JPH04267884A - Ｌ−バリンの製造法 - Google Patents
Ｌ−バリンの製造法Info
- Publication number
- JPH04267884A JPH04267884A JP4729491A JP4729491A JPH04267884A JP H04267884 A JPH04267884 A JP H04267884A JP 4729491 A JP4729491 A JP 4729491A JP 4729491 A JP4729491 A JP 4729491A JP H04267884 A JPH04267884 A JP H04267884A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- valine
- culture
- medium
- homoserine
- cysteine
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は高収量で効率よくＬ−バ
リンを製造する方法に関するものである。Ｌ−バリンは
必須アミノ酸の一つとして、人間および動物の栄養上重
要な役割をするものであり、医薬、食品、飼料添加剤等
の需要が近年急激に増加している。
リンを製造する方法に関するものである。Ｌ−バリンは
必須アミノ酸の一つとして、人間および動物の栄養上重
要な役割をするものであり、医薬、食品、飼料添加剤等
の需要が近年急激に増加している。
【０００２】
【従来の技術】Ｌ−バリンの工業的製法としては、他の
アミノ酸の場合と同様に立体異性体が存在するので、化
学合成法ではＬ−体のみの製造は困難であり、主として
発酵法による生産が行われている。従来公知の発酵法と
して、栄養要求変異株を用いる方法（例えば、特公昭３
９−１５２４６号公報）、薬剤耐性変異株を用いる方法
（例えば、特開昭４９−１１６２９３号公報）が提案さ
れているが、該菌株ではＬ−バリンの蓄積に限界がある
ため、新たな観点でＬ−バリンを効果的に生成させる方
法の提供が強く望まれていた。
アミノ酸の場合と同様に立体異性体が存在するので、化
学合成法ではＬ−体のみの製造は困難であり、主として
発酵法による生産が行われている。従来公知の発酵法と
して、栄養要求変異株を用いる方法（例えば、特公昭３
９−１５２４６号公報）、薬剤耐性変異株を用いる方法
（例えば、特開昭４９−１１６２９３号公報）が提案さ
れているが、該菌株ではＬ−バリンの蓄積に限界がある
ため、新たな観点でＬ−バリンを効果的に生成させる方
法の提供が強く望まれていた。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明はＬ−バリンの
製造をさらに効率的に行う方法を提供しようとするもの
である。
製造をさらに効率的に行う方法を提供しようとするもの
である。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は、コリネ型細菌
に属し、ホモセリン要求性およびＳ−（２−アミノエチ
ル）−Ｌ−システインに耐性を有する微生物を好気的に
培養して培養液中にＬ−バリンを生成蓄積せしめ、該培
養液からＬ−バリンを採取するに際し、培地中にＬ−ス
レオニンを０．５〜２０ｇ／ｌの濃度で存在させること
を特徴とするＬ−バリンの製造法である。
に属し、ホモセリン要求性およびＳ−（２−アミノエチ
ル）−Ｌ−システインに耐性を有する微生物を好気的に
培養して培養液中にＬ−バリンを生成蓄積せしめ、該培
養液からＬ−バリンを採取するに際し、培地中にＬ−ス
レオニンを０．５〜２０ｇ／ｌの濃度で存在させること
を特徴とするＬ−バリンの製造法である。
【０００５】本発明に使用される微生物は、コリネ型細
菌に属し、ホモセリン要求性およびＳ−（２−アミノエ
チル）−Ｌ−システインに耐性を有する微生物であれば
特に限定されるものではない。具体的には、例えばブレ
ビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−２３３（ＦＥＲＭ Ｐ−
１４９７）から下記の様にして誘導したホモセリン要求
性およびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに
耐性を有する微生物ＭＪ−２３３−ＨＳ−ＡＥＣ−１（
ＦＥＲＭ Ｐ−１１９６５）を挙げることができる。
菌に属し、ホモセリン要求性およびＳ−（２−アミノエ
チル）−Ｌ−システインに耐性を有する微生物であれば
特に限定されるものではない。具体的には、例えばブレ
ビバクテリウム・フラバム（Ｂｒｅｖｉｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｆｌａｖｕｍ）ＭＪ−２３３（ＦＥＲＭ Ｐ−
１４９７）から下記の様にして誘導したホモセリン要求
性およびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに
耐性を有する微生物ＭＪ−２３３−ＨＳ−ＡＥＣ−１（
ＦＥＲＭ Ｐ−１１９６５）を挙げることができる。
【０００６】即ち、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ
−２３３にＮ−メチルーＮ’−ニトロ−Ｎ−ニトログア
ニジン処理により変異を誘起せしめた後、この菌懸濁液
をＬ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ含有した平板培地［尿
素０．２％、硫安０．７％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５
％、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
Ｏ ０．０５％、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ
、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、Ｄ−ビオ
チン２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ、
寒天２．０ｇ／ｌ、グルコース２％（滅菌後添加）］に
塗抹し、３０℃で２日間培養し生じたコロニーを除いた
平板培地にレプリカし、Ｌ−ホモセリンを含有する平板
培地のみ生育するコロニーを得た。
−２３３にＮ−メチルーＮ’−ニトロ−Ｎ−ニトログア
ニジン処理により変異を誘起せしめた後、この菌懸濁液
をＬ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ含有した平板培地［尿
素０．２％、硫安０．７％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５
％、Ｋ２ＨＰＯ４ ０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２
Ｏ ０．０５％、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ
、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、Ｄ−ビオ
チン２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ、
寒天２．０ｇ／ｌ、グルコース２％（滅菌後添加）］に
塗抹し、３０℃で２日間培養し生じたコロニーを除いた
平板培地にレプリカし、Ｌ−ホモセリンを含有する平板
培地のみ生育するコロニーを得た。
【０００７】このようにして分離したホモセリン要求性
のブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３株を、さ
らに上記と同様にＮ−メチルーＮ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ログアニジン処理を施した後、Ｓ−アミノエチル−２−
システイン１０ｇ／ｌ含有する平板培地［尿素０．２％
、硫安０．７％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５％、Ｋ２Ｈ
ＰＯ４０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．０５％
、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、ＭｎＳＯ４・
４〜６Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、Ｄ−ビオチン２００μｇ
／ｌ、チアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ、寒天２０ｇ／ｌ
、Ｌ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ，グルコース２％（滅
菌後添加）］に塗抹し、３０℃にて３日間培養し、生じ
たコロニーを分離することにより、ホモセリン要求性お
よびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに耐性
を有する変異株ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２
３３−ＨＳ−ＡＥＣ−１を得た。
のブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３株を、さ
らに上記と同様にＮ−メチルーＮ’−ニトロ−Ｎ−ニト
ログアニジン処理を施した後、Ｓ−アミノエチル−２−
システイン１０ｇ／ｌ含有する平板培地［尿素０．２％
、硫安０．７％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５％、Ｋ２Ｈ
ＰＯ４０．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．０５％
、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、ＭｎＳＯ４・
４〜６Ｈ２Ｏ ６ｍｇ／ｌ、Ｄ−ビオチン２００μｇ
／ｌ、チアミン塩酸塩１００μｇ／ｌ、寒天２０ｇ／ｌ
、Ｌ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ，グルコース２％（滅
菌後添加）］に塗抹し、３０℃にて３日間培養し、生じ
たコロニーを分離することにより、ホモセリン要求性お
よびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに耐性
を有する変異株ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２
３３−ＨＳ−ＡＥＣ−１を得た。
【０００８】上記のようにして得られた変異株を好気的
に培養して、培養液中に目的とするＬ−バリンを生成蓄
積せしめるが、培地にＬ−スレオニンを０．５〜２０ｇ
／ｌ、好ましくは１〜１０ｇ／ｌ、さらに好ましくは２
〜５ｇ／ｌの濃度で存在させることが重要である。
に培養して、培養液中に目的とするＬ−バリンを生成蓄
積せしめるが、培地にＬ−スレオニンを０．５〜２０ｇ
／ｌ、好ましくは１〜１０ｇ／ｌ、さらに好ましくは２
〜５ｇ／ｌの濃度で存在させることが重要である。
【０００９】本発明の方法に使用される培地組成、炭素
源、窒素源、無機塩は特に限定されるものではなく一般
の微生物に使用されるものでよい。通常、炭素源として
は主にグルコースを用い、窒素源としては、アンモニア
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、尿素等を単独または混合して用いることができる
。
源、窒素源、無機塩は特に限定されるものではなく一般
の微生物に使用されるものでよい。通常、炭素源として
は主にグルコースを用い、窒素源としては、アンモニア
、硫酸アンモニウム、塩化アンモニウム、硝酸アンモニ
ウム、尿素等を単独または混合して用いることができる
。
【００１０】無機塩としては、リン酸一水素カリウム、
リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられ
る。この他に、菌の生育およびＬ−バリン生成に必要で
あれば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステ
ィ−プリカー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を
培地に添加してもよい。
リン酸二水素カリウム、硫酸マグネシウム等が用いられ
る。この他に、菌の生育およびＬ−バリン生成に必要で
あれば、ペプトン、肉エキス、酵母エキス、コーンステ
ィ−プリカー、カザミノ酸、各種ビタミン等の栄養素を
培地に添加してもよい。
【００１１】培養は通気撹拌、振盪等の好気的条件下で
行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５
℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜８
付近であり、その調節は酸またはアルカリを添加して行
われる。培養開始時におけるグルコース濃度は、１〜５
容量％、好ましくは２〜３容量％である。培養期間は２
〜８日間、最適期間は４〜５日間である。培養液からの
Ｌ−バリンの回収は、培養液を遠心分離により菌体を除
去した後、公知の手法、例えばイオン交換樹脂処理法ま
たは沈澱法等により容易に行うことができる。
行い、培養温度は２０〜４０℃、好ましくは２５〜３５
℃である。培養中のｐＨは５〜１０、好ましくは７〜８
付近であり、その調節は酸またはアルカリを添加して行
われる。培養開始時におけるグルコース濃度は、１〜５
容量％、好ましくは２〜３容量％である。培養期間は２
〜８日間、最適期間は４〜５日間である。培養液からの
Ｌ−バリンの回収は、培養液を遠心分離により菌体を除
去した後、公知の手法、例えばイオン交換樹脂処理法ま
たは沈澱法等により容易に行うことができる。
【００１２】
【実施例】実施例−１
培地（尿素０．４％、硫安１．４％、ＫＨ２ＰＯ４
０．０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０．０５％、ＭｇＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ ０．０５％、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｐｐ
ｍ、，ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ ６ｐｐｍ、ビオチ
ン２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩 １００μｇ／ｌ
、カザミノ酸 ０．１％、酵母エキス ０．１％）
１０ｍｌを２４φ大型試験管に分注、滅菌し、ｐＨ７に
調節した。これに更に別滅菌（１２０℃、１５分間）を
行って調製した５０％グルコース溶液０．２ｍｌを加え
た後、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３−Ｈ
Ｓ−ＡＥＣ−１を植菌し、３０℃でｐＨを７〜７．５に
調整しつつ２日間振とう培養した。
０．０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０．０５％、ＭｇＳＯ４・７
Ｈ２Ｏ ０．０５％、ＦｅＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｐｐ
ｍ、，ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２Ｏ ６ｐｐｍ、ビオチ
ン２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩 １００μｇ／ｌ
、カザミノ酸 ０．１％、酵母エキス ０．１％）
１０ｍｌを２４φ大型試験管に分注、滅菌し、ｐＨ７に
調節した。これに更に別滅菌（１２０℃、１５分間）を
行って調製した５０％グルコース溶液０．２ｍｌを加え
た後、ブレビバクテリウム・フラバムＭＪ−２３３−Ｈ
Ｓ−ＡＥＣ−１を植菌し、３０℃でｐＨを７〜７．５に
調整しつつ２日間振とう培養した。
【００１３】次に、本培養培地（尿素０．４％、硫安１
．４％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０
．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．０５％、Ｆｅ
ＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２
Ｏ ６ｐｐｍ、Ｌ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ、ビオ
チン ２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩 １００μ
ｇ／ｌ、コーンスティープリカー１０ｍｌ／ｌ、Ｌ−ス
レオニン２ｇ／ｌ）５０ｍｌを５００ｍｌ容三角フラス
コに分注、滅菌した（滅菌後ｐＨ７）。これに更に別滅
菌（１２０℃、１５分間）した５０％グルコース溶液２
ｍｌを添加後、前培養物の１ｍｌを植菌し、３０℃にて
３日間ｐＨを７〜７．５に調節しつつ振とう培養を行っ
た。結果を第１表に示す。また、比較のために、上記実
施例において微生物培養時の培地中にＬ−スレオニン２
ｇ／ｌを添加せずに上記と同様に培養を行った。、その
結果を比較例として第１表に示す。なお、上記実施例に
おいて、菌体増殖度（ＯＤ６１０）は６１０ｎｍの濁度
を測定することにより求め、Ｌ−バリンの定性はペーパ
ークロマトグラフィーにより、定量はＨＰＬＣ（島津Ｌ
Ｃ−５Ａ）により行った。
．４％、ＫＨ２ＰＯ４ ０．０５％、Ｋ２ＨＰＯ４０
．０５％、ＭｇＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ０．０５％、Ｆｅ
ＳＯ４・７Ｈ２Ｏ ６ｐｐｍ、ＭｎＳＯ４・４〜６Ｈ２
Ｏ ６ｐｐｍ、Ｌ−ホモセリン１００ｍｇ／ｌ、ビオ
チン ２００μｇ／ｌ、チアミン塩酸塩 １００μ
ｇ／ｌ、コーンスティープリカー１０ｍｌ／ｌ、Ｌ−ス
レオニン２ｇ／ｌ）５０ｍｌを５００ｍｌ容三角フラス
コに分注、滅菌した（滅菌後ｐＨ７）。これに更に別滅
菌（１２０℃、１５分間）した５０％グルコース溶液２
ｍｌを添加後、前培養物の１ｍｌを植菌し、３０℃にて
３日間ｐＨを７〜７．５に調節しつつ振とう培養を行っ
た。結果を第１表に示す。また、比較のために、上記実
施例において微生物培養時の培地中にＬ−スレオニン２
ｇ／ｌを添加せずに上記と同様に培養を行った。、その
結果を比較例として第１表に示す。なお、上記実施例に
おいて、菌体増殖度（ＯＤ６１０）は６１０ｎｍの濁度
を測定することにより求め、Ｌ−バリンの定性はペーパ
ークロマトグラフィーにより、定量はＨＰＬＣ（島津Ｌ
Ｃ−５Ａ）により行った。
【００１４】
【表１】
第
１表 Ｏ
Ｄ６１０ Ｌ−バリン生成量
実施例 ３５
１２ｇ／ｌ 比較例
２８
４ｇ／ｌ
１表 Ｏ
Ｄ６１０ Ｌ−バリン生成量
実施例 ３５
１２ｇ／ｌ 比較例
２８
４ｇ／ｌ
【００１５】
【発明の効果】本発明によれば、栄養培地中に著量のＬ
−バリンを生成蓄積できる。このため、Ｌ−バリンが安
価な原料で収率良く製造することができるので、工業的
に有利な方法である。
−バリンを生成蓄積できる。このため、Ｌ−バリンが安
価な原料で収率良く製造することができるので、工業的
に有利な方法である。
Claims (1)
- 【請求項１】 コリネ型細菌に属し、ホモセリン要求
性およびＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システインに
耐性を有する微生物を好気的に培養して培養液中にＬ−
バリンを生成蓄積せしめ、該培養液からＬ−バリンを採
取するに際し、培地中にＬ−スレオニンを０．５〜２０
ｇ／ｌの濃度で存在させることを特徴とするＬ−バリン
の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4729491A JPH04267884A (ja) | 1991-02-21 | 1991-02-21 | Ｌ−バリンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP4729491A JPH04267884A (ja) | 1991-02-21 | 1991-02-21 | Ｌ−バリンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04267884A true JPH04267884A (ja) | 1992-09-24 |
Family
ID=12771265
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP4729491A Pending JPH04267884A (ja) | 1991-02-21 | 1991-02-21 | Ｌ−バリンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04267884A (ja) |
-
1991
- 1991-02-21 JP JP4729491A patent/JPH04267884A/ja active Pending
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JPH0488994A (ja) | 発酵法によるｌ―グルタミン酸の製造法 | |
| JPH02186995A (ja) | 発酵法によるｌ‐アルギニンの製造法 | |
| JP2810697B2 (ja) | 芳香族アミノ酸の製造法 | |
| JPH04262790A (ja) | 発酵法による５’−キサンチル酸の製造法 | |
| JPS6257315B2 (ja) | ||
| JPS62195293A (ja) | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JPS6274293A (ja) | Ｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JP3717970B2 (ja) | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 | |
| JP3704737B2 (ja) | Ｌ−ロイシンの製造方法 | |
| JP3131311B2 (ja) | 発酵法によるｌ−イソロイシンの製造法 | |
| US5650304A (en) | Process for producing L-lysine by fermentation | |
| US5188947A (en) | Process and microorganism for producing l-ornithine by corynebacterium, brevibacterium, or athrobacter | |
| JP3006929B2 (ja) | 発酵法によるｌ−バリンの製造法 | |
| JP2578463B2 (ja) | 発酵法によるｌ−リジンの製造法 | |
| JP3006939B2 (ja) | Ｌ−リジンの製造法 | |
| JP2971089B2 (ja) | 発酵法によるｌ―スレオニンの製造法 | |
| JPS63248392A (ja) | 発酵法によるｌ−ロイシンの製造法 | |
| US5034319A (en) | Process for producing L-arginine | |
| EP0469517A2 (en) | Process for producing L-glutamic acid | |
| JPH04267884A (ja) | Ｌ−バリンの製造法 | |
| JPS61119194A (ja) | 発酵法によるｌ−オルニチンの製造法 | |
| US5284757A (en) | Process for producing l-arginine by fermentation with brevibacterium or corynebacterium | |
| US5362636A (en) | Process for producing L-lysine by fermentation with a bacteria having selenalysine resistance | |
| JPH029384A (ja) | 発酵法によるｌ−グルタミン酸の製造方法 | |
| JP2995816B2 (ja) | 発酵法によるｌ―リジンの製造法 |