JPH04282395A - 新規生理活性物質ｔａ−３０３７ａ及びその製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、グルタチオントランス
フェラーゼ阻害活性を有する新規生理活性物質ＴＡ−３
０３７Ａ、その製造法及びそれを含有する薬剤に関する
。

【０００２】

【従来の技術】抗癌剤を用いた癌化学療法では抗癌剤耐
性細胞の出現が治療上の大きな障壁となってきている。

【０００３】なかでも、シスプラチンやアルキル化剤に
耐性となった癌細胞では、細胞内グルタチン濃度の増大
とグルタチオントランスフェラーゼ活性の亢進が観察さ
れている〔Ｃａｎｃｅｒ　　Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈ
ａｒｍａｃｏｌ．，第１７巻，第２２３〜第２２６頁（
１９８６）；Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．，
第３４巻，第２５８３〜２５８６頁（１９８５）〕。

【０００４】従来は、カルシウム拮抗剤を用いて抗癌剤
の細胞内濃度を高めたり、グルタチオン生合成阻害剤を
用いて抗癌剤の不活化機構を阻害するという試みがなさ
れていたが、どれも副作用と効果の点で満足できるもの
ではなく、癌の抗癌剤耐性機構を打ち砕く手段はなかっ
た。

【０００５】

【発明が解決しようとする課題】本発明は、抗癌剤の不
活化に関わるグルタチオントランスフェラーゼの阻害物
質、その製造法及びそれを含有する薬剤を提供すること
を目的とするものである。

【０００６】

【課題を解決するための手段】本発明を概説すれば、本
発明の第１の発明は、下記理化学的性質を有する新規生
理活性物質ＴＡ−３０３７Ａ（以下ＴＡ−３０３７Ａ物
質という）及びその塩に関するものである。 （１）分子量　　　　　　　　　　　　　　　　２８１
（２）分子式　　　　　　　　　　　　　　　　Ｃ１６
Ｈ１１Ｏ４　Ｎ１　（３）融点　　　　　　　　　　　
　　　　　　　２４８〜２５０℃（分解） （４）旋光度　　　　　　　　　　　　　　　　〔α〕
Ｄ　２３＝０°（Ｃ０．５，ＤＭＦ）

【０００７】（５）紫外吸収スペクトルλｍａｘ　ｎｍ
（ε）　　２０４（２６８１６），２４２（１５６７４
），２８２（９３８５），３８３（１４５６１），（Ｅ
ｔＯＨ）

【０００８】λｍａｘ　ｎｍ（ε）　　２０５（２１９
９７），２４１（１８３０７），２８２（９０４３），
３５０ｓｈ（８６１５），３８２（１４３４５）（０．
１Ｎ　　ＨＣｌ　　９０％　　ＥｔＯＨ）λｍａｘ　ｎ
ｍ（ε）　　３２４（９１５２）（０．１Ｎ　　ＮａＯ
Ｈ　　９０％　　ＥｔＯＨ）（６）赤外線吸収スペクト
ル（ＫＢｒ　　Ｄｉｓｋ）（ｃｍ−１） ３４４０（ｂｒ），２９３０，１７５２，１６６３，１
２７５，１２５８，７５８

【０００９】（７）　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（重ＤＭ
ＳＯ中、４００ＭＨｚ）（ｐｐｍ，多重度）６．６５（
１Ｈ，ｓ），６．９０（１Ｈ，ｔ），７．３２（１Ｈ，
ｄｄ），７．３４（１Ｈ，ｔ），７．４６（２Ｈ，ｔ）
，７．６０（２Ｈ，ｄ），７．６６（１Ｈ，ｄｄ），１
１．１（１Ｈ，ｓ）

【００１０】（８）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重ＤＭ
ＳＯ中、１００ＭＨｚ）（ｐｐｍ，多重度）１０９．４
ｄ，１１２．０ｓ，１１８．７ｄ，１２０．４ｄ，１２
３．３ｓ，１２６．７ｄ，１２７．８ｄ，１２８．０ｄ
×２，１２９．０ｄ×２，１２９．９ｓ，１３４．０ｓ
，１４０．３ｓ，１５７．３ｓ，１６９．３ｓ

【００１１】本発明の第２の発明はＴＡ−３０３７Ａ物
質の製造法に関する発明であって、ストレプトミセス属
に属するＴＡ−３０３７Ａ物質生産菌を培養し、その培
養物からＴＡ−３０３７Ａ物質を採取することを特徴と
するＴＡ−３０３７Ａ物質の製造法に関するものである
。本発明の第３の発明は、ＴＡ−３０３７Ａ物質又はそ
の塩を有効成分とするグルタチオントランスフェラーゼ
阻害剤に関するものである。

【００１２】本発明者らは、グルタチオントランスフェ
ラーゼ阻害物質を広く自然界から検索し、アドリアマイ
シン耐性マウス白血病細胞のグルタチオントランスフェ
ラーゼ阻害活性を顕著に示す物質、ＴＡ−３０３７Ａ物
質を得て本発明を完成した。

【００１３】本発明で使用するＴＡ−３０３７Ａ物質生
産菌はストレプトミセス属に属し、ＴＡ−３０３７Ａ物
質を生産するものであれば特に制限はないが、その１例
は１９８８年１１月１２日、群馬県日光市茶木平で採取
した土壌より分離されたストレプトミセス（Ｓｔｒｅｐ
ｔｏｍｙｃｅｓ）属に属する菌株ＴＡ−３０３７があげ
られる。その菌学的特徴は次の通りである。尚、この菌
株は工業技術院微生物工業技術研究所に１９９１年（平
成３年）２月７日に寄託され、受託番号として微工研菌
寄第１１９９１号（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１１９９１）が付
与されている。

【００１４】ＴＡ−３０３７Ａ物質生産菌ＴＡ−３０３
７株は、菌糸巾１ミクロン内外の放線菌であり、光学顕
微鏡下では放線菌の気菌糸上の胞子鎖はＲｅｃｔｕｓｆ
ｌｅｘｉｂｉｌｉｓである。電子顕微鏡では桿状の胞子
が観察され、胞子表面は平滑である。細胞壁の構成成分
としては、Ｌ，Ｌ−ジアミノピメリン酸が検出され、電
顕でも胞子のうやその他の特徴的な構造は認められない
。以上より本菌はストレプトマイセス属に属する。

【００１５】本菌の培養性状、生理学的性状ならびに糖
の資化性能の有無を以下の表に示す。尚、各種培地にお
ける色の記載について（　　）内に示す標準はコンティ
ナー・コーポレーション・オブ・アメリカのカラーハー
モニーマニアルを用いた。すべての性状試験は２７℃に
おいて２週間培養後判定した。

【００１６】

【表１】

【００１７】

【表２】

【００１８】

【表３】

【００１９】以上の性状は本菌が放線菌ストレプトミセ
ス属に属することを示す。従って、本発明で用いるＴＡ
−３０３７Ａ生産菌は菌株ＴＡ−３０３７と同等または
類縁のストレプトミセス属の放線菌を包含する。

【００２０】ＴＡ−３０３７Ａ物質は、以下に示す理化
学的性状および生物学的性質により特徴づけられる。 （Ａ）ＴＡ−３０３７Ａ物質の理化学的性状（１）分子
量　　　　　　　　　　　　　　　　２８１（２）分子
式　　　　　　　　　　　　　　　　Ｃ１６Ｈ１１Ｏ４
　Ｎ１　（３）融点　　　　　　　　　　　　　　　　
　　２４８〜２５０℃（分解） （４）旋光度　　　　　　　　　　　　　　　　〔α〕
Ｄ　２３＝０°（Ｃ０．５，ＤＭＦ）

【００２１】（５）紫外吸収スペクトルλｍａｘ　ｎｍ
（ε）　　２０４（２６８１６），２４２（１５６７４
），２８２（９３８５），３８３（１４５６１）（Ｅｔ
ＯＨ）

【００２２】λｍａｘ　ｎｍ（ε）　　２０５（２１９
９７），２４１（１８３０７），２８２（９０４３），
３５０ｓｈ（８６１５），３８２（１４３４５）（０．
１Ｎ　　ＨＣｌ　　９０％　　ＥｔＯＨ）λｍａｘ　ｎ
ｍ（ε）　　３２４（９１５２）（０．１Ｎ　　ＮａＯ
Ｈ　　９０％　　ＥｔＯＨ）

【００２３】（６）赤外線
吸収スペクトル（ＫＢｒ　　Ｄｉｓｋ）（ｃｍ−１） ３４４０（ｂｒ），２９３０，１７５２，１６６３，１
２７５，１２５８，７５８

【００２４】（７）　１Ｈ−ＮＭＲスペクトル（重ＤＭ
ＳＯ中、４００ＭＨｚ）（ｐｐｍ，多重度）６．６５（
１Ｈ，ｓ），６．９０（１Ｈ，ｔ），７．３２（１Ｈ，
ｄｄ），７．３４（１Ｈ，ｔ），７．４６（２Ｈ，ｔ）
，７．６０（２Ｈ，ｄ），７．６６（１Ｈ，ｄｄ），１
１．１（１Ｈ，ｓ）

【００２５】（８）１３Ｃ−ＮＭＲスペクトル（重ＤＭ
ＳＯ中、１００ＭＨｚ）（ｐｐｍ，多重度）１０９．４
ｄ，１１２．０ｓ，１１８．７ｄ，１２０．４ｄ，１２
３．３ｓ，１２６．７ｄ，１２７．８ｄ，１２８．０ｄ
×２，１２９．０ｄ×２，１２９．９ｓ，１３４．０ｓ
，１４０．３ｓ，１５７．３ｓ，１６９．３ｓ （９）外観 黄色針状結晶。

【００２６】（Ｂ）ＴＡ−３０３７Ａ物質の生物学的性
状 （１）抗菌活性 寒天希釈法において、ＴＡ−３０３７Ａ物質は、各種細
菌、かびなどに対し５０μｇ／ｍｌでそれらの増殖を阻
止しなかった。

【００２７】（２）急性毒性 ＴＡ−３０３７Ａ物質のマウスに対する急性毒性を試験
した結果、マウス腹腔内投与の場合１００ｍｇ／ｋｇで
毒性を示さなかった。

【００２８】（３）生理活性 ＴＡ−３０３７Ａ物質のグルタチオントランスフェラー
ゼ阻害活性の測定はＨａｂｉｇらの方法〔Ｊ．Ｂｉｏｌ
．Ｃｈｅｍ．，第２４９巻，第７１３０〜７１３９頁（
１９７４）〕に準じて行なった。すなわち、１００ｍＭ
リン酸カリウム緩衝液（ｐＨ６．５）に１ｍＭグルタチ
オンと１ｍＭクロロジニトロベンゼンを含む反応液に、
検体と酵素液を添加した際の、３０℃における３４０ｎ
ｍの吸光度の増加を測定した。酵素液はアドリアマイシ
ン耐性マウス白血病細胞の細胞破砕液を用いた。その結
果、ＴＡ−３０３７Ａ物質のアドリアマイシン耐性マウ
ス白血病細胞のグルタチオントランスフェラーゼに対す
る５０％阻害濃度は、２．５μｇ／ｍｌであった。

【００２９】以上のごとく、本発明のＴＡ−３０３７Ａ
物質は、低濃度でアドリアマイシン耐性マウス白血病細
胞のグルタチオントランスフェラーゼを阻害し、抗菌活
性も毒性も極めて弱いことから、癌の薬剤耐性克服剤と
して期待される。ＴＡ−３０３７Ａ物質の塩としては、
例えば通常使用される酸との酸付加塩、あるいはアルカ
リ金属、アルカリ土類金属との塩等の通常汎用されてい
る薬理学的に許容し得る塩が挙げられる。

【００３０】本発明のＴＡ−３０３７Ａ物質はＴＡ−３
０３７Ａ物質生産菌を培養しその培養物から採取するこ
とによって製造することができる。ＴＡ−３０３７Ａ物
質生産菌を培養する際に使用する培地は、ＴＡ−３０３
７Ａ物質生産菌が利用できる任意の栄養源を含有するも
のであれば良い。例えば、炭素源としてグリセリン、グ
ルコース、マルトース、シュクロース、デキストリン、
でんぷん、油脂類などが使用できる。窒素源として大豆
粉、綿実粕、肉エキス、ペプトン、乾燥酵母、酵母エキ
ス、コーンスティープリカーなどの有機物、並びに硝酸
アンモニウム、硝酸ナトリウム、炭酸カルシウム、塩化
アンモニウムなどの無機物が使用できる。

【００３１】また、必要に応じて食塩、塩化カリウム、
りんご酸塩、重金属塩などの無機塩類を添加することも
できる。発酵中の発泡を抑制するために、常法に従って
適当な消泡剤、例えばシリコーン、大豆油などを適宜添
加することもできる。

【００３２】培養法としては、一般に行われている抗生
物質の生産の方法と同様に、好気的液体深部培養法が最
も適している。使用しうる培養温度はＴＡ−３０３７Ａ
物質生産菌の発育が実質的に阻害されず、ＴＡ−３０３
７Ａ物質を生産しうる範囲であれば、特に制約されるも
のではないが、特に好ましいのは２５〜３０℃の範囲内
の温度を挙げることができる。

【００３３】培養時間は、通常、ＴＡ−３０３７Ａ物質
が十分に蓄積するまで継続することができ、培地組成、
培養温度により異なるが、通常４８〜９６時間の培養で
目的のＴＡ−３０３７Ａ物質を得ることができる。

【００３４】かくして得られる培養物から、ＴＡ−３０
３７Ａ物質を単離するには、合目的的な任意の方法が利
用可能である。例えば、培養物を濾過し、遠心分離など
のそれ自体公知の分離方法によって菌体を除去し、その
濾液上清から適当な有機溶媒を用いた溶媒抽出法や、吸
着やイオン交換能を利用したクロマトグラフィーを単独
で、または組み合わせて使用することにより単離精製し
て採取することができる。

【００３５】本発明のＴＡ−３０３７Ａ物質はグルタチ
オントランスフェラーゼを強く阻害する作用を有する。 従って本発明ではＴＡ−３０３７Ａ物質又はその塩を有
効成分とするグルタチオントランスフェラーゼ阻害剤が
提供される。グルタチオントランスフェラーゼ阻害剤は
酵素阻害剤等の試薬又は癌の薬剤耐性克服剤などの医薬
として有用である。本発明のグルタチオントランスフェ
ラーゼ阻害剤を癌の薬剤耐性の克服のために使用するに
は、人を含む担癌温血動物にＴＡ−３０３７Ａ物質の有
効量を投与すればよい。投与方法は注射などの他、経口
投与及び注射以外の非経口投与などの方法で行うことが
できる。投与量は投与する対象、投与ルートなどによっ
て変動するが通常０．１ｍｇ〜１００ｍｇ／ｋｇ／日、
好ましくは０．５〜５０ｍｇ／ｋｇ／日程度である。

【００３６】投与する際の製剤としては特に制限はなく
、ＴＡ−３０３７Ａ物質は通常使用される医薬用添加剤
、例えば担体や補助剤などとともに液剤、固型製剤（カ
プセル、錠剤、凍結乾燥製剤など）等として製剤化され
、投与される。以下に、実施例により本発明のＴＡ−３
０３７Ａ物質の製造例を示し、更に本発明を詳細に説明
するが、本発明はこれら実施例に限定されない。

【００３７】

【実施例】寒天斜面培地に培養した放線菌（微工研菌寄
第１１９９１号）をグリセロール２．５％、肉エキス（
極東）０．５％、ポリペプトン（日本製薬）０．５％、
酵母エキス（Ｄｉｆｃｏ）１．０％、硫酸マグネシウム
０．０５％、炭酸カルシウム０．３２％を含む液体培地
（ｐＨ７．４に調整）を三角フラスコ（５００ｍｌ容）
に１００ｍｌずつ分注して、常法により１２０℃で２０
分間あらかじめ滅菌しておいたものに接種し、２７℃で
７２時間回転振盪培養（毎分１８０回転）した。この種
母培養液を同様に三角フラスコに分注、滅菌した上記の
培地１０リットルに２％接種し、２７℃で７２時間回転
振盪培養した。

【００３８】このようにして得られた培養液を遠心分離
器にかけて菌体を分離した上清９リットルをｐＨ２にし
て等量の酢酸ブチルで抽出した。この抽出液を減圧下に
濃縮し、得られた残渣６．６ｇをセファデックスＬＨ−
２０カラムにかけてメタノールで展開した。この活性画
分を集め減圧下に濃縮して得られた粗粉末２０６ｍｇを
シリカゲルカラムにかけて、クロロホルム−メタノール
（５０：１）で溶出展開した。この活性画分を集め減圧
下に濃縮し、メタノール：クロロホルム＝１：１に加温
して溶かして静置すると、結晶化した。こうして、ＴＡ
−３０３７Ａ物質の黄色結晶１２５ｍｇを得た。

【００３９】

【発明の効果】本発明のＴＡ−３０３７Ａ物質は、アド
リアマイシン耐性マウス白血病細胞のグルタチオントラ
ンスフェラーゼを強く阻害し、抗菌活性がほとんどなく
、低毒性の抗癌剤耐性克服剤として、癌の治療に期待さ
れる優れた新規物質である。また、本発明によるＴＡ−
３０３７Ａ物質は、グルタチオントランスフェラーゼ阻
害活性によって、ロイコトリエンの生合成を阻害するア
レルギー疾患治療剤として、使用できる可能性をも有し
ている。本発明はこれら有用な性質を有する新規物質を
提供する極めて有用な発明である。

Claims (3)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】　　下記理化学的性質を有することを特徴
   とする新規生理活性物質ＴＡ−３０３７Ａ及びその塩：
   （１）分子量　　　　　　　　　　　　　　　　２８１
   （２）分子式　　　　　　　　　　　　　　　　Ｃ１６
   Ｈ１１Ｏ４　Ｎ１　（３）融点　　　　　　　　　　　
   　　　　　　　２４８〜２５０℃（分解） （４）旋光度　　　　　　　　　　　　　　　　〔α〕
   Ｄ　２３＝０°（Ｃ０．５，ＤＭＦ） （５）紫外吸収スペクトル λｍａｘ　ｎｍ（ε）　　２０４（２６８１６），２４
   ２（１５６７４），２８２（９３８５），３８３（１４
   ５６１），（ＥｔＯＨ） λｍａｘ　ｎｍ（ε）　　２０５（２１９９７），２４
   １（１８３０７），２８２（９０４３），３５０ｓｈ（
   ８６１５），３８２（１４３４５） （０．１Ｎ　　ＨＣｌ　　９０％　　ＥｔＯＨ）λｍａ
   ｘ　ｎｍ（ε）　　３２４（９１５２）（０．１Ｎ　　
   ＮａＯＨ　　９０％　　ＥｔＯＨ）。
2. 【請求項２】　　ストレプトミセス属に属する新規生理
   活性物質ＴＡ−３０３７Ａ生産菌を培養しその培養物か
   ら新規生理活性物質ＴＡ−３０３７Ａを採取することを
   特徴とする新規生理活性物質ＴＡ−３０３７Ａの製造法
   。
3. 【請求項３】　　新規生理活性物質ＴＡ−３０３７Ａ又
   はその塩を有効成分とするグルタチオントランスフェラ
   ーゼ阻害剤。