JPH0418087A - 新規物質ｕｃｆ１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は、新規物質ＵＣＦＩに関する。

ＵＣＦＩは抗菌作用および抗腫瘍作用を有し、抗菌剤お
よび抗腫瘍剤として有用である。

従来の技術 本発明の化合物に類似の化合物としては、下記式で示さ
れる化合物が知られている。

マニュマイシン〔ジャーナル・オブ・アンチビオティク
ス（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　４０　（１１）、
１５３０（１９８７）］］ｌｌ−５６４０７　Ｃジャー
ナル・オブ・アンチビオティクス（Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏ
ｔｉｃｓ）　３６　（８）、９５０（１９８３）］ア又
カマイシン〔ジャーナル・オブ・アンチビオティクス（
Ｊ、Ａｎｔｉｂｉｏｔｉｃｓ）　２９　（９）、８７６
（１９７６）］発胡が解決しようとする課題 本発明の目的は、優れた抗菌作用および抗腫瘍作用を有
する化合物を提供することにある。

課題を解決するための手段 本発明者らは、静岡県沼津市の土壌から分離した微生物
を培地に培養して得られる培養物中に抗菌および抗腫瘍
作用を有する物質が生産されることを見出した。この物
質を単離、精製し、その理化学的性質を調べた結果、新
規物質であることが判明し、ＵＣＦＩと命名した。

本発明によれば、下記式（ｆ） を表わす。） で表わされる新規物質ＵＣＦＩが提供される。

式（Ｉ）の定義中、Ｒが をＵＣＦｌ−Ａ、Ｒが をＵＣＦＩ−Ｂと称する。

ＵＣＦ　１−ＡおよびＵＣＦｌ−Ｂの理化学的性質は以
下の通りである。

ＵＣＦｌ−Ａ ■性　　状　：　黄色粉末 ■分子式　：　　Ｃ２，Ｈ３，Ｎ、Ｏ。

■元素分析　：　　Ｃ６４，６９％、８６．７４％、Ｎ
５．２７％■旋光度　：　　［ｆｆ〕１９　　＝−１４
０，６°　（ｃｍ０．４、　りａａＵＬＡ）■紫外部吸
収スペクトル（メタノール溶液）λ　ｍａＸ　ｎｍ　　
　（Ｅ）　　　：　　　２８２（３０３００ン、　　　
３１４（３１１００）■光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ
打錠）ｃｍ−’：３３９８、１６７２．１６２４．１６
０３．１５１４．１３６７、１００５■呈色反応：　バ
ニリン硫酸、エールリッヒ試薬、ヨウ素、塩化第二鉄に
陽性。

■溶解性：　アルコール、アセトン、酢酸エチル、クロ
ロホルムに可溶、水、ヘキサンに不溶。

ＵＣＦ　１−Ｂ ■性　　状　：　黄色粉末 ■分子式　：　　Ｃ３，８，６Ｎ２０゜■元素分析　：
　　Ｃ６５，６４％、８６．８４％、Ｎ４．９２％■旋
光度　：　　〔α］、　　　＝６３．４°　（ｃｍ０．
１、　クロロホルム）■紫外部吸収スペクトル（メタノ
ール溶液）／ｍａｘ　　ｎｍ　　　（Ｅ）　　　：　　
　２７９（５４５［１０）、　　　３１５（３８８ＣＩ
Ｃ１）■光外部吸収スペクトル（ＫＢｒ打錠）ｃｍ−’
：３３５４、１６６４．１６３０．１６１６．１５９７
．１５２２．１３６３゜■呈色反応、　バニリン硫酸、
エールリッヒ試薬、ヨウ素、塩化第二鉄に陽性。

■溶解性°　アルコール、アセトン、酢酸エチル、クロ
ロホルムに可溶、水、へキサンに不溶。

ＵＣＦＩ−ＡおよびＵＣＦ　１−Ｂのシリカゲル薄層ク
ロマトグラフィー（ＴＬＣ）でのＲｆ値および高速液体
クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）の保持時間を第１表に
示す。

第　　　１　　　表 ＵＣＦｌ−Ａ　Ｏ，３８４，６８ 次にＵＣＦｌの生物活性について説明する。

（Ａ）各種細菌に対する抗菌作用 抗菌作用はバクト・トリプトン（Ｏｉｆｃｏ社＊）３ｇ
、肉エキス３ｇ、酵母エキス１ｇ、グルコースＩｇ、寒
天１６ｇをＩＡの水に溶解して作成した培地（ｐＨ７）
を用いて寒天希釈法で測定した。第２表に抗菌活性を最
少生育阻止濃度（ＭＩＣ＞で示した。

第　　　　２　　　　表 ＾ＴＣＣ１０５ Ｎα１０７１０ ７０７（Ｂ）？細胞に対する生育阻害 ９６穴マイクロタイタープレートにＲＰＭＩ−１６４０
培地（Ｇｊｂｃｏ社製）、１０％牛脂児血清、１０ｑ／
ｎｆインシユリン及び１０−’Ｍエストラジオールから
なる培地（以下、培地Ａと称す）で４．５Ｘ１０’個／
ｍｌに調製したＭＣＦ７細胞（＾ＴＣＣ、ＨＴＢ２２）
を０、１−ずつ該プレートの容入に分注した。該プレー
トを炭酸ガスインキュベータ内で３７℃、２０時間培養
後、これに培地Ａにより適宜希釈した試験化合物０．０
５ｍＲずつ加え、炭酸ガスインキュベーター内で３７℃
、７２時間培養した。培養上清を除去後、残渣に培地Ａ
及び０．０２％ニュートラルレッドからなる培地を０．
１ｍｌずつ加え、３７℃で１時間炭酸ガスインキュベー
タ内で培養し、細胞を染色した。培養上清を除去後、残
渣を生理食塩水で１回洗浄した。ついで０．００１Ｎ塩
酸／３０％エタノールで色素を抽出後、マイクロプレー
トリーダーにより５５０ｎｍの吸光度を測定した。

無処理細胞と既知濃度の試験化合物で処理した細胞の吸
光度を比較することにより細胞の増殖を５０％阻害する
試験化合物濃度（ＩＣ３，）を算出した。その結果を第
３表に示す。

第　　　　３　　　　表 次にＵＣＦＩの製造法について説明する。

ＵＣＦＩはストレプトマイセス属に属し、ＩＩ［：Ｆｌ
を生産する能力を有する微生物を培地に培養し、培養物
中にＵＣＦ　１を生成蓄積させ、該培養物からＵＣＦＩ
を採取することによって得ることができる。

ＵＣＦＩ生産菌株としてはストレプトマイセス属に属し
、ＵＣＦＩ生産能を有する菌株であればいずれの菌株で
も用いることができる。またこれらの菌株の人工的変異
方法、例えば紫外線照射、Ｘ線照射、変異誘起剤処理な
どによって変異させた変異株あるいは自然的に変異した
変異株でもＵＣＦ　１を生産するものであれば本発明に
用いることができる。代表的菌株としてはストレプトマ
イセス・エスピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、
　）Ｕ　ＯＦ　１株（以下ＵＯＦＩ株と略記する。）が
あげられる。

以下に、ＵＯＦＩ株の菌学的性質について説明する。

該性質の決定は、国際ストレプトマイセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）プロジェクト　（ＩＳＰ）がストレプ
トマイセス種の特性決定のために推奨する方法〔イー・
ビー・シェリング（Ｅ、Ｂ、　Ｓｈｉｒｌｉｎｇ）およ
びデイ−・ゴツトリーブ　（Ｄ、　Ｇｏｔｔｌｉｅｂ）
、インターナショナル・ジャーナル・システマティック
・バクテリオロジー（Ｉｎｔ、Ｊ、５ｙｓｔ、Ｂａｃｔ
ｅｒｉｏｌ、）　１６゜３１３〜３４０（１９６６）　
］に従った。全細胞の加水分解物中のジアミノピメリン
酸の異性体はビー・ベツカ−（Ｂ、　Ｂｅｃｋｅｒ）ら
の方式〔アプライド・ミクロバイオロジー（＾ｐｐｌ、
Ｍｉｃｒｏｂｉｏ１．）　１２．４２１−４２３（１９
６４）　）によって確認した。形態学的検討は、光学顕
微鏡を用いて行い、とくに胞子表面の形態については走
査型電子顕微鏡を用いて行った。色の名称の割当てには
、カラー・ハーモニー・マニュアル（ＣｏｌｏｒＨａｒ
ｍｏｎｙ　Ｍａｎｕａｌ）　［：ｌンティナー・コーポ
レーション・オブ・アメリカ（Ｃｏｎｔａｉｎｅｒ　Ｃ
ｏｒｐｏｒａｔｉｏｎｏｆ　Ａｍｅｒｉｃａ）　、第４
版（１９５Ｂ）３を使用した。

ＵＯＦＩ株の菌学的性質は次の通りである。

（１）形態 気菌糸・分枝する。

基生菌糸二分枝するが、分断はない。

抱子：気菌糸上に分節胞子（１０個から３０個もしくは
さらに多数）の長い連鎖として着生する。連鎖の形態は
屈曲状もしくはループ状。

胞子の表面：平滑（Ｓｍｏｏｔｈ） 胞子の運動性：なし 胞子の形・大きさ：楕円形（０，５Ｘ０．７μｍ）なお
、菌核、胞子のうは観察されない。

〔２）色調 気菌糸：茶色〜赤色 基生菌糸：灰色 可溶性色素：淡黄色 メラニン色素：なし く３）細胞壁の化学組成 ジアミノピメリン酸の立体型ｚＬＬ型 （４）生理的性質 炭素源の同化性： 同化するニゲルコース、キシロース、 マンニトール、アラビノース、 ラムノース、　イノシトール、 ラクトース、　ガラクトース 同化しない：ラフィノース、サリシン、シュークロース ゼラチンの液化：陰性 スターチの加水分解：陽性 脱脂粉乳の凝固：陰性 脱脂粉乳のペプトン化：陽性 繊維素の分解：陽性 生育温度範囲：１６〜３７℃（至適２８〜３２℃）なお
、生育温度範囲については２日後、ゼラチン、脱脂粉乳
および繊維素に対する作用については、２８℃、１か月
後の結果を、そのほかの性質は２８℃、２週間後の結果
を示した。

（５）　　各種寒天培地における生育状態各種寒天培地
で２８℃、２８日間、ＵＯＦ　ｉ株を培養した結果を第
４表に示す。

第　　　４　　　表 ■シュクロース・ｆＧ、悪い　　　　　　　　　　　　
　　　　■イ　　　　　　　　ＩＰｌあり　淡黄色　　
　　　　　　　　　ｊｊ　　　　　　　　ｊＡＭ：中程
度　′リー’−；　（ｌｆｅ）なお、略号は次のとおり
である。

Ｇ：生育の程度 ＡＭ・気菌糸の着生度および色調 ８Ｍ二基生菌糸の色調 Ｐ：可溶性色素の色調 （６）ＵＯＦＩ株の同定 ＵＯＦＩ株はＬＬ型のジアミノピメリン酸が検出される
ことから、エム・ビー・レチェバリエとエイチ・ニー・
レチェバリエ（Ｍ、Ｐ、　　Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒａ
ｎｄ　Ｈ，Ａ、Ｌｅｃｈｅｖａｌｉｅｒ）による放線菌
の分類〔インターナショナル・ジャーナル・システマテ
ィック・バクテリオロジー（Ｉｎｔ、　Ｊ、５ｙｓｔ、
Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、）２０、４３５〜４４３（１９７
０）　Ｅによると細胞壁■型と分類される。

さらに該菌株の形態学的特徴を組み合わせると、この菌
株をストレプトマイセス属に帰属させるのが適当である
。

木馬における種の同定においては、灰色〜白色の気菌糸
、屈曲状もしくはループ状の胞子連鎖、平滑な胞子表面
、メラニン様色素産生、可溶性色素の産生および炭素源
の資化パターンなどの特徴をもとに、細菌学泡量Ｗ　リ
スト〔ヴイー・ビー・デイ−・スカーマン（Ｖ、　Ｂ、
　Ｄ、　Ｓｋｅｒｍａｎ）　らの、ＩｎｔＪ、５ｙｓｔ
、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ、、３０，２２５−４２０　　（
１９８０）］で承認されている種名より、分類的特徴が
類似している種を■ＳＰの記載［１ｎｔ、Ｊ、　　５ｙ
ｓｔ、Ｂａｃｔｅｒｉｏｌ（１９７２）およびアール・
イー・ブカナン（Ｒ，Ｅ。

Ｂｕｃｈａｎａｎ）とエヌ・イー・ギボンズ（Ｎ、　Ｅ
、　Ｇｉｂｂｏｎｓ）編、バーシーズ・マニュアル・オ
ブ・デターミネイティブ・バクテリオロジイ（Ｂｅｒｇ
ｅｙ’　ｓ　Ｍａｎｕａｌｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔ
ｉｖｅ　Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版〕をもとに
検索した。

検索の結果、ストレプトマイセス・オリバセイスクレロ
テイカス（Ｓｔｒａｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｏｌｉｖａｃｅ
ｉｓ−ｃｌｅｒｏｔｉｃｕｓ）がＵＯＦＩ株の近縁の種
として挙げられるが、ＵＯＦ　１株の種を特定すること
はできない。従って、本菌種をストレプトマイセス・エ
スピー（Ｓｔｒｅｐｔｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）に属する
ものとする。

該菌株はブダペスト条約に基づき、平成２年３月３０日
付けで工業技術院微生物工業技術研究所に微工研条寄第
２８４４号（ＦＥＲＭ　　ＢＰ−２８４４）として寄託
されている。

本発胡のＵＣＦＩ生産菌株の培養においては通常の放線
菌の培養法が一般に用いられる。培地としては菌が資化
可能な炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培
地であれば合成培地、天然培地いずれでも使用可能であ
る。

炭素源としてはグルコース、澱粉、デキストリン、マン
ノース、フラクトース、シュークロース、ラクトース、
キシロース、アラビノース、マンニトール、糖蜜などが
単独または組み合わせて用いられる。さらに、菌の資化
能によっては炭化水素、アルコール類、を機酸なども用
いられる。窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アン
モニウム、硝酸アンモニウム、硝酸す）　ＩＪウム、尿
素、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、コー
ン・スチープ・リカー、大豆粉、カザミノ酸などが単独
または組み合わせて用いられる。そのほか、必要に応じ
て食塩、塩化カリウム、硫酸マグネシウム、炭酸カルシ
ウム、リン酸二水素カリウム、リン酸水素二カリウム、
硫酸第一鉄、塩化カルシウム、硫酸マンガン、硫酸亜鉛
、硫酸銅などの無機塩類を加える。さらに使用する菌の
生育やＵＣＦＩの生産を促進する物質、例えばビタミン
Ｂ３、ビオチンなどを適当に添加することができる。

培養法としては、液体培養法、とくに深部攪拌培養法が
適している。培養は温度１６〜３７℃、好ましくは２５
〜３２℃でｐＨ４〜１０、好ましくは６〜８で行われる
。通常１〜７日間培養を行うと目的物質ＵＣＦＩが培養
液中および菌体中に生成蓄積される。培養中、培地のｐ
Ｈ調整にはアンモニア水や炭酸アンモニウム溶液などが
用いられる。

培養物中の生成量が最大に達したときに培養を停止し、
培養物中よりＵＣＦＩを単離精製する。

培養物からのＵＣＦＩの単離精製は、微生物代謝生産物
をその培養物から単離精製するために常用される方法に
従って行なわれる。例えば培養物を濾過により培養ｐ液
と菌体に分け、菌体をクロロホルム、アセトンなどで抽
出する。ついで、抽出液と培養ｐ液とを合わせて、ポリ
スチレン系吸着剤例えばダイヤイオンＨＰ２０（三菱化
成社製）などに通塔して活性成分を吸着させ、酢酸エチ
ル、アセトンなどで溶出する。溶出液を濃縮し、シリカ
ゲルによるカラムクロマトグラフィー、高速液体クロマ
トグラフィーなどにより、ＵＣＦＩの黄色粉末を得る。

なあ、培養、精製工程中のＵＣＦＩの動向はバチルス・
ズブチリスＮα１０７０７を用いるバイオアッセイ、ま
たは薄層クロマトグラフィーによるＬ；ＣＦ　１の紫外
８吸収あるｌ、）ｌま他の呈色反応を目安として追跡す
ることができる。

以下に本発明の実施例を示す。

実施例１゜ 種菌としてストレプトマイセス・エスピー［１０Ｆ１株
（ＦＥＲＭ　ＢＰ−２８４４）を用いた。該菌株を２１
容量の三角フラスコ中のバクト・トリプトン（Ｄｉｆｃ
ｏ社製）５ｇ／β、酵母エキス５ｇ／β、肉エキス３ｇ
／ｌ、可溶性澱粉１０ｇ／β、グルコースＬｏｇ／ｊ２
．炭酸カルシウム５ｇ／Ａの組成からなる種培地（殺菌
前ｐｔ１７．２）　３００ｍｌに植菌し、３０℃で４８
時間振盪（２０Ｏｒｐｍ）培養した。

得られた種培養液を３０！容量のジャーファーメンタ−
中の下記組成の発酵培地１５Ｊに１０％（容量）の割合
で移し、２８℃で通気攪拌（回転数２０　Ｏｒｐｍ、通
気量１５β／分）方式により培養を行った。

発酵培地組成：可溶性デンプン５０ｇ／ｌ、コーン・ス
チーブ・リカー３０　ｇ／ｌ、ＫＩＩ２ＰＯ，０，５ｇ
　／　ｊ！　、　Ｍｇ５Ｏ＜・７１１２００．５ｇ　／
　ｆ、炭酸カルシウム５ｇ／ｆ、（殺菌前ｐＨ７，０、
Ｎａ叶で調整）培養中、培地のｐＨはとくに制御しない
で、８０時間培養した。培養液にｎ−プロパツール１５
Ａを添加し攪拌した後、培養物から菌体および沈殿物を
戸別し、Ｐ液２Ｍを得た。

ｐ液を濃縮後、水で希釈し、ポリスチレン系吸着樹脂ダ
イヤイオンＨＰ２０　（三菱化成社製）　１０Ｉｌを充
填したカラムに通塔して活性物質を吸着させた。

脱イオン水および５０％メタノールで不純物を溶出後、
メタノールおよび酢酸エチルで溶出した。

溶出液を濃縮し、残渣に水を加えた後、酢酸エチルで抽
出を行った。抽出液を無水硫酸す）　ＩＪウムで脱水し
た後濃縮し、シリカゲルカラム（ＢＷ３００；富士デヴ
イソン化学社製）にかけ、クロロホルム：メタノール（
１００：　１　：　ｖ／ｖ　）で展開した。溶出された
活性画分を濃縮し、逆相系シリカゲル（ＹＭＣＲ３３５
−２０、ワイエムシー社製）カラムにかけメタノール：
　５０ｍＭ　　Ｋ８２ＰＯ−（ｐＨ７）　（８：２）を
溶媒として高速液体クロマトグラフィーを行い、ＵＣＦ
Ｉ−Ａを含む両分番号２０〜２１およびＵＣＦＩ−Ｂを
含む両分番号２８〜３２をそれぞれ集めた。それぞれの
画分をＨＰ２０カラムに吸着させ、水洗後メタノールで
溶出した。溶出液を濃縮することによりＵＣＦＩ−Ａの
黄色粉末６３ｍｇ、ＵＣＦＩ−Ｂの黄色粉末５１ｍｇが
得られた。

発明の効果 本発明により抗菌および抗腫瘍作用を有する新規物質Ｕ
ＣＦＩが提供される。

特許出願人（１０２）協和醗酵工業株式会社−ｊ　Ａ／
′ 手続補正８（自発） 平成３年９月２日 平成２年特許願第１２０６４０号 ２、発明の名称 新規物質ＵＣＦＩ ３、補正をする者 事件との関係　　特許出願人 郵便番号　１００ 住　所　　東京都千代田区大手町−丁目６番１号名　称
　（１０２）協和醗酵工業株式会社明細書の発明の詳細
な説明の欄 ５、補正の内容 （２）　　明細書第１１頁下から第５行のＦ基中菌糸：
灰色」を「基土菌糸：茶色〜赤色」に訂正する。

（３）明細書第１３頁第１行の「２８日間」を「２週間
」に訂正する。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 式 ▲数式、化学式、表等があります▼ （式中、Ｒは▲数式、化学式、表等があります▼ または▲数式、化学式、表等があります▼ を表わす。） で表わされる新規物質ＵＣＦ１。