JPH04283513A - 活性酸素消去剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、強力な生物活性をもつ
活性酸素、特にＯＨラジカルに対し直接的な捕捉作用を
有する活性酸素消去剤に関する。

【０００２】

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】最近、
活性酸素やフリーラジカルが生体膜組織に障害を与え、
これが種々の疾病をはじめ、癌、老化の原因にも関連す
ることを示す多くの臨床報告がある。生体内での活性酸
素には　３Ｏの１，２，３電子還元分子種であるＯ２　
−　（ス−パーオキサイドアニオンラジカル）、Ｈ２　
Ｏ２　，・ＯＨ（ＯＨラジカル）及び励起状態の　１Ｏ
２　がある。また脂質の過酸化反応で生じるペルオキシ
ラジカルやアルコキシラジカルが知られている。

【０００３】一方、生体は常に酸素に被曝されている状
態であるため酵素的防御機構を持っている。例えばスー
パーオキサイドアニオンラジカルに対して不均化反応を
行うスーパーオキサイドディスムターゼ（Ｓｕｐｅｒｏ
ｘｉｄｅ　Ｄｉｓｍｕｔａｓｅ：ＳＯＤ）があり、これ
を有効成分とする生体内の活性酸素に由来する障害の予
防及び治療剤も知られている。また、ビタミンＣ、ビタ
ミンＥが抗酸化性があるので活性酸素フリーラジカルを
消去する物質として試験されてきた。

【０００４】しかし、スーパーオキサイドディスムター
ゼはその製造法が困難で、また原料の入手も制限があり
、さらに安定性及び安全性にも問題が残る。またビタミ
ンＥやビタミンＣは、生体を用いた実験で安定性や活性
酸素消去作用が十分ではない等の難点が残る。また、Ｏ
Ｈラジカルについては、特に活性酸素種としての反応性
が高く、かつ上述酵素のような生体での特定の防御機構
を持っていない。

【０００５】以上のことから、強力な生物作用を有する
活性酸素、特にＯＨラジカルに対し直接的な捕捉作用を
有する消去剤が強く望まれている。

【０００６】本発明の目的は、強力な生物作用を有する
活性酸素、特にＯＨラジカルに対し直接的な捕捉作用を
有する活性酸素消去剤を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明は、４，４−ジメ
チル−６，６’　−ビガイアコールと、４，４−ジプロ
ピル−６，６’　−ビガイアコール及びデハイドロジバ
ニリルアルコールから成ることを特徴とする生体内の活
性酸素消去剤である。この４，４−ジメチル−６，６’
　−ビガイアコールと、４，４−ジプロピル−６，６’
　−ビガイアコール及びデハイドロジバニリルアルコー
ルは公知の化合物で〔ジャーナル・オブ・オーガニック
・ケミストリー（　Ｊ．　Ｏｒｇ．　Ｃｈｅｍ．）２８
巻，１０４８頁，１９６２年参照〕、本試験に用いた化
合物も同じ方法にて合成し、試験に供した。

【０００８】本発明の活性酸素消去剤の使用方法は、生
体内の活性酸素発生系として考えられているＯＨラジカ
ル発生系のフェントン系、あるいはスーパーオキシドア
ニオンラジカルの発生系として考えられているキサンチ
ン−キサンチンオキダーゼ系に直接投与すればよい。

【０００９】次に４，４−ジメチル−６，６’　−ビガ
イアコール、４，４−ジプロピル−６，６’　−ビガイ
アコール及びデハイドロジバニルアルコールの活性酸素
消去作用の効果を明らかにする実施例を示す。

【００１０】

【実施例】実施例１　　デオキシリボース法＜原理＞本
方法は、フェントン系にてＯＨラジカルを発生させ、そ
のＯＨラジカルとデオキシリボースとの反応（３．１ｘ
１０９Ｍ−１ｓ　−１）により生じるマロンジアルデヒ
ド（ＭＤＡ　）をチオバルビツール酸と反応させた時に
生成する反応物を測定（ＴＢＡ法）し、ＴＢＡ値を求め
るものである（アナリティカル・ケミストリー（Ａｎａ
ｌｙｔｉｃａｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ）　１６５
巻，　２１５　頁，　１９８７年を改良）。即ち、この
系にＯＨラジカルの捕捉物質が存在するとＴＢＡ値が低
下することを利用し、捕捉物質添加前のＴＢＡ値に対し
、添加後のＴＢＡ値から阻害率を求め、ＯＨラジカル阻
害活性値として示した。

【００１１】＜方法＞０．２ＭのＫＨ２ＰＯ４−　ＫＯ
Ｈ　緩衝液（ｐＨ７．４　）０．１ｍｌに２８ｍＭのデ
オキシリボース０．１ｍｌと、２０ｍＭの４，４−ジメ
チル−６，６’−ビガイアコールと、４，４−ジプロピ
ル−６，６’−ビガイアコールと、デハイドロジバニル
アルコール０．１ｍｌと、１．０４ｍＭのＥＤＴＡ０．
１ｍｌと、１ｍＭのアスコルビン酸０．１ｍｌと、１ｍ
ＭのＦｅＣｌ３　０．１ｍｌ及び、１ｍＭの過酸化水素
水０．１ｍｌを順次添加し、反応液が１．０ｍｌになる
ように蒸留水にて調製する。反応液は３７℃で６０分間
インキュベーション後、ＴＢＡ法にてチオバルビツール
酸−ＭＤＡアダクト（吸光度５３２ｎｍ）の測定をした
。この方法により得られた４，４−ジメチル−６，６’
　−ビガイアコールと、４，４−ジプロピル−６，６’
　−ビガイアコール及びデハイドロジバニリルアルコー
ルのＯＨラジカル阻害率を次式によって算出し、表１に
示した。

【００１２】 　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ａ１　：捕捉物
質添加後の吸光度Ａ２　：捕捉物質添加前の吸光度

【表１】

【００１３】またこれら全ての化合物については、０．
２ｍＭの濃度でも同程度の阻害作用が認められることか
ら、本物質がＯＨラジカル阻害作用の極めて高い物質で
あるといえる。

【００１４】実施例２．不飽和脂肪酸（リノール酸メチ
ル）の脂質過酸化抑制作用 ＜原理．方法＞１．０ｍＭのヒポキサンチン３．０ｍｌ
と、２．０Ｕ／ｍｌのキサンチンオキシダーゼ（バター
ミルク製，和光製）０．１５ｍｌと、０．１５ｍｌの蒸
留水と、０．１％トリトンＸ１００　　０．００６ｍｌ
及びリノール酸メチル０．３ｍｌを順次添加した反応組
成液に２ｍＭの４，４−ジメチル−６，６’　−ビガイ
アコールと、４，４−ジプロピル−６，６’　−ビガイ
アコール及びデハイドロジバニリルアルコール０．４ｍ
ｌを添加し、リノール酸メチルの過酸化抑制作用を測定
するものである。尚、コントロールには蒸留水を試料の
代わりに添加した。反応液は３７℃、２４時間振とう後
、ＴＢＡ法にて過酸化物（ＴＢＡ−ＭＤＡ　アダクトを
測定し、次式により過酸化抑制率を求め、表２に示した
。

【００１５】Ａ１　：試料添加時の吸光度Ａ２　：試料
溶液の代わりに蒸留水を添加したとき吸光度Ａ３　：Ｘ
ＯＤの代わりに蒸留水を添加したときの吸光度

【表２】

【００１６】表２の結果からこれらビフェニル化合物は
スーパーオキサイド並びに脂質の過酸化によって生じる
ペルオキシラジカル、アルコキシラジカルを捕捉し、脂
質の過酸化を抑制していることがわかった。

【００１７】実施例３．ミクロソーム膜の脂質過酸化抑
制作用 ＜原理．方法＞０．１Ｍの燐酸緩衝液（１．５ｍＭＫＣ
ｌを含むｐＨ７．４　）０．１５ｍｌに２０ｍＭの４，
４−ジメチル−６，６’−ビガイアコールと、４，４−
ジプロピル−６，６’−ビガイアコールと、デハイドロ
ジバニリルアルコール各々，０．１５ｍｌと、２０ｍＭ
のＡＤＰ０．１５ｍｌ、１ｍＭの硫酸第１鉄０．１５ｍ
ｌ及び０．１５ｍＭの過酸化水素水０．１５ｍｌからな
るＯＨラジカル発生組成液に、ラット肝臓より分画した
ミクロソーム（２６．３ｍｇ　ｐｒｏｔｅｉｎ／ｍｌ　
）懸濁液０．１５ｍｌを添加し、蒸留水にて１．５ｍｌ
の反応溶液を調製する。その溶液を３７℃６０分間イン
キューベーションを行い、ミクロソーム膜の脂質過酸化
抑制作用をＴＢＡ法で測定し次式により求め、表３に示
した。

【００１８】Ａ１　：ミクロソーム，燐酸緩衝液の自動
酸化の系 Ａ２　：試料の変わりにを蒸留水を添加した完全系Ａ３
　：試料を添加した完全系

【表３】

【００１９】表３の結果からビフェニル化合物は、生体
試料であるミクロソーム膜での脂質過酸化に対する抑制
作用も高く、反応６０分目に６０％の抑制率を示した。

【００２０】実施例４．ＥＳＲ分析によるＯＨラジカル
捕捉作用の確認 ＜原理．方法＞０．１Ｍの燐酸緩衝液（ｐＨ７．４　）
０．１ｍｌと、５ｍＭのジエチレントリアミンペンタ酢
酸（ＤＥＴＡＰＡＣ　）０．１ｍｌと、０．１ＭのＤＭ
ＰＯ（５，５　−ジメチル−１−ピロリン−１−オキサ
イド）０．１ｍｌと、１ｍＭの硫酸第１鉄０．１ｍｌ及
び０．１５ｍＭの過酸化水素水０．１ｍｌを順次添加し
、ＯＨラジカルを発生させた。この反応系に０．２ｍＭ
の各種活性酸素捕捉剤を０．１ｍｌを添加し、蒸留水に
て１．０ｍｌに調製した。尚，捕捉物質の代わりに試料
を溶解するときに用いた１００ｍＭエタノールを入れた
時の系をコントロールとした。測定は，ＥＳＲ（電子ス
ピン共鳴装置，日本電子ＪＥＯＬ−ＰＥ−３Ｘ型製）を
用い、反応開始後、１分目に行い標準物質としては２価
マンガンイオンを用いた。図１にその時のＥＳＲスペク
トルを示した。 捕捉物質のＯＨラジカルの捕捉能はそのコントロールに
対するピークの抑制率を求め、ＯＨラジカルとの反応速
度定数を次式により求め、表４に示した。 　　　　　　　　　　　　Ｋｓ：ＤＭＰＯ−ＯＨラジカ
ルの反応速度定数 ＫＤＭＰＯ：ＤＭＰＯ−ＯＨラジカルの反応速度定数３
．４×１０９　 ［ＤＭＰＯ］：ＤＭＰＯ濃度 ［Ｓ］：試料濃度 ［Ｆ］：ＤＭＰＯ−ＯＨのピーク抑制率

【図１】

【００２１】

【表４】

【００２２】生体内坑酸化剤として考えられているビタ
ミンＣがＯＨラジカルに対してＫＳ＝１０９　であるこ
とが確認されている。これに対し、４，４−ジメチル−
６，６’　−ビガイアコール、４，４’　−ジプロピル
−６，６’　−ビガイアコール及びデハイドロジバニリ
ルアルコールの各々は、その１００倍も高いＯＨラジカ
ル捕捉能を有する有効な薬剤であることが本実験で明ら
かとなった。

【００２３】

【発明の効果】以上記載の如く、本発明の有効成分であ
る４，４−ジメチル−６，６’　−ビガイアコール、４
，４−ジプロピル−６，６’　−ビガイアコール及びデ
ハイドロジバニリルアルコールは、炎症、発癌、虚血障
害、放射線障害、老化、白内症、自己免疫障害等の原因
である活性酸素、特に活性酸素のなかでも最も反応性が
高く、生体での防御機構を持たないＯＨラジカルに対し
直接捕捉し、消去する極めて有用な活性酸素消去剤であ
ることは明らかである。

【図面の簡単な説明】

【図１】実施例４のＯＨラジカル捕捉作用を示すＥＲＳ
スペクトルである。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】４，　４−ジメチル−６，６’　−ビガイ
   アコール、４，　４−ジプロピル−６，　６’　−ビガ
   イアコール及びデハイドロジバニリルアルコールの少な
   くとも１種を有効成分とすることを特徴とする生体内活
   性酸素消去剤。