JPH04108398A - 一体型多層分析要素 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、体液中の成分を測定するための一体型多層分
析要素およびその製造方法に関し、更に詳しくは、テト
ラゾリウム塩を１つの層に含み、アルカリ性緩衝剤を他
の層に含む一体型多層分析要素およびその製造方法に関
する。

［従来の技術］ 体液中の成分を分析するに当って、共有すると不安定で
徐々に着色する基質や発色剤がある。特にテトラゾリウ
ム塩はアルカリ緩衝剤と共存すると、経時的に強度に着
色する。従って、種々の方法を用いて分離することが考
案されている。

オウエン（Ｏｔｅｎ）らの米国特許第４，３５１゜８９
９号には、試薬溶液をまず第１の濾紙に含浸し、乾燥し
て試薬層を形成し、別に、第２の濾紙にアルカリ緩衝液
を含浸し、乾燥して緩衝剤含有層を形成し、予め形成し
たこれら両層を物理的に積層して作成した分析要素を、
体液成分の分析に用いることか開示されている。オウエ
ンらの方法は、テトラゾリウム塩や酵素、補酵素とアル
カリ緩衝剤とを完全に分離できるか、測定の為に、この
２層を積層する治具（マウント等）か必要となりうる。

また、オウエンらの分析要素を大量生産するのにあたっ
ては、この２層を積層、マウントする加工機等の導入か
必要となり、大きなコストアップになるという欠点をも
っている。

特開昭６３−９４９９５号公報には、有機溶媒に可溶な
緩衝剤を溶媒に溶解又は分散させて、溶液または懸濁液
を多孔性展開層に噴霧又は含浸し、試薬層にラミネート
している。有機溶媒に可溶で、かつ、検体の水にも可溶
なアルカリ緩衝剤を用いることは、良好な緩衝能をもつ
緩衝剤を選択するに当って、非常に大きな制約を受ける
ことになり、しかもそのようなアルカリ緩衝剤は種類も
少ない。

また、有機溶媒中のｐＨを正確に測定することは非常に
困難で、さらに目的のｐＨにする為に、アルカリや酸を
添加した時、塩かできて沈澱を生しる可能性かあり−１
その際のｐＨはより不正確となる。沈澱を生した有機溶
媒の緩衝液を均一に噴霧、含浸することは実質的に不可
能であろう。

Ｆ発明が解決しようとする課題− 本発明は、安定でかつ容易に製造できる一体型多層分析
要素、特にテトラツリウム塩とアルカリ緩衝剤とを別個
の層に含む一体型多層分析要素およびその製造方法を提
供しようとするものである。

［課題を解決するための手段］ 本発明は、上記課題を解決する為に、テトラゾリウム塩
含有層、アルカリ性緩衝剤含有層、およびこれら両層の
間に配置された中間層から成り、テトラゾリウム塩含有
層およびアルカリ性緩衝剤含有層の少なくとも一方に、
テトラゾリウム塩およびアルカリ性緩衝剤の少なくとも
一方を実質的に溶解しない溶媒を塗布して、テトラゾリ
ウム塩含有層およびアルカリ性緩衝剤層を積層したこと
を特徴とする一体型多層分析要素、および予め形成した
テトラゾリウム塩含有層およびアルカリ性緩衝剤含有層
の少なくとも一方に、テトラゾリウム塩およびアルカリ
性緩衝剤の少なくとも一方を実質的に溶解しない溶媒を
塗布し、両層を積層し、溶媒を乾燥することを特徴とす
る一体型多層分析要素の製造方法を提供するものである
。

中間層を形成する為の溶媒は、バインター樹脂を含んで
いてもよい。

本発明において用いるテトラゾリウム塩は既知のテトラ
ゾリウム塩のいずれでもよいが、代表的なテトラゾリウ
ム塩は次のような化合物である＝３、３’−［３，３’
−ジメトキシ−（１，１”−ビフェニル）−４，４°−
ジイルコービス［２−（ｐ−ニトロフェニル）−５−フ
ェニル−２Ｈ−テトラゾリウムクロリド］　　（ＮＴＢ
）、 ３．３　−［３，３°−ジメトキシ−（１，１“−ビフ
ェニル）−４，４°−ジイルヨービス［２，５−ビス（
ｐニトロフェニル）−２８−テトラソリウムクロリドコ
　（ＴＮＴＢ）　　、 ３．３　−（１，１’−ビフェニル−４４°−ジイル）
−ビス（２，５−ジフェニル−２Ｈ〜テトラゾリウムク
ロソド（ＮｅｏＴＢ）、 ３．３”［３，３’−ンメトキ／−（１，１“−ビフェ
ニル）−４，４“−ジイルヨービス（２，５−ンフェニ
ルー２Ｈ−テトラゾリウムクロリド）（ＴＢ）、３−（
ｐ−ヨードフェニル）　−２−（ｐ−ニトロフェニル）
−５〜フェニル−２Ｈ−テトラソリウムクロリド（ＩＮ
Ｔ）、 ３−（４，５−ツメトチルー２−チアゾゾル）２．５−
ジフェニル−２Ｈ−テトラゾリウムブロミ　ド　（ＭＴ
Ｔ）　　、 ２．５−ジフェニル−３−（１−ナフチル）−２Ｈ−テ
トラゾリウムクロワ）”（ＴＶ）。

アルカリ緩衝剤としては、ｐＨか７以上で緩衝能をもつ
ものであれば、既知のアルカリ緩衝剤のいずれを使用し
てもよい。

緩衝剤含有層には、測定する項目に応じて他の試薬を含
ませ得る。例を挙げれば、以下の通りである。

乳酸：乳酸脱水素酵素、ＮＡＤ、シアポラーゼグルコー
ス：クルコース脱水素酵素、ＮＡＤ１ジアホラーゼ ケトン体、３−ヒドロキシ酪酸脱水素酵素、ＮＡＤ、ジ
アホラーゼ コレステロール：コレステロール脱水素酵素、ＮＡＤ、
ジアホラーゼ 胆汁酸：３α−ヒドロキシステロイド脱水素酵素、ＮＡ
Ｄ、ジアホラーゼ アルコール：アルコール脱水素酵素、ＮＡＤ。

ジアホラーゼ フルクトサミンが測定対象である場合、他の試薬は必要
でない。

本発明の多層分析要素は、テトラゾリウム塩含有層およ
びアルカリ性緩衝剤含有層を予め形成し、それらの少な
くとも一方に、テトラゾリウム塩およびアルカリ性緩衝
剤の少なくとも一方を実質的に溶解しない溶媒を塗布し
、両層を積層し、溶媒を乾燥することにより製造するこ
とができる。

アルカリ緩衝剤含有層は、適当な溶媒にバインダーおよ
びアルカリ緩衝剤を溶解し、適当な基材に塗布し、乾燥
することにより形成することができる。バインターとし
ては、ポリビニルピロリドン、ヒドロキンプロピルセル
ロース、メチルセルロース、アルキン酸ナトリウム、ポ
リアクリル酸セラチンなとの親水性高分子が好適である
。これら親水性高分子を用いる場合、溶媒は水性媒体、
特に水である。

テトラゾリウム塩含有層は、テトラゾリウム塩を溶液と
し、多孔性マトリックス、例えば濾紙、布、メンブレン
フィルターなどに含浸し、乾燥して形成する。テトラゾ
リウム塩を溶解する溶媒は、既知である。

中間層を形成する溶媒としては、テトラゾリウム塩およ
びアルカリ緩衝剤の少なくとも一方、好ましくは両方を
溶解しない溶媒から選ばれ、混合溶媒であっても良い。

溶媒としては、アセトン、イソプロピルアルコール、プ
ロピルアルコール、ブタノール、クロロホルム、塩化メ
チレン、トルエンなどが例示できる。

溶媒は、テトラゾリウム塩およびアルカリ緩衝剤の少な
くとも一方を溶解しないので、テトラゾリウム塩含有層
およびアルカリ緩衝剤含有層のいずれかに塗布し、塗布
面を重ね合わせて両層を積層しても、テトラゾリウム塩
およびアルカリ緩衝剤が溶媒により形成される中間層に
おいて混合することがなく、多層分析要素内では、実質
的にテトラゾリウム塩とアルカリ緩衝剤か分離されてい
る。

中間層を形成する溶媒には、場合によりバインダーを加
えてもよく、バインダーとしては中間層の溶媒に可溶な
ものを用いることができる。

［実施例］ 次に、実施例を示し、本発明を具体的に説明する。

実施例１ 乳酸測定用多層要素の作製 試薬／アルカリ緩衝剤含有層を形成する為に、下記成分
： 乳酸脱水素酵素　　　　　　　　　３０　ＫＵβ−ＮＡ
Ｄ　　　　　　　　　　　　１００巧ジアホラーゼ　　
　　　　　　　　　５　ＫＵｏ、３Ｍ炭酸緩衝液（ｐＨ
９，０）　　　　９９ポリビニルピロリドン　　　　　
　　１９１０％ト’Ｊ）ンＸ１００　　　　　　　　５
（１＋ｓｊを混合し、下引き処理を施したポリエチレン
テレフタレートフィルムにコーティングし、４０°Ｃで
３０分間乾燥する。

テトラゾリウム塩（発色剤）層を形成する為に、下記成
分 ＮＴＢ　　　　　　　　　　　　　　３００ｉｙメタノ
ール　　　　　　　　　　　　１０９Ｈ，０１４，７９ を混合し、多孔性マトリックスに含浸し、４０°Ｃで３
０分間乾燥する。

次に、下記成分： ヒドロキシプロピルセルロース　　　２９イソプロパツ
ール　　　　　　　　９８９を混合し、得られた溶液を
テトラゾリウム塩含有多孔性マトリック層にグラビアコ
ーター等を用いてコーティングし、アルカリ緩衝剤含有
層上にラミネートし、４０°Ｃて３０分間乾燥して一体
型積層体を作製した。

この一体型積層体を５＋ｎｍＸ７ｍｍにカットし、フラ
スチノクのヘースフィルム５ｍｍＸ８０＋ｎｍの一端に
両面テープで固定して、試験片を製造した。

比較例１ 中間層を形成する溶液の溶媒としてインプロパツールに
代えて精製水を用いる以外は実施例１と同じ手順で比較
試験片を製造した。

試験片の評価（１） 実施例１および比較例１で製造した各試験片のハックグ
ラウンドを、波長５５０ｎｍでの反射率で測定し、その
反射率をクベルカームンク（ＫｕｂｅｌｋａＭｕｎｋ）
の式に従ってに／Ｓ値に変換した。

Ｋ／Ｓ値は、実施例１では０．０５であり、比較例１で
は１．２５であった。実施例１てはバックグラウンドを
比較例１の１／２０以下に抑えることができた。バック
グラウンドの着色が抑えられることによって光学的グイ
ナミックレンシが確保でき、かつ、安定に製造できる。

試験片の評価（２） 種々の濃度の乳酸水溶液を各試験片の多層要素部分に点
着し、３分後の反射率を測定し、検量線を作成した。

濃度２０　ｙｇ／　Ｊｊ及び８０ｍｇ／ｃｔＱの乳酸水
溶液について各１０回測定した時の同時再現性を検量線
より濃度換算して比較を行った。

能的にも大きく向上した。

特許出願人株式会社　京都第一科学

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １、テトラゾリウム塩含有層、アルカリ性緩衝剤含有層
   、およびこれら両層の間に配置された中間層から成り、
   テトラゾリウム塩含有層およびアルカリ性緩衝剤含有層
   の少なくとも一方に、テトラゾリウム塩およびアルカリ
   性緩衝剤の少なくとも一方を実質的に溶解しない溶媒を
   塗布して、テトラゾリウム塩含有層およびアルカリ性緩
   衝剤層を積層したことを特徴とする一体型多層分析要素
   。 ２、該溶媒がバインダー樹脂を含み、中間層がバインダ
   ー樹脂からなる請求項１記載の一体型多層分析要素。 ３、予め形成したテトラゾリウム塩含有層およびアルカ
   リ性緩衝剤含有層の少なくとも一方に、テトラゾリウム
   塩およびアルカリ性緩衝剤の少なくとも一方を実質的に
   溶解しない溶媒を塗布し、両層を積層し、溶媒を乾燥す
   ることを特徴とする一体型多層分析要素の製造方法。 ４、該溶媒がバンダー樹脂を含む請求項３記載の製造方
   法。