JPS6274293A - Ｌ−イソロイシンの製造法 - Google Patents
Ｌ−イソロイシンの製造法Info
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- JPS6274293A JPS6274293A JP60215718A JP21571885A JPS6274293A JP S6274293 A JPS6274293 A JP S6274293A JP 60215718 A JP60215718 A JP 60215718A JP 21571885 A JP21571885 A JP 21571885A JP S6274293 A JPS6274293 A JP S6274293A
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- Japan
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- medium
- producing
- culture
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-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/02—Preparation of hybrid cells by fusion of two or more cells, e.g. protoplast fusion
- C12N15/03—Bacteria
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
産業上の利用分野
本発明はプロトプラスト融合により得たし一イソロイ／
ン生産能を有するコリネバクテリウム属に属する微生物
を用いるし一イソロイシンの製造法に関する。
ン生産能を有するコリネバクテリウム属に属する微生物
を用いるし一イソロイシンの製造法に関する。
Ｌ−イソロイシンはアミノ酸製剤として医薬品として有
用である。
用である。
従来の技術
従来、発酵法によるし一インロインンの製造法としては
ミクロコツカス、グルタミクムに嘱し、スレオニン、メ
チオニン、ホモセリン又はロインン要求性を存する微生
物を用いる方法（特公昭３８−７０９１号公報）、ブレ
ビバクテリウム・フラバムに属し、α−アミ７−β−ヒ
ドロキ／吉草酸耐性及びプリン又はリジン要求性を有す
る微生物を用いる方法（特開昭４９−８５２８８号公報
）、α−アミノ−β−ヒドロキ／吉草酸及び０−メチル
スレオニン相性を有するｊ敢生物を用いる方法（特開昭
４９−９３５８６号公報）、ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム、属に属し、α−アミノ−β−ヒド
ロキシ吉草酸耐性でかつエチオニン、２−チアゾールア
ラニン及びＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
のうち少なくとも１つに耐性を有する微生物を用いる方
法（特開昭５０−１０１５８２号公報）、コリネバクテ
リウム屈に属し、イソロイノンアナログ耐性でかつメチ
オニン又はリジン要求性を有する微生物を用いる方法（
特開昭４９−１１４５２号公報）、コリネバクテリウム
属又はブレビバクテリウム属に属し、ビタミン−Ｐ耐性
を有する微生物を用いる方法（特開昭５７１６３７号公
報）、コリネバクテリウム属に属し、アルギニン要求性
を有する微生物を用いる方法（特開昭５９−１０６２９
５号公報）、コリネバクテリウム属に属し、フルオロピ
ルビン酸感受性を有する微生物を用いる方法（特開昭５
９−１０６２９４号公報）等が知られている。
ミクロコツカス、グルタミクムに嘱し、スレオニン、メ
チオニン、ホモセリン又はロインン要求性を存する微生
物を用いる方法（特公昭３８−７０９１号公報）、ブレ
ビバクテリウム・フラバムに属し、α−アミ７−β−ヒ
ドロキ／吉草酸耐性及びプリン又はリジン要求性を有す
る微生物を用いる方法（特開昭４９−８５２８８号公報
）、α−アミノ−β−ヒドロキ／吉草酸及び０−メチル
スレオニン相性を有するｊ敢生物を用いる方法（特開昭
４９−９３５８６号公報）、ブレビバクテリウム属又は
コリネバクテリウム、属に属し、α−アミノ−β−ヒド
ロキシ吉草酸耐性でかつエチオニン、２−チアゾールア
ラニン及びＳ−（２−アミノエチル）−Ｌ−システィン
のうち少なくとも１つに耐性を有する微生物を用いる方
法（特開昭５０−１０１５８２号公報）、コリネバクテ
リウム屈に属し、イソロイノンアナログ耐性でかつメチ
オニン又はリジン要求性を有する微生物を用いる方法（
特開昭４９−１１４５２号公報）、コリネバクテリウム
属又はブレビバクテリウム属に属し、ビタミン−Ｐ耐性
を有する微生物を用いる方法（特開昭５７１６３７号公
報）、コリネバクテリウム属に属し、アルギニン要求性
を有する微生物を用いる方法（特開昭５９−１０６２９
５号公報）、コリネバクテリウム属に属し、フルオロピ
ルビン酸感受性を有する微生物を用いる方法（特開昭５
９−１０６２９４号公報）等が知られている。
発明が解決しようとする問題点
プロトプラスト融合により得たし一イソロイシン生産能
を有するコリネバクテリウム属に属する微生物を用いる
ことにより、親株より大量にＬ−インロインンを製造す
る方法は開発されていない。
を有するコリネバクテリウム属に属する微生物を用いる
ことにより、親株より大量にＬ−インロインンを製造す
る方法は開発されていない。
問題点を解決するための手段
本発明方法によると、プロトプラスト融合により得たし
一イソロイシン生産能を有するコリネバクテリウム属に
属する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ−イソロイ
シンを生成蓄積させ、該培養物からＬ−イソロイシンを
収率よく採取することができる。
一イソロイシン生産能を有するコリネバクテリウム属に
属する微生物を培地に培養し、培養物中にＬ−イソロイ
シンを生成蓄積させ、該培養物からＬ−イソロイシンを
収率よく採取することができる。
本発明に用いる微生物としてはＬ−イソロイシン生産性
を有する微生物と主発酵生産物がＬ−イソロイシン以外
のアミノ酸を生産する能力を有する微生物との間のプロ
トプラスト融合株であればいずれも用いられる。
を有する微生物と主発酵生産物がＬ−イソロイシン以外
のアミノ酸を生産する能力を有する微生物との間のプロ
トプラスト融合株であればいずれも用いられる。
具体的には、コリネバクテリウム・グルタミクム （Ｃ
ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕ
ｍ） Ｈ−３８５９（以下、Ｉ（−３８５’ｌと称
す）及びＨ−３８６０（以下、Ｈ−３８６０と称す）が
挙げられ、いずれも茨城県筑波郡谷田部町東１丁目１番
３の】ｍ産省工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
条寄第８４９号及び第８５０号として昭和６０年７月１
６日に寄託されている。
ｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｇｌｕｔａｍｉｃｕ
ｍ） Ｈ−３８５９（以下、Ｉ（−３８５’ｌと称
す）及びＨ−３８６０（以下、Ｈ−３８６０と称す）が
挙げられ、いずれも茨城県筑波郡谷田部町東１丁目１番
３の】ｍ産省工業技術院微生物工業技術研究所に微工研
条寄第８４９号及び第８５０号として昭和６０年７月１
６日に寄託されている。
次にプロトプラスト融合株の取得例を示す。
親株として、イソロイシン生産菌であるコリネバクテリ
ウム・グルタミクムＨ−３５０１（ＦＥＲＭ ＢＰ−
８４８）（以下、Ｈ−３５０１と称す）及びリジン生産
菌であるコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１１
９（ＦＥＲＭ ＢＰ−１４９）（以下、Ｈ−３１１９
と称す）を用いる。
ウム・グルタミクムＨ−３５０１（ＦＥＲＭ ＢＰ−
８４８）（以下、Ｈ−３５０１と称す）及びリジン生産
菌であるコリネバクテリウム・グルタミクムＨ−３１１
９（ＦＥＲＭ ＢＰ−１４９）（以下、Ｈ−３１１９
と称す）を用いる。
培養細胞からプロトプラストを形成させるためには例え
ば栄養培地ＮＢ（粉末ブイヨン２０ｇ１酵母エキス５ｇ
を純水１１に含みｐ Ｈ７，２に調整した培地）に菌を
接種し、振盪培養する。比色計によって６６０ｎｍにお
ける吸光度（００）を測定し、対数増殖期の初期（ＯＤ
＝０．１〜０．２）に培養液中０．１〜０．８ ｕ ／
ｍｌの濃度になるようにペニシリンＧを添加する。培養
を続けて、さらにＯＤが０．３〜０．５に増加したとこ
ろで細胞を集菌し、５５Ｍ培地〔グルコース１０ｇ５Ｎ
Ｈ，Ｃ１４ｇ、尿素２ｇ、酵母エキス１ｇ、Ｉ＜）４２
Ｆ’０４１ ｇ 、 Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４３ｇ 、 Ｍ
ｇ Ｃｌ ２・６６Ｈ２Ｏ１４，Ｆｅ５０＊７Ｈ２０
１０ｍｇ、ＭｎＳＯ４・４〜６日２０ Ｑ、２ｍｇ１Ｚ
ｎＳＯ４・７Ｈ２００，９ｍｇ、Ｃｕ５Ｏａ・５Ｈ２０
０，４ｍｇ、ＮａｚＢｍ○７＝１０Ｈｚ０ ０．０９ｍ
ｇ、（ＮＨ＜）ｓＭｏｅＯｚ＊−４８２００，０４のｇ
、ビオチン３０１１！Ｚ、サイアミン塩酸塩１ｍｇを純
水１１に含み、ｐ Ｈ７，２に調整した培地、アミノ酸
要求性の菌の培養には、要求アミノ酸５０■／ｍｌを追
加〕で洗浄する。次に菌体をＰＦＭ培地（３３Ｍ２倍希
釈液中にシュクロース０．４ Ｍ 、 Ｍ ｇ Ｃｌ
２ ・６Ｈ２００，０１Ｍを含み、ｐ ）ｉ ７．
Ｏ〜８．５に調整した培地）に再懸濁する。この細胞懸
濁液にリゾチーム（０，２〜２■／ｍｌ）を加え、３０
〜３７℃で１６時間処理する。
ば栄養培地ＮＢ（粉末ブイヨン２０ｇ１酵母エキス５ｇ
を純水１１に含みｐ Ｈ７，２に調整した培地）に菌を
接種し、振盪培養する。比色計によって６６０ｎｍにお
ける吸光度（００）を測定し、対数増殖期の初期（ＯＤ
＝０．１〜０．２）に培養液中０．１〜０．８ ｕ ／
ｍｌの濃度になるようにペニシリンＧを添加する。培養
を続けて、さらにＯＤが０．３〜０．５に増加したとこ
ろで細胞を集菌し、５５Ｍ培地〔グルコース１０ｇ５Ｎ
Ｈ，Ｃ１４ｇ、尿素２ｇ、酵母エキス１ｇ、Ｉ＜）４２
Ｆ’０４１ ｇ 、 Ｋ ２ ＨＰ Ｏ４３ｇ 、 Ｍ
ｇ Ｃｌ ２・６６Ｈ２Ｏ１４，Ｆｅ５０＊７Ｈ２０
１０ｍｇ、ＭｎＳＯ４・４〜６日２０ Ｑ、２ｍｇ１Ｚ
ｎＳＯ４・７Ｈ２００，９ｍｇ、Ｃｕ５Ｏａ・５Ｈ２０
０，４ｍｇ、ＮａｚＢｍ○７＝１０Ｈｚ０ ０．０９ｍ
ｇ、（ＮＨ＜）ｓＭｏｅＯｚ＊−４８２００，０４のｇ
、ビオチン３０１１！Ｚ、サイアミン塩酸塩１ｍｇを純
水１１に含み、ｐ Ｈ７，２に調整した培地、アミノ酸
要求性の菌の培養には、要求アミノ酸５０■／ｍｌを追
加〕で洗浄する。次に菌体をＰＦＭ培地（３３Ｍ２倍希
釈液中にシュクロース０．４ Ｍ 、 Ｍ ｇ Ｃｌ
２ ・６Ｈ２００，０１Ｍを含み、ｐ ）ｉ ７．
Ｏ〜８．５に調整した培地）に再懸濁する。この細胞懸
濁液にリゾチーム（０，２〜２■／ｍｌ）を加え、３０
〜３７℃で１６時間処理する。
プロトプラストの形成を光学顕微鏡で確認する。
融合させようとする菌株の、上記の如くして得たプロト
プラストの数を計測し１：１になるように混合し、遠心
分離によりＰＦＭ培地で洗浄後０．１ｍｌに再懸濁する
。これに４０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４．
０００を含むＰＦＭ培地２．５ｍｌを加え静かに攪拌す
る。５分後、Ｑ、３ｍｌを例えばストレプトマイシン及
びリファンピシンをマーカーとした場合には、ストレプ
トマイシン１００■／ｍｌ及びリファンビンン１■／ｍ
ｌを含むＰＣＧ寒天平板培地（グルコース５ｇ、カザミ
ノ酸５ｇ、酵母エキス２．５ｇ、に２ＨＰＯ４３，５ｇ
、ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２００６４
１ｇ５ＦｅＳＯｎ・７Ｈ２０１０ｍｇ、ＭｎＳＯ４・４
〜６８２０ ２ｍｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２００，９ｍｇ
、 Ｃｕ ＳＯ＋ ・５ Ｈ２Ｏ０，４ｍｇ、 Ｎ ａ
ｚＢｓｏｔ・１０ＨｚＯＯ，０９ｍｇ、（Ｎ Ｈｔ ）
６ Ｍ ｏ ｓ ０２１・４ Ｈ２Ｏ０，０４ｍｇ−
ビオチン３０■、サイアミン塩酸塩２Ｉ＋Ｉｇ、コハク
酸ナトリウム１３５ｇ。
プラストの数を計測し１：１になるように混合し、遠心
分離によりＰＦＭ培地で洗浄後０．１ｍｌに再懸濁する
。これに４０％ポリエチレングリコール（ＰＥＧ）４．
０００を含むＰＦＭ培地２．５ｍｌを加え静かに攪拌す
る。５分後、Ｑ、３ｍｌを例えばストレプトマイシン及
びリファンピシンをマーカーとした場合には、ストレプ
トマイシン１００■／ｍｌ及びリファンビンン１■／ｍ
ｌを含むＰＣＧ寒天平板培地（グルコース５ｇ、カザミ
ノ酸５ｇ、酵母エキス２．５ｇ、に２ＨＰＯ４３，５ｇ
、ＫＨ２ＰＯ４１，５ｇ、ＭｇＣｌ２・６Ｈ２００６４
１ｇ５ＦｅＳＯｎ・７Ｈ２０１０ｍｇ、ＭｎＳＯ４・４
〜６８２０ ２ｍｇ、ＺｎＳＯ４・７Ｈ２００，９ｍｇ
、 Ｃｕ ＳＯ＋ ・５ Ｈ２Ｏ０，４ｍｇ、 Ｎ ａ
ｚＢｓｏｔ・１０ＨｚＯＯ，０９ｍｇ、（Ｎ Ｈｔ ）
６ Ｍ ｏ ｓ ０２１・４ Ｈ２Ｏ０，０４ｍｇ−
ビオチン３０■、サイアミン塩酸塩２Ｉ＋Ｉｇ、コハク
酸ナトリウム１３５ｇ。
寒天１４ｇを１１中に含み、ｐ Ｈ７，４に調整した培
地に塗布する。
地に塗布する。
３０℃で１２日間培養後に生じてきたストレプトマイシ
ン及びリファンピシン二重耐性株のコロニーを取得する
。
ン及びリファンピシン二重耐性株のコロニーを取得する
。
Ｌ−イソロイシン生産菌とＬ−リジン生産菌の融合株２
００株を釣菌し、後述のイソロイシン生産試験にかけ、
親株よりインロイシン生産能が向上した菌株１（−３８
５９及びＨ−３８６０を取得する。
００株を釣菌し、後述のイソロイシン生産試験にかけ、
親株よりインロイシン生産能が向上した菌株１（−３８
５９及びＨ−３８６０を取得する。
細胞融合の親株であるＨ−３５０１はアルギニン要求性
のため最小培地〔グルコース０．５％、（ＮＨ，）、５
０．０．１５％、Ｋ）１２ＰＯ，０，１５％、Ｋ２ＨＰ
Ｏ４０，０５％、ＮａＣｊ２０．０１％、Ｍｇ５Ｏ，・
７Ｈ，ＯＯ，０５％、（： ａ Ｃｌ ２ ・２ ）（
２０１ｘ／ｍｌ、ＭｎＣ１−４８２０７μｇ／ｍｌ。
のため最小培地〔グルコース０．５％、（ＮＨ，）、５
０．０．１５％、Ｋ）１２ＰＯ，０，１５％、Ｋ２ＨＰ
Ｏ４０，０５％、ＮａＣｊ２０．０１％、Ｍｇ５Ｏ，・
７Ｈ，ＯＯ，０５％、（： ａ Ｃｌ ２ ・２ ）（
２０１ｘ／ｍｌ、ＭｎＣ１−４８２０７μｇ／ｍｌ。
Ｆ ｅ Ｓ Ｃ４・７ Ｈ２Ｏ１０ｘｒ／ｍｌ、チアミ
ン塩酸塩０．ｌμｇ／ｍｌ、ビオチア０．０３％ｇ／ｍ
ｌ、寒天１．５％：Ｉ）Ｈ７，２）では生育せずその生
育にはアルギニン（５０ｒ／ｍｌ）の添加を必要とする
。又、融合株Ｈ−３８６０は親株と同様にその生育にア
ルギニンを必要としたが、融合株Ｈ−３８５９は最小培
地でも充分な生育ができるのが特徴である。
ン塩酸塩０．ｌμｇ／ｍｌ、ビオチア０．０３％ｇ／ｍ
ｌ、寒天１．５％：Ｉ）Ｈ７，２）では生育せずその生
育にはアルギニン（５０ｒ／ｍｌ）の添加を必要とする
。又、融合株Ｈ−３８６０は親株と同様にその生育にア
ルギニンを必要としたが、融合株Ｈ−３８５９は最小培
地でも充分な生育ができるのが特徴である。
第１表に親株及び融合株の生育状況を示す。
本発明に使用する培地組成としては使用菌株の利用しう
る炭素源、窒素源、無機物その他の必要な栄養素を程良
く含有するものであれば合成培地及び天然培地のいずれ
も使用できる。
る炭素源、窒素源、無機物その他の必要な栄養素を程良
く含有するものであれば合成培地及び天然培地のいずれ
も使用できる。
炭素源としては、グルコース、シュクロース、フラクト
ース、ＩＩＩ、デンプン、デンプン加水分解物などの炭
水化物、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸、リン
ゴ酸などの有機酸、メタノール、エタノール、プロパツ
ールなどのアルコールが用いられる。
ース、ＩＩＩ、デンプン、デンプン加水分解物などの炭
水化物、酢酸、プロピオン酸、ギ酸、フマール酸、リン
ゴ酸などの有機酸、メタノール、エタノール、プロパツ
ールなどのアルコールが用いられる。
窒素源としては、アンモニア、塩化アンモニウム、硫酸
アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などの各種無機酸や有機酸のアンモニウム塩、尿素、ア
ミン類、その地合窒素化合物、ならびにペプトン、肉エ
キス、酵母エキス、コーン・スチーブ・リカー、カゼ・
イン加水分解物、大豆粕酸加水分解物、各種発酵菌体お
よびその消化物などが用いられる。
アンモニウム、酢酸アンモニウム、リン酸アンモニウム
などの各種無機酸や有機酸のアンモニウム塩、尿素、ア
ミン類、その地合窒素化合物、ならびにペプトン、肉エ
キス、酵母エキス、コーン・スチーブ・リカー、カゼ・
イン加水分解物、大豆粕酸加水分解物、各種発酵菌体お
よびその消化物などが用いられる。
無機物としては、リン酸第−カリウム、リン酸第二カリ
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カ
ルシウムなどが用いられる。
ウム、リン酸マグネシウム、硫酸マグネシウム、塩化ナ
トリウム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、炭酸カ
ルシウムなどが用いられる。
勿論本発明に使用する微生物が生育のために特定の栄養
素を必要とする場合には、その栄養素を適当１培地中に
存在させなければならないが、これらの物質は窒素源と
して例示した天然物に含まれて添加される場合がある。
素を必要とする場合には、その栄養素を適当１培地中に
存在させなければならないが、これらの物質は窒素源と
して例示した天然物に含まれて添加される場合がある。
培養は振盪培養あるいは深部通気攪拌培養などの好気的
条件下で行なう。培養温度は通常２０〜１０℃、好まし
くは２５〜３５℃の範囲で、培地のｐＨは５〜９の範囲
で、好ましくは中性付近に保持することが望ましい。培
地のｐ）（調節は、炭酸カルシウム、無機又は有機の酸
、アルカリ溶液、尿素、アンモニア、ｐＨ緩衝剤などに
よって行う。
条件下で行なう。培養温度は通常２０〜１０℃、好まし
くは２５〜３５℃の範囲で、培地のｐＨは５〜９の範囲
で、好ましくは中性付近に保持することが望ましい。培
地のｐ）（調節は、炭酸カルシウム、無機又は有機の酸
、アルカリ溶液、尿素、アンモニア、ｐＨ緩衝剤などに
よって行う。
培養期間は通常２〜７日間で培養液中にＬ−インロイン
ンが生成蓄積する。
ンが生成蓄積する。
培養終了後、培養液から菌体などの沈殿物を除去し、公
知のイオン交換処理法、濃縮法、吸着法、塩析法などを
併用することにより、培養液からし一インロイシンを回
収することができる。
知のイオン交換処理法、濃縮法、吸着法、塩析法などを
併用することにより、培養液からし一インロイシンを回
収することができる。
以下に実施例を示す。
実施例１
種菌として融合株）（−３８５９及びＨ−３８６０並び
に親株Ｈ−３５０１及びＨ−３１１９を用いた。
に親株Ｈ−３５０１及びＨ−３１１９を用いた。
これらの菌株をグルコース５０ｇ／ｌ、酵母エキス１０
ｇ／ｎ 、ペプトン１０ｇ／ｆ、尿素３ｇ／ｌ、食塩
２．５ ｇ ／ Ｉ！、コーンステイープリカー５ｇ／
ｌおよびビオチン５０■／ｌからなる種培地（ｐＨ７，
２）２０ｍｌを含む３０ Ｑｍｌｍｌ用フラスコに接種
し、２８℃で２４時間、ロータリーシェーカー（回転数
：２１０ｒｐｍ）上で振盪培養した。この種培養液２ｎ
ｌを２９ｍｌの下記組成の発酵培地を含む３０３ｍｌ容
三角フラスコに接種し、２８℃で７２時間＊盪培饗（回
転数：２１０ｒｐｍ）した。
ｇ／ｎ 、ペプトン１０ｇ／ｆ、尿素３ｇ／ｌ、食塩
２．５ ｇ ／ Ｉ！、コーンステイープリカー５ｇ／
ｌおよびビオチン５０■／ｌからなる種培地（ｐＨ７，
２）２０ｍｌを含む３０ Ｑｍｌｍｌ用フラスコに接種
し、２８℃で２４時間、ロータリーシェーカー（回転数
：２１０ｒｐｍ）上で振盪培養した。この種培養液２ｎ
ｌを２９ｍｌの下記組成の発酵培地を含む３０３ｍｌ容
三角フラスコに接種し、２８℃で７２時間＊盪培饗（回
転数：２１０ｒｐｍ）した。
培養液中に生成したし一イソロインン及びＬ−ＩＪジン
の債を第２表に示す。
の債を第２表に示す。
発酵培地の組成
廃Ｕ蜜（グルコース換算）７０ｇ／ｆｆ、コーンステイ
ープリカー５ｇ／Ｌ塩化アンモニウム２０ｇ／Ｌ尿素２
ｇ／１２、Ｋ ｌ（２Ｐ ０４ ２ ｇ ／ ｎ、Ｍ
ｇ５Ｏ，−７１（２００，５ｇ／ＡＳＦｅＳＯ＋・７Ｈ
２００，Ｏｉｇ＃、ＭｎＣｎｚ’４ｌ−（２００，０１
ｇ／ｊ”、Ｃ＋１ＳＯ４・５Ｈ２００，０１ｇ／ＬＣａ
ＣＬ・２Ｈ２０Ω、０１ｇ／ｌ、Ｚｎ５Ｏ＊・７）（２
０１，ｍｇ／ｊ！、 ＮｉＣ１！ｚ １ａ＋ｇ／ｊ！
、モリブデン酸７７％７−４水塩１ｍｇ／ｌ’、Ｃ０Ｃ
Ｌ・６ｔ（２０１ｍｇ／β、パントテン酸カルンウム１
０ｍｇ／ｌ、ニコチン酸１ｍｇ／ｆｆ、ビオチン５０γ
／Ａ）、Ｉ）Ｈ７，４ なおアルギニン要求株の場合は、アルギニン塩酸塩を０
．５ ｇ ’、ｌ’ｌ添加。
ープリカー５ｇ／Ｌ塩化アンモニウム２０ｇ／Ｌ尿素２
ｇ／１２、Ｋ ｌ（２Ｐ ０４ ２ ｇ ／ ｎ、Ｍ
ｇ５Ｏ，−７１（２００，５ｇ／ＡＳＦｅＳＯ＋・７Ｈ
２００，Ｏｉｇ＃、ＭｎＣｎｚ’４ｌ−（２００，０１
ｇ／ｊ”、Ｃ＋１ＳＯ４・５Ｈ２００，０１ｇ／ＬＣａ
ＣＬ・２Ｈ２０Ω、０１ｇ／ｌ、Ｚｎ５Ｏ＊・７）（２
０１，ｍｇ／ｊ！、 ＮｉＣ１！ｚ １ａ＋ｇ／ｊ！
、モリブデン酸７７％７−４水塩１ｍｇ／ｌ’、Ｃ０Ｃ
Ｌ・６ｔ（２０１ｍｇ／β、パントテン酸カルンウム１
０ｍｇ／ｌ、ニコチン酸１ｍｇ／ｆｆ、ビオチン５０γ
／Ａ）、Ｉ）Ｈ７，４ なおアルギニン要求株の場合は、アルギニン塩酸塩を０
．５ ｇ ’、ｌ’ｌ添加。
第２表
（Ａｒｇ”）：アルギニン非要求性
（Ａｒｇ−） ・アルギニン要求性
融合株！−（−３８６０を用いて得たＬ−インロインン
含有培養液２００ｍｌから遠心分離により、菌体その他
の不純物を除いた上澄液を強酸性陽イオン交換樹脂ダイ
ヤイオン５ＫＩ（Ｈ”型）（三菱化成社製）のカラムに
通し、Ｌ−イソロイシンを吸着させ、水洗後０．５規定
のアンモニア水で溶出して、Ｌ−イソロイシン画分を集
め、濃縮してｐ Ｈ６，０２の等電点で晶出させること
により純度９９％のし一インロイシン８５０ｍｇを得た
。
含有培養液２００ｍｌから遠心分離により、菌体その他
の不純物を除いた上澄液を強酸性陽イオン交換樹脂ダイ
ヤイオン５ＫＩ（Ｈ”型）（三菱化成社製）のカラムに
通し、Ｌ−イソロイシンを吸着させ、水洗後０．５規定
のアンモニア水で溶出して、Ｌ−イソロイシン画分を集
め、濃縮してｐ Ｈ６，０２の等電点で晶出させること
により純度９９％のし一インロイシン８５０ｍｇを得た
。
発明の効果
本発明方法により収率よくＬ−イソロイシンをｉ尋るこ
とができる。
とができる。
Claims (3)
- （１）プロトプラスト融合により得たＬ−イソロイシン
生産能を有するコリネバクテリウム属に属する微生物を
培地に培養し、培養物中にＬ−イソロイシンを生成蓄積
させ、該培養物からＬ−イソロイシンを採取することを
特徴とするＬ一イソロイシンの製造法。 - （２）プロトプラスト融合がＬ−イソロイシン生産性を
有する微生物と主発酵生産物がＬ−イソロイシン以外の
アミノ酸を生産する能力を有する微生物との間で行われ
ることを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の製造法
。 - （３）該アミノ酸がＬ−リジンであることを特徴とする
特許請求の範囲第２項記載の製造法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60215718A JPS6274293A (ja) | 1985-09-28 | 1985-09-28 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60215718A JPS6274293A (ja) | 1985-09-28 | 1985-09-28 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS6274293A true JPS6274293A (ja) | 1987-04-06 |
Family
ID=16677024
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP60215718A Pending JPS6274293A (ja) | 1985-09-28 | 1985-09-28 | Ｌ−イソロイシンの製造法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS6274293A (ja) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2008044409A1 (fr) | 2006-10-10 | 2008-04-17 | Ajinomoto Co., Inc. | Procédé de fabrication d'un l-amino acide |
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| WO2008102572A1 (ja) | 2007-02-20 | 2008-08-28 | Ajinomoto Co., Inc. | Ｌ－アミノ酸または核酸の製造方法 |
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| CN111925953A (zh) * | 2019-12-30 | 2020-11-13 | 河南工业大学 | 一种谷氨酸生产菌株及其制备方法与应用 |
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| JPS58158185A (ja) * | 1982-03-15 | 1983-09-20 | Ajinomoto Co Inc | 生育の改善されたアミノ酸生産菌の育種方法 |
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-
1985
- 1985-09-28 JP JP60215718A patent/JPS6274293A/ja active Pending
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