JPH04234399A - 抗真菌活性ペプチド - Google Patents
抗真菌活性ペプチドInfo
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- JPH04234399A JPH04234399A JP2409213A JP40921390A JPH04234399A JP H04234399 A JPH04234399 A JP H04234399A JP 2409213 A JP2409213 A JP 2409213A JP 40921390 A JP40921390 A JP 40921390A JP H04234399 A JPH04234399 A JP H04234399A
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- lys
- cys
- tyr
- peptide
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- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Food Preservation Except Freezing, Refrigeration, And Drying (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、人体内や食品中の真
菌に対し有効に働き、しかも人体に対し毒性がない抗真
菌活性ペプチドに関するものである。
菌に対し有効に働き、しかも人体に対し毒性がない抗真
菌活性ペプチドに関するものである。
【０００２】
【従来の技術】近年、抗生物質や抗癌剤の開発は大きな
進歩をとげ、その医薬品の投与により病原菌を死滅させ
、病巣を破壊し、病気の治癒に貢献している。
進歩をとげ、その医薬品の投与により病原菌を死滅させ
、病巣を破壊し、病気の治癒に貢献している。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、これら
抗生物質や抗癌剤は、病原菌や病巣に作用するだけでな
く細菌や他の部位に作用するため、体内の細菌増殖が抑
えられ、患者の体力が減弱してしまう結果、共生してい
る体内の真菌が増殖し、真菌感染症の発生の増加を惹起
するとともに重症化傾向がみられる。
抗生物質や抗癌剤は、病原菌や病巣に作用するだけでな
く細菌や他の部位に作用するため、体内の細菌増殖が抑
えられ、患者の体力が減弱してしまう結果、共生してい
る体内の真菌が増殖し、真菌感染症の発生の増加を惹起
するとともに重症化傾向がみられる。
【０００４】そこで、この様な場合に真菌の増殖を抑え
る抗菌剤の開発をこの発明は目的としている。
る抗菌剤の開発をこの発明は目的としている。
【０００５】
【課題を解決するための手段】この目的を達成するため
、この発明は真菌のカビの一種であるＡｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ（アスペリギルス ジャ
イガンテス）の培地より精製し、その構造を決定し、１
番目のＡｌａから順にＴｈｒ，Ｔｙｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ
，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，
Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａ
ｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌ
ａ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ
，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，
Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａ
ｓｐ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙ
ｓ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓまで５１個のアミノ酸がペプチド結
合をして並び、７番目と３３番目、１４番目と４０番目
、２６番目と２８番目、および４９番目と５１番目のＣ
ｙｓ間にジスルフィド結合が形成されている構造を有し
ていることを特徴とする抗真菌活性ペプチドとしている
。
、この発明は真菌のカビの一種であるＡｓｐｅｒｇｉｌ
ｌｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ（アスペリギルス ジャ
イガンテス）の培地より精製し、その構造を決定し、１
番目のＡｌａから順にＴｈｒ，Ｔｙｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ
，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，
Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａ
ｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌ
ａ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ
，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，
Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａ
ｓｐ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙ
ｓ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓまで５１個のアミノ酸がペプチド結
合をして並び、７番目と３３番目、１４番目と４０番目
、２６番目と２８番目、および４９番目と５１番目のＣ
ｙｓ間にジスルフィド結合が形成されている構造を有し
ていることを特徴とする抗真菌活性ペプチドとしている
。
【０００６】
【作用】この抗真菌活性ペプチドは、適当に希釈されて
、人体に投与されることにより、抗生物質や抗癌剤でバ
ランスが崩れ増殖することになるであろう真菌の増殖を
未然に防ぐ、また食品に添加して真菌の増殖を抑え、食
品の日持ちを良くする。
、人体に投与されることにより、抗生物質や抗癌剤でバ
ランスが崩れ増殖することになるであろう真菌の増殖を
未然に防ぐ、また食品に添加して真菌の増殖を抑え、食
品の日持ちを良くする。
【０００７】
【実施例】この発明にかかる抗真菌活性ペプチドは、表
１に示すように３個のアスパラギン酸（Ａｓｐ）、２個
のアスパラギン（Ａｓｎ）、２個のセリン（Ｓｅｒ）、
２個のスレオニン（Ｔｈｒ）、１個のグルタミン酸（Ｇ
ｌｕ）、１個のグルタミン（Ｇｌｎ）、１個のプロリイ
ン（Ｐｒｏ）、４個のグリシン（Ｇｌｙ）４個のアラニ
ン（Ａｌａ）、８個のシステイン（Ｃｙｓ）、１個のバ
リン（Ｖａｌ）、２個のイソロイシン（Ｉｌｅ）、６個
のチロシン（Ｔｙｒ）、１個のフェニルアラニン（Ｐｈ
ｅ）、１２個のリジン（Ｌｙｓ）、１個のアルギニン（
Ａｒｇ）の計５１個のアミノ酸から構成され、図１に示
すような構造を呈している。
１に示すように３個のアスパラギン酸（Ａｓｐ）、２個
のアスパラギン（Ａｓｎ）、２個のセリン（Ｓｅｒ）、
２個のスレオニン（Ｔｈｒ）、１個のグルタミン酸（Ｇ
ｌｕ）、１個のグルタミン（Ｇｌｎ）、１個のプロリイ
ン（Ｐｒｏ）、４個のグリシン（Ｇｌｙ）４個のアラニ
ン（Ａｌａ）、８個のシステイン（Ｃｙｓ）、１個のバ
リン（Ｖａｌ）、２個のイソロイシン（Ｉｌｅ）、６個
のチロシン（Ｔｙｒ）、１個のフェニルアラニン（Ｐｈ
ｅ）、１２個のリジン（Ｌｙｓ）、１個のアルギニン（
Ａｒｇ）の計５１個のアミノ酸から構成され、図１に示
すような構造を呈している。
【０００８】
【表１】
【０００９】これらアミノ酸は、以後それぞれ（ ）
内の３文字のアルファベットの略号で示す。
内の３文字のアルファベットの略号で示す。
【００１０】５１個のアミノ酸配列構造を説明するため
、図１に示すような順位番号を付す。
、図１に示すような順位番号を付す。
【００１１】すなわち、抗真菌活性ペプチドは、１番目
のＡｌａから順にＴｈｒ，Ｔｙｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｌ
ｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓ
ｎ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ
，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，
Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，Ｌ
ｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｇｌ
ｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ
，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，
Ｔｙｒ，Ｃｙｓまで５１個のアミノ酸がペプチド結合を
して並び、７番目と３３番目、１４番目と４０番目、２
６番目と２８番目、および４９番目と５１番目のＣｙｓ
間にジスルフィド結合が形成されている構造を呈してい
る。
のＡｌａから順にＴｈｒ，Ｔｙｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｌ
ｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓ
ｎ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ
，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，
Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，Ｌ
ｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｇｌ
ｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ
，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，
Ｔｙｒ，Ｃｙｓまで５１個のアミノ酸がペプチド結合を
して並び、７番目と３３番目、１４番目と４０番目、２
６番目と２８番目、および４９番目と５１番目のＣｙｓ
間にジスルフィド結合が形成されている構造を呈してい
る。
【００１２】ジスルフィド結合はペプチド結合をして並
んでいるＣｙｓのうち、所定のＣｙｓ間（システィン残
基間）でシスチンを形成している。
んでいるＣｙｓのうち、所定のＣｙｓ間（システィン残
基間）でシスチンを形成している。
【００１３】この抗真菌活性ペプチドの配列構造は、次
のようにして決定される。
のようにして決定される。
【００１４】まず、真菌のカビの一種であるＡｓｐｅｒ
ｇｉｌｌｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ の培地を陽イオン
交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＣ５０に吸着させ、
０．２Ｍ ＮａＣｌで洗う。ついで１．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌで溶出させ粗画分とする。
ｇｉｌｌｕｓ ｇｉｇａｎｔｅｕｓ の培地を陽イオン
交換樹脂Ａｍｂｅｒｌｉｔｅ ＩＲＣ５０に吸着させ、
０．２Ｍ ＮａＣｌで洗う。ついで１．５Ｍ Ｎａ
Ｃｌで溶出させ粗画分とする。
【００１５】粗画分をＡｍｂｅｒｌｉｔｅ×Ｅ６４樹脂
を充填したカラムにかけ、０．４Ｍ〜０．９Ｍの範囲の
ＮａＣｌ（ｐＨ６）のグラディエント をかけて溶出さ
せる。
を充填したカラムにかけ、０．４Ｍ〜０．９Ｍの範囲の
ＮａＣｌ（ｐＨ６）のグラディエント をかけて溶出さ
せる。
【００１６】イオン交換クロマトグラフィーにかけた後
、商品名ＯＤＳ−１２０Ｔカラム（０．４６×２５）を
用い５〜７０％の濃度勾配をかけたアセトニトリル（０
．１％トリフルオロ酢酸を含む）で溶出させた。
、商品名ＯＤＳ−１２０Ｔカラム（０．４６×２５）を
用い５〜７０％の濃度勾配をかけたアセトニトリル（０
．１％トリフルオロ酢酸を含む）で溶出させた。
【００１７】その結果は図２に示す通りであり、溶出開
始後約１３分で約１９％のアセトニトリル濃度の位置に
ピークが現れ、この濃度で抗真菌活性ペプチドの最終精
製品が得られた。
始後約１３分で約１９％のアセトニトリル濃度の位置に
ピークが現れ、この濃度で抗真菌活性ペプチドの最終精
製品が得られた。
【００１８】なお、図２の左軸は２１０ナノメータ（ｎ
ｍ）における吸光度を表わす。
ｍ）における吸光度を表わす。
【００１９】最終精製された抗真菌活性ペプチドのアミ
ノ酸分析は、このペプチドを６Ｎ塩酸中で１１０°Ｃで
２２時間加熱してアミノ酸に分解後、アト−社アミノ酸
分析機（モデルＭＬＣ２０３）で行なった。
ノ酸分析は、このペプチドを６Ｎ塩酸中で１１０°Ｃで
２２時間加熱してアミノ酸に分解後、アト−社アミノ酸
分析機（モデルＭＬＣ２０３）で行なった。
【００２０】アミノ酸配列の構造決定のために、このペ
プチドを６Ｍグアニジン存在下でジチオスライトールで
還元後、ヨードアセトアミドで処理し、Ｓ−カルボキシ
アミドメチル化をした。このペプチドのアミノ酸配列を
アプライド バイオシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ社）プロティンシークエンサー（モデ
ル４７０Ａ）を用いて決定した。
プチドを６Ｍグアニジン存在下でジチオスライトールで
還元後、ヨードアセトアミドで処理し、Ｓ−カルボキシ
アミドメチル化をした。このペプチドのアミノ酸配列を
アプライド バイオシステム（Ａｐｐｌｉｅｄ Ｂｉ
ｏｓｙｓｔｅｍｓ社）プロティンシークエンサー（モデ
ル４７０Ａ）を用いて決定した。
【００２１】ジスルフィド結合の位置は、抗真菌活性ペ
プチドを４Ｍ尿素中でリジルエンドペプチダーゼ処理を
行い、各ペプチドのアミノ酸配列を気相プロティンシー
クエンサーで分析して決定した。
プチドを４Ｍ尿素中でリジルエンドペプチダーゼ処理を
行い、各ペプチドのアミノ酸配列を気相プロティンシー
クエンサーで分析して決定した。
【００２２】抗真菌活性ペプチドのアミノ酸組成は、表
１に示すように５１個のアミノ酸からなり、塩基性アミ
ノ酸であるＬｙｓや含硫アミノ酸であるＣｙｓが多いの
が特徴である。
１に示すように５１個のアミノ酸からなり、塩基性アミ
ノ酸であるＬｙｓや含硫アミノ酸であるＣｙｓが多いの
が特徴である。
【００２３】抗真菌活性ペプチドを０．１Ｍジチオスラ
ィトールで還元後、ヨードアセトアミドで処理し、Ｓ−
カルボキシアミドメチル化し、気相プロティンシークエ
ンサーで鎖の位置を順次Ｎ末端側からアミノ酸配列を分
析した。
ィトールで還元後、ヨードアセトアミドで処理し、Ｓ−
カルボキシアミドメチル化し、気相プロティンシークエ
ンサーで鎖の位置を順次Ｎ末端側からアミノ酸配列を分
析した。
【００２４】Ｓ−カルボキシアミドメチル化した抗真菌
活性ペプチドのアミノ酸配列分析結果は表２に示されて
おり、Ｎ末端からＣ末端に向かって、１番目のＡｌａか
ら４７番目のＧｌｙまでアミノ酸配列が決定された。
活性ペプチドのアミノ酸配列分析結果は表２に示されて
おり、Ｎ末端からＣ末端に向かって、１番目のＡｌａか
ら４７番目のＧｌｙまでアミノ酸配列が決定された。
【００２５】
【表２】
【００２６】Ｓ−カルボキシアミドメチル化した抗真菌
活性ペプチドをキモトリプシンで消化し、処理後、ＯＤ
Ｓ−１２０Ｔカラムで分析すると図３に示すように４つ
のペプチドのピーク（Ｃ１〜Ｃ４）に分かれたパターン
が現われた。
活性ペプチドをキモトリプシンで消化し、処理後、ＯＤ
Ｓ−１２０Ｔカラムで分析すると図３に示すように４つ
のペプチドのピーク（Ｃ１〜Ｃ４）に分かれたパターン
が現われた。
【００２７】この各々のピークＣ１〜Ｃ４でのペプチド
を気相プロティンクエンサーで分析したところ表３に示
す結果を得た。すなわち、ピークＣ１は主に４６〜５１
番目のアミノ酸残基よりなるペプチドで、これに４〜８
番目のアミノ酸残基のペプチドがマイナー（ｍｉｎｏｒ
）成分として混入していた。
を気相プロティンクエンサーで分析したところ表３に示
す結果を得た。すなわち、ピークＣ１は主に４６〜５１
番目のアミノ酸残基よりなるペプチドで、これに４〜８
番目のアミノ酸残基のペプチドがマイナー（ｍｉｎｏｒ
）成分として混入していた。
【００２８】
【表３】
【００２９】ピークＣ２は９〜１６番目のアミノ酸残基
よりなるペプチドと、１〜８番目のアミノ酸残基よりな
るペプチドとの混合（ｍｉｘｔｕｒｅ）であった。ピー
クＣ３は１７〜２９番目、ピークＣ４は３０〜４５番目
のアミノ酸残基よりなるペプチドあった。
よりなるペプチドと、１〜８番目のアミノ酸残基よりな
るペプチドとの混合（ｍｉｘｔｕｒｅ）であった。ピー
クＣ３は１７〜２９番目、ピークＣ４は３０〜４５番目
のアミノ酸残基よりなるペプチドあった。
【００３０】Ｓ−カルボキシアミドメチル化した抗真菌
活性ペプチドをＶ８プロテアーゼで消化し、処理後、Ｏ
ＤＳ−１２０Ｔカラムで分析すると、図４に示すように
１個のピークが得られた。
活性ペプチドをＶ８プロテアーゼで消化し、処理後、Ｏ
ＤＳ−１２０Ｔカラムで分析すると、図４に示すように
１個のピークが得られた。
【００３１】このピークのペプチドを気相プロティンシ
ークエンサーで分析すると、表４に示すように４２〜５
１番目のアミノ酸残基よりなるペプチドに相当すること
が判明した。
ークエンサーで分析すると、表４に示すように４２〜５
１番目のアミノ酸残基よりなるペプチドに相当すること
が判明した。
【００３２】また、Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真
菌活性ペプチドをカルボキシペプチダーゼＹで消化処理
すると、システインが最初に遊離してくることが、アミ
ノ酸分析で確認された。
菌活性ペプチドをカルボキシペプチダーゼＹで消化処理
すると、システインが最初に遊離してくることが、アミ
ノ酸分析で確認された。
【００３３】
【表４】
【００３４】以上の結果から、抗真菌活性ペプチドのア
ミノ酸配列を図５のように決定した。ここでＣはキモト
リプシンで消化したペプチド、Ｖ８はＶ８プロテアーゼ
で消化したペプチド、Ｌはリジルエンドペプチダーゼで
消化したペプチドを表わす。
ミノ酸配列を図５のように決定した。ここでＣはキモト
リプシンで消化したペプチド、Ｖ８はＶ８プロテアーゼ
で消化したペプチド、Ｌはリジルエンドペプチダーゼで
消化したペプチドを表わす。
【００３５】抗真菌活性ペプチドのジスルフィド結合の
位置を決定するため、４Ｍ尿素存在下でリジルエンドペ
プチダーゼで抗真菌活性ペプチドを消化処理し、ＯＤＳ
−１２０Ｔカラムで分析すると、図６に示すようにＬ１
〜Ｌ１０の１０個のピークに分れたパターンが得られた
。ここにＬはリジルエンドペプチダーゼで処理したこと
を示す。
位置を決定するため、４Ｍ尿素存在下でリジルエンドペ
プチダーゼで抗真菌活性ペプチドを消化処理し、ＯＤＳ
−１２０Ｔカラムで分析すると、図６に示すようにＬ１
〜Ｌ１０の１０個のピークに分れたパターンが得られた
。ここにＬはリジルエンドペプチダーゼで処理したこと
を示す。
【００３６】これらのピークＬ１〜Ｌ１０のペプチドを
エルマン試薬で分析したところ、Ｌ４，Ｌ８，Ｌ９，Ｌ
１０のピークがシスチン残基を含んでいた。
エルマン試薬で分析したところ、Ｌ４，Ｌ８，Ｌ９，Ｌ
１０のピークがシスチン残基を含んでいた。
【００３７】これらピークのアミノ酸配列を分析した結
果が表５に示されている。これによれば、ピークＬ４は
７〜９番目と３３〜３９番目のアミノ酸を含むペプチド
であった。したがって、図７に示すように７番目と３３
番目とのシステイン残基の間にジスルフィド結合が形成
されていることがわかる。
果が表５に示されている。これによれば、ピークＬ４は
７〜９番目と３３〜３９番目のアミノ酸を含むペプチド
であった。したがって、図７に示すように７番目と３３
番目とのシステイン残基の間にジスルフィド結合が形成
されていることがわかる。
【００３８】ピークＬ８は４９〜５１番目のアミノ酸残
基を含むペプチドで、４９番目と５１番目とのシステイ
ン残基間にジスルフィド結合が形成されている。ピーク
Ｌ１０は１１〜１５番目と４０〜４６番目のアミノ酸残
基を含むペプチドで、したがって１４番目と４０番目と
のシステイン残基間にジスルフィド結合が形成されてい
る。
基を含むペプチドで、４９番目と５１番目とのシステイ
ン残基間にジスルフィド結合が形成されている。ピーク
Ｌ１０は１１〜１５番目と４０〜４６番目のアミノ酸残
基を含むペプチドで、したがって１４番目と４０番目と
のシステイン残基間にジスルフィド結合が形成されてい
る。
【００３９】
【表５】
【００４０】以上の結果から抗真菌活性ペプチドのアミ
ノ酸配列構造は図１に示すような、１番目のＡｌａから
５１番目のＣｙｓまでペプチド結合をするとともに、７
番目と３３番目，１４番目と４０番目、２６番目と２８
番目および４９番目と５１番目との間にジスルフィド結
合をしたループ構造を持つことが判明した。
ノ酸配列構造は図１に示すような、１番目のＡｌａから
５１番目のＣｙｓまでペプチド結合をするとともに、７
番目と３３番目，１４番目と４０番目、２６番目と２８
番目および４９番目と５１番目との間にジスルフィド結
合をしたループ構造を持つことが判明した。
【００４１】このように抗真菌ペプチドは、５１個のア
ミノ酸より構成されており、システイン残基のジスルフ
ィド結合によりループが形成されている。このため、非
常に安定で、ネイテイブ（ｎａｔｉｖｅ）な状態では種
々のプロテアーゼにより分解されず、また１００°Ｃで
１時間加熱しても活性を失わない。
ミノ酸より構成されており、システイン残基のジスルフ
ィド結合によりループが形成されている。このため、非
常に安定で、ネイテイブ（ｎａｔｉｖｅ）な状態では種
々のプロテアーゼにより分解されず、また１００°Ｃで
１時間加熱しても活性を失わない。
【００４２】また、培養したＨＬ６０白血病細胞、Ｈｅ
Ｌａ細胞、ヒト繊維芽細胞、酵母に対しては１００μｇ
／ｍｌの濃度でも全く毒性を示さなかった。
Ｌａ細胞、ヒト繊維芽細胞、酵母に対しては１００μｇ
／ｍｌの濃度でも全く毒性を示さなかった。
【００４３】また、真菌に対する抗真菌活性ペプチドの
抗真菌活性を表６に示す。これによると、抗真菌活性ペ
プチドは広い種類の真菌類に対しても低濃度で有効であ
る。
抗真菌活性を表６に示す。これによると、抗真菌活性ペ
プチドは広い種類の真菌類に対しても低濃度で有効であ
る。
【００４４】
【表６】
【００４５】
【効果】以上説明してきたように、本願発明により得ら
れた抗真菌活性ペプチドは、これを１００μｇ／ｍｌの
低濃度で患者や食品に投与、添加しても人体に毒性を示
さず安全であり、しかも人体内や食品中の多くの真菌に
対し有効に働くと予測できる。
れた抗真菌活性ペプチドは、これを１００μｇ／ｍｌの
低濃度で患者や食品に投与、添加しても人体に毒性を示
さず安全であり、しかも人体内や食品中の多くの真菌に
対し有効に働くと予測できる。
【００４６】
【配列表】配列番号 ：１
配列の長さ：５１
配列の型 ：アミノ酸
鎖の数 ：両形態
トポロジー：両形態
配列の種類：ペプチド
配列
Ａｌａ，Ｔｈｒ，Ｔｙｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃ
ｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，
１ ５
１０Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，
Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａ
ｌａ， １５
２０
Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃ
ｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒ
ｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ， ２５
３０
３５Ｇｌ
ｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ
，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，
４０
４５Ｃｙｓ
，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ ５０
ｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，
１ ５
１０Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，
Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｔｈｒ，Ａ
ｌａ， １５
２０
Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃ
ｙｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒ
ｏ，Ａｒｇ，Ａｓｐ， ２５
３０
３５Ｇｌ
ｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ
，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，
４０
４５Ｃｙｓ
，Ｔｙｒ，Ｃｙｓ ５０
【図面の簡単な説明】
【図１】抗真菌活性ペプチドのアミノ酸配列構造を示す
図である。 【図２】ＯＳＤ−１２０Ｔカラム（０．４６×２５■）
を用い、５〜７０％の濃度勾配をもつアセトニトリル（
０．１％トリフルオロ酢酸を含む）で溶出させた抗真菌
活性ペプチドの最終精製を示す図である。 【図３】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをキモトリプシンで処理後、ＯＳＤ−１２０Ｔカラ
ムで溶出したパターンを示す図である。 【図４】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをＶ８プロテアーゼで処理後、ＯＳＤ−１２０Ｔカ
ラムで溶出したパターンを示す図である。 【図５】
抗真菌活性ペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 【図６】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをリジルエンドペプチダーゼで処理後、ＯＳＤ−１
２０Ｔカラムで溶出したパターンを示す図である。 【図７】Ｓ−カルボキシアドメチル化抗真菌活性ペプチ
ドをリジルエンドペプチダーゼで処理後、生成したペプ
チドのアミノ酸配列を示す図である。
図である。 【図２】ＯＳＤ−１２０Ｔカラム（０．４６×２５■）
を用い、５〜７０％の濃度勾配をもつアセトニトリル（
０．１％トリフルオロ酢酸を含む）で溶出させた抗真菌
活性ペプチドの最終精製を示す図である。 【図３】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをキモトリプシンで処理後、ＯＳＤ−１２０Ｔカラ
ムで溶出したパターンを示す図である。 【図４】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをＶ８プロテアーゼで処理後、ＯＳＤ−１２０Ｔカ
ラムで溶出したパターンを示す図である。 【図５】
抗真菌活性ペプチドのアミノ酸配列を示す図である。 【図６】Ｓ−カルボキシアミドメチル化抗真菌活性ペプ
チドをリジルエンドペプチダーゼで処理後、ＯＳＤ−１
２０Ｔカラムで溶出したパターンを示す図である。 【図７】Ｓ−カルボキシアドメチル化抗真菌活性ペプチ
ドをリジルエンドペプチダーゼで処理後、生成したペプ
チドのアミノ酸配列を示す図である。
Claims (1)
- 【請求項１】 １番目のＡｌａから順にＴｈｒ，Ｔｙ
ｒ，Ａｓｎ，Ｇｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ
，Ｌｙｓ，Ａｓｐ，Ａｓｎ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，
Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ａｌａ，Ｇｌｎ，Ｓｅｒ，Ｇｌｙ，Ｌ
ｙｓ，Ｔｈｒ，Ａｌａ，Ｉｌｅ，Ｃｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙ
ｓ，Ｔｙｒ，Ｖａｌ，Ｌｙｓ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｐｒｏ
，Ａｒｇ，Ａｓｐ，Ｇｌｙ，Ａｌａ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，
Ｇｌｕ，Ｐｈｅ，Ａｓｐ，Ｓｅｒ，Ｔｙｒ，Ｌｙｓ，Ｇ
ｌｙ，Ｌｙｓ，Ｃｙｓ，Ｔｙｒ，Ｃｙｓまで５１個のア
ミノ酸がペプチド結合をして並び、７番目と３３番目、
１４番目と４０番目、２６番目と２８番目、および４９
番目と５１番目のＣｙｓ間にジスルフィド結合が形成さ
れている構造を有していることを特徴とする抗真菌活性
ペプチド
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2409213A JPH04234399A (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗真菌活性ペプチド |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2409213A JPH04234399A (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗真菌活性ペプチド |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04234399A true JPH04234399A (ja) | 1992-08-24 |
Family
ID=18518566
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2409213A Pending JPH04234399A (ja) | 1990-12-28 | 1990-12-28 | 抗真菌活性ペプチド |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04234399A (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06500074A (ja) * | 1990-06-15 | 1994-01-06 | ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト | 抗菌性ポリペプチドおよびその製法 |
-
1990
- 1990-12-28 JP JP2409213A patent/JPH04234399A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH06500074A (ja) * | 1990-06-15 | 1994-01-06 | ヘキスト・アクチェンゲゼルシャフト | 抗菌性ポリペプチドおよびその製法 |
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