JPH0380467B2 - - Google Patents

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JPH0380467B2
JPH0380467B2 JP59071515A JP7151584A JPH0380467B2 JP H0380467 B2 JPH0380467 B2 JP H0380467B2 JP 59071515 A JP59071515 A JP 59071515A JP 7151584 A JP7151584 A JP 7151584A JP H0380467 B2 JPH0380467 B2 JP H0380467B2
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JP
Japan
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culture solution
filamentous fungi
aerobic
aerobic filamentous
culture
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JP59071515A
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Isao Endo
Teruyuki Nagamune
Toshio Higuchi
Ichiro Inoe
Keiichi Ushama
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Nitto Denko Corp
RIKEN
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Nitto Denko Corp
RIKEN
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Description

【発明の詳細な説明】 (産業上の利用分野) 本発明は好気性糸状菌の培養方法に関する。
(従来技術) 培養液内で、かび、放線菌等の細胞を増殖培養
して、グリセリン、アルコール等の一次代謝産物
またはペニシリン、ストレプトマイシン等の二次
代謝産物の生産が工業的レベルで行なわれている
ことはよく知られている。
培養液内で細胞を培養すると、培養する細胞の
種類によつて、細胞はペレツト増殖あるいはパル
ピー増殖によつて増殖する。ペレツト増殖とは培
養細胞の菌糸と菌糸とが培養中にからまり、粒状
の細胞のかたまりを形成して増殖する増殖形態を
いい、ペニシリンの生産等において生じる。パル
ピー増殖とは培養液中に増殖細胞が均一に分布し
た状態で増殖する増殖形態をいい、ストレプトマ
イシンの生産等において生じる。しかしながらこ
れら従来の増殖形態においては種々の問題があつ
た。ペレツト増殖を起こすと、細胞の増殖率が極
めて低く、効率よく細胞を増殖することができな
いことはよく知られている。また、パルピー培養
を起こす細胞の場合は、培養細胞が培養液中に均
一に混合した状態で存在するので、培養液の粘度
が極めて高くなり、培養液の攪拌に要する動力が
著しく高くなる。さらに、ペレツト増殖、パルピ
ー増殖の両方とも培養液中に細胞が混合された状
態で存在するので、培養液から代謝産物を分離抽
出する際あるいは細胞増殖中の培養液から少量の
サンプルを採取して、培養液および代謝産物を分
析する際において、固形物である細胞を除去する
必要があり、培養液からの代謝産物の分離抽出あ
るいは培養液のモニターを行なうのが極めて厄介
かつ時間の浪費をともなうものであつた。
(発明の目的) 本発明の目的は、従来の培養法によるとペレツ
ト増殖を生じる好気性糸状菌をペレツト増殖とは
異なる増殖形態により増殖させ、効率よく好気性
糸状菌を培養する方法を提供することにある。ま
た、本発明の目的は、培養液中には増殖好気性糸
状菌を存在せしめない状態で好気性糸状菌を増殖
でき、培養液中から固形物である好気性状菌を除
去する工程を介すことなく、培養液中から容易に
代謝産物の分離抽出あるいは培養液の分析を行な
うことのできる好気性糸状菌の培養方法を提供す
ることにある。さらに、本発明の別の目的は、好
気性糸状菌増殖中の培養液の粘度を上昇せしめ
ず、低い動力で培養液を攪拌することができると
ともに、酸素の供給条件をよくすることができる
好気性糸状菌の培養方法を提供することにある。
(発明の構成) 本発明の好気性糸状菌の培養方法は、培養液中
に分散された複数の発泡担体内で好気性糸状菌を
培養することを特徴とする。
本発明で使用される発泡担体としては、親水性
材料を発泡したもの、疎水性材料を発泡した中の
いずれのものをも使用できるが、例えばポリビニ
ルアルコールを発泡したもの、ウレタンフオーム
等を挙げることができる。ウレタンフオームとし
ても、例えばポリエチレングリコールジイソシア
ネートとポリプロピレングリコールジイソシアネ
ートから連続発泡法で製造したものを使用するこ
とができる。発泡担体の細孔径が10μm乃至10mm
のものが好気性糸状菌増殖を発泡担体の細好内で
効率よく行なうことができ好ましい。発泡担体を
培養液に分散して使用する場合は、発泡担体の大
きさは培養槽の大きさの1/5以下好ましくは、1/2
0以下とすることが攪拌効率向上の点から望まし
くまた発泡担体の最大量体積(発泡担体内部の発
泡の体積をも含めた見かけの体積)は培地100ml
当り100cm3好ましくは50〜10cm3とするのが好まし
い。本発明の方法で増殖できる好気性糸状菌とし
ては、カビ、放線菌を挙げることができる。
(発明の効果) 本発明は好気性糸状菌の培養を発泡担体の細孔
内で行なうようにしたものであり、本発明の好気
性糸状菌の培養方法を使用すると、従来の培養方
法を用いた場合と異なつた増殖形態により細胞が
増殖する。
具体的には、従来法によるとペレツト増殖を起
していた好気性糸状菌が、本発明の方法によれば
パルピー増殖によりあるいは発泡担体内のみで好
気性糸状菌の増殖が行なわれ、培養液内には好気
性糸状菌が存在しない新たな増殖形態により増殖
される。また従来法によるとパルピー増殖を起し
ていた好気性糸状菌が、本発明の方法によれば培
養液内の好気性糸状菌の数がより減少したパルピ
ー増殖によりあるいは発泡担体内のみで好気性糸
状菌の増殖が行なわれ培養液内に好気性糸状菌が
存在しない新たな増殖形態により増殖される。
従つて、本発明を使用すると従来ペレツト増殖
を起していた好気性糸状菌を、ペレツト増殖とは
異なる増殖形態により効率よく好気性糸状菌の増
殖を行なうことができる。また、発泡担体内のみ
で好気性糸状菌の増殖が行なわれ、培養液中には
好気性糸状菌が存在しない新たな増殖形態により
好気性糸状菌の増殖が行なわれる場合は、固形物
である好気性糸状菌を培養液から分離抽出する工
程を省略することができるので、培養液からの代
謝産物の分離抽出および培養液の分析を簡易にか
つ短時間で行なうことができる。パルピー増殖を
行なう場合であつても、従来法の場合よりも培養
液中の好気性糸状菌の量が少ないので、固形物の
分離を容易に行なうことができる。さらに、培養
液中に好気性糸状菌がほとんど存在しないが、存
在しても従来法の場合よりも少量であるので、培
養液の粘度を低くおさえることができ、培養液の
攪拌を低動力で効率よく行なうことができる。ま
た、酸素の供給条件をよくすることができるの
で、好気性糸状菌を効率よく培養することができ
る。
(実施例) 以下、本発明を実施例により説明する。
実施例 1 水1に、ラクトース40g、コーンスチープリ
カー20g、NaNO33g、KH2PO40.5gおよび
MgSO40.25gを添加混合して調整した培養液100
mlを容積300mlの三角フラスコに入れ、この培養
液にペニシリウム クリソゲナム(Penicillium
chrysogenum)の前培養液1mlを添加し、さら
に三角フラスコ内に平均細孔径約0.5mmを有する
約5mm角の日東電気工業製人工土壌用ウレタンホ
ーム2g(22cm3)を入れた。三角フラスコ内の培
養液の温度を24℃に保持して、この三角フラスコ
をロータリーシエーカにより攪拌速度200rpmで
攪拌して培養し、これを実施例1とした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記
実施例1と同様にして好気性糸状菌を培養し、こ
れを比較例1とした。
比較例1の場合は増殖好気性糸状菌が培養液中
に均一に混合して増殖するパルピー増殖であつた
が、実施例1の場合は好気性糸状菌が発泡担体内
で増殖し、好気性糸状菌増殖後においても、培養
液中には好気性糸状菌が存在せず、好気性糸状菌
増殖開始時と同様培養液は透明な状態を保持し続
けた。
第1図に、実施例1と比較例1における培養液
中のラクトース濃度と生成ペニシリンの生産量を
示す。
ラクトース濃度は比較例1の方が実施例1より
も早く低下したが、ペニシリンの生産量は実施例
1および比較例1ともに7日目で同程度の最大量
を示した。生成ペニシリンの量単位γはμg/
を意味する。
実施例 2 実施例1と全く同様の培養液100mlを容積300ml
の三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリ
ウム クリソゲナム(Penicillium
chrysogenum)の前培養液1mlを添加し、さら
に三角フラスコ内に平均細孔径約0.5mmの約5mm
角のポリプロピレングリコール(RPG)ウレタ
ンホーム1g(30cm3)を入れた。実施例1と同様
にして三角フラスコ内の培養液の温度を24℃に保
持して、この三角フラスコをロータリーシエーカ
を用い攪拌速度200rpmで攪拌して培養し、これ
を実施例2とした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記
実施例2と同様にして好気性糸状菌を培養し、こ
れを比較例2とした。
比較例2の場合は増殖好気性糸状菌が培養液中
に均一に混合して増殖するパルピー増殖であつた
が、実施例2の場合は好気性糸状菌が発泡担体内
で増殖し、好気性糸状菌増殖後においても、培養
液中には好気性糸状菌が存在せず、好気性糸状菌
増殖開始時と同様培養液は透明な状態を保持し続
けた。
第2図に、実施例2と比較例2における培養液
中のラクトース濃度と生成ペニシリンの生産量を
示す。
ラクトース濃度は比較例2の方が実施例2より
も早く低下したが、ペニシリンの生産量の最大値
は実施例2の方が比較列2よりも1日おくれて示
されたが、その生産量はほぼ同じであつた。
実施例 3 水1に、サツカロース30g、酵母エキス5
g、K2HPO41g、NaNO33g、MgSO4
7H2O0.5g、KCl0.5g、FeSO4・7H2O0.01gを
添加混合してなるチヤペツク(Czapek)培養液
100mlを容積300mlの三角フラスコに入れ、この培
養液にアスペルギルスオリゼー(Aspergillus
oryzae)の前培養液1mlを添加し、さらに三角
フラスコ内に平均細孔径約0.5mmの約5mm角の日
東電気工業製人工土壌用ウレタンホーム0.5g
(5.5cm3)を入れた。次に、三角フラスコ内の培養
液の温度を24℃に保持して、この三角フラスコを
ロータリーシエーカにより攪拌速度200rpmで攪
拌して、これを実施例3Aとした。この実施例3A
と全く同様にして別の三角フラスコで培養したも
のを実施例3Bとした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記
実施例3Aおよび3Bと同様にして、2個の別の三
角フラスコで好気性糸状菌を培養し、これを比較
例3Aおよび3Bとした。
比較例3Aおよび3Bの場合は、培養液中に好気
性糸状菌の固まりを作るペレツト増殖により好気
性糸状菌増殖が行なわれたが、実施例3Aおよび
3Bの場合はパルピー増殖により好気性糸状菌が
行なわれた。
第3図に実施例3Aおよび3Bと比較例3Aおよび
3Bにおける培養液中のラクトース濃度とα−ア
ミラーゼ活性の生産量を示す。
第3図に示されるように、本発明の実施例3A
および3Bにおけるα−アミラーゼ活性の生産量
は比較例3Aおよび3Bよりも極めて高い。また、
グルコースの分解も比較列3Aおよび3Bよりも実
施例3Aおよび3Bの方が早かつた。α−アミラー
ゼ活性の量単位DPはブルーバリエー
(bluevalue)法において、40℃30分間に青色ヨウ
素定色10%低下せしめたアミロースのミリグラム
数である。
実施例 4 水1に、グルコース25g、大豆粉25g、乾燥
酵母3g、(NH42SO42g、NaCl2g、
KH2PO40.1g、CaCO32g、大豆油2.4mlを添加混
合して作成した培養液100mlを容積300mlの三角フ
ラスコに入れ、この培養液にストレプトマイセス
グリセウス(Streptmyces grisevs)を前培養
液1mlを添加し、さらに三角フラスコ内に平均細
孔径約0.5mm、約5mm角の日東電気工業製人工土
壌用ウレタンホーム0.5g(5.5cm3)を入れた。次
に、三角フラスコ内の培養液の温度を24℃に保持
して、この三角フラスコをロータリーシエーカに
より攪拌速度200rpmで攪拌して培養し、これを
実施例4Aとした。この実施例4Aと全く同様にし
て別の三角フラスコで培養したものを実施例4B
とした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は上記実
施例4Aおよび4Bと同様にして、2個の異なる三
角フラスコで好気性糸状菌を培養し、これを比較
例4Aおよび4Bとした。
実施例4Aおよび4B、比較例4Aおよび4Bのい
ずれの場合も、培養液中に好気性糸状菌が均一に
混合するパルピー増殖により好気性糸状菌が増殖
したが、実施例4Aおよび4Bにおける培養後の培
養液の粘度は比較例4Aおよび4Bの培養後の培養
液の粘度よりも低かつた。
第4図に、実施例4Aおよび4Bと比較列4Aおよ
び4Bにおける培養液中のグルコース濃度と生成
ストレプトマイシンの生産量を示す。
第4図に示されるように、本発明の実施例4A
および4Bにおける生成ストレプトマイシンの生
産量は比較例4Aおよび4Bよりも短期間でより多
く得た。
実施例 5 実施例1と全く同様の培養液100mlを容積300ml
の三角フラスコに入れ、この培養液中にペニシリ
ニウム クリソゲナム(penicillium
chrysogenum)の前培養液1mlを添加し、さら
に三角フラスコ内に平均細孔径約0.5mmの約5mm
角の日東電工製人工土壌用ウレタンホーム0.5g
(5.5cm3)を入れた。次に実施例1と同様にして三
角フラスコ内の培養液の温度を24℃に保持して、
この三角フラスコをロータリーシエーカを用い攪
拌速度200rpmで攪拌して培養し、これを実施例
5Aとした。この実施例5Aと全く同様にして別の
三角フラスコで培養したものを実施例5Bとした。
ウレタンホームを混入せしめない以外は、上記
実施例5Aおよび5Bと同様にして、2個の異なる
三角フラスコで好気性糸状菌を培養し、これを比
較例5Aおよび5Bとした。
比較例5Aおよび5Bの場合は、培養液中に好気
性糸状菌の固まりを作るペレツト増殖により好気
性糸状菌増殖が行なわれたが、実施例5Aおよび
5Bの場合は増殖好気性糸状菌が培養液中に均一
に混合したパルピー増殖により好気性糸状菌増殖
が行なわれた。
第5図に、実施例5Aおよび5Bと比較例5Aおよ
び5Bにおける培養液中のラクトース濃度と生成
ペニシリンの生産量を示す。
第5図に示されるように、本発明の実施例5A
および5Bにおける生成ペニシリンの生産量は比
較例5Aおよび5Bよりも短期間でより多く得られ
た。また、ラクトースの分解も比較例5Aおよび
5Bよりも実施例5Aおよび5Bの方が早かつた。
次に本発明を利用する工業レベルでの好気性糸
状菌の培養方法を説明する。
第6図は本発明の方法を利用する好気性糸状菌
の培養装置の一実施態様の概略図である。培養槽
1内部には上記各実施例において記載された培養
液2が保持されている。培養液2には複数の発泡
担体3が分散混合されており、培養液2には培養
する好気性糸状菌が混入されている。培養液2は
攪拌装置4により攪拌される。また培養液2は温
度コントローラによりほぼ一定に保持される。培
養液は上方のドリツプ装置5から順次培養槽1内
に滴下されており、増殖好気性糸状菌への栄養が
補給されている。培養槽1には培養液の状態を測
定するPHセンサ溶存酸素濃度センサー7、温度セ
ンサー8などのプローブ7が設けられているが、
このプローブ6,7,8は培養液2が攪拌される
ことにともなり発泡担体3により常時洗浄される
ので培養液2の状態を正確に測定することができ
る。培養液2をサンプルするためあるいは代謝産
物を集積するために、培養液2を取り出す際は培
養槽1の下部に設けられた取出口9から培養液2
が取り出されるが、発泡担体3が培養液2に分散
混合されている場合は、好気性糸状菌の増殖は専
ら発泡担体3の細孔の内部で行なわれるので、培
養液2中には増殖好気性糸状菌がほとんど存在し
ない状態となるかあるいはより減少した状態とな
り固型物である好気性糸状菌の分離を全く必要と
しないがあるいはこの分離作業が極めて容易にな
る。
【図面の簡単な説明】
第1図乃至第5図はそれぞれ実施例1乃至実施
例5の実験結果を示すグラフ、第6図は本発明の
方法を使用する工業レベルでの細胞培養方法を説
明する概略図である。 1……培養槽、2……培養液、3……発泡担
体、4……攪拌装置、5……ドリツプ装置、6…
…PHセンサー、7……溶存酸素温度センサー、8
……温度センサー、9……取出口。

Claims (1)

  1. 【特許請求の範囲】 1 培養液中に分散された複数の発泡担体内で好
    気性糸状菌を培養することを特徴とする好気性糸
    状菌の培養方法。 2 前記発泡担体の細孔径が10μm乃至10mmであ
    る特許請求の範囲第1項記載の好気性糸状菌の培
    養方法。 3 前記発泡担体の大きさが、前記培養液の保持
    する培養槽の大きさの1/5以下である特許請求の
    範囲第1項または第2項記載の好気性糸状菌の培
    養方法。 4 前記発泡担体の最大量体積が前記培養液
    100μ当たり100cm3以下である特許請求の範囲第
    1項乃至第3項いずれか1項の好気性糸状菌の培
    養方法。
JP7151584A 1984-04-10 1984-04-10 好気性糸状菌の培養方法 Granted JPS60214878A (ja)

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