JPH04139196A - 新規ペプチド、その製造法及び用途 - Google Patents
新規ペプチド、その製造法及び用途Info
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- JPH04139196A JPH04139196A JP2264637A JP26463790A JPH04139196A JP H04139196 A JPH04139196 A JP H04139196A JP 2264637 A JP2264637 A JP 2264637A JP 26463790 A JP26463790 A JP 26463790A JP H04139196 A JPH04139196 A JP H04139196A
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- Japan
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- peptide
- protein
- thr
- trp
- water
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
［産業上の利用分野］
本発明は、下記構造を有する新規なペプチドを提供する
ものであり、アンギオテンシン変換酵素阻害剤等として
有用なペプチドに関する。
ものであり、アンギオテンシン変換酵素阻害剤等として
有用なペプチドに関する。
’ｆｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ
［従来の技術］
アンギオテンノン変換酵素は、主として肺や血管内皮細
胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテンノンＩ（Ａｓ
ｐ−＾ｒｇ −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −１１ｅ −Ｈｉｓ
−Ｐｒｏ −Ｐｈｅ −Ｈｉｓ −Ｌｅｕ）にするア
ンギオテンシン■を生成させる酵素である。また、この
酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破壊し不活
化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与している。
胞、腎近位尿細管に存在し、アンギオテンノンＩ（Ａｓ
ｐ−＾ｒｇ −Ｖａｌ −Ｔｙｒ −１１ｅ −Ｈｉｓ
−Ｐｒｏ −Ｐｈｅ −Ｈｉｓ −Ｌｅｕ）にするア
ンギオテンシン■を生成させる酵素である。また、この
酵素は生体内降圧物質であるブラジキニンを破壊し不活
化する作用も併有し、昇圧系に強力に関与している。
従来より、アンギオテンシン変換酵素の活性を阻害すれ
ば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療に有
効であると考えられている。
ば、降圧に働き、臨床的には高血圧症の予防、治療に有
効であると考えられている。
最近ではプロリン誘導体であるカプトグリルが合成され
、降圧活性が確認されて以来、種々のアンギオテンノン
変換酵素阻害物質の合成研究か盛んであり、又天然物か
らの取得も試みられているところである。
、降圧活性が確認されて以来、種々のアンギオテンノン
変換酵素阻害物質の合成研究か盛んであり、又天然物か
らの取得も試みられているところである。
天然物由来のアンギオテノノノ変換酵素阻害剤は食品あ
るいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の高い
降圧剤となることが期待されるからである。
るいは食品原料から得られるので低毒性で安全性の高い
降圧剤となることが期待されるからである。
［発明が解決しようとする課題：・
しかしなから、天然物中に見出されるアンギオテンノン
変換酵素阻害物質は極めてまれで、僅かにブラノル産や
日本産蛇毒より得られたテプロタイド（ノナペプチド５
Ｑ２０８８＋）等や、ストレプトミセス属に属する放線
菌の代謝産物ｌ５８３ （特開昭５８−１７７９２０号
公報）か知られているに過ぎない。また、天然物を酵素
処理して得られたアンキオテノンン変換酵素阻害物質と
しては、牛乳カゼインをトリプトノンにより分解して得
たペプチド類等が知られているが（特開昭５８−１０９
４２５号、同５９−４４３２３号、同５９−４４３２４
号、同６１−３６２２６号、同６１−３６２２７号）新
規な阻害物質の開発か望まれているところである。
変換酵素阻害物質は極めてまれで、僅かにブラノル産や
日本産蛇毒より得られたテプロタイド（ノナペプチド５
Ｑ２０８８＋）等や、ストレプトミセス属に属する放線
菌の代謝産物ｌ５８３ （特開昭５８−１７７９２０号
公報）か知られているに過ぎない。また、天然物を酵素
処理して得られたアンキオテノンン変換酵素阻害物質と
しては、牛乳カゼインをトリプトノンにより分解して得
たペプチド類等が知られているが（特開昭５８−１０９
４２５号、同５９−４４３２３号、同５９−４４３２４
号、同６１−３６２２６号、同６１−３６２２７号）新
規な阻害物質の開発か望まれているところである。
［課題を解決するための手段］。
本発明者らは、かかる課題を解決すべく天然物質で副作
用の少なし）アンギオテンシン変換酵素阻害物質を鋭意
探索した結果、蛋白質特に魚肉、カツオブシを特定の酵
素で加水分解した組成物中にアンギオテンノン変換酵素
阻害活性を有する物質の存在をつきとめ、該物質がＴｒ
ｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒを骨格とするペプチドであ
ることを知見し、本発明を完成した。
用の少なし）アンギオテンシン変換酵素阻害物質を鋭意
探索した結果、蛋白質特に魚肉、カツオブシを特定の酵
素で加水分解した組成物中にアンギオテンノン変換酵素
阻害活性を有する物質の存在をつきとめ、該物質がＴｒ
ｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒを骨格とするペプチドであ
ることを知見し、本発明を完成した。
本発明のＴｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒを骨格とする
ペプチドは文献未載の新規なペプチドであり、カノオブ
ン等の蛋白質をサーモライシンによって加水分解するこ
とによって製造され、実用にあたっては組成物をそのま
ま用いても良く、あるいは必要に応じて精製して使用さ
れる。更にはペプチド合成の常套手段を適用して合成す
ることによって製造することもできる。
ペプチドは文献未載の新規なペプチドであり、カノオブ
ン等の蛋白質をサーモライシンによって加水分解するこ
とによって製造され、実用にあたっては組成物をそのま
ま用いても良く、あるいは必要に応じて精製して使用さ
れる。更にはペプチド合成の常套手段を適用して合成す
ることによって製造することもできる。
上記でいうＴｒｐはトリプトファン、Ｈｉｓはヒスチジ
ン、Ｔｈｒはスレオニンを意味し、かかるアミノ酸はい
ずれもし一体である。
ン、Ｔｈｒはスレオニンを意味し、かかるアミノ酸はい
ずれもし一体である。
本発明のペプチドは蛋白質をサーモライシンで加水分解
することによっても、ペプチド合成法でも取得できる。
することによっても、ペプチド合成法でも取得できる。
蛋白質をサーモライシンで加水分解するには、蛋白質の
性状により処決は異なるが、難溶性の場合には熱水に蛋
白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズし、所定量のサ
モライノンを加え温度１０〜８５℃程度で０．１〜４８
時間反応を行う。
性状により処決は異なるが、難溶性の場合には熱水に蛋
白質を混合し強力な撹拌でホモジナイズし、所定量のサ
モライノンを加え温度１０〜８５℃程度で０．１〜４８
時間反応を行う。
蛋白質としては、動物由来や微生物由来のもの等か任意
に用いられ、特に有用なものはカツオブン、イワシ等の
魚類又はアクチンである。加水分解液中には本発明のペ
プチド以外に、池のペプチドが存在（２てるか、これら
は混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、
本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えない
。
に用いられ、特に有用なものはカツオブン、イワシ等の
魚類又はアクチンである。加水分解液中には本発明のペ
プチド以外に、池のペプチドが存在（２てるか、これら
は混合物のままで各種の用途に用いられても良く、又、
本発明のペプチドのみを単離して用いても差し支えない
。
単離する場合は加水分解液を遠心分離等の公知の操作で
濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した後、
あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する吸着
親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶解度
の差、２種の混ざり合わない液相間における分配の差、
分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析出性
あるいは析出速度の差なとを利用する手段を適用して目
的物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要に応
して単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合せ、ま
た反覆して適用される。
濾過する。その後抽出、濃縮、乾固などを適用した後、
あるいはせずしてそのまま、種々の吸着剤に対する吸着
親和性の差、種々の溶剤に対する溶解性あるいは溶解度
の差、２種の混ざり合わない液相間における分配の差、
分子の大きさに基づく溶出速度の差、溶液からの析出性
あるいは析出速度の差なとを利用する手段を適用して目
的物を単離するのが好ましい。これらの方法は必要に応
して単独に用いられ、あるいは任意の順序に組合せ、ま
た反覆して適用される。
本発明のペプチドはペプチド合成に通常用いられる方法
、即ち液相法または固相法でペプチド結合の任意の位置
で二分される２種のフラグメントの一方に相当する反応
性カルホキノル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料とをカルボジイ
ミド法、活性エステル法等を用いて縮合させ、生成する
縮合物が保護基を有する場合、その保護基を除去させる
ことによっても製造し得る。
、即ち液相法または固相法でペプチド結合の任意の位置
で二分される２種のフラグメントの一方に相当する反応
性カルホキノル基を有する原料と、他方のフラグメント
に相当する反応性アミノ基を有する原料とをカルボジイ
ミド法、活性エステル法等を用いて縮合させ、生成する
縮合物が保護基を有する場合、その保護基を除去させる
ことによっても製造し得る。
この反応工程において反応に関与すべきでない官能基は
、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては
、例えばペンジルオキノカルポニル、ｔ−プチルオキノ
力ルホニル、ｐ−ヒフェニルイソブロビロオキシカルホ
ニル、９−フルオレニルメチルオキンカルポニル等が挙
げられる。カルホキノル基の保護基としては例えばアル
キルエステル、ベンジルエステル等を形成し得る居が挙
げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカルホキノル基
はクロルメチル樹脂、オキンメチル樹脂、Ｐ−アルコキ
ンベンジルアルコール樹脂等の担体に結合している。
、保護基により保護される。アミノ基の保護基としては
、例えばペンジルオキノカルポニル、ｔ−プチルオキノ
力ルホニル、ｐ−ヒフェニルイソブロビロオキシカルホ
ニル、９−フルオレニルメチルオキンカルポニル等が挙
げられる。カルホキノル基の保護基としては例えばアル
キルエステル、ベンジルエステル等を形成し得る居が挙
げられるが、固相法の場合は、Ｃ末端のカルホキノル基
はクロルメチル樹脂、オキンメチル樹脂、Ｐ−アルコキ
ンベンジルアルコール樹脂等の担体に結合している。
縮合反応は、カルボジイミド等の縮合剤の存在下にある
いはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペプチド活性
エステルを用いて実施する。
いはＮ−保護アミノ酸活性エステルまたはペプチド活性
エステルを用いて実施する。
縮合反応終了後、保護基は除去されるか、固相法の場合
はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。
はさらにペプチドのＣ末端と樹脂との結合を切断する。
更に、本発明のペプチドは通常の方法に従い精製される
。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等
が挙げられる。
。例えばイオン交換クロマトグラフィー、逆相液体クロ
マトグラフィー、アフィニティークロマトグラフィー等
が挙げられる。
本発明で使用するペプチドの投与経路としては、経口投
与、非経口投与、直腸内投与のいずれでもよいか、経口
投与が好ましい。本発明のペプチドの投与量は、化合物
の種類、投与方法、也者の症状・年令等により異なるか
、通常１回０．００１〜Ｉ ０００ｍ９、好ましくは０
０１−１０ｍｇを１日当たり１〜３回である。本発明の
ペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の
形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野におい
て常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が
用いられる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン
、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネノウム、合成ケイ
酸アルミニウム、カルボキンメチルセルロースナトリウ
ム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルホキノメチルセ
ルロースカルンウム、イオン交換樹脂、メチルセルロー
ス、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキノプロピルセル
ロー各、ヒドロキノプロピルメチルセルロース、ポリヒ
ニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ
酸、ステアリン酸マグネンウム、タルク、トラガント、
ヘントナイト、ヒーガム、酸化チタン、ソルヒタン脂肪
酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂
肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラ
チン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、
流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非
イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げ
られる。
与、非経口投与、直腸内投与のいずれでもよいか、経口
投与が好ましい。本発明のペプチドの投与量は、化合物
の種類、投与方法、也者の症状・年令等により異なるか
、通常１回０．００１〜Ｉ ０００ｍ９、好ましくは０
０１−１０ｍｇを１日当たり１〜３回である。本発明の
ペプチドは通常、製剤用担体と混合して調製した製剤の
形で投与される。製剤用担体としては、製剤分野におい
て常用され、かつ本発明のペプチドと反応しない物質が
用いられる。具体的には、例えば乳糖、ブドウ糖、マン
ニット、デキストリン、シクロデキストリン、デンプン
、蔗糖、メタケイ酸アルミン酸マグネノウム、合成ケイ
酸アルミニウム、カルボキンメチルセルロースナトリウ
ム、ヒドロキシプロピルデンプン、カルホキノメチルセ
ルロースカルンウム、イオン交換樹脂、メチルセルロー
ス、ゼラチン、アラビアゴム、ヒドロキノプロピルセル
ロー各、ヒドロキノプロピルメチルセルロース、ポリヒ
ニルピロリドン、ポリビニルアルコール、軽質無水ケイ
酸、ステアリン酸マグネンウム、タルク、トラガント、
ヘントナイト、ヒーガム、酸化チタン、ソルヒタン脂肪
酸エステル、ラウリル硫酸ナトリウム、グリセリン、脂
肪酸グリセリンエステル、精製ラノリン、グリセロゼラ
チン、ポリソルベート、マクロゴール、植物油、ロウ、
流動パラフィン、白色ワセリン、フルオロカーボン、非
イオン界面活性剤、プロピレングリコール、水等が挙げ
られる。
剤型としては、錠剤、カプセル剤、顆粒剤、散剤、シロ
ップ剤、懸濁剤、半開、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼
付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は
常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用
時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁する形であっ
てもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティン
グしてもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドを
水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水
あるいはブドウ糖溶液に溶解させてらよく、また緩衝剤
や保存剤を添加してもよい。
ップ剤、懸濁剤、半開、軟膏、クリーム剤、ゲル剤、貼
付剤、吸入剤、注射剤等が挙げられる。これらの製剤は
常法に従って調製される。尚、液体製剤にあっては、用
時、水又は他の適当な媒体に溶解又は懸濁する形であっ
てもよい。また錠剤、顆粒剤は周知の方法でコーティン
グしてもよい。注射剤の場合には、本発明のペプチドを
水に溶解させて調製されるが、必要に応じて生理食塩水
あるいはブドウ糖溶液に溶解させてらよく、また緩衝剤
や保存剤を添加してもよい。
これらの製剤は、本発明のペプチドを０．０１５以上、
好ましくは０５〜７０％の割合で含有することができる
。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含有
していてもよい。
好ましくは０５〜７０％の割合で含有することができる
。これらの製剤はまた、治療上価値ある他の成分を含有
していてもよい。
［作 用コ
本発明のペプチドは、新規なペプチドであり優れたアン
ギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降下作用、
プラノキニン不活化抑制作用を示し、本態性高血圧、腎
性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予防、治療剤
、これらの疾壱の診断剤や各種の病態において用いられ
る血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞の減少
、うっ血性心不全における病態の改善剤として有用であ
る。
ギオテンシン変換酵素阻害作用を有し、血圧降下作用、
プラノキニン不活化抑制作用を示し、本態性高血圧、腎
性高血圧、副腎性高血圧などの高血圧症の予防、治療剤
、これらの疾壱の診断剤や各種の病態において用いられ
る血圧降下剤、狭心病発作の閾値上昇、心筋梗塞の減少
、うっ血性心不全における病態の改善剤として有用であ
る。
「実施例コ
次に実例を挙げて本発明を更に具体的に説明する。
（Ａ）カツオブン５ｇに水４０ｍ１を加え充分ホモジナ
イズし、サーモライシンを２０ｍｇ加え３７℃、ｐＨ７
で３時間加水分解反応を行った後、１００’Ｃで１０分
間煮沸し、冷却後遠心分離して濃縮し、高速液体クロマ
トグラフィー（ＯＤＳ−、Ｐｈ−及びＣＮ−カラム）に
より精製し、ペプチドを得た。
イズし、サーモライシンを２０ｍｇ加え３７℃、ｐＨ７
で３時間加水分解反応を行った後、１００’Ｃで１０分
間煮沸し、冷却後遠心分離して濃縮し、高速液体クロマ
トグラフィー（ＯＤＳ−、Ｐｈ−及びＣＮ−カラム）に
より精製し、ペプチドを得た。
氷晶を気相プロティンシーケンサ−（アプライド バイ
オンステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用いる自動エドマ
ン分解法を適用してアミノ酸配列を分析し、下記の構造
を得た。
オンステムズ社製 ４７７ Ａ型）を用いる自動エドマ
ン分解法を適用してアミノ酸配列を分析し、下記の構造
を得た。
Ｈ−１１ｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−ＯＨ該
ペプチドの物性値はっぎのとうりである。
ペプチドの物性値はっぎのとうりである。
ＴＬＣＩｎ−ブタノール 酢酸：ピリノン 水−１５３
： １０ ： １２（ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色）Ｒｆ：０．
３７９ ｍ、ｐ：１３２°Ｃ 元素分析 Ｃ３ｚＨ４４１Ｎ＋。ｏｔ’ ０．５ＨｔＯ
としてＣＨＮ 計算値 ５６，４８ ６．４６ １９．９６測定値 ５
６，４２ ６．５０ １９ ９９比旋光度［αン５：
（Ｃ＝０．５ 水）ニー１．３゜〔ペプチドの合成〕 市販のＢｏｃ（ブトキシカルボニル） −Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）０−ＲｅｓｉｎＣヘンノル樹脂（置換率０．６４
ｔｎｅｑ／ｙ） Ｅ ０４７９をバイオサーチ社のペプ
チド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように
合成を行った。
： １０ ： １２（ （シリカゲルプレート、ニンヒドリン発色）Ｒｆ：０．
３７９ ｍ、ｐ：１３２°Ｃ 元素分析 Ｃ３ｚＨ４４１Ｎ＋。ｏｔ’ ０．５ＨｔＯ
としてＣＨＮ 計算値 ５６，４８ ６．４６ １９．９６測定値 ５
６，４２ ６．５０ １９ ９９比旋光度［αン５：
（Ｃ＝０．５ 水）ニー１．３゜〔ペプチドの合成〕 市販のＢｏｃ（ブトキシカルボニル） −Ｔｈｒ（Ｂｚ
ｌ）０−ＲｅｓｉｎＣヘンノル樹脂（置換率０．６４
ｔｎｅｑ／ｙ） Ｅ ０４７９をバイオサーチ社のペプ
チド合成装置ＳＡＭ２の反応槽に分取し、以下のように
合成を行った。
４５％トリフルオロ酢酸、２．５％アニソールを含む塩
化メチレン中、２５分間の反応により、Ｂｏａ基を除去
したのち、塩化メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロ
ピルエチルアミンを含む塩化メチレンによる中和、及び
塩化メチレンによる洗浄を行った。
化メチレン中、２５分間の反応により、Ｂｏａ基を除去
したのち、塩化メチレンによる洗浄、１０％ジイソプロ
ピルエチルアミンを含む塩化メチレンによる中和、及び
塩化メチレンによる洗浄を行った。
これと５ｍｌの０．４ Ｍ Ｂｏｃ−Ｈｉｓ （Ｔｏｓ
） （）シル基）のジメチルホルムアミド溶液、５１の
０．４Ｍノイソブロピルカルポジイミドの塩化メチレン
溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温にて２時間撹
拌反応させた。
） （）シル基）のジメチルホルムアミド溶液、５１の
０．４Ｍノイソブロピルカルポジイミドの塩化メチレン
溶液とを混合した後、反応槽に加え、室温にて２時間撹
拌反応させた。
得られた樹脂をツメチルホルムアミド、塩化メチレン、
１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチレン
、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメチルホルムア
ミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−１１ｉｓ （Ｔｏｓ
） −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）樹脂を得た。
１０％ジイソプロピルエチルアミンを含む塩化メチレン
、塩化メチレン更に塩化メチレン及びジメチルホルムア
ミドとの混合液で洗浄し、Ｂｏｃ−１１ｉｓ （Ｔｏｓ
） −Ｔｈｒ （Ｂｚｌ）樹脂を得た。
引き続き同様のＢｏａ基の除去、Ｂｏａとアミノ酸のカ
ップリングを繰り返し１ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ （Ｔｏ
ｓ） −Ｈｌｓ （Ｔｏｓ）Ｔｂｒ （Ｂｚｌ ）樹脂
を得た。
ップリングを繰り返し１ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ （Ｔｏ
ｓ） −Ｈｌｓ （Ｔｏｓ）Ｔｂｒ （Ｂｚｌ ）樹脂
を得た。
該樹脂を２０１の１０％アニソールを含むフッ化水素中
で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂から遊離させｆ
コ。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で抽出
し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これをＯＤＳカラ
ム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５ Ｃ＋ｓ）による逆相クロ
マトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｉ Ｉｅ−Ｔｒｐ−
Ｈｉｓ−ＨｊｓＴｈｒ−ＯＨ（収量８０＋ｎ）を得た。
で０℃、１時間撹拌し、ペプチドを樹脂から遊離させｆ
コ。フッ化水素を減圧留去し、残渣を３０％酢酸で抽出
し、凍結乾燥して粗ペプチドを得た。これをＯＤＳカラ
ム（Ｃｏｓｍｏｓｉｌ ５ Ｃ＋ｓ）による逆相クロ
マトグラフィーにより精製し、Ｈ−Ｉ Ｉｅ−Ｔｒｐ−
Ｈｉｓ−ＨｊｓＴｈｒ−ＯＨ（収量８０＋ｎ）を得た。
本島を前記と同一のプロテインンーケンサーにより分析
した結果、上記の組成であることか判明した。
した結果、上記の組成であることか判明した。
該ペプチドの物性値はつぎのとうりである。
尚、ＴＬＣの溶媒は以下すべて前記と同一である。
Ｒｆ：０゜３７７
ｍ、ｐ：１３２℃
元素分析 Ｃｓ５Ｈ４４Ｎ ＩｏＯ７’ ０ 、７ Ｈ
ｔＯとしてＣＨＮ 計算値 ５６．１９ ６．４９ １９．８６測定値 ５
６，１０ ６．４４ １９．８１比旋光度［α］”、
（Ｃ：＝０．５ 水）ニー１．３゜又、目的とするペ
プチドのアミノ酸種に応して反応薬剤を変更した以外は
上記の合成例に準して下記に示すペプチドを合成した。
ｔＯとしてＣＨＮ 計算値 ５６．１９ ６．４９ １９．８６測定値 ５
６，１０ ６．４４ １９．８１比旋光度［α］”、
（Ｃ：＝０．５ 水）ニー１．３゜又、目的とするペ
プチドのアミノ酸種に応して反応薬剤を変更した以外は
上記の合成例に準して下記に示すペプチドを合成した。
Ｈ−Ｔｒｐ−Ｈｉ ５−Ｈｉ ５−Ｔｈｒ−Ｐｈｅ−Ｏ
ＨＬＣ Ｒｆ：０．２７８ ｍ、ｐ：１６３℃ 元素分析 ｃ３ｅＨ，ｔＮ、、Ｏ，ｒ−０，６ＨｚＯと
してＣＨＮ 計算値 ５８．６２ ５．９０ １８．９９測定値 ５
８，５８ ５．８２ １８．９２比旋光度〔α］１５：
（Ｃ＝０．５ 水） ■、６゜Ｈ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−
Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−ＯＨＬＣ Ｒｆ：０ ２７８ ｍ、ｐ：１６３℃ 元素分析 Ｃｘ７Ｈ３３Ｎ ｓｏ ｅ・０．５ＨｔＯと
してＣＨＮ 計算値 ５５，０９ ５．８２ ２１．４２測定値 ５
５，１６ ５．７７ ２１．４１比旋光度［α］″５；
（Ｃ＝０．５ 水）：３．７７゜Ｈ−１１ｅ−Ｔｒ
ｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−ＰｈｅＬＣ Ｒｆ：０．５０８ ｍ、ｐ ・ １６９℃ 元素分析 Ｃ４＝ Ｈｓ ３Ｎ １１Ｏａ・０．４ Ｈ
ｔｏとしてＣＨＮ 計算値 ５９．５５ ６．４０ １８．１９測定値 ５
９，５２ ６．４３ １８．１４比旋光度［α］”；
（Ｃ＝０．５ 水）＝０７゜ひ 実施例１〜４ （アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定）アンギオ
テンシン変換酵素阻害活性の測定は、ＣｈｅｕｎｇとＣ
ｕｓｈｍａｎの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａ
ｒａＩｌｌａｃｏｌｏｇｙ２０１６３７（１９７１））
に準じて以下の方法で行った。
ＨＬＣ Ｒｆ：０．２７８ ｍ、ｐ：１６３℃ 元素分析 ｃ３ｅＨ，ｔＮ、、Ｏ，ｒ−０，６ＨｚＯと
してＣＨＮ 計算値 ５８．６２ ５．９０ １８．９９測定値 ５
８，５８ ５．８２ １８．９２比旋光度〔α］１５：
（Ｃ＝０．５ 水） ■、６゜Ｈ−Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−
Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−ＯＨＬＣ Ｒｆ：０ ２７８ ｍ、ｐ：１６３℃ 元素分析 Ｃｘ７Ｈ３３Ｎ ｓｏ ｅ・０．５ＨｔＯと
してＣＨＮ 計算値 ５５，０９ ５．８２ ２１．４２測定値 ５
５，１６ ５．７７ ２１．４１比旋光度［α］″５；
（Ｃ＝０．５ 水）：３．７７゜Ｈ−１１ｅ−Ｔｒ
ｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ−ＰｈｅＬＣ Ｒｆ：０．５０８ ｍ、ｐ ・ １６９℃ 元素分析 Ｃ４＝ Ｈｓ ３Ｎ １１Ｏａ・０．４ Ｈ
ｔｏとしてＣＨＮ 計算値 ５９．５５ ６．４０ １８．１９測定値 ５
９，５２ ６．４３ １８．１４比旋光度［α］”；
（Ｃ＝０．５ 水）＝０７゜ひ 実施例１〜４ （アンギオテンシン変換酵素阻害活性の測定）アンギオ
テンシン変換酵素阻害活性の測定は、ＣｈｅｕｎｇとＣ
ｕｓｈｍａｎの方法（Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ Ｐｈａ
ｒａＩｌｌａｃｏｌｏｇｙ２０１６３７（１９７１））
に準じて以下の方法で行った。
酵素基質；Ｂｚ（ベンジル） −Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｅ
ｕ（８６ｍ９を水８ｉ１とリン酸緩衝液８ｆｆｌｌに溶
解した溶液） 酵 素：うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ａｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μＱ１酵素溶液を１２μＱ及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５
０μｅとした後、３７℃で３０分間反応を行っ１こ。
ｕ（８６ｍ９を水８ｉ１とリン酸緩衝液８ｆｆｌｌに溶
解した溶液） 酵 素：うさぎの肺のアセトンパウダー（シグマ社製）
（１ｇを５０ｍＭのリン酸緩衝液１０ａｌ中で粉砕した
後、遠心分離した上澄液） 上記の酵素基質を１００μＱ１酵素溶液を１２μＱ及び
本発明の所定濃度のペプチドを混合し、水で全体を２５
０μｅとした後、３７℃で３０分間反応を行っ１こ。
反応はｌＮ−ＨＣｌ ２５０μＱを用いて終了させた
。
。
反応終了液に酢酸エチルｌ、５１を入れＶ ｏｒｔｅｘ
で１５秒撹拌し、それを遠心分離した。
で１５秒撹拌し、それを遠心分離した。
酢酸エチル層から１．Ｏｍｌをとり出して、酢酸エチル
を留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し
、抽出された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ
２ｔｓ）を測定した。
を留去し、それに１ｍｌの蒸留水を入れて残渣を溶解し
、抽出された馬尿酸の紫外吸収２２８ｎｍの値（ＯＤ
２ｔｓ）を測定した。
阻害率は阻害剤なしで反応したときのＯＤ！ｔ１１を１
００％とし、反応時間０分のときの０Ｄｔｔ８を０％と
して求め阻害率５０％の時の阻害剤（本発明のペプチド
）の濃度ＩＣ５ｏ（μＭ）で活性を表示した。
００％とし、反応時間０分のときの０Ｄｔｔ８を０％と
して求め阻害率５０％の時の阻害剤（本発明のペプチド
）の濃度ＩＣ５ｏ（μＭ）で活性を表示した。
結果を第１表に示す。
又、参考例として本発明以外の阻害剤についても測定を
行ったので、第１表に合わせて示す。
行ったので、第１表に合わせて示す。
第
表
（注）Ｐｈｅ；フェニルアラニン
ｌｉｅ；イソロイシン
［効
果コ
本発明ではアンギオテンシン変換酵素阻害剤として有用
な、 新規なペプチドが得られる。
な、 新規なペプチドが得られる。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ骨格をもつ新規ペ
プチド。 ２、蛋白質をサーモライシンで加水分解することを特徴
とするＴｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ骨格をもつ新規
ペプチドの製造法。 ３、蛋白質としてアクチンを使用する請求項２記載の製
造法。 ４、蛋白質として魚肉を使用する請求項２記載の製造法
。 ５、蛋白質としてカツオブシを使用する請求項２記載の
製造法。 ６、Ｔｒｐ−Ｈｉｓ−Ｈｉｓ−Ｔｈｒ骨格をもつペプチ
ドを有効成分とするアンギオテンシン変換酵素阻害剤。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2264637A JP3009718B2 (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2264637A JP3009718B2 (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04139196A true JPH04139196A (ja) | 1992-05-13 |
| JP3009718B2 JP3009718B2 (ja) | 2000-02-14 |
Family
ID=17406120
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2264637A Expired - Lifetime JP3009718B2 (ja) | 1990-10-01 | 1990-10-01 | 新規ペプチド、その製造法及び用途 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3009718B2 (ja) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000264845A (ja) * | 1999-02-04 | 2000-09-26 | Nippon Synthetic Chem Ind Co Ltd:The | コレステロール降下剤及びその用途 |
| EP1092724A3 (en) * | 1999-10-15 | 2001-08-29 | The Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd. | Angiotensin converting enzyme inhibitor |
| JP2004514644A (ja) * | 2000-03-09 | 2004-05-20 | アルファーマ エイ エス | 抗菌化合物および処方物 |
| CN114766683A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-07-22 | 威海食德源生物科技有限责任公司 | 食叶草活性肽的制备方法 |
-
1990
- 1990-10-01 JP JP2264637A patent/JP3009718B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2000264845A (ja) * | 1999-02-04 | 2000-09-26 | Nippon Synthetic Chem Ind Co Ltd:The | コレステロール降下剤及びその用途 |
| EP1092724A3 (en) * | 1999-10-15 | 2001-08-29 | The Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd. | Angiotensin converting enzyme inhibitor |
| US7034002B1 (en) | 1999-10-15 | 2006-04-25 | The Nippon Synthetic Chemical Industry Co., Ltd. | Angiotensin converting enzyme inhibitor |
| JP2004514644A (ja) * | 2000-03-09 | 2004-05-20 | アルファーマ エイ エス | 抗菌化合物および処方物 |
| JP2014196302A (ja) * | 2000-03-09 | 2014-10-16 | ライティックス バイオファーマ エイエス | 抗菌化合物および処方物 |
| CN114766683A (zh) * | 2022-04-28 | 2022-07-22 | 威海食德源生物科技有限责任公司 | 食叶草活性肽的制备方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP3009718B2 (ja) | 2000-02-14 |
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