JPH04243893A - 化学療法剤 - Google Patents
化学療法剤Info
- Publication number
- JPH04243893A JPH04243893A JP3140295A JP14029591A JPH04243893A JP H04243893 A JPH04243893 A JP H04243893A JP 3140295 A JP3140295 A JP 3140295A JP 14029591 A JP14029591 A JP 14029591A JP H04243893 A JPH04243893 A JP H04243893A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- ras
- val
- cys
- amino acid
- trans
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
- C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
- C07K5/10—Tetrapeptides
- C07K5/1002—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral
- C07K5/1005—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
- C07K5/1013—Tetrapeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing O or S as heteroatoms, e.g. Cys, Ser
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】ｒａｓ発がん遺伝子タンパク質、Ｒａｓが
機能し、正常細胞をがん細胞に形質転換するためには細
胞膜に局在しなければならない。（ギブズ（Ｇｉｂｂｓ
） 等、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．第５３巻、１７
１〜２８６頁（１９８９年））局在はＲａｓタンパク質
ファルネシル化のときに起こる。Ｒａｓのがん細胞に於
ける形態は突然変異を有し、このタンパク質と正常細胞
に於けるＲａｓと区別される。この局在に翻訳後少なく
とも３段階の修飾が必要であり、３段階の修飾は全てＲ
ａｓのＣ末端で生じる。 ＲａｓＣ末端は“Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘ
ａａ”ボックス（Ａａａは脂肪族アミノ酸であり、Ｘａ
ａは任意のアミノ酸である）と呼ばれる配列モチーフを
含む（ウィルムセン（Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ） 等、ネイ
チュア第３１０巻、５８３〜５８６頁（１９８４年））
。このモチーフを有する他のタンパク質としてはＲｈｏ
、真菌接合因子、核ラミン及びトランスデューシンのγ
サブユニットのようなｒａｓ関連ＧＴＰ結合タンパク質
がある。
機能し、正常細胞をがん細胞に形質転換するためには細
胞膜に局在しなければならない。（ギブズ（Ｇｉｂｂｓ
） 等、Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌ．Ｒｅｖ．第５３巻、１７
１〜２８６頁（１９８９年））局在はＲａｓタンパク質
ファルネシル化のときに起こる。Ｒａｓのがん細胞に於
ける形態は突然変異を有し、このタンパク質と正常細胞
に於けるＲａｓと区別される。この局在に翻訳後少なく
とも３段階の修飾が必要であり、３段階の修飾は全てＲ
ａｓのＣ末端で生じる。 ＲａｓＣ末端は“Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘ
ａａ”ボックス（Ａａａは脂肪族アミノ酸であり、Ｘａ
ａは任意のアミノ酸である）と呼ばれる配列モチーフを
含む（ウィルムセン（Ｗｉｌｌｕｍｓｅｎ） 等、ネイ
チュア第３１０巻、５８３〜５８６頁（１９８４年））
。このモチーフを有する他のタンパク質としてはＲｈｏ
、真菌接合因子、核ラミン及びトランスデューシンのγ
サブユニットのようなｒａｓ関連ＧＴＰ結合タンパク質
がある。
【０００２】Ｒａｓのイソプレノイドファルネシルによ
るファルネシル化はチオ−エーテル結合によりＣｙｓに
生体内で生じる（ハンコック（Ｈａｎｃｏｃｋ） 等、
セル第５７巻、１１６７頁（１９８９年）、カセイ（Ｃ
ａｓｅｙ）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
． 米国第８６巻、８３２３頁（１９８９年））。更に
Ｈａ−Ｒａｓ及びＮ−ＲａｓはＣ末端Ｃｙｓファルネシ
ル受容体近傍Ｃｙｓ残基にチオエステルによりパルミト
イル化される（グチアレツ（Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ） 等
、ＥＭＢＯＪ．第８巻、１０９３〜１０９８頁（１９８
９年）、ハンコック等、セル第５７巻、１１６７〜１１
７７頁（１９８９年））。Ｋｉ−Ｒａｓはパルミチン酸
受容体Ｃｙｓが無い。ＲａｓＣ末端に於ける最後の３個
のアミノ酸がタンパク質分解的に除去されメチルエステ
ル化は新しいＣ末端で生じる（ハンコック等、同書）。 真菌接合因子と哺乳類核ラミニンは同じ修飾段階を行な
う（アンダーレッグ（Ａｎｄｅｒｅｇｇ）等、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６３巻、１８２３６頁（１９８８
年）、ファーンスウォース（Ｆａｒｎｓｗｏｒｔｈ）等
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６４巻、２０４２２頁
（１９８９年））。
るファルネシル化はチオ−エーテル結合によりＣｙｓに
生体内で生じる（ハンコック（Ｈａｎｃｏｃｋ） 等、
セル第５７巻、１１６７頁（１９８９年）、カセイ（Ｃ
ａｓｅｙ）等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ
． 米国第８６巻、８３２３頁（１９８９年））。更に
Ｈａ−Ｒａｓ及びＮ−ＲａｓはＣ末端Ｃｙｓファルネシ
ル受容体近傍Ｃｙｓ残基にチオエステルによりパルミト
イル化される（グチアレツ（Ｇｕｔｉｅｒｒｅｚ） 等
、ＥＭＢＯＪ．第８巻、１０９３〜１０９８頁（１９８
９年）、ハンコック等、セル第５７巻、１１６７〜１１
７７頁（１９８９年））。Ｋｉ−Ｒａｓはパルミチン酸
受容体Ｃｙｓが無い。ＲａｓＣ末端に於ける最後の３個
のアミノ酸がタンパク質分解的に除去されメチルエステ
ル化は新しいＣ末端で生じる（ハンコック等、同書）。 真菌接合因子と哺乳類核ラミニンは同じ修飾段階を行な
う（アンダーレッグ（Ａｎｄｅｒｅｇｇ）等、Ｊ．Ｂｉ
ｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６３巻、１８２３６頁（１９８８
年）、ファーンスウォース（Ｆａｒｎｓｗｏｒｔｈ）等
、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６４巻、２０４２２頁
（１９８９年））。
【０００３】Ｒａｓファルネシル化の生体内阻害はロバ
スタチン（メルクアンドカンパニー．ラーウェイ．ニュ
ージャージー）とコンパクチン（ハンコック等、同書、
カセイ等、同書、シャファー（Ｓｃｈａｆｅｒ） 等、
サイエンス第２４５巻、３７９頁（１９８９年）により
示されている。これらの薬剤はポリイソプレノイド、フ
ァルネシル前駆体を生産するためのＨＭＧ−ＣｏＡ還元
酵素である律速酵素を阻害する。前駆体としてファルネ
シル−ＰＰｉ（ＦＰＰ）１ を用いる推定のファルネシ
ル−タンパク質トランスフェラーゼがＲａｓファルネシ
ル化に関与することが推測される（ゴルドスタイン（Ｇ
ｏｌｄｓｔｅｉｎ） 等、ネイチュア第３４３巻、４２
５〜４３０頁（１９９０年））。
スタチン（メルクアンドカンパニー．ラーウェイ．ニュ
ージャージー）とコンパクチン（ハンコック等、同書、
カセイ等、同書、シャファー（Ｓｃｈａｆｅｒ） 等、
サイエンス第２４５巻、３７９頁（１９８９年）により
示されている。これらの薬剤はポリイソプレノイド、フ
ァルネシル前駆体を生産するためのＨＭＧ−ＣｏＡ還元
酵素である律速酵素を阻害する。前駆体としてファルネ
シル−ＰＰｉ（ＦＰＰ）１ を用いる推定のファルネシ
ル−タンパク質トランスフェラーゼがＲａｓファルネシ
ル化に関与することが推測される（ゴルドスタイン（Ｇ
ｏｌｄｓｔｅｉｎ） 等、ネイチュア第３４３巻、４２
５〜４３０頁（１９９０年））。
【０００４】本発明はｒａｓ発がん遺伝子タンパク質の
酵素触媒によるファルネシル化を阻害する化合物、１種
以上の本発明の化合物を包含している化学療法組成物及
びファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素の
阻害によりＲａｓタンパク質のファルネシル化を阻害す
る方法を含む。
酵素触媒によるファルネシル化を阻害する化合物、１種
以上の本発明の化合物を包含している化学療法組成物及
びファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ酵素の
阻害によりＲａｓタンパク質のファルネシル化を阻害す
る方法を含む。
【０００５】本発明の化合物はアミノ酸配列Ｃｙｓ−Ａ
ａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａａ（式中Ａａａ１ は脂肪
族アミノ酸であり、Ａａａ２ は脂肪族アミノ酸であり
、Ｘａａは任意のアミノ酸である。）を包含している。 脂肪族アミノ酸としてはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩ
ｌｅがある。
ａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａａ（式中Ａａａ１ は脂肪
族アミノ酸であり、Ａａａ２ は脂肪族アミノ酸であり
、Ｘａａは任意のアミノ酸である。）を包含している。 脂肪族アミノ酸としてはＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ及びＩ
ｌｅがある。
【０００６】好適な化合物はＡａａ１ がＶａｌである
化合物である。好適な化合物はまたＡａａ２ がＬｅｕ
、Ｉｌｅ又はＶａｌである化合物である。好適な化合物
はまたＸａａがＳｅｒ又はＭｅｔである化合物である。 更に好適な化合物はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ、
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ及びＣｙｓ−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｍｅｔである。
化合物である。好適な化合物はまたＡａａ２ がＬｅｕ
、Ｉｌｅ又はＶａｌである化合物である。好適な化合物
はまたＸａａがＳｅｒ又はＭｅｔである化合物である。 更に好適な化合物はＣｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ、
Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔ及びＣｙｓ−Ｖａｌ−
Ｖａｌ−Ｍｅｔである。
【０００７】Ｒａｓタンパク質ファルネシル化の阻害は
Ｒａｓが正常細胞をがん細胞に形質転換する能力を遮断
する。本発明の化合物は細胞膜に於けるＲａｓ局在を阻
害し、Ｒａｓ機能の負の優性阻害剤として作用すること
ができる可溶性Ｒａｓを生じる。がん細胞に於ける可溶
性Ｒａｓは負の優性阻害剤になることができるが正常細
胞に於ける可溶性Ｒａｓは阻害剤とならない。
Ｒａｓが正常細胞をがん細胞に形質転換する能力を遮断
する。本発明の化合物は細胞膜に於けるＲａｓ局在を阻
害し、Ｒａｓ機能の負の優性阻害剤として作用すること
ができる可溶性Ｒａｓを生じる。がん細胞に於ける可溶
性Ｒａｓは負の優性阻害剤になることができるが正常細
胞に於ける可溶性Ｒａｓは阻害剤とならない。
【０００８】Ｒａｓの細胞質ゾル局在（Ｃｙｓ−Ａａａ
１ −Ａａａ２ −Ｘａａボックスの無い膜ドメイン）
及び活性（傷害ＧＴＰａｓｅ、ＧＴＰに結合したままで
ある）形態は膜結合Ｒａｓ機能の負の優性Ｒａｓ阻害剤
として作用する（ギブズ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、６６３０〜６６３４頁
（１９８９年））。正常なＧＴＰａｓｅを有するＲａｓ
の細胞質ゾル局在形態は阻害剤として作用しない。ギブ
ズ等同書はアフリカツメガエル卵母細胞と哺乳類細胞に
於てこの作用を示している。Ｒａｓファルネシル化を遮
断するために本発明の化合物を投与すると膜内のＲａｓ
量を減少させるばかりでなくＲａｓの細胞質ゾルプール
も生じる。活性Ｒａｓを有する腫瘍細胞では細胞質ゾル
プールは膜結合Ｒａｓ機能の別のアンタゴニストとして
作用する。正常Ｒａｓを有する正常細胞ではＲａｓの細
胞質ゾルプールはアンタゴニストとして作用しない。フ
ァルネシル化を完全に阻害しない場合には他のファルネ
シル化タンパク質がその機能により持続することができ
る。
１ −Ａａａ２ −Ｘａａボックスの無い膜ドメイン）
及び活性（傷害ＧＴＰａｓｅ、ＧＴＰに結合したままで
ある）形態は膜結合Ｒａｓ機能の負の優性Ｒａｓ阻害剤
として作用する（ギブズ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃ
ａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、６６３０〜６６３４頁
（１９８９年））。正常なＧＴＰａｓｅを有するＲａｓ
の細胞質ゾル局在形態は阻害剤として作用しない。ギブ
ズ等同書はアフリカツメガエル卵母細胞と哺乳類細胞に
於てこの作用を示している。Ｒａｓファルネシル化を遮
断するために本発明の化合物を投与すると膜内のＲａｓ
量を減少させるばかりでなくＲａｓの細胞質ゾルプール
も生じる。活性Ｒａｓを有する腫瘍細胞では細胞質ゾル
プールは膜結合Ｒａｓ機能の別のアンタゴニストとして
作用する。正常Ｒａｓを有する正常細胞ではＲａｓの細
胞質ゾルプールはアンタゴニストとして作用しない。フ
ァルネシル化を完全に阻害しない場合には他のファルネ
シル化タンパク質がその機能により持続することができ
る。
【０００９】ファルネシル−トランスフェラーゼ活性は
化合物投与量を調節することにより低下又は完全に阻害
することができる。化合物投与量を調節することによっ
てファルネシル−トランスフェラーゼ酵素活性を低下さ
せることは酵素を使用する他の代謝過程を妨害するとい
った起こり得る望ましくない副作用を避けるために有用
である。これらの化合物及びその類縁体はファルネシル
−タンパク質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファ
ルネシル−タンパク質トランスフェラーゼはＲａｓボッ
クスのＣｙｓをファルネシル基で共有結合的に修飾する
ためにファルネシル−ピロリン酸を使用する。ＨＭＧ−
ＣｏＡ還元酵素を阻害することによるファルネシルピロ
リン酸生合成の阻害はＲａｓ膜局在を生体内で遮断しＲ
ａｓ機能を阻害する。ファルネシル−タンパク質トラン
スフェラーゼの阻害は更に特異的であり、一般の阻害剤
又はイソプレン生合成より副作用が少ない。種々のＣｙ
ｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａａボックスは一文字
アミノ酸略語により以下で確認される。
化合物投与量を調節することにより低下又は完全に阻害
することができる。化合物投与量を調節することによっ
てファルネシル−トランスフェラーゼ酵素活性を低下さ
せることは酵素を使用する他の代謝過程を妨害するとい
った起こり得る望ましくない副作用を避けるために有用
である。これらの化合物及びその類縁体はファルネシル
−タンパク質トランスフェラーゼの阻害剤である。ファ
ルネシル−タンパク質トランスフェラーゼはＲａｓボッ
クスのＣｙｓをファルネシル基で共有結合的に修飾する
ためにファルネシル−ピロリン酸を使用する。ＨＭＧ−
ＣｏＡ還元酵素を阻害することによるファルネシルピロ
リン酸生合成の阻害はＲａｓ膜局在を生体内で遮断しＲ
ａｓ機能を阻害する。ファルネシル−タンパク質トラン
スフェラーゼの阻害は更に特異的であり、一般の阻害剤
又はイソプレン生合成より副作用が少ない。種々のＣｙ
ｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａａボックスは一文字
アミノ酸略語により以下で確認される。
【００１０】Ｒａｓ− ［３ Ｈ］メバロン酸（３５Ｃ
ｉ／ミリモル）と［３ Ｈ］ファルネシル−ＰＰｉ（Ｆ
ＰＰ）ＦＰＰ（２０Ｃｉ／ミリモル）のポリイソプレニ
ル化をニューイングランドスクレアから購入した。［１
４Ｃ］ＦＰＰ（４９．７ｍＣｉ ／ミリモル）を部分精
製プレニルトランスフェラーゼ［４−１４Ｃ］イソペン
チル−ＰＰｉ（４７．９ｍＣｉ ／ミリモル、アメーシ
ャム）とゲラニル−ＰＰｉから酵素的に調製した。反応
液は２８０ピコモル（１０μｃｉ）の［３ Ｈ］メバロ
ン酸、５００ピコモル（０．０２５μＣｉ）の［１４Ｃ
］ＦＰＰ又は２５ピコモル（０．５μＣｉ）の［３Ｈ］
ＦＰＰを含有した。５０μｌ の標準反応に於て２５０
ピコモルの大腸菌から精製したＲａｓ（ギブズ等、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、
６６３０〜６６３４頁（１９８９年））をウサギ網状赤
血球溶解物（プロメガ、Ｌ４２１０）又は組織抽出液（
１０，０００ｘｇ上清、１０ｍｇ／ｍｌ）に加えた。緩
衝条件は５００ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ８．０／５０ｍ
ＭＭｇＣｌ２ の１／１０容量又は５００ｍＭＮａＨｅ
ｐｅｓ、ｐＨ７．５／５０ｍＭＭｇＣｌ２ ／５０ｍＭ
ジチオトレイトールの１／１０容量を添加して調整した
。このトリス緩衝検定に於て反応液を２４℃で１時間温
置した。Ｈｅｐｅｓ緩衝検定に於ける反応速度は少なく
とも４倍以上であり、温置は２４℃で１０分であった。 組織抽出液を前述の通り５０ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ８
．０／１ｍＭＥＧＴＡ／１ｍＭＭｇＣｌ２ ／１ｍＭジ
チオトレイトール／１０μｌ ／ｍｌアプロチニン／０
．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリドを含む緩
衝液中［（エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］
四酢酸から調製した。
ｉ／ミリモル）と［３ Ｈ］ファルネシル−ＰＰｉ（Ｆ
ＰＰ）ＦＰＰ（２０Ｃｉ／ミリモル）のポリイソプレニ
ル化をニューイングランドスクレアから購入した。［１
４Ｃ］ＦＰＰ（４９．７ｍＣｉ ／ミリモル）を部分精
製プレニルトランスフェラーゼ［４−１４Ｃ］イソペン
チル−ＰＰｉ（４７．９ｍＣｉ ／ミリモル、アメーシ
ャム）とゲラニル−ＰＰｉから酵素的に調製した。反応
液は２８０ピコモル（１０μｃｉ）の［３ Ｈ］メバロ
ン酸、５００ピコモル（０．０２５μＣｉ）の［１４Ｃ
］ＦＰＰ又は２５ピコモル（０．５μＣｉ）の［３Ｈ］
ＦＰＰを含有した。５０μｌ の標準反応に於て２５０
ピコモルの大腸菌から精製したＲａｓ（ギブズ等、Ｐｒ
ｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、
６６３０〜６６３４頁（１９８９年））をウサギ網状赤
血球溶解物（プロメガ、Ｌ４２１０）又は組織抽出液（
１０，０００ｘｇ上清、１０ｍｇ／ｍｌ）に加えた。緩
衝条件は５００ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ８．０／５０ｍ
ＭＭｇＣｌ２ の１／１０容量又は５００ｍＭＮａＨｅ
ｐｅｓ、ｐＨ７．５／５０ｍＭＭｇＣｌ２ ／５０ｍＭ
ジチオトレイトールの１／１０容量を添加して調整した
。このトリス緩衝検定に於て反応液を２４℃で１時間温
置した。Ｈｅｐｅｓ緩衝検定に於ける反応速度は少なく
とも４倍以上であり、温置は２４℃で１０分であった。 組織抽出液を前述の通り５０ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ８
．０／１ｍＭＥＧＴＡ／１ｍＭＭｇＣｌ２ ／１ｍＭジ
チオトレイトール／１０μｌ ／ｍｌアプロチニン／０
．５ｍＭフェニルメチルスルホニルフルオリドを含む緩
衝液中［（エチレンビス（オキシエチレンニトリロ）］
四酢酸から調製した。
【００１１】基質として用いられるＲａｓタンパク質を
大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ） で発現させ精製した。ギブズ
等、同書、ギブズ等Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． 米国第８５巻、５０２６〜５０３０頁（１９８
８年）。異なったＣｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘ
ａａボックス配列を有するＲａｓタンパク質をギブズ等
同書に記載されるオリゴヌクレオチドリンカーにより作
製した。大腸菌発現ＲｈｏはＪ．Ｃ．ラカルのギフトで
あった。ゲラニオールとトランス、トランスファルネソ
ールはアルドリッヒから購入した。ＥＰＰ、ゲラニル−
ＰＰｉとジメチルアリル−ＰＰｉはデビッソン等、Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．第１１０巻、１３０〜１
４４頁（１９８５年）に記載される通り合成した。ゲラ
ニルゲラニオールとゲラニルゲラニル−ＰＰｉはＤｒ．
タニガワテツオ（クラレ社、東京）とオグラキョウゾ
ウ（東北大、仙台）から各々入手した。化合物はその成
分アミノ酸から通常のペプチド合成手法好ましくは固相
技術により合成することができる。次いでペプチドを逆
相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精
製する。
大腸菌（Ｅ．Ｃｏｌｉ） で発現させ精製した。ギブズ
等、同書、ギブズ等Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ． 米国第８５巻、５０２６〜５０３０頁（１９８
８年）。異なったＣｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘ
ａａボックス配列を有するＲａｓタンパク質をギブズ等
同書に記載されるオリゴヌクレオチドリンカーにより作
製した。大腸菌発現ＲｈｏはＪ．Ｃ．ラカルのギフトで
あった。ゲラニオールとトランス、トランスファルネソ
ールはアルドリッヒから購入した。ＥＰＰ、ゲラニル−
ＰＰｉとジメチルアリル−ＰＰｉはデビッソン等、Ｍｅ
ｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ．第１１０巻、１３０〜１
４４頁（１９８５年）に記載される通り合成した。ゲラ
ニルゲラニオールとゲラニルゲラニル−ＰＰｉはＤｒ．
タニガワテツオ（クラレ社、東京）とオグラキョウゾ
ウ（東北大、仙台）から各々入手した。化合物はその成
分アミノ酸から通常のペプチド合成手法好ましくは固相
技術により合成することができる。次いでペプチドを逆
相高性能液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）により精
製する。
【００１２】標準のペプチド合成方法は例えば次の研究
シュレーデル（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ） 等、“ザペプチ
ド”Ｉ巻、アカデミックプレス１９６５年又はボダンス
ッキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ） 等、“ペプチド合成”
、インターサイエンスパブリッシャーズ１９６６年又は
マクオミー（編集）“プロテクティブグループスインオ
ーガニックケミストリー”プレナムプレス１９７３年又
はバラニー（Ｂａｒａｎｙ）等、“ザペプチドアナリシ
スシンセシスバイオロジー”第２巻、１章アカデミック
プレス１９８０年に開示されている。これらの研究の開
示を引用する。ペプチドをアプライドバイオシステムス
モデル４３０Ａペプチドシンセサイザーで調製し逆相Ｈ
ＰＬＣで精製しアミノ酸分析及び高速原子衝撃質量分析
によって確認した。化学ファルネシル化はトランス、ト
ランス−ファルネシルブロミド（アルドリッヒ）を保護
されていないペプチドと反応させて得た。
シュレーデル（Ｓｃｈｒｏｅｄｅｒ） 等、“ザペプチ
ド”Ｉ巻、アカデミックプレス１９６５年又はボダンス
ッキー（Ｂｏｄａｎｓｚｋｙ） 等、“ペプチド合成”
、インターサイエンスパブリッシャーズ１９６６年又は
マクオミー（編集）“プロテクティブグループスインオ
ーガニックケミストリー”プレナムプレス１９７３年又
はバラニー（Ｂａｒａｎｙ）等、“ザペプチドアナリシ
スシンセシスバイオロジー”第２巻、１章アカデミック
プレス１９８０年に開示されている。これらの研究の開
示を引用する。ペプチドをアプライドバイオシステムス
モデル４３０Ａペプチドシンセサイザーで調製し逆相Ｈ
ＰＬＣで精製しアミノ酸分析及び高速原子衝撃質量分析
によって確認した。化学ファルネシル化はトランス、ト
ランス−ファルネシルブロミド（アルドリッヒ）を保護
されていないペプチドと反応させて得た。
【００１３】酵素反応物をＳＤＳ−ＰＡＧＥ（硫酸ドデ
シルナトリウム／ポリアクリルアミドゲル電気泳動）又
は免疫沈降によって分析した。ゲル分析の場合、各標識
反応を１％ＳＤＳ／１００ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ６．
８／１０％グリセロール／１％２−メルカプトエタノー
ルを含む緩衝液に３分間煮沸し１３．７％ポリアクリル
アミドゲルに直接充填した。放射能標識Ｒａｓをエンラ
イトニング（ニューイングランドヌクレア）でフルオロ
グラフィー増強した後オートラジオグラフィーで可視化
した。放射能標識Ｒａｓの免疫沈降の場合、反応液をま
ずボルディエーの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． 第
２５６巻、１６０４〜１６０７頁（１９８１年）の変法
を用いてトリトンＸ−１１４で抽出した。１％トリトン
Ｘ−１１４（ピアス）のアリコート（１５０μｌ ）を
５０μｌ の反応混合液に加えてトリトンＸ−１１４最
終濃度０．７５％を得た。氷上で１０分後、試験管を３
７℃浴に３分間移した。次いで濁った溶液を１０，００
０ｘｇで５分間室温で遠心分離した。上の方の水相を除
去し、洗浄相を冷却リン酸緩衝食塩水１５０μｌ とセ
ファロース−タンパク質Ａビーズに結合したＲａｓモノ
クローナル抗体Ｙ１３−２５９（グチアレツ（Ｇｕｔｉ
ｅｒｒｅｚ） 等、ＥＭＢＯＪ．第８巻、１０９３〜１
０９８頁（１９８９年）とハンコック等、セル第５７巻
、１１６７〜１１７７頁（１９８９年）１５０μｌ を
加えて希釈した。
シルナトリウム／ポリアクリルアミドゲル電気泳動）又
は免疫沈降によって分析した。ゲル分析の場合、各標識
反応を１％ＳＤＳ／１００ｍＭトリス−Ｃｌ、ｐＨ６．
８／１０％グリセロール／１％２−メルカプトエタノー
ルを含む緩衝液に３分間煮沸し１３．７％ポリアクリル
アミドゲルに直接充填した。放射能標識Ｒａｓをエンラ
イトニング（ニューイングランドヌクレア）でフルオロ
グラフィー増強した後オートラジオグラフィーで可視化
した。放射能標識Ｒａｓの免疫沈降の場合、反応液をま
ずボルディエーの方法（Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ． 第
２５６巻、１６０４〜１６０７頁（１９８１年）の変法
を用いてトリトンＸ−１１４で抽出した。１％トリトン
Ｘ−１１４（ピアス）のアリコート（１５０μｌ ）を
５０μｌ の反応混合液に加えてトリトンＸ−１１４最
終濃度０．７５％を得た。氷上で１０分後、試験管を３
７℃浴に３分間移した。次いで濁った溶液を１０，００
０ｘｇで５分間室温で遠心分離した。上の方の水相を除
去し、洗浄相を冷却リン酸緩衝食塩水１５０μｌ とセ
ファロース−タンパク質Ａビーズに結合したＲａｓモノ
クローナル抗体Ｙ１３−２５９（グチアレツ（Ｇｕｔｉ
ｅｒｒｅｚ） 等、ＥＭＢＯＪ．第８巻、１０９３〜１
０９８頁（１９８９年）とハンコック等、セル第５７巻
、１１６７〜１１７７頁（１９８９年）１５０μｌ を
加えて希釈した。
【００１４】検定は更に急速な別の方法によって分析す
ることができた。酵素の存在しない検定混合液を予め熱
的に平衡にした後、反応液をイソプレニル−タンパク質
トランスフェラーゼの添加により開始し、エタノール（
１ｍｌ）中１Ｍ ＨＣｌの添加により都合の良い時間
に停止する。急冷反応液を１５分間放置する（沈降過程
が完了するまで）。１００％エタノール２ｍｌを加えた
後、反応液をホワットマンＧＦ／Ｃフィルターにより減
圧濾過した。フィルターを１００％エタノール２ｍｌア
リコートで４回洗浄し、シンチレーション液体（１０ｍ
ｌ）と混合し、次いでベックマンＬＳ３８０１シンチレ
ーションカウンターで計数した。
ることができた。酵素の存在しない検定混合液を予め熱
的に平衡にした後、反応液をイソプレニル−タンパク質
トランスフェラーゼの添加により開始し、エタノール（
１ｍｌ）中１Ｍ ＨＣｌの添加により都合の良い時間
に停止する。急冷反応液を１５分間放置する（沈降過程
が完了するまで）。１００％エタノール２ｍｌを加えた
後、反応液をホワットマンＧＦ／Ｃフィルターにより減
圧濾過した。フィルターを１００％エタノール２ｍｌア
リコートで４回洗浄し、シンチレーション液体（１０ｍ
ｌ）と混合し、次いでベックマンＬＳ３８０１シンチレ
ーションカウンターで計数した。
【００１５】Ｒａｓのイソプレノイド部分の化学切断と
同定−放射能標識ＲａｓのトリトンＸ−１１４抽出と免
疫沈降によりタンパク質をカセイ等Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、８３２３−８３
２７頁（１９８９年）、マルテーゼ（Ｍａｌｔｅｓｅ）
等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６４巻、１８１６
８〜１８１７２頁（１９８９年）に記載される方法の変
法によって化学的に処理した。特にことわらない限り処
理は全て４℃で行なった。免疫複合体を１５％トリクロ
ロ酢酸１０容量を加えて沈降させ、次いで１ｍｌのアセ
トンで３連続処理（各々最低６時間）して脱脂した。次
いでアセトン沈降物をＣＨＣｌ３ ／メタノール（１：
２）７５０μｌ で１６時間２回温置した。次いで沈降
物を窒素の穏やかな流れ下で乾燥し０．５％ギ酸６００
μｌ に再浮遊させた。ＣＨ３ Ｉ（アルドリッヒ）１
００μｌ を加えて化学切断を開始した。反応液を３７
℃で１６時間暗所で温置した。３５％Ｎａ２ ＣＯ３
のアリコート（３０μｌ ）を加え次いで室温で一晩温
置した。反応液をＣＨＣｌ３ ／メタノール（９：１）
各々４００μｌ で３回抽出した。下の方の有機相をプ
ールし、窒素下で蒸発させて溶媒Ａ（５０％ＣＨ３ Ｃ
Ｎ／２５ｍＭＨ３ ＰＯ４ ）２００μｌ に再浮遊さ
せＨＰＬＣで分析した。抽出した切断生成物のアリコー
トを０．５×１５ｃｍＣ１８ＨＰＬＣカラム（バイダッ
ク）に装填した。溶離は０〜１５％溶媒Ｂ（１００％Ｃ
Ｈ３ ＣＮ／２５ｍＭＨ３ ＰＯ４ ）の２２．５ｍｌ
直線勾配を用いて１ｍｌ／分で次いで１５〜１００％溶
媒Ｂの急勾配（１ｍｌ／分で５６．５ｍｌ）を用いて得
た。溶離の吸収は２１０ｎｍに於ける吸光度を測定する
ことによって監視した。画分（２５μｌ ）を集めＲａ
ｄｉ−Ｓａｆｅシンチレーション液（ベックマン）２．
５ｍｌ中で放射能を測定した。
同定−放射能標識ＲａｓのトリトンＸ−１１４抽出と免
疫沈降によりタンパク質をカセイ等Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ
．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻、８３２３−８３
２７頁（１９８９年）、マルテーゼ（Ｍａｌｔｅｓｅ）
等、Ｊ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．第２６４巻、１８１６
８〜１８１７２頁（１９８９年）に記載される方法の変
法によって化学的に処理した。特にことわらない限り処
理は全て４℃で行なった。免疫複合体を１５％トリクロ
ロ酢酸１０容量を加えて沈降させ、次いで１ｍｌのアセ
トンで３連続処理（各々最低６時間）して脱脂した。次
いでアセトン沈降物をＣＨＣｌ３ ／メタノール（１：
２）７５０μｌ で１６時間２回温置した。次いで沈降
物を窒素の穏やかな流れ下で乾燥し０．５％ギ酸６００
μｌ に再浮遊させた。ＣＨ３ Ｉ（アルドリッヒ）１
００μｌ を加えて化学切断を開始した。反応液を３７
℃で１６時間暗所で温置した。３５％Ｎａ２ ＣＯ３
のアリコート（３０μｌ ）を加え次いで室温で一晩温
置した。反応液をＣＨＣｌ３ ／メタノール（９：１）
各々４００μｌ で３回抽出した。下の方の有機相をプ
ールし、窒素下で蒸発させて溶媒Ａ（５０％ＣＨ３ Ｃ
Ｎ／２５ｍＭＨ３ ＰＯ４ ）２００μｌ に再浮遊さ
せＨＰＬＣで分析した。抽出した切断生成物のアリコー
トを０．５×１５ｃｍＣ１８ＨＰＬＣカラム（バイダッ
ク）に装填した。溶離は０〜１５％溶媒Ｂ（１００％Ｃ
Ｈ３ ＣＮ／２５ｍＭＨ３ ＰＯ４ ）の２２．５ｍｌ
直線勾配を用いて１ｍｌ／分で次いで１５〜１００％溶
媒Ｂの急勾配（１ｍｌ／分で５６．５ｍｌ）を用いて得
た。溶離の吸収は２１０ｎｍに於ける吸光度を測定する
ことによって監視した。画分（２５μｌ ）を集めＲａ
ｄｉ−Ｓａｆｅシンチレーション液（ベックマン）２．
５ｍｌ中で放射能を測定した。
【００１６】Ｒａｓの試験管内ファルネシル化−Ｒａｓ
の試験管内ポリイソプレニル化を評価するために我々は
２種のＳ．セレビシアエ（Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｒａ
ｓ遺伝子工学産物［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
と［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳ（ＣＶ
ＬＳ＝Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ）ギブズ等、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻
、６６３０〜６６３４頁を使用した。両タンパク質は任
意のＣｙｓ残基を有しない酵母ＲＡＳ１の最初の１８４
個のアミノ酸を含有する。［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔ
ｅｒｍ）はＬｅｕ−１８５をＰｒｏ置換して終わる。［
Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳは最後のＰ
ｒｏ残基が配列−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｖ
ａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒを有する更に７個のＣ末端残基で
置換されている。精製Ｒａｓタンパク質をウサギ網状赤
血球溶解物と５μＭ ［３ Ｈ］メバロン酸又は１０μ
Ｍ ［１４Ｃ］ＦＰＰの存在下で温置した。両放射性前
駆体を［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳに
取込ませた。検出可能な標識はＲａｓが存在しないか又
は［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）を有する反応物
に見られず修飾が［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
ＣＶＬＳのユニークなＣ末端領域で起きることを示した
。ＲａｓはＲａｓ特異的モノクローナル抗体Ｙ１３−２
５９で免疫沈降により受容体タンパク質として明確に同
定された。正常及び発がん遺伝子両哺乳類ＨａＲａｓタ
ンパク質も基質として作用した。更にＣ末端配列−Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕを有するアプリシア（Ａｐ
ｌｙｓｉａ） Ｒｈｏを［３ Ｈ］メバロネートで放射
能標識した。
の試験管内ポリイソプレニル化を評価するために我々は
２種のＳ．セレビシアエ（Ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅ）Ｒａ
ｓ遺伝子工学産物［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
と［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳ（ＣＶ
ＬＳ＝Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ）ギブズ等、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国第８６巻
、６６３０〜６６３４頁を使用した。両タンパク質は任
意のＣｙｓ残基を有しない酵母ＲＡＳ１の最初の１８４
個のアミノ酸を含有する。［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔ
ｅｒｍ）はＬｅｕ−１８５をＰｒｏ置換して終わる。［
Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳは最後のＰ
ｒｏ残基が配列−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｃｙｓ−Ｖ
ａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒを有する更に７個のＣ末端残基で
置換されている。精製Ｒａｓタンパク質をウサギ網状赤
血球溶解物と５μＭ ［３ Ｈ］メバロン酸又は１０μ
Ｍ ［１４Ｃ］ＦＰＰの存在下で温置した。両放射性前
駆体を［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳに
取込ませた。検出可能な標識はＲａｓが存在しないか又
は［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）を有する反応物
に見られず修飾が［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
ＣＶＬＳのユニークなＣ末端領域で起きることを示した
。ＲａｓはＲａｓ特異的モノクローナル抗体Ｙ１３−２
５９で免疫沈降により受容体タンパク質として明確に同
定された。正常及び発がん遺伝子両哺乳類ＨａＲａｓタ
ンパク質も基質として作用した。更にＣ末端配列−Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕを有するアプリシア（Ａｐ
ｌｙｓｉａ） Ｒｈｏを［３ Ｈ］メバロネートで放射
能標識した。
【００１７】［３ Ｈ］メバロン酸又は［１４Ｃ］ＦＰ
Ｐで標識したＲａｓは生体内で変性したＲａｓに対して
前述した通りトリトンＸ−１１４洗浄相に量的に抽出し
た。 放射能標識が取込まれていないＲａｓは水相に残留した
。この結果は試験管内修飾によりＲａｓに疎水性を与え
たことを示した。
Ｐで標識したＲａｓは生体内で変性したＲａｓに対して
前述した通りトリトンＸ−１１４洗浄相に量的に抽出し
た。 放射能標識が取込まれていないＲａｓは水相に残留した
。この結果は試験管内修飾によりＲａｓに疎水性を与え
たことを示した。
【００１８】Ｒａｓへの放射能標識取込みに関与する活
性又は活性群は１００，０００ｘｇに於ける遠心分離に
対して網状赤血球細胞質ゾル画分に残った。Ｒａｓの試
験管内ポリイソプレニル化が他の組織の抽出液中に検出
されるかを試験するために、１００，０００ｘｇ上清画
分をラット脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、骨格筋、脾臓及
び精巣から調製した。［３ Ｈ］ＦＰＰを試験される各
々の上清と温置中にＲａｓに取込ませた。脳から調製し
た上清を用いて最も高い取込みが見られた。ホスファタ
ーゼ阻害剤としての検定に於て１０ｍＭＮａＦの介在は
組織分布結果に影響しなかった。脳に於ける高活性はこ
の組織に２０ＫＤａＧ−タンパク質量とすることができ
る。［３ Ｈ］ＦＰＰのＲａｓ及びＲｈｏの取込みもま
たウシ脳細胞質ゾル画分を用いて検出した。
性又は活性群は１００，０００ｘｇに於ける遠心分離に
対して網状赤血球細胞質ゾル画分に残った。Ｒａｓの試
験管内ポリイソプレニル化が他の組織の抽出液中に検出
されるかを試験するために、１００，０００ｘｇ上清画
分をラット脳、心臓、腎臓、肝臓、肺、骨格筋、脾臓及
び精巣から調製した。［３ Ｈ］ＦＰＰを試験される各
々の上清と温置中にＲａｓに取込ませた。脳から調製し
た上清を用いて最も高い取込みが見られた。ホスファタ
ーゼ阻害剤としての検定に於て１０ｍＭＮａＦの介在は
組織分布結果に影響しなかった。脳に於ける高活性はこ
の組織に２０ＫＤａＧ−タンパク質量とすることができ
る。［３ Ｈ］ＦＰＰのＲａｓ及びＲｈｏの取込みもま
たウシ脳細胞質ゾル画分を用いて検出した。
【００１９】ファルネシル化基質として［Ｌｅｕ６８］
ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳＰＤ野生型及びラス関連
タンパク質Ｒｈｏ及びＹＰＴ１のＣｙｓ−Ａａａ１ −
Ａａａ２ −Ｘａａボックス突然変異をファルネシル−
タンパク質トランスフェラーゼ活性源としてウシ脳細胞
質ゾルを用いて試験した。野生型に関する活性を示す結
果を表１に示す。本明細書で定義されるＣｙｓ−Ａａａ
１ −Ａａａ２ −Ｘａａの臨界を示す。表 １変異
株
ファルネシル化（５μＭ ）
基質 −ＰＤ（野生
型） −ＫＣＶＬＳ
＋＋＋Ｓｅｒ（１８８） −ＫＳ
ＶＬＳ −Ｔｒｐ（１
９１） −ＫＣＶＬＷ＋Ａｌａ（１９２）
−ＫＣＶＬＳＡ
−Ｔｅｒｍ（１８８）−Ｋ
−Ｔｅｒｍ（１８９）
−ＫＣ −Ｔｅｒｍ（１
９０） −ＫＣＶ
−Ｔｅｒｍ（１９１）−ＫＣＶＬ
−Ｒｈｏ
−ＧＣＶＶＬ ＋／
−ＹＰＴ１ −ＧＧＧＣＣ
−活性の関連値：＋
＋＋ １＋ ０．３−
＜＜０．０１Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａ
ａボックスのないＲａｓ又はＣｙｓをＳｅｒに置換した
｛［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＳＶＬＳの形態
について取込みは見られなかった。
ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳＰＤ野生型及びラス関連
タンパク質Ｒｈｏ及びＹＰＴ１のＣｙｓ−Ａａａ１ −
Ａａａ２ −Ｘａａボックス突然変異をファルネシル−
タンパク質トランスフェラーゼ活性源としてウシ脳細胞
質ゾルを用いて試験した。野生型に関する活性を示す結
果を表１に示す。本明細書で定義されるＣｙｓ−Ａａａ
１ −Ａａａ２ −Ｘａａの臨界を示す。表 １変異
株
ファルネシル化（５μＭ ）
基質 −ＰＤ（野生
型） −ＫＣＶＬＳ
＋＋＋Ｓｅｒ（１８８） −ＫＳ
ＶＬＳ −Ｔｒｐ（１
９１） −ＫＣＶＬＷ＋Ａｌａ（１９２）
−ＫＣＶＬＳＡ
−Ｔｅｒｍ（１８８）−Ｋ
−Ｔｅｒｍ（１８９）
−ＫＣ −Ｔｅｒｍ（１
９０） −ＫＣＶ
−Ｔｅｒｍ（１９１）−ＫＣＶＬ
−Ｒｈｏ
−ＧＣＶＶＬ ＋／
−ＹＰＴ１ −ＧＧＧＣＣ
−活性の関連値：＋
＋＋ １＋ ０．３−
＜＜０．０１Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａ
ａボックスのないＲａｓ又はＣｙｓをＳｅｒに置換した
｛［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＳＶＬＳの形態
について取込みは見られなかった。
【００２０】ウシ脳細胞質ゾルを用いると［３ Ｈ］メ
バロン酸は組織抽出液をウサギ網状赤血球溶解質調製物
に見られるのと同じクレアチンリン酸／クレアチンキナ
ーゼ混合物で補足しない限りＲａｓに取込まれなかった
。 ２種のｒａｓ関連２０ＫＤａＧ−タンパク質もまた試験
した。ＹＰＴ１（Ｃ末端配列−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｃｙｓ）は放射性標識されなかったがＲｈｏ（−Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ）は弱い基質であった。延
長ボックス（−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌ
ａ）又は縮小配列（−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ）を有す
るＲａｓタンパク質は不十分な基質であり、５μＭ に
於て放射性標識取込は検出されなかった。１００μＭ
では［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳＡと
［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬに対して対
照［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳに比べ
て各々４０−及び２００倍以下の放射性標識取込みが見
られた。
バロン酸は組織抽出液をウサギ網状赤血球溶解質調製物
に見られるのと同じクレアチンリン酸／クレアチンキナ
ーゼ混合物で補足しない限りＲａｓに取込まれなかった
。 ２種のｒａｓ関連２０ＫＤａＧ−タンパク質もまた試験
した。ＹＰＴ１（Ｃ末端配列−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｃｙｓ）は放射性標識されなかったがＲｈｏ（−Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ）は弱い基質であった。延
長ボックス（−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ａｌ
ａ）又は縮小配列（−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ）を有す
るＲａｓタンパク質は不十分な基質であり、５μＭ に
於て放射性標識取込は検出されなかった。１００μＭ
では［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳＡと
［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬに対して対
照［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳに比べ
て各々４０−及び２００倍以下の放射性標識取込みが見
られた。
【００２１】［３ Ｈ］ＦＰＰによって放射能標識され
たＲａｓタンパク質とウシ脳細胞質ゾルを免疫沈降し次
いでＲａｓに取込まれた産物を同定するために上述の通
りヨードメタシンで処理した。この方法はスルホニウム
塩中間体によってチオエーテル結合を切断し、遊離した
イソプレノイドの遊離アルコール形を生じる。ヨードメ
タンで処理した後放射性同位体の回収は６５％であった
。 Ｒａｓの存在しない平行反応に於て［３ Ｈ］ＦＰＰ標
準の回収は６１％であり抽出反応中３５〜４０％の損失
が生じたことを示した。反応生成物はＣ−１８カラムを
用いてＨＰＬＣにより分析した。回収放射能８６％を表
わす主ピークはファルネソール標準と同時移動した。ウ
サギ網状赤血球溶解物に於ける［３ Ｈ］メバロネート
で標識したＲａｓに対して同様の形が見られた。Ｃｙｓ
受容体部位が存在しない［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅ
ｒｍ）を有する検定にピークは検出されなかった。［３
Ｈ］ＦＰＰ標識［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
ＣＶＬＳを０．１Ｍ ＫＯＨ／１００％メタノールで
処理すると放射能を放出しなかった。ＦＰＰがＲａｓの
ポリイソプレニル化に前駆体として作用する観察やファ
ルネソールの主ヨードメタン切断生成物としての同定は
ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ活性がウ
サギ網状赤血球、ウシ脳及び種々のラット組織の細胞質
ゾル画分に存在することを示す。
たＲａｓタンパク質とウシ脳細胞質ゾルを免疫沈降し次
いでＲａｓに取込まれた産物を同定するために上述の通
りヨードメタシンで処理した。この方法はスルホニウム
塩中間体によってチオエーテル結合を切断し、遊離した
イソプレノイドの遊離アルコール形を生じる。ヨードメ
タンで処理した後放射性同位体の回収は６５％であった
。 Ｒａｓの存在しない平行反応に於て［３ Ｈ］ＦＰＰ標
準の回収は６１％であり抽出反応中３５〜４０％の損失
が生じたことを示した。反応生成物はＣ−１８カラムを
用いてＨＰＬＣにより分析した。回収放射能８６％を表
わす主ピークはファルネソール標準と同時移動した。ウ
サギ網状赤血球溶解物に於ける［３ Ｈ］メバロネート
で標識したＲａｓに対して同様の形が見られた。Ｃｙｓ
受容体部位が存在しない［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅ
ｒｍ）を有する検定にピークは検出されなかった。［３
Ｈ］ＦＰＰ標識［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）
ＣＶＬＳを０．１Ｍ ＫＯＨ／１００％メタノールで
処理すると放射能を放出しなかった。ＦＰＰがＲａｓの
ポリイソプレニル化に前駆体として作用する観察やファ
ルネソールの主ヨードメタン切断生成物としての同定は
ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼ活性がウ
サギ網状赤血球、ウシ脳及び種々のラット組織の細胞質
ゾル画分に存在することを示す。
【００２２】ウシ脳ファルネシル−タンパク質トランス
フェラーゼ活性の特性−Ｒａｓのファルネシル化はＥＤ
ＴＡによって阻害され５ｍＭＭｇＣｌ２ は２価カチオ
ンの有効源として作用した。［１４Ｃ］ＦＰＰ濃度０．
０３〜３０μＭ 及び［Ｌｅｕ６１］ＨａＲａｓ濃度０
．０３〜２５０μＭ に変化させることによって我々は
ＦＰＰ及びＲａｓの見掛けのＫｍ値各々０．３μＭ 及
び１．０μＭ を算出した。基質としてＧＴＰ［γ−Ｓ
］又はＧＤＰ［β−Ｓ］と複合したＲａｓを用いるとフ
ァルネシル化がグアニンヌクレオチド誘発Ｒａｓ構造配
座と無関係であることを示す等価ファルネシル化が見ら
れた（ミルバーン（Ｍｉｌｂｕｒｎ） 等、サイエンス
第２４７巻、９３９〜９４５頁（１９９０年））。ファ
ルネシルトランスフェラーゼ活性をスーパーロース−１
２ゲル濾過カラムから見掛けサイズ１９０ＫＤａを有す
る１本のピークとして溶離した。サイズ７５ＫＤａを有
する活性の小さいピークはプロテアーゼ阻害剤ロイペプ
チン及びアンチパインがクロマトグラフィー緩衝液に含
まれないときに見られた。
フェラーゼ活性の特性−Ｒａｓのファルネシル化はＥＤ
ＴＡによって阻害され５ｍＭＭｇＣｌ２ は２価カチオ
ンの有効源として作用した。［１４Ｃ］ＦＰＰ濃度０．
０３〜３０μＭ 及び［Ｌｅｕ６１］ＨａＲａｓ濃度０
．０３〜２５０μＭ に変化させることによって我々は
ＦＰＰ及びＲａｓの見掛けのＫｍ値各々０．３μＭ 及
び１．０μＭ を算出した。基質としてＧＴＰ［γ−Ｓ
］又はＧＤＰ［β−Ｓ］と複合したＲａｓを用いるとフ
ァルネシル化がグアニンヌクレオチド誘発Ｒａｓ構造配
座と無関係であることを示す等価ファルネシル化が見ら
れた（ミルバーン（Ｍｉｌｂｕｒｎ） 等、サイエンス
第２４７巻、９３９〜９４５頁（１９９０年））。ファ
ルネシルトランスフェラーゼ活性をスーパーロース−１
２ゲル濾過カラムから見掛けサイズ１９０ＫＤａを有す
る１本のピークとして溶離した。サイズ７５ＫＤａを有
する活性の小さいピークはプロテアーゼ阻害剤ロイペプ
チン及びアンチパインがクロマトグラフィー緩衝液に含
まれないときに見られた。
【００２３】ファルネシルトランスフェラーゼ活性の特
異性を決定するために数種のイソプレノイドとペプチド
をファルネシル化反応の拮抗剤として試験した（表２）
。０．５μＭ ［３ Ｈ］ＦＰＰ及び１μＭ Ｒａｓを
有する検定では非放射性ＦＰＰとゲラニルゲラニル−Ｐ
Ｐｉは検定を有効に阻害した。Ｒａｓはゲラニルゲラニ
ルにより生体内で（カセイ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国（１９８９年）第８６巻、８３
２３〜８３２７頁）又は［３ Ｈ］メバロネートをポリ
イソプレン生合成の前駆体として使用する場合試験管内
であまり修飾されない。ゲラニル−ＰＰｉとジメチルア
リル−ＰＰｉは拮抗剤として効力が低くファルネソール
とゲラニルゲラニオールは不活性であった。
異性を決定するために数種のイソプレノイドとペプチド
をファルネシル化反応の拮抗剤として試験した（表２）
。０．５μＭ ［３ Ｈ］ＦＰＰ及び１μＭ Ｒａｓを
有する検定では非放射性ＦＰＰとゲラニルゲラニル−Ｐ
Ｐｉは検定を有効に阻害した。Ｒａｓはゲラニルゲラニ
ルにより生体内で（カセイ等、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａ
ｃａｄ．Ｓｃｉ． 米国（１９８９年）第８６巻、８３
２３〜８３２７頁）又は［３ Ｈ］メバロネートをポリ
イソプレン生合成の前駆体として使用する場合試験管内
であまり修飾されない。ゲラニル−ＰＰｉとジメチルア
リル−ＰＰｉは拮抗剤として効力が低くファルネソール
とゲラニルゲラニオールは不活性であった。
【００２４】ハーベイＲａｓＣｙｓ−Ａａａ１ −Ａａ
ａ２−Ｘａａボックス配列を有する数種のペプチドもま
た試験した（表２）。最も短いペプチドＣＶＬＳ（Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ）は長いペプチドとほぼ同
じ位効力がありＲａｓとファルネシル−タンパク質トラ
ンスフェラーゼ間の臨界相互作用は４残基ボックス領域
に限定されることを示した。スルフヒドリル部分はＣｙ
ｓをＳｅｒに置換したペプチドが不活性であるため明ら
かに競合に必要である。Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２
−Ｘａａボックス配列遊離ＣｙｓＳ−（トランス，ト
ランス）ファルネシル−Ｃｙｓが存在しないペプチド及
び唯一のＣｙｓ残基を有する関連のないペプチドは１０
０μＭまで試験した場合拮抗剤ではなかった。ペプチド
ＳＳＧＣＶＬＳによる最初の実験はこれがファルネシル
化の基質であることを示す。最も短い活性ペプチド、Ｓ
−（トランス，トランス）ファルネシル−ＣＶＬＳの予
想産物はペプチド単独よりほぼ１０倍以下の効力であっ
た（表２）。ＣＶＩＭとＳ−（トランス，トランス）フ
ァルネシル−ＣＶＩＭは各々のＣＶＬＳ誘導体より有効
であった。
ａ２−Ｘａａボックス配列を有する数種のペプチドもま
た試験した（表２）。最も短いペプチドＣＶＬＳ（Ｃｙ
ｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ）は長いペプチドとほぼ同
じ位効力がありＲａｓとファルネシル−タンパク質トラ
ンスフェラーゼ間の臨界相互作用は４残基ボックス領域
に限定されることを示した。スルフヒドリル部分はＣｙ
ｓをＳｅｒに置換したペプチドが不活性であるため明ら
かに競合に必要である。Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａａ２
−Ｘａａボックス配列遊離ＣｙｓＳ−（トランス，ト
ランス）ファルネシル−Ｃｙｓが存在しないペプチド及
び唯一のＣｙｓ残基を有する関連のないペプチドは１０
０μＭまで試験した場合拮抗剤ではなかった。ペプチド
ＳＳＧＣＶＬＳによる最初の実験はこれがファルネシル
化の基質であることを示す。最も短い活性ペプチド、Ｓ
−（トランス，トランス）ファルネシル−ＣＶＬＳの予
想産物はペプチド単独よりほぼ１０倍以下の効力であっ
た（表２）。ＣＶＩＭとＳ−（トランス，トランス）フ
ァルネシル−ＣＶＩＭは各々のＣＶＬＳ誘導体より有効
であった。
【００２５】表２ ポリイソプレノイドとペプチドに
よるＲａｓファルネシル化の競合化合物
ＩＣ５０（μＭ ）ジメチル
アリル−ＰＰｉ
３２５ゲラニル−ＰＰｉ
６７ファルネシル−ＰＰｉ
０．７ゲラニルゲラニル−ＰＰ
ｉ
１．４ファルネソール
＞＞１００ゲラニルゲラニオール
＞＞
１００ＹＲＫＬＮＰＰＤＥＳＧＰＧＳＭＳＳＫＣＶＬＳ
１．４ＳＳＧＣＶＬＳ
２．０ＳＳＧＳＶＬＳ
＞＞２００ＣＶＬＳ ２．
２ＣＶＩＭ ０．０９ＳＶ
ＬＳ ＞＞１００Ｓ−（トランス，トランス
）ファルネシル−ＣＶＬＳ ２８Ｓ−（
トランス，トランス）ファルネシル−ＣＶＩＭ
１．４ウシ脳からのファルネシル−タンパ
ク質トランスフェラーゼをＤＥＡＥ−セファセル（ファ
ーマシア、０〜０．８ＭＮａＣｌ勾配溶離）とＮ−オク
チルアガロース（シグマ、０〜０．６Ｍ ＮａＣｌ勾
配溶離）によりクロマトグラフィー処理した。１μＭ
の［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳ、０．
５μＭ ［３ Ｈ］ＦＰＰ及び指ｅｓ緩衝検定を用いて
温置した。反応液をトリトンＸ−１１４抽出段階を含ま
ない免疫沈降次いでニトロセルロース濾過により分析し
た。データーは２〜５回定量の平均である。＞＞、最も
高い濃度に於ける競合は試験しなかった。上では１つの
大文字のアミノ酸略語を使用する。これらの化合物はＲ
ａｓタンパク質ファルネシル化及びその後の正常細胞の
がん細胞への形質転換の阻害をもたらす任意の都合の良
い手段によって投与することができる。この投与として
は連続静脈内ボラス注入又は経口投与によることができ
る。本発明の適当な組成物としては本発明の化合物と薬
理的に使用し得る担体例えば食塩水、例えばｐＨ７．４
を包含している水溶液がある。この液剤は患者の筋肉内
血流に局所ボラス注入によって入れることができる。
よるＲａｓファルネシル化の競合化合物
ＩＣ５０（μＭ ）ジメチル
アリル−ＰＰｉ
３２５ゲラニル−ＰＰｉ
６７ファルネシル−ＰＰｉ
０．７ゲラニルゲラニル−ＰＰ
ｉ
１．４ファルネソール
＞＞１００ゲラニルゲラニオール
＞＞
１００ＹＲＫＬＮＰＰＤＥＳＧＰＧＳＭＳＳＫＣＶＬＳ
１．４ＳＳＧＣＶＬＳ
２．０ＳＳＧＳＶＬＳ
＞＞２００ＣＶＬＳ ２．
２ＣＶＩＭ ０．０９ＳＶ
ＬＳ ＞＞１００Ｓ−（トランス，トランス
）ファルネシル−ＣＶＬＳ ２８Ｓ−（
トランス，トランス）ファルネシル−ＣＶＩＭ
１．４ウシ脳からのファルネシル−タンパ
ク質トランスフェラーゼをＤＥＡＥ−セファセル（ファ
ーマシア、０〜０．８ＭＮａＣｌ勾配溶離）とＮ−オク
チルアガロース（シグマ、０〜０．６Ｍ ＮａＣｌ勾
配溶離）によりクロマトグラフィー処理した。１μＭ
の［Ｌｅｕ６８］ＲＡＳ１（ｔｅｒｍ）ＣＶＬＳ、０．
５μＭ ［３ Ｈ］ＦＰＰ及び指ｅｓ緩衝検定を用いて
温置した。反応液をトリトンＸ−１１４抽出段階を含ま
ない免疫沈降次いでニトロセルロース濾過により分析し
た。データーは２〜５回定量の平均である。＞＞、最も
高い濃度に於ける競合は試験しなかった。上では１つの
大文字のアミノ酸略語を使用する。これらの化合物はＲ
ａｓタンパク質ファルネシル化及びその後の正常細胞の
がん細胞への形質転換の阻害をもたらす任意の都合の良
い手段によって投与することができる。この投与として
は連続静脈内ボラス注入又は経口投与によることができ
る。本発明の適当な組成物としては本発明の化合物と薬
理的に使用し得る担体例えば食塩水、例えばｐＨ７．４
を包含している水溶液がある。この液剤は患者の筋肉内
血流に局所ボラス注入によって入れることができる。
Claims (11)
- 【請求項１】 細胞膜Ｒａｓタンパク質局在を阻害し
、正常細胞のがん細胞への形質転換を阻止するアミノ酸
配列を包含している化合物。Ｃｙｓ−Ａａａ１ −Ａａ
ａ２ −Ｘａａ（式中Ａａａ１ は脂肪族アミノ酸であ
り、Ａａａ２ は脂肪族アミノ酸であり、Ｘａａは任意
のアミノ酸である。） - 【請求項２】 Ａａａ１ がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅｕ
又はＩｌｅであり、Ａａａ２ がＡｌａ、Ｖａｌ、Ｌｅ
ｕ又はＩｌｅであり、ＸａａがＳｅｒ又はＭｅｔである
請求項１記載の化合物。 - 【請求項３】 Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒであ
る請求項２記載の化合物。 - 【請求項４】 Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｍｅｔであ
る請求項２記載の化合物。 - 【請求項５】 Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｍｅｔであ
る請求項２記載の化合物。 - 【請求項６】 請求項１記載の化合物を包含している
化学療法組成物。 - 【請求項７】 請求項６記載の組成物の治療的に有効
な量を患者に投与することを特徴とするＲａｓタンパク
質のファルネシル化を阻害する方法。 - 【請求項８】 請求項２記載の化合物を包含している
化学療法組成物。 - 【請求項９】 請求項８記載の組成物の治療的に有効
な量を患者に投与することを特徴とするＲａｓタンパク
質のファルネシル化を阻害する方法。 - 【請求項１０】 細胞膜Ｒａｓタンパク質局在を阻害
し、正常細胞のがん細胞への形質転換を阻止する配列：
Ｓ−（トランス，トランス）ファルネシル−Ｃｙｓ−Ａ
ａａ１ −Ａａａ２ −Ｘａａ（式中Ａａａ１ は脂肪
族アミノ酸であり、Ａａａ２ は脂肪族アミノ酸であり
、Ｘａａはアミノ酸である。）を包含している請求項１
記載の化合物。 - 【請求項１１】 Ｓ−（トランス，トランス）ファル
ネシル−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ、Ｓ−（トラ
ンス，トランス）ファルネシル−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｉｌ
ｅ−Ｍｅｔ及びＳ−（トランス，トランス）ファルネシ
ル−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｍｅｔからなる群から選
択される請求項１０記載の化合物。
Applications Claiming Priority (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US536840 | 1974-12-27 | ||
| US53684090A | 1990-06-12 | 1990-06-12 | |
| US70023291A | 1991-05-17 | 1991-05-17 | |
| US700232 | 1991-05-17 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04243893A true JPH04243893A (ja) | 1992-08-31 |
Family
ID=27065282
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3140295A Withdrawn JPH04243893A (ja) | 1990-06-12 | 1991-06-12 | 化学療法剤 |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0461869A3 (ja) |
| JP (1) | JPH04243893A (ja) |
| CA (1) | CA2044333A1 (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005902A1 (fr) * | 1995-08-09 | 1997-02-20 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Composition medicinale |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US8003342B1 (en) | 1990-04-18 | 2011-08-23 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Method for identifying farnesyl transferase inhibitors |
| US5976851A (en) * | 1990-04-18 | 1999-11-02 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the identification, characterization, and inhibition of farnesyl protein transferase |
| US6632626B1 (en) | 1990-04-18 | 2003-10-14 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods of assaying farnesyl transferase |
| US5962243A (en) * | 1990-04-18 | 1999-10-05 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods for the identification of farnesyltransferase inhibitors |
| US6083917A (en) * | 1990-04-18 | 2000-07-04 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the identification, characterization and inhibition of farnesyltransferase |
| US5420245A (en) * | 1990-04-18 | 1995-05-30 | Board Of Regents, The University Of Texas | Tetrapeptide-based inhibitors of farnesyl transferase |
| US5238922A (en) * | 1991-09-30 | 1993-08-24 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
| US5340828A (en) * | 1991-09-30 | 1994-08-23 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
| GB2267966A (en) * | 1992-06-17 | 1993-12-22 | Merck & Co Inc | A fluorescence assay for farnesyl protein transferase activity |
| US5352705A (en) * | 1992-06-26 | 1994-10-04 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
| US5326773A (en) * | 1992-10-29 | 1994-07-05 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl-protein transferase |
| US5504212A (en) * | 1992-10-29 | 1996-04-02 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl-protein transferase |
| US5536750A (en) * | 1992-10-29 | 1996-07-16 | Merck & Co., Inc. | Inhibitors of farnesyl-protein transferase |
| JPH08502890A (ja) * | 1992-10-30 | 1996-04-02 | メルク エンド カンパニー インコーポレーテッド | ファルネシル−タンパク質トランスフェラーゼの阻害剤のアッセイ |
| CA2118985A1 (en) * | 1993-04-02 | 1994-10-03 | Dinesh V. Patel | Heterocyclic inhibitors of farnesyl protein transferase |
| AU6909194A (en) * | 1993-05-14 | 1994-12-12 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Preparation of n-cyanodithioimino-carbonates and 3-mercapto-5-amino-1h-1,2,4-triazole |
| US6011175A (en) * | 1993-05-18 | 2000-01-04 | University Of Pittsburgh | Inhibition of farnesyltransferase |
| US5705686A (en) * | 1993-05-18 | 1998-01-06 | University Of Pittsburgh | Inhibition of farnesyl transferase |
| US5965539A (en) * | 1993-05-18 | 1999-10-12 | Univeristy Of Pittsburgh | Inhibitors of prenyl transferases |
| US5602098A (en) * | 1993-05-18 | 1997-02-11 | University Of Pittsburgh | Inhibition of farnesyltransferase |
| US5834434A (en) * | 1993-05-18 | 1998-11-10 | University Of Pittsburgh | Inhibitors of farnesyltransferase |
| US6872803B1 (en) | 1993-09-21 | 2005-03-29 | Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd. | Peptides |
| JP3576554B2 (ja) * | 1993-09-21 | 2004-10-13 | 協和醗酵工業株式会社 | 新規ペプチド |
| US5763577A (en) * | 1993-10-25 | 1998-06-09 | Warner-Lambert Company | Substituted tetra- and pentapeptide inhibitors of protein: farnesyl transferase |
| US5523430A (en) * | 1994-04-14 | 1996-06-04 | Bristol-Myers Squibb Company | Protein farnesyl transferase inhibitors |
| US5510510A (en) * | 1994-05-10 | 1996-04-23 | Bristol-Meyers Squibb Company | Inhibitors of farnesyl protein transferase |
| FR2721021B1 (fr) * | 1994-06-10 | 1996-07-12 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux inhibiteurs de farnésyl transférase, leur préparation et les compositions pharmaceutique qui les contiennent. |
| DE69507476D1 (de) * | 1994-06-10 | 1999-03-04 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Farnesyl-transferase-inhibitoren, ihre herstellung und sie enthaltende pharmazeutische zusammensetzungen |
| US5571792A (en) * | 1994-06-30 | 1996-11-05 | Warner-Lambert Company | Histidine and homohistidine derivatives as inhibitors of protein farnesyltransferase |
| US5830868A (en) * | 1994-09-13 | 1998-11-03 | Warner-Lambert Company | Substituted DI- and tripeptide inhibitors of protein: farnesyl transferase |
| FR2730491B1 (fr) * | 1995-02-09 | 1997-03-14 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux inhibiteurs de farnesyl transferase, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| FR2736638B1 (fr) * | 1995-07-12 | 1997-08-22 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux inhibiteurs de farnesyl transferase, leur preparation et les compositions pharmaceutiques qui les contiennent |
| US6310095B1 (en) | 1995-11-06 | 2001-10-30 | University Of Pittsburgh | Inhibitors of protein isoprenyl transferases |
| US6693123B2 (en) | 1995-11-06 | 2004-02-17 | University Of Pittsburgh | Inhibitors of protein isoprenyl transferases |
| US6221865B1 (en) | 1995-11-06 | 2001-04-24 | University Of Pittsburgh | Inhibitors of protein isoprenyl transferases |
| US6204293B1 (en) | 1995-11-06 | 2001-03-20 | University Of Pittsburgh | Inhibitors of protein isoprenyl transferases |
| US5990277A (en) * | 1996-09-03 | 1999-11-23 | Yissum Research Development Company Of The Herbrew University Of Jerusalem | Semipeptoid farnesyl protein transferase inhibitors and analogs thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0203587A3 (en) * | 1985-05-30 | 1989-08-09 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Ras oncogene peptides and antibodies |
| US5141851A (en) * | 1990-04-18 | 1992-08-25 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Isolated farnesyl protein transferase enzyme |
| US5185248A (en) * | 1990-05-08 | 1993-02-09 | E. R. Squibb & Sons, Inc. | Farnesyl-protein transferase assay for identifying compounds that block neoplastic transformation |
-
1991
- 1991-06-11 CA CA002044333A patent/CA2044333A1/en not_active Abandoned
- 1991-06-12 EP EP19910305283 patent/EP0461869A3/en not_active Withdrawn
- 1991-06-12 JP JP3140295A patent/JPH04243893A/ja not_active Withdrawn
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997005902A1 (fr) * | 1995-08-09 | 1997-02-20 | Banyu Pharmaceutical Co., Ltd. | Composition medicinale |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0461869A2 (en) | 1991-12-18 |
| EP0461869A3 (en) | 1992-07-08 |
| CA2044333A1 (en) | 1991-12-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH04243893A (ja) | 化学療法剤 | |
| US5238922A (en) | Inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| US5340828A (en) | Inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| Schaber et al. | Polyisoprenylation of Ras in vitro by a farnesyl-protein transferase. | |
| CA2072033A1 (en) | Non-substrate inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| US5326773A (en) | Inhibitors of farnesyl-protein transferase | |
| US5504212A (en) | Inhibitors of farnesyl-protein transferase | |
| US5420245A (en) | Tetrapeptide-based inhibitors of farnesyl transferase | |
| US5504115A (en) | Inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| US5245061A (en) | Inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| AU663169B2 (en) | New anticoagulant peptide derivatives and pharmaceutical compositions containing the same as well as a process for the preparation thereof | |
| CA2075678A1 (en) | Non-substrate inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| WO1992018465A2 (en) | Compounds for inhibition of protein methylation | |
| JPH06157590A (ja) | ファルネシル−蛋白トランスフェラーゼの非基質性阻害剤 | |
| US5260479A (en) | Inhibitors of farnesyl protein transferase | |
| AU689651B2 (en) | Inhibitors of farnesyl-protein transferase | |
| US5536750A (en) | Inhibitors of farnesyl-protein transferase | |
| US5661128A (en) | Peptide inhibitors of farnesyl-protein transferase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A300 | Application deemed to be withdrawn because no request for examination was validly filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A300 Effective date: 19980903 |