JPH04237496A - 環状イヌロオリゴ糖の製造方法 - Google Patents
環状イヌロオリゴ糖の製造方法Info
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Classifications
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は環状イヌロオリゴ糖の製
造方法に関するものである。詳しくは特定の微生物由来
の酵素をβ−２，１−フラクトースオリゴ糖又はイヌリ
ンに作用させて環状イヌロオリゴ糖を製造する方法に関
するものである。
造方法に関するものである。詳しくは特定の微生物由来
の酵素をβ−２，１−フラクトースオリゴ糖又はイヌリ
ンに作用させて環状イヌロオリゴ糖を製造する方法に関
するものである。
【０００２】
【従来の技術及び発明が解決しようとする問題点】従来
、数個の糖から構成される環状オリゴ糖としては、グル
コースがα−１、４−グルコシド結合したサイクロサイ
クロデキストリンが知られている。サイクロサイクロデ
キストリンは、食品用包接化剤として注目されており、
フレーバー成分の保持、特異臭のマスキング、苦みの除
去、酸化の防止等を目的として食品の高付加価値化に貢
献している。しかし、高コストであり、水に対する溶解
度が小さいので、利用が限られているのが現状である。 そこで、溶解度の大きい食品用包接化剤の開発が望まれ
、また食品のみならず幅広い分野においても、新しい包
接化剤の開発が望まれてきた。
、数個の糖から構成される環状オリゴ糖としては、グル
コースがα−１、４−グルコシド結合したサイクロサイ
クロデキストリンが知られている。サイクロサイクロデ
キストリンは、食品用包接化剤として注目されており、
フレーバー成分の保持、特異臭のマスキング、苦みの除
去、酸化の防止等を目的として食品の高付加価値化に貢
献している。しかし、高コストであり、水に対する溶解
度が小さいので、利用が限られているのが現状である。 そこで、溶解度の大きい食品用包接化剤の開発が望まれ
、また食品のみならず幅広い分野においても、新しい包
接化剤の開発が望まれてきた。
【０００３】近年、内山らは、フルクトースを主成分と
する多糖類であるイヌリンに、バチルス・サーキュラン
スＭＺ Ｎｏ．３１由来の酵素を作用させて、環状イ
ヌロオリゴ糖を得ることを報告している（Ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９２，８３−９
０，１９８９及び特開平２−２５２７０１号公報）。し
かしながら、環状オリゴ糖の収率は約２．５％或いは２
０％程度と低く、また、微生物学的方法による環状イヌ
ロオリゴ糖の製造方法については、まだ例が少ないのが
現状であり、効率的に環状オリゴ糖を生産し得る方法の
開発が望まれていた。
する多糖類であるイヌリンに、バチルス・サーキュラン
スＭＺ Ｎｏ．３１由来の酵素を作用させて、環状イ
ヌロオリゴ糖を得ることを報告している（Ｃａｒｂｏｈ
ｙｄｒａｔｅ Ｒｅｓｅａｒｃｈ，１９２，８３−９
０，１９８９及び特開平２−２５２７０１号公報）。し
かしながら、環状オリゴ糖の収率は約２．５％或いは２
０％程度と低く、また、微生物学的方法による環状イヌ
ロオリゴ糖の製造方法については、まだ例が少ないのが
現状であり、効率的に環状オリゴ糖を生産し得る方法の
開発が望まれていた。
【０００４】
【問題点を解決するための手段】そこで、本発明者らは
イヌリンから環状イヌロオリゴ糖を微生物学的方法によ
り収率良く製造する方法について鋭意研究を進めた結果
、バチルス・サーキュランスＭＣＩ−２５５４（微工研
菌寄第１１９４０号）由来のサイクロイヌロオリゴ
サッカライド フラクタノトランスフェラーゼ（ｃｙ
ｃｌｏｉｎｕｌｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｆｒｕｃｔａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，以下、「
ＣＦＴａｓｅ」という。）が効率良く環状イヌロオリゴ
糖を生産することを見出し、本発明を完成するに至った
。すなわち、本発明の要旨は、バチルス・サーキュラン
スＭＣＩ−２５５４由来のＣＦＴａｓｅをβ−２，１−
フラクトースオリゴ糖又はイヌリンに作用させることを
特徴とする環状イヌロオリゴ糖の製造方法に存する。
イヌリンから環状イヌロオリゴ糖を微生物学的方法によ
り収率良く製造する方法について鋭意研究を進めた結果
、バチルス・サーキュランスＭＣＩ−２５５４（微工研
菌寄第１１９４０号）由来のサイクロイヌロオリゴ
サッカライド フラクタノトランスフェラーゼ（ｃｙ
ｃｌｏｉｎｕｌｏ−ｏｌｉｇｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ
ｆｒｕｃｔａｎｏｔｒａｎｓｆｅｒａｓｅ，以下、「
ＣＦＴａｓｅ」という。）が効率良く環状イヌロオリゴ
糖を生産することを見出し、本発明を完成するに至った
。すなわち、本発明の要旨は、バチルス・サーキュラン
スＭＣＩ−２５５４由来のＣＦＴａｓｅをβ−２，１−
フラクトースオリゴ糖又はイヌリンに作用させることを
特徴とする環状イヌロオリゴ糖の製造方法に存する。
【０００５】以下、本発明を説明するに本発明で使用す
るＣＦＴａｓｅは、バチルス・サーキュランスＭＣＩ−
２５４４（微工研菌寄第１１９４０号；以下、本菌株又
はＭＣＩ２５５４号菌と称することもある。）由来のも
のである。ＭＣＩ２５５４号菌は、本発明者等により、
天然土壌から分離された細菌であり、その菌学的性状は
次の通りである。
るＣＦＴａｓｅは、バチルス・サーキュランスＭＣＩ−
２５４４（微工研菌寄第１１９４０号；以下、本菌株又
はＭＣＩ２５５４号菌と称することもある。）由来のも
のである。ＭＣＩ２５５４号菌は、本発明者等により、
天然土壌から分離された細菌であり、その菌学的性状は
次の通りである。
【０００６】１．形態的性状
○普通寒天培地上、４０℃、３日めのコロニーの特徴１
）外形 ：円形 ２）大きさ ：２〜３ｍｍ ３）表面の隆起：凸状 ４）表面の形状：平滑 ５）光沢 ：鈍光 ６）色調 ：黄味白色 ７）透明度 ：半透明 ８）周縁 ：全縁 ○Ｓｏｉｌ ｅｘｔｒａｃｔ寒天培地（Ｒ．Ｅ．Ｇｏ
ｒｄｏｎ ｅｔ．ａｌ．Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ．Ｐ．１０１，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
Ｈａｎｄ ｂｏｏｋ ＮＯ．４２７，１９７３）上
、４０℃、４８時間培養中の形態的性質 １）細胞形態 ：直径０．４〜０．５μｍ、長さ１．
５〜３．５μｍの棹状 ２）運動性 ：あり ３）胞子形成 ：細胞中央部または端部に楕円形の芽
胞を形成する菌体の膨張が見られる。
）外形 ：円形 ２）大きさ ：２〜３ｍｍ ３）表面の隆起：凸状 ４）表面の形状：平滑 ５）光沢 ：鈍光 ６）色調 ：黄味白色 ７）透明度 ：半透明 ８）周縁 ：全縁 ○Ｓｏｉｌ ｅｘｔｒａｃｔ寒天培地（Ｒ．Ｅ．Ｇｏ
ｒｄｏｎ ｅｔ．ａｌ．Ｔｈｅ Ｇｅｎｕｓ Ｂ
ａｃｉｌｌｕｓ．Ｐ．１０１，Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ
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、４０℃、４８時間培養中の形態的性質 １）細胞形態 ：直径０．４〜０．５μｍ、長さ１．
５〜３．５μｍの棹状 ２）運動性 ：あり ３）胞子形成 ：細胞中央部または端部に楕円形の芽
胞を形成する菌体の膨張が見られる。
【０００７】
４）グラム染色：陽性〜不定
５）抗酸性 ：陰性
２．生理学的性状
１）嫌気条件下での生育
：陰性 ２）空気中での生育
：陽性 ３）カ
タラーゼ
：陽性 ４）オキシダーゼ
：陰性 ５）Ｏ
−Ｆテスト
：酸化 ６）ゼラチンの加水分解
：陽性 （普通寒天＋０
．４％ゼラチンプレート上） ７）カゼインの加水分
解 ：陰性 ８
）硝酸塩の還元
：陰性 ９）メチルレッドテスト
：陰性１０）ＶＰテス
ト
：陰性１１）インドールの生成
：陰性１２）硫化水素の生成
：陰性１
３）デンプンの加水分解
：陽性１４）クエン酸の利用
：陽性 （クリステン
セン培地上） １５）無機窒素源の利用
：陽性（アンモニウム塩）
陽性（硝酸塩）１６）ウレア
ーゼ
：陰性１７）ＤＮａｓｅの生産
：陰性１８）２％ＮａＣｌ中
での生育 ：生育可能
３％ＮａＣｌ中での生育
： 不可１９）色素の生成
：陰性２０
）生育温度域
：２０〜４７℃ 至適生育温
度
４０℃２１）生育ｐＨ
：ｐＨ５．６〜８２２
）Ｔｗｅｅｎ８０の分解
：陽性２３）チロシン分解性
：陰性２４）リゾチーム耐性
：陰性
（１０，０００ｕｎｉｔ／ｍｌ） ２５）炭素源からの酸の生成
：陰性 ２）空気中での生育
：陽性 ３）カ
タラーゼ
：陽性 ４）オキシダーゼ
：陰性 ５）Ｏ
−Ｆテスト
：酸化 ６）ゼラチンの加水分解
：陽性 （普通寒天＋０
．４％ゼラチンプレート上） ７）カゼインの加水分
解 ：陰性 ８
）硝酸塩の還元
：陰性 ９）メチルレッドテスト
：陰性１０）ＶＰテス
ト
：陰性１１）インドールの生成
：陰性１２）硫化水素の生成
：陰性１
３）デンプンの加水分解
：陽性１４）クエン酸の利用
：陽性 （クリステン
セン培地上） １５）無機窒素源の利用
：陽性（アンモニウム塩）
陽性（硝酸塩）１６）ウレア
ーゼ
：陰性１７）ＤＮａｓｅの生産
：陰性１８）２％ＮａＣｌ中
での生育 ：生育可能
３％ＮａＣｌ中での生育
： 不可１９）色素の生成
：陰性２０
）生育温度域
：２０〜４７℃ 至適生育温
度
４０℃２１）生育ｐＨ
：ｐＨ５．６〜８２２
）Ｔｗｅｅｎ８０の分解
：陽性２３）チロシン分解性
：陰性２４）リゾチーム耐性
：陰性
（１０，０００ｕｎｉｔ／ｍｌ） ２５）炭素源からの酸の生成
【０００８】
【表１】
【０００９】
３．化学分類学的性状
１）ＤＮＡ中のＧＣ含量
５５％ ２）細胞壁のジアミノ−アミノ酸
ｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸 （全菌体
水解物） ３）全菌体糖組成
グルコース
リボ
ース ４）主要メナキノン
ＭＫ−７ ５）菌体脂肪酸
分枝型
アンテイソ−Ｃ１５：０
イソ−Ｃ１６：０４．分類学
的考察 ○属レベルの同定 本菌株（ＭＣＩ２５５４号菌）は、１）グラム陽性棹菌
である、２）運動性を有する、３）芽胞を形成する、４
）グルコースから酸を生成する、５）細胞壁のジアミノ
−アミノ酸はｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸を有する、
６）主要メナキノンはＭＫ−７を有するなどの特徴を示
す。
５５％ ２）細胞壁のジアミノ−アミノ酸
ｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸 （全菌体
水解物） ３）全菌体糖組成
グルコース
リボ
ース ４）主要メナキノン
ＭＫ−７ ５）菌体脂肪酸
分枝型
アンテイソ−Ｃ１５：０
イソ−Ｃ１６：０４．分類学
的考察 ○属レベルの同定 本菌株（ＭＣＩ２５５４号菌）は、１）グラム陽性棹菌
である、２）運動性を有する、３）芽胞を形成する、４
）グルコースから酸を生成する、５）細胞壁のジアミノ
−アミノ酸はｍｅｓｏ−ジアミノピメリン酸を有する、
６）主要メナキノンはＭＫ−７を有するなどの特徴を示
す。
【００１０】これらの特徴から、本菌株はＢｅｒｇｅｙ
’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第２巻（１９８６）
に記載されている、グラム陽性内生胞子形成棹菌及び球
菌（Ｅｎｄｏｓｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒａｍ
−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｒｏｄｓ ａｎｄ Ｃｏｃ
ｃｉ）群のＢａｃｉｌｌｕｓ属菌に帰属することが判明
した。
’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ ｏｆ Ｓｙｓｔｅｍａｔ
ｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ第２巻（１９８６）
に記載されている、グラム陽性内生胞子形成棹菌及び球
菌（Ｅｎｄｏｓｐｏｒｅ−ｆｏｒｍｉｎｇ Ｇｒａｍ
−Ｐｏｓｉｔｉｖｅ Ｒｏｄｓ ａｎｄ Ｃｏｃ
ｃｉ）群のＢａｃｉｌｌｕｓ属菌に帰属することが判明
した。
【００１１】○種レベルの同定
Ｂａｃｉｌｌｕｓ属菌には、現在約５０種近い菌種が含
まれている。これらの種は、芽胞の形態・形成部位、各
種の生理学的性状及び化学分類学的性状によって識別さ
れている。特にＤＮＡ中のＧＣ含量が３２〜６９％と幅
広い範囲に渡っており、その相違は種の特徴として取り
上げられている。本菌株（ＭＣＩ２５５４号菌）のＧＣ
含量は５５％であり、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕ
ａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ第２巻に基づいて種の検索を行なったところ
、本菌株に近いＧＣ含量を持つ種として、Ｂ．ｃｉｒｃ
ｕｌａｎｓ，Ｂ．ｍａｃｅｒａｎｓ Ｂ．ｃｏａｇｕ
ｌａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａ，及びＢ．ｓｔｅａｒ
ｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓなどが挙げられる。そこで
、これら５種と各種生理学的性状について比較を行なっ
た。表１に示したように本菌株はＢ．ｓｔｅａｒｏｔｈ
ｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓとは生
育温度範囲の点で明らかに区別された。また、Ｂ．ｍａ
ｃｅｒａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａとは糖からガスの
生成、硝酸塩の還元能などの生理学的性状において一致
しなかった。従って本菌株は１）ＧＣ含量が５５％であ
る、２）５０〜５５℃で生育を示さない、３）ＶＰカテ
スト陰性、４）ガスの発生を伴わずによく糖の発酵を行
なう、５）硝酸塩の還元能なしなどの特徴を持つことか
ら、Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓと同定した。
まれている。これらの種は、芽胞の形態・形成部位、各
種の生理学的性状及び化学分類学的性状によって識別さ
れている。特にＤＮＡ中のＧＣ含量が３２〜６９％と幅
広い範囲に渡っており、その相違は種の特徴として取り
上げられている。本菌株（ＭＣＩ２５５４号菌）のＧＣ
含量は５５％であり、Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕ
ａｌ ｏｆＳｙｓｔｅｍａｔｉｃ Ｂａｃｔｅｒｉ
ｏｌｏｇｙ第２巻に基づいて種の検索を行なったところ
、本菌株に近いＧＣ含量を持つ種として、Ｂ．ｃｉｒｃ
ｕｌａｎｓ，Ｂ．ｍａｃｅｒａｎｓ Ｂ．ｃｏａｇｕ
ｌａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａ，及びＢ．ｓｔｅａｒ
ｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓなどが挙げられる。そこで
、これら５種と各種生理学的性状について比較を行なっ
た。表１に示したように本菌株はＢ．ｓｔｅａｒｏｔｈ
ｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎｓとは生
育温度範囲の点で明らかに区別された。また、Ｂ．ｍａ
ｃｅｒａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａとは糖からガスの
生成、硝酸塩の還元能などの生理学的性状において一致
しなかった。従って本菌株は１）ＧＣ含量が５５％であ
る、２）５０〜５５℃で生育を示さない、３）ＶＰカテ
スト陰性、４）ガスの発生を伴わずによく糖の発酵を行
なう、５）硝酸塩の還元能なしなどの特徴を持つことか
ら、Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓと同定した。
【００１２】以下に示すように本菌株は、Ｂ．ｓｔｅａ
ｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎ
ｓとは生育温度範囲の点で明らかに区別された。なお、
以下、ＡはＭＣＩ２５５４号菌、ＢはＢ．ｃｉｒｃｕｌ
ａｎｓ、ＣはＢ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ、ＤはＢ．ｍａｃ
ｅｒａｎｓ、ＥはＢ．ｐｏｌｙｍｙｘａ、ＦはＢ．ｓｔ
ｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを示し（Ｂ〜Ｆは文
献値：Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ）、＋は陽
性（９０％以上）、−は陰性（１０％以下）、ｄは陽性
（１１〜８９％）、ｖは培養条件により性状不安定、Ｎ
Ｄはデータなしを示す。
ｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓ，Ｂ．ｃｏａｇｕｌａｎ
ｓとは生育温度範囲の点で明らかに区別された。なお、
以下、ＡはＭＣＩ２５５４号菌、ＢはＢ．ｃｉｒｃｕｌ
ａｎｓ、ＣはＢ．ｃｏａｇｕｌａｎｓ、ＤはＢ．ｍａｃ
ｅｒａｎｓ、ＥはＢ．ｐｏｌｙｍｙｘａ、ＦはＢ．ｓｔ
ｅａｒｏｔｈｅｒｍｏｐｈｉｌｕｓを示し（Ｂ〜Ｆは文
献値：Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ Ｍａｎｎｕａｌ）、＋は陽
性（９０％以上）、−は陰性（１０％以下）、ｄは陽性
（１１〜８９％）、ｖは培養条件により性状不安定、Ｎ
Ｄはデータなしを示す。
【００１３】
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
Ｅ Ｆ───────────
────────────────────────細
胞の直径＞１．０μｍ − −
− − −
−球状胞子
− − − −
− −細胞の膨張
＋ ＋ ｖ
＋ ＋ ＋カタラー
ゼ ＋
＋ ＋ ＋ ｄ
＋嫌気条件下での生育 −
ｄ ＋ ＋
＋ −ＶＰテスト
− − ＋
− ＋ − ｐＨ
＜６ −
＋ ＋ ＋ ｄ
＋ ＞７
− − −
− − −
Ａ
Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ
Ｆ────────────────────
───────────────酸の生成 Ｄ−グルコース ＋
＋ ＋ ＋ ＋
＋ Ｌ−アラビノース
＋ ＋ ｄ ＋
＋ ｄ Ｄ−キシロース
＋ ＋ ｄ
＋ ＋ ｄ Ｄ−マ
ンニトール ＋ ＋
ｄ ＋ ＋
ｄグルコースからのガスの生成 − −
− ＋ ＋
−カゼインの加水分解 −
ｄ ｄ − ＋
ｄゼラチンの液化
＋ ｄ − ＋
＋ ＋デンプンの加水分解
＋ ＋ ＋
＋ ＋ ＋クエン酸の利
用 ＋ ｄ
ｄ ｄ −
ｄチロシンの分解 −
− − −
− −硝酸塩の還元
− ｄ ｄ
＋ ＋ ｄインドールの生成
− −
− − − −ＮａＣ
ｌ及びＫＣｌの要求 − −
− − − −生
育ｐＨ ６．８ ＋
＋ ＋ ＋ ＋
＋ ５．７
＋ ｄ ＋
＋ ＋ −
５．０ − −
＋ − −
−ＮａＣｌの影響 ２％
＋ ＮＤ ＋ ＮＤ
ＮＤ ＮＤ ５％
− ｄ −
− − ｄ
７％ −
ｄ − − −
− １０％
− − −
− − −生育温度 ５℃
− − − −
ｄ − １０℃
− ｄ
− ｄ ＋ −
３０℃ ＋
＋ ＋ ＋
＋ − ４０℃
＋ ＋ ＋
＋ ＋ ＋
Ａ
Ｂ Ｃ Ｄ
Ｅ Ｆ────────────────
─────────────────── ５０
℃ −
− ＋ ｄ −
＋ ５５℃
− − ＋
− − ＋ ６５℃
− −
− − −
＋リゾチーム耐性 −
ｄ − −
ｄ −ＧＣ含量（％）
５５ ３１．６ ４４．３
４４．９ ４１．０ ４３．５
−６１．０ −５６．０ −５１．
０ −５１．４ −６２．２また、Ｂ．ｍａｃ
ｅｒａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａとは糖からのガスの
生成、硝酸塩の還元能などの生理学的性状において一致
しなかった。従って本菌株は１）ＧＣ含量が５５％であ
る、２）５０〜５５℃で生育を示さない、３）ＶＰテス
ト陰性、４）ガスの発生を伴わずによく糖の発酵を行な
う、５）硝酸塩の還元能なしなどの特徴を持つことから
、Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓと同定した。
Ａ Ｂ Ｃ Ｄ
Ｅ Ｆ───────────
────────────────────────細
胞の直径＞１．０μｍ − −
− − −
−球状胞子
− − − −
− −細胞の膨張
＋ ＋ ｖ
＋ ＋ ＋カタラー
ゼ ＋
＋ ＋ ＋ ｄ
＋嫌気条件下での生育 −
ｄ ＋ ＋
＋ −ＶＰテスト
− − ＋
− ＋ − ｐＨ
＜６ −
＋ ＋ ＋ ｄ
＋ ＞７
− − −
− − −
Ａ
Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ
Ｆ────────────────────
───────────────酸の生成 Ｄ−グルコース ＋
＋ ＋ ＋ ＋
＋ Ｌ−アラビノース
＋ ＋ ｄ ＋
＋ ｄ Ｄ−キシロース
＋ ＋ ｄ
＋ ＋ ｄ Ｄ−マ
ンニトール ＋ ＋
ｄ ＋ ＋
ｄグルコースからのガスの生成 − −
− ＋ ＋
−カゼインの加水分解 −
ｄ ｄ − ＋
ｄゼラチンの液化
＋ ｄ − ＋
＋ ＋デンプンの加水分解
＋ ＋ ＋
＋ ＋ ＋クエン酸の利
用 ＋ ｄ
ｄ ｄ −
ｄチロシンの分解 −
− − −
− −硝酸塩の還元
− ｄ ｄ
＋ ＋ ｄインドールの生成
− −
− − − −ＮａＣ
ｌ及びＫＣｌの要求 − −
− − − −生
育ｐＨ ６．８ ＋
＋ ＋ ＋ ＋
＋ ５．７
＋ ｄ ＋
＋ ＋ −
５．０ − −
＋ − −
−ＮａＣｌの影響 ２％
＋ ＮＤ ＋ ＮＤ
ＮＤ ＮＤ ５％
− ｄ −
− − ｄ
７％ −
ｄ − − −
− １０％
− − −
− − −生育温度 ５℃
− − − −
ｄ − １０℃
− ｄ
− ｄ ＋ −
３０℃ ＋
＋ ＋ ＋
＋ − ４０℃
＋ ＋ ＋
＋ ＋ ＋
Ａ
Ｂ Ｃ Ｄ
Ｅ Ｆ────────────────
─────────────────── ５０
℃ −
− ＋ ｄ −
＋ ５５℃
− − ＋
− − ＋ ６５℃
− −
− − −
＋リゾチーム耐性 −
ｄ − −
ｄ −ＧＣ含量（％）
５５ ３１．６ ４４．３
４４．９ ４１．０ ４３．５
−６１．０ −５６．０ −５１．
０ −５１．４ −６２．２また、Ｂ．ｍａｃ
ｅｒａｎｓ，Ｂ．ｐｏｌｙｍｙｘａとは糖からのガスの
生成、硝酸塩の還元能などの生理学的性状において一致
しなかった。従って本菌株は１）ＧＣ含量が５５％であ
る、２）５０〜５５℃で生育を示さない、３）ＶＰテス
ト陰性、４）ガスの発生を伴わずによく糖の発酵を行な
う、５）硝酸塩の還元能なしなどの特徴を持つことから
、Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓと同定した。
【００１４】○種以下のレベルの同定
Ｂ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓは複合種から構成されており、
Ｎａｋａｍｕｒａ及びＳｗｅｚｅｙによって１０のグル
ープに分けられている（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ．Ｂａｃ．
Ｖｏｌ．３３，ｐ．７０３−７０８，１９８３）。そこ
で、本菌株とＢ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓの各グループとを
比較した。
Ｎａｋａｍｕｒａ及びＳｗｅｚｅｙによって１０のグル
ープに分けられている（Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ．Ｂａｃ．
Ｖｏｌ．３３，ｐ．７０３−７０８，１９８３）。そこ
で、本菌株とＢ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓの各グループとを
比較した。
【００１５】以下に示すように、本菌株はＧＣ含量にお
いてはグループ７〜１０の範囲内に含まれることがわか
った。また、各種生理学的性状を比較したところ、嫌気
条件下での生育以外はグループ９の性状とよく一致した
。特に、リゾチーム感受性、クエン酸の利用が可能であ
るなどの特徴をもつことから、グループ９に近縁である
ことが示唆された。以下、Ａは本菌株、１〜１０はＢ．
ｃｉｒｃｕｌａｎｓの各グループを示し（１〜１０は文
献値：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ．Ｂａｃ．Ｖｏｌ．３３，ｐ
．７０３−７０８，１９８３）、＋，−及びｄは前記と
同義を示す。
いてはグループ７〜１０の範囲内に含まれることがわか
った。また、各種生理学的性状を比較したところ、嫌気
条件下での生育以外はグループ９の性状とよく一致した
。特に、リゾチーム感受性、クエン酸の利用が可能であ
るなどの特徴をもつことから、グループ９に近縁である
ことが示唆された。以下、Ａは本菌株、１〜１０はＢ．
ｃｉｒｃｕｌａｎｓの各グループを示し（１〜１０は文
献値：Ｉｎｔ．Ｊ．Ｓｙｓ．Ｂａｃ．Ｖｏｌ．３３，ｐ
．７０３−７０８，１９８３）、＋，−及びｄは前記と
同義を示す。
【００１６】
Ａ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７
８ ９ １０─────────────────
──────────────────ＮａＣｌの影響 ５％ −
＋ − − − ｄ − − ＋
− ｄ ７％
− − − − − − −
− − − −ｐＨ５．６における生育
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ｄ ｄ −
＋ ＋リゾチーム耐性
− − − ＋ − − − ＋ ＋
− ＋嫌気条件下での生育 −
＋ ＋ − − ＋ ＋ − ＋
＋ ＋デンプンの加水分解 ＋ ＋
− ＋ ＋ ＋ ＋ − ＋ ＋
＋カゼインの加水分解 − −
＋ − ｄ ｄ − − − − −
ＶＰテスト − −
− − − − − − − −
−硝酸塩の還元 −
− − − − − − − ＋ −
＋クエン酸の利用 ＋
− ｄ − − − − − − ＋
−酸の生成 グルコース ＋ ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ アラビノース ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ − ＋ ＋
＋ キシロース ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ ＋ マンニトール
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ ＋ＧＣ含量（％）
５５ ３７ ４５ ４７ ４７ ４７ ４
７ ５０ ５０ ５３ ５０
−３９
−４６ −４９ −４８ −５０ −５０ −５２ −
５２ −５４ −５３さらに、環状イヌロオリゴ糖生産
菌として知られているＢ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＭＺ
Ｎｏ．３１（特開平２−２５５０８６号公報）の性状と
比較したところ、以下に示すとおり４０℃での生育、硝
酸塩の還元、クエン酸の利用などの点で明らかに区別さ
れた。以下、ＡはＭＣＩ２５５４号菌、ＧはＢ．ｃｉｒ
ｃｕｌａｎｓＭＺ Ｎｏ．３１を示し、＋，−，ＮＤ
は前記と同義を示す。
Ａ １ ２ ３ ４ ５ ６ ７
８ ９ １０─────────────────
──────────────────ＮａＣｌの影響 ５％ −
＋ − − − ｄ − − ＋
− ｄ ７％
− − − − − − −
− − − −ｐＨ５．６における生育
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ｄ ｄ −
＋ ＋リゾチーム耐性
− − − ＋ − − − ＋ ＋
− ＋嫌気条件下での生育 −
＋ ＋ − − ＋ ＋ − ＋
＋ ＋デンプンの加水分解 ＋ ＋
− ＋ ＋ ＋ ＋ − ＋ ＋
＋カゼインの加水分解 − −
＋ − ｄ ｄ − − − − −
ＶＰテスト − −
− − − − − − − −
−硝酸塩の還元 −
− − − − − − − ＋ −
＋クエン酸の利用 ＋
− ｄ − − − − − − ＋
−酸の生成 グルコース ＋ ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ アラビノース ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ − ＋ ＋
＋ キシロース ＋
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ ＋ マンニトール
＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋ ＋
＋ ＋ＧＣ含量（％）
５５ ３７ ４５ ４７ ４７ ４７ ４
７ ５０ ５０ ５３ ５０
−３９
−４６ −４９ −４８ −５０ −５０ −５２ −
５２ −５４ −５３さらに、環状イヌロオリゴ糖生産
菌として知られているＢ．ｃｉｒｃｕｌａｎｓＭＺ
Ｎｏ．３１（特開平２−２５５０８６号公報）の性状と
比較したところ、以下に示すとおり４０℃での生育、硝
酸塩の還元、クエン酸の利用などの点で明らかに区別さ
れた。以下、ＡはＭＣＩ２５５４号菌、ＧはＢ．ｃｉｒ
ｃｕｌａｎｓＭＺ Ｎｏ．３１を示し、＋，−，ＮＤ
は前記と同義を示す。
【００１７】
Ｂ
Ａ───────────────
────────────────────生育温度範
囲 １５〜３５℃
２０〜４７℃
（１０℃で微弱、４０℃で
生育不可）（至適温度４０℃）生育ｐＨ範囲
ｐＨ６〜８
ｐＨ５．６〜８嫌気条件下での生育
−
−カタラーゼ
＋
＋Ｖ
Ｐテスト
−
−メチルレッドテスト
＋
−硝酸塩の還元
＋
−インドールの生成
−
−硫化水素の生
成 −
−デ
ンプンの加水分解 ＋
＋クエン酸の利用
−
＋食塩の影響
３％で生育不可 ３
％で生育不可酸の生成 グルコース
＋
＋ フラクトース
＋
＋ マルトース
＋
＋ ガ
ラクトース ＋
＋ マンニトール
＋
＋ シュクロース
＋
＋ ラクトース
＋
＋ エ
スクリン ＋
ＮＤ ソルビトール
−
− アドニトール
−
ＮＤ イノシトー
ル −
−
エタノール
−
−ＧＣ含量
ＮＤ
５５％本発明で使用する前記のバチル
ス・サーキュランスＭＣＩ−２５５４号菌は、通常の微
生物が利用しうる栄養を含有する培地で培養することに
より容易に増殖させることができる。炭素源としては、
グルコース、水飴、デキストリン、シュークロース、澱
粉、イヌリン、糖蜜、動、植物油等を使用できる。また
窒素源として大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用できる。その他
必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、およびその
他のイオンを生成する無機塩類を添加することは有効で
ある。
Ｂ
Ａ───────────────
────────────────────生育温度範
囲 １５〜３５℃
２０〜４７℃
（１０℃で微弱、４０℃で
生育不可）（至適温度４０℃）生育ｐＨ範囲
ｐＨ６〜８
ｐＨ５．６〜８嫌気条件下での生育
−
−カタラーゼ
＋
＋Ｖ
Ｐテスト
−
−メチルレッドテスト
＋
−硝酸塩の還元
＋
−インドールの生成
−
−硫化水素の生
成 −
−デ
ンプンの加水分解 ＋
＋クエン酸の利用
−
＋食塩の影響
３％で生育不可 ３
％で生育不可酸の生成 グルコース
＋
＋ フラクトース
＋
＋ マルトース
＋
＋ ガ
ラクトース ＋
＋ マンニトール
＋
＋ シュクロース
＋
＋ ラクトース
＋
＋ エ
スクリン ＋
ＮＤ ソルビトール
−
− アドニトール
−
ＮＤ イノシトー
ル −
−
エタノール
−
−ＧＣ含量
ＮＤ
５５％本発明で使用する前記のバチル
ス・サーキュランスＭＣＩ−２５５４号菌は、通常の微
生物が利用しうる栄養を含有する培地で培養することに
より容易に増殖させることができる。炭素源としては、
グルコース、水飴、デキストリン、シュークロース、澱
粉、イヌリン、糖蜜、動、植物油等を使用できる。また
窒素源として大豆粉、小麦胚芽、コーンスティープリカ
ー、綿実粕、肉エキス、ペプトン、酵母エキス、硫酸ア
ンモニウム、硝酸ソーダ、尿素等を使用できる。その他
必要に応じて、ナトリウム、カリウム、カルシウム、マ
グネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、およびその
他のイオンを生成する無機塩類を添加することは有効で
ある。
【００１８】本発明においては、本発明のＣＦＴａｓｅ
をβ−２，１−フクラトースオリゴ糖に水溶液中で作用
させる。また、本発明のＣＦＴａｓｅはイヌリンに作用
して環状イヌロオリゴ糖を生成するので、ＣＦＴａｓｅ
をキクイモ、ゴボウ、チコリ等のイヌリン含有量の高い
植物の抽出液或いはイヌリンを唯一の炭素源として含む
培養液中で作用させることにより、環状イヌロオリゴ糖
を得ることができる。本発明において、ＣＦＴａｓｅの
作用は、本発明の細菌そのものを作用させてもよいし、
または同細菌からＣＦＴａｓｅを抽出し、そのまま、あ
るいは固定化等を行い作用させても良い。
をβ−２，１−フクラトースオリゴ糖に水溶液中で作用
させる。また、本発明のＣＦＴａｓｅはイヌリンに作用
して環状イヌロオリゴ糖を生成するので、ＣＦＴａｓｅ
をキクイモ、ゴボウ、チコリ等のイヌリン含有量の高い
植物の抽出液或いはイヌリンを唯一の炭素源として含む
培養液中で作用させることにより、環状イヌロオリゴ糖
を得ることができる。本発明において、ＣＦＴａｓｅの
作用は、本発明の細菌そのものを作用させてもよいし、
または同細菌からＣＦＴａｓｅを抽出し、そのまま、あ
るいは固定化等を行い作用させても良い。
【００１９】培養液で培養した培養上清中から環状イヌ
ロオリゴ糖を得る場合、例えば、炭素源としてのイヌリ
ンを約１〜１０％含有し、その他、窒素源として、大豆
粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
ソーダ、尿素等、更に、必要に応じナトリウム、カリウ
ム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、及び
その他のイオンを生成する事のできる無機塩類等を添加
した培地に本菌を接種し、振とう培養を行う。この際、
培養温度は２０〜５０℃が、また培養時間は１２〜１２
０時間が好適である。得られた培養液を遠心分離により
除菌し、その上清中の酵素を加熱処理により失活させる
。その後濃縮を行い、例えばこれを活性炭カラムに吸着
させる。蒸留水でフルクトース、グルコース、その他の
直鎖オリゴ糖を溶出させた後、５０％メタノール水溶液
にて溶出を行う。この分画中に環状イヌロオリゴ糖が得
られるので、その分画を濃縮乾固すると所期の環状イヌ
ロオリゴ糖を得ることができる。
ロオリゴ糖を得る場合、例えば、炭素源としてのイヌリ
ンを約１〜１０％含有し、その他、窒素源として、大豆
粉、小麦胚芽、コーンスティープリカー、綿実粕、肉エ
キス、ペプトン、酵母エキス、硫酸アンモニウム、硝酸
ソーダ、尿素等、更に、必要に応じナトリウム、カリウ
ム、マグネシウム、コバルト、塩素、燐酸、硫酸、及び
その他のイオンを生成する事のできる無機塩類等を添加
した培地に本菌を接種し、振とう培養を行う。この際、
培養温度は２０〜５０℃が、また培養時間は１２〜１２
０時間が好適である。得られた培養液を遠心分離により
除菌し、その上清中の酵素を加熱処理により失活させる
。その後濃縮を行い、例えばこれを活性炭カラムに吸着
させる。蒸留水でフルクトース、グルコース、その他の
直鎖オリゴ糖を溶出させた後、５０％メタノール水溶液
にて溶出を行う。この分画中に環状イヌロオリゴ糖が得
られるので、その分画を濃縮乾固すると所期の環状イヌ
ロオリゴ糖を得ることができる。
【００２０】また酵素を作用させる場合、例えば、前記
方法により培養を行った培養液を遠心分離により除菌し
、得られた濾液を作用させてもよいし、或いは該濾液に
さらに硫安（６５％飽和）を加え塩析を行い、析出した
沈殿物を遠心分離により取得し、少量の水に懸濁させた
後、透析を行い、得られる粗酵素液を作用させてもよい
。この培養濾液又は粗酵素液を例えば、ｐＨ７．０に調
整した０．０１−０．１Ｍのリン酸緩衝液中で約５％以
上の濃度にイヌリンに３０〜６０℃で３０分以上作用さ
せる事等によって所期の環状イヌロオリゴ糖が得られる
。もとより、精製酵素を作用させてもよく、かかる精製
酵素は例えば、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５
０Ｍ、ＳＰ−Ｔｏｙｏｅａｒｌ ６５０Ｍカラム（東
ソー社製商品名）によるイオン交換クロマトグラフィー
にて精製を行った後、ＴｏｙｏｐｅａｒｌＨＷ５５Ｆ（
東ソー社製商品名）でゲル濾過を行うことにより、ＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミド電気泳動により単一バンドを示
す酵素標本を得ることができる。
方法により培養を行った培養液を遠心分離により除菌し
、得られた濾液を作用させてもよいし、或いは該濾液に
さらに硫安（６５％飽和）を加え塩析を行い、析出した
沈殿物を遠心分離により取得し、少量の水に懸濁させた
後、透析を行い、得られる粗酵素液を作用させてもよい
。この培養濾液又は粗酵素液を例えば、ｐＨ７．０に調
整した０．０１−０．１Ｍのリン酸緩衝液中で約５％以
上の濃度にイヌリンに３０〜６０℃で３０分以上作用さ
せる事等によって所期の環状イヌロオリゴ糖が得られる
。もとより、精製酵素を作用させてもよく、かかる精製
酵素は例えば、ＤＥＡＥ−Ｔｏｙｏｐｅａｒｌ ６５
０Ｍ、ＳＰ−Ｔｏｙｏｅａｒｌ ６５０Ｍカラム（東
ソー社製商品名）によるイオン交換クロマトグラフィー
にて精製を行った後、ＴｏｙｏｐｅａｒｌＨＷ５５Ｆ（
東ソー社製商品名）でゲル濾過を行うことにより、ＳＤ
Ｓ−ポリアクリルアミド電気泳動により単一バンドを示
す酵素標本を得ることができる。
【００２１】バチルス・サーキュランス− ＭＣＩ−
２５５４号菌由来の酵素標本の至適ｐＨは７．５であり
、また４５℃で最大活性を示した。ｐＨは６．０〜１０
．０の範囲で安定であり、３０分間の熱処理では５０℃
まで安定であった。ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳
動による分子量は約２０万であった。ゲル濾過クロマト
グラフィーによる分子量は、約６０万であった。上述の
方法により、通常、６〜８個のフルクトースがβ−２，
１−フラクシド結合した環状イヌロオリゴ糖が得られる
。
２５５４号菌由来の酵素標本の至適ｐＨは７．５であり
、また４５℃で最大活性を示した。ｐＨは６．０〜１０
．０の範囲で安定であり、３０分間の熱処理では５０℃
まで安定であった。ＳＤＳ−ポリアクリルアミド電気泳
動による分子量は約２０万であった。ゲル濾過クロマト
グラフィーによる分子量は、約６０万であった。上述の
方法により、通常、６〜８個のフルクトースがβ−２，
１−フラクシド結合した環状イヌロオリゴ糖が得られる
。
【００２２】
【実施例】以下に実施例をあげて本発明の方法、さらに
具体的に説明するが、本発明はその要旨を越えない限り
これらに限定されるものではない。
具体的に説明するが、本発明はその要旨を越えない限り
これらに限定されるものではない。
【００２３】（実施例１）イヌリン４％、イーストエキ
ストラクト０．２％、硝酸ナトリウム０．５％、マグネ
シウム０．０５％、塩化カリウム０．０５％、リン酸−
カリウム０．０５％、塩化第二鉄０．００１％を含んだ
培地１５０ｍｌをｐＨ７．０に調整して１２０℃２０分
間蒸気滅菌した。この滅菌した培地にバチルス・サーキ
ュランス ＭＣＩ−２５５４号菌を１白金耳接種し、
１６０ｒｐｍ で３０℃、３０時間培養した。培養液の
６６０ｎｍでのＯＤ値は約６であった。培養終了後遠心
分離により菌体を除去し、培養濾液を得た。得られた培
養濾液を１００℃で１０分間加熱処理することにより、
酵素を失活させ、約１０ｍｌにまで減圧濃縮した。この
液を活性炭カラム（活性炭５０ｇとセライトＮｏ．５３
５ ５０ｇの混合物を蒸留水にて充填）に吸着させ蒸
留水１リットルを流したのち５０％メタノール水溶液で
溶出した。溶出ピークを集めて減圧濃縮にて乾固して、
環状イヌロオリゴ糖の粉末を得た。０．５Ｍの硫酸アン
モニウムでイオン型にしたＱＡＥ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
（東ソー社製商品名）をカラムに詰め、８０％メタノー
ルで平衡化した後に得られた環状イヌロオリゴ糖を８０
％メタノールに溶かしたものを乗せ、８０％メタノール
で溶出させ分取したところ、フラクトースが６〜８、分
子結合した環状イヌロオリゴ糖（ＣＩ−６，ＣＩ−７，
ＣＩ−８）溶液をそれぞれ得た。減圧濃縮にて乾固した
結果、ＣＩ−６を１．２３ｇ、ＣＩ−７を０．４４ｇ、
ＣＩ−８を０．０９ｇ得た。
ストラクト０．２％、硝酸ナトリウム０．５％、マグネ
シウム０．０５％、塩化カリウム０．０５％、リン酸−
カリウム０．０５％、塩化第二鉄０．００１％を含んだ
培地１５０ｍｌをｐＨ７．０に調整して１２０℃２０分
間蒸気滅菌した。この滅菌した培地にバチルス・サーキ
ュランス ＭＣＩ−２５５４号菌を１白金耳接種し、
１６０ｒｐｍ で３０℃、３０時間培養した。培養液の
６６０ｎｍでのＯＤ値は約６であった。培養終了後遠心
分離により菌体を除去し、培養濾液を得た。得られた培
養濾液を１００℃で１０分間加熱処理することにより、
酵素を失活させ、約１０ｍｌにまで減圧濃縮した。この
液を活性炭カラム（活性炭５０ｇとセライトＮｏ．５３
５ ５０ｇの混合物を蒸留水にて充填）に吸着させ蒸
留水１リットルを流したのち５０％メタノール水溶液で
溶出した。溶出ピークを集めて減圧濃縮にて乾固して、
環状イヌロオリゴ糖の粉末を得た。０．５Ｍの硫酸アン
モニウムでイオン型にしたＱＡＥ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ
（東ソー社製商品名）をカラムに詰め、８０％メタノー
ルで平衡化した後に得られた環状イヌロオリゴ糖を８０
％メタノールに溶かしたものを乗せ、８０％メタノール
で溶出させ分取したところ、フラクトースが６〜８、分
子結合した環状イヌロオリゴ糖（ＣＩ−６，ＣＩ−７，
ＣＩ−８）溶液をそれぞれ得た。減圧濃縮にて乾固した
結果、ＣＩ−６を１．２３ｇ、ＣＩ−７を０．４４ｇ、
ＣＩ−８を０．０９ｇ得た。
【００２４】（実施例２）実施例１で得られた培養濾液
１００ｍｌを限外濾過で１０ｍｌまで濃縮して酵素液を
得た後、１０％のイヌリンを含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液４０ｍｌに加えて５０℃で２時間反応させた。反応液
を加熱し酵素を失活させた後、活性炭カラムクロマトグ
ラフィーを行い５０％メタノールにて溶出させ、溶出液
に環状イヌロオリゴ糖を得た。これを減圧濃縮後、実施
例１と同様にＱＡＥ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（東ソー社製
商品名）により、環状イヌロオリゴ糖を分離させ、減圧
濃縮にて乾固した結果、ＣＩ−６を１．７ｇ、ＣＩ−７
を０．９ｇ、ＣＩ−８を０．１１ｇ得た。
１００ｍｌを限外濾過で１０ｍｌまで濃縮して酵素液を
得た後、１０％のイヌリンを含む０．０５Ｍリン酸緩衝
液４０ｍｌに加えて５０℃で２時間反応させた。反応液
を加熱し酵素を失活させた後、活性炭カラムクロマトグ
ラフィーを行い５０％メタノールにて溶出させ、溶出液
に環状イヌロオリゴ糖を得た。これを減圧濃縮後、実施
例１と同様にＱＡＥ−ｔｏｙｏｐｅａｒｌ（東ソー社製
商品名）により、環状イヌロオリゴ糖を分離させ、減圧
濃縮にて乾固した結果、ＣＩ−６を１．７ｇ、ＣＩ−７
を０．９ｇ、ＣＩ−８を０．１１ｇ得た。
【００２５】
【発明の効果】本発明のバチルス・サーキュランスＭＣ
Ｉ−２５５４（微工研菌寄第１１９４０号）由来のＣＦ
Ｔａｓｅはβ−２，１−フラクトースオリゴ糖又はイヌ
リンから環状イヌロオリゴ糖を良好に生産するので、環
状イヌロオリゴ糖を約８０％以上の高収率で製造するこ
とができる。環状イヌロオリゴ糖は食品の分野のみなら
ず広い分野での包接化合物としての利用が期待できる。
Ｉ−２５５４（微工研菌寄第１１９４０号）由来のＣＦ
Ｔａｓｅはβ−２，１−フラクトースオリゴ糖又はイヌ
リンから環状イヌロオリゴ糖を良好に生産するので、環
状イヌロオリゴ糖を約８０％以上の高収率で製造するこ
とができる。環状イヌロオリゴ糖は食品の分野のみなら
ず広い分野での包接化合物としての利用が期待できる。
Claims (3)
- 【請求項１】 バチルス・サーキュランスＭＣＩ−２
５５４（微工研菌寄第１１９４０号）由来のサイクロイ
ヌロオリゴ サッカライド フラクタノトランスフ
ェラーゼをβ−２，１−フラクトースオリゴ糖に作用さ
せることを特徴とする環状イヌロオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項２】 バチルス・サーキュランスＭＣＩ−２
５５４（微工研菌寄第１１９４０号）由来のサイクロイ
ヌロオリゴ サッカライド フラクタノトランスフ
ェラーゼをイヌリンに作用させることを特徴とする環状
イヌロオリゴ糖の製造方法。 - 【請求項３】 環状イヌロオリゴ糖が６〜８個のフル
クトース分子から成ることを特徴とする請求項１または
請求項２記載の環状イヌロオリゴ糖の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3003983A JPH04237496A (ja) | 1991-01-17 | 1991-01-17 | 環状イヌロオリゴ糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3003983A JPH04237496A (ja) | 1991-01-17 | 1991-01-17 | 環状イヌロオリゴ糖の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04237496A true JPH04237496A (ja) | 1992-08-25 |
Family
ID=11572273
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3003983A Pending JPH04237496A (ja) | 1991-01-17 | 1991-01-17 | 環状イヌロオリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04237496A (ja) |
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6423833B1 (en) * | 1998-05-05 | 2002-07-23 | Steven J. Catani | Functional sugar polymers from inexpensive sugar sources and apparatus for preparing same |
| JP2015526711A (ja) * | 2012-06-26 | 2015-09-10 | セントル ホスピタリエ リージョナル ユニヴェルシテール ドゥ リールＣｅｎｔｒｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｅｒ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｉｒｅ ｄｅ Ｌｉｌｌｅ | Ｍａｌｄｉ−ｔｏｆ質量分析による侵襲性真菌感染症の体外診断法 |
| US9175006B2 (en) | 2009-06-17 | 2015-11-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions and methods for cyclofructans as separation agents |
-
1991
- 1991-01-17 JP JP3003983A patent/JPH04237496A/ja active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6423833B1 (en) * | 1998-05-05 | 2002-07-23 | Steven J. Catani | Functional sugar polymers from inexpensive sugar sources and apparatus for preparing same |
| US9175006B2 (en) | 2009-06-17 | 2015-11-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Compositions and methods for cyclofructans as separation agents |
| JP2015526711A (ja) * | 2012-06-26 | 2015-09-10 | セントル ホスピタリエ リージョナル ユニヴェルシテール ドゥ リールＣｅｎｔｒｅ Ｈｏｓｐｉｔａｌｉｅｒ Ｒｅｇｉｏｎａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔａｉｒｅ ｄｅ Ｌｉｌｌｅ | Ｍａｌｄｉ−ｔｏｆ質量分析による侵襲性真菌感染症の体外診断法 |
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