JPH04257524A - Ｌａｃｉと硫酸化ポリサッカライドとの組み合わせ抗凝固剤 - Google Patents
Ｌａｃｉと硫酸化ポリサッカライドとの組み合わせ抗凝固剤Info
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- JPH04257524A JPH04257524A JP3213844A JP21384491A JPH04257524A JP H04257524 A JPH04257524 A JP H04257524A JP 3213844 A JP3213844 A JP 3213844A JP 21384491 A JP21384491 A JP 21384491A JP H04257524 A JPH04257524 A JP H04257524A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明はＬＡＣＩと硫酸化ポリサ
ッカライドとの組み合わせ抗凝固剤、更に詳しくは総て
の血漿において相乗抗凝固作用を発揮する、ＬＡＣＩと
ヘパリン又は同様の、そのような抗凝固剤としての硫酸
化ポリサッカライドとの組み合わせに関する。
ッカライドとの組み合わせ抗凝固剤、更に詳しくは総て
の血漿において相乗抗凝固作用を発揮する、ＬＡＣＩと
ヘパリン又は同様の、そのような抗凝固剤としての硫酸
化ポリサッカライドとの組み合わせに関する。
【０００２】
【従来の技術】凝血は内因性（ｉｎｔｒｉｎｓｉｃ）
又は外因性（ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ）の経路で活性化され
得る。内因性経路は第ＸＩＩ因子、カリクレイン、高分
子量キニノーゲン、外来表面及び第ＸＩ因子の相互作用
を伴う接触相により始まる。この反応の生成物である第
ＸＩａ因子は第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に転化し、これ
は続いて活性化された第ＶＩＩＩ因子、リン脂質及びカ
ルシウムの存在下で第Ｘ因子を第Ｘａ因子に加水分解す
る。もう１つの経路として、外因性経路は血漿の第ＶＩ
Ｉ／ＶＩＩａ因子が組織因子（ＴＦ；トロンボプラスチ
ン）に結合して、第ＩＸ及び第Ｘ因子を蛋白分解的に活
性化する複合体を形成するときに開始される。内因性経
路か外因性経路で第Ｘａ因子が一旦形成されると、それ
は第Ｖａ因子、リン脂質及びカルシウムを結合してプロ
トロンビンをトロンビンに転化するプロトロンビナーゼ
複合体である複合体を形成する事が出来る。結局、トロ
ンビンはフィブリンの凝塊を形成させるのである。
又は外因性（ｅｘｔｒｉｎｓｉｃ）の経路で活性化され
得る。内因性経路は第ＸＩＩ因子、カリクレイン、高分
子量キニノーゲン、外来表面及び第ＸＩ因子の相互作用
を伴う接触相により始まる。この反応の生成物である第
ＸＩａ因子は第ＩＸ因子を第ＩＸａ因子に転化し、これ
は続いて活性化された第ＶＩＩＩ因子、リン脂質及びカ
ルシウムの存在下で第Ｘ因子を第Ｘａ因子に加水分解す
る。もう１つの経路として、外因性経路は血漿の第ＶＩ
Ｉ／ＶＩＩａ因子が組織因子（ＴＦ；トロンボプラスチ
ン）に結合して、第ＩＸ及び第Ｘ因子を蛋白分解的に活
性化する複合体を形成するときに開始される。内因性経
路か外因性経路で第Ｘａ因子が一旦形成されると、それ
は第Ｖａ因子、リン脂質及びカルシウムを結合してプロ
トロンビンをトロンビンに転化するプロトロンビナーゼ
複合体である複合体を形成する事が出来る。結局、トロ
ンビンはフィブリンの凝塊を形成させるのである。
【０００３】ヘパリンは種々の臨床状態で抗凝固剤とし
て広く用いられてきた。ヘパリンの抗凝固効果は大部分
はアンチトロンビンＩＩＩによるトロンビンの抑制に対
するヘパリンの触媒作用の直接的な結果であり、また程
度はそれより少ないが、第ＸＩＩａ、ＸＩａ、ＩＸａ、
Ｘａ因子及びカリクレインを含めて他の凝固プロテアー
ゼのアンチトロンビンＩＩＩによる抑制に対するヘパリ
ンの触媒作用の結果である（１−４）。ヘパリンの非存
在下では、アンチトロンビンＩＩＩは第ＶＩＩａ因子を
抑制しない（５−８）。ヘパリンの存在下では、第ＶＩ
Ｉａ因子は抑制抵抗性であるか（６）、又はアンチトロ
ンビンＩＩＩにより１１分で（７）、７５−９０分で（
８）或は６時間で（５）５０％抑制されると報告された
。かくして、アンチトロンビンＩＩＩによる第ＶＩＩａ
因子の制御速度は非常に遅いためにアンチトロンビンＩ
ＩＩはヘパリンの存在下又は非存在下でＴＦ／第ＶＩＩ
因子の経路の生理的調節剤になるとは考えられない（９
）。内因性経路の、プロテアーゼのアンチトロンビンＩ
ＩＩ依存性抑制に加えて、ヘパリンはまた第Ｘａ因子及
びプロトロンビナーゼ複合体からのプロトロンビンをア
ンチトロンビンＩＩＩ依存性様式で置き換えることによ
って抗凝固作用を発揮することができる（１０、１１）
。
て広く用いられてきた。ヘパリンの抗凝固効果は大部分
はアンチトロンビンＩＩＩによるトロンビンの抑制に対
するヘパリンの触媒作用の直接的な結果であり、また程
度はそれより少ないが、第ＸＩＩａ、ＸＩａ、ＩＸａ、
Ｘａ因子及びカリクレインを含めて他の凝固プロテアー
ゼのアンチトロンビンＩＩＩによる抑制に対するヘパリ
ンの触媒作用の結果である（１−４）。ヘパリンの非存
在下では、アンチトロンビンＩＩＩは第ＶＩＩａ因子を
抑制しない（５−８）。ヘパリンの存在下では、第ＶＩ
Ｉａ因子は抑制抵抗性であるか（６）、又はアンチトロ
ンビンＩＩＩにより１１分で（７）、７５−９０分で（
８）或は６時間で（５）５０％抑制されると報告された
。かくして、アンチトロンビンＩＩＩによる第ＶＩＩａ
因子の制御速度は非常に遅いためにアンチトロンビンＩ
ＩＩはヘパリンの存在下又は非存在下でＴＦ／第ＶＩＩ
因子の経路の生理的調節剤になるとは考えられない（９
）。内因性経路の、プロテアーゼのアンチトロンビンＩ
ＩＩ依存性抑制に加えて、ヘパリンはまた第Ｘａ因子及
びプロトロンビナーゼ複合体からのプロトロンビンをア
ンチトロンビンＩＩＩ依存性様式で置き換えることによ
って抗凝固作用を発揮することができる（１０、１１）
。
【０００４】過去数年間に、外因性経路の調節はリポ蛋
白会合凝固抑制剤（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ：ＬＡＣＩ）と称される血漿誘導蛋白質を主
として伴うことを示す証拠が蓄積されてきた（１２）。 この蛋白質はまた外因性経路抑制剤（ＥＰＩ）（１３）
又は組織因子抑制剤（ＴＦＩ）（１４）とも称されてい
る。 この抑制剤は第Ｘａ因子と直接複合体を形成することが
でき、不活性なＴＦ／第ＶＩＩａ因子／第Ｘａ因子／Ｃ
ａ２＋／抑制剤複合体の形成によってＴＦの活性を抑制
する（１２）。Ｈｅｐ Ｇ２ヘパトームから明らかに
関係した抑制剤を精製した後（１４）、続いて蛋白質の
ｃＤＮＡ暗号解読がクローン化された（１５）。最近、
組み換え蛋白質の発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）で大量
の試験管内用及び生体内用蛋白質が生成されるようにな
った。
白会合凝固抑制剤（ｌｉｐｏｐｒｏｔｅｉｎ−ａｓｓｏ
ｃｉａｔｅｄ ｃｏａｇｕｌａｔｉｏｎ ｉｎｈｉ
ｂｉｔｏｒ：ＬＡＣＩ）と称される血漿誘導蛋白質を主
として伴うことを示す証拠が蓄積されてきた（１２）。 この蛋白質はまた外因性経路抑制剤（ＥＰＩ）（１３）
又は組織因子抑制剤（ＴＦＩ）（１４）とも称されてい
る。 この抑制剤は第Ｘａ因子と直接複合体を形成することが
でき、不活性なＴＦ／第ＶＩＩａ因子／第Ｘａ因子／Ｃ
ａ２＋／抑制剤複合体の形成によってＴＦの活性を抑制
する（１２）。Ｈｅｐ Ｇ２ヘパトームから明らかに
関係した抑制剤を精製した後（１４）、続いて蛋白質の
ｃＤＮＡ暗号解読がクローン化された（１５）。最近、
組み換え蛋白質の発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）で大量
の試験管内用及び生体内用蛋白質が生成されるようにな
った。
【０００５】また、１９８９年１月２５日公開の欧州特
許出願（ＥＰ）第３００，９８８号明細書にはＨｅｐ
Ｇ２細胞、ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞及びチャン（Ｃｈａ
ｎｇ）肝細胞のコンディショニングされた培地からのＬ
ＡＣＩの単離が開示され、また１９８９年５月３１日公
開の欧州特許出願（ＥＰ）第３１８，４５１号明細書に
はＬＡＣＩ蛋白質のｃＤＮＡ暗号解読のクローニングが
開示されている。
許出願（ＥＰ）第３００，９８８号明細書にはＨｅｐ
Ｇ２細胞、ＳＫ−Ｈｅｐ−１細胞及びチャン（Ｃｈａ
ｎｇ）肝細胞のコンディショニングされた培地からのＬ
ＡＣＩの単離が開示され、また１９８９年５月３１日公
開の欧州特許出願（ＥＰ）第３１８，４５１号明細書に
はＬＡＣＩ蛋白質のｃＤＮＡ暗号解読のクローニングが
開示されている。
【０００６】本発明書中で括弧の中の数字で引用される
文献のリストを後記に示す。
文献のリストを後記に示す。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】ヘパリンその他の従来
の抗凝固剤の抗凝固活性を越え、かつ総ての血漿におい
て抗凝固作用を発揮する新規な抗凝固剤の開発が望まれ
ている。
の抗凝固剤の抗凝固活性を越え、かつ総ての血漿におい
て抗凝固作用を発揮する新規な抗凝固剤の開発が望まれ
ている。
【０００８】
【０００９】本発明はリポ蛋白会合凝固抑制剤（ＬＡＣ
Ｉ）と硫酸化ポリサッカライドとの新規な組み合わせ抗
凝固剤に関する。この組み合わせは、驚くべきことに、
総ての血漿において相乗抗凝固作用を発揮することが見
いだされた。
Ｉ）と硫酸化ポリサッカライドとの新規な組み合わせ抗
凝固剤に関する。この組み合わせは、驚くべきことに、
総ての血漿において相乗抗凝固作用を発揮することが見
いだされた。
【００１０】本発明の１つの好ましい態様において、Ｌ
ＡＣＩ及びヘパリンはＬＡＣＩ単独又はヘパリン単独に
比較して著しく向上した抗凝固性を示す。抗凝固活性を
もつことが知られている多数の関連硫酸化ポリサッカラ
イドもＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩ依存性抑制を高めること
が見いだされた。これらの化合物の重量規準による相対
効力は次の順序である：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝
５，１００）＞非分別ヘパリン＞低分子量ヘパリン（平
均Ｍｒ＝３，７００）＞ペントサンポリサルフェート＞
デルマタンサルフェート＞デキストランサルフェート＞
ヘパランサルフェート。
ＡＣＩ及びヘパリンはＬＡＣＩ単独又はヘパリン単独に
比較して著しく向上した抗凝固性を示す。抗凝固活性を
もつことが知られている多数の関連硫酸化ポリサッカラ
イドもＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩ依存性抑制を高めること
が見いだされた。これらの化合物の重量規準による相対
効力は次の順序である：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝
５，１００）＞非分別ヘパリン＞低分子量ヘパリン（平
均Ｍｒ＝３，７００）＞ペントサンポリサルフェート＞
デルマタンサルフェート＞デキストランサルフェート＞
ヘパランサルフェート。
【００１１】ＴＦ誘発凝固の抑制におけるＬＡＣＩの独
特の機構と能力の故に、ＬＡＣＩはこれまで血栓性疾病
の治療／予防用の潜在治療性蛋白質と言われてきた。治
療用にヘパリンとＬＡＣＩとを本明細書に記載されると
おりに組み合わせて相乗作用的に使用することは従って
次の理由から極めて魅力的である。即ち、第１は、ヘパ
リンは広い範囲から入手でき、かつ治療に必要とされる
ＬＡＣＩの量をＬＡＣＩ機能を強化することによって低
下させることができること；第２は、ヘパリンとＬＡＣ
Ｉのと併用は凝固の内因性及び外因性の両経路を抑制す
ること；そして第３は、この組み合わせはヘパリン単独
では十分でない種々の臨床状態、例えばＴＦが大量に生
成する可能性がある散在性の血管内凝固において有効な
ことである。
特の機構と能力の故に、ＬＡＣＩはこれまで血栓性疾病
の治療／予防用の潜在治療性蛋白質と言われてきた。治
療用にヘパリンとＬＡＣＩとを本明細書に記載されると
おりに組み合わせて相乗作用的に使用することは従って
次の理由から極めて魅力的である。即ち、第１は、ヘパ
リンは広い範囲から入手でき、かつ治療に必要とされる
ＬＡＣＩの量をＬＡＣＩ機能を強化することによって低
下させることができること；第２は、ヘパリンとＬＡＣ
Ｉのと併用は凝固の内因性及び外因性の両経路を抑制す
ること；そして第３は、この組み合わせはヘパリン単独
では十分でない種々の臨床状態、例えばＴＦが大量に生
成する可能性がある散在性の血管内凝固において有効な
ことである。
【００１２】凝固を抑制するために用いられるＬＡＣＩ
及び硫酸化ポリサッカライドの用量は少ないのが好まし
いが、それは相乗抗凝固結果を生むのに有効な量である
。血漿のｍＬ（ミリリットル）当たり約０．１〜約４単
位のヘパリンを血漿のｍＬ当たり約０．１〜約５μｇ（
マイクログラム）のＬＡＣＩと組み合わせて使用するの
が相乗抗凝固活性に好ましい。他の硫酸化ポリサッカラ
イドも種々の量と割合でＬＡＣＩと共に使用して相乗抗
凝固効果を生むことができる。これら他の硫酸化ポリサ
ッカライドをそれぞれ次の量で約０．１〜約５μｇのＬ
ＡＣＩと共に使用するのが相乗抗凝固活性にとって好ま
しい：
及び硫酸化ポリサッカライドの用量は少ないのが好まし
いが、それは相乗抗凝固結果を生むのに有効な量である
。血漿のｍＬ（ミリリットル）当たり約０．１〜約４単
位のヘパリンを血漿のｍＬ当たり約０．１〜約５μｇ（
マイクログラム）のＬＡＣＩと組み合わせて使用するの
が相乗抗凝固活性に好ましい。他の硫酸化ポリサッカラ
イドも種々の量と割合でＬＡＣＩと共に使用して相乗抗
凝固効果を生むことができる。これら他の硫酸化ポリサ
ッカライドをそれぞれ次の量で約０．１〜約５μｇのＬ
ＡＣＩと共に使用するのが相乗抗凝固活性にとって好ま
しい：
【００１３】低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝５，１００
）：０．２〜２μｇ／ｍＬ、低分子量ヘパリン（平均Ｍ
ｒ＝３，７００）：１〜１０μｇ／ｍＬ、ペントサン
ポリサルフェート：４．５〜４５μｇ／ｍＬ、デルマ
タンサルフェート：３４〜３４０μｇ／ｍＬ、デキスト
ランサルフェート（平均Ｍｒ＝６，０００〜８，０００
）：５０〜５００μｇ／ｍＬ、及びヘパランサルフェー
ト：１００〜１０００μｇ／ｍＬ。
）：０．２〜２μｇ／ｍＬ、低分子量ヘパリン（平均Ｍ
ｒ＝３，７００）：１〜１０μｇ／ｍＬ、ペントサン
ポリサルフェート：４．５〜４５μｇ／ｍＬ、デルマ
タンサルフェート：３４〜３４０μｇ／ｍＬ、デキスト
ランサルフェート（平均Ｍｒ＝６，０００〜８，０００
）：５０〜５００μｇ／ｍＬ、及びヘパランサルフェー
ト：１００〜１０００μｇ／ｍＬ。
【００１４】本明細書で使用されるＬＡＣＩとはウン（
Ｗｕｎ）等がＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３、６０
０１−６００４（１９８８）に記載するリポ蛋白会合凝
固抑制剤を意味するものと定義される。ＬＡＣＩは公知
の各種供給源、例えばＨｅｐＧ２細胞、ＳＫヘパトーマ
細胞及びチャン肝細胞のような培養された肝細胞のコン
ディショニングされた培地から単離するか、又は組み替
えＤＮＡ法で製造することができる。ＬＡＣＩの特定の
単離法又は製造法が本明細書に記載されるが、本発明は
ＬＡＣＩのいかなる特定の供給源にも限定されないこと
は分るだろう。
Ｗｕｎ）等がＪ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３、６０
０１−６００４（１９８８）に記載するリポ蛋白会合凝
固抑制剤を意味するものと定義される。ＬＡＣＩは公知
の各種供給源、例えばＨｅｐＧ２細胞、ＳＫヘパトーマ
細胞及びチャン肝細胞のような培養された肝細胞のコン
ディショニングされた培地から単離するか、又は組み替
えＤＮＡ法で製造することができる。ＬＡＣＩの特定の
単離法又は製造法が本明細書に記載されるが、本発明は
ＬＡＣＩのいかなる特定の供給源にも限定されないこと
は分るだろう。
【００１５】本明細書で使用されるヘパリンの１単位と
は１Ｕ．Ｓ．Ｐ．（米国薬局方）単位を意味するものと
定義される。ヘパリンのＵ．Ｓ．Ｐ．単位は１：１００
０のＣａＣｌ２ 溶液０．２ｍＬの添加１時間後のその
量である。ヘパリンは肝臓及び肺等の肥満細胞を含有す
る哺乳類の組織から単離することによって一般に得られ
る。本明細書で用いられている用語「ヘパリン」はまた
製剤上許容し得るその水溶性塩、例えばナトリウム塩を
包含することを意味する。市販のヘパリンナトリウム塩
製品の適当な例はリポーヘピン（Ｌｉｐｏ−Ｈｅｐｉｎ
：登録商標）［リカー ラボラトリーズ社（Ｒｉｋｅ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］、リクアエミン（
Ｌｉｑｕａｅｍｉｎ：登録商標）ナトリウム［オルガノ
ン社（Ｏｒｇａｎｏｎ）］及びパンヘプリン（Ｐａｎｈ
ｅｐｒｉｎ：登録商標）［アボット ラボラトリーズ
社（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］で
ある。
は１Ｕ．Ｓ．Ｐ．（米国薬局方）単位を意味するものと
定義される。ヘパリンのＵ．Ｓ．Ｐ．単位は１：１００
０のＣａＣｌ２ 溶液０．２ｍＬの添加１時間後のその
量である。ヘパリンは肝臓及び肺等の肥満細胞を含有す
る哺乳類の組織から単離することによって一般に得られ
る。本明細書で用いられている用語「ヘパリン」はまた
製剤上許容し得るその水溶性塩、例えばナトリウム塩を
包含することを意味する。市販のヘパリンナトリウム塩
製品の適当な例はリポーヘピン（Ｌｉｐｏ−Ｈｅｐｉｎ
：登録商標）［リカー ラボラトリーズ社（Ｒｉｋｅ
ｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］、リクアエミン（
Ｌｉｑｕａｅｍｉｎ：登録商標）ナトリウム［オルガノ
ン社（Ｏｒｇａｎｏｎ）］及びパンヘプリン（Ｐａｎｈ
ｅｐｒｉｎ：登録商標）［アボット ラボラトリーズ
社（Ａｂｂｏｔｔ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ）］で
ある。
【００１６】本明細書は本発明をなすと見なされる主題
を特に指摘しかつ請求している特許請求の範囲から始ま
っているが、本発明はグラフとして示される添付図面と
共に説明される次の好ましい態様により更によく理解さ
れると考えられる。
を特に指摘しかつ請求している特許請求の範囲から始ま
っているが、本発明はグラフとして示される添付図面と
共に説明される次の好ましい態様により更によく理解さ
れると考えられる。
【００１７】図面において、図１は正常血漿及び内生Ｌ
ＡＣＩを枯渇させた同じ血漿の活性化された部分的トロ
ンボプラスチン時間（ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐａｒｔ
ｉａｌｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｔｉｍｅ：Ａ
ＰＴＴ）に対するヘパリンの効果を示す。凍結血漿を解
かし、そして予備処理することなく使用するか、又はア
ンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセファローズ（Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ）４Ｂにより免疫吸着して内生ＬＡＣＩを枯渇させた
後使用した。血漿には色々な濃度のヘパリンを補充し、
そのＡＰＴＴを後記の「方法」の欄に記載されるように
して測定した。図中、−○−：元の血漿；−△−：ＬＡ
ＣＩ枯渇血漿。ヘパリン０．６単位／ｍＬ−血漿を越え
る外挿値は両血漿がヘパリン０．８単位／ｍＬ−血漿に
おいて１時間以上未凝血のままであると言う結果に基づ
くものであった。
ＡＣＩを枯渇させた同じ血漿の活性化された部分的トロ
ンボプラスチン時間（ａｃｔｉｖａｔｅｄ ｐａｒｔ
ｉａｌｔｈｒｏｍｂｏｐｌａｓｔｉｎ ｔｉｍｅ：Ａ
ＰＴＴ）に対するヘパリンの効果を示す。凍結血漿を解
かし、そして予備処理することなく使用するか、又はア
ンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセファローズ（Ｓｅｐｈａｒｏｓ
ｅ）４Ｂにより免疫吸着して内生ＬＡＣＩを枯渇させた
後使用した。血漿には色々な濃度のヘパリンを補充し、
そのＡＰＴＴを後記の「方法」の欄に記載されるように
して測定した。図中、−○−：元の血漿；−△−：ＬＡ
ＣＩ枯渇血漿。ヘパリン０．６単位／ｍＬ−血漿を越え
る外挿値は両血漿がヘパリン０．８単位／ｍＬ−血漿に
おいて１時間以上未凝血のままであると言う結果に基づ
くものであった。
【００１８】図２は組織因子（ＴＦ）の色々な濃度にお
ける正常血漿およびＬＡＣＩ枯渇血漿のプロトロンビン
時間（ＰＴ）に対するヘパリンの効果を示す。使用した
血漿は無処理のもの（−○−）か、後記の「方法」の欄
に記載される免疫吸着で内生ＬＡＣＩ抗原を枯渇させた
もの（−△−）であった。ＴＦ試薬はＰＴの定量のため
に１：１，０００（パネルＡ）、１：１００（パネルＢ
）又は１：１０（パネルＣ）で希釈した。パネルＡ及び
Ｂの鎖線はそれぞれヘパリン０．５単位／ｍＬ−血漿（
パネルＡ）及びヘパリン２単位／ｍＬ−血漿（パネルＢ
）において１時間以上未凝血のままであったという結果
に基づく外挿線であった。
ける正常血漿およびＬＡＣＩ枯渇血漿のプロトロンビン
時間（ＰＴ）に対するヘパリンの効果を示す。使用した
血漿は無処理のもの（−○−）か、後記の「方法」の欄
に記載される免疫吸着で内生ＬＡＣＩ抗原を枯渇させた
もの（−△−）であった。ＴＦ試薬はＰＴの定量のため
に１：１，０００（パネルＡ）、１：１００（パネルＢ
）又は１：１０（パネルＣ）で希釈した。パネルＡ及び
Ｂの鎖線はそれぞれヘパリン０．５単位／ｍＬ−血漿（
パネルＡ）及びヘパリン２単位／ｍＬ−血漿（パネルＢ
）において１時間以上未凝血のままであったという結果
に基づく外挿線であった。
【００１９】図３は色々な濃度のＴＦで凝塊を誘発させ
た血漿のＰＴに対する外生添加されたＬＡＣＩの効果を
示す。パネルＡのＴＦ試薬はＰＴの定量のために１：１
，００００（−□−）、１：１，０００（−○−）及び
１：１００（−●−）で希釈した。パネルＢのＴＦ試薬
は１：１０希釈度で使用した。
た血漿のＰＴに対する外生添加されたＬＡＣＩの効果を
示す。パネルＡのＴＦ試薬はＰＴの定量のために１：１
，００００（−□−）、１：１，０００（−○−）及び
１：１００（−●−）で希釈した。パネルＢのＴＦ試薬
は１：１０希釈度で使用した。
【００２０】図４はＬＡＣＩ枯渇血漿のＰＴを延長する
際のヘパリンとＬＡＣＩとの間の相乗作用テストを示す
。
際のヘパリンとＬＡＣＩとの間の相乗作用テストを示す
。
【００２１】（Ａ）ＬＡＣＩ枯渇血漿のＰＴに対するＬ
ＡＣＩ、ヘパリン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
の効果：ＬＡＣＩ枯渇血漿にはＬＡＣＩ（−ｘ−）、ヘ
パリン（−□−）又はＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
（−▲−）を補充し、それらのＰＴを１：１００希釈度
のＴＦ試薬９０μＬ（マイクロリットル）を使用して後
記の「方法」の欄に記載された通り定量した。
ＡＣＩ、ヘパリン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
の効果：ＬＡＣＩ枯渇血漿にはＬＡＣＩ（−ｘ−）、ヘ
パリン（−□−）又はＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
（−▲−）を補充し、それらのＰＴを１：１００希釈度
のＴＦ試薬９０μＬ（マイクロリットル）を使用して後
記の「方法」の欄に記載された通り定量した。
【００２２】（Ｂ）ＬＡＣＩ／ヘパリンの相互作用のア
イソボーラー（ｉｓｏｂｏｌａｒ）分析：同じＰＴ（等
効凝血時間：８０秒、１００秒、１２０秒、１４０秒、
１６０秒、１８０秒及び２００秒）を与えるＬＡＣＩ単
独、ヘパリン単独及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
の濃度をパネルＡの曲線から求めた。Ｄａ及びＤｂはそ
れぞれ濃度ｄａ及びｄｂにおいてＬＡＣＩ／ヘパリンの
組み合わせと効果が等しいＬＡＣＩ及びヘパリンのそれ
ぞれの濃度である。ｄａ／Ｄａ＋ｄｂ／Ｄｂの値は２つ
の試剤が相互作用するかどうかを反映する値である。こ
の値が１であることは相互作用がゼロであることを示唆
し、＞１の値は拮抗作用であることを示し、＜１の値は
相乗作用であることを示す。
イソボーラー（ｉｓｏｂｏｌａｒ）分析：同じＰＴ（等
効凝血時間：８０秒、１００秒、１２０秒、１４０秒、
１６０秒、１８０秒及び２００秒）を与えるＬＡＣＩ単
独、ヘパリン単独及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせ
の濃度をパネルＡの曲線から求めた。Ｄａ及びＤｂはそ
れぞれ濃度ｄａ及びｄｂにおいてＬＡＣＩ／ヘパリンの
組み合わせと効果が等しいＬＡＣＩ及びヘパリンのそれ
ぞれの濃度である。ｄａ／Ｄａ＋ｄｂ／Ｄｂの値は２つ
の試剤が相互作用するかどうかを反映する値である。こ
の値が１であることは相互作用がゼロであることを示唆
し、＞１の値は拮抗作用であることを示し、＜１の値は
相乗作用であることを示す。
【００２３】図５は内生ＬＡＣＩの枯渇された血漿に対
するＬＡＣＩ、ヘパリン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み
合わせの効果を示す。血漿はアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセ
ファローズ４Ｂカラムによる免疫吸着によって内生ＬＡ
ＣＩが枯渇されたものであった。ＰＴは１：１００希釈
度のＴＦ試薬９０μＬを用いて後記の「方法」の欄に記
載されるとおりに測定した。ＬＡＣＩ枯渇血漿には色々
な量のＬＡＣＩ（−ｘ−）、ヘパリン（−□−）及び血
漿のｍＬ当たりヘパリン０．５単位（−●−）、１．０
単位（−▲−）及び２．０単位（−△−）とそれぞれ組
み合わせたＬＡＣＩを補充した。この図５には直線回帰
分析から得た式及び相関係数を示される。
するＬＡＣＩ、ヘパリン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み
合わせの効果を示す。血漿はアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセ
ファローズ４Ｂカラムによる免疫吸着によって内生ＬＡ
ＣＩが枯渇されたものであった。ＰＴは１：１００希釈
度のＴＦ試薬９０μＬを用いて後記の「方法」の欄に記
載されるとおりに測定した。ＬＡＣＩ枯渇血漿には色々
な量のＬＡＣＩ（−ｘ−）、ヘパリン（−□−）及び血
漿のｍＬ当たりヘパリン０．５単位（−●−）、１．０
単位（−▲−）及び２．０単位（−△−）とそれぞれ組
み合わせたＬＡＣＩを補充した。この図５には直線回帰
分析から得た式及び相関係数を示される。
【００２４】図６は正常細胞のＰＴに対する硫酸化ポリ
サッカライドの効果を示す。ＰＴは１：１００希釈度の
ＴＦ試薬９０μＬ、硫酸化ポリサッカライド１０μＬ、
貯留（ｐｏｏｌｅｄ）血漿１００μＬ及び２５ミリモル
濃度のＣａＣｌ２ １００μＬを用いて後記の「方法」
の欄に記載されるとおりに測定した。使用した硫酸化ポ
リサッカライドはＬＭＷＨ５１００（低分子量ヘパリン
、平均Ｍｒ＝５，１００）；ＵＦＨ（非分別ヘパリン）
；ＬＭＷＨ３７００（低分子量ヘパリン、平均Ｍｒ＝３
，７００）；ＰＰＳ（ペントサン ポリサルフェート
）；ＤＳ（デルマタンサルフェート）；ＤＸＳ（デキス
トランサルフェート、平均Ｍｒ＝６，０００−８，００
０）；及びＨＳ（ヘパランサルフェート）である。
サッカライドの効果を示す。ＰＴは１：１００希釈度の
ＴＦ試薬９０μＬ、硫酸化ポリサッカライド１０μＬ、
貯留（ｐｏｏｌｅｄ）血漿１００μＬ及び２５ミリモル
濃度のＣａＣｌ２ １００μＬを用いて後記の「方法」
の欄に記載されるとおりに測定した。使用した硫酸化ポ
リサッカライドはＬＭＷＨ５１００（低分子量ヘパリン
、平均Ｍｒ＝５，１００）；ＵＦＨ（非分別ヘパリン）
；ＬＭＷＨ３７００（低分子量ヘパリン、平均Ｍｒ＝３
，７００）；ＰＰＳ（ペントサン ポリサルフェート
）；ＤＳ（デルマタンサルフェート）；ＤＸＳ（デキス
トランサルフェート、平均Ｍｒ＝６，０００−８，００
０）；及びＨＳ（ヘパランサルフェート）である。
【００２５】図７は貯留血漿のＰＴに対する硫酸化ポリ
サッカライド、ＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライド／
ＬＡＣＩの組み合わせの効果を示す。ＰＴは１：１００
希釈度のＴＦ試薬９０μＬ；硫酸化ポリサッカライド、
ＬＡＣＩ又は表示濃度硫酸化ポリサッカライド／ＬＡＣ
Ｉの組み合わせ１０μＬ；貯留血漿１００μＬ；及び２
５ミリモル濃度ＣａＣｌ２ １００μＬを用いて後記の
「方法」の欄に記載されるとおり測定した。使用した化
合物は図６の場合の化合物と同じである。ＬＡＣＩ単独
（−ｘ−）；硫酸化ポリサッカライド単独（−□−）；
ＬＡＣＩ／硫酸化ポリサッカライドの組み合わせ（−▲
−）。
サッカライド、ＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライド／
ＬＡＣＩの組み合わせの効果を示す。ＰＴは１：１００
希釈度のＴＦ試薬９０μＬ；硫酸化ポリサッカライド、
ＬＡＣＩ又は表示濃度硫酸化ポリサッカライド／ＬＡＣ
Ｉの組み合わせ１０μＬ；貯留血漿１００μＬ；及び２
５ミリモル濃度ＣａＣｌ２ １００μＬを用いて後記の
「方法」の欄に記載されるとおり測定した。使用した化
合物は図６の場合の化合物と同じである。ＬＡＣＩ単独
（−ｘ−）；硫酸化ポリサッカライド単独（−□−）；
ＬＡＣＩ／硫酸化ポリサッカライドの組み合わせ（−▲
−）。
【００２６】ＬＡＣＩ／硫酸化ポリサッカライドの新規
な組み合わせ抗凝固剤をここで更にマウスＣ１２７細胞
に発現された組み換えＬＡＣＩ（ｒＬＡＣＩ）とヘパリ
ン及び関連した硫酸化ポリサッカライドとの組み合わせ
により詳細に説明する。
な組み合わせ抗凝固剤をここで更にマウスＣ１２７細胞
に発現された組み換えＬＡＣＩ（ｒＬＡＣＩ）とヘパリ
ン及び関連した硫酸化ポリサッカライドとの組み合わせ
により詳細に説明する。
【００２７】本発明において使用したＬＡＣＩは組織因
子（ＴＦ）／第ＶＩＩ因子誘発凝固を第Ｘａ因子依存性
様式で抑制する公知の血漿誘導抑制剤である。内因性経
路及び外因性経路で開始される凝固の調節における内生
血漿ＬＡＣＩ及び外生添加されたＬＡＣＩとヘパリンと
の役割を活性化された部分トロンボプラスチン時間（Ａ
ＰＴＴ）検定法及び修正プロトロンビン時間（ＰＴ）検
定法を用いてテストした。このような検定法は凝血時間
に対するヘパリンの効果を測定する血液学の分野におい
て常用のものである。例えば、米国特許第３，４８６，
９８１号明細書を参照されたい。ＬＡＣＩ枯渇血漿及び
正常血漿は同一のＡＴＴＰを有し、またヘパリンに対す
る応答においてＡＴＴＰを同様に延長させ、そして両血
漿は同様のヘパリン濃度において凝固が完全に防止され
る（１時間以上の凝血時間と定義するものとする）。こ
れらの結果は凝固が内因性経路で開始されるときヘパリ
ンは非常に有効な抗凝固剤であり、かつ内生ＬＡＣＩは
この経路の調節には余り関与しないことを示す。正常血
漿のＰＴはヘパリンの非存在下においてかろうじてＬＡ
ＣＩ枯渇血漿のＰＴより長いだけであり、これは内生血
漿ＬＡＣＩがＴＦ誘発凝血のごく限られた抑制能しか有
しないことを示唆するものである。しかし、ヘパリンの
存在下では、ＬＡＣＩ枯渇血漿及び正常血漿のＰＴは非
常に違う。ＰＴの延長はＬＡＣＩ枯渇血漿中のヘパリン
濃度を上げるにつれてごく穏やかにかつ直線的に起こっ
たのである。これに対して、正常血漿はヘパリンに対す
る応答においてより大きな延長の程度を示し、そしてそ
の血漿はある特定のヘパリン限界濃度において完全に凝
固防止されるに至った。これらの結果は、ＬＡＣＩはヘ
パリンについて補助因子として作用し、しかしてＴＦ誘
発凝血の抑制を著しく高めることを示唆するものである
。ＬＡＣＩ枯渇血漿に精製した組み換えＬＡＣＩ、ヘパ
リン又はそれら２者の組み合わせを補充し、ＴＦ誘発凝
血に対するそれらの効果をテストした。この結果、予想
外にも、ＬＡＣＩとヘパリンの組み合わせはＬＡＣＩ単
独又はヘパリン単独に比較して著しく高い抗凝固性をも
たらすことが見いだされた。多くの硫酸化ポリサッカラ
イドもＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩ依存性抑制を高めること
が見いだされた。これら化合物の有効範囲は次の通りで
ある：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝５，１００）：０
．２〜２μｇ（マイクログラム）／ｍＬ；非分別ヘパリ
ン：０．１〜４単位／ｍＬ；低分子量ヘパリン（ｍｒ＝
３，７００）：１〜１０μｇ／ｍＬ；ペントサン ポ
リサルフェート：４．５〜４５μｇ／ｍＬ；デルマタン
サルフェート：３４〜３４０μｇ／ｍＬ；デキストラン
サルフェート：５０〜５００μｇ／ｍＬ；及びヘパラン
サルフェート：１００〜１，０００μｇ／ｍＬ。上記の
結果に基づいて、ＬＡＣＩはＴＦ誘発凝血においてヘパ
リンの補助因子であること、及びＬＡＣＩと硫酸ポリサ
ッカライドは総ての血漿において相乗抗凝固作用を発揮
すると結論される。
子（ＴＦ）／第ＶＩＩ因子誘発凝固を第Ｘａ因子依存性
様式で抑制する公知の血漿誘導抑制剤である。内因性経
路及び外因性経路で開始される凝固の調節における内生
血漿ＬＡＣＩ及び外生添加されたＬＡＣＩとヘパリンと
の役割を活性化された部分トロンボプラスチン時間（Ａ
ＰＴＴ）検定法及び修正プロトロンビン時間（ＰＴ）検
定法を用いてテストした。このような検定法は凝血時間
に対するヘパリンの効果を測定する血液学の分野におい
て常用のものである。例えば、米国特許第３，４８６，
９８１号明細書を参照されたい。ＬＡＣＩ枯渇血漿及び
正常血漿は同一のＡＴＴＰを有し、またヘパリンに対す
る応答においてＡＴＴＰを同様に延長させ、そして両血
漿は同様のヘパリン濃度において凝固が完全に防止され
る（１時間以上の凝血時間と定義するものとする）。こ
れらの結果は凝固が内因性経路で開始されるときヘパリ
ンは非常に有効な抗凝固剤であり、かつ内生ＬＡＣＩは
この経路の調節には余り関与しないことを示す。正常血
漿のＰＴはヘパリンの非存在下においてかろうじてＬＡ
ＣＩ枯渇血漿のＰＴより長いだけであり、これは内生血
漿ＬＡＣＩがＴＦ誘発凝血のごく限られた抑制能しか有
しないことを示唆するものである。しかし、ヘパリンの
存在下では、ＬＡＣＩ枯渇血漿及び正常血漿のＰＴは非
常に違う。ＰＴの延長はＬＡＣＩ枯渇血漿中のヘパリン
濃度を上げるにつれてごく穏やかにかつ直線的に起こっ
たのである。これに対して、正常血漿はヘパリンに対す
る応答においてより大きな延長の程度を示し、そしてそ
の血漿はある特定のヘパリン限界濃度において完全に凝
固防止されるに至った。これらの結果は、ＬＡＣＩはヘ
パリンについて補助因子として作用し、しかしてＴＦ誘
発凝血の抑制を著しく高めることを示唆するものである
。ＬＡＣＩ枯渇血漿に精製した組み換えＬＡＣＩ、ヘパ
リン又はそれら２者の組み合わせを補充し、ＴＦ誘発凝
血に対するそれらの効果をテストした。この結果、予想
外にも、ＬＡＣＩとヘパリンの組み合わせはＬＡＣＩ単
独又はヘパリン単独に比較して著しく高い抗凝固性をも
たらすことが見いだされた。多くの硫酸化ポリサッカラ
イドもＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩ依存性抑制を高めること
が見いだされた。これら化合物の有効範囲は次の通りで
ある：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝５，１００）：０
．２〜２μｇ（マイクログラム）／ｍＬ；非分別ヘパリ
ン：０．１〜４単位／ｍＬ；低分子量ヘパリン（ｍｒ＝
３，７００）：１〜１０μｇ／ｍＬ；ペントサン ポ
リサルフェート：４．５〜４５μｇ／ｍＬ；デルマタン
サルフェート：３４〜３４０μｇ／ｍＬ；デキストラン
サルフェート：５０〜５００μｇ／ｍＬ；及びヘパラン
サルフェート：１００〜１，０００μｇ／ｍＬ。上記の
結果に基づいて、ＬＡＣＩはＴＦ誘発凝血においてヘパ
リンの補助因子であること、及びＬＡＣＩと硫酸ポリサ
ッカライドは総ての血漿において相乗抗凝固作用を発揮
すると結論される。
【００２８】次の実施例は本発明を更に説明するもので
あるが、本発明はこれらの特定の実施例及びその細部に
は限定されないことは分かるだろう。
あるが、本発明はこれらの特定の実施例及びその細部に
は限定されないことは分かるだろう。
【００２９】実施例
【００３０】物質
ラビットの脳トロンボプラスチン（組織因子、ＴＦ）を
オルソ ダイアグノスチック社（Ｏｒｔｈｏ Ｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃ）から入手した。活性化された部分ト
ロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）の測定用試薬である
デード（Ｄａｄｅ）の活性化されたセファロプラスチン
をアメリカン サイエンティフィック プロダクト
社（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔ）から購入した。非分別ヘパリン（ＵＦＨ
，ロットＮｏ．０３８０７８）はエルキン−シン社（Ｅ
ｌｋｉｎ−Ｓｉｎｎ Ｉｎｃ．）から入手した。平均
分子量５，１００及び３，７００の低分子量ヘパリン（
ＬＭＷＨ）はカルバイオケム社（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
）から入手した。ペントサン ポリサルフェート（Ｐ
Ｓ、Ｎｏ．Ｐ８２７５）、ウシ粘膜のデルマタンサルフ
ェート（ＤＳ、Ｎｏ．Ｃ２４１３）及びウシ腸管粘膜の
ヘパランサルフェート（ＨＳ、Ｎｏ．Ｈ７６４１）はシ
グマ社（Ｓｉｇｍａ）からのものであった。デキストラ
ンサルフェート（ＤＸＳ、平均Ｍｒ＝７，０００〜８，
０００）はＩＣＮバイオケミカルズ社（ＩＣＮ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から供給されたものであった。 ヒト血漿はアメリカン レッド クロス社（Ａｍｅ
ｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ）［セント ル
イス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）］によって提供されたもので
あった。４単位の血漿を貯留し、使用時まで既知少量に
して−８０℃で凍結、貯蔵した。ウシの第Ｘａ因子及び
スペクトロツァイム（Ｓｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ）Ｘａは
アメリカン ダイアグノスティカ社（Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）から入手した。
オルソ ダイアグノスチック社（Ｏｒｔｈｏ Ｄｉ
ａｇｎｏｓｔｉｃ）から入手した。活性化された部分ト
ロンボプラスチン時間（ＡＰＴＴ）の測定用試薬である
デード（Ｄａｄｅ）の活性化されたセファロプラスチン
をアメリカン サイエンティフィック プロダクト
社（Ａｍｅｒｉｃａｎ Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐ
ｒｏｄｕｃｔ）から購入した。非分別ヘパリン（ＵＦＨ
，ロットＮｏ．０３８０７８）はエルキン−シン社（Ｅ
ｌｋｉｎ−Ｓｉｎｎ Ｉｎｃ．）から入手した。平均
分子量５，１００及び３，７００の低分子量ヘパリン（
ＬＭＷＨ）はカルバイオケム社（Ｃａｌｂｉｏｃｈｅｍ
）から入手した。ペントサン ポリサルフェート（Ｐ
Ｓ、Ｎｏ．Ｐ８２７５）、ウシ粘膜のデルマタンサルフ
ェート（ＤＳ、Ｎｏ．Ｃ２４１３）及びウシ腸管粘膜の
ヘパランサルフェート（ＨＳ、Ｎｏ．Ｈ７６４１）はシ
グマ社（Ｓｉｇｍａ）からのものであった。デキストラ
ンサルフェート（ＤＸＳ、平均Ｍｒ＝７，０００〜８，
０００）はＩＣＮバイオケミカルズ社（ＩＣＮ Ｂｉ
ｏｃｈｅｍｉｃａｌｓ）から供給されたものであった。 ヒト血漿はアメリカン レッド クロス社（Ａｍｅ
ｒｉｃａｎ Ｒｅｄ Ｃｒｏｓｓ）［セント ル
イス（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ）］によって提供されたもので
あった。４単位の血漿を貯留し、使用時まで既知少量に
して−８０℃で凍結、貯蔵した。ウシの第Ｘａ因子及び
スペクトロツァイム（Ｓｐｅｃｔｒｏｚｙｍｅ）Ｘａは
アメリカン ダイアグノスティカ社（Ａｍｅｒｉｃａ
ｎ Ｄｉａｇｎｏｓｔｉｃａ）から入手した。
【００３１】方法
【００３２】ｒＬＡＣＩの発現と精製
ｒＬＡＣＩをウシの乳頭腫ウイルスのベクターを用いて
マウスＣ１２７細胞に発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）さ
せ、そしてｒＬＡＣＩ産生細胞株をコンディショニング
した培地を採取するための細胞生産工場で次のように増
殖させた。
マウスＣ１２７細胞に発現（ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ）さ
せ、そしてｒＬＡＣＩ産生細胞株をコンディショニング
した培地を採取するための細胞生産工場で次のように増
殖させた。
【００３３】ｐＭＬ２のｐＢＲ３２２誘導体の中でクロ
ーン化させたウシの乳頭腫ウイルスのゲノム全体より成
るウシの乳頭腫ウイルスに基づくベクターであるｐＭＯ
Ｎ１１２３を用いてＬＡＣＩを発現させた。このベクタ
ーはマウスのメタロチオニンＩプロモーター、及び独特
のＢａｍＨＩ部位に挿入されたＤＮＡ断片によってコー
ド化された蛋白質の発現を指令するＳＶ４０レート（Ｌ
ａｔｅ）のポリＡ付加部位を使用するものである。真核
生物の細胞中の外生遺伝子の複製と発現用のベクターと
して乳頭腫ウイルスＤＮＡを利用する組み換えＤＮＡ法
の使用は、米国特許第４，４４１，９４４６号明細書か
ら分かる様に、普通のやり方である。ＬＡＣＩ ｃＤ
ＮＡの発現のために、ｐＭＯＮ１１２３をＢａｍＨＩに
より消化させ、そして５’懸垂端をクレナウ（Ｋｌｅｎ
ｏｗ）断片［ＩＮ、インジアナポリス（Ｉｎｄｉａｎａ
ｐｏｌｉｓ）のボエリンガー マンハイム社（Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）］及びデオキシ
ヌクレオチド類（ｄＮＴＰ）により書き込ませた（ｆｉ
ｌｌｅｄ−ｉｎ）。同様に、ＬＡＣＩ ｃＤＮＡをＥ
ｃｏＲＩ断片として単離し、その端をクレナウ書き込み
で鈍化（ｂｌｕｎｔ）させた。ＬＡＣＩ断片を結合させ
て（ｌｉｇａｔｅ）ｐＭＯＮ１１２３となし、プラスミ
ドｐＭＯＮ１４５６を生成させた。マウスのＣ１２７細
胞を増殖させ、そしてラマバードラン（Ｒａｍａｂｈａ
ｄｒａｎ）等が以前にＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１、６７０１（１９８４）に記載し
た方法でｐＭＯＮ１４５６及びｐＳＶｎｅｏ を用いて
同時にトランスフェクションさせた。Ｇ４１８抗生物質
［ジェネティシン社（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）］を用いて
選択した後、耐性コロニーを捜し出し、２４ウエルの平
板に接種した。各ウエルから取ったコンディショニング
した培地に次に酵素結合免疫吸着剤検定法（ＥＬＩＳＡ
）で組み換えＬＡＣＩ（ｒＬＡＣＩ）発現の検定を行っ
た。ＬＡＣＩ約１〜２μｇ／細胞１０６ 個／２４時間
を発現する１つのクローン１４５５−１５をｒＬＡＣＩ
の単離のために展開させた。
ーン化させたウシの乳頭腫ウイルスのゲノム全体より成
るウシの乳頭腫ウイルスに基づくベクターであるｐＭＯ
Ｎ１１２３を用いてＬＡＣＩを発現させた。このベクタ
ーはマウスのメタロチオニンＩプロモーター、及び独特
のＢａｍＨＩ部位に挿入されたＤＮＡ断片によってコー
ド化された蛋白質の発現を指令するＳＶ４０レート（Ｌ
ａｔｅ）のポリＡ付加部位を使用するものである。真核
生物の細胞中の外生遺伝子の複製と発現用のベクターと
して乳頭腫ウイルスＤＮＡを利用する組み換えＤＮＡ法
の使用は、米国特許第４，４４１，９４４６号明細書か
ら分かる様に、普通のやり方である。ＬＡＣＩ ｃＤ
ＮＡの発現のために、ｐＭＯＮ１１２３をＢａｍＨＩに
より消化させ、そして５’懸垂端をクレナウ（Ｋｌｅｎ
ｏｗ）断片［ＩＮ、インジアナポリス（Ｉｎｄｉａｎａ
ｐｏｌｉｓ）のボエリンガー マンハイム社（Ｂｏｅ
ｈｒｉｎｇｅｒ Ｍａｎｎｈｅｉｍ）］及びデオキシ
ヌクレオチド類（ｄＮＴＰ）により書き込ませた（ｆｉ
ｌｌｅｄ−ｉｎ）。同様に、ＬＡＣＩ ｃＤＮＡをＥ
ｃｏＲＩ断片として単離し、その端をクレナウ書き込み
で鈍化（ｂｌｕｎｔ）させた。ＬＡＣＩ断片を結合させ
て（ｌｉｇａｔｅ）ｐＭＯＮ１１２３となし、プラスミ
ドｐＭＯＮ１４５６を生成させた。マウスのＣ１２７細
胞を増殖させ、そしてラマバードラン（Ｒａｍａｂｈａ
ｄｒａｎ）等が以前にＰｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．
Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８１、６７０１（１９８４）に記載し
た方法でｐＭＯＮ１４５６及びｐＳＶｎｅｏ を用いて
同時にトランスフェクションさせた。Ｇ４１８抗生物質
［ジェネティシン社（Ｇｅｎｅｔｉｃｉｎ）］を用いて
選択した後、耐性コロニーを捜し出し、２４ウエルの平
板に接種した。各ウエルから取ったコンディショニング
した培地に次に酵素結合免疫吸着剤検定法（ＥＬＩＳＡ
）で組み換えＬＡＣＩ（ｒＬＡＣＩ）発現の検定を行っ
た。ＬＡＣＩ約１〜２μｇ／細胞１０６ 個／２４時間
を発現する１つのクローン１４５５−１５をｒＬＡＣＩ
の単離のために展開させた。
【００３４】このｒＬＡＣＩ産生細胞株１４５５−１５
を、ウシ胎児血清を１０％含有するダルベッコの変性イ
ーグルス培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄＥａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）中で培養した。 これらの細胞を１５０ｃｍ２ のフラスコ中で全面生長
（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）まで増殖させた。各フラスコ
を次にトリプシン化し、これを用いて８５０ｃｍ２ の
ローラーボトル１本に接種した。全面生長後、各ローラ
ーボトルからの細胞を用いて１０室の細胞生産工場［６
，０００ｃｍ２ 、ニューヨーク州グランド アイラ
ンド（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ）のＧＩＢＣＯラボ
ラトリーズ社（ＧＩＢＣＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ）］１つに接種した。全面生長に達したとき、細胞を
燐酸塩緩衝生理食塩水で洗浄し、メナジオン０．２μｇ
／ｍＬ、酪酸ナトリウム２．５ミリモル／Ｌ及びアプロ
チニン５０Ｕ／ｍＬを補充したダルベッコの変性イーグ
ルス培地より成る血清を含まない培地中でインキュベー
トした。血清を含まないコンディショニングされた培地
を２日毎に集め、新鮮な培地と交換した。
を、ウシ胎児血清を１０％含有するダルベッコの変性イ
ーグルス培地（Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ Ｍｏｄｉｆｉ
ｅｄＥａｇｌｅ’ｓ Ｍｅｄｉｕｍ）中で培養した。 これらの細胞を１５０ｃｍ２ のフラスコ中で全面生長
（ｃｏｎｆｌｕｅｎｃｙ）まで増殖させた。各フラスコ
を次にトリプシン化し、これを用いて８５０ｃｍ２ の
ローラーボトル１本に接種した。全面生長後、各ローラ
ーボトルからの細胞を用いて１０室の細胞生産工場［６
，０００ｃｍ２ 、ニューヨーク州グランド アイラ
ンド（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ）のＧＩＢＣＯラボ
ラトリーズ社（ＧＩＢＣＯ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅ
ｓ）］１つに接種した。全面生長に達したとき、細胞を
燐酸塩緩衝生理食塩水で洗浄し、メナジオン０．２μｇ
／ｍＬ、酪酸ナトリウム２．５ミリモル／Ｌ及びアプロ
チニン５０Ｕ／ｍＬを補充したダルベッコの変性イーグ
ルス培地より成る血清を含まない培地中でインキュベー
トした。血清を含まないコンディショニングされた培地
を２日毎に集め、新鮮な培地と交換した。
【００３５】この血清を含まないコンディショニングさ
れた培地を５０ｍＭ（ＮＨ４ ）２ ＳＯ４ に調整し
、０．２μのフィルターを通して濾過し、そしてアミコ
ン（Ａｍｉｃｏｎ）ＹＭ３０ラジアル カートリッジ
濃縮器を用いて３０倍に濃縮した。この濃縮液を硫酸ア
ンモニウムによる沈澱に付した。硫酸アンモニウムの２
３〜９０％飽和度間で沈澱させた蛋白質を集め、２０ｍ
Ｍ Ｎａ２ ＳＯ４ を含有する燐酸塩緩衝生理食塩
水にたいして透析した。洗浄剤のトリトン（Ｔｒｉｔｏ
ｎ）Ｘ−１００を加えて０．０５％の最終濃度となし、
その溶液を４０，０００ｘｇで１時間遠心分離すること
によって透明にした。上澄み液を２０ｍＭ Ｎａ２
ＳＯ４ 、０．０５％のトリトンＸ−１００を含有する
燐酸塩緩衝生理食塩水（緩衝液Ａ）で平衡にしたアンヒ
ドロトリプシン−セファローズ４Ｂカラム（ゲル１２ｍ
Ｌ、文献１７に記載の方法に従って調製）でクロマトグ
ラフ分析した。このカラムを緩衝液Ａ８０ｍＬ及びトリ
トンＸ−１００を含まない同じ緩衝液８０ｍＬで洗浄し
た。その結合蛋白質を３カラム分の容積中で１．５Ｍ
ＮａＳＣＮにより溶離した。溶離された蛋白質を濃縮
し、そして０．１５Ｍ ＮａＣｌ及び２０ｍＭ Ｎ
ａ２ ＳＯ４ を含有する溶液に対して透析した。ＬＡ
ＣＩの回収率は約６０％であった。新しく調製したアン
ヒドロトリプトシン−セファローズ４Ｂカラムは約ＬＡ
ＣＩ０．６ｍｇ／ｍＬ−ゲルの容量を有していた。繰り
返し使用すると、容量は約０．２ｍｇ／ｍＬ−ゲルまで
低下した。その溶離された蛋白質のドデシル硫酸ナトリ
ウムポリアクリルアミドゲルによる電気泳動分析はＭｒ
〜３８，０００の１つの主たるバンドを示す。このバン
ドは痕跡量の高分子量汚染物質を有するＬＡＣＩに相当
する。これらの汚染物質はフェニル セファローズ４
Ｂによる吸着で除去した。
れた培地を５０ｍＭ（ＮＨ４ ）２ ＳＯ４ に調整し
、０．２μのフィルターを通して濾過し、そしてアミコ
ン（Ａｍｉｃｏｎ）ＹＭ３０ラジアル カートリッジ
濃縮器を用いて３０倍に濃縮した。この濃縮液を硫酸ア
ンモニウムによる沈澱に付した。硫酸アンモニウムの２
３〜９０％飽和度間で沈澱させた蛋白質を集め、２０ｍ
Ｍ Ｎａ２ ＳＯ４ を含有する燐酸塩緩衝生理食塩
水にたいして透析した。洗浄剤のトリトン（Ｔｒｉｔｏ
ｎ）Ｘ−１００を加えて０．０５％の最終濃度となし、
その溶液を４０，０００ｘｇで１時間遠心分離すること
によって透明にした。上澄み液を２０ｍＭ Ｎａ２
ＳＯ４ 、０．０５％のトリトンＸ−１００を含有する
燐酸塩緩衝生理食塩水（緩衝液Ａ）で平衡にしたアンヒ
ドロトリプシン−セファローズ４Ｂカラム（ゲル１２ｍ
Ｌ、文献１７に記載の方法に従って調製）でクロマトグ
ラフ分析した。このカラムを緩衝液Ａ８０ｍＬ及びトリ
トンＸ−１００を含まない同じ緩衝液８０ｍＬで洗浄し
た。その結合蛋白質を３カラム分の容積中で１．５Ｍ
ＮａＳＣＮにより溶離した。溶離された蛋白質を濃縮
し、そして０．１５Ｍ ＮａＣｌ及び２０ｍＭ Ｎ
ａ２ ＳＯ４ を含有する溶液に対して透析した。ＬＡ
ＣＩの回収率は約６０％であった。新しく調製したアン
ヒドロトリプトシン−セファローズ４Ｂカラムは約ＬＡ
ＣＩ０．６ｍｇ／ｍＬ−ゲルの容量を有していた。繰り
返し使用すると、容量は約０．２ｍｇ／ｍＬ−ゲルまで
低下した。その溶離された蛋白質のドデシル硫酸ナトリ
ウムポリアクリルアミドゲルによる電気泳動分析はＭｒ
〜３８，０００の１つの主たるバンドを示す。このバン
ドは痕跡量の高分子量汚染物質を有するＬＡＣＩに相当
する。これらの汚染物質はフェニル セファローズ４
Ｂによる吸着で除去した。
【００３６】精製されたｒＬＡＣＩの特性化単離した蛋
白質は次の基準により実質的に純粋なＬＡＣＩである：
（ａ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥが本質的に１つのバンドを示す
；（ｂ）アミノ酸分析及び蛋白質の配列化（ｓｅｑｕｅ
ｎｃｉｎｇ）がＬＡＣＩのｃＤＮＡ配列から演繹される
組成と配列にマッチする；および（ｃ）アミド分解基質
検定における第Ｘａ因子抑制の化学量論比が約１：１で
ある（下記を参照されたい）。
白質は次の基準により実質的に純粋なＬＡＣＩである：
（ａ）ＳＤＳ−ＰＡＧＥが本質的に１つのバンドを示す
；（ｂ）アミノ酸分析及び蛋白質の配列化（ｓｅｑｕｅ
ｎｃｉｎｇ）がＬＡＣＩのｃＤＮＡ配列から演繹される
組成と配列にマッチする；および（ｃ）アミド分解基質
検定における第Ｘａ因子抑制の化学量論比が約１：１で
ある（下記を参照されたい）。
【００３７】ＬＡＣＩの濃度をアミノ酸分析で定量した
。第Ｘａ因子の活性部位濃度をチェース（Ｃｈａｓｅ）
及びショウ（Ｓｈｏｗ）（１６）に従ってｐ−ニトロフ
ェニル−ｐ’−グアニジノベンゾエートで滴定すること
によって測定した。第Ｘａ因子のアミド分解活性および
ＬＡＣＩのアンチ第Ｘａ因子活性は次のようにして測定
した：１０μＬのウシ第Ｘａ因子［活性分子０．０８４
ｐモル（ｐｍｏｌ）］を１０μＬのＴＢＢ緩衝液［ウシ
の血清アルブミン５ｍｇ／ｍＬ及びウシのガンマー
グロブリン２．５ｍｇ／ｍＬを含有するトリス（Ｔｒｉ
ｓ）緩衝生理食塩水］又は１０μＬの適正に希釈したＴ
ＢＢ緩衝液中ＬＡＣＩと使い捨てキューベット中で室温
において５分間混合した。０．２２ｍＬの検定緩衝液（
０．１Ｍトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８．４、０．５％トリト
ン Ｘ−１００）及び１０μＬのスペクトロツァイム
Ｘａ（１２．５ｍＭ）の添加後、４０５ｎｍにおける吸
光度の変化率を３７℃において測定した。対照の４０５
ｎｍにおける吸光度変化は活性第Ｘａ因子０．１ｐモル
当たり０．０２３３／分であった。ＬＡＣＩを含有する
その反応混合物において、アンチＸａ活性度は第Ｘａ因
子の活性度の減少に基づいて対照の活性度の減少と比較
して計算した。上記の検定法を用いたとき、２．６ｎｇ
の精製されたＬＡＣＩ（アミノ酸分析に基づく；Ｍｒ＝
３８，０００と仮定して０．０６８ｐモルと当量）は０
．０６６ｐモルの活性第Ｘａ因子を抑制することが見い
だされた。従って、ＬＡＣＩと第Ｘａ因子との間の相互
作用の化学量論比は１：１であると思われる。
。第Ｘａ因子の活性部位濃度をチェース（Ｃｈａｓｅ）
及びショウ（Ｓｈｏｗ）（１６）に従ってｐ−ニトロフ
ェニル−ｐ’−グアニジノベンゾエートで滴定すること
によって測定した。第Ｘａ因子のアミド分解活性および
ＬＡＣＩのアンチ第Ｘａ因子活性は次のようにして測定
した：１０μＬのウシ第Ｘａ因子［活性分子０．０８４
ｐモル（ｐｍｏｌ）］を１０μＬのＴＢＢ緩衝液［ウシ
の血清アルブミン５ｍｇ／ｍＬ及びウシのガンマー
グロブリン２．５ｍｇ／ｍＬを含有するトリス（Ｔｒｉ
ｓ）緩衝生理食塩水］又は１０μＬの適正に希釈したＴ
ＢＢ緩衝液中ＬＡＣＩと使い捨てキューベット中で室温
において５分間混合した。０．２２ｍＬの検定緩衝液（
０．１Ｍトリス／ＨＣｌ、ｐＨ８．４、０．５％トリト
ン Ｘ−１００）及び１０μＬのスペクトロツァイム
Ｘａ（１２．５ｍＭ）の添加後、４０５ｎｍにおける吸
光度の変化率を３７℃において測定した。対照の４０５
ｎｍにおける吸光度変化は活性第Ｘａ因子０．１ｐモル
当たり０．０２３３／分であった。ＬＡＣＩを含有する
その反応混合物において、アンチＸａ活性度は第Ｘａ因
子の活性度の減少に基づいて対照の活性度の減少と比較
して計算した。上記の検定法を用いたとき、２．６ｎｇ
の精製されたＬＡＣＩ（アミノ酸分析に基づく；Ｍｒ＝
３８，０００と仮定して０．０６８ｐモルと当量）は０
．０６６ｐモルの活性第Ｘａ因子を抑制することが見い
だされた。従って、ＬＡＣＩと第Ｘａ因子との間の相互
作用の化学量論比は１：１であると思われる。
【００３８】活性化された部分トロンボプラスチン時間
（ＡＰＴＴ） フィブロメーター（Ｆｉｂｒｏｍｅｔｅｒ）凝血タイミ
ング測定装置を用いて血漿のＡＰＴＴを測定するのにデ
ードの活性化されセファロスプラスチン試薬を使用した
。９０μＬの血漿を１０μＬの硫酸化ポリサッカライド
又は対照の緩衝液及び１００μＬの活性化されたセファ
ロスプラスチン試薬と３７℃において正確に２分間混合
した。この混合物にカルシウム溶液（２５ｍＭ Ｃａ
Ｃｌ２ １００μＬ）を加え、凝血を起こすまでの時間
を記録した。この検定は１時間以下の時間観察された。 実際の目的には、血漿は凝血が１時間以内に起こらない
場合、“完全抗凝固”であるとする。
（ＡＰＴＴ） フィブロメーター（Ｆｉｂｒｏｍｅｔｅｒ）凝血タイミ
ング測定装置を用いて血漿のＡＰＴＴを測定するのにデ
ードの活性化されセファロスプラスチン試薬を使用した
。９０μＬの血漿を１０μＬの硫酸化ポリサッカライド
又は対照の緩衝液及び１００μＬの活性化されたセファ
ロスプラスチン試薬と３７℃において正確に２分間混合
した。この混合物にカルシウム溶液（２５ｍＭ Ｃａ
Ｃｌ２ １００μＬ）を加え、凝血を起こすまでの時間
を記録した。この検定は１時間以下の時間観察された。 実際の目的には、血漿は凝血が１時間以内に起こらない
場合、“完全抗凝固”であるとする。
【００３９】プロトロンビン時間（ＰＴ）ラビットの脳
トロンボプラスチン（ＴＦ、オルソ ダイアグノスチ
ック社）をＰＴの測定のために１ｍｇ／ｍＬのウシの血
清アルブミンを含有する生理食塩水中で１：１０、１：
１００、１：１，０００又は１：１０，０００で希釈し
た。１００μＬの血漿を対照緩衝液であＬＡＣＩ溶液ま
たは硫酸化ポリサッカライド溶液１０μＬおよびフィブ
ロメーターのウエル中の希釈されたＴＦ９０μＬと３７
℃で２分間混合した。１００μＬの２５ｍＭ ＣａＣ
ｌ２ を加え、凝血するまでの時間測定した。硫酸化ポ
リサッカライド及びＬＡＣＩの濃度は未希釈血漿のｍＬ
当たりのこれら化合物の量を意味する（最終混合物の濃
度に非らず）。ここに報告されるＰＴは凝血時間の長さ
に依存して２〜８個の測定値の平均である。凝血時間が
短い場合（＜１００秒）、測定値間の変化は小さく、従
って２〜３回の検定を行い、各データー点について平均
した。凝血時間が長く（＞１００秒）、かつ希釈ＴＦま
たは高濃度のＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライドの使
用に起因して変化がより大きい場合は、４〜８回の測定
を行い、各データー点について平均した。検定は１時間
以下観察された。この血漿は凝血が１時間以内に起こら
ない場合“完全抗凝固”であると称される。
トロンボプラスチン（ＴＦ、オルソ ダイアグノスチ
ック社）をＰＴの測定のために１ｍｇ／ｍＬのウシの血
清アルブミンを含有する生理食塩水中で１：１０、１：
１００、１：１，０００又は１：１０，０００で希釈し
た。１００μＬの血漿を対照緩衝液であＬＡＣＩ溶液ま
たは硫酸化ポリサッカライド溶液１０μＬおよびフィブ
ロメーターのウエル中の希釈されたＴＦ９０μＬと３７
℃で２分間混合した。１００μＬの２５ｍＭ ＣａＣ
ｌ２ を加え、凝血するまでの時間測定した。硫酸化ポ
リサッカライド及びＬＡＣＩの濃度は未希釈血漿のｍＬ
当たりのこれら化合物の量を意味する（最終混合物の濃
度に非らず）。ここに報告されるＰＴは凝血時間の長さ
に依存して２〜８個の測定値の平均である。凝血時間が
短い場合（＜１００秒）、測定値間の変化は小さく、従
って２〜３回の検定を行い、各データー点について平均
した。凝血時間が長く（＞１００秒）、かつ希釈ＴＦま
たは高濃度のＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライドの使
用に起因して変化がより大きい場合は、４〜８回の測定
を行い、各データー点について平均した。検定は１時間
以下観察された。この血漿は凝血が１時間以内に起こら
ない場合“完全抗凝固”であると称される。
【００４０】抗血清、アンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇ及びアン
チ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセファローズ４Ｂ ２匹のニュージーランド産白ウサギをその各々にフロイ
ト（Ｆｒｅｕｎｄ）の完全アジュバント１ｍＬ及び精製
されたＬＡＣＩ １ｍＬ（ＬＡＣＩ蛋白質２００μｇ
）を含有するホモジネートを皮内注射することによって
免疫化した。１カ月後、これらのウサギを各々フロイト
の不完全アジュバント１ｍＬ及び精製されたＬＡＣＩ
１ｍＬ（ＬＡＣＩ蛋白質１００μｇ）を含有するホモ
ジネートで促進した。その後各週に抗血清を採集した。 促進剤の注射は３カ月後にウサギから瀉血するまで１カ
月毎に行った。蛋白質Ａ−セファローズ４Ｂカラムにで
のクロマトグラフィーにかけることによってその抗血清
からアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇを単離した。単離されたア
ンチ−ＬＡＣＩ−ＩｇをＩｇ１０ｍｇ／ｍＬ−ゲルの濃
度で薬局方推奨の方法によって臭化シアンで活性化され
たセファローズ４Ｂにカップリングさせた。
チ−ＬＡＣＩ−Ｉｇセファローズ４Ｂ ２匹のニュージーランド産白ウサギをその各々にフロイ
ト（Ｆｒｅｕｎｄ）の完全アジュバント１ｍＬ及び精製
されたＬＡＣＩ １ｍＬ（ＬＡＣＩ蛋白質２００μｇ
）を含有するホモジネートを皮内注射することによって
免疫化した。１カ月後、これらのウサギを各々フロイト
の不完全アジュバント１ｍＬ及び精製されたＬＡＣＩ
１ｍＬ（ＬＡＣＩ蛋白質１００μｇ）を含有するホモ
ジネートで促進した。その後各週に抗血清を採集した。 促進剤の注射は３カ月後にウサギから瀉血するまで１カ
月毎に行った。蛋白質Ａ−セファローズ４Ｂカラムにで
のクロマトグラフィーにかけることによってその抗血清
からアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇを単離した。単離されたア
ンチ−ＬＡＣＩ−ＩｇをＩｇ１０ｍｇ／ｍＬ−ゲルの濃
度で薬局方推奨の方法によって臭化シアンで活性化され
たセファローズ４Ｂにカップリングさせた。
【００４１】ＬＡＣＩ枯渇血漿の調製
貯留された凍結血漿（１００ｍＬ）解凍し、アンチ−Ｌ
ＡＣＩ−Ｉｇセファローズ４Ｂカラム（結合Ｉｇを〜１
５ｍｇ含有するゲル３ｍＬ）を５回通過させて内生ＬＡ
ＣＩ抗原を枯渇させた。この免疫吸着された血漿は免疫
検定（感度〜１ｎｇ／ｍＬ）でいかなるＬＡＣＩ抗原も
検出されなかったので本質的に内生ＬＡＣＩが枯渇され
ていた。
ＡＣＩ−Ｉｇセファローズ４Ｂカラム（結合Ｉｇを〜１
５ｍｇ含有するゲル３ｍＬ）を５回通過させて内生ＬＡ
ＣＩ抗原を枯渇させた。この免疫吸着された血漿は免疫
検定（感度〜１ｎｇ／ｍＬ）でいかなるＬＡＣＩ抗原も
検出されなかったので本質的に内生ＬＡＣＩが枯渇され
ていた。
【００４２】結果
内因性凝固に対するヘパリンの効果
【００４３】ＡＰＰＴ検定において、内因性凝固カステ
ードを開始に至らしめる接触層蛋白質を活性化する。図
１は正常血漿及び内生ＬＡＣＩを枯渇させた同じ血漿の
ＡＰＴＴに対するヘパリンの効果を示す。０〜０．６単
位／ｍＬ−血漿のヘパリン濃度において凝血時間の中度
の延長（５倍以下）が観察された。ヘパリン０．８単位
／ｍＬにおいて、血漿は１時間以上未凝血のままであっ
た（これを“完全抗凝固”であると定義するものとする
）。正常血漿とＬＡＣＩ枯渇血漿とにはＡＰＴＴに有意
差がなかった。これは内生血漿のＬＡＣＩはヘパリンの
存在下又は非存在下において内因性凝固の調節に有意の
役割を果していないことを示唆するものである。
ードを開始に至らしめる接触層蛋白質を活性化する。図
１は正常血漿及び内生ＬＡＣＩを枯渇させた同じ血漿の
ＡＰＴＴに対するヘパリンの効果を示す。０〜０．６単
位／ｍＬ−血漿のヘパリン濃度において凝血時間の中度
の延長（５倍以下）が観察された。ヘパリン０．８単位
／ｍＬにおいて、血漿は１時間以上未凝血のままであっ
た（これを“完全抗凝固”であると定義するものとする
）。正常血漿とＬＡＣＩ枯渇血漿とにはＡＰＴＴに有意
差がなかった。これは内生血漿のＬＡＣＩはヘパリンの
存在下又は非存在下において内因性凝固の調節に有意の
役割を果していないことを示唆するものである。
【００４４】外因性凝固の調節における内生血漿ＬＡＣ
Ｉの役割 正常血漿をアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇ又は正常ラビットの
Ｉｇと共に予備インキュベートし、そしてそれらのＰＴ
を測定して外因性凝固の調節における内生血漿のＬＡＣ
Ｉの役割を決定した。表１に示されるとおり、ＰＴはア
ンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇで処理された血漿について正常Ｉ
ｇによるＰＴよりも短かった。しかし、抗体処理血漿と
対照との間の差異はＴＦの１：１０、１：１００及び１
：１，０００の希釈度においては小さかった。ＴＦの１
：１０，０００の希釈度においてはＰＴの中度の差異が
観察された。無処理の血漿及びアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇ
セファローズ４Ｂによる免疫吸着によって内生ＬＡＣＩ
を枯渇させた血漿を使用すると同様の結果が得られた。 これらの結果は内生ＬＡＣＩのＴＦ誘発凝固を抑制する
容量及び／又は能力はこれらの条件下ではかなり小さい
ことを示唆している。
Ｉの役割 正常血漿をアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇ又は正常ラビットの
Ｉｇと共に予備インキュベートし、そしてそれらのＰＴ
を測定して外因性凝固の調節における内生血漿のＬＡＣ
Ｉの役割を決定した。表１に示されるとおり、ＰＴはア
ンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇで処理された血漿について正常Ｉ
ｇによるＰＴよりも短かった。しかし、抗体処理血漿と
対照との間の差異はＴＦの１：１０、１：１００及び１
：１，０００の希釈度においては小さかった。ＴＦの１
：１０，０００の希釈度においてはＰＴの中度の差異が
観察された。無処理の血漿及びアンチ−ＬＡＣＩ−Ｉｇ
セファローズ４Ｂによる免疫吸着によって内生ＬＡＣＩ
を枯渇させた血漿を使用すると同様の結果が得られた。 これらの結果は内生ＬＡＣＩのＴＦ誘発凝固を抑制する
容量及び／又は能力はこれらの条件下ではかなり小さい
ことを示唆している。
【００４５】外因性凝固に対するヘパリンの効果正常血
漿及び内生ＬＡＣＩの枯渇された同じ血漿のＰＴに対す
るヘパリンの効果を色々な濃度のＴＦを用いて測定した
。図２（Ａ）は１：１，０００希釈度のＴＦを用いたと
きの結果を示す（ヘパリンなしの対照の場合ＰＴ＝７７
秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）において、ヘパリン濃度
が高くなると（０〜０．６単位／ｍＬ−血漿）、ＰＴは
次第に、本質的に直線的に延長された。内生ＬＡＣＩを
含有する血漿（○）においては、ヘパリンの応答はＳ型
曲線であった。ヘパリン０．１〜０．２単位／ｍＬ−血
漿において、ＰＴはＬＡＣＩ枯渇血漿におけるＰＴと同
じか、又は限界のところでそれより長かった。ヘパリン
０．３及び０．４単位／ｍＬ−血漿においては、ＰＴは
ＬＡＣＩ枯渇血漿のＰＴより１．５倍及び２．６倍長か
った。ヘパリン０．５単位／ｍＬ−血漿において、血漿
は“完全抗凝固”となった。
漿及び内生ＬＡＣＩの枯渇された同じ血漿のＰＴに対す
るヘパリンの効果を色々な濃度のＴＦを用いて測定した
。図２（Ａ）は１：１，０００希釈度のＴＦを用いたと
きの結果を示す（ヘパリンなしの対照の場合ＰＴ＝７７
秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）において、ヘパリン濃度
が高くなると（０〜０．６単位／ｍＬ−血漿）、ＰＴは
次第に、本質的に直線的に延長された。内生ＬＡＣＩを
含有する血漿（○）においては、ヘパリンの応答はＳ型
曲線であった。ヘパリン０．１〜０．２単位／ｍＬ−血
漿において、ＰＴはＬＡＣＩ枯渇血漿におけるＰＴと同
じか、又は限界のところでそれより長かった。ヘパリン
０．３及び０．４単位／ｍＬ−血漿においては、ＰＴは
ＬＡＣＩ枯渇血漿のＰＴより１．５倍及び２．６倍長か
った。ヘパリン０．５単位／ｍＬ−血漿において、血漿
は“完全抗凝固”となった。
【００４６】図２（Ｂ）は１：１００希釈度のＴＦを使
用したときの結果を示す（ヘパリンなしの対照の場合Ｐ
Ｔ＝４１秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）においても、ヘ
パリン濃度が高くなると共にＰＴが直線的に増加したが
、図２（Ａ）のＰＴと同じＰＴを達成するには約６倍高
いヘパリン濃度が必要であった。内生ＬＡＣＩを含有す
る血漿（○）においても、ヘパリンの応答はＳ型曲線で
あったが、“完全抗凝固”状態を達成するのに必要とさ
れる限界濃度はヘパリン１．５単位／ｍＬ−血漿より大
の濃度にあった。
用したときの結果を示す（ヘパリンなしの対照の場合Ｐ
Ｔ＝４１秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）においても、ヘ
パリン濃度が高くなると共にＰＴが直線的に増加したが
、図２（Ａ）のＰＴと同じＰＴを達成するには約６倍高
いヘパリン濃度が必要であった。内生ＬＡＣＩを含有す
る血漿（○）においても、ヘパリンの応答はＳ型曲線で
あったが、“完全抗凝固”状態を達成するのに必要とさ
れる限界濃度はヘパリン１．５単位／ｍＬ−血漿より大
の濃度にあった。
【００４７】図２（Ｃ）は１：１０希釈度のＴＦを使用
する同様のテストを示す（ヘパリンなしの対照の場合Ｐ
Ｔ＝２４秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）において、ＰＴ
のヘパリン誘発延長は図２（Ａ）及び同（Ｂ）の延長よ
りはるかに少なかった。ＬＡＣＩ含有血漿において、ヘ
パリン４単位／ｍＬ−血漿以下において５００秒未満の
ままであった。
する同様のテストを示す（ヘパリンなしの対照の場合Ｐ
Ｔ＝２４秒）。ＬＡＣＩ枯渇血漿（△）において、ＰＴ
のヘパリン誘発延長は図２（Ａ）及び同（Ｂ）の延長よ
りはるかに少なかった。ＬＡＣＩ含有血漿において、ヘ
パリン４単位／ｍＬ−血漿以下において５００秒未満の
ままであった。
【００４８】以上の結果を併せ考察すると、これらは外
因性凝固の調節には幾つかの機構が関与しているだろう
ことを示唆している。第１は、ヘパリンが内生ＬＡＣＩ
の非存在下でＴＦ誘発凝血を中度に延長することができ
ることであり；第２は、内生血漿ＬＡＣＩはヘパリンの
非存在下でＴＦ誘発凝血に対して弱い凝血防止効果を持
つことであり；そして第３は、ある限界濃度を越えたと
ころで、ヘパリンは血漿ＬＡＣＩの存在下においてＴＦ
誘発凝血の抑制を劇的に高めることで、これはＬＡＣＩ
がその抑制反応においてヘパリンに対する補助因子とし
て役立つことを示唆している。
因性凝固の調節には幾つかの機構が関与しているだろう
ことを示唆している。第１は、ヘパリンが内生ＬＡＣＩ
の非存在下でＴＦ誘発凝血を中度に延長することができ
ることであり；第２は、内生血漿ＬＡＣＩはヘパリンの
非存在下でＴＦ誘発凝血に対して弱い凝血防止効果を持
つことであり；そして第３は、ある限界濃度を越えたと
ころで、ヘパリンは血漿ＬＡＣＩの存在下においてＴＦ
誘発凝血の抑制を劇的に高めることで、これはＬＡＣＩ
がその抑制反応においてヘパリンに対する補助因子とし
て役立つことを示唆している。
【００４９】正常血漿のＰＴに対する外生添加ＬＡＣＩ
の効果 上記のテストを内生ＬＡＣＩを含有するか、又はそれが
枯渇された血漿に限る。結果は、内生血漿ＬＡＣＩはＴ
Ｆの量が少ない場合ＴＦ誘発凝血の抑制に重要な役割を
果たし得るが、ＴＦの量が多い場合それは不十分である
ことを示唆している。対照の範囲を内生ＬＡＣＩが不十
分である状態の場合まで広げるために、外生ＬＡＣＩを
正常血漿に添加してＰＴに対するその効果を調べた。図
３（Ａ）は、広い一定濃度範囲のＴＦ（１：１０，００
０、１：１，０００及び１：１００希釈度のＴＦ）を使
用する場合、ＰＴは血漿に添加された外生ＬＡＣＩの濃
度に対して直線関係にあることを示す。ＰＴの延長に必
要とされるＬＡＣＩの濃度は使用ＴＦ濃度が高くなると
共に増加するが、これはＴＦ−ＬＡＣＩ濃度応答曲線の
傾斜に反映される。使用されるＴＦの高いほうの濃度で
は（１：１０希釈度のＴＦ）、ＴＦ−ＬＡＣＩ濃度応答
曲線は図３（Ｂ）に示される通り直線ではない。
の効果 上記のテストを内生ＬＡＣＩを含有するか、又はそれが
枯渇された血漿に限る。結果は、内生血漿ＬＡＣＩはＴ
Ｆの量が少ない場合ＴＦ誘発凝血の抑制に重要な役割を
果たし得るが、ＴＦの量が多い場合それは不十分である
ことを示唆している。対照の範囲を内生ＬＡＣＩが不十
分である状態の場合まで広げるために、外生ＬＡＣＩを
正常血漿に添加してＰＴに対するその効果を調べた。図
３（Ａ）は、広い一定濃度範囲のＴＦ（１：１０，００
０、１：１，０００及び１：１００希釈度のＴＦ）を使
用する場合、ＰＴは血漿に添加された外生ＬＡＣＩの濃
度に対して直線関係にあることを示す。ＰＴの延長に必
要とされるＬＡＣＩの濃度は使用ＴＦ濃度が高くなると
共に増加するが、これはＴＦ−ＬＡＣＩ濃度応答曲線の
傾斜に反映される。使用されるＴＦの高いほうの濃度で
は（１：１０希釈度のＴＦ）、ＴＦ−ＬＡＣＩ濃度応答
曲線は図３（Ｂ）に示される通り直線ではない。
【００５０】ＬＡＣＩ及びヘパリンの相乗抗凝固作用上
記のテストはヘパリン又はＬＡＣＩの血漿に対する個別
添加はＴＦ誘発凝血の用量依存性抑制を生むことを照明
している（図２及び図３）。加えて、ヘパリンはＴＦ誘
発凝血の抑制に内生ＬＡＣＩによって協力作用を及ぼす
と思われる（図２）。協力作用の程度を測るために、Ｌ
ＡＣＩ枯渇血漿にヘパリン、精製されたＬＡＣＩ又はそ
の両者の組み合わせを補充してそれらの抗凝固効果を比
較した。図４（Ａ）は外生添加ヘパリン及びＬＡＣＩの
濃度に対するＰＴの関係を示す。ヘパリン単独（□）又
はＬＡＣＩ単独（ｘ）の濃度の増加に対するＰＴの延長
は直線的である。ヘパリンとＬＡＣＩが血漿中に同時に
存在する場合（▲）、凝血時間に対する全効果は使用さ
れる化合物の濃度と共に変化する。低濃度（例えば、ヘ
パリン＜０．２単位／ｍＬプラスＬＡＣＩ＜１μｇ／ｍ
Ｌ）では、凝血時間は個々の成分について予測したもの
から余り偏位しない。より高い濃度（ヘパリン０．３単
位／ｍＬプラスＬＡＣＩ １．５μｇ／ｍＬ）では、
凝血時間は個々の成分から予測したものから次第に偏位
し、その強化効果が明らかになる。例えば、ヘパリン０
．５単位／ｍＬプラスＬＡＣＩ ２．５μｇ／ｍＬは
〜１，０００秒のＰＴを有するのに対し、ヘパリン１単
位／ｍＬまたはＬＡＣＩ ５μｇ／ｍＬのＰＴは２０
０秒未満である。
記のテストはヘパリン又はＬＡＣＩの血漿に対する個別
添加はＴＦ誘発凝血の用量依存性抑制を生むことを照明
している（図２及び図３）。加えて、ヘパリンはＴＦ誘
発凝血の抑制に内生ＬＡＣＩによって協力作用を及ぼす
と思われる（図２）。協力作用の程度を測るために、Ｌ
ＡＣＩ枯渇血漿にヘパリン、精製されたＬＡＣＩ又はそ
の両者の組み合わせを補充してそれらの抗凝固効果を比
較した。図４（Ａ）は外生添加ヘパリン及びＬＡＣＩの
濃度に対するＰＴの関係を示す。ヘパリン単独（□）又
はＬＡＣＩ単独（ｘ）の濃度の増加に対するＰＴの延長
は直線的である。ヘパリンとＬＡＣＩが血漿中に同時に
存在する場合（▲）、凝血時間に対する全効果は使用さ
れる化合物の濃度と共に変化する。低濃度（例えば、ヘ
パリン＜０．２単位／ｍＬプラスＬＡＣＩ＜１μｇ／ｍ
Ｌ）では、凝血時間は個々の成分について予測したもの
から余り偏位しない。より高い濃度（ヘパリン０．３単
位／ｍＬプラスＬＡＣＩ １．５μｇ／ｍＬ）では、
凝血時間は個々の成分から予測したものから次第に偏位
し、その強化効果が明らかになる。例えば、ヘパリン０
．５単位／ｍＬプラスＬＡＣＩ ２．５μｇ／ｍＬは
〜１，０００秒のＰＴを有するのに対し、ヘパリン１単
位／ｍＬまたはＬＡＣＩ ５μｇ／ｍＬのＰＴは２０
０秒未満である。
【００５１】薬理学的には、薬物の相互作用はゼロ相互
作用、相乗作用又は拮抗作用を区別する基準として相互
作用指数を用いるアイソボール（等効果曲線）法により
分析することができる。薬物の相互作用指数はｄａ／Ｄ
ａ＋ｄｂ／Ｄｂと定義される。ここで、ｄａ及びｄｂは
それぞれ当該組み合わせにおけるＡ及びＢの濃度であり
、またＤａ及びＤｂは個々に当該組み合わせと効果が等
しいＡ及びＢの濃度である。相互作用指数の値は相互作
用のタイプを反映する。即ち、この値が１であることは
ゼロ相互作用を示唆し；＜１の値は相乗作用を示し；＞
１の値は拮抗作用を示す。図４（Ａ）のデーターに基づ
いて、化合物（即ち、同じ凝血時間を与える個別のＬＡ
ＣＩ、ヘパリン、及びそれらの組み合わせ）の等効果濃
度を相互作用指数の計算のために得ることができる。 図４（Ｂ）は凝血時間の関数としての相互作用指数を示
す。その結果は増加する濃度のＬＡＣＩ及びヘパリンの
併用に起因して凝血時間が増加すると共に相乗作用又は
強化作用が増加すること（相互作用指数が＜１）を示す
。
作用、相乗作用又は拮抗作用を区別する基準として相互
作用指数を用いるアイソボール（等効果曲線）法により
分析することができる。薬物の相互作用指数はｄａ／Ｄ
ａ＋ｄｂ／Ｄｂと定義される。ここで、ｄａ及びｄｂは
それぞれ当該組み合わせにおけるＡ及びＢの濃度であり
、またＤａ及びＤｂは個々に当該組み合わせと効果が等
しいＡ及びＢの濃度である。相互作用指数の値は相互作
用のタイプを反映する。即ち、この値が１であることは
ゼロ相互作用を示唆し；＜１の値は相乗作用を示し；＞
１の値は拮抗作用を示す。図４（Ａ）のデーターに基づ
いて、化合物（即ち、同じ凝血時間を与える個別のＬＡ
ＣＩ、ヘパリン、及びそれらの組み合わせ）の等効果濃
度を相互作用指数の計算のために得ることができる。 図４（Ｂ）は凝血時間の関数としての相互作用指数を示
す。その結果は増加する濃度のＬＡＣＩ及びヘパリンの
併用に起因して凝血時間が増加すると共に相乗作用又は
強化作用が増加すること（相互作用指数が＜１）を示す
。
【００５２】ヘパリンはＬＡＣＩによるＴＦ誘発凝血の
抑制を向上させる ヘパリンの非存在下及び存在下におけるＬＡＣＩの相対
効力を見積もるために、ＬＡＣＩ枯渇血漿に色々な濃度
のＬＡＣＩ及びヘパリンを補充し、それらのＰＴを測定
した。図５はヘパリンの非存在下（ｘ）並びに血漿のｍ
Ｌ当たりそれぞれ０．５単位（●）、１．０単位（▲）
及び２．０単位（△）のヘパリンの存在下におけるＬＡ
ＣＩの濃度の関数としてのＰＴを示す。その傾斜が効力
を反映すると仮定すると、ＬＡＣＩの相対効力は０．５
単位、１．０単位及び２．０単位／ｍＬ−血漿のヘパリ
ンの存在下で外生添加ヘパリンの非存在下における効力
を越えてそれぞれその３．４倍、８．５倍及び７５倍に
増加する。
抑制を向上させる ヘパリンの非存在下及び存在下におけるＬＡＣＩの相対
効力を見積もるために、ＬＡＣＩ枯渇血漿に色々な濃度
のＬＡＣＩ及びヘパリンを補充し、それらのＰＴを測定
した。図５はヘパリンの非存在下（ｘ）並びに血漿のｍ
Ｌ当たりそれぞれ０．５単位（●）、１．０単位（▲）
及び２．０単位（△）のヘパリンの存在下におけるＬＡ
ＣＩの濃度の関数としてのＰＴを示す。その傾斜が効力
を反映すると仮定すると、ＬＡＣＩの相対効力は０．５
単位、１．０単位及び２．０単位／ｍＬ−血漿のヘパリ
ンの存在下で外生添加ヘパリンの非存在下における効力
を越えてそれぞれその３．４倍、８．５倍及び７５倍に
増加する。
【００５３】血漿のＰＴに対する硫酸化ポリサッカライ
ド及びそれらのＬＡＣＩとの組み合わせの効果ＴＦ誘発
凝血をＬＡＣＩ依存性の様式で、及びＬＡＣＩに依存し
ない様式で抑制するヘパリンの能力に鑑み、他の硫酸化
ポリサッカライドもそれらの抗凝固効果についてテスト
した。図６は正常血漿のＰＴに対する種々の硫酸化ポリ
サッカライドの効果を示す。テストした総ての化合物が
凝血時間を延長する能力を示したが、この効果は非常に
異なる濃度で観察された。これら化合物の相対効力は重
量で次の順序である：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝５
，１００）＞非分別ヘパリン＞低分子量ヘパリン（平均
Ｍｒ＝３，７００）＞ペントサン ポリサルフェート
＞デルマタンサルフェート＞デキストランサルフェート
＞ヘパランサルフェート。これらの化合物もＬＡＣＩ依
存性抗凝血活性を高めるかどうかを調べるために、図４
（Ａ）に記載のテストと同様のテストを行った。図７（
Ａ）−（Ｆ）は正常血漿のＰＴに対するＬＡＣＩ、硫酸
化ポリサッカライド及びそれらの組み合わせの効果を示
す。テストした化合物は総てＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩに
よる抑制を高めたが、それは非常に異なる濃度において
であった。ＬＡＣＩ抗凝血活性を高める硫酸化ポリサッ
カライドの濃度は図６で用いられた濃度と同様の範囲で
あり、その相対効力は重量で上記と同じ順序である。
ド及びそれらのＬＡＣＩとの組み合わせの効果ＴＦ誘発
凝血をＬＡＣＩ依存性の様式で、及びＬＡＣＩに依存し
ない様式で抑制するヘパリンの能力に鑑み、他の硫酸化
ポリサッカライドもそれらの抗凝固効果についてテスト
した。図６は正常血漿のＰＴに対する種々の硫酸化ポリ
サッカライドの効果を示す。テストした総ての化合物が
凝血時間を延長する能力を示したが、この効果は非常に
異なる濃度で観察された。これら化合物の相対効力は重
量で次の順序である：低分子量ヘパリン（平均Ｍｒ＝５
，１００）＞非分別ヘパリン＞低分子量ヘパリン（平均
Ｍｒ＝３，７００）＞ペントサン ポリサルフェート
＞デルマタンサルフェート＞デキストランサルフェート
＞ヘパランサルフェート。これらの化合物もＬＡＣＩ依
存性抗凝血活性を高めるかどうかを調べるために、図４
（Ａ）に記載のテストと同様のテストを行った。図７（
Ａ）−（Ｆ）は正常血漿のＰＴに対するＬＡＣＩ、硫酸
化ポリサッカライド及びそれらの組み合わせの効果を示
す。テストした化合物は総てＴＦ誘発凝血のＬＡＣＩに
よる抑制を高めたが、それは非常に異なる濃度において
であった。ＬＡＣＩ抗凝血活性を高める硫酸化ポリサッ
カライドの濃度は図６で用いられた濃度と同様の範囲で
あり、その相対効力は重量で上記と同じ順序である。
【００５４】
【表１】正常血漿のプロトロンビン時間に対するアンチ
ーＬＡＣＩ−Ｉｇの効果
プロトロンビン時間（秒）ａ ＴＦ希釈度ｂ
血漿＋正常ラビットＩｇｃ 血漿＋アンチー
ＬＡＣＩ−Ｉｇｄ １ ： １０
２７．１
２５．５１ ： １００
４４．６
４２．７１ ： １，０００
８６．１
７５．５１ ： １０，０００
１７５．７
１２９．１
ーＬＡＣＩ−Ｉｇの効果
プロトロンビン時間（秒）ａ ＴＦ希釈度ｂ
血漿＋正常ラビットＩｇｃ 血漿＋アンチー
ＬＡＣＩ−Ｉｇｄ １ ： １０
２７．１
２５．５１ ： １００
４４．６
４２．７１ ： １，０００
８６．１
７５．５１ ： １０，０００
１７５．７
１２９．１
【００５５】 ａプロトロンビン時間は
「方法」の欄に記載したようにして検定した。それらの
値は２つの測定値の平均である。
「方法」の欄に記載したようにして検定した。それらの
値は２つの測定値の平均である。
【００５６】 ｂＴＦを順次希釈して１ｍｇ／ｍＬのウ
シの血清アルブミンを含有する生理食塩水溶液にした。
シの血清アルブミンを含有する生理食塩水溶液にした。
【００５７】 ｃ正常血漿（１．９５ｍＬ）を０．５ｍ
Ｌの正常ラビットＩｇ（１．６ｍｇ／ｍＬ）と混合し、
検定前に４℃において３時間インキュベートした。
Ｌの正常ラビットＩｇ（１．６ｍｇ／ｍＬ）と混合し、
検定前に４℃において３時間インキュベートした。
【００５８】 ｄ正常ラビットＩｇの代わりに抗ＬＡＣ
Ｉ−Ｉｇを使用したことを除きｃと同じ。
Ｉ−Ｉｇを使用したことを除きｃと同じ。
【００５９】ＬＡＣＩと硫酸化ポリサッカライドとの組
み合わせ抗凝固剤は、例えば散在性の血管内凝固に必要
とされるだろうもののような処理が必要とされるときに
、温血哺乳動物に対する適当な投与によって内因性及び
外因性の両凝固経路を抑制するのに使用することができ
る。この組み合わせの通常投与されるだろう量は哺乳動
物の身体的特性と病状の厳しさに主として依存する。 この量は有効量、即ち凝固の抑制に医療上有利であるが
、その使用に伴って得られる利点を圧迫する有毒な効果
はない量でなければならない。好ましい投与ルートは経
口投与と非経口投与である。投与の実例を示すと、この
組み合わせを常用の希釈剤及びキャリアー、例えば生理
食塩水と共に溶解して投与する方法である。この活性な
組み合わせの製剤上許容できる希釈剤またはキャリアー
中の治療用剤形を取る他の適当な処方物は、例えばペン
シルベニア州（Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）イーストン
（Ｅａｓｔｏｎ）のマック パブリッシング社（Ｍａ
ｃｋ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ）から１９８０年に
刊行されたアーサー オーソル（ＡｒｔｈｕｒＯｓｏ
ｌ）編のレミングトンのファーマシュウティカル サ
イエンセス（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）のような製剤
分野の一般的な教科書を参考にして調製することができ
る。
み合わせ抗凝固剤は、例えば散在性の血管内凝固に必要
とされるだろうもののような処理が必要とされるときに
、温血哺乳動物に対する適当な投与によって内因性及び
外因性の両凝固経路を抑制するのに使用することができ
る。この組み合わせの通常投与されるだろう量は哺乳動
物の身体的特性と病状の厳しさに主として依存する。 この量は有効量、即ち凝固の抑制に医療上有利であるが
、その使用に伴って得られる利点を圧迫する有毒な効果
はない量でなければならない。好ましい投与ルートは経
口投与と非経口投与である。投与の実例を示すと、この
組み合わせを常用の希釈剤及びキャリアー、例えば生理
食塩水と共に溶解して投与する方法である。この活性な
組み合わせの製剤上許容できる希釈剤またはキャリアー
中の治療用剤形を取る他の適当な処方物は、例えばペン
シルベニア州（Ｐｅｎｎｓｙｌｖａｎｉａ）イーストン
（Ｅａｓｔｏｎ）のマック パブリッシング社（Ｍａ
ｃｋ ＰｕｂｌｉｓｈｉｎｇＣｏ）から１９８０年に
刊行されたアーサー オーソル（ＡｒｔｈｕｒＯｓｏ
ｌ）編のレミングトンのファーマシュウティカル サ
イエンセス（Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａ
ｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ）のような製剤
分野の一般的な教科書を参考にして調製することができ
る。
【００６０】当業者には、以上の本発明の開示を本発明
の精神と範囲から逸脱することなく読んだ後は、色々な
他の例は明白であろう。このような他の例も前記の特許
請求の範囲に含まれるものである。
の精神と範囲から逸脱することなく読んだ後は、色々な
他の例は明白であろう。このような他の例も前記の特許
請求の範囲に含まれるものである。
【００６１】文献
１．ローゼンベルグ，アール ディー（Ｒｏｓｅｎｂ
ｅｒｇ，Ｒ．Ｄ．）のＦｅｄ．Ｐｒｏｃ．、３６、１０
−１８（１９７７）。
ｅｒｇ，Ｒ．Ｄ．）のＦｅｄ．Ｐｒｏｃ．、３６、１０
−１８（１９７７）。
【００６２】２．ホルマー，イー（Ｈｏｌｍｅｒ，Ｅ．
）、クラチ，ケー（Ｋｕｒａｃｈｉ，ｋ．）及びソダー
ストロム，ジー（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ，Ｇ．）の
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１９３、３９５−４００（１９
８１）。
）、クラチ，ケー（Ｋｕｒａｃｈｉ，ｋ．）及びソダー
ストロム，ジー（Ｓｏｄｅｒｓｔｒｏｍ，Ｇ．）の
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｊ．、１９３、３９５−４００（１９
８１）。
【００６３】３．カス，ビー（Ｃａｓｕ，Ｂ．）のＡｄ
ｖ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
、４３、５１−１３４（１９８５）。
ｖ．Ｃａｒｂｏｈｙｄｒ．Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．
、４３、５１−１３４（１９８５）。
【００６４】４．オフォス，エフ エー（Ｏｆｏｓｕ
，Ｆ．Ａ．）、ブチャナン，エム アール（Ｂｕｃｈ
ａｎａｎ，Ｍ．Ｒ．）、アンヴァリ，エヌ（Ａｎｖａｒ
ｉ，Ｎ．）、スミス，エル エム（Ｓｍｉｔｈ，Ｌ．
Ｍ．）及びブラッチュマン，エム エー（Ｂｌａｊｃ
ｈｍａｎ，Ｍ．Ａ．）のＡｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．、５５６、１２３−１３１（１９８９）。
，Ｆ．Ａ．）、ブチャナン，エム アール（Ｂｕｃｈ
ａｎａｎ，Ｍ．Ｒ．）、アンヴァリ，エヌ（Ａｎｖａｒ
ｉ，Ｎ．）、スミス，エル エム（Ｓｍｉｔｈ，Ｌ．
Ｍ．）及びブラッチュマン，エム エー（Ｂｌａｊｃ
ｈｍａｎ，Ｍ．Ａ．）のＡｎｎ．Ｎ．Ｙ．Ａｃａｄ．Ｓ
ｃｉ．、５５６、１２３−１３１（１９８９）。
【００６５】５．ゴダール，エーチ シー（Ｇｏｄａ
ｌ，Ｈ．Ｃ．）、ライフ，エム（Ｒｙｇｈ，Ｍ．）及び
ラーケ，ケー（Ｌａａｋｅ，Ｋ．）のＴｈｒｏｍｂ．Ｒ
ｅｓ．、５、７７３−７７５（１９７４）。
ｌ，Ｈ．Ｃ．）、ライフ，エム（Ｒｙｇｈ，Ｍ．）及び
ラーケ，ケー（Ｌａａｋｅ，Ｋ．）のＴｈｒｏｍｂ．Ｒ
ｅｓ．、５、７７３−７７５（１９７４）。
【００６６】６．ジェスティー，ジェー（Ｊｅｓｔｙ，
Ｊ．）のＡｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
、１８５、１６５−１７５（１９７８）。
Ｊ．）のＡｒｃｈ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
、１８５、１６５−１７５（１９７８）。
【００６７】７．ブローズ，ジー ジェー ジュニ
ア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）及びマジェルス，ピ
ー ダブリュウ（Ｍａｊｅｒｕｓ，Ｐ．Ｗ．）のＪ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５５、１２４２−１２４７（
１９８０）。
ア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）及びマジェルス，ピ
ー ダブリュウ（Ｍａｊｅｒｕｓ，Ｐ．Ｗ．）のＪ．
Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．、２５５、１２４２−１２４７（
１９８０）。
【００６８】８．コンドー，エス（Ｋｏｎｄｏ，Ｓ．）
及びキシール，ダブリュウ（Ｋｉｓｉｅｌ，Ｗ．）のＴ
ｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．、４６、３２５−３３５（１９８
７）。
及びキシール，ダブリュウ（Ｋｉｓｉｅｌ，Ｗ．）のＴ
ｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．、４６、３２５−３３５（１９８
７）。
【００６９】９．ネマーソン，ワイ（Ｎｅｍｅｒｓｏｎ
，Ｙ．）のＢｌｏｏｄ、７１、１−８（１９８８）。
，Ｙ．）のＢｌｏｏｄ、７１、１−８（１９８８）。
【００７０】１０．ウォーカー，エフ ジェ（Ｗａｌ
ｋｅｒ，Ｆ．Ｊ．）及びエスモン，シーティー（Ｅｓｍ
ｏｎ，Ｃ．Ｔ．）のＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ａｃｔａ、５８５、４０５−４１５（１９７９）。
ｋｅｒ，Ｆ．Ｊ．）及びエスモン，シーティー（Ｅｓｍ
ｏｎ，Ｃ．Ｔ．）のＢｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．
Ａｃｔａ、５８５、４０５−４１５（１９７９）。
【００７１】１１．オフォス，エフ エー（Ｏｆｏｓ
ｕ，Ｆ．Ａ．）、モディ，ジー（Ｍｏｄｉ，Ｇ．）、セ
ルスク，エー エル（Ｃｅｒｓｋｕ，Ａ．Ｌ．）、ハ
ーシュ，ジェー（Ｈｉｒｓｈ，Ｊ．）及びブラッチュマ
ン，エム エー（Ｂｌａｊｃｈｍａｎ，Ｍ．Ａ．）の
Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．、２８、４８７−４９７（１９
８２）。
ｕ，Ｆ．Ａ．）、モディ，ジー（Ｍｏｄｉ，Ｇ．）、セ
ルスク，エー エル（Ｃｅｒｓｋｕ，Ａ．Ｌ．）、ハ
ーシュ，ジェー（Ｈｉｒｓｈ，Ｊ．）及びブラッチュマ
ン，エム エー（Ｂｌａｊｃｈｍａｎ，Ｍ．Ａ．）の
Ｔｈｒｏｍｂ．Ｒｅｓ．、２８、４８７−４９７（１９
８２）。
【００７２】１２．ブローズ，ジー ジェー ジュ
ニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）、ワーレン，エル
エー（Ｗａｒｒｅｎ，Ｌ．Ａ．）、ノボツニー，ダ
ブリュウ エフ（Ｎｏｖｏｔｎｙ，Ｗ．Ｆ．）、ヒグ
チ，ディー エー（Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｄ．Ａ．）、ギ
ラード，ジェー ジェー（Ｇｉｒａｒｄ，Ｊ．Ｊ．）
及びミレティフ，ジェー ピー（Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，
Ｊ．Ｐ．）のＢｌｏｏｄ、７１、３３５−３４３（１９
８８）。
ニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）、ワーレン，エル
エー（Ｗａｒｒｅｎ，Ｌ．Ａ．）、ノボツニー，ダ
ブリュウ エフ（Ｎｏｖｏｔｎｙ，Ｗ．Ｆ．）、ヒグ
チ，ディー エー（Ｈｉｇｕｃｈｉ，Ｄ．Ａ．）、ギ
ラード，ジェー ジェー（Ｇｉｒａｒｄ，Ｊ．Ｊ．）
及びミレティフ，ジェー ピー（Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，
Ｊ．Ｐ．）のＢｌｏｏｄ、７１、３３５−３４３（１９
８８）。
【００７３】１３．ラオ，エル ヴイ エム（Ｒａ
ｏ，Ｌ．Ｖ．Ｍ．）及びラパポート，エスアイ（Ｒａｐ
ａｐｏｒｔ，Ｓ．Ｉ．）のＢｌｏｏｄ、６９、６４５−
６５１（１９８７）。
ｏ，Ｌ．Ｖ．Ｍ．）及びラパポート，エスアイ（Ｒａｐ
ａｐｏｒｔ，Ｓ．Ｉ．）のＢｌｏｏｄ、６９、６４５−
６５１（１９８７）。
【００７４】１４．ブローズ，ジー ジェー ジュ
ニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）及びミレティフ，
ジェー ピー （Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，Ｊ．Ｐ．）の
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４
、１８８６−１８９０（１９８７）。
ニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）及びミレティフ，
ジェー ピー （Ｍｉｌｅｔｉｃｈ，Ｊ．Ｐ．）の
Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、８４
、１８８６−１８９０（１９８７）。
【００７５】１５．ウン，ティ−シー（Ｗｕｎ，Ｔ−Ｃ
．）、クレツマー，ケーケー（ｋｒｅｔｚｍｅｒ，Ｋ．
Ｋ．）、ギラード，ティー ジェー（Ｇｉｒａｒｄ，
Ｔ．Ｊ．）、ミレティフ，ジェー ピー（Ｍｉｌｅｔ
ｉｃｈ，Ｊ．Ｐ．）及びブローズ，ジー ジェー
ジュニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）のＪ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３、６００１−６００４（１９８
８）。
．）、クレツマー，ケーケー（ｋｒｅｔｚｍｅｒ，Ｋ．
Ｋ．）、ギラード，ティー ジェー（Ｇｉｒａｒｄ，
Ｔ．Ｊ．）、ミレティフ，ジェー ピー（Ｍｉｌｅｔ
ｉｃｈ，Ｊ．Ｐ．）及びブローズ，ジー ジェー
ジュニア（Ｂｒｏｚｅ，Ｇ．Ｊ．Ｊｒ．）のＪ．Ｂｉｏ
ｌ．Ｃｈｅｍ．、２６３、６００１−６００４（１９８
８）。
【００７６】１６．チェース，ティー ジュニア（Ｃ
ｈａｓｅ，Ｔ．Ｊｒ．）及びショウ，イー（Ｓｈａｗ，
Ｅ．）のＭｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９、２
０−２７（１９７０）。
ｈａｓｅ，Ｔ．Ｊｒ．）及びショウ，イー（Ｓｈａｗ，
Ｅ．）のＭｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、１９、２
０−２７（１９７０）。
【００７７】１７．イシイ，エス エーチ（Ｉｓｈｉ
ｉ，Ｓ．Ｈ．）、ヨコサワ，エーチ（Ｙｏｋｏｓａｗａ
，Ｈ．）、クマザキ，ティー（Ｋｕｍａｚａｋｉ，Ｔ．
）及びナカムラ，アイ（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｉ．）のＭ
ｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、９１、３７８−３８
３（１９８３）。
ｉ，Ｓ．Ｈ．）、ヨコサワ，エーチ（Ｙｏｋｏｓａｗａ
，Ｈ．）、クマザキ，ティー（Ｋｕｍａｚａｋｉ，Ｔ．
）及びナカムラ，アイ（Ｎａｋａｍｕｒａ，Ｉ．）のＭ
ｅｔｈｏｄｓ Ｅｎｚｙｍｏｌ、９１、３７８−３８
３（１９８３）。
【００７８】１８．ベレンバウム，エム シー（Ｂｅ
ｒｅｎｂａｕｍ，Ｍ．Ｃ．）のＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒ
ｅｖ．，４１、９３−１４１（１９８９）。
ｒｅｎｂａｕｍ，Ｍ．Ｃ．）のＰｈａｒｍａｃｏｌ．Ｒ
ｅｖ．，４１、９３−１４１（１９８９）。
【図１】正常血漿及び内生ＬＡＣＩを枯渇させた同じ血
漿の活性化された部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ
Ｔ）に対するヘパリンの効果を示すグラフである。
漿の活性化された部分トロンボプラスチン時間（ＡＰＴ
Ｔ）に対するヘパリンの効果を示すグラフである。
【図２】色々な組織因子（ＴＦ）濃度における正常血漿
及びＬＡＣＩ枯渇血漿のプロトロンビン時間に対するヘ
パリンの効果を示すグラフであって、図２（Ａ）は１：
１，０００希釈度のＴＦを用いた時の結果を、図２（Ｂ
）は１：１００希釈度のＴＦを使用したときの結果を、
そして図２（Ｃ）は１：１０希釈度のＴＦを使用したと
きの結果をそれぞれ示す。
及びＬＡＣＩ枯渇血漿のプロトロンビン時間に対するヘ
パリンの効果を示すグラフであって、図２（Ａ）は１：
１，０００希釈度のＴＦを用いた時の結果を、図２（Ｂ
）は１：１００希釈度のＴＦを使用したときの結果を、
そして図２（Ｃ）は１：１０希釈度のＴＦを使用したと
きの結果をそれぞれ示す。
【図３】色々な濃度のＴＦで凝塊を誘発させた血漿のＰ
Ｔに対する外生添加ＬＡＣＩの効果を示すグラフであっ
て、図３（Ａ）は１：１０，０００、１：１，０００及
び１：１００希釈度のＴＦを使用したときの結果を、そ
して図３（Ａ）は１：１０希釈度のＴＦを使用したとき
の結果をそれぞれ示す。
Ｔに対する外生添加ＬＡＣＩの効果を示すグラフであっ
て、図３（Ａ）は１：１０，０００、１：１，０００及
び１：１００希釈度のＴＦを使用したときの結果を、そ
して図３（Ａ）は１：１０希釈度のＴＦを使用したとき
の結果をそれぞれ示す。
【図４】ＬＡＣＩ枯渇血漿のＰＴを延長する際のヘパリ
ンとＬＡＣＩとの間の相互作用テストの結果を示すグラ
フであって、図４（Ａ）は外生添加ヘパリン及びＬＡＣ
Ｉの濃度に対するＰＴの関係を、そして図４（Ｂ）は凝
血時間の関数としての相互作用指数をそれぞれ示す。
ンとＬＡＣＩとの間の相互作用テストの結果を示すグラ
フであって、図４（Ａ）は外生添加ヘパリン及びＬＡＣ
Ｉの濃度に対するＰＴの関係を、そして図４（Ｂ）は凝
血時間の関数としての相互作用指数をそれぞれ示す。
【図５】内生ＬＡＣＩ枯渇血漿に対するＬＡＣＩ、ヘパ
リン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせの効果を示す
グラフである。
リン及びＬＡＣＩ／ヘパリンの組み合わせの効果を示す
グラフである。
【図６】正常細胞のＰＴに対する硫酸化ポリサッカライ
ドの効果を示すグラフである。
ドの効果を示すグラフである。
【図７】貯留血漿のＰＴに対する硫酸化ポリサッカライ
ド、ＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライド／ＬＡＣＩの
組み合わせの効果を示すグラフであって、図７（Ａ）は
硫酸化ポリサッカライドとしてＬＭＷＨ５１００を使用
したときの結果を、図７（Ｂ）はＬＭＷＨ３７００を使
用したときの結果を、図７（Ｃ）はＰＰＳを使用したと
きの結果を、図７（Ｄ）はＤＳを使用したときの結果を
、図７（Ｅ）はＤＸＳを使用したときの結果を、そして
図７（Ｆ）はＨＳを使用したときの結果をそれぞれ示す
。
ド、ＬＡＣＩ及び硫酸化ポリサッカライド／ＬＡＣＩの
組み合わせの効果を示すグラフであって、図７（Ａ）は
硫酸化ポリサッカライドとしてＬＭＷＨ５１００を使用
したときの結果を、図７（Ｂ）はＬＭＷＨ３７００を使
用したときの結果を、図７（Ｃ）はＰＰＳを使用したと
きの結果を、図７（Ｄ）はＤＳを使用したときの結果を
、図７（Ｅ）はＤＸＳを使用したときの結果を、そして
図７（Ｆ）はＨＳを使用したときの結果をそれぞれ示す
。
Claims (6)
- 【請求項１】 有効相乗作用性抗凝固剤量のリポ蛋白
会合凝固抑制剤（ＬＡＣＩ）と抗凝固剤硫酸化ポリサッ
カライドとを温血哺乳動物に投与することを含んで成る
温血哺乳動物における血液凝固の抑制法。 - 【請求項２】 硫酸化ポリサッカライドがヘパリン、
ペントサン ポリサルフェート、デルマタンサルフェ
ート、デキストランサルフェート及びヘパランサルフェ
ートより成る群から選択されたものである、請求項１に
記載の方法。 - 【請求項３】 処理される血漿のｍＬ当たり約０．１
単位乃至約４単位のヘパリン及び約０．１μｇ乃至約５
μｇのＬＡＣＩを投与する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項４】 リポ蛋白会合凝固抑制剤及び抗凝固剤
硫酸化ポリサッカライドを、温血哺乳動物に投与した時
に相乗抗凝固効果を奏する割合で含んで成る組成物。 - 【請求項５】 硫酸化ポリサッカライドがヘパリン、
ペントサン ポリサルフェート、デルマタンサルフェ
ート、デキストランサルフェート及びヘパランサルフェ
ートより成る群から選択されたものである、請求項４に
記載の組成物。 - 【請求項６】 リポ蛋白会合凝固抑制剤及びヘパリン
がヘパリン約０．１単位乃至約４単位、リポ蛋白会合凝
固抑制剤約０．１μｇ乃至約５μｇの割合である、請求
項４に記載の組成物。
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US57308390A | 1990-08-27 | 1990-08-27 | |
| US573083 | 1990-08-27 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04257524A true JPH04257524A (ja) | 1992-09-11 |
| JPH0733336B2 JPH0733336B2 (ja) | 1995-04-12 |
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Family Applications (1)
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|---|---|---|---|
| JP3213844A Expired - Fee Related JPH0733336B2 (ja) | 1990-08-27 | 1991-08-26 | Ｌａｃｉと硫酸化ポリサッカライドとの組み合わせ抗凝固剤 |
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|---|---|
| EP (1) | EP0473564B1 (ja) |
| JP (1) | JPH0733336B2 (ja) |
| AT (1) | ATE135585T1 (ja) |
| CA (1) | CA2049873C (ja) |
| DE (1) | DE69118056T2 (ja) |
| DK (1) | DK0473564T3 (ja) |
| ES (1) | ES2085462T3 (ja) |
| GR (1) | GR3020312T3 (ja) |
| IE (1) | IE913004A1 (ja) |
| PT (1) | PT98779B (ja) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2008115176A (ja) * | 1995-06-07 | 2008-05-22 | Chiron Corp | タンパク質の可溶化、精製、および再生の方法 |
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|---|---|---|---|---|
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| US5276015A (en) * | 1992-03-18 | 1994-01-04 | Washington University | Method of inhibiting microvascular thrombosis |
| US6063764A (en) * | 1992-06-01 | 2000-05-16 | Washington University & Chiron Corp. | Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis |
| US20030171292A1 (en) | 1992-06-01 | 2003-09-11 | Creasey Abla A. | Method for using lipoprotein associated coagulation inhibitor to treat sepsis |
| ITPD940054A1 (it) * | 1994-03-23 | 1995-09-23 | Fidia Advanced Biopolymers Srl | Polisaccaridi solfatati |
| DK0769962T3 (da) * | 1994-07-07 | 2003-06-23 | Univ Washington | Fremgangsmåde til afsvækkelse af arteriel stenose |
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| WO1996004377A1 (en) * | 1994-08-05 | 1996-02-15 | Chiron Corporation | Production of tissue factor pathway inhibitor |
| AU759412B2 (en) * | 1995-06-07 | 2003-04-17 | G.D. Searle & Co. | Method of solubilizing, purifying and refolding protein and compositions comprising proteins and solubilizing agents |
| AU2003200506B2 (en) * | 1995-06-07 | 2007-01-18 | G.D. Searle Llc | Method of solubilizing, purifying and refolding protein and compositions comprising proteins and solubilizing agents |
| US5772629A (en) * | 1995-10-23 | 1998-06-30 | Localmed, Inc. | Localized intravascular delivery of TFPI for inhibition of restenosis in recanalized blood vessels |
| EP0868191A1 (en) * | 1995-12-18 | 1998-10-07 | Stichting Sanquin Bloedvoorziening | Potentiation of complement and coagulation inhibitory properties of c1-inhibitor. |
| US7674769B2 (en) | 2001-10-15 | 2010-03-09 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | Treatment of severe pneumonia by administration of tissue factor pathway inhibitor (TFPI) |
| EP1654283B1 (en) | 2003-08-13 | 2011-07-13 | Novartis Vaccines and Diagnostics, Inc. | Improved method of purifying tfpi and tfpi analogs |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0300988A2 (en) * | 1987-07-23 | 1989-01-25 | Washington University | Tissue factor inhibitor |
| EP0318451A2 (en) * | 1987-11-23 | 1989-05-31 | Monsanto Company | DNA clone of human tissue factor inhibitor |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE69117545T2 (de) * | 1990-01-25 | 1996-10-31 | Univ Washington | Faktor X-LACI-Hybridprotein |
-
1991
- 1991-08-26 AT AT91870132T patent/ATE135585T1/de not_active IP Right Cessation
- 1991-08-26 IE IE300491A patent/IE913004A1/en not_active IP Right Cessation
- 1991-08-26 ES ES91870132T patent/ES2085462T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-26 PT PT98779A patent/PT98779B/pt not_active IP Right Cessation
- 1991-08-26 CA CA002049873A patent/CA2049873C/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-26 JP JP3213844A patent/JPH0733336B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1991-08-26 EP EP91870132A patent/EP0473564B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-26 DE DE69118056T patent/DE69118056T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1991-08-26 DK DK91870132.7T patent/DK0473564T3/da active
-
1996
- 1996-06-20 GR GR960401682T patent/GR3020312T3/el unknown
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0300988A2 (en) * | 1987-07-23 | 1989-01-25 | Washington University | Tissue factor inhibitor |
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| JP2008115176A (ja) * | 1995-06-07 | 2008-05-22 | Chiron Corp | タンパク質の可溶化、精製、および再生の方法 |
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|---|---|
| PT98779A (pt) | 1992-07-31 |
| JPH0733336B2 (ja) | 1995-04-12 |
| EP0473564A1 (en) | 1992-03-04 |
| ATE135585T1 (de) | 1996-04-15 |
| GR3020312T3 (en) | 1996-09-30 |
| PT98779B (pt) | 1999-06-30 |
| DK0473564T3 (da) | 1996-04-15 |
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| DE69118056T2 (de) | 1996-10-24 |
| IE913004A1 (en) | 1992-03-11 |
| ES2085462T3 (es) | 1996-06-01 |
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