JPH04233465A - 散乱光検知免疫測定 - Google Patents
散乱光検知免疫測定Info
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- JPH04233465A JPH04233465A JP3217336A JP21733691A JPH04233465A JP H04233465 A JPH04233465 A JP H04233465A JP 3217336 A JP3217336 A JP 3217336A JP 21733691 A JP21733691 A JP 21733691A JP H04233465 A JPH04233465 A JP H04233465A
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- G01N33/54366—Apparatus specially adapted for solid-phase testing
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】発明の分野
本発明は、散乱光検知を実施する機器及び免疫測定方法
に関する。
に関する。
【０００２】従来の技術
光学的に透明な材料の表面上で反応により生じる光の変
化を用いて、光学的に透明な基質表面に結合しているリ
ガンドを検出する公知の方式では、臨界角に等しいか又
はそれより大きい角度でその表面の方に光を向ける。こ
の構成の結果、全（内）反射を生じ、エバネッセント波
を発生する。
化を用いて、光学的に透明な基質表面に結合しているリ
ガンドを検出する公知の方式では、臨界角に等しいか又
はそれより大きい角度でその表面の方に光を向ける。こ
の構成の結果、全（内）反射を生じ、エバネッセント波
を発生する。
【０００３】通例、エバネッセンス波は、光学的透過性
固体材料の内部で全内反射の結果として分析され、検体
を含有する水溶液中で確認される。たとえば、米国特許
第 ３，９３９，３５０号（Ｋｒｏｎｉｃｋ ら）では
、リガンドを蛍光標識と結合し、かつ光源が適当な波長
の光を発して蛍光性分子を活性化し、それが光を吸収す
る方式を用いる。その場合、手段からの発光を計測する
。その吸収量が検体中の反応物の量を示す。光は、液体
／固体界面の方に向け、界面で全内反射を生じる角度に
する。代りの方法としては、光透過性材料の透明な壁を
短い距離光エネルギーが通過する結果、活性化された蛍
光分子が光を発することが記載されている。その光が即
ちエバネッセント波であって、蛍光により発生する光を
検知して、それによって界面における蛍光性分子の存在
が示される。
固体材料の内部で全内反射の結果として分析され、検体
を含有する水溶液中で確認される。たとえば、米国特許
第 ３，９３９，３５０号（Ｋｒｏｎｉｃｋ ら）では
、リガンドを蛍光標識と結合し、かつ光源が適当な波長
の光を発して蛍光性分子を活性化し、それが光を吸収す
る方式を用いる。その場合、手段からの発光を計測する
。その吸収量が検体中の反応物の量を示す。光は、液体
／固体界面の方に向け、界面で全内反射を生じる角度に
する。代りの方法としては、光透過性材料の透明な壁を
短い距離光エネルギーが通過する結果、活性化された蛍
光分子が光を発することが記載されている。その光が即
ちエバネッセント波であって、蛍光により発生する光を
検知して、それによって界面における蛍光性分子の存在
が示される。
【０００４】欧州特許出願 ８２ ２０１ １０７０．
８号では、検体中に浸漬した導波管を使用して検体中の
リガンドの量を計測する方法と機器を記載している。そ
の中では光学的透過性材料は検体の容器又は容器の一部
として使用するよりむしろ、検体内に浸漬した導波管と
されている。導波管を通過する光の変動は、導波管の表
面に結合している反応物による多重の全内反射によって
発生する。結合反応物は固体／液体界面における反応物
層とエバネッセント波が相互作用する結果として導波管
から出て行く光量を変化させる。
８号では、検体中に浸漬した導波管を使用して検体中の
リガンドの量を計測する方法と機器を記載している。そ
の中では光学的透過性材料は検体の容器又は容器の一部
として使用するよりむしろ、検体内に浸漬した導波管と
されている。導波管を通過する光の変動は、導波管の表
面に結合している反応物による多重の全内反射によって
発生する。結合反応物は固体／液体界面における反応物
層とエバネッセント波が相互作用する結果として導波管
から出て行く光量を変化させる。
【０００５】欧州特許出願 ８５ ３０４１７２．１号
では、全内反射により液体／固体界面の液体を通って導
波管に入る光を使用する光学的分析方法を教示している
。導波管を出て行く光を計測する。
では、全内反射により液体／固体界面の液体を通って導
波管に入る光を使用する光学的分析方法を教示している
。導波管を出て行く光を計測する。
【０００６】欧州特許出願 ８５ ３０４４９６．４号
では、水溶液と固体基質の界面で散乱される光の方向を
定めることによって溶液中のリガンドを検出する方法を
記載している。液体を介して固体表面の方に光を向ける
。その表面上には免疫反応性リガンドを格子様に配して
おく。好ましくは光散乱粒子を用いて標識化した、溶液
中の反応物は、格子上の反応物に結合する時、ある角度
で光に反射を起こさせる。それを光検知器により計測す
る。
では、水溶液と固体基質の界面で散乱される光の方向を
定めることによって溶液中のリガンドを検出する方法を
記載している。液体を介して固体表面の方に光を向ける
。その表面上には免疫反応性リガンドを格子様に配して
おく。好ましくは光散乱粒子を用いて標識化した、溶液
中の反応物は、格子上の反応物に結合する時、ある角度
で光に反射を起こさせる。それを光検知器により計測す
る。
【０００７】欧州特許出願 ８７ ３０５６６９．１号
（１９８８年１月２７日公開）では、不均一形態の、溶
液中リガンド又はリガンド結合性パートナーを検出する
免疫測定方式を記載しており、それはキュベットと水性
試料の界面におけるコロイド状金標識の存在により攪乱
されたエバネッセント波から散乱されて戻る光を検知す
る方式である。コロイド状金標識は、試料キュベットの
表面に局在する抗原と反応する抗体に結合する。界面に
存在するエバネッセント波は、容器、たとえば試料キュ
ベットを選択して、水性試料の屈折率よりも大きい屈折
率とし、かつ光源とキュベットを整列させて、光投射を
臨界角に等しいか又はそれより大きい角度で容器と水溶
液の界面の方に向けるようにして、全内反射を得た結果
生じたものである。 界面における散乱光は、光源に向かって散乱されて戻る
光のみを検知するように置かれた光検知手段により検知
する。臨界角より大きいか又はそれに等しい角度で界面
の方に向かう光投射を生ずる光源の場所は、全内反射が
得られるように選択する。即ち、検体中の光の透過がな
い。それにより検知する光が散乱されて戻る現象は検体
中のエバネッセント波に依存する。入射光波が全内反射
される場合、検体キュベット界面にエバネッセント波を
発生する。
（１９８８年１月２７日公開）では、不均一形態の、溶
液中リガンド又はリガンド結合性パートナーを検出する
免疫測定方式を記載しており、それはキュベットと水性
試料の界面におけるコロイド状金標識の存在により攪乱
されたエバネッセント波から散乱されて戻る光を検知す
る方式である。コロイド状金標識は、試料キュベットの
表面に局在する抗原と反応する抗体に結合する。界面に
存在するエバネッセント波は、容器、たとえば試料キュ
ベットを選択して、水性試料の屈折率よりも大きい屈折
率とし、かつ光源とキュベットを整列させて、光投射を
臨界角に等しいか又はそれより大きい角度で容器と水溶
液の界面の方に向けるようにして、全内反射を得た結果
生じたものである。 界面における散乱光は、光源に向かって散乱されて戻る
光のみを検知するように置かれた光検知手段により検知
する。臨界角より大きいか又はそれに等しい角度で界面
の方に向かう光投射を生ずる光源の場所は、全内反射が
得られるように選択する。即ち、検体中の光の透過がな
い。それにより検知する光が散乱されて戻る現象は検体
中のエバネッセント波に依存する。入射光波が全内反射
される場合、検体キュベット界面にエバネッセント波を
発生する。
【０００８】本発明の目的は、試料に光エネルギーをよ
り多く導入する新規免疫測定方法、及び高水準の感度を
示す機器を提供することである。本発明の免疫測定方法
と機器により感度が低いという問題を回避し、次の利点
を提供する。つまり、受容手段に多くの光を透過させ得
ることにより、発生する光信号が強くなり、水溶液中の
リガンド及びリガンド結合性パートナーを検出する感度
が改良される。
り多く導入する新規免疫測定方法、及び高水準の感度を
示す機器を提供することである。本発明の免疫測定方法
と機器により感度が低いという問題を回避し、次の利点
を提供する。つまり、受容手段に多くの光を透過させ得
ることにより、発生する光信号が強くなり、水溶液中の
リガンド及びリガンド結合性パートナーを検出する感度
が改良される。
【０００９】発明の要約
散乱光検知免疫測定を行う方法と機器とが提供される。
【００１０】その機器は、検体水溶液を受け入れる光学
的透過性手段、光投射手段、光投射指向手段、整列手段
、及び光検知手段から成る。光投射は、臨界角より小さ
い角度、即ち、臨界角の包絡線の内側の角度で、水溶液
受容光学的透過性手段と水溶液との界面の方に向かう。 散乱光を計測する光検知手段は、臨界角の包絡線の外側
に配置される。臨界角の外側に散乱する光、即ち前方散
乱光を受けるように、当該線の外側に配置することが好
ましい。後方散乱光を受けるように、臨界角の手前且つ
光源の前面に置くこともあり得る。
的透過性手段、光投射手段、光投射指向手段、整列手段
、及び光検知手段から成る。光投射は、臨界角より小さ
い角度、即ち、臨界角の包絡線の内側の角度で、水溶液
受容光学的透過性手段と水溶液との界面の方に向かう。 散乱光を計測する光検知手段は、臨界角の包絡線の外側
に配置される。臨界角の外側に散乱する光、即ち前方散
乱光を受けるように、当該線の外側に配置することが好
ましい。後方散乱光を受けるように、臨界角の手前且つ
光源の前面に置くこともあり得る。
【００１１】散乱光の計測により水溶液中のリガンドの
存在と量を決定する方法を提供する。その方法は、問題
となっているリガンドを含有すると思われる水溶性検体
を光散乱粒状標識と結合して検体水溶液を形成すること
を含む。第２の液体結合性パートナーを、水溶液の屈折
率より大きい屈折率を有する光学的透過性材料でできて
いる、試料受容手段の内部表面の少くとも１つと結合さ
せる。標識化した第１の液体結合性パートナーと検体を
混合する以前又は以後のどちらかに、上記水溶液を試料
受容手段に導入して、水溶液と光学的透過性材料の間に
界面を形成させ、臨界角より小さい角度で界面を光投射
する。
存在と量を決定する方法を提供する。その方法は、問題
となっているリガンドを含有すると思われる水溶性検体
を光散乱粒状標識と結合して検体水溶液を形成すること
を含む。第２の液体結合性パートナーを、水溶液の屈折
率より大きい屈折率を有する光学的透過性材料でできて
いる、試料受容手段の内部表面の少くとも１つと結合さ
せる。標識化した第１の液体結合性パートナーと検体を
混合する以前又は以後のどちらかに、上記水溶液を試料
受容手段に導入して、水溶液と光学的透過性材料の間に
界面を形成させ、臨界角より小さい角度で界面を光投射
する。
【００１２】図面の説明
図１は本発明の提供する機器を示す。光投射指向用手段
２が臨界角より小さく角度で試料受容手段４と水溶液の
間の界面３の方に光を向けるように光投射用手段１は、
整列される。光検知手段５は、臨界角を越えて、又は光
投射用手段の前方でのいずれかで、臨界角の包絡線の外
側に位置を定める。
２が臨界角より小さく角度で試料受容手段４と水溶液の
間の界面３の方に光を向けるように光投射用手段１は、
整列される。光検知手段５は、臨界角を越えて、又は光
投射用手段の前方でのいずれかで、臨界角の包絡線の外
側に位置を定める。
【００１３】図２は反応物による散乱光を呈する陽性反
応を示す。
応を示す。
【００１４】図３は光散乱粒子を有する反応物が存在し
ない結果、散乱光を生じない陰性反応を示す。
ない結果、散乱光を生じない陰性反応を示す。
【００１５】詳細な説明
光散乱粒子を用いて標識化したリガンド結合性パートナ
ー及び水溶液を受容する手段の表面に結合するリガンド
結合性パートナーを使用し、水溶液中でリガンド又はリ
ガンド結合性パートナーを検出する免疫測定に使用する
ため機器を提供する。その機器は下記から成る。
ー及び水溶液を受容する手段の表面に結合するリガンド
結合性パートナーを使用し、水溶液中でリガンド又はリ
ガンド結合性パートナーを検出する免疫測定に使用する
ため機器を提供する。その機器は下記から成る。
【００１６】（ａ） 少くとも一部は光学的透過性材料
（その光学的透過材料は水溶液の屈折率より大きい屈折
率を有する）で構成され、水溶液を受け入れるための受
容手段。
（その光学的透過材料は水溶液の屈折率より大きい屈折
率を有する）で構成され、水溶液を受け入れるための受
容手段。
【００１７】（ｂ） 前記の光学的透過性受容手段と水
溶液の間の界面を光投射する光投射手段。
溶液の間の界面を光投射する光投射手段。
【００１８】（ｃ） 光投射を臨界角より小さい角度で
界面の方に向けるように、光投射手段に対する位置関係
を固定して、前記光学的透過性受容手段の位置を定める
整列手段、及び （ｄ） 光散乱粒子による散乱光を受光する光検知手段
。
界面の方に向けるように、光投射手段に対する位置関係
を固定して、前記光学的透過性受容手段の位置を定める
整列手段、及び （ｄ） 光散乱粒子による散乱光を受光する光検知手段
。
【００１９】この機器は、前記光投射を前記界面の方に
向ける手段を追加して含むことがあり得る。
向ける手段を追加して含むことがあり得る。
【００２０】受容手段の例には、試料容器、毛管配管、
キュベット及び顕微鏡スライドが挙げられる。
キュベット及び顕微鏡スライドが挙げられる。
【００２１】光投射を実施する手段の例には、任意の単
色光又は多色光の光源及びレーザーが挙げられる。光投
射を実施する手段は、光投射が臨界角より小さい角度で
受容手段と水溶液の間の界面の方に向けられるように整
列される。光投射指向用手段はレーザーの場合のように
本来光投射手段の一部であるもの、又はレンズ、プリズ
ム若しくは反射鏡のような個別のユニットでもあり得る
。
色光又は多色光の光源及びレーザーが挙げられる。光投
射を実施する手段は、光投射が臨界角より小さい角度で
受容手段と水溶液の間の界面の方に向けられるように整
列される。光投射指向用手段はレーザーの場合のように
本来光投射手段の一部であるもの、又はレンズ、プリズ
ム若しくは反射鏡のような個別のユニットでもあり得る
。
【００２２】臨界角は、水溶性試料と受容手段により形
成される界面の方に向かう光が受容手段の内部で全（内
）反射を生じる角度として定義される。臨界角より小さ
い角度で光源を使用することにより、界面を光が通過し
、透過光が光散乱粒子によって散乱されることになる。 対照的に、先行技術の方法は全内反射に依存した方法で
あって、それ故散乱される光はエバネッセント光である
。透過される光エネルギーの量は、エバネッセント波で
得られるエネルギー量より大きく、従って透過光を使用
する本発明は、以前の方法より感度に優れる。好ましく
は、臨界角包絡線を越える位置に置いた光検知器を使用
して前方散乱光を検知する。臨界角を越えてからの検知
では多量の媒質により散乱される光が検知器に達するの
が妨げられ、界面の光散乱粒子、たとえば金ゾル粒子か
ら散乱される光のみが観測される。場合により、光検知
器を臨界角の前方且つ光源の前方の位置に置き、逆散乱
光を計測してもよい。リガンド及びリガンド結合性パー
トナーを介して界面に結合する光散乱粒子から生じる散
乱光の（計測される）増加は、検体中のリガンドの増を
示す。
成される界面の方に向かう光が受容手段の内部で全（内
）反射を生じる角度として定義される。臨界角より小さ
い角度で光源を使用することにより、界面を光が通過し
、透過光が光散乱粒子によって散乱されることになる。 対照的に、先行技術の方法は全内反射に依存した方法で
あって、それ故散乱される光はエバネッセント光である
。透過される光エネルギーの量は、エバネッセント波で
得られるエネルギー量より大きく、従って透過光を使用
する本発明は、以前の方法より感度に優れる。好ましく
は、臨界角包絡線を越える位置に置いた光検知器を使用
して前方散乱光を検知する。臨界角を越えてからの検知
では多量の媒質により散乱される光が検知器に達するの
が妨げられ、界面の光散乱粒子、たとえば金ゾル粒子か
ら散乱される光のみが観測される。場合により、光検知
器を臨界角の前方且つ光源の前方の位置に置き、逆散乱
光を計測してもよい。リガンド及びリガンド結合性パー
トナーを介して界面に結合する光散乱粒子から生じる散
乱光の（計測される）増加は、検体中のリガンドの増を
示す。
【００２３】提供される免疫測定方法により水溶液中の
リガンドの存在が定性的又は定量的に検出される。その
方法は下記ステップから成る。
リガンドの存在が定性的又は定量的に検出される。その
方法は下記ステップから成る。
【００２４】（ａ） 水溶液中のリガンドに対し特異的
な第１のリガンド結合性パートナーを用意して、その第
１のリガンド結合性パートナーを水溶液中で光散乱特性
を有する粒子を用いて直接又は間接に標識化するステッ
プ。
な第１のリガンド結合性パートナーを用意して、その第
１のリガンド結合性パートナーを水溶液中で光散乱特性
を有する粒子を用いて直接又は間接に標識化するステッ
プ。
【００２５】（ｂ） 第１のリガンド結合性パートナー
と、検体水溶液と、少くとも１部分は光学的透過性材料
から出来ている試料受容手段の内面に結合している第２
の結合パーナーとを組合わせて、光学的透過性材料と試
料の間に界面を形成し、好ましくは、リガンドに結合で
きる第１及び第２のリガンド結合性パートナーを多数使
用し、光学的透過性材料が水溶液の屈折率より大きい屈
折率を有するようにするステップ。
と、検体水溶液と、少くとも１部分は光学的透過性材料
から出来ている試料受容手段の内面に結合している第２
の結合パーナーとを組合わせて、光学的透過性材料と試
料の間に界面を形成し、好ましくは、リガンドに結合で
きる第１及び第２のリガンド結合性パートナーを多数使
用し、光学的透過性材料が水溶液の屈折率より大きい屈
折率を有するようにするステップ。
【００２６】（ｃ） 臨界角より小さい角度で光学的透
過性材料を介して界面を光投射するステップ、及び（ｄ
） 散乱光の量が水溶液中に存在するリガンドの量の関
数である、界面から散乱される光量を計測するステップ
。検知器を臨界角の包絡線を越える（外側）位置に置く
ことによって、計測される散乱光を臨界角より大きい角
度で界面から散乱される光とし得る。
過性材料を介して界面を光投射するステップ、及び（ｄ
） 散乱光の量が水溶液中に存在するリガンドの量の関
数である、界面から散乱される光量を計測するステップ
。検知器を臨界角の包絡線を越える（外側）位置に置く
ことによって、計測される散乱光を臨界角より大きい角
度で界面から散乱される光とし得る。
【００２７】この方法では、第２の結合性パートナーを
含有する試薬を前もって受容手段にコートし、これに試
料溶液を導入するのが好ましい。光散乱粒子に結合して
いる第１のリガンド結合性パートナーは、過剰の試料溶
液の除去の後、好ましくは更なる洗浄の後に導入する。 好ましい実施態様として、光学的透過性受容手段はキュ
ベットである。光学的透過性材料の表面で反応が進行す
るとき、散乱光信号をモニターし、その配列の結果を変
化の瞬間速度の計算又は標準又は基準に対し計測した水
準の比較により決定する。信号変化の速度又は信号が予
定値に達する時間を存在リガンドの量の尺度とする。
含有する試薬を前もって受容手段にコートし、これに試
料溶液を導入するのが好ましい。光散乱粒子に結合して
いる第１のリガンド結合性パートナーは、過剰の試料溶
液の除去の後、好ましくは更なる洗浄の後に導入する。 好ましい実施態様として、光学的透過性受容手段はキュ
ベットである。光学的透過性材料の表面で反応が進行す
るとき、散乱光信号をモニターし、その配列の結果を変
化の瞬間速度の計算又は標準又は基準に対し計測した水
準の比較により決定する。信号変化の速度又は信号が予
定値に達する時間を存在リガンドの量の尺度とする。
【００２８】実施例１
光学的液浸油を用いてガラスプリズムに充分に連結させ
たマイクロタイターウェル形態のポリスチレンキュベッ
トを含む、免疫測定を行うための本発明機器を作製した
。ヘリウムネオンレーザーを使用してキュベットの底の
表面部を臨界角より小さい角度で光投射した。臨界角は
計算により５７．０７４°であった。プリズム、水溶液
、ポリスチレンキュベット及び光学的液浸油の有する屈
折率はそれぞれ１．６４，１．３３，１．５９及び１．
５１であった。マイクロタイターウェルは抗ＨＢｓＡｇ
免疫単クローン性抗体を用いてコートした。下記試料を
使用した。
たマイクロタイターウェル形態のポリスチレンキュベッ
トを含む、免疫測定を行うための本発明機器を作製した
。ヘリウムネオンレーザーを使用してキュベットの底の
表面部を臨界角より小さい角度で光投射した。臨界角は
計算により５７．０７４°であった。プリズム、水溶液
、ポリスチレンキュベット及び光学的液浸油の有する屈
折率はそれぞれ１．６４，１．３３，１．５９及び１．
５１であった。マイクロタイターウェルは抗ＨＢｓＡｇ
免疫単クローン性抗体を用いてコートした。下記試料を
使用した。
【００２９】陰性−正常ヒト血清プール（ＨＢｓＡｇに
対し陰性） 陽性−ＮＭＬ Ｅｌｉｓａ 陽性対照（約 ２８０
／ｎｇ／ｍｌ ＨＢｓＡｇ含有） 定量的実験を行った。図２に示す写真記録は反応物によ
る散乱光の存在を証明している。図３は散乱光の量に明
白な差異を示す反応がないことを説明する写真であって
、カメラにより検知される。矢印で示した範囲はマイク
ロタイター板ウェルの底であり、そこに捕捉された抗体
が結合した。図２は散乱光を示した陽性の例を説明して
いる。図３は散乱光を示さない陰性の例である。代りの
実施態様でかつ本発明を実施する好ましい実施態様では
、カメラを適宜の電子式光検知器と取換る。
対し陰性） 陽性−ＮＭＬ Ｅｌｉｓａ 陽性対照（約 ２８０
／ｎｇ／ｍｌ ＨＢｓＡｇ含有） 定量的実験を行った。図２に示す写真記録は反応物によ
る散乱光の存在を証明している。図３は散乱光の量に明
白な差異を示す反応がないことを説明する写真であって
、カメラにより検知される。矢印で示した範囲はマイク
ロタイター板ウェルの底であり、そこに捕捉された抗体
が結合した。図２は散乱光を示した陽性の例を説明して
いる。図３は散乱光を示さない陰性の例である。代りの
実施態様でかつ本発明を実施する好ましい実施態様では
、カメラを適宜の電子式光検知器と取換る。
【００３０】本発明をその具体的実施態様と関連して説
明したが、更に進んで変更態様をなし得ることは理解さ
れよう。本出願は本発明の変更、使用又は応用を網羅す
ることを意図するものである。それは一般に本発明の原
理に従い、かつ本発明が関係する技術分野で公知又は慣
用の手法を含み、かつ請求項の範囲に記載された本質的
特徴に当てはまり得るような技術を含む。
明したが、更に進んで変更態様をなし得ることは理解さ
れよう。本出願は本発明の変更、使用又は応用を網羅す
ることを意図するものである。それは一般に本発明の原
理に従い、かつ本発明が関係する技術分野で公知又は慣
用の手法を含み、かつ請求項の範囲に記載された本質的
特徴に当てはまり得るような技術を含む。
【図１】本発明の提供する免疫測定機器を示す。
【図２】反応物の散乱光による陰性反応の説明図である
。
。
【図３】散乱光を生じない陰性反応の説明図である。
１ 光投射手段
２ 光投射指向手段
３ 受容手段と水溶液の間の界面
４ 試料受容手段
５ 光検知器
Claims (12)
- 【請求項１】 （ａ） 光学的透過性材料から成る少
くとも１つの部分を含み、その材料が水溶液の屈折率よ
り大きい屈折率を有する、水溶液を受け入れて保持する
受容手段、 （ｂ） 受容手段の前記光学的透過性材料部分と前記受
容手段の水溶液との間に形成される界面に光を照射する
光投射手段、及び （ｃ） 光の方向が臨界角より小さい角度で界面に入射
するようにされている、前記光散乱粒子による散乱光を
受ける光検知手段、 から成り、水溶液中で光散乱粒子を用いて標識化された
リガンド、又は光散乱粒子を用いて標識化されたリガン
ド結合性パートナーを検出する、免疫分析用の機器。 - 【請求項２】 前記の光検知手段が、前方散乱光を検
知する位置に置かれる請求項１に記載の機器。 - 【請求項３】 前記の光学的透過性受容手段が試料容
器である、請求項１に記載の機器。 - 【請求項４】 前記の光学的透過性受容手段が、キュ
ベットである、請求項１に記載の機器。 - 【請求項５】 前記の光投射手段がレーザーである請
求項１に記載の機器。 - 【請求項６】 前記の光学的透過性受容手段と前記の
水溶液の間の界面に光指向手段により投射光の方向を向
ける、光指向手段を追加して含む、請求項１に記載の機
器。 - 【請求項７】 前記の光指向手段が、プリズムである
、請求項６に記載の機器。 - 【請求項８】 前記の光学的透過性材料がスライドの
１つの表面に上記水溶液を載せるスライドであり、かつ
前記光がもう１つの面から前記スライドを介して投射さ
れる、請求項１に記載の機器。 - 【請求項９】 （ａ） リガンドに対し結合親和性を
有する第１のリガンド結合性パートナー及び第２のリガ
ンド結合性パートナーを用意し、前記の第１のリガンド
結合性パートナーと前記の第２のリガンドの少くとも１
つが、前記リガンドに対し特異的な結合親和性を有し、
前記第１のリガンド結合性パートナーは前記水溶液中で
光散乱特性を有する粒子を用いて標識化され、かつ前記
第２のリガンド結合性パートナーは水溶液受容手段の少
くとも１つの表面に結合しているようにするステップ、
（ｂ） 前記の第１のリガンド結合性パートナーと、前
記の水溶液と、第２の結合性パートナーを結合させてい
る水溶液受容手段の表面であって前記水溶液の屈折率よ
り大きい屈折率を有する光学的透過性材料から成る表面
とを一緒にし、それにより該受容手段の表面に結合して
いる第２の結合性パートナーがリガンドと結合し、かつ
第１の結合性パートナーがリガンドと結合して光散乱層
を形成するステップ、 （ｃ） 受容手段と水溶液を、前記光学的透過性材料を
介してそれらの界面において臨界角より小さい角度で光
投射するステップ、及び （ｄ） 散乱光の量が前記水溶液中に存在するリガンド
の量の関数である、光散乱層により前記界面から散乱さ
れる光量を計測するステップ、 から成る、水溶液中のリガンドの存在を測る方法。 - 【請求項１０】 計測される散乱光の前記の量が臨界
角より大きい角度で前記界面から散乱される光である、
請求項９に記載の方法。 - 【請求項１１】 前記の標識化した第１のリガンド結
合性パートナーが金ゾル標識単クローン性抗体である、
請求項９に記載の方法。 - 【請求項１２】 前記の光検知手段が後方散乱を検知
する位置に置かれる、請求項１に記載の機器。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US574184 | 1984-01-26 | ||
| US07/574,184 US5350697A (en) | 1990-08-28 | 1990-08-28 | Scattered light detection apparatus |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04233465A true JPH04233465A (ja) | 1992-08-21 |
Family
ID=24295028
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3217336A Pending JPH04233465A (ja) | 1990-08-28 | 1991-08-28 | 散乱光検知免疫測定 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5350697A (ja) |
| EP (1) | EP0479345A3 (ja) |
| JP (1) | JPH04233465A (ja) |
Cited By (1)
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1991
- 1991-08-07 EP EP19910202027 patent/EP0479345A3/en not_active Withdrawn
- 1991-08-28 JP JP3217336A patent/JPH04233465A/ja active Pending
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|---|---|
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| EP0479345A2 (en) | 1992-04-08 |
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