JPH04217627A - チロシナーゼ活性阻害及びメラニン生成抑制剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は医薬品，医薬部外品，化
粧品等に、肌の美白化を目的として配合することのでき
るチロシナーゼ活性抑制及びメラニン生成抑制剤に関す
る。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】メラニ
ンは、色素細胞内でチロシナーゼの作用によって、チロ
シンがドーパ，ドーパキノンに変化し、ドーパクローム
等を経て生成すると考えられているが、このメラニンは
皮膚に存在し、紫外線等から身体を守る重要な役目を担
っている。しかし、メラニンの過剰生成はシミ・そばか
すを形成し、皮膚の老化を促進する為、最近では、紫外
線によるメラニン過剰生成の予防を目的とした薬剤の開
発も進められている。

【０００３】従来から、色白の美しい肌にするためにハ
イドロキノン，ＮＢＥＨ（モノベンジルエーテル　　オ
ブ　　ハイドロキノン）が使われているが、これらは色
素細胞の変性，致死を引き起こし、皮膚本来の生理機能
を損ない、非可逆的白班、色素異常、かぶれ等の副作用
を引き起こす欠陥がある。

【０００４】そこで、上記したメラニンの生成に関与す
る酵素であるチロシナーゼに着目して、皮膚のメラニン
量を低減する目的でビタミンＣ及びその誘導体が使われ
るようになった。しかし、これらのチロシナーゼ活性阻
害剤は、活性そのものが低く、還元力を利用する薬剤で
あるため安定性が悪い。また安全性そのものに問題を残
すものが多かった。

【０００５】従って本発明の目的は、チロシナーゼ活性
を少量で効果的に阻害し、又メラニン生成量を少量に抑
制するものであって、しかも安全性の高い薬剤を提供す
ることにある。

【０００６】

【課題を解決するための手段】上述の目的に対し、本発
明者等は、チロシナーゼ活性阻害試験とメラニン生成抑
制作用を有するような天然物の探索を行ったところ、ク
ローブ油を水蒸気蒸留し、その残留画分につき、シリカ
ゲルクロマトグラフィーにより溶出した酢酸エチルフラ
クシヨンを、さらにシリカゲルクロマトグラフィーによ
り精製して得られるデハイドロジオイゲノールにその強
い生理活性を見い出し、本発明を完成した。

【０００７】本発明は、構造式

【化２】 で表されるデハイドロジオイゲノールからなるチロシナ
ーゼ活性阻害及びメラニン生成抑制剤である。

【０００８】デハイドロジオイゲノールは公知の化合物
であり（日本化学雑誌，８７巻，９号，ｐ１１０−１１
２，１９６６）、またその安全性の高いことが確認され
ている（特願平０１−２０７５８１号公報）。

【０００９】本発明のチロシナーゼ活性阻害及びメラニ
ン生成抑制剤は、例えば、医薬品・医薬部外品・化粧品
等に適用することが可能である。

【００１０】その適用量は使用する系によって様々で、
一概には言えないが、以下の実施例から明らかな様に、
既存のこの種の物質と同等もしくはかなり低濃度で良い
。

【００１１】次に、デハイドロジオイゲノールによるチ
ロシナーゼ活性阻害作用とメラニン生成抑制作用の効果
を明らかにする実施例を示す。

【００１２】

【実施例】実施例１　　チロシナーゼ活性阻害試験測定
原理は、チロシンにチロシナーゼを作用させて生成する
ドーパクロムを測定するものである。

【００１３】反応組成液はＬ−チロシン（０．３ｍｇ／
ｍｌ）１．０ｍｌ，マックルベン緩衝液（ｐＨ６．８）
１．０ｍｌ，デハイドロジオイゲノール０．９ｍｌの総
量２．９ｍｌを調製し、３７℃，１０分間，インキュベ
ーションを行い、チロシナーゼ（１ｍｇ／ｍｌ，マッシ
ュルーム，シグマ社製）０．１ｍｌを添加し、３７℃，
１５分間インキュベーションを行い、４７５ｎｍの吸光
度を測定した。デハイドロジオイゲノールは水に溶けに
くいため、１％のエタノールに溶かし、最終濃度０．６
，１．５，３．０ｍＭの試料を調製し用いた。またエタ
ノールによる酵素失活も考えられるため、同濃度での検
討も併せて行い、酵素失活のないことを確認した。

【００１４】チロシナーゼ酵素阻害活性の失活は以下の
式によって算出し、表１に示した。

【００１５】

【数１】

【００１６】（Ａ）：試料の代わりに緩衝液を添加した
際の吸光度（Ｂ）：試料を添加した際の吸光度（Ｃ）：
チロシナーゼの代わりに緩衝液を添加した際の吸光度（
Ｄ）：チロシナーゼと試料の代わりに緩衝液を添加した
際の吸光度

【００１７】表１

【００１８】この表１の結果から、デハイドロジオイゲ
ノールは、濃度依存的にチロシナーゼ活性を阻害し、し
かも低濃度で効果のあることが分かった。

【００１９】実施例２　　メラニン抑制作用試験色素細
胞でのメラニン抑制作用試験は、Ｂ１６メラノーマ細胞
（１×１０６　個）を、デハイドロジオイゲノールを添
加した１０％牛胎児血清含有Ｅａｇｅ１最小必須培地５
ｍｌ中５％ＣＯ２　，３７℃条件下で、ファルコンシャ
ーレ（φ６０ｍｍ）内で４日間培養し、反応させた。

【００２０】培養後、細胞を０．０５％トリプシンにて
剥離した。さらに細胞を燐酸緩衝生理食塩水にて３回洗
い、Ｎｅｕｈａｕｅｒの血球計算盤を用いて細胞数（細
胞増加率）を算定した。

【００２１】一方で、細胞をシャーレに接着させた状態
で１０％中性ホルマリンで２０分間固定後、５０ｍＭ燐
酸緩衝液（ｐＨ６．８で３回洗い、５ｍＭ　　Ｌ−ドー
パを含む同緩衝液で３７℃，５時間インキュベート後、
よく洗浄し細胞全体が黒色に染色されている細胞をドー
パ陽性細胞として数えた。

【００２２】試料調製については、１％エタノールで、
細胞に影響がないことを確認し、同濃度のエタノールで
最終濃度０．１，０．０１，０．００１ｍＭになるよう
に試料を調製し、試料無添加のＢ１６メラノーマ細胞増
加に対する抑制率（％）として求めた。

【００２３】また比較例としてアスコルビン酸，ハイド
ロキノンを用いた。その結果を表２に示す。

【００２４】表２　　　　　　　　　　　　抑制率（％
）

【００２５】表２の結果からデハイドロジオイゲノー
ルは、アスコルビン酸に比べ、メラニン抑制作用が高く
、その抑制作用はハイドロキノンに比べても劣らぬ抑制
作用であった。一方、０．１ｍＭでのハイドロキノンは
デハイドロジオイゲノールの細胞増加率に比べると１／
５程度であった。即ち、ハイドロキノンによるメラニン
生成抑制作用は、細胞毒性によるところが大きいことを
示すものであり、安全性に大きな問題がある。これに対
しデハイドロジオイゲノールは細胞毒性という点でも安
全性に優れている。

【００２６】

【発明の効果】以上記載の如く、本発明が低濃度で高い
チロシナーゼ活性阻害作用及びメラニン生成抑制作用を
有し、またその安全性も高いことから、紫外線等による
メラニンの過剰生成によるシミ，そばかす形成を予防す
る化粧品への配合や、色素沈着症の治療，予防剤として
の薬品への利用が可能な、有用なるチロシナーゼ活性抑
制及びメラニン生成抑制剤を提供することは明らかであ
る。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】下記構造式 【化１】 で表されるデハイドロジオイゲノールからなるチロシナ
   ーゼ活性抑制剤