JPH0411558B2

JPH0411558B2 -

Info

Publication number: JPH0411558B2
Application number: JP57046179A
Authority: JP
Priority date: 1981-03-23
Filing date: 1982-03-23
Publication date: 1992-02-28
Also published as: IL65316A; HU184516B; IE52934B1; AU8181082A; IE820669L; AU555657B2; CA1202615A; DD202440A5; US4450107A; EP0061418A1; IL65316A0; ATE15051T1; DK91282A; DE3265533D1; DE3111951A1; EP0061418B1; JPS57177000A

Description

【発明の詳細な説明】

本発明は、一般式（）：［式中、R¹は水素原子又はメチル基を表わし、
R²は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を
表わし、Ｘは

【式】基又は

【式】基を表わし、Ｙはカルボニル基を表わし、かつ第１及び第２の炭素原
子間の結合は、飽和されているか又は二重結合で
あり、あるいは第１及び第２の炭素原子間の結合
が単結合である場合、Ｘは

【式】基を表わし、Ｙは

【式】基を表わす〕で示される新規の7α−アルコキシカルボニル−15β，16β−メチ
レン−４−アンドロステン化合物に関する。本発明による化合物は、重要な薬理作用を有す
る。該化合物は、なかんずくアルドステロン−拮
抗質の型の利尿剤であり、すなわちそれは、ナト
リウム−及びカリウム離脱に対してデスオキシコ
ルチコステロンの反作用を示す。本発明による化
合物は、ホルマン（Hollmann）の試験形式（G.
Hollmann他、“Tubula¨re Wirkungen und
renale Elimination von Spirolactonen”、
Naunyn−Schmidebergs Arch.Exp.Path.
Pharmak.第247巻、1964年、第419頁；P.Marx、
“Renale Wirkungen des ｄ−Aldosterons und
seines Antagonisten Spironolactons”、Diss.
Med.Fak.FU Berlin、1966年）でその作用の点
で公知のスピロノラクトンよりも驚異的に卓越し
ていることが証明される。更に、本発明は、一般式（）：［式中、R¹は水素原子又はメチル基を表わし、
R²は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を
表わし、Ｘは

【式】基又は

【式】基を表わし、Ｙはカルボニル基を表わし、かつ第１及び第２の炭素原
子間の結合は、飽和されているか又は二重結合で
ある〕で示される7α−アルコキシカルボニル−
15β，16β−メチレン−４−アンドロステン化合
物の製造法に関し、この方法は、自体公知の方法
で、一般式（）：〔式中、R¹は前記のものを表わす〕で示される
化合物を反応させて低級アルキル−エステルに変
え、場合によつては△¹−二重結合を導入し及
び／又はラクトン環を相当するプロピオン酸−カ
リウム塩に開環することを特徴とする。式（）の7α−カルボキシル化合物のエステ
ル化は、自体公知の方法により、カルボン酸と、
ジアゾアルカン、例えばジアゾメタン又はジアゾ
エタンとを、適当な溶剤中、例えばジエチルエー
テル、テトラヒドロフランもしくはジオキサン又
はこれら溶剤の混合物中で０℃〜25℃、有利に０
℃〜５℃の温度で反応させ、引続き過剰のジアゾ
アルカンを有機酸、例えば氷酢酸又は酒石酸を添
加することによつて分解し、かつこの溶液から真
空中で溶剤を除去することにより行なわれる。こ
のエステル化は、当業者に公知の方法により式
（）のカルボン酸と、例えばクロル蟻酸ブチル
−又はイソブチル−エステルのようなクロル蟻酸
−アルキルエステルとを、適当な溶剤中、例えば
テトラヒドロフラン又はジオキサン中でHCl−受
容対としての例えばトリエチルアミンのような３
級アミンの存在下で０℃〜20℃、有利に０℃〜５
℃の温度で反応させ、一般式（）：〔式中、R¹、Ｘ及びＹはそれぞれ前記のものを
表わす〕で示される混合無水物に変えることによ
り、実施することもできる。後処理するためには、３級アミン−塩酸塩の形
成される沈殿物を別し、液から溶剤を除去
し、その際に式（）の混合無水物は粗製生成物
として得られる。一般式（）の所望のエステルを得るために
は、式（）の化合物をアルコールR²−OH（但
し、R²は前記のものを表わす）に溶解し、この
溶液を24〜72時間、有利に48時間沸騰加熱し、そ
の後に溶剤を留去し、式（）の化合物を単離す
る。 △¹−二重結合の導入は、自体公知の方法によ
り行なわれ、化学的又は微生物学的方法で行なう
ことができる。１，２−脱水素化に適した化学的
脱水素化剤は、例えば二酸化セレン、２，３−ジ
クロル−５，６−ジシアノベンゾキノン、クロラ
ニル、三酢酸タリウム又は四酢酸鉛である。１，２−脱水素化に適した微生物は、例えば分
裂菌、殊に例えば単一ATCC6946のようなアルス
ロバクター属（Arthrobacter）のもの；例えば
バチルス・レンツス（B.lentus）ATCC13805及
びバチルス・スフエリクス（B.sphaericus）
ATCC7055のようなバチルス属（Bacillus）のも
の；例えば緑膿菌（P.aeruginosa）IFO3505のよ
うなシユードモナス属（Pseudmonas）のもの；
例えばフラボバクテリウム・フラベツセンス（F.
flavescens）IFO3058のようなフラボバクテリウ
ム属（Flavobacterium）のもの；例えばラクト
バチルス・ブレビス（L.brevis）IFO3345のよう
なラクトバチルス属（Lactobacillus）ならびに
例えばノカルジア・オパカ（N.opaca）
ATCC4276のようなノカルジア属（Nocardia）
のものである。１，２−脱水素化は、化学的に実施するのが好
ましい。そのためには、１，２−ジヒドロステロ
イドを適当な溶剤中で脱水素化剤と一緒に長時間
加熱する。適当な溶剤は、例えばジオキサン、第
三ブタノール、テトラヒドロフラン、トルオー
ル、ベンゾールないしはこれら溶剤の混合物であ
る。反応は、数時間後に終結する。反応は薄層クロ
マトグラフイーによつて行なうのが望ましい。反
応混合物は、出発物質が反応している場合に後処
理される。ラクトン環の場合によつては引続く開環は、同
様に自体公知の方法により行なわれる。そのため
には、ラクトンを希苛性カリ液と一緒に加熱し、
その際に３−置換プロピオン酸のカリウム塩は形
成される。反応の終結後、この反応混合物は、常法で、例
えば沈殿物、抽出物、再結晶法及び／又はカラム
クロマトグラフイー法によつて後処理される。開始剤組成物の製造 (A) ３−（7α−カルボキシ−17β−ヒドロキシ−
15β，16β−メチレン−３−オキソ−４−アン
ドロステン−17α−イル）−プロピオン酸ラク
トン：１３−（17β−ヒドロキシ−15β，16β−メチ
レン−３−オキソ−４，６−アンドロスタ−
ジエン−17α−イル）−プロピオン酸ラクト
ン（製造は西ドイツ国特許公開公報第
2652761号を参照）5.3ｇを無水テトラヒドロ
フラン100mlに溶解し、この溶液にアルゴン
雰囲気下でトルオール中のシアン化ジエチル
アルミニウムの２モルの溶液を30mlを添加
し、この溶液を還流下で30分間煮沸し、冷却
し、1n苛性ソーダ液100ml中に加える。ジク
ロルメタンでの抽出後、この溶液を20％硫酸
で洗浄し、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で
乾燥し、かつ真空中で濃縮する。粗製生成物
を珪素ゲルでヘキサン／アセトンでクロマト
グラフイー処理することによつて、融点238
℃〜241℃３−（7α−シアノ−17β−ヒドロキ
シ−15β，16β−メチレン−３−オキソ−４
−アンドロステン−17α−イル）−プロピオ
ン酸ラクトン５ｇが得られる。 α_D＝68°。UV＝ε₂₃₅＝14400。 IR：2250、1770、1680、1640cm^-1。２３−（7α−シアノ−17β−ヒドロキシ−
15β，16β−メチレン−３−オキソ−４−ア
ンドロステン−17α−イル）−プロピオン酸
ラクトン5.0ｇを無水テトラヒドロフラン300
mlに溶解し、この溶液を−70℃に冷却する。
この溶液にトルオール中の1.2モルの水素化
アルミニウムジイソブチル溶液35mlを滴加
し、この溶液を−70℃で３時間さらに撹拌
し、飽和クエン酸溶液200mlで分解し、ジク
ロルメタンで抽出し、水で中和洗浄し、硫酸
ナトリウム上で乾燥し、かつ真空中で濃縮し
た。得られる粗製生成物を珪酸ゲルでジクロ
ルメタン／アセトンでクロマトグラフイー処
理することによつて精製する。融点226℃〜
228℃の3β，5′−ジヒドロキシ−15β，16β−
メチレン−４−アンドロステン−〔17（β−
1′〕スピロ−2′〕−ペルヒドロフラン−7α−
カルボニトリル3.9ｇが得られる。 IR：3650、3500、2250、1710cm^-1。３ 3β，5′−ジヒドロキシ−15β，16β−メチレ
ン−４−アンドロステン−〔17（β−1′）スピ
ロ−2′〕−ペルヒドロフラン−7α−カルボニ
トリル3.65ｇをジメチルホルムアミド75mlに
溶解し、この溶液をイミダゾール2.25ｇ及び
第三ブチル−ジメチルシリルクロリド4.05ｇ
と一緒に室温で３時間撹拌し、氷水１中に
加え、沈殿した沈殿物を別し、ジクロルメ
タンに引取り、硫酸ナトリウム上で乾燥し、
かつ真空中で濃縮する。得られる粗製生成物
を珪酸ゲルでヘキサン／酢酸エステルで精製
する。３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチル
−シリルオキシ）−15β，16β−メチレン−４
−アンドロステン−〔（17β−1′）−スピロ−
2′〕ペルヒドロフラン−7α−カルボニトリル
4.4ｇが得られる。 IR：2250cm^-1。４３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチル−シ
リルオキシ）−15β，16β−メチレン−４−ア
ンドロステン〔（17β，−1′）−スピロ−2′〕ペ
ルヒドロフラン−7α−カルボニトリル４，
３ｇを無水トリオール100mlに溶解し、この
溶液に−70℃でトリオール中の1.2モルの水
素化アルミニウムジイソブチル溶液13mlを添
加し、この溶液をこの温度で３時間撹拌す
る。引続き、この溶液を飽和クエン酸溶液50
mlで分解し、水相をエーテルで抽出し、合し
た有機相を水で中和洗浄し、硫酸ナトリウム
上で乾燥し、かつ真空中で濃縮する。３，
5′−ビス（第三ブチル−ジメチルシリルオキ
シ）−15β，16β−メチレン−４−アンドロス
テン〔（17β，−1′）−スピロ−2′〕−ペルヒド
ロフラン−7α−カルボアルデヒド3.5ｇが得
られる。 IR：1725cm^-1。５３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチルシリ
ルオキシ）−15β，16β−メチレン−４−アン
ドロステン〔（17β，−1′）−スピロ−2′〕ペル
ヒドロフラン−7α−カルボアルデヒド1.1ｇ
をアセトン50mlに溶解し、この溶液に０℃で
ジヨーンズ（Jones）溶液2.7mlを添加し、こ
の溶液をこの温度で１時間撹拌する。引続
き、この溶液を水300mlで稀釈し、ジクロル
メタンで抽出する。合した有機相を1n苛性
ソーダ液で抽出し、水相をジクロルメタンで
洗浄し、冷たい濃硫酸で酸性にし、ジクロル
メタンで抽出し、水で中和洗浄し、硫酸ナト
リウム上で乾燥し、かつ真空中で濃縮する。
融点260℃〜262℃の3β−（7α−カルボキシ−
17β−ヒドロキシ−15β，16β−メチレン−３
−オキソ−４−アンドロステン−17α−イ
ル）プロピオン酸ラクトン528ｇが得られる。 UV：ε₂₃₈＝16900。 (B) 3β−（7α−カルボキシ−17β−ヒドロキシ−
6α−メチル−15β，16β−メチレン−３−オキ
ソ−４−アンドロステン−17α−イル）プロピ
オン酸ラクトン：１３−（17β−ヒドロキシ−15β，16β−メチ
レン−３−オキソ−４−アンドロステン−
17α−イル）プロピオン酸ラクトン（製造
は、西ドイツ国特許公開公報第2652761号を
参照）10ｇを物質でオキシ塩化燐19ml、クロ
ロホルム300ml、酢酸ナトリウム10ｇ及びメ
チラール300mlの懸濁液に加え、沸騰するま
で加熱する。この懸濁液に２時間でオキシ塩
化燐19mlを滴加し、これをさらに２時間煮沸
する。冷却後、飽和炭酸ナトリウム溶液を滴
加し、有機相を分離し、真空中で濃縮する。
得られる粗製生成物を珪酸ゲルでジクロルメ
タン／アセトンでクロマトグラフイー処理す
ることによつて精製する。融点170.5℃〜
172.5℃の３−（17β−ヒドロキシ−６，６，
15β，16β−ビス−メチレン−３−オキソ−
４−アンドロステン−17α−イル）−プロピ
エン酸ラクトン7.2ｇが得られる。 UV：ε₂₆₁＝11300。２３−（17β−ヒドロキシ−６，６，15β，
16β−ビス−メチレン−３−オキソ−４−ア
ンドロステン−17α−イル）プロピオン酸ラ
クトン７ｇにエタノール250ml中で無水酢酸
ナトリウム3.5ｇ及び５％炭素上のパラジウ
ム500mgを添加し、これに沸騰加熱しながら
８時間でエタノール40ml中のシクロヘキサン
1.4mlを少しずつ添加する。次に、この溶液
から触媒を別し、液を真空中で濃縮す
る。得られる粗製生成物を珪酸ゲルでジクロ
ルメタン／アセトンでクロマトグラフイー処
理することによつて精製する。融点228.5℃
〜231℃の３−（17β−ヒドロキシ−６−メチ
ル−15β，16β−メチレン−３−オキソ−４，
６−アンドロスタジエン−17α−イル）プロ
ピオン酸ラクトン5.9ｇが得られる。 UV：ε₂₉₀＝23800。３３−（17β−ヒドロキシ−６−メチル−
15β，16β−メチレン−３−オキソ−４，６
−アンドロスタジエン−17α−イル）プロピ
オン酸ラクトン6.8ｇに無水テトラヒドロフ
ラン150ml中でトリオール中のシアン化ジエ
チルアルミニウムの２モルの溶液35mlを添加
し、この溶液を還流下で１時間煮沸し、冷却
し、1n苛性ソーダ液100ml中に加える。ジク
ロルメタンでの抽出後、この溶液を20％硫酸
で洗浄し、水で洗浄し、硫酸ナトリウム上で
乾燥し、かつ真空中で濃縮する。３−（7α−
シアノ−17β−ヒドロキシ−6α−メチル−
15β，16β−メチレン−３−オキソ−４−ア
ンドロステン−17α−イル）プロピオン酸ラ
クトン6.7ｇが粗製生成物として得られる。 UV：ε₂₃₆＝12200。４３−（7α−シアノ−17β−ヒドロキシ−6α
−メチル−15β，16β−メチレン−３−オキ
ソ−４−アンドロステン−17α−イル）プロ
ピオン酸ラクトン（粗製生成物）6.3ｇを無
水テトラヒドロフラン400mlに溶解し、この
溶液を−70℃に冷却する。この溶液にトルオ
ール中の1.2モルの水素化アルミニウムジイ
ソブチル溶液42mlを滴加し、この溶液を−70
℃で３時間さらに撹拌し、クエン酸溶液200
mlで分解し、ジクロルメタンで抽出し、水で
中和洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、か
つ真空中で濃縮する。得られる粗製生成物を
珪酸ゲルでジクロルメタン／アセトンでクロ
マトグラフイー処理することによつて精製す
る。3β，5′−ジヒドロキシ−6α−メチル−
15β，16β−メチレン−４−アンドロステン
−〔（17β−1′）−スピロ−2′〕ペルヒドロフラ
ン−7α−カルボニトリル5.1ｇが得られる。 IR：3650、3520、2260、1710cm^-1。５ 3β，5′−ジヒドロキシ−6α−メチル−
15β，16β−メチレン−４−アンドロステン
〔（17β−1′）−スピロ−2′〕ペルヒドロフラン
−7α−カルボニトリル５ｇを無水ジメチル
ホルムアミド100mlに溶解し、この溶液をイ
ミダゾール３ｇ及び第三ブチル−ジメチルシ
リルクロリド5.5ｇと一緒に室温で３時間撹
拌し、この溶液を氷水1000ml中に加え、沈殿
した沈殿物を別し、ジクロルメタンに引取
り、硫酸ナトリウム上で乾燥し、真空中で濃
縮する。３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチ
ルシリルオキシ）−6α−メチル−15β，16β−
メチレン−４−アンドロステン〔（17β−1′）
−スピロ−2′〕ペルヒドロフラン−7α−カル
ボニトリル6.2ｇが油として得られる。 IR：2260cm^-1。６３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチルシリ
ルオキシ）−6α−メチル−15β，16β−メチレ
ン−４−アンドロステン〔（17β−1′）−スピ
ロ−2′〕ペルヒドロフラン−7α−カルボニト
リル6.0ｇを無水トリオール150mlに溶解し、
この溶液に−70℃でトルオール中の1.2モル
の水素化アルミニウムジイソブチル溶液25ml
を添加し、この溶液を−70℃で１時間撹拌
し、−20℃で２時間撹拌する。引続き、この
溶液を飽和クエン酸溶液100mlで分解し、水
相をエーテルで抽出し、合した有機相を水で
中和洗浄し、硫酸ナトリウム上で乾燥し、か
つ真空中で濃縮する。珪酸ゲルでヘキサン／
酢酸エステルでのクロマトグラフイー処理
後、３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチルシ
リルオキシ）−6α−メチル−15β，16β−メチ
レン−４−アンドロステン−〔（17β−1′）−ス
ピロ−2′〕ペルヒドロフラン−7α−カルボア
ルデヒド4.9ｇが油として得られる。 IR：1730cm^-1。７３，5′−ビス（第三ブチル−ジメチルシリ
ルオキシ）−6α−メチル−15β，16β−メチレ
ン−４−アンドロステン〔（17β−1′）−スピ
ロ−2′〕ペルヒドロフラン−7α−カルボアル
デヒド4.5ｇをアセトン125mlに溶解し、この
溶液に０℃でジヨーンズ（Jones）溶液10ml
を添加し、この溶液をこの温度で２時間撹拌
する。引続き、この溶液を水500mlで稀釈し、
ジクロルメタンで抽出する。合した有機相を
1n苛性ソーダ液で抽出し、水相をジクロル
メタンで洗浄し、冷たい濃硫酸で酸性にし、
ジクロルメタンで抽出し、水で中和洗浄し、
硫酸ナトリウム上で乾燥し、かつ真空中で濃
縮する。3β−（7α−カルボキシ−17β−ヒド
ロキシ−6α−メチル−15β，16β−メチレン
−３−オキソ−４−アンドロステン−17α−
イル）プロピオン酸ラクトン2.45ｇが得られ
る。 UV：ε₂₃₉＝14400。本発明による化合物は、医薬品を製造するため
の生薬製剤学の自体公知の方法により経口投与及
び非経口的投与使用される。次に、本発明による化合物を含有する医薬品の
薬理作用の確認試験について説明する。１ウサギの子宮細胞質ゾル中のプロゲスト−ゲ
ン受容体ウサギの子宮ホモゲノートの細胞質ゾルは、
蛋白質、受容体分子を含有し、この受容体分子
は、高い親和性及び低い能力を有するプロゲス
テロンを結合する。この受容体を標識化されて
いない合成ゲスターゲンの存在下に ³H−プロ
ゲステロンと一緒に恒温保持した場合には、特
徴のある投与量に依存する変位曲線が得られ
る。この性質は、新規化合物の一般的な記載に
とつて好適なものである。物質： 49Ci／ミリモルの特異的活量を有するプロゲ
ステロン−［1α，2α− ³H（ｎ）］は、英国のア
メルシヤム社（Amersham）から入手でき、
セフアデツクス（（Sephadex）Ｇ−10は、スウ
エデン国のフアルマシア社（Pharmacia）か
ら入手できた。他の全ての物質は、分析の程度
に応じて商業的に入手できた。動物：体重2.5〜４Kgの成熟したウサギをネンブタ
ールで麻酔して卵巣切除した。子宮を摘出する
３〜５日前に、この動物に胡麻油0.2mlに溶解
した、エストラジオールベンゾエート10μｇを
毎日皮下注射した。この動物を麻酔にかけ、か
つ頚静脈によつて瀉血した。子宮を摘出し、か
つ冷たい食塩水で洗浄した。細胞質ゾルの製造全ての後続の工程を４℃の冷たい室の中で実
施した。子宮から癒着性脂肪組織を取り除き、
この子宮を温和に洗浄し、血管から残存する幾
らかの血液を除去した。この子宮組織１ｇを
EDTA1.5×10^-3モル／及びグリセロール30
％を含有する0.01モル／トリス緩衝液１ml、
PH7.5、中に入れ、かつ鋏みで小片に裁断した。
この組織をウルトラ−ターラツクス（Ultra−
Turrax）（Janke u.Kunkel社、ドイツ在）を
用いて均質化し、かつ緩衝液２ml当り組織１ｇ
の最終濃度にまで緩衝液で洗浄された遠心分離
管に移した。この均質物質をソルバル
（Sorvall）遠心分離器中で1000×ｇで10分間遠
心分離した。また、上澄み液をベツクマン
（Beckman）遠心分離器、型式Ｌ３−50中で
105000×ｇで90分間遠心分離した。脂肪層の下
の上澄み液を捕集し、かつ−18℃で貯蔵した。恒温保持そのつどの評価分析の前に、子宮細胞質ゾル
をコルチゾールで処理し、トランスコルチンの
結合部位を飽和させた。コルチゾール10μ
（10^-4モル／）を細胞質ゾル0.4mlに添加し、
かつ４℃で15分間保持した。 ³H−プロゲステロン10μ（最終濃度10^-7モ
ル／）および標準曲線のために標識化されて
いないプロゲステロン10μまたは適当な濃度
の試験物質10μを細胞質ゾル20μに添加し
た。ステロイドを、最終濃度が３％を上廻らな
いような程度にエタノールに溶解した。希釈の
ための緩衝液は、グリセロール10％のみを含有
していた。そのつど試料を４℃で60分間恒温保
持した。恒温保持後、グリセロール10％を有す
る緩衝液0.46mlを添加し、0.2mlのアリコート
をカラム上に施した。セフアデツクスＧ−10カラム上での分離セフアデツクスＧ−10を、EDTA1.5×10^-3
モル／及びグリセロール10％を含有する10^-2
モル／トリス緩衝液、PH7.5、中に懸濁させ
た。他には何も備えていない石英綿毛の小さな
栓を有する容積約２mlのパスツール微量管をカ
ラムとして使用した。先の試験により、プロゲ
ステロンを結合した受容体は緩衝液１mlで溶離
されることが判明した。結合していないプロゲ
ステロンを緩衝液とメタノールとの混合物３ml
（１＋３、ｖ／ｖ）を用いてカラムから定量的
に放出した。溶出液の容量を緩衝液／メタノールで調節し
た後、放射能を液体シンチレーシヨン計数器中
でインスタゲル（Instagel）中の双方の画分
の場合について計数した。他のプロゲストーゲンの相対的結合親和性を
測定するために、［ ³H］−プロゲステロンと、
標識化されていない物質との変位を対数モル濃
度に対する百分率での結合としてプロツトし
た。このような変位曲線は、ロジツト対数変換
によつて線状化することができる。化合物の活
性は、プロゲステロンと等価の変位を得るため
の濃度の倍数と規定されている競合的フアクタ
ーとして示される。２ラツト前立腺の細胞質ゾル中の男性ホルモン
受容体ラツト前立腺のホモゲノートの細胞質ゾル
は、蛋白質、受容体分子を含有し、この受容体
分子は、高い親和性及び低い能力を有するジヒ
ドロテストステロン（DHT）を結合する。こ
の受容体を標識化されていない合成男性ホルモ
ンの存在下に ³H−ジヒドロテストステロンと
一緒に恒温保持した場合には、特徴のある投与
量に依存する変位曲線が得られる。この性質
は、新規化合物の一般的な記載にとつて好適な
ものである。物質： 60Ci／ミリモルの特異的活量を有する5α−
ジヒドロ−［1α，2α− ³H（ｎ）］−テストステロ
ンは、英国のアメルシヤム社（Amersham）
から入手でき、セフアデツクス（（Sephadex）
Ｇ−10は、スウエデン国のフアルマシア社
（Pharmacia）から入手できた。他の全ての物
質は、分析の程度に応じて商業的に入手でき
た。動物：体重300〜400ｇの成熟したラツト（系統：
Wistar、増殖：Schering社）をエーテルで麻
酔して卵巣切除した。卵巣を切除してから20〜
24時間後に、この動物を断頭しかつ瀉血した。
腺を氷冷却したスクロース0.25ml／中に捕集
した。細胞質ゾルの製造全ての後続の工程を４℃の冷たい室の中で実
施した。前立腺から癒着性脂肪組織を取り除
き、かつ圧搾し、血管から残存する幾らかの血
液を除去した。この前立腺組織を濾紙上でプロ
ツトし、かつ鋏みで小片に裁断した。この前立
腺組織１ｇを0.01モル／トリス緩衝液0.6ml、
PH7.5、中に入れ、かつアリコートをポツター
−エルベム（Potter−Elvehjem）５mlと一緒
に均質化した。試料を捕集し、かつ緩衝液１ml
当り組織１ｇの最終濃度にまで緩衝液で希釈し
た。このホモゲネートをベツクマン
（Beckman）遠心分離器、型式Ｌ３−50中で
105000×ｇで90分間遠心分離した。脂肪層の下
の上澄み液を捕集し、かつ−18℃でアリコート
で貯蔵した。恒温保持 ³H−DHT10μ（最終濃度５×10^-8モル／
）および標準曲線のために標識化されていな
いDHT10μまたは適当な濃度の試験物質10μ
を細胞質ゾル40μに添加した。ステロイド
を、最終濃度が３％を上廻らないような程度に
エタノールに溶解した。そのつど試料を４℃で
120分間恒温保持した。恒温保持後、緩衝液
0.44mlを添加し、0.2mlのアリコートをカラム
上に施した。セフアデツクスＧ−10カラム上での分離セフアデツクスＧ−10を、トリス緩衝液0.01
モル／モル、PH7.5、中に懸濁させた。他に
は何も備えていない石英綿毛の小さな栓を有す
る容積約２mlのパスツール微量管をカラムとし
て使用した。先の試験により、DHTを結合し
た受容体は緩衝液１mlで溶離されることが判明
した。結合していないDHTを緩衝液とメタノ
ールとの混合物３ml（１＋３、ｖ／ｖ）を用い
てカラムから定量的に放出した。溶出液の容量を緩衝液／メタノールで調節し
た後、放射能を液体シンチレーシヨン計数器中
でインスタゲル（Instagel）中の双方の画分
の場合について計数した。他の放射能ステロイドの相対的結合親和性を
測定するために、標識化されていない物質によ
る［ ³H］−DHTの変位を対数モル濃度に対す
る百分率での結合としてプロツトした。このよ
うな変位曲線は、ロツドバード（Rodbard）他
によるロジツト／対数変換によつて線状化する
ことができる（J.Lab.Clin.Med.74：770、
1969）。競合的フアクター（KF）は、試験試料
の濃度と、基準物質（すなわち、DHT）の濃
度との割合として規定される。他の男性ホルモンの相対的結合親和性を測定
するために、［ ³H］−ジヒドロテストステロン
と、標識化されていない物質との変位を対数モ
ル濃度に対する百分率での結合としてプロツト
した。このような変位曲線は、ロジツト対数変
換によつて線状化することができる。化合物の
活性は、ジヒドロテストステロンと等価の変位
を得るための濃度の倍数と規定されている競合
的フアクターとして示される。

【表】 R＝エチル，C_１＝＝C_２

Claims

【特許請求の範囲】１一般式（）：［式中、R¹は水素原子又はメチル基を表わし、
R²は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を
表わし、Ｘは【式】基又は【式】基を表わし、Ｙはカルボニル基を表わし、かつ第１及び第２
の炭素原子間の結合は、飽和されているか又は二
重結合である］で示される7α−アルコキシカル
ボニル−15β，16β−メチレン−４−アンドロス
テン化合物。２３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−15β，16β−メチレン−３−オキソ−４
−アンドロステン−17α−イル）プロピオン酸ラ
クトンである、特許請求の範囲第１項記載の化合
物。３３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−15β，16β−メチレン−３−オキソ−４
−アンドロスタジエン−17α−イル）プロピオン
酸ラクトンである、特許請求の範囲第１項記載の
化合物。４３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−15β，16β−メチレン−３−オキソ−１，
４−アンドロスタジエン−17α−イル）プロピオ
ン酸のカリウム塩である、特許請求の範囲第１項
記載の化合物。５３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−6α−メチル−15β，16β−メチレン−３
−オキソ−４−アンドロステン−17α−イル）プ
ロピオン酸ラクトンである、特許請求の範囲第１
項記載の化合物。６３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−6α−メチル−15β，16β−メチレン−３
−オキソ−１，４−アンドロスタジエン−17α−
イル）プロピオン酸ラクトンである、特許請求の
範囲第１項記載の化合物。７３−（7α−メトキシカルボニル−17β−ヒド
ロキシ−15β，16β−メチレン−４−オキソ−４
−アンドロスタテン−17α−イル）プロピオン酸
のカリウム塩である、特許請求の範囲第１項記載
の化合物。８一般式（）：［式中、R¹は水素原子又はメチル基を表わし、
R²は１〜４個の炭素原子を有するアルキル基を
表わし、Ｘは【式】基又は【式】基を表わし、Ｙはカルボニル基を表わし、かつ第１及び第２
の炭素原子間の結合は、飽和されているか又は二
重結合である］で示される7α−アルコキシカル
ボニル−15β，16β−メチレン−４−アンドロス
テン化合物の製造法において、自体公知の方法
で、一般式（）：［式中、R¹は前記のものを表わす］で示される
化合物を反応させて低級アルキル−エステルに変
え、場合によつてはΔ¹−二重結合を導入し及
び／又はラクトン環を相当するプロピオン酸−カ
リウム塩に開環することを特徴とする、一般式
（）の7α−アルコキシカルボニル−15β，16β−
メチレン−４−アンドロステン化合物の製造法。