JPH04145367A - ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分画定量方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量キット - Google Patents
ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分画定量方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量キットInfo
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- JPH04145367A JPH04145367A JP26877090A JP26877090A JPH04145367A JP H04145367 A JPH04145367 A JP H04145367A JP 26877090 A JP26877090 A JP 26877090A JP 26877090 A JP26877090 A JP 26877090A JP H04145367 A JPH04145367 A JP H04145367A
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- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［産業上の利用分野］
本発明はヘモグロビンＡＩＣ（ＨｂＡＩＣ）の分画定量
方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ
ＩＣ（ＨｂＡＩＣ）の分画定量方法に関する。 ［従来技術］ 抹消血中のグルコースは、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡｏ）
のβ鎖のＮ末端（ヘパリン残基）とシッフ結合すること
により、不安定なアルジミン（ｐｒｅ−ＨｂＡｌｃ）と
なる。この反応は可逆反応で、生成したアルジミンが、
元のグルコースとヘモグロビン（ＨｂＡｏ）に分解する
場合と、アルジミンが更にアマトリ転換し、安定なケト
アミン（ＨｂＡｌｃ）となる場合がある。 現在、グリコヘモグロビン（）ｌｂＡｌｃ）値が、糖尿
病の血糖コントロールの指標として有用であると認識さ
れ、臨床領域で広く利用されている。 血液中には、前述のＨｊＡｏ、 Ｉ）ｒｅ−ＨｂＡｏ、
ＨｂＡＩｃが存在し、ｐｒｅ−ＨｂＡＩｃは採血時の
血糖値、採血後のグルコースの消費等により、大きく値
が変動する為、ＨｂＡｌｃのみを定量することが望まし
いとされている。ＨｂＡｌｃの定量方法には、エレクト
ロフォーカシング法、比色法、アフィニティークロマト
グラフィー法、ＨＰＬＣ法等がある。 現在、汎用されているＨＰＬＣ法では、（Ａ） ｐｒｅ
−ＨｂＡｌｃと）ｆｂＡｌｃとが混在する検体ヲクロマ
ト処理時間を長くすることにより両者を分離する方法 （Ｂ）検体の前処理により、ｐｒｅ−ＨｂＡｌｃを除去
し、クロマト処理時間を短縮する方法がある。 ｐｒｅ−ＨｂＡＩｃ ｔ７）除去方法Ｅ＆ｉ、（１）グ
ルコースを赤血球に消費させｐｒｅ−ＨｂＡＩＣを分解
する方法。 （２）グルコースを受は取る物質を添加し、ｐｒｅ−Ｈ
ｂＡＩｃを分解する方法。 （３）強力なアロステリックエフェクターを添加し、可
逆的に結合しているグルコースヲ追い出し、ｐｒｅ−）
１ｂＡｌｃを分解する方法がある。 この様に、ＨＰＬＣ法は、汎用されてはいるが、高価な
機器の購入が必要であり、煩雑な前処理が必須であるこ
と、１時間あたりの処理検体数が少ないこと等、解決す
べき問題が多い。 アフィニティクロマトグラフィー法の測定操作は、 （１）資料調製液で調製した検体をｍ−アミノフェニル
ボロン酸を固定化したアガロースを充填したカラムに添
加し、グリコヘモグロビンのグルコースのｃｉｓ−ジオ
ール基と、アガロースに固定化したｍ−アミノフェニル
ボロン酸と五員環を形成させる。 （２）緩衝液でアガロースを洗浄することにより、グリ
コヘモグロビン以外のヘモグロビンを、流出させる。 （３）溶出用緩衝液でグリコヘモグロビンを溶出させる
。 （４）グリコヘモグロビン画分の吸光度、非グリコヘモ
グロビン画分の吸光度を測定する。 （５）計算によりグリコヘモグロビン量を算出する。 であり、 （１）正確で特異性の高い測定値が得られる。 （２） ｐ ｒ ｅ−ＨｂＡ ｌ ｃの影響がない。 （３）胎児性ヘモグロビン（ＨｂＦ）、異常ヘモグロビ
ン（ＨｂＳ、 ＨｂＣ）の影響がない。 という特長がある。しかしながら、アフィニティークロ
マトグラフを用いる方法である為、測定操作を自動化す
ることが困難で、汎用されるには至っていない。 Ｕ問題を解決する為の手段］ 本発明の発明者らは、 （１）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨｚ）−ＣＨ：Ｎ−を介
して、ｍ−７ミノフエニルボロン酸を共有結合させた試
験管、ビーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子等
の実験器具を用いる方法。 （２）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した試験管、ビ
ーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子等の実験器
具を用いる方法。 がアフィニティークロマトグラフィー法の自動化、汎用
を可能にすることを見出した。 即ち、本発明によれば、 （１） ＨＰＬＣ法の煩雑な前処理が省略でき、単位時
間当たりの処理検体数の、飛躍的 な増大が期待できる。 （２）アフィニティークロマトグラフィー法の測定操作
の大幅な簡略化が可能となる。 （３）高価なアフィニティークロマトグラフィー担体の
使用量を減少させることにより、安価なＨｂＡＩｃ分画
定量キットの提供が可能となる。 以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。 実施例Ｉ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたマイロタ
イタープレート。 （２＞ ３．３°、 ５．５’−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 ４）標準へモグロビ７ Ａｌｃ （Ｈ，ｂＡｌｃ）。 ５）試料調製液。 ６緩衝液。 ７）洗浄液。 ８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
マイクロタイタープレートの各人に２００ ＪＪＩづつ
分取した。 （３） （２）のＪｔ作をしたマイクロタイタープレ
ートにシールをし、室温で３０分インキユベートシた。 （４）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、洗浄液３００ ＪＪＩで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人にキットの（３）と（４）の等量混液２００
ｐｌを添加、混和し、３７度で１０分間インキュベート
した。 （６） （５）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に反応停止液１００ ＪＪＩを添加し、４５０
ｎｍの吸光度を測定した。 （７）標準ＨｂＡＩｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例２゜ Ａ、キット内容 （１）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２） 、−ＣＨ＝Ｎ−
を固定化し、その官能基に、計アミノメチルボロン酸を
共有結合させた、マイクロタイタープレート（２）酵素
標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌｃ）抗体。 （３）酵素標識抗体溶解液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 （５）酵素基質。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
マイクロタイタープレートの各人に２００ ｐｌづつ分
取した。 （３） （２）の操作をしたマイクロタイタープレー
トにシールをし、室温で３０分インキュベートした。 （４）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、洗浄液３００ Ｊｌｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に酵素標識抗体２００ ＪＪＩを添加し、３７
度で１時間インキュベートした。 （６）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、各人を洗浄液３００ 、ｐｉで３回洗浄した。 （７） （６）のｉ作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に、酵素基質液２００ ＪＪＩを添加、混和し
、３７度で１時間インキュベートした（８） （７）
の操作をしたマイクロタイタープレートの各人に反応停
止液＋００ ＪＪＩを添加し、４９２ ｎｍの吸光度を
測定した。 （９）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例３゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させた試験管。 （２） ３．３°、 ５．５’−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
キット（１）の試験管に２ ｍｌづつ分取した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管の内容液を捨て、
洗浄液２ ｍｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管に（３）と（４
）の等量混液２ ｍｌを添加、混和し、３７度で１０分
間インキュベートした。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加、混和し、４５０ ｎｍの吸光度を測定した
。 （７）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＩ（ｂＡｌｃ値を求めた。 実施例４゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した試験管。 （２）酵素標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌ
ｃ）抗体。 酵素標識抗体溶解液。 標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 酵素基質。 緩衝液。 洗浄液。 反応停止液。 測定操作 被検血液を試料調製液で溶血させた。 （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、キット（１
）の試験管に２ ｍｌづつ分取した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管の内容液を捨て、
洗浄液２ ｍｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管に酵素標識抗体
２ ｍｌを添加し、３７度で１時間インキユベートシた
。 （６） （５）の操作をした各試験管の内容を捨て、
各試験管を洗浄液２ ｍｌで洗浄した。 （７） （６）の操作をした各試験管に、酵素基質液
２ ｍｌを添加、混和し、３７度で１時間インキュベー
トした。 （８） （７）の操作をした各試験管に、反応停止液
ｌ ｍｌを添加し、４９２ ｎｍの吸光度を測定した。 （９）標準ＨｂＡ］ｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例５ Ａ、キット内容 （１）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体（懸濁液） （２） ３．３’ 、 ５．５°−テトラメチルベンジ
ンまたは、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準へモグロビ７ Ａｌｃ （ＨｂＡｌｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
その５０ＪＪｌを試験管に秤取し、更に、キットの（１
）の担体懸濁液５０）１１を秤取、混和した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管を洗浄液２ ｍｌ
で３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管にキットの（３
）と（４）の等量混液２ ｔｎｌを添加、混和し、３７
度で１０分間インキュベートした（混和後、３分後、８
分後に、更に、混和した）。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加、混和し、３．００Ｏｒｐｍで、１０分間遠
心分離した後、その上清の４５０ ｎｍの吸光度を測定
した。 （７）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例６゜ Ａ、キット内容 （１） ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたビーズ
。 （２） ３．３’ 、 ５．５−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
その５０ア１を試験管に秤取し、更に、キットの（１）
のビーズ１個を秤取、混和した。 （３） （２）の操作をした試験管に蓋をし、室温で
３０分インキュベートした。 （４）各試験管の内容液を捨て、洗浄液２ ｍｌで３回
洗浄した。 （５）新しく準備した各試験管にキットの（３）と（４
）の等量混液２ ｍｌを添加、混和し、（４）の操作を
したビーズを入れ、３７度で１０分間インキュベートし
た。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加し、４５０ ｒ＋＋ｒ＋の吸光度を測定した
。 （７）標準ＨｂＡＩｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例７゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたビズ。 （２）酵素標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌ
ｃ）抗体。 （３）酵素標識抗体溶解液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 （５）酵素基質。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 全自動分析装置を用いて、以下のフローチャトに従い、
ＨｂＡＩＣの分画定量を行なった。
方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ
ＩＣ（ＨｂＡＩＣ）の分画定量方法に関する。 ［従来技術］ 抹消血中のグルコースは、ヘモグロビンＡ（ＨｂＡｏ）
のβ鎖のＮ末端（ヘパリン残基）とシッフ結合すること
により、不安定なアルジミン（ｐｒｅ−ＨｂＡｌｃ）と
なる。この反応は可逆反応で、生成したアルジミンが、
元のグルコースとヘモグロビン（ＨｂＡｏ）に分解する
場合と、アルジミンが更にアマトリ転換し、安定なケト
アミン（ＨｂＡｌｃ）となる場合がある。 現在、グリコヘモグロビン（）ｌｂＡｌｃ）値が、糖尿
病の血糖コントロールの指標として有用であると認識さ
れ、臨床領域で広く利用されている。 血液中には、前述のＨｊＡｏ、 Ｉ）ｒｅ−ＨｂＡｏ、
ＨｂＡＩｃが存在し、ｐｒｅ−ＨｂＡＩｃは採血時の
血糖値、採血後のグルコースの消費等により、大きく値
が変動する為、ＨｂＡｌｃのみを定量することが望まし
いとされている。ＨｂＡｌｃの定量方法には、エレクト
ロフォーカシング法、比色法、アフィニティークロマト
グラフィー法、ＨＰＬＣ法等がある。 現在、汎用されているＨＰＬＣ法では、（Ａ） ｐｒｅ
−ＨｂＡｌｃと）ｆｂＡｌｃとが混在する検体ヲクロマ
ト処理時間を長くすることにより両者を分離する方法 （Ｂ）検体の前処理により、ｐｒｅ−ＨｂＡｌｃを除去
し、クロマト処理時間を短縮する方法がある。 ｐｒｅ−ＨｂＡＩｃ ｔ７）除去方法Ｅ＆ｉ、（１）グ
ルコースを赤血球に消費させｐｒｅ−ＨｂＡＩＣを分解
する方法。 （２）グルコースを受は取る物質を添加し、ｐｒｅ−Ｈ
ｂＡＩｃを分解する方法。 （３）強力なアロステリックエフェクターを添加し、可
逆的に結合しているグルコースヲ追い出し、ｐｒｅ−）
１ｂＡｌｃを分解する方法がある。 この様に、ＨＰＬＣ法は、汎用されてはいるが、高価な
機器の購入が必要であり、煩雑な前処理が必須であるこ
と、１時間あたりの処理検体数が少ないこと等、解決す
べき問題が多い。 アフィニティクロマトグラフィー法の測定操作は、 （１）資料調製液で調製した検体をｍ−アミノフェニル
ボロン酸を固定化したアガロースを充填したカラムに添
加し、グリコヘモグロビンのグルコースのｃｉｓ−ジオ
ール基と、アガロースに固定化したｍ−アミノフェニル
ボロン酸と五員環を形成させる。 （２）緩衝液でアガロースを洗浄することにより、グリ
コヘモグロビン以外のヘモグロビンを、流出させる。 （３）溶出用緩衝液でグリコヘモグロビンを溶出させる
。 （４）グリコヘモグロビン画分の吸光度、非グリコヘモ
グロビン画分の吸光度を測定する。 （５）計算によりグリコヘモグロビン量を算出する。 であり、 （１）正確で特異性の高い測定値が得られる。 （２） ｐ ｒ ｅ−ＨｂＡ ｌ ｃの影響がない。 （３）胎児性ヘモグロビン（ＨｂＦ）、異常ヘモグロビ
ン（ＨｂＳ、 ＨｂＣ）の影響がない。 という特長がある。しかしながら、アフィニティークロ
マトグラフを用いる方法である為、測定操作を自動化す
ることが困難で、汎用されるには至っていない。 Ｕ問題を解決する為の手段］ 本発明の発明者らは、 （１）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨｚ）−ＣＨ：Ｎ−を介
して、ｍ−７ミノフエニルボロン酸を共有結合させた試
験管、ビーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子等
の実験器具を用いる方法。 （２）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した試験管、ビ
ーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子等の実験器
具を用いる方法。 がアフィニティークロマトグラフィー法の自動化、汎用
を可能にすることを見出した。 即ち、本発明によれば、 （１） ＨＰＬＣ法の煩雑な前処理が省略でき、単位時
間当たりの処理検体数の、飛躍的 な増大が期待できる。 （２）アフィニティークロマトグラフィー法の測定操作
の大幅な簡略化が可能となる。 （３）高価なアフィニティークロマトグラフィー担体の
使用量を減少させることにより、安価なＨｂＡＩｃ分画
定量キットの提供が可能となる。 以下に実施例を挙げて、本発明を更に詳細に説明する。 実施例Ｉ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたマイロタ
イタープレート。 （２＞ ３．３°、 ５．５’−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 ４）標準へモグロビ７ Ａｌｃ （Ｈ，ｂＡｌｃ）。 ５）試料調製液。 ６緩衝液。 ７）洗浄液。 ８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
マイクロタイタープレートの各人に２００ ＪＪＩづつ
分取した。 （３） （２）のＪｔ作をしたマイクロタイタープレ
ートにシールをし、室温で３０分インキユベートシた。 （４）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、洗浄液３００ ＪＪＩで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人にキットの（３）と（４）の等量混液２００
ｐｌを添加、混和し、３７度で１０分間インキュベート
した。 （６） （５）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に反応停止液１００ ＪＪＩを添加し、４５０
ｎｍの吸光度を測定した。 （７）標準ＨｂＡＩｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例２゜ Ａ、キット内容 （１）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ２） 、−ＣＨ＝Ｎ−
を固定化し、その官能基に、計アミノメチルボロン酸を
共有結合させた、マイクロタイタープレート（２）酵素
標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌｃ）抗体。 （３）酵素標識抗体溶解液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 （５）酵素基質。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
マイクロタイタープレートの各人に２００ ｐｌづつ分
取した。 （３） （２）の操作をしたマイクロタイタープレー
トにシールをし、室温で３０分インキュベートした。 （４）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、洗浄液３００ Ｊｌｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に酵素標識抗体２００ ＪＪＩを添加し、３７
度で１時間インキュベートした。 （６）マイクロタイタープレートの各人の内容液を捨て
、各人を洗浄液３００ 、ｐｉで３回洗浄した。 （７） （６）のｉ作をしたマイクロタイタープレー
トの各人に、酵素基質液２００ ＪＪＩを添加、混和し
、３７度で１時間インキュベートした（８） （７）
の操作をしたマイクロタイタープレートの各人に反応停
止液＋００ ＪＪＩを添加し、４９２ ｎｍの吸光度を
測定した。 （９）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例３゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させた試験管。 （２） ３．３°、 ５．５’−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
キット（１）の試験管に２ ｍｌづつ分取した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管の内容液を捨て、
洗浄液２ ｍｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管に（３）と（４
）の等量混液２ ｍｌを添加、混和し、３７度で１０分
間インキュベートした。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加、混和し、４５０ ｎｍの吸光度を測定した
。 （７）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＩ（ｂＡｌｃ値を求めた。 実施例４゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した試験管。 （２）酵素標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌ
ｃ）抗体。 酵素標識抗体溶解液。 標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 酵素基質。 緩衝液。 洗浄液。 反応停止液。 測定操作 被検血液を試料調製液で溶血させた。 （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、キット（１
）の試験管に２ ｍｌづつ分取した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管の内容液を捨て、
洗浄液２ ｍｌで３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管に酵素標識抗体
２ ｍｌを添加し、３７度で１時間インキユベートシた
。 （６） （５）の操作をした各試験管の内容を捨て、
各試験管を洗浄液２ ｍｌで洗浄した。 （７） （６）の操作をした各試験管に、酵素基質液
２ ｍｌを添加、混和し、３７度で１時間インキュベー
トした。 （８） （７）の操作をした各試験管に、反応停止液
ｌ ｍｌを添加し、４９２ ｎｍの吸光度を測定した。 （９）標準ＨｂＡ］ｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例５ Ａ、キット内容 （１）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体（懸濁液） （２） ３．３’ 、 ５．５°−テトラメチルベンジ
ンまたは、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準へモグロビ７ Ａｌｃ （ＨｂＡｌｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
その５０ＪＪｌを試験管に秤取し、更に、キットの（１
）の担体懸濁液５０）１１を秤取、混和した。 （３） （２）の操作をした試験管を室温で３０分間
インキュベートした。 （４） （３）の操作をした試験管を洗浄液２ ｍｌ
で３回洗浄した。 （５） （４）の操作をした各試験管にキットの（３
）と（４）の等量混液２ ｔｎｌを添加、混和し、３７
度で１０分間インキュベートした（混和後、３分後、８
分後に、更に、混和した）。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加、混和し、３．００Ｏｒｐｍで、１０分間遠
心分離した後、その上清の４５０ ｎｍの吸光度を測定
した。 （７）標準ＨｂＡｌｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例６゜ Ａ、キット内容 （１） ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたビーズ
。 （２） ３．３’ 、 ５．５−テトラメチルベンジン
または、その水可溶化誘導体を含む水溶液。 （３）過酸化ストロンチウムまたは、過酸化水素を含む
水溶液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌｃ）。 （５）試料調製液。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 （１）被検血液を試料調製液で溶血させた。 （２） （１）の操作をした検体を緩衝液で希釈し、
その５０ア１を試験管に秤取し、更に、キットの（１）
のビーズ１個を秤取、混和した。 （３） （２）の操作をした試験管に蓋をし、室温で
３０分インキュベートした。 （４）各試験管の内容液を捨て、洗浄液２ ｍｌで３回
洗浄した。 （５）新しく準備した各試験管にキットの（３）と（４
）の等量混液２ ｍｌを添加、混和し、（４）の操作を
したビーズを入れ、３７度で１０分間インキュベートし
た。 （６） （５）の操作をした各試験管に反応停止液１
ｍｌを添加し、４５０ ｒ＋＋ｒ＋の吸光度を測定した
。 （７）標準ＨｂＡＩｃを用いて同一操作をして描いた検
量線から検体のＨｂＡｌｃ値を求めた。 実施例７゜ Ａ、キット内容 （１）ｍ−フェニルボロン酸を共有結合させたビズ。 （２）酵素標識抗ヒトヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡｌ
ｃ）抗体。 （３）酵素標識抗体溶解液。 （４）標準ヘモグロビンＡｌｃ （ＨｂＡＩＣ）。 （５）酵素基質。 （６）緩衝液。 （７）洗浄液。 （８）反応停止液。 Ｂ、測定操作 全自動分析装置を用いて、以下のフローチャトに従い、
ＨｂＡＩＣの分画定量を行なった。
１スタート
２検体サンプリング
３）第−試薬分生
４ ビーズ投入
５攪拌
６インキユベーシヨン
７ ビーズ投入
８第二試薬分注
９）攪拌
（１０）インキュベーション
（１１ビーズ洗浄
（１２ビーズトランス
（１３酵素基質分注
（１４）攪拌
（１５）インキュベーション
（１６）反応停止液分注
（１７）測光、データ処理
以下余白
Claims (7)
- （１）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体に、ヘモグロビンＡｌｃ
（ＨｂＡｌｃ）を吸着、結合させた後、既知の方法（放
射イムノアッセイ法、 非放射イムノアッセイ法、テトラメチルベンジジン法、
フルオレイン法等）により、ヘモグロビンＡｌｃ（Ｈｂ
Ａｌｃ）を分画定量する方法。 - （２）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−ＣＨ＝Ｎ
−を固定化し、その官能基に、ｍ−アミノメチルボロン
酸を共有結合させた、試験管、ビーズ、マイクロタイタ
ープレート、磁性粒子、等の実験器具を用いて既知の方
法（放射イムノアッセイ法、非放射イムノアッセイ法、
テトラメチルベンジジン法、フルオレイン法等）により
、ヘモグロビンＡｌｃ（ＨｂＡｌｃ）を分画定量する方
法。 - （３）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した、試験管、
ビーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子、等の実
験器具を用いて既知の方法（放射イムノアッセイ法、非
放射イムノアッセイ法等）により、ヘモグロビンＡｌｃ
（ＨｂＡｌｃ）を分画定量する方法。 - （４）請求項（１）、請求項（２）及び請求項（３）の
実施の為に構成されたヘモグロビンＡｌｃ（ＨｂＡｌｃ
）定量分画キット。 - （５）アフィニティークロマトグラフィー担体を、ウェ
ルの側面に固相化したマイクロタイタープレート。 - （６）官能基−Ｎ＝ＣＨ−（ＣＨ＿２）＿ｎ−ＣＨ＝Ｎ
−を固定化し、その官能基に、ｍ−アミノメチルボロン
酸を共有結合させた、試験管、ビーズ、マイクロタイタ
ープレート、磁性粒子、等の実験器具。 - （７）ｍ−アミノメチルボロン酸を固定化したアフィニ
ティークロマトグラフィー担体を固相化した、試験管、
ビーズ、マイクロタイタープレート、磁性粒子、等の実
験器具。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26877090A JPH04145367A (ja) | 1990-10-06 | 1990-10-06 | ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分画定量方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量キット |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP26877090A JPH04145367A (ja) | 1990-10-06 | 1990-10-06 | ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分画定量方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量キット |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04145367A true JPH04145367A (ja) | 1992-05-19 |
Family
ID=17463064
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP26877090A Pending JPH04145367A (ja) | 1990-10-06 | 1990-10-06 | ヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）の分画定量方法と、それを実施する為に構成されたヘモグロビンＡ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）定量キット |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04145367A (ja) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0666795A (ja) * | 1992-06-16 | 1994-03-11 | Fujirebio Inc | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| JPH0862221A (ja) * | 1994-07-18 | 1996-03-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | グリケートされたタンパク質の定量的測定方法 |
| US6162645A (en) * | 1997-03-13 | 2000-12-19 | Abbott Laboratories | Determination of % glycated hemoglobin |
| US6316265B1 (en) | 1997-03-13 | 2001-11-13 | Abbott Laboratories | Determination of % glycated hemoglobin |
| WO2002095407A1 (fr) * | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Srl, Inc. | Procede de dosage immunologique |
| CN109269858A (zh) * | 2018-11-02 | 2019-01-25 | 郑州标源生物科技有限公司 | 一种液态糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
-
1990
- 1990-10-06 JP JP26877090A patent/JPH04145367A/ja active Pending
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0666795A (ja) * | 1992-06-16 | 1994-03-11 | Fujirebio Inc | 糖化ヘモグロビンの測定方法 |
| JPH0862221A (ja) * | 1994-07-18 | 1996-03-08 | Boehringer Mannheim Gmbh | グリケートされたタンパク質の定量的測定方法 |
| US6162645A (en) * | 1997-03-13 | 2000-12-19 | Abbott Laboratories | Determination of % glycated hemoglobin |
| US6316265B1 (en) | 1997-03-13 | 2001-11-13 | Abbott Laboratories | Determination of % glycated hemoglobin |
| WO2002095407A1 (fr) * | 2001-05-18 | 2002-11-28 | Srl, Inc. | Procede de dosage immunologique |
| US6964872B2 (en) | 2001-05-18 | 2005-11-15 | Srl, Inc. | Immunoassay method |
| CN109269858A (zh) * | 2018-11-02 | 2019-01-25 | 郑州标源生物科技有限公司 | 一种液态糖化血红蛋白质控品的制备方法 |
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