JPH04210916A - ミリストイル化を伴う疾患の治療を意図する薬効のある生成物を得るためのｎ−ミリストイル−（ｓ）−フェニルアラニンの使用 - Google Patents
ミリストイル化を伴う疾患の治療を意図する薬効のある生成物を得るためのｎ−ミリストイル−（ｓ）−フェニルアラニンの使用Info
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- JPH04210916A JPH04210916A JP3007188A JP718891A JPH04210916A JP H04210916 A JPH04210916 A JP H04210916A JP 3007188 A JP3007188 A JP 3007188A JP 718891 A JP718891 A JP 718891A JP H04210916 A JPH04210916 A JP H04210916A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
［０００１］
【産業上の利用分野】本発明はＮ−ミリストイルトラン
スフェラーゼの阻害剤としてのＮ−ミリストイル（Ｓ）
−フェニルアラニンの使用に関する。 ［０００２］
スフェラーゼの阻害剤としてのＮ−ミリストイル（Ｓ）
−フェニルアラニンの使用に関する。 ［０００２］
【従来の技術】先行技術からタンパク質のＮ−末端アミ
ノ基はアセチル、ピログルタミルおよびホルミル基によ
って保護されることが知られている。今や庄司等はミリ
スチン酸が環状ＡＭＰ−依存タ依存タンパク−キナーゼ
サブユニットのＮ−末端基に共有結合よって結合してい
ることを証明した（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 （１９８２）、７９．６１２３〜
６１３１）。 ［０００３］ この末端ミリストイル基の存在はそのと
き以来力ルシニュウリン（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ）Ｂ
（ＡＩＴＫＥＮ等、Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ、
（１９８２）、１５０．Ｎｏ号、３１４〜３１８頁参照
）またはチロシンタンパク質キナーゼ（ＴＰＫ） （
ＢＵＳＳおよび５ＥＦＴＯＮ、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、 （
１９８５）、５３．７〜１２頁参照）のようなさまざま
な他のタンパク質に示されてきた。 ［０００４］発がん遺伝子分野においてもまた、ＢＩＳ
ＨＯＰは形質転換タンパク質が成熟の間にミリストイル
化を受けることを証明した。さらに、それ以来、ミリス
チル化によって進行する、この成熟段階はこのタンパク
質の形質転換力に対し不可欠であることが示されてきた
（ＫＡＭＰＳ、ＢＵＳＳおよび５ＥＦＴＯＮ、Ｐｒ。 ｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ、 （
１９８５）、８２．４６２５〜４６２８頁参照）。この
概念はその時以来ウィルス起源の多数の他の形質転換タ
ンパク質に対し一般化されてきた（ＲＨＥＥおよびＨＵ
ＮＴＥＲ，Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、、 （１９８７）、６Ｌ
１０４５〜１０５３頁参照）。この成熟は、ＴＯＷ
ＬＥＲおよびＧＬＡＳＥＲによって証明された、Ｎ−ミ
リストイルトランスフェラーゼとして知られている酵素
によって接触される（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ
、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ、 （１９８６）、８３．２８１
２〜２８１６頁参照）。 ［０００５］
ノ基はアセチル、ピログルタミルおよびホルミル基によ
って保護されることが知られている。今や庄司等はミリ
スチン酸が環状ＡＭＰ−依存タ依存タンパク−キナーゼ
サブユニットのＮ−末端基に共有結合よって結合してい
ることを証明した（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、
Ｓｃｉ、ＵＳＡ、 （１９８２）、７９．６１２３〜
６１３１）。 ［０００３］ この末端ミリストイル基の存在はそのと
き以来力ルシニュウリン（ｃａｌｃｉｎｅｕｒｉｎ）Ｂ
（ＡＩＴＫＥＮ等、Ｆｅｂｓ Ｌｅｔｔｅｒｓ、
（１９８２）、１５０．Ｎｏ号、３１４〜３１８頁参照
）またはチロシンタンパク質キナーゼ（ＴＰＫ） （
ＢＵＳＳおよび５ＥＦＴＯＮ、Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、 （
１９８５）、５３．７〜１２頁参照）のようなさまざま
な他のタンパク質に示されてきた。 ［０００４］発がん遺伝子分野においてもまた、ＢＩＳ
ＨＯＰは形質転換タンパク質が成熟の間にミリストイル
化を受けることを証明した。さらに、それ以来、ミリス
チル化によって進行する、この成熟段階はこのタンパク
質の形質転換力に対し不可欠であることが示されてきた
（ＫＡＭＰＳ、ＢＵＳＳおよび５ＥＦＴＯＮ、Ｐｒ。 ｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ、 （
１９８５）、８２．４６２５〜４６２８頁参照）。この
概念はその時以来ウィルス起源の多数の他の形質転換タ
ンパク質に対し一般化されてきた（ＲＨＥＥおよびＨＵ
ＮＴＥＲ，Ｊ、Ｖｉｒｏｌ、、 （１９８７）、６Ｌ
１０４５〜１０５３頁参照）。この成熟は、ＴＯＷ
ＬＥＲおよびＧＬＡＳＥＲによって証明された、Ｎ−ミ
リストイルトランスフェラーゼとして知られている酵素
によって接触される（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ １．Ａｃａｄ
、Ｓｃ ｉ、ＵＳＡ、 （１９８６）、８３．２８１
２〜２８１６頁参照）。 ［０００５］
【発明が解決しようとする課題】今や、ＮＭＴは事実上
、一方においてミリスチン酸だけを補基質として、他方
において、グリシンに隣接するペプチド配列の関与に関
して（７アミノ酸の関与）、Ｎ末端側の最後のアミノ酸
としてこのグリシンを含む基質タンパク質と認める。 ［０００６］ このように、いくつかのタンパク質のＮ
末端グリシン残基のミリストイル化は、細胞の形質転換
および細胞増殖の抑制に関与するいくつかの機構に非常
に重要な役割を演する。さらに、庄司等（特開昭６３１
４６．８５１号、特開昭６２−２５５，８１０号および
特開昭６２−１２６，３８４号参照）によって、ミリス
トイルグリシンまたはオリゴペプチド誘導体が細胞形質
転換もしくは増殖またはレトロウィルス増殖に対して阻
害効果を持つことが示された。 ［０００７］
、一方においてミリスチン酸だけを補基質として、他方
において、グリシンに隣接するペプチド配列の関与に関
して（７アミノ酸の関与）、Ｎ末端側の最後のアミノ酸
としてこのグリシンを含む基質タンパク質と認める。 ［０００６］ このように、いくつかのタンパク質のＮ
末端グリシン残基のミリストイル化は、細胞の形質転換
および細胞増殖の抑制に関与するいくつかの機構に非常
に重要な役割を演する。さらに、庄司等（特開昭６３１
４６．８５１号、特開昭６２−２５５，８１０号および
特開昭６２−１２６，３８４号参照）によって、ミリス
トイルグリシンまたはオリゴペプチド誘導体が細胞形質
転換もしくは増殖またはレトロウィルス増殖に対して阻
害効果を持つことが示された。 ［０００７］
【課題を解決するめだの手段】本発明は特にミリストイ
ル化に対し責任がある酵素、すなわちＮ−ミリストイル
トランスフェラーゼによるギャグ（ｇａｇ）のようなタ
ンパク質のこのミリストイル化の阻害剤としてのＮ−ミ
リストイル−（Ｓ）−フェニルアラニンの使用から成る
。 ［０００８］ この化合によるこの酵素の活性の阻害は
今まで証明されたことは一度もなかった。その上、ＮＭ
Ｔの阻害剤としてのＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニ
ルアラニンの使用は、がん細胞およびレトロウィルスの
増殖の阻害剤として先行技術に記述された化合物の使用
よりもこの酵素の活性について著しく大きな阻害を引き
起こす。 ［０００９］実際上、細胞増殖および形質転換にＮ−ミ
リストイル−（Ｓ）−フェニルアラニンによって及ぼさ
れる影響の詳細な研究は、マウス起源（Ｌ１２１０）の
ガン細胞を使用して行なわれた。この生物学的媒体から
の酵素の抽出およびその活性の測定後、Ｎ−ミリストイ
ル−（Ｓ）−フェニルアラニンの添加はその活性を強く
阻害することが明らかである。 （００１０１その上、この化合物はＬ１２１０ （マウ
ス起源の）またはＨＬ６０（ヒト起源の）のような、培
養中のかん細胞に対して細胞毒性活性を表わす。この細
胞毒性はこれらの細胞に関しＮ−ミリストイルグリシン
によるものよりも著しく大きいことが証明された。
ル化に対し責任がある酵素、すなわちＮ−ミリストイル
トランスフェラーゼによるギャグ（ｇａｇ）のようなタ
ンパク質のこのミリストイル化の阻害剤としてのＮ−ミ
リストイル−（Ｓ）−フェニルアラニンの使用から成る
。 ［０００８］ この化合によるこの酵素の活性の阻害は
今まで証明されたことは一度もなかった。その上、ＮＭ
Ｔの阻害剤としてのＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニ
ルアラニンの使用は、がん細胞およびレトロウィルスの
増殖の阻害剤として先行技術に記述された化合物の使用
よりもこの酵素の活性について著しく大きな阻害を引き
起こす。 ［０００９］実際上、細胞増殖および形質転換にＮ−ミ
リストイル−（Ｓ）−フェニルアラニンによって及ぼさ
れる影響の詳細な研究は、マウス起源（Ｌ１２１０）の
ガン細胞を使用して行なわれた。この生物学的媒体から
の酵素の抽出およびその活性の測定後、Ｎ−ミリストイ
ル−（Ｓ）−フェニルアラニンの添加はその活性を強く
阻害することが明らかである。 （００１０１その上、この化合物はＬ１２１０ （マウ
ス起源の）またはＨＬ６０（ヒト起源の）のような、培
養中のかん細胞に対して細胞毒性活性を表わす。この細
胞毒性はこれらの細胞に関しＮ−ミリストイルグリシン
によるものよりも著しく大きいことが証明された。
【００１１】このように、この活性の阻害は、この酵素
が、特にいくつかのがんに含まれる形質転換タンパク質
、またはそれ自身レトロウィルスの成熟分裂を含むタン
パク質のいずれかの成熟に支配的な役割を演するという
事実のためになおさら有利である。 ［００１２］それゆえにＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フ
ェニルアラニンはがんおよび／またはエイズのようなレ
トロウィルス疾患の治療に応用可能である。 ［００１３］本発明の主題はまた、単独でまたは１種以
上の非毒性、不活性賦形剤またはビヒクルと組み合わせ
て、薬学的組成物の形での、Ｎ−ミリストイル−（Ｓ）
フェニルアラニン、または薬学的に許容しうる塩基によ
るその付加塩の使用にある。 ［００１４］本発明に係る薬学的組成物の中に、経口、
非経口または経鼻投与に適した、単純錠剤または糖衣錠
、舌下錠、小量入りの袋、小さな包み、硬質ゼラチンカ
プセル、舌下用調合薬、トローチ、座薬などの名を挙げ
ることができる。 ［００１５］投与量は患者の年齢および体重、状態の本
質および厳しさ、さらにまた投与経路によって変化する
。後者は経口、経鼻、経直腸または非経口であり得る。 一般に、単位投与量は２４時間当り１〜３回投与する治
療に対しては０．１〜１００ｍｇの範囲にある。 ［００１６］
が、特にいくつかのがんに含まれる形質転換タンパク質
、またはそれ自身レトロウィルスの成熟分裂を含むタン
パク質のいずれかの成熟に支配的な役割を演するという
事実のためになおさら有利である。 ［００１２］それゆえにＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フ
ェニルアラニンはがんおよび／またはエイズのようなレ
トロウィルス疾患の治療に応用可能である。 ［００１３］本発明の主題はまた、単独でまたは１種以
上の非毒性、不活性賦形剤またはビヒクルと組み合わせ
て、薬学的組成物の形での、Ｎ−ミリストイル−（Ｓ）
フェニルアラニン、または薬学的に許容しうる塩基によ
るその付加塩の使用にある。 ［００１４］本発明に係る薬学的組成物の中に、経口、
非経口または経鼻投与に適した、単純錠剤または糖衣錠
、舌下錠、小量入りの袋、小さな包み、硬質ゼラチンカ
プセル、舌下用調合薬、トローチ、座薬などの名を挙げ
ることができる。 ［００１５］投与量は患者の年齢および体重、状態の本
質および厳しさ、さらにまた投与経路によって変化する
。後者は経口、経鼻、経直腸または非経口であり得る。 一般に、単位投与量は２４時間当り１〜３回投与する治
療に対しては０．１〜１００ｍｇの範囲にある。 ［００１６］
【実施例】次の実施例は本発明を説明するものであるが
、どの点においても決して本発明を限定するものでない
。 ［００１７］実施例１：Ｎ−ミリストイルー（Ｓ）−フ
ェニルアラニンの合成 工程Ａ：第三ブチルＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニ
ルアラニネイト ＶＡＶＧＨＡＮ Ｊ、Ｒ，ｊ ｒ、 と０８ＡＴＯ
Ｒ。 Ｌ、 （ＪＡＣ３，（１９５１）、７３．５５５３頁
参照）により記述された技法を使用し、予期した生成物
をミリスチン酸と第三ブチル（Ｓ）−フェニルアラニネ
イトより得た。 収率：９２％ ［００１８］工程Ｂ：Ｎ−ミリストイル−（Ｓ）−フェ
ニルアラニン 工程Ａで得た化合物２ｇをジクロロメタン２５ｍ１に溶
解した。トリフルオロ酢酸５ｍｌを添加後、溶液を室温
で２４時間放置した。それから乾燥状態まで蒸発させた
。予期した合成物をペンタン中の残留物の結晶化および
濾過の後に得た。 収率：４９％ 融点（Ｋｏｆｌｅｒ）ニア４℃ 元素微量分析： ６％ Ｈ％ ８％計算値：
７３．５６ ９．９３ ３．７３実測値：
７３．３０ ９゜８１ ３．５８［００
１９］薬理学的検討： 実施例２：触媒作用を及ぼす反応生成物の類似体による
Ｎ−ミリストイルトランスフェラーゼ（ＮＭＴ）阻害法
王程Ａ：Ｌ１２１０ガン細胞の大量培養マウス血統の白
血病細胞（Ｌ１２１０）を次の培地を含む５００〜１０
１００Ｏのローラーボトル中で培養した。：ＲＰＭ１１
６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）；１０％牛脂児血清；５０単
位／ｍｌのペニシリン；５０μＭストレプトマイシン；
２ｍＭグルタミン；および１０ｍＭＨＥＰＥＳ （Ｇｉ
ｂｃｏ） 。細胞は５％ＣＯ２／９５％空気の雰囲気中
３７℃で連続的な攪拌により成長させた。細胞を収集し
、洗浄した。典型的に２．５Ｘ１０”個の細胞を含む最
終沈殿物を溶菌緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７，９；
１ｍＭ ＤＴＴ； １ｍＭ ＥＤＴＡ；および２
５０ｍＭシヨ糖〕中で再懸濁した。細胞を溶解し、均質
にした。ミクロソーム（小胞性の小胞体）を１０５．０
００ｇの遠心分離により沈殿物として収集した。 ［００２０１工程Ｂ：この生物学的原料からの酵素の可
溶化 ＮＭＴは膜酵素である。この酵素を溶解するために、こ
の懸濁液を次いで可溶化緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥ
Ｓ％ｐＨ７，５，１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴ
Ｔ。 １０％グリセロールおよび３％トリトン７７０〕中に２
／３に希釈し、攪拌しながら３０分間４℃に保持した。 この懸濁液を次いで７５分間１０５，０００ｇで再び遠
心分離した。洗浄剤に不溶性の物質は沈殿物として沈降
した。上澄みはＬ１２１０ミクロソーム中に存在するＮ
ＭＴ活性のすべてを含んでいた。 ［００２１］工程Ｃ：Ｎ−ミリストイルトランスフェラ
ーゼ活性およびＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニルア
ラニンによるその阻害の測定 その化合物は次いでペプチド基質グリシン−アスパラギ
ン−（アラニン）４−（アルギニン）２ （”Ｇ ８
Ｒ” ）と競争させて上澄みについてＴＯＷＬＥＲ等（
ＰＮＡＳ。 （１９８７）、８４．２７０８〜２７１１頁参照）によ
り記述された条件に従って試験した。ミリストイル補酵
素Ａを使用直前にＡＴＰ、補酵素Ａ（リチウム塩）およ
びシュードモナスアシル−Ｃｏａシンテターゼとともに
ミリステイトのインキュベーションにより酵素的に合成
した。 （３０℃で２０分）。ペプチド基質と上記で得
た生物学的原料をそのあとに添加した。混合物を３７℃
で１０分間インキュベートした。；反応は次いでメタノ
ール１１０μｍとトリクロロ酢酸１０μｍを使用して停
止した。培地を４℃で１０分間放置し、次いで１０，０
００ｇで５分間遠心分離した。最終上澄の一部（３０μ
ｍ）をμＢｏｎｄａｐａｋカラム（Ｗａ ｔ ｅ ｒ
ｓ）を備え付けたＨＰＬＣ系の中に注入し、Ｔｏｗｌｅ
ｒ等（ＰＮＡＳｌ （１９８７）、８４．２７０８〜１
１頁参照）によって記述された様な直線的勾配で展開さ
せた。アシル化ペプチドの検出はシンチレーション流体
（Ｚ ｉ ｎ ｓｓｅｔ）５ｍｌ／分の添加により、放
射性線検出器（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を使用し行なった。 アシル化したペプチドは８５％アセトニトリル−ＴＦＡ
／１５％水−ＴＦＡで溶出した。 ［００２２］阻害剤として試験した化合物は冷却状態で
短時間超音波処理した後、トリトン７７０の０．１％溶
液中に懸濁した。阻害剤の溶液１０μｍを反応培地に添
加した。実験条件は上記したものと同じであった。化合
物の活性は懸濁溶液の存在における以外は同様の条件の
もとてインキュベートし、対照の活性の減少を基準とし
て評価した。 ［００２３］ これらの条件下で、Ｎ−ミリストイル（
Ｓ）−フェニルアラニンはＩ Ｃ５ｏ＝２Ｘ １０−４
Ｍを持った。これはＮ−ミリストイルグリセリンについ
て測定した、Ｉ Ｃ５ｏ＝３Ｘ １０−”Ｍより１５倍
大きい活性に相当した。 ［００２４］実施例３：細胞毒性 化合物の細胞毒性はＡＬＬＥＹ等（Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ、、 （１９８８）４８，５８９〜６０１頁参照
）により記述された熱量測定試験を使用して評価した。 この自動化試験は規定通りに２細胞系列すなわち、Ｌ１
２１０（マウス白血病）およびＨＬ６０（ヒト前骨髄細
胞）を使用した。これらの系列の各々において、細胞毒
性は化合物について９濃度を使用して評価した。■Ｃ５
ｏは細胞成長の５０％阻害濃度である。結果を次の表に
順序正しくまとめる。 ［００２５］
、どの点においても決して本発明を限定するものでない
。 ［００１７］実施例１：Ｎ−ミリストイルー（Ｓ）−フ
ェニルアラニンの合成 工程Ａ：第三ブチルＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニ
ルアラニネイト ＶＡＶＧＨＡＮ Ｊ、Ｒ，ｊ ｒ、 と０８ＡＴＯ
Ｒ。 Ｌ、 （ＪＡＣ３，（１９５１）、７３．５５５３頁
参照）により記述された技法を使用し、予期した生成物
をミリスチン酸と第三ブチル（Ｓ）−フェニルアラニネ
イトより得た。 収率：９２％ ［００１８］工程Ｂ：Ｎ−ミリストイル−（Ｓ）−フェ
ニルアラニン 工程Ａで得た化合物２ｇをジクロロメタン２５ｍ１に溶
解した。トリフルオロ酢酸５ｍｌを添加後、溶液を室温
で２４時間放置した。それから乾燥状態まで蒸発させた
。予期した合成物をペンタン中の残留物の結晶化および
濾過の後に得た。 収率：４９％ 融点（Ｋｏｆｌｅｒ）ニア４℃ 元素微量分析： ６％ Ｈ％ ８％計算値：
７３．５６ ９．９３ ３．７３実測値：
７３．３０ ９゜８１ ３．５８［００
１９］薬理学的検討： 実施例２：触媒作用を及ぼす反応生成物の類似体による
Ｎ−ミリストイルトランスフェラーゼ（ＮＭＴ）阻害法
王程Ａ：Ｌ１２１０ガン細胞の大量培養マウス血統の白
血病細胞（Ｌ１２１０）を次の培地を含む５００〜１０
１００Ｏのローラーボトル中で培養した。：ＲＰＭ１１
６４０培地（Ｇｉｂｃｏ）；１０％牛脂児血清；５０単
位／ｍｌのペニシリン；５０μＭストレプトマイシン；
２ｍＭグルタミン；および１０ｍＭＨＥＰＥＳ （Ｇｉ
ｂｃｏ） 。細胞は５％ＣＯ２／９５％空気の雰囲気中
３７℃で連続的な攪拌により成長させた。細胞を収集し
、洗浄した。典型的に２．５Ｘ１０”個の細胞を含む最
終沈殿物を溶菌緩衝液（５０ｍＭトリス、ｐＨ７，９；
１ｍＭ ＤＴＴ； １ｍＭ ＥＤＴＡ；および２
５０ｍＭシヨ糖〕中で再懸濁した。細胞を溶解し、均質
にした。ミクロソーム（小胞性の小胞体）を１０５．０
００ｇの遠心分離により沈殿物として収集した。 ［００２０１工程Ｂ：この生物学的原料からの酵素の可
溶化 ＮＭＴは膜酵素である。この酵素を溶解するために、こ
の懸濁液を次いで可溶化緩衝液（５０ｍＭ ＨＥＰＥ
Ｓ％ｐＨ７，５，１ｍＭ ＥＤＴＡ、１ｍＭ ＤＴ
Ｔ。 １０％グリセロールおよび３％トリトン７７０〕中に２
／３に希釈し、攪拌しながら３０分間４℃に保持した。 この懸濁液を次いで７５分間１０５，０００ｇで再び遠
心分離した。洗浄剤に不溶性の物質は沈殿物として沈降
した。上澄みはＬ１２１０ミクロソーム中に存在するＮ
ＭＴ活性のすべてを含んでいた。 ［００２１］工程Ｃ：Ｎ−ミリストイルトランスフェラ
ーゼ活性およびＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニルア
ラニンによるその阻害の測定 その化合物は次いでペプチド基質グリシン−アスパラギ
ン−（アラニン）４−（アルギニン）２ （”Ｇ ８
Ｒ” ）と競争させて上澄みについてＴＯＷＬＥＲ等（
ＰＮＡＳ。 （１９８７）、８４．２７０８〜２７１１頁参照）によ
り記述された条件に従って試験した。ミリストイル補酵
素Ａを使用直前にＡＴＰ、補酵素Ａ（リチウム塩）およ
びシュードモナスアシル−Ｃｏａシンテターゼとともに
ミリステイトのインキュベーションにより酵素的に合成
した。 （３０℃で２０分）。ペプチド基質と上記で得
た生物学的原料をそのあとに添加した。混合物を３７℃
で１０分間インキュベートした。；反応は次いでメタノ
ール１１０μｍとトリクロロ酢酸１０μｍを使用して停
止した。培地を４℃で１０分間放置し、次いで１０，０
００ｇで５分間遠心分離した。最終上澄の一部（３０μ
ｍ）をμＢｏｎｄａｐａｋカラム（Ｗａ ｔ ｅ ｒ
ｓ）を備え付けたＨＰＬＣ系の中に注入し、Ｔｏｗｌｅ
ｒ等（ＰＮＡＳｌ （１９８７）、８４．２７０８〜１
１頁参照）によって記述された様な直線的勾配で展開さ
せた。アシル化ペプチドの検出はシンチレーション流体
（Ｚ ｉ ｎ ｓｓｅｔ）５ｍｌ／分の添加により、放
射性線検出器（Ｂｅｒｔｈｏｌｄ）を使用し行なった。 アシル化したペプチドは８５％アセトニトリル−ＴＦＡ
／１５％水−ＴＦＡで溶出した。 ［００２２］阻害剤として試験した化合物は冷却状態で
短時間超音波処理した後、トリトン７７０の０．１％溶
液中に懸濁した。阻害剤の溶液１０μｍを反応培地に添
加した。実験条件は上記したものと同じであった。化合
物の活性は懸濁溶液の存在における以外は同様の条件の
もとてインキュベートし、対照の活性の減少を基準とし
て評価した。 ［００２３］ これらの条件下で、Ｎ−ミリストイル（
Ｓ）−フェニルアラニンはＩ Ｃ５ｏ＝２Ｘ １０−４
Ｍを持った。これはＮ−ミリストイルグリセリンについ
て測定した、Ｉ Ｃ５ｏ＝３Ｘ １０−”Ｍより１５倍
大きい活性に相当した。 ［００２４］実施例３：細胞毒性 化合物の細胞毒性はＡＬＬＥＹ等（Ｃａｎｃｅｒ Ｒ
ｅｓ、、 （１９８８）４８，５８９〜６０１頁参照
）により記述された熱量測定試験を使用して評価した。 この自動化試験は規定通りに２細胞系列すなわち、Ｌ１
２１０（マウス白血病）およびＨＬ６０（ヒト前骨髄細
胞）を使用した。これらの系列の各々において、細胞毒
性は化合物について９濃度を使用して評価した。■Ｃ５
ｏは細胞成長の５０％阻害濃度である。結果を次の表に
順序正しくまとめる。 ［００２５］
【表１】
［００２６］ これらの結果はＮ−ミリストイル−（Ｓ
）フェニルアラニンがＮ−ミリストイルグリセリンより
明らかに大きな細胞毒性を表わすことを示した。 ［００２７］製薬学的組成物 実施例４：錠剤：有効成分２ｍｇ用量を含む１０００錠
の製剤処方
）フェニルアラニンがＮ−ミリストイルグリセリンより
明らかに大きな細胞毒性を表わすことを示した。 ［００２７］製薬学的組成物 実施例４：錠剤：有効成分２ｍｇ用量を含む１０００錠
の製剤処方
Claims (3)
- 【請求項１】１種以上の薬学的に許容しうる、非毒性、
不活性賦形剤またはビヒクルを含み、Ｎ−ミリストイル
トランスフェラーゼとして使用できる薬学的組成物を得
るためのＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニルアラニン
または薬学的に許容しうる塩基によるその付加塩の使用
。 - 【請求項２】 がんの治療に使用できる、請求項１に記
載の薬学的組成物を得るためのＮ−ミリストイル（Ｓ）
−フェニルアラニンの使用。 - 【請求項３】 エイズのようなレトロウィルスの治療に
使用できる、請求項１に記載の薬学的組成物を得るため
のＮ−ミリストイル−（Ｓ）−フェニルアラニンの使用
。
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|---|---|---|---|
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