JPH04149198A - カルシトニン誘導体 - Google Patents
カルシトニン誘導体Info
- Publication number
- JPH04149198A JPH04149198A JP2272423A JP27242390A JPH04149198A JP H04149198 A JPH04149198 A JP H04149198A JP 2272423 A JP2272423 A JP 2272423A JP 27242390 A JP27242390 A JP 27242390A JP H04149198 A JPH04149198 A JP H04149198A
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- JP
- Japan
- Prior art keywords
- calcitonin
- peptide
- amino acid
- residue
- derivative
- Prior art date
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- Pending
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明は生物学的活性を持つカルシトニン誘導体長ヒこ
のカルシトニン誘導体の製造法に関スる。
のカルシトニン誘導体の製造法に関スる。
カルシトニン（以下ＣＴと称する）は哺乳動物の甲状腺
あるいは魚類、鳥類の鯰後腺で生産されるペプチドホル
モンである。このホルモンは破骨細胞を抑制することで
骨からのカルシウムの遊離を抑制し、血中カルシウム濃
度を低下させる事が知られており、骨粗髭症、ベージェ
ット病、高カルシウム血症の治療薬として広く臨床的に
用いられている。現在までのところ、ヒト、ウシ、ブタ
、ヒツジ、ラット、ニワトリ、サケ、ウナギＯＣＴにつ
いてアミノ酸配列が明らかにされており、これらはいず
れも３２個のアミノ酸から成り、１位と７位のシスティ
ンがジスルフィド結合を形成し、カルボキシ末端がプロ
リンアミドである点で共通している。哺乳類由来ＣＴに
比べ、鯰後腺由来ＣＴは高い活性を有しており、アミノ
酸配列の相同性も高い。これらの鯰後膝由来ＣＴについ
て数多くの誘導体が合成され（米国特許に４，２３９，
６８０゜Ｎα４，３９７，７８０． ｋ ４．４１４，
１４９． Ｎｏ、 ４，４４４．６８Ｌ Ｎｏ。
あるいは魚類、鳥類の鯰後腺で生産されるペプチドホル
モンである。このホルモンは破骨細胞を抑制することで
骨からのカルシウムの遊離を抑制し、血中カルシウム濃
度を低下させる事が知られており、骨粗髭症、ベージェ
ット病、高カルシウム血症の治療薬として広く臨床的に
用いられている。現在までのところ、ヒト、ウシ、ブタ
、ヒツジ、ラット、ニワトリ、サケ、ウナギＯＣＴにつ
いてアミノ酸配列が明らかにされており、これらはいず
れも３２個のアミノ酸から成り、１位と７位のシスティ
ンがジスルフィド結合を形成し、カルボキシ末端がプロ
リンアミドである点で共通している。哺乳類由来ＣＴに
比べ、鯰後腺由来ＣＴは高い活性を有しており、アミノ
酸配列の相同性も高い。これらの鯰後膝由来ＣＴについ
て数多くの誘導体が合成され（米国特許に４，２３９，
６８０゜Ｎα４，３９７，７８０． ｋ ４．４１４，
１４９． Ｎｏ、 ４，４４４．６８Ｌ Ｎｏ。
４．４５１，３９５． Ｎｏ、 ４，４９５，０９７
． ｋ ４，４９７，７３１． Ｎｏ。
． ｋ ４，４９７，７３１． Ｎｏ。
４．５２８，１３２． Ｎｃｔ ４．５３７，７１６
． ＆ ４．５９７，９００． Ｎａ４．６０４，２３
６． ＆ ４．６０４，２３７． Ｎｉｌ ４，６
０４．２３Ｂ、 Ｎａ４．６０５，５１４． 階４．
６０５，５１５．随４，６０６，８５６．随４．６２２
，３８６． 階４．６２２，３８７．距４．６２２．
３８８．階４．６３２．９７８． 漱４．６３９．５
０９．隘４，６３９，５１０．阻４．６３９，５１１．
Ｎｏ、４，６５９，８０４． ｌｌ＆１４，７３２
，９６９． ｋ４、７３２．９６９． 胤４．７４６
，７２８． Ｎｏ、 ４．７６４，５８９．階４．７６
４，５９１． ＮＩＣ１４，８０４，７４２，ＥＰＮ
ｎ ２Ｂ８，０５８． ＥＰＮＩ２９０．０２９ 、特
開昭５１−１２８９９３、特開昭５２−５９１７８）、
生理活性発現に関与する構造上の因子の探索が行われて
いる。通常ペプチド製剤の活性は、その生体内での安定
性に大きく左右される。一般にペプチドの荷電残基に隣
接するペプチド結合は、プロテアーゼによる加水分解を
うけやすいことが知られている〔日本生化学余線 生化
学データブックＩ東京化学同人３４１−４１４頁（１９
８１） ） 、サケカルシトニン、ウナギカルシトニン
、及びトリカルシトニンでは、荷電をもつアミノ酸残基
として、１１位のリジン残基及び１５位のグルタミン酸
残基、並びに１８位のリジン残基等が挙げられる。
． ＆ ４．５９７，９００． Ｎａ４．６０４，２３
６． ＆ ４．６０４，２３７． Ｎｉｌ ４，６
０４．２３Ｂ、 Ｎａ４．６０５，５１４． 階４．
６０５，５１５．随４，６０６，８５６．随４．６２２
，３８６． 階４．６２２，３８７．距４．６２２．
３８８．階４．６３２．９７８． 漱４．６３９．５
０９．隘４，６３９，５１０．阻４．６３９，５１１．
Ｎｏ、４，６５９，８０４． ｌｌ＆１４，７３２
，９６９． ｋ４、７３２．９６９． 胤４．７４６
，７２８． Ｎｏ、 ４．７６４，５８９．階４．７６
４，５９１． ＮＩＣ１４，８０４，７４２，ＥＰＮ
ｎ ２Ｂ８，０５８． ＥＰＮＩ２９０．０２９ 、特
開昭５１−１２８９９３、特開昭５２−５９１７８）、
生理活性発現に関与する構造上の因子の探索が行われて
いる。通常ペプチド製剤の活性は、その生体内での安定
性に大きく左右される。一般にペプチドの荷電残基に隣
接するペプチド結合は、プロテアーゼによる加水分解を
うけやすいことが知られている〔日本生化学余線 生化
学データブックＩ東京化学同人３４１−４１４頁（１９
８１） ） 、サケカルシトニン、ウナギカルシトニン
、及びトリカルシトニンでは、荷電をもつアミノ酸残基
として、１１位のリジン残基及び１５位のグルタミン酸
残基、並びに１８位のリジン残基等が挙げられる。
従って本発明は荷電をもつアミノ酸残基であるリジン及
びグルタミン酸に注目し、リジン及び／又はグルタミン
酸が荷電をもたないアミノ酸残基に置換された種々のカ
ルシトニン誘導体、または特定のリジン残基及びそのＣ
末端側の残基を除去した種々のカルシトニン誘導体を提
供しようとするものである。
びグルタミン酸に注目し、リジン及び／又はグルタミン
酸が荷電をもたないアミノ酸残基に置換された種々のカ
ルシトニン誘導体、または特定のリジン残基及びそのＣ
末端側の残基を除去した種々のカルシトニン誘導体を提
供しようとするものである。
上記の課題は、１１位のリジン残基、工５位のグルタミ
ン酸残基及び１８位のリジン残基の内の少なくとも１残
基がグルタミン残基に置き換えられているカルシトニン
誘導体〔置換型誘導体〕；並びに１６位から１７位及び
１９位から２３位までのアミノ酸残基、１６位から２３
位までのアミノ酸残基、１８位から２２位までのアミノ
酸残基、１８位から２３位までのアミノ酸残基を欠失し
たカルシトニン誘導体〔短縮型誘導体〕を提供すること
により解決される。
ン酸残基及び１８位のリジン残基の内の少なくとも１残
基がグルタミン残基に置き換えられているカルシトニン
誘導体〔置換型誘導体〕；並びに１６位から１７位及び
１９位から２３位までのアミノ酸残基、１６位から２３
位までのアミノ酸残基、１８位から２２位までのアミノ
酸残基、１８位から２３位までのアミノ酸残基を欠失し
たカルシトニン誘導体〔短縮型誘導体〕を提供すること
により解決される。
本発明のカルシトニン誘導体の設計の基本となるカルシ
トニン又はその誘導体としては、１１位にリジン残基、
１５位にグルタミン酸残基、及び１８位にリジン残基を
有するすべてのカルシトニン又はその誘導体を用いるこ
とができる。
トニン又はその誘導体としては、１１位にリジン残基、
１５位にグルタミン酸残基、及び１８位にリジン残基を
有するすべてのカルシトニン又はその誘導体を用いるこ
とができる。
この様な天然カルシトニンとしては、次のようなカルシ
トニン： サケＩ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＫＬＱ
ＴＹＰＲＴＮＴＧＳＧＴＰ−ＮＨｚサケＩＩ Ｃ５Ｎ
ＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＤＬＨＫＬＱＴＦＰＲＴＮ丁Ｇ
ＡＧＶＰ−ＮＨｚサケＩ［Ｉ Ｃ３ＮＬＳＴＣＭＬＧ
ＫＬＳＱＤＬＩ（）［ＬＱＴＦｌ’ＲＴＮＴＧＡＧＶＰ
−ＮＨ。
トニン： サケＩ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＫＬＱ
ＴＹＰＲＴＮＴＧＳＧＴＰ−ＮＨｚサケＩＩ Ｃ５Ｎ
ＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＤＬＨＫＬＱＴＦＰＲＴＮ丁Ｇ
ＡＧＶＰ−ＮＨｚサケＩ［Ｉ Ｃ３ＮＬＳＴＣＭＬＧ
ＫＬＳＱＤＬＩ（）［ＬＱＴＦｌ’ＲＴＮＴＧＡＧＶＰ
−ＮＨ。
ウナギ Ｃ５ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＫＬＱＴ
ＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨｚトリ ＣＡＳＬＳＴ
ＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴ
Ｐ −ＮＨｔを挙げることができる。
ＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨｚトリ ＣＡＳＬＳＴ
ＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴ
Ｐ −ＮＨｔを挙げることができる。
さらに、本発明のカルシトニン誘導体の設計の基本とな
る非天然カルシトニン誘導体としては、前記従来技術の
項に挙げた文献に記載されているカルシトニン誘導体の
内１１位にリジン残基、１５位にグルタミン酸残基、１
８位にリジン残基を有するものを挙げることができる。
る非天然カルシトニン誘導体としては、前記従来技術の
項に挙げた文献に記載されているカルシトニン誘導体の
内１１位にリジン残基、１５位にグルタミン酸残基、１
８位にリジン残基を有するものを挙げることができる。
本発明のカルシトニン誘導体においてＡ、及びＡ２並び
にＸ ＋ Ｘ ｓが後記のごとく定義される対応する
基本カルシトニンはいずれもすでに知られているもので
ある。
にＸ ＋ Ｘ ｓが後記のごとく定義される対応する
基本カルシトニンはいずれもすでに知られているもので
ある。
前記置換型のカルシトニン誘導体としては、例えば次の
アミノ酸配列： Ａ１χＩＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＱＬＳＱＥＬＨ［、ＱＴ
ＹＰＲＴＸＪａＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ。
アミノ酸配列： Ａ１χＩＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＱＬＳＱＥＬＨ［、ＱＴ
ＹＰＲＴＸＪａＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ。
Ａ、χ＋ＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＱＬＨＫＬＱＴ
ＹＰＲＴＸｓχ４ＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚＡ＋×１χ、Ｌ
ＳＴＡ２νＬＧ）［ＬＳＱＥＬＨＱＬ（ｌＴＹＰＲＴＸ
ｉＸ４ＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ。
ＹＰＲＴＸｓχ４ＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚＡ＋×１χ、Ｌ
ＳＴＡ２νＬＧ）［ＬＳＱＥＬＨＱＬ（ｌＴＹＰＲＴＸ
ｉＸ４ＧＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ。
Ａ ＩＸ ＩＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＱＬＳＱＱＬＨＫＬ
ＱＴＹＰＲＴＸｓＸｎＧＸｓＧＴＰ−Ｎｌ２ 。
ＱＴＹＰＲＴＸｓＸｎＧＸｓＧＴＰ−Ｎｌ２ 。
Ａ Ｉ Ｘ Ｉ Ｘ ｚＬｓＴＡ ２ ＶＬＧＱＬＳＱ
ＥＬＨＱＬＱＴＹＰＲＴＸｓＸ 、ＧＸ ５ＧＴＰ−Ｎ
Ｈ！ 。
ＥＬＨＱＬＱＴＹＰＲＴＸｓＸ 、ＧＸ ５ＧＴＰ−Ｎ
Ｈ！ 。
Ａ ＋ Ｘ ＋ Ｘ ｚＬＳＴＡ ｚＶＬＧＫＬｓＱＱ
ＬＨＱＬＱＴＹＰ ＲＴＸ ｓＸａ ＧＸ ５ＧＴＰ
−ＮＨ！、または Ａ Ｉ Ｘ Ｉ Ｘ ２ＬＳＴＡ ＺＶＬＧＱＬＳＱＱ
ＬＨＱＬＱＴＹＰＲＴＸ ３Ｘ４ＧＸ ５ＧＴＰ−ＮＨ
！、（式中、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立にシスティン
又は５−ｎ−アルキルシスティンであるか、あるいはこ
れらは−緒になって１．７−シスチン又は１．７−α−
アミノスペリン酸を構成しており：Ｘ、はＳ又はＡであ
りｌＸ２はＮ又はＳであり；Ｘ、はＮ又はＤであり；Ｘ
４はＴ又は■であり；そしてＸ５はＳ又はＡである） を有するカルシトニン誘導体が挙げられる。
ＬＨＱＬＱＴＹＰ ＲＴＸ ｓＸａ ＧＸ ５ＧＴＰ
−ＮＨ！、または Ａ Ｉ Ｘ Ｉ Ｘ ２ＬＳＴＡ ＺＶＬＧＱＬＳＱＱ
ＬＨＱＬＱＴＹＰＲＴＸ ３Ｘ４ＧＸ ５ＧＴＰ−ＮＨ
！、（式中、Ａ１及びＡ２はそれぞれ独立にシスティン
又は５−ｎ−アルキルシスティンであるか、あるいはこ
れらは−緒になって１．７−シスチン又は１．７−α−
アミノスペリン酸を構成しており：Ｘ、はＳ又はＡであ
りｌＸ２はＮ又はＳであり；Ｘ、はＮ又はＤであり；Ｘ
４はＴ又は■であり；そしてＸ５はＳ又はＡである） を有するカルシトニン誘導体が挙げられる。
また、前記短縮型のカルシトニン誘導体としては、例え
ば次のアミノ酸配列： Ａ１χ＋ＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＥＫＲＴＸＪ４
ＧＸｓＧＴＰ−Ｎ）ｌｘ。
ば次のアミノ酸配列： Ａ１χ＋ＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＥＫＲＴＸＪ４
ＧＸｓＧＴＰ−Ｎ）ｌｘ。
ＡＩｘ＋ＸｔＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＥＲＴＸ３χ４
Ｇχ５ＧＴＰ−Ｎｌ２゜Ａ＋Ｘ＋ＸｚＬＳＴｌｈＶＬＧ
ＫＬＳＱＥＬＨＰＲＴＸＪＪＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ、また
は Ａ 、 Ｘ ＋ ＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨ
ＲＴＸＪａＧχ５ＧＴＰ−Ｎｌ２（式中、Ａ１及びＡ２
はそれぞれ独立にシスティン又は５−ｎ−アルキルシス
ティンであるか、あるいはこれらは−緒になって１．７
−シスチン又は１．７−α−アミノスペリン酸を構成し
ており；ＸｌはＳ又はＡであり；ｘ２はＮ又はＳであり
；χ、はＮ又はＤであり；Ｘ４はＴ又は■であり；そし
てＸ、はＳ又はＡである） を有するものが挙げられる。
Ｇχ５ＧＴＰ−Ｎｌ２゜Ａ＋Ｘ＋ＸｚＬＳＴｌｈＶＬＧ
ＫＬＳＱＥＬＨＰＲＴＸＪＪＸｓＧＴＰ−ＮＨｚ、また
は Ａ 、 Ｘ ＋ ＸｚＬＳＴＡｚＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨ
ＲＴＸＪａＧχ５ＧＴＰ−Ｎｌ２（式中、Ａ１及びＡ２
はそれぞれ独立にシスティン又は５−ｎ−アルキルシス
ティンであるか、あるいはこれらは−緒になって１．７
−シスチン又は１．７−α−アミノスペリン酸を構成し
ており；ＸｌはＳ又はＡであり；ｘ２はＮ又はＳであり
；χ、はＮ又はＤであり；Ｘ４はＴ又は■であり；そし
てＸ、はＳ又はＡである） を有するものが挙げられる。
さらに具体的な例として、次のアミノ酸配列：■１止
酊−一万 Ａ Ｉ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＱＬ
ＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨｚＡ ２ Ｃ５
ＮＬＳＴＣＶＬＧＱＬＳＱＥＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶ
ＧＡＧＴＰ−ＮＨ！Ａ ３ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬ
ＧＫＬＳＱＱＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−Ｎ
）ｌｘ（天然型 Ｃ５ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨ
ＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨりを有するウナ
ギの鯰後腺由来のカルシトニン誘導体を挙げることがで
きる。
酊−一万 Ａ Ｉ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨＱＬ
ＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨｚＡ ２ Ｃ５
ＮＬＳＴＣＶＬＧＱＬＳＱＥＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶ
ＧＡＧＴＰ−ＮＨ！Ａ ３ Ｃ３ＮＬＳＴＣＶＬ
ＧＫＬＳＱＱＬＨＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−Ｎ
）ｌｘ（天然型 Ｃ５ＮＬＳＴＣＶＬＧＫＬＳＱＥＬＨ
ＫＬＱＴＹＰＲＴＤＶＧＡＧＴＰ−ＮＨりを有するウナ
ギの鯰後腺由来のカルシトニン誘導体を挙げることがで
きる。
目的ペプチドを固相法により合成する場合について以下
に示す。すなわち不溶性樹脂に目的とするＣＴ誘導体の
Ｃ末端アミノ酸から順次結合させて行く。不溶性樹脂と
しては当該技術分野で知られた物のいずれであっても良
いが、ＴＦＡで脱離可能でかつ目的ペプチドのＣ末端が
アミド化された形で得られるＰ−メチルベンズヒドリル
アミン（Ｂ）ＩＡ）樹脂が好ましい。アミノ酸は官能基
を保護したものを用いるが、使用する縮合法、樹脂から
の脱離法により適当な保護基を選択する必要がある。得
られた保護ペプチド樹脂からペプチドを脱離、脱保護し
た後、目的ペプチドが分子内ジスルフィド結合を有する
場合には次いで空気酸化あるいはフェリシアン化カリウ
ム酸化等の酸化反応によりこれを形成する。得られた粗
ペプチド画分から目的ペプチドの単離を行うためには逆
相、イオン交換、ゲルろ過等の高速液体クロマトグラフ
ィーを用いるのが効果的である。最終標品についてはア
ミノ酸配列分析及びアミノ酸組成分析によりその構造を
確認することができる。
に示す。すなわち不溶性樹脂に目的とするＣＴ誘導体の
Ｃ末端アミノ酸から順次結合させて行く。不溶性樹脂と
しては当該技術分野で知られた物のいずれであっても良
いが、ＴＦＡで脱離可能でかつ目的ペプチドのＣ末端が
アミド化された形で得られるＰ−メチルベンズヒドリル
アミン（Ｂ）ＩＡ）樹脂が好ましい。アミノ酸は官能基
を保護したものを用いるが、使用する縮合法、樹脂から
の脱離法により適当な保護基を選択する必要がある。得
られた保護ペプチド樹脂からペプチドを脱離、脱保護し
た後、目的ペプチドが分子内ジスルフィド結合を有する
場合には次いで空気酸化あるいはフェリシアン化カリウ
ム酸化等の酸化反応によりこれを形成する。得られた粗
ペプチド画分から目的ペプチドの単離を行うためには逆
相、イオン交換、ゲルろ過等の高速液体クロマトグラフ
ィーを用いるのが効果的である。最終標品についてはア
ミノ酸配列分析及びアミノ酸組成分析によりその構造を
確認することができる。
以下、実施例により本発明を更に詳細に説明するが、実
施例は本発明の範囲をなんら制限するものではない。
施例は本発明の範囲をなんら制限するものではない。
前記ＡＩ、Ａ２及びＡ３の配列を有するＥＣＴ誘導体の
合成法を示す。アブライドバイオシステムズ社製ペプチ
ド合成＄１４３ＯＡによりＢＨＡ樹脂０、５ ｍｍｏｌ
を用いて固相法により合成する。本装置はｔ−Ｂｏｃア
ミノ酸をＤＣＣ−ＨＯＢｉ法により縮合することでペプ
チド合成を行う。合成試薬、反応条件はすべて同社より
供給されているものを用いた。
合成法を示す。アブライドバイオシステムズ社製ペプチ
ド合成＄１４３ＯＡによりＢＨＡ樹脂０、５ ｍｍｏｌ
を用いて固相法により合成する。本装置はｔ−Ｂｏｃア
ミノ酸をＤＣＣ−ＨＯＢｉ法により縮合することでペプ
チド合成を行う。合成試薬、反応条件はすべて同社より
供給されているものを用いた。
得られた保護ペプチド樹脂から、チオアニソール、エタ
ンジチオール存在下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ト
リフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）により目的
ペプチドの脱離及び脱保護を行ない、エーテル中再結晶
によりペプチドを回収する。これを１０％酢酸に溶解し
Ｂｉｏ Ｇｅｌ Ｐ ２（バイオラッドラボラトリー
ズ社）カラムを用いて低分子試薬を除去した後凍結乾燥
を行なう。得られた淡黄色綿状固体を６Ｍ塩酸グアニジ
ン溶液に２００■／ｄの濃度で熔解し、室温で２時間撹
拌することにより分子内シスチン結合の生成を行う。透
析あるいはゲル濾過でグアニジンを除去した後ペプチド
溶液を凍結乾燥し、更に００Ｓ−８０ＴｒＩカラム（東
ソー）による逆相ＨＰＬＣ、Ｂ５−５０２Ｃカラム（旭
化成）によるイオン交換ＨＰＬＣ、Ｇ−２０００Ｓ−カ
ラム（東ソー）によるゲル濾過ＦＩＰＬＣを用いて目的
ペプチドの単離精製を行った。以上の方法により、ＢＨ
Ａ樹脂０．５ｍｈｏ ］を用いた合成より、約３０１Ｊ
ｇの最終精製標品を得ることができる。
ンジチオール存在下、トリフルオロ酢酸（ＴＦＡ）／ト
リフルオロメタンスルホン酸（ＴＦＭＳＡ）により目的
ペプチドの脱離及び脱保護を行ない、エーテル中再結晶
によりペプチドを回収する。これを１０％酢酸に溶解し
Ｂｉｏ Ｇｅｌ Ｐ ２（バイオラッドラボラトリー
ズ社）カラムを用いて低分子試薬を除去した後凍結乾燥
を行なう。得られた淡黄色綿状固体を６Ｍ塩酸グアニジ
ン溶液に２００■／ｄの濃度で熔解し、室温で２時間撹
拌することにより分子内シスチン結合の生成を行う。透
析あるいはゲル濾過でグアニジンを除去した後ペプチド
溶液を凍結乾燥し、更に００Ｓ−８０ＴｒＩカラム（東
ソー）による逆相ＨＰＬＣ、Ｂ５−５０２Ｃカラム（旭
化成）によるイオン交換ＨＰＬＣ、Ｇ−２０００Ｓ−カ
ラム（東ソー）によるゲル濾過ＦＩＰＬＣを用いて目的
ペプチドの単離精製を行った。以上の方法により、ＢＨ
Ａ樹脂０．５ｍｈｏ ］を用いた合成より、約３０１Ｊ
ｇの最終精製標品を得ることができる。
最終標品の配列確認及び純度検定はアミノ酸配列分析及
び組成分析により行った。第１表に誘導体ＡＩ 、Ａ２
、Ａ３の配列分析結果を示す。
び組成分析により行った。第１表に誘導体ＡＩ 、Ａ２
、Ａ３の配列分析結果を示す。
勇ユ」−一表
ＥＣＴ誘導体のアミノ酸組成分析
ＥＣＴ銖 のパ−
各ＣＴ誘導体の生物学的活性は、ブタ腎臓上皮由来細胞
株ＬＬＣＰＬ におけ増殖抑制作用（、Ｔ、ＭＤａｙｅ
ｒ ら、Ｊ、Ｃｅ１ｌ Ｂｉｏｌ、、 ９Ｌ １９５−
２００．１９８１）あるいはアデニレートシクラーゼ活
性化作用（Ａ。
株ＬＬＣＰＬ におけ増殖抑制作用（、Ｔ、ＭＤａｙｅ
ｒ ら、Ｊ、Ｃｅ１ｌ Ｂｉｏｌ、、 ９Ｌ １９５−
２００．１９８１）あるいはアデニレートシクラーゼ活
性化作用（Ａ。
Ｗｏｈｌｗｅｎｄら、Ｂｉｏｃｈｅｍ、Ｂｉｏｐｈｙｓ
、１ｌｉｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ＋＋ １３Ｌ５３７−５４
２）により評価した。その結果を第２表に示す。
、１ｌｉｅｓ、Ｃｏｍｍｕｎ＋＋ １３Ｌ５３７−５４
２）により評価した。その結果を第２表に示す。
第一」し−友
ＥＣＴ誘導体の生物学的活性
−９．２９
９．３５
−９．１９
−９．１３
第２表から明らかなごとく、いずれの誘導体もＥＣＴ活
性を有しておりそのうちＡ１は天然型ＥＣＴよりやや強
い活性を有していた。
性を有しておりそのうちＡ１は天然型ＥＣＴよりやや強
い活性を有していた。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、１１位のリジン残基、１５位のグルタミン酸残基及
び１８位のリジン残基の内の少なくとも１残基がグルタ
ミン残基に置き換えられているカルシトニン誘導体。 ２、前記カルシトニン誘導体がサケカルシトニン、ウナ
ギカルシトニン又はトリカルシトニンの誘導体である請
求項１に記載のカルシトニン誘導体。 ３、次のアミノ酸配列： ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａ＿１及びＡ＿２はそれぞれ独立にシステイン
又はＳ−ｎ−アルキルシステインであるか、あるいはこ
れらは一緒になって１，７−シスチン又は１，７−α−
アミノスベリン酸を構成しており；Ｘ＿１はＳ又はＡで
あり；Ｘ＿２はＮ又はＳであり；Ｘ＿３はＮ又はＤであ
り；Ｘ＿４はＴ又はＶであり；そしてＸ＿５はＳ又はＡ
である） を有する請求項１又は２に記載のカルシトニン誘導体。 ４、１６位から１７位及び１９位から２３位までのアミ
ノ酸残基、１６位から２３位までのアミノ酸残基、１８
位から２２位までのアミノ酸残基、または１８位から２
３位までのアミノ酸残基を欠失したカルシトニン誘導体
。 ５、前記カルシトニン誘導体がサケカルシトニン、ウナ
ギカルシトニン又はトリカルシトニンの誘導体である請
求項４に記載のカルシトニン誘導体。 ６、次のアミノ酸配列： ▲数式、化学式、表等があります▼ または ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ａ＿１及びＡ＿２はそれぞれ独立にシステイン
又はＳ−ｎ−アルキルシステインであるか、あるいはこ
れらは一緒になって１，７−シスチン又は、１，７−α
−アミノスベリン酸を構成しており；Ｘ＿１はＳ又はＡ
であり；Ｘ＿２はＮ又はＳであり；Ｘ＿３はＮ又はＤで
あり；Ｘ＿４はＴ又はＶであり；そしてＸ＿５はＳ又は
Ａである） を有する請求項４又は５に記載のカルシトニン誘導体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2272423A JPH04149198A (ja) | 1990-10-12 | 1990-10-12 | カルシトニン誘導体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2272423A JPH04149198A (ja) | 1990-10-12 | 1990-10-12 | カルシトニン誘導体 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04149198A true JPH04149198A (ja) | 1992-05-22 |
Family
ID=17513705
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2272423A Pending JPH04149198A (ja) | 1990-10-12 | 1990-10-12 | カルシトニン誘導体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04149198A (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016538282A (ja) * | 2013-11-14 | 2016-12-08 | キーバイオサイエンス・アクチエンゲゼルシャフト | 疾患および障害を処置するためのカルシトニン模倣体 |
-
1990
- 1990-10-12 JP JP2272423A patent/JPH04149198A/ja active Pending
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2016538282A (ja) * | 2013-11-14 | 2016-12-08 | キーバイオサイエンス・アクチエンゲゼルシャフト | 疾患および障害を処置するためのカルシトニン模倣体 |
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