが、
最初にＬ−アラニン溶液をある程度濃縮した後に行って
もよい。
濃縮操作は酵素反応終了１僕中に含まれるアンモニアの
除去を目的とするものであり、該濃縮操作はＬ−アラニ
ンのセラミ化や汁解を避けるため比較的低温（約８０℃
以下、好ましくは約６０℃以下）で減圧状態で行うのが
好ましい。尚１本発明方法によＪｔはこの濃縮操作にお
いては、溶液がアルカリ性となっており溶液中に含有さ
れているアンモニウムイオン（ＮＨＪ−３は溶存アンモ
ニア（ＮＥＩｇ ）の形に変換されている１こめ濃縮に
よるアンモニアの除去が効率良く行えるという副次的効
果もある。
除去を目的とするものであり、該濃縮操作はＬ−アラニ
ンのセラミ化や汁解を避けるため比較的低温（約８０℃
以下、好ましくは約６０℃以下）で減圧状態で行うのが
好ましい。尚１本発明方法によＪｔはこの濃縮操作にお
いては、溶液がアルカリ性となっており溶液中に含有さ
れているアンモニウムイオン（ＮＨＪ−３は溶存アンモ
ニア（ＮＥＩｇ ）の形に変換されている１こめ濃縮に
よるアンモニアの除去が効率良く行えるという副次的効
果もある。
上記の如き各操作を付した酵素反応終了１便からＬ−ア
ラニン結晶を晶析させるには・該溶液を更に濃縮するか
、あるいは冷却するか又はメタノール、エタノールの如
き水性溶媒を添加するなどにより容易【こ実施できる。
ラニン結晶を晶析させるには・該溶液を更に濃縮するか
、あるいは冷却するか又はメタノール、エタノールの如
き水性溶媒を添加するなどにより容易【こ実施できる。
これらの操作は、アミノ酸の晶析に向常用いられる方法
によっＣ行なうことができる。尚、晶析操作時の液性は
、目的物の収率に影響を与えるため、必要ならば晶析系
の散性をｐＨ５，０〜９．Ｏ１好ましくは６．０〜８．
０に調整して晶析するのが好ましい。ｐＨ１４整には、
塩酸。
によっＣ行なうことができる。尚、晶析操作時の液性は
、目的物の収率に影響を与えるため、必要ならば晶析系
の散性をｐＨ５，０〜９．Ｏ１好ましくは６．０〜８．
０に調整して晶析するのが好ましい。ｐＨ１４整には、
塩酸。
酪酸、硫酸などを使用することができる。
上記の如き本発明方法によれば、フマル酸、Ｌ −リン
ゴ酸・Ｌ−アスパラギン酸などの夾雑物を３まず・また
パイロジエンの？昆入もＪ忍めら２１ない極めて高純度
のＬ−アラニン結晶を、再結晶操作やイオン交攪樹脂処
哩などの煩雑ａ操作を行なうことなく、非常に簡便な操
作で収・を良く得ることができる。尚１本発明方法で得
られるし一アラニン結晶は前述の如く夾雑物やパイロジ
エンを含んでいないのでそのまま医療用（例え＋１’輸
液川原末）として使用できる。
ゴ酸・Ｌ−アスパラギン酸などの夾雑物を３まず・また
パイロジエンの？昆入もＪ忍めら２１ない極めて高純度
のＬ−アラニン結晶を、再結晶操作やイオン交攪樹脂処
哩などの煩雑ａ操作を行なうことなく、非常に簡便な操
作で収・を良く得ることができる。尚１本発明方法で得
られるし一アラニン結晶は前述の如く夾雑物やパイロジ
エンを含んでいないのでそのまま医療用（例え＋１’輸
液川原末）として使用できる。
従って本発明方法はＬ−アラニン高純度結晶の工業的製
法として優れた方法である。
法として優れた方法である。
以Ｆに実施例を挙げて更に本発明の詳細な説明する。
実施例 １
後述の参考例２で得られるＬ−アラニン溶液（Ｌ−アラ
ニン１．４モル、フマル酸２８ミリモル。
ニン１．４モル、フマル酸２８ミリモル。
Ｌ−リンゴ酸５２ミリモル、Ｌ−□アスパラギン酸１、
−ｔ−ミリモルおよび炭酸アンモニウムを食付）１１に
、水酸化カリウム１７０ミリモルおよび活性炭「雪ＡＪ
（藤沢薬品工業株式会社製の活性炭）２ｇを添加し、６
０℃で２０分間加熱した後・活性炭を分離する。ｐ液を
減圧ン遷（ｉｉｉ Ｌ 、液１を約１８０−とした１麦
、１５℃に冷却する（該冷却欣の結晶１１４．９！ｉ’
を得る。収率９２．１幅〔αＪ甘 〜ト ｌ ４，８°
（Ｃ＝ｌＱ 、 ６Ｎ−Ｈｅｉ ）７マル７１（庄１
〕；検出されず Ｌ −＋７ンゴ酸（注Ｉに検出さｎず Ｌ−アスパラギン酸（注２）；検出されず発熱性物質（
注３〕；認めｉｆ’（０，０５°、０．１００゜０．１
５°） アンモニウム含暇（注４ ） ； ９ ＰＰｍ注１：細
管式等速電気泳動分析〃；（馬車製１ｐ−２Ａ型）によ
り分析。検出限界０．０１％ 注２：高速液体クロマトグラフにより分析。検出限界０
００５幅 注３：家兎法によりＬ−アラニン５幅溶履を１ｏ ｒｖ
（ｙの条件で実施。ＩＩ３の条件は「日本薬局方第１０
版」に準拠した。
−ｔ−ミリモルおよび炭酸アンモニウムを食付）１１に
、水酸化カリウム１７０ミリモルおよび活性炭「雪ＡＪ
（藤沢薬品工業株式会社製の活性炭）２ｇを添加し、６
０℃で２０分間加熱した後・活性炭を分離する。ｐ液を
減圧ン遷（ｉｉｉ Ｌ 、液１を約１８０−とした１麦
、１５℃に冷却する（該冷却欣の結晶１１４．９！ｉ’
を得る。収率９２．１幅〔αＪ甘 〜ト ｌ ４，８°
（Ｃ＝ｌＱ 、 ６Ｎ−Ｈｅｉ ）７マル７１（庄１
〕；検出されず Ｌ −＋７ンゴ酸（注Ｉに検出さｎず Ｌ−アスパラギン酸（注２）；検出されず発熱性物質（
注３〕；認めｉｆ’（０，０５°、０．１００゜０．１
５°） アンモニウム含暇（注４ ） ； ９ ＰＰｍ注１：細
管式等速電気泳動分析〃；（馬車製１ｐ−２Ａ型）によ
り分析。検出限界０．０１％ 注２：高速液体クロマトグラフにより分析。検出限界０
００５幅 注３：家兎法によりＬ−アラニン５幅溶履を１ｏ ｒｖ
（ｙの条件で実施。ＩＩ３の条件は「日本薬局方第１０
版」に準拠した。
注４＝インドフェノール法により分析。
実施例 ２
後述の参考例２で醇られる■・−アラニン１８ａ［Ｌ−
アラニン１．４１モル、フマル酸２９ミリモル、 ］、
、 ＋ １１ンゴ酸５３ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸
２ミリモルおよび炭酸アンモニウム含有）１１に水酸化
カリウム０．２モルを加え、以下実施列１と同条件で゛
活性炭処理および減圧濃縮を行ない。
アラニン１．４１モル、フマル酸２９ミリモル、 ］、
、 ＋ １１ンゴ酸５３ミリモル、Ｌ−アスパラギン酸
２ミリモルおよび炭酸アンモニウム含有）１１に水酸化
カリウム０．２モルを加え、以下実施列１と同条件で゛
活性炭処理および減圧濃縮を行ない。
全量約２００ｒｎｌとしだ後、１５℃に冷却する（該冷
却Ｑ （７） ｐａｌ ９．６）。次ｉｃ ａ４ 酸テ
溶１ｆｔ ノｐＨを７．６に調節し川に約１時１１」静
１ρ４−る。析出結晶を戸数し少量の含水メタノールで
洗浄後乾燥することによりＬ−γラニンＰ’＋’：晶１
１３．７’を得る。収率９（） ５ μ 〔αＪπ〜ｉ刊４．８°（Ｃ＝ １０ 、６１１−ＨＣ
Ｉ ）フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ１役；険出されず Ｌ−アスパラギンＡｌ ； Ｍ出さｎず発熱性物ｒｘ
； ：ｙめず（１）、２０’、 ０．１５°、 ０．１
０°）アンモニウム含へｔ；ｌｌｐｐｍ 実施例 ３ ２ｋ ｔｌ ｍ ｒｌｆとして１０−３Ｍの塩化マグネ
シウムおよび０．０８Ｍのフマル酸ジカリウムを含む１
．２５Ｍフマル酸アンモニウム水溶ｔＦｔを用い後述の
参考例２−（３１と同様にして酵素反応を行ない―Ｌ−
アラニアＭ＋１ｆｆｉ（Ｌ−ｙラニン１．２６モル／１
１フマル酸１３．５ミリ七ル／１ 、 Ｌ−リンゴ酸４
９．４ミリモル／ｌ 、 Ｌ−アスパラギン１４９１．
５ミリモル／ｌおよび０分間加熱した後活性炭を分離す
る。ｒ欣を減圧濃縮し全量を約２８０−とした後１５℃
に冷却する（該冷却液のｐＨ：９．０）。析出結晶を戸
数し。
却Ｑ （７） ｐａｌ ９．６）。次ｉｃ ａ４ 酸テ
溶１ｆｔ ノｐＨを７．６に調節し川に約１時１１」静
１ρ４−る。析出結晶を戸数し少量の含水メタノールで
洗浄後乾燥することによりＬ−γラニンＰ’＋’：晶１
１３．７’を得る。収率９（） ５ μ 〔αＪπ〜ｉ刊４．８°（Ｃ＝ １０ 、６１１−ＨＣ
Ｉ ）フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ１役；険出されず Ｌ−アスパラギンＡｌ ； Ｍ出さｎず発熱性物ｒｘ
； ：ｙめず（１）、２０’、 ０．１５°、 ０．１
０°）アンモニウム含へｔ；ｌｌｐｐｍ 実施例 ３ ２ｋ ｔｌ ｍ ｒｌｆとして１０−３Ｍの塩化マグネ
シウムおよび０．０８Ｍのフマル酸ジカリウムを含む１
．２５Ｍフマル酸アンモニウム水溶ｔＦｔを用い後述の
参考例２−（３１と同様にして酵素反応を行ない―Ｌ−
アラニアＭ＋１ｆｆｉ（Ｌ−ｙラニン１．２６モル／１
１フマル酸１３．５ミリ七ル／１ 、 Ｌ−リンゴ酸４
９．４ミリモル／ｌ 、 Ｌ−アスパラギン１４９１．
５ミリモル／ｌおよび０分間加熱した後活性炭を分離す
る。ｒ欣を減圧濃縮し全量を約２８０−とした後１５℃
に冷却する（該冷却液のｐＨ：９．０）。析出結晶を戸
数し。
少量の含水メタノールで洗浄後乾燥することにより、Ｌ
−アラニン結晶２２８．７Ｆを得る。収率９２．４鴫 〔α翔＋１４，８°（Ｃ＝ １０ 、６８−ＨＣＩ ）
フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（０，１０°、 ０．２０’・０．
００°］アンモニウム含量； ｌ Ｏｐｐｍ 参考例 １ アルカリ金属を使用しない例で、得られる目的物の純度
が大きく影響されることを示す。
−アラニン結晶２２８．７Ｆを得る。収率９２．４鴫 〔α翔＋１４，８°（Ｃ＝ １０ 、６８−ＨＣＩ ）
フマル酸；検出されず Ｌ−リンゴ酸；検出されず Ｌ−アスパラギン酸；検出されず 発熱性物質；認めず（０，１０°、 ０．２０’・０．
００°］アンモニウム含量； ｌ Ｏｐｐｍ 参考例 １ アルカリ金属を使用しない例で、得られる目的物の純度
が大きく影響されることを示す。
実施例１で使用したものと同様のＬ−アラニン溶液１／
に活性炭「雪ＡＪ２Ｍを添加し、６０℃で２０分間加熱
した後活性炭を分離する。ｆｌ便を減圧濃縮し全量を約
２００−とじた後１５℃に冷却する（該冷却液のｐＨ：
５．６）。析出結晶をσｊ取し少量の含水メタノールで
洗浄後乾燥することによ４．Ｌ−アラニン結晶１１０．
６ｇを得る。収率８８．７％ 〔０片 ＋１４．７°（に ＝ Ｔ ｆｌ 、 ６Ｎ−
８０１３フマル酸ｉ０．０４喘 Ｌ−リンゴ酸；０．０２弘 Ｌ−アスパラギン酸；０．０１３％ アンモニウム含縫； ｌ ６４ ｐｐｌ＋１本品は９本
発明方法により得られる結晶に比べ、夾雑物の混入があ
り、シｙｐもアンモニウム含量は約１０倍以上晶い。
に活性炭「雪ＡＪ２Ｍを添加し、６０℃で２０分間加熱
した後活性炭を分離する。ｆｌ便を減圧濃縮し全量を約
２００−とじた後１５℃に冷却する（該冷却液のｐＨ：
５．６）。析出結晶をσｊ取し少量の含水メタノールで
洗浄後乾燥することによ４．Ｌ−アラニン結晶１１０．
６ｇを得る。収率８８．７％ 〔０片 ＋１４．７°（に ＝ Ｔ ｆｌ 、 ６Ｎ−
８０１３フマル酸ｉ０．０４喘 Ｌ−リンゴ酸；０．０２弘 Ｌ−アスパラギン酸；０．０１３％ アンモニウム含縫； ｌ ６４ ｐｐｌ＋１本品は９本
発明方法により得られる結晶に比べ、夾雑物の混入があ
り、シｙｐもアンモニウム含量は約１０倍以上晶い。
参考例 ２
（固定化菌体を用いるＬ−アラニンの製造〕１１） ア
スパルターゼ活性を有する固定化菌体の調製 コーンスチーブリ力−２％、ミースト２％、フマル酸ｉ
、ｉ４％、フマル酸ジ了ンモニウム０．５％、第一リン
酸カリウム０．２％および硫酸マグネシウム０．０５％
を含む培地（ρ１１７．０３ Ｉ ００−を５００ｔｎ
ｔ容坂ｌ」フラスコに入ｎ、これにニジエリシア・コリ
（ＡＴＣＣ３１３Ｑ３ ）を植菌する。３０℃で１６時
間振とう培養した後、遠心分離することによりニジエリ
シア・コリｍ体２３１１＜湿重量）を得る。
スパルターゼ活性を有する固定化菌体の調製 コーンスチーブリ力−２％、ミースト２％、フマル酸ｉ
、ｉ４％、フマル酸ジ了ンモニウム０．５％、第一リン
酸カリウム０．２％および硫酸マグネシウム０．０５％
を含む培地（ρ１１７．０３ Ｉ ００−を５００ｔｎ
ｔ容坂ｌ」フラスコに入ｎ、これにニジエリシア・コリ
（ＡＴＣＣ３１３Ｑ３ ）を植菌する。３０℃で１６時
間振とう培養した後、遠心分離することによりニジエリ
シア・コリｍ体２３１１＜湿重量）を得る。
別ニケニューゲルＷＧ（コペンハーゲンペクチンファク
トリー社製のカラギーナン）Ｆｉｙを４５℃の温水１２
９−に溶解しカラギーナン水溶液を調製し・この溶液に
上記で得たニジエリシア・コリ菌体２３７を生理食塩水
２３−にけん濁したものを４０″Ｃ【こて添加混合する
。混合液を４℃に冷キン酸１０ミリモルおよび塩化カリ
ウム２％を含む水溶液４０〇−中に浸漬し３７℃で２４
時間放置する。生成ゲルを分離し２％塩化カリウム水溶
液で洗浄することにより固定化ニジエリシア・コリ菌体
１８０Ｓｉ（浸１１を得る。
トリー社製のカラギーナン）Ｆｉｙを４５℃の温水１２
９−に溶解しカラギーナン水溶液を調製し・この溶液に
上記で得たニジエリシア・コリ菌体２３７を生理食塩水
２３−にけん濁したものを４０″Ｃ【こて添加混合する
。混合液を４℃に冷キン酸１０ミリモルおよび塩化カリ
ウム２％を含む水溶液４０〇−中に浸漬し３７℃で２４
時間放置する。生成ゲルを分離し２％塩化カリウム水溶
液で洗浄することにより固定化ニジエリシア・コリ菌体
１８０Ｓｉ（浸１１を得る。
（２）Ｌ −アスパラギン酸−β−デカルボキシラーゼ
活性を有する固定化菌体の調製 グルタミン酸ナトリウム３．２＜、 ミースト０．５＜
、？Ｉ！−リン酸カリウム０．０５％＄（よび硫酸マグ
ネシウム０．ＯＪ％を含む培地（ｐｌ＋７．３３を５（
）〇−容坂口フラスコに１本当り１２０ｄつつ１０本に
入れ、これにシュードモナス・ダク不一（ＩＡＭ１］５
２．ｌを植菌する。３０℃で２４時時間上う培養した後
、遠心分離することによりシュードモナス・グクネー菌
体２０１（湿改ｌ猜）を得る。
活性を有する固定化菌体の調製 グルタミン酸ナトリウム３．２＜、 ミースト０．５＜
、？Ｉ！−リン酸カリウム０．０５％＄（よび硫酸マグ
ネシウム０．ＯＪ％を含む培地（ｐｌ＋７．３３を５（
）〇−容坂口フラスコに１本当り１２０ｄつつ１０本に
入れ、これにシュードモナス・ダク不一（ＩＡＭ１］５
２．ｌを植菌する。３０℃で２４時時間上う培養した後
、遠心分離することによりシュードモナス・グクネー菌
体２０１（湿改ｌ猜）を得る。
別にノ？ニューゲルＷＧ４．０３Ｓ’を５０℃の温水８
５ｎｌに溶解しカラギーナン水溶液を調製し、この溶液
に上記で得たシュー トモナス・ダクネー菌体２０７を
生理食ＩＩＡ水２０−にけん濁したものを４５℃にて添
加混合する。混合液を４℃に冷却し３０か放置し生成す
るゲルを１辺が約３露の立方体に成型することにより固
定化シュードモナス・グクネー菌体１３０５’（４虫り
りを得る。
５ｎｌに溶解しカラギーナン水溶液を調製し、この溶液
に上記で得たシュー トモナス・ダクネー菌体２０７を
生理食ＩＩＡ水２０−にけん濁したものを４５℃にて添
加混合する。混合液を４℃に冷却し３０か放置し生成す
るゲルを１辺が約３露の立方体に成型することにより固
定化シュードモナス・グクネー菌体１３０５’（４虫り
りを得る。
（３）酵素反応
（１）で得１こ固疋化菌体４０ノを外とう管材カラム（
内径１．６ Ｃｌ１１．長さ１９ｃｍ）に充填する。こ
れにＬ−アスパラギン酸結晶を添加することによりｐＨ
６〜６−５１Ｃ調裂し、該溶液に１１４Ｍのピリドキサ
ールリン１糞を添加する。この溶液を（２）で得た固定
って２０ ｍ１Ａｔｒの流速で導通する。流出液を集め
るコトによりＬ−了う二ン含有酵素反応終丁欲を得る。
内径１．６ Ｃｌ１１．長さ１９ｃｍ）に充填する。こ
れにＬ−アスパラギン酸結晶を添加することによりｐＨ
６〜６−５１Ｃ調裂し、該溶液に１１４Ｍのピリドキサ
ールリン１糞を添加する。この溶液を（２）で得た固定
って２０ ｍ１Ａｔｒの流速で導通する。流出液を集め
るコトによりＬ−了う二ン含有酵素反応終丁欲を得る。
Claims (1)
- フマル酸と了ンモニＴを基實として、固定化されたアス
パルターゼ活性を有する微生物もしくはその処理物およ
び固定化されたＬ−アスパラギン酸−β−デカルボキシ
ラーゼ活性を有する微生物もしくはその処理物を用いて
酵素反応させて得られる酵素反応終了液からＬ−アラニ
ン結晶を取得するに際し、あらｆ））しめ該酵素反応終
了液中にアルカリ金属を序在させておくことを特徴とす
るＬ−アラニン結晶の取得方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12059483A JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP12059483A JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6012994A true JPS6012994A (ja) | 1985-01-23 |
| JPH0379990B2 JPH0379990B2 (ja) | 1991-12-20 |
Family
ID=14790123
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP12059483A Granted JPS6012994A (ja) | 1983-07-01 | 1983-07-01 | Ｌ−アラニン結晶の取得方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6012994A (ja) |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5327792A (en) * | 1976-08-25 | 1978-03-15 | Hitachi Ltd | Fuel and control rod supporter |
| JPS568691A (en) * | 1979-07-03 | 1981-01-29 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Method and apparatus for continuous production of l-alanine |
| JPS5783289A (en) * | 1980-09-17 | 1982-05-25 | Grace W R & Co | Preparation of l-alanine by using fixed microorganism |
-
1983
- 1983-07-01 JP JP12059483A patent/JPS6012994A/ja active Granted
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5327792A (en) * | 1976-08-25 | 1978-03-15 | Hitachi Ltd | Fuel and control rod supporter |
| JPS568691A (en) * | 1979-07-03 | 1981-01-29 | Denki Kagaku Kogyo Kk | Method and apparatus for continuous production of l-alanine |
| JPS5783289A (en) * | 1980-09-17 | 1982-05-25 | Grace W R & Co | Preparation of l-alanine by using fixed microorganism |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0379990B2 (ja) | 1991-12-20 |
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