JPS632266B2 - - Google Patents
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- JPS632266B2 JPS632266B2 JP55177107A JP17710780A JPS632266B2 JP S632266 B2 JPS632266 B2 JP S632266B2 JP 55177107 A JP55177107 A JP 55177107A JP 17710780 A JP17710780 A JP 17710780A JP S632266 B2 JPS632266 B2 JP S632266B2
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
- C12N1/205—Bacterial isolates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P1/00—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes
- C12P1/06—Preparation of compounds or compositions, not provided for in groups C12P3/00 - C12P39/00, by using microorganisms or enzymes by using actinomycetales
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
- C12R2001/465—Streptomyces
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Description
本発明は、新規抗生物質AM−5344−A2およ
びその製造方法に関するものである。 本発明者らは、放線菌の生産する抗生物質の探
索の過程で、土壌分離の一放線菌AM−5344株が
抗生物質を生産することを見い出し、本菌株の菌
学的性質を調べ、またこの抗生物質を単離した
後、その理化学的および生物学的性質を調べるこ
とによつて、本発明を完成した。 本発明によつて得られる抗生物質AM−5344−
A2は、次に示すような理化学的性質を有してい
る。 (1) 元素分析値： Ｃ 63.87％、Ｈ 3.96％、Ｎ 2.29％ (2) 分子量： マススペクトル（FDマススペクトル）分析
において、質量数527に大きなピークが見られ、
また528、529にもピークが観察された。 (3) 融点： ＞290℃ (4) 比旋光度： 〔α〕20 D＝−214゜（Ｃ 0.25、クロロホルム） (5) 紫外線吸収スペクトル： クロロホルム中での吸収極大（E1%1cn）は、
260nｍ（668）、329nｍ（514）、375nｍ
shoulder（117）、420nｍ shoulder（86）を示
す。 第１図のとおりである。 (6) 赤外線吸収スペクトル： 第２図のとおりである。（KBr法） (7) 溶剤に対する溶解性： クロロホルムに溶け、アセトン、酢酸エチ
ル、ベンゼン等の有機溶媒および低級アルコー
ルに難溶で、ｎ−ヘキサン、エチルエーテル、
水に不溶である。 (8) 呈色反応： 塩化第二鉄反応、ライドン・スミス反応に陽
性であり、ドラーゲンドルフ反応、ニンヒドリ
ン反応には陰性である。 (9) 塩基性、中性、酸性の区分： 中性物質である。 (10) 物質の色： 橙色 (11) Rf値： シリカゲル薄層クロマトグラフイー（メルク
社製TLCアルミシート、シリカゲル60F254、厚
さ0.2mm）を通常法にて行なつた時のRf値は、
次のとおりである。 Rf値 (イ) クロロホルム：メタノール（40：１）0.32 (ロ) ベンゼン：アセトン（１：１） 0.68 (ハ) ベンゼン：メタノール（４：１） 0.58 (ニ) 酢酸エチル 0.20 (ホ) ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：１）
0.61 抗生物質AM−5344−A2の生物学的性質につ
いて述べると次のごとくである。 (1) 抗菌性 寒天希釈法による最小阻止濃度（MIC）は、
第１表に示すとおりである。
びその製造方法に関するものである。 本発明者らは、放線菌の生産する抗生物質の探
索の過程で、土壌分離の一放線菌AM−5344株が
抗生物質を生産することを見い出し、本菌株の菌
学的性質を調べ、またこの抗生物質を単離した
後、その理化学的および生物学的性質を調べるこ
とによつて、本発明を完成した。 本発明によつて得られる抗生物質AM−5344−
A2は、次に示すような理化学的性質を有してい
る。 (1) 元素分析値： Ｃ 63.87％、Ｈ 3.96％、Ｎ 2.29％ (2) 分子量： マススペクトル（FDマススペクトル）分析
において、質量数527に大きなピークが見られ、
また528、529にもピークが観察された。 (3) 融点： ＞290℃ (4) 比旋光度： 〔α〕20 D＝−214゜（Ｃ 0.25、クロロホルム） (5) 紫外線吸収スペクトル： クロロホルム中での吸収極大（E1%1cn）は、
260nｍ（668）、329nｍ（514）、375nｍ
shoulder（117）、420nｍ shoulder（86）を示
す。 第１図のとおりである。 (6) 赤外線吸収スペクトル： 第２図のとおりである。（KBr法） (7) 溶剤に対する溶解性： クロロホルムに溶け、アセトン、酢酸エチ
ル、ベンゼン等の有機溶媒および低級アルコー
ルに難溶で、ｎ−ヘキサン、エチルエーテル、
水に不溶である。 (8) 呈色反応： 塩化第二鉄反応、ライドン・スミス反応に陽
性であり、ドラーゲンドルフ反応、ニンヒドリ
ン反応には陰性である。 (9) 塩基性、中性、酸性の区分： 中性物質である。 (10) 物質の色： 橙色 (11) Rf値： シリカゲル薄層クロマトグラフイー（メルク
社製TLCアルミシート、シリカゲル60F254、厚
さ0.2mm）を通常法にて行なつた時のRf値は、
次のとおりである。 Rf値 (イ) クロロホルム：メタノール（40：１）0.32 (ロ) ベンゼン：アセトン（１：１） 0.68 (ハ) ベンゼン：メタノール（４：１） 0.58 (ニ) 酢酸エチル 0.20 (ホ) ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：１）
0.61 抗生物質AM−5344−A2の生物学的性質につ
いて述べると次のごとくである。 (1) 抗菌性 寒天希釈法による最小阻止濃度（MIC）は、
第１表に示すとおりである。
【表】
【表】
(2) 抗トリコモナス活性
液体培地希釈法による最小阻止濃度（MIC）
は、次に示すとおりである。なお、液体培地に
はTrichosel broth（BBL社製）を用いた。 MIC（mcg／ml） トリコモナス・フエータス（Trichomonas
foetus） 0.05 以上のように、本抗生物質はグラム陽性菌、嫌
気性菌およびトリコモナスに対して抗菌、抗原虫
活性を示すことから、抗生物質AM−5344−A2
は抗菌剤としての用途が考えられ、特に嫌気性菌
感染症の予防および治療に有効と思われる。また
本物質は、その抗菌スペクトルから動物薬として
の使用も十分期待される。 上記の理化学的性質および生物学的性質を既知
抗生物質の性質と比較した結果、抗生物質AM−
5344−A2は新規物質であることがわかつた。す
なわち、中性、脂溶性で紫外線吸収スペクトルが
260nｍ、329nｍ、375nｍ shoulder、420nｍ
shoulder付近に吸収極大を有し、かつグラム陽性
菌に対して有効な類似の抗生物質として、たとえ
ば、チヤートロイシン〔Giorn.Microbiol.１、
176（1955）〕、セルロマイシン〔Antibiotiki
（Moscow）２、16〜20（1957）〕、メケマイシン
〔Meiji Yakkadaigaku Kenkyu Kiyo２、１〜
８（1963）〕、サーモルビンＡ〔Clin.Med.71、511〜
521（1964）〕があげられる。しかし、チヤートロ
イシンは、元素分析値より窒素を含まず、抗生物
質AM−5344−A2は窒素を含むことから明らか
に異なる。セルロマイシンは無色の結晶（抗生物
質AM−5344−A2は橙色）のポリエン系抗生物
質であるが、その紫外線吸収スペクトルの各極大
吸収での比吸光度が抗生物質AM−5344−A2の
ものと著しく異なるメケマイシン、サーモルビン
Ａは元素分析値より窒素を含まず、抗生物質AM
−5344−A2は窒素を含むことから異なる。以上
のとおり、抗生物質AM−5344−A2は既知抗生
物質と明らかに区別されるので新規である。 本発明の抗生物質AM−5344−A2を生産する
ために使用される微生物の実用的な例は、本発明
者らによつて千葉県千葉市幸町の土壌から新たに
分離されたストレプトミセス・エスピー・AM−
5344株があげられる。 (1) 形態学的性質 栄養菌糸は天然培地、合成培地の両方でよく
発達し、通常は隔壁を有しない。気菌糸はグリ
セロール・アスパラギン寒天、チロシン寒天等
で中程度に着生するが、その他の培地では着生
が貧弱かあるいは着性しない。気菌糸の色調は
黄色ないし灰色で、粉状またはベルベツト状を
呈する。 顕微鏡下の観察では、胞子柄は直線状ないし
はループ状を呈し、グリセロール・アスパラギ
ン寒天、チロシン寒天では胞子の着生が見られ
ず、スターチ無機塩寒天で10〜50個の胞子の連
鎖が観察される。胞子の表面は平滑である。菌
核、胞子嚢および遊走子は見出されない。 (2) 各種培地上での性状 イー・ビー・シヤーリング（Int.J.Syst.
Bacteriol.16巻、313頁、1966年）の方法にし
たがい、それに公知の培地および実験方法を併
せて使用した。その結果を第２表に示す。色調
は標準色として、カラー・ハーモニー・マニユ
アル第４版（コンテナー・コーポレーシヨン・
オブ・アメリカ・シカゴ1958年）を用いて決定
し、色票名とゝもに括弧内にそのコードを併せ
て記した。以下は特記しない限り、27℃、２週
間目の各培地における観察である。
は、次に示すとおりである。なお、液体培地に
はTrichosel broth（BBL社製）を用いた。 MIC（mcg／ml） トリコモナス・フエータス（Trichomonas
foetus） 0.05 以上のように、本抗生物質はグラム陽性菌、嫌
気性菌およびトリコモナスに対して抗菌、抗原虫
活性を示すことから、抗生物質AM−5344−A2
は抗菌剤としての用途が考えられ、特に嫌気性菌
感染症の予防および治療に有効と思われる。また
本物質は、その抗菌スペクトルから動物薬として
の使用も十分期待される。 上記の理化学的性質および生物学的性質を既知
抗生物質の性質と比較した結果、抗生物質AM−
5344−A2は新規物質であることがわかつた。す
なわち、中性、脂溶性で紫外線吸収スペクトルが
260nｍ、329nｍ、375nｍ shoulder、420nｍ
shoulder付近に吸収極大を有し、かつグラム陽性
菌に対して有効な類似の抗生物質として、たとえ
ば、チヤートロイシン〔Giorn.Microbiol.１、
176（1955）〕、セルロマイシン〔Antibiotiki
（Moscow）２、16〜20（1957）〕、メケマイシン
〔Meiji Yakkadaigaku Kenkyu Kiyo２、１〜
８（1963）〕、サーモルビンＡ〔Clin.Med.71、511〜
521（1964）〕があげられる。しかし、チヤートロ
イシンは、元素分析値より窒素を含まず、抗生物
質AM−5344−A2は窒素を含むことから明らか
に異なる。セルロマイシンは無色の結晶（抗生物
質AM−5344−A2は橙色）のポリエン系抗生物
質であるが、その紫外線吸収スペクトルの各極大
吸収での比吸光度が抗生物質AM−5344−A2の
ものと著しく異なるメケマイシン、サーモルビン
Ａは元素分析値より窒素を含まず、抗生物質AM
−5344−A2は窒素を含むことから異なる。以上
のとおり、抗生物質AM−5344−A2は既知抗生
物質と明らかに区別されるので新規である。 本発明の抗生物質AM−5344−A2を生産する
ために使用される微生物の実用的な例は、本発明
者らによつて千葉県千葉市幸町の土壌から新たに
分離されたストレプトミセス・エスピー・AM−
5344株があげられる。 (1) 形態学的性質 栄養菌糸は天然培地、合成培地の両方でよく
発達し、通常は隔壁を有しない。気菌糸はグリ
セロール・アスパラギン寒天、チロシン寒天等
で中程度に着生するが、その他の培地では着生
が貧弱かあるいは着性しない。気菌糸の色調は
黄色ないし灰色で、粉状またはベルベツト状を
呈する。 顕微鏡下の観察では、胞子柄は直線状ないし
はループ状を呈し、グリセロール・アスパラギ
ン寒天、チロシン寒天では胞子の着生が見られ
ず、スターチ無機塩寒天で10〜50個の胞子の連
鎖が観察される。胞子の表面は平滑である。菌
核、胞子嚢および遊走子は見出されない。 (2) 各種培地上での性状 イー・ビー・シヤーリング（Int.J.Syst.
Bacteriol.16巻、313頁、1966年）の方法にし
たがい、それに公知の培地および実験方法を併
せて使用した。その結果を第２表に示す。色調
は標準色として、カラー・ハーモニー・マニユ
アル第４版（コンテナー・コーポレーシヨン・
オブ・アメリカ・シカゴ1958年）を用いて決定
し、色票名とゝもに括弧内にそのコードを併せ
て記した。以下は特記しない限り、27℃、２週
間目の各培地における観察である。
【表】
【表】
【表】
【表】
ミセス・プロジエクト選定の培地
(3) 生理的諸性質 １ メラニン色素の形成 (イ) チロシン寒天 陰性 (ロ) ペプトン・イースト鉄寒天 陰性 (ハ) グルコース・ペプトン・ゼラチン培地穿
刺（21〜23℃） 陰性 (ニ) トリプトン・イースト液 陰性 ２ チロシナーゼ反応 陰性 ３ 硫化水素の生産 陰性 ４ 硝酸塩の還元 陰性 ５ ゼラチンの液化（21〜23℃）（グルコー
ス・ペプトン・ゼラチン培地） 陰性 ６ スターチの加水分解 陽性 ７ 脱脂乳の凝固（36℃） 陰性 ８ 脱脂乳のペプトン化（36℃） 陽性 ９ セルロース分解 陰性 10 生育温度範囲 ６〜36℃ 11 炭素源の利用性 よく利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−マンニ
トール、Ｄ−フラクトース、
Ｌ−アラビノース、ｉ−イノ
シトール、ラムノース、ラフ
イノース、マルトース やゝ利用する：Ｄ−キシロース 利用しない：シユクロース (4) 細胞壁組成 デイアミノピメリン酸はLL−型であり、ア
ラビノース、ガラクトースは認められない。 以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとお
りになる。細胞壁組成は、LL−デイアミノピメ
リン酸を有する。また、形態的には直線状または
ループ状の胞子柄を形成し、胞子の表面は平滑で
ある。培養上の諸性質としては、栄養菌糸は黄色
から暗褐色を呈し、PHの変化によつて変化せず、
気菌糸の色調は黄色ないし灰色を呈する。シユー
クロース・硝酸塩寒天、グルコース・アスパラギ
ン寒天等で黄色の可溶性色素を生産する。メラニ
ン色素は生産しない。 これらの結果から、本菌株はストレプトミセス
属に属する菌種であり、しかもプリムドハムとス
トレナーの分類（バージーズ・マニユアル・オ
ブ・デタミネーテイブ・バクテリオロジー第８
版、1974年、748〜829頁）による、イエローある
いはグレイシリーズに属する菌種と考えられる。 なお、本菌株はストレプトミセス・エスピー・
AM−5344（Streptomyces sp.AM−5344）とし
て、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され
ている（受託番号、微工研条寄第67号）。 本発明における使用菌として、ストレプトミセ
ス・エスピー・AM−5344株は、その具体例であ
つて、この菌をたとえば紫外線、エツクス線、放
射線、化学薬剤等を用いる人工的変異手段で変異
して得られる変異株は、もちろん、ストレプトミ
セスに属する微生物であつて、抗生物質AM−
5344−A2の生産能を有するものはすべて本発明
に用いることができる。 本発明において、抗生物質AM−5344−A2を
生産する微生物を培養する培地としては、炭素
源、窒素源、無機物等を含む微生物の培養に通常
用いられる培地が広く使用されうる。培地の炭素
源としては、同化可能な炭素化合物であればよ
く、たとえば、ブドウ糖、麦芽糖、乳糖、シヨ
糖、デンプン、デキストリン、グリセリン、糖蜜
などが使用される。また、培地の窒素源として
は、利用可能な窒素化合物であればよく、たとえ
ば、大豆粉、コーンスチープリカー、綿実粉、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、カゼ
イン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩などが
利用される。その他に、培地の調製にあたり、リ
ン酸塩、マグネシウム、カリウム、カルシウム、
ナトリウム、鉄、マンガンなどの塩類が必要に応
じて使用される。培養は通常好気的に行なわれ、
通気撹拌培養が好適である。培養温度は、微生物
が発育し抗生物質AM−5344−A2を生産する範
囲で適宜変更できるが、特に好ましいのは25〜30
℃である。PHは６〜７が好ましい。培養時間は
種々の条件によつて異なるが、通常、50〜100時
間程度であつて、抗生物質AM−5344−A2が最
高力価に達する時間を見計つて適当な時間に培養
を終了する。 このようにして得られたストレプトミセスに属
する抗生物質AM−5344−A2生産微生物の培養
物からの抗生物質AM−5344−A2の採取は、微
生物の培養物より抗生物質を分離精製する公知の
手段を適宜選択組合わせて行なうことができる。
培養物から抗生物質AM−5344−A2を分離精製
する手段の一例を示すと、次のとおりである。 すなわち、培養物を菌体と液に分別して、菌
体からはアセトンや酢酸エチルなどで抽出する
か、メタノールで菌体処理したのち、酢酸エチ
ル、クロロホルム等の有機溶媒で抽出する。液
からは酢酸エチル、ベンゼン等の水と分離し、抗
生物質AM−5344−A2を溶解せしめる有機溶媒
で抽出した後、脂溶性物質の精製において通常用
いられる公知の方法により、抗生物質AM−5344
−A2を回収する。たとえば、抽出液（酢酸エチ
ル層）を減圧下で濃縮し、生じた沈澱を分離し、
これをｎ−ヘキサンで洗浄した後、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフイーにより、溶出溶媒にクロ
ロホルム、メタノールの混合溶媒系を用いて、抗
生物質AM−5344−A2を単離する。 なお、生産される抗生物質AM−5344−A2の
検出および定量は、シリカゲル薄層クロマトグラ
フイー（メルク社製シリカゲル60F254、厚さ0.2
mm、展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝40：
１、抗生物質AM−5344−A2のRf値0.51）および
アコレプラズマ・レイデルウイ（Acholeplasma
laidlawii）PG−８を用いた生物学的検定法によ
つた。 次に本発明の抗生物質AM−5344−A2の実施
例を示すが、この実施例は単なる一例を示すもの
であつて、本発明を限定するものではない。 実施例 １ ストレプトミセス・エスピー・AM−5344株
（Streptomyces sp.AM−5344；受託番号、微工
研条寄第67号）の斜面培養から一白金耳を種培地
に接種し、27℃で２日間培養後、30の培地を含
む50容ジヤーフアーメンターに１％の割合で種
培養を接種し、27℃で89時間、通気撹拌培養を行
つた。培地は種培養には、グルコース1.0％、ペ
プトン2.0％、酵母エキス0.5％、炭酸カルシウム
0.4％のものを、本培養には、グリセリン2.0％、
キナ粉2.0％、食塩0.3％のものを、それぞれPH7.0
に調整した後、121℃で15分間滅菌したものを用
いた。 培養物30を遠心分離して得た培養液に、酢酸
エチル10を加えてよく撹拌した後、遠心分離に
より酢酸エチル層を分離した。この酢酸エチル抽
出液を減圧下で500mlまで濃縮し、ｎ−ヘキサン
300mlを加えて油性物質を除き、褐色粉末3.0ｇを
得た。これをシリカゲルカラム（メルク社製キー
ゼルゲル60 120ｇ）にのせた後、クロロホルム
1.5で展開し、次にクロロホルム：メタノール
（50：１）の混合溶媒5.0で溶出して得られた活
性分画（分画番号130番〜550番、12ml／cube）
を減圧下で濃縮乾固することにより、褐色粉末
500mgを得た。この褐色粉末をクロロホルム：メ
タノール（40：１）の混合溶媒を用いた分取薄層
クロマトグラフイー（Rf値0.32）により精製し、
抗生物質AM−5344−A2の橙色粉末150mgを得
た。このものゝ性質は、本明細書第３頁から第５
頁までに記載されている理化学的性質と一致し
た。 実施例 ２ 実施例１と同様にして得た培養物30を遠心分
離し菌体を得た。この菌体にメタノール10を加
えてよく撹拌した後、再び遠心分離してメタノー
ルを除去した後、菌体にクロロホルム５を加え
て撹拌し抽出した。これを別し、得られたクロ
ロホルム層を減圧下で濃縮乾固し、アメ状物質６
ｇを得た。これをクロロホルムで充填したシリカ
ゲルカラム（和光純薬工業社製ワコーゲルＣ−
200 240ｇ）にのせ、クロロホルムで展開し、次
にクロロホルム：メタノール（50：１）の混合溶
媒10で展開溶出して得られた活性分画（分画番
号120番〜500番、25ml／cube）を減圧下700mlま
で濃縮し、ｎ−ヘキサンを加えることによつて得
られた沈澱を別し、乾燥後、抗生物質AM−
5344−A2の橙色粉末1.5ｇを得た。このものゝ性
質は、本明細書第３頁から４頁までに記載されて
いる理化学的性質と一致した。
(3) 生理的諸性質 １ メラニン色素の形成 (イ) チロシン寒天 陰性 (ロ) ペプトン・イースト鉄寒天 陰性 (ハ) グルコース・ペプトン・ゼラチン培地穿
刺（21〜23℃） 陰性 (ニ) トリプトン・イースト液 陰性 ２ チロシナーゼ反応 陰性 ３ 硫化水素の生産 陰性 ４ 硝酸塩の還元 陰性 ５ ゼラチンの液化（21〜23℃）（グルコー
ス・ペプトン・ゼラチン培地） 陰性 ６ スターチの加水分解 陽性 ７ 脱脂乳の凝固（36℃） 陰性 ８ 脱脂乳のペプトン化（36℃） 陽性 ９ セルロース分解 陰性 10 生育温度範囲 ６〜36℃ 11 炭素源の利用性 よく利用する：Ｄ−グルコース、Ｄ−マンニ
トール、Ｄ−フラクトース、
Ｌ−アラビノース、ｉ−イノ
シトール、ラムノース、ラフ
イノース、マルトース やゝ利用する：Ｄ−キシロース 利用しない：シユクロース (4) 細胞壁組成 デイアミノピメリン酸はLL−型であり、ア
ラビノース、ガラクトースは認められない。 以上、本菌の菌学的性状を要約すると次のとお
りになる。細胞壁組成は、LL−デイアミノピメ
リン酸を有する。また、形態的には直線状または
ループ状の胞子柄を形成し、胞子の表面は平滑で
ある。培養上の諸性質としては、栄養菌糸は黄色
から暗褐色を呈し、PHの変化によつて変化せず、
気菌糸の色調は黄色ないし灰色を呈する。シユー
クロース・硝酸塩寒天、グルコース・アスパラギ
ン寒天等で黄色の可溶性色素を生産する。メラニ
ン色素は生産しない。 これらの結果から、本菌株はストレプトミセス
属に属する菌種であり、しかもプリムドハムとス
トレナーの分類（バージーズ・マニユアル・オ
ブ・デタミネーテイブ・バクテリオロジー第８
版、1974年、748〜829頁）による、イエローある
いはグレイシリーズに属する菌種と考えられる。 なお、本菌株はストレプトミセス・エスピー・
AM−5344（Streptomyces sp.AM−5344）とし
て、工業技術院微生物工業技術研究所に寄託され
ている（受託番号、微工研条寄第67号）。 本発明における使用菌として、ストレプトミセ
ス・エスピー・AM−5344株は、その具体例であ
つて、この菌をたとえば紫外線、エツクス線、放
射線、化学薬剤等を用いる人工的変異手段で変異
して得られる変異株は、もちろん、ストレプトミ
セスに属する微生物であつて、抗生物質AM−
5344−A2の生産能を有するものはすべて本発明
に用いることができる。 本発明において、抗生物質AM−5344−A2を
生産する微生物を培養する培地としては、炭素
源、窒素源、無機物等を含む微生物の培養に通常
用いられる培地が広く使用されうる。培地の炭素
源としては、同化可能な炭素化合物であればよ
く、たとえば、ブドウ糖、麦芽糖、乳糖、シヨ
糖、デンプン、デキストリン、グリセリン、糖蜜
などが使用される。また、培地の窒素源として
は、利用可能な窒素化合物であればよく、たとえ
ば、大豆粉、コーンスチープリカー、綿実粉、ペ
プトン、肉エキス、酵母エキス、乾燥酵母、カゼ
イン加水分解物、アンモニウム塩、硝酸塩などが
利用される。その他に、培地の調製にあたり、リ
ン酸塩、マグネシウム、カリウム、カルシウム、
ナトリウム、鉄、マンガンなどの塩類が必要に応
じて使用される。培養は通常好気的に行なわれ、
通気撹拌培養が好適である。培養温度は、微生物
が発育し抗生物質AM−5344−A2を生産する範
囲で適宜変更できるが、特に好ましいのは25〜30
℃である。PHは６〜７が好ましい。培養時間は
種々の条件によつて異なるが、通常、50〜100時
間程度であつて、抗生物質AM−5344−A2が最
高力価に達する時間を見計つて適当な時間に培養
を終了する。 このようにして得られたストレプトミセスに属
する抗生物質AM−5344−A2生産微生物の培養
物からの抗生物質AM−5344−A2の採取は、微
生物の培養物より抗生物質を分離精製する公知の
手段を適宜選択組合わせて行なうことができる。
培養物から抗生物質AM−5344−A2を分離精製
する手段の一例を示すと、次のとおりである。 すなわち、培養物を菌体と液に分別して、菌
体からはアセトンや酢酸エチルなどで抽出する
か、メタノールで菌体処理したのち、酢酸エチ
ル、クロロホルム等の有機溶媒で抽出する。液
からは酢酸エチル、ベンゼン等の水と分離し、抗
生物質AM−5344−A2を溶解せしめる有機溶媒
で抽出した後、脂溶性物質の精製において通常用
いられる公知の方法により、抗生物質AM−5344
−A2を回収する。たとえば、抽出液（酢酸エチ
ル層）を減圧下で濃縮し、生じた沈澱を分離し、
これをｎ−ヘキサンで洗浄した後、シリカゲルカ
ラムクロマトグラフイーにより、溶出溶媒にクロ
ロホルム、メタノールの混合溶媒系を用いて、抗
生物質AM−5344−A2を単離する。 なお、生産される抗生物質AM−5344−A2の
検出および定量は、シリカゲル薄層クロマトグラ
フイー（メルク社製シリカゲル60F254、厚さ0.2
mm、展開溶媒；クロロホルム：メタノール＝40：
１、抗生物質AM−5344−A2のRf値0.51）および
アコレプラズマ・レイデルウイ（Acholeplasma
laidlawii）PG−８を用いた生物学的検定法によ
つた。 次に本発明の抗生物質AM−5344−A2の実施
例を示すが、この実施例は単なる一例を示すもの
であつて、本発明を限定するものではない。 実施例 １ ストレプトミセス・エスピー・AM−5344株
（Streptomyces sp.AM−5344；受託番号、微工
研条寄第67号）の斜面培養から一白金耳を種培地
に接種し、27℃で２日間培養後、30の培地を含
む50容ジヤーフアーメンターに１％の割合で種
培養を接種し、27℃で89時間、通気撹拌培養を行
つた。培地は種培養には、グルコース1.0％、ペ
プトン2.0％、酵母エキス0.5％、炭酸カルシウム
0.4％のものを、本培養には、グリセリン2.0％、
キナ粉2.0％、食塩0.3％のものを、それぞれPH7.0
に調整した後、121℃で15分間滅菌したものを用
いた。 培養物30を遠心分離して得た培養液に、酢酸
エチル10を加えてよく撹拌した後、遠心分離に
より酢酸エチル層を分離した。この酢酸エチル抽
出液を減圧下で500mlまで濃縮し、ｎ−ヘキサン
300mlを加えて油性物質を除き、褐色粉末3.0ｇを
得た。これをシリカゲルカラム（メルク社製キー
ゼルゲル60 120ｇ）にのせた後、クロロホルム
1.5で展開し、次にクロロホルム：メタノール
（50：１）の混合溶媒5.0で溶出して得られた活
性分画（分画番号130番〜550番、12ml／cube）
を減圧下で濃縮乾固することにより、褐色粉末
500mgを得た。この褐色粉末をクロロホルム：メ
タノール（40：１）の混合溶媒を用いた分取薄層
クロマトグラフイー（Rf値0.32）により精製し、
抗生物質AM−5344−A2の橙色粉末150mgを得
た。このものゝ性質は、本明細書第３頁から第５
頁までに記載されている理化学的性質と一致し
た。 実施例 ２ 実施例１と同様にして得た培養物30を遠心分
離し菌体を得た。この菌体にメタノール10を加
えてよく撹拌した後、再び遠心分離してメタノー
ルを除去した後、菌体にクロロホルム５を加え
て撹拌し抽出した。これを別し、得られたクロ
ロホルム層を減圧下で濃縮乾固し、アメ状物質６
ｇを得た。これをクロロホルムで充填したシリカ
ゲルカラム（和光純薬工業社製ワコーゲルＣ−
200 240ｇ）にのせ、クロロホルムで展開し、次
にクロロホルム：メタノール（50：１）の混合溶
媒10で展開溶出して得られた活性分画（分画番
号120番〜500番、25ml／cube）を減圧下700mlま
で濃縮し、ｎ−ヘキサンを加えることによつて得
られた沈澱を別し、乾燥後、抗生物質AM−
5344−A2の橙色粉末1.5ｇを得た。このものゝ性
質は、本明細書第３頁から４頁までに記載されて
いる理化学的性質と一致した。
第１図は抗生物質AM−5344−A2の紫外線吸
収スペクトル（クロロホルム中で測定）を、第２
図は赤外線吸収スペクトル（KBr法）を示す。
収スペクトル（クロロホルム中で測定）を、第２
図は赤外線吸収スペクトル（KBr法）を示す。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 次の理化学的性質を有する抗生物質AM−
5344−A2 元素分析値： Ｃ 63.87％、Ｈ 3.96％、Ｎ 2.29％ 比旋光度： 〔α〕20 D＝−214゜（Ｃ 0.25、クロロホルム） 融点： ＞290℃ 紫外線吸収スペクトル： 第１図のとおり。 赤外線吸収スペクトル： 第２図のとおり。 Rf値： シリカゲル薄層クロマトグラフイー（メルク
社製TLCアルミシート、シリカゲル60F254、厚
さ0.2mm）を通常法にて行なつた時のRf値は、
次のとおりである。 Rf値 (イ) クロロホルム：メタノール（40：１）0.32 (ロ) ベンゼン：アセトン（１：１） 0.68 (ハ) ベンゼン：メタノール（４：１） 0.58 (ニ) 酢酸エチル 0.20 (ホ) ｎ−ブタノール：酢酸：水（４：１：１）
0.61 溶剤に対する溶解性 クロロホルムに溶け、アセトン、酢酸エチ
ル、ベンゼン等の有機溶媒および低級アルコー
ルに難溶で、ｎ−ヘキサン、エチルエーテル、
水に不溶である。 ２ ストレプトミセス属に属し、抗生物質AM−
5344−A2を生産する能力を有する菌株を培地に
好気的に培養し、培養物中に特許請求の範囲第１
項に示す理化学的性質を有する抗生物質AM−
5344−A2を蓄積せしめ、これを採取することを
特徴とする抗生物質AM−5344−A2の製造方法。 ３ 微生物がストレプトミセス・エスピー・AM
−5344である特許請求の範囲第２項記載の製造方
法。
Priority Applications (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55177107A JPS57102897A (en) | 1980-12-17 | 1980-12-17 | Antibiotic am-5344-a2 and its preparation |
| EP81110170A EP0054801B1 (en) | 1980-12-17 | 1981-12-04 | Antibiotic am-5344-a2 and process for the preparation thereof |
| DE8181110170T DE3169901D1 (en) | 1980-12-17 | 1981-12-04 | Antibiotic am-5344-a2 and process for the preparation thereof |
| AT81110170T ATE12646T1 (de) | 1980-12-17 | 1981-12-04 | Antibiotikum am-5344-a2 und verfahren zu dessen herstellung. |
| US06/507,385 US4666715A (en) | 1980-12-17 | 1983-06-24 | Antibiotic AM-5344-A2 substance and process for the production thereof |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP55177107A JPS57102897A (en) | 1980-12-17 | 1980-12-17 | Antibiotic am-5344-a2 and its preparation |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS57102897A JPS57102897A (en) | 1982-06-26 |
| JPS632266B2 true JPS632266B2 (ja) | 1988-01-18 |
Family
ID=16025268
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP55177107A Granted JPS57102897A (en) | 1980-12-17 | 1980-12-17 | Antibiotic am-5344-a2 and its preparation |
Country Status (5)
| Country | Link |
|---|---|
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| EP (1) | EP0054801B1 (ja) |
| JP (1) | JPS57102897A (ja) |
| AT (1) | ATE12646T1 (ja) |
| DE (1) | DE3169901D1 (ja) |
Families Citing this family (3)
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|---|---|---|---|---|
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- 1980-12-17 JP JP55177107A patent/JPS57102897A/ja active Granted
-
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- 1981-12-04 EP EP81110170A patent/EP0054801B1/en not_active Expired
- 1981-12-04 AT AT81110170T patent/ATE12646T1/de not_active IP Right Cessation
-
1983
- 1983-06-24 US US06/507,385 patent/US4666715A/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS57102897A (en) | 1982-06-26 |
| EP0054801B1 (en) | 1985-04-10 |
| ATE12646T1 (de) | 1985-04-15 |
| DE3169901D1 (en) | 1985-05-15 |
| EP0054801A1 (en) | 1982-06-30 |
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