JPH04293494A - フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法 - Google Patents
フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法Info
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- JPH04293494A JPH04293494A JP3081337A JP8133791A JPH04293494A JP H04293494 A JPH04293494 A JP H04293494A JP 3081337 A JP3081337 A JP 3081337A JP 8133791 A JP8133791 A JP 8133791A JP H04293494 A JPH04293494 A JP H04293494A
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、フラクトース含有オリ
ゴ糖または配糖体の製造方法に関し、詳しくは低コスト
で効率よくフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を工
業的に製造する方法に関する。
ゴ糖または配糖体の製造方法に関し、詳しくは低コスト
で効率よくフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を工
業的に製造する方法に関する。
【０００２】
【従来の技術および発明が解決しようとする課題】近年
、健康志向の増大に伴い、グルコシル基あるいはフラク
トシル基転移酵素を用いた種々の生理活性を有するオリ
ゴ糖や有用配糖体の合成等の研究が盛んに行われている
。カップリングシュガー（登録商標），フラクトオリゴ
糖，パラチノース，α─グルコシルステビオサイドなど
が虫歯にならない、またビフィズス菌増殖因子等の性質
を持つものとして実用化された例である。
、健康志向の増大に伴い、グルコシル基あるいはフラク
トシル基転移酵素を用いた種々の生理活性を有するオリ
ゴ糖や有用配糖体の合成等の研究が盛んに行われている
。カップリングシュガー（登録商標），フラクトオリゴ
糖，パラチノース，α─グルコシルステビオサイドなど
が虫歯にならない、またビフィズス菌増殖因子等の性質
を持つものとして実用化された例である。
【０００３】現在、フラクトシル基転移酵素としてはバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ） の生産するレバンシュクラーゼおよびアスペル
ギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ
），ペニシリウム・オキザリクム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ ｏｘａｌｉｃｕｍ）， ペニシリウム・フリクエ
ンタンス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｒｅｑｕｅｎｔ
ａｎｓ），ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ ｓｐ．） Ｋ２５などのかびが生産するβ─フ
ラクトフラノシダーゼ、アルスロバクター・エスピー（
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｋ─１の生産する
β─フラクトフラノシダーゼが知られている。
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ） の生産するレバンシュクラーゼおよびアスペル
ギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ
），ペニシリウム・オキザリクム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉ
ｕｍ ｏｘａｌｉｃｕｍ）， ペニシリウム・フリクエ
ンタンス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｒｅｑｕｅｎｔ
ａｎｓ），ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌ
ｉｕｍ ｓｐ．） Ｋ２５などのかびが生産するβ─フ
ラクトフラノシダーゼ、アルスロバクター・エスピー（
Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｋ─１の生産する
β─フラクトフラノシダーゼが知られている。
【０００４】これらの酵素で合成されるキシロシルフラ
クトシド，イソマルトシルフラクトシドは抗う蝕性の性
質を有しており、さらにフラクトオリゴ糖，ガラクトシ
ルフラクトシド，ラクトシルフラクトシドはビフィズス
菌増殖因子としての活性を有している。そのため、医薬
品および食品分野での幅広い用途が期待されている。ラ
クトシルフラクトシドの構造を図１に示す。
クトシド，イソマルトシルフラクトシドは抗う蝕性の性
質を有しており、さらにフラクトオリゴ糖，ガラクトシ
ルフラクトシド，ラクトシルフラクトシドはビフィズス
菌増殖因子としての活性を有している。そのため、医薬
品および食品分野での幅広い用途が期待されている。ラ
クトシルフラクトシドの構造を図１に示す。
【０００５】しかし、上記酵素を用いたオリゴ糖合成反
応は、生成物阻害によって反応が平衡に達してしまうた
め、目的とする物質、例えばラクトシルフラクトシドは
反応固形分中３０％程度しか得られない。さらに、この
３０％程度のラクトシルフラクトシドを含む反応液はど
のような乾燥法を用いても粉末にできないという欠点を
有する。
応は、生成物阻害によって反応が平衡に達してしまうた
め、目的とする物質、例えばラクトシルフラクトシドは
反応固形分中３０％程度しか得られない。さらに、この
３０％程度のラクトシルフラクトシドを含む反応液はど
のような乾燥法を用いても粉末にできないという欠点を
有する。
【０００６】また、インベルターゼ活性を持つ酵母を用
いてフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を製造する
方法もあるが、この方法では該酵母がフラクトース含有
オリゴ糖または配糖体を受容体とフラクトースに分解し
てしまうため好ましくない。そこで、単糖を除去する方
法として、酵母の代わりに単糖のみを除く限外ろ過膜を
用いることは可能であるが、この方法は未だ研究段階で
あり、受容体が単糖の場合には応用できないという欠点
がある。
いてフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を製造する
方法もあるが、この方法では該酵母がフラクトース含有
オリゴ糖または配糖体を受容体とフラクトースに分解し
てしまうため好ましくない。そこで、単糖を除去する方
法として、酵母の代わりに単糖のみを除く限外ろ過膜を
用いることは可能であるが、この方法は未だ研究段階で
あり、受容体が単糖の場合には応用できないという欠点
がある。
【０００７】
【課題を解決するための手段】そこで、本発明者らはこ
のような実情を考慮し、効率のよい実用的なフラクトー
ス含有オリゴ糖または配糖体の製造方法を確立すべく研
究を重ねた結果、受容体の存在下、スクロースにフラク
トシル基転移酵素を作用させ、生成するグルコースをイ
ンベルターゼ欠損酵母によって資化すれば、フラクトー
ス含有オリゴ糖または配糖体を効率よく製造することが
できることを見出し、本発明を完成したのである。
のような実情を考慮し、効率のよい実用的なフラクトー
ス含有オリゴ糖または配糖体の製造方法を確立すべく研
究を重ねた結果、受容体の存在下、スクロースにフラク
トシル基転移酵素を作用させ、生成するグルコースをイ
ンベルターゼ欠損酵母によって資化すれば、フラクトー
ス含有オリゴ糖または配糖体を効率よく製造することが
できることを見出し、本発明を完成したのである。
【０００８】すなわち、本発明は受容体の存在下、スク
ロースにフラクトシル基転移酵素およびインベルターゼ
欠損酵母を作用させることを特徴とするフラクトース含
有オリゴ糖または配糖体の製造方法を提供するものであ
る。
ロースにフラクトシル基転移酵素およびインベルターゼ
欠損酵母を作用させることを特徴とするフラクトース含
有オリゴ糖または配糖体の製造方法を提供するものであ
る。
【０００９】本発明では、フラクトシル基転移酵素がフ
ラクトース供与体（スクロース）に作用してグルコース
とフラクトースに加水分解し、生成したフラクトースを
受容体（キシロース，ガラクトース，ラクトースなど）
に転移させ、グルコースをインベルターゼ欠損酵母によ
って資化することにより、フラクトース含有オリゴ糖ま
たは配糖体を製造するものである。
ラクトース供与体（スクロース）に作用してグルコース
とフラクトースに加水分解し、生成したフラクトースを
受容体（キシロース，ガラクトース，ラクトースなど）
に転移させ、グルコースをインベルターゼ欠損酵母によ
って資化することにより、フラクトース含有オリゴ糖ま
たは配糖体を製造するものである。
【００１０】本発明でいうフラクトース含有オリゴ糖と
は、キシロシルフラクトシド，ガラクトシルフラクトシ
ド，ラクトシルフラクトシド，ソルボシルフラクトシド
，フコシルフラクトシド，ケストース，スタキオース，
エルロース，ラフィノース，イソマルトシルフラクトシ
ド，キシロビオシルフラクトシドおよびアラビノシルフ
ラクトシドの中のいずれかを意味する。
は、キシロシルフラクトシド，ガラクトシルフラクトシ
ド，ラクトシルフラクトシド，ソルボシルフラクトシド
，フコシルフラクトシド，ケストース，スタキオース，
エルロース，ラフィノース，イソマルトシルフラクトシ
ド，キシロビオシルフラクトシドおよびアラビノシルフ
ラクトシドの中のいずれかを意味する。
【００１１】また、本発明でいうフラクトース含有配糖
体とは、フラクトシルステビオサイド，フラクトシルル
ブソサイドおよびフラクトシルレバウディオサイドの中
のいずれかを意味する。
体とは、フラクトシルステビオサイド，フラクトシルル
ブソサイドおよびフラクトシルレバウディオサイドの中
のいずれかを意味する。
【００１２】フラクトース供与体から、フラクトシル基
転移酵素の酵素反応により生成するフラクトースを受容
する分子体としては、上記フラクトース含有オリゴ糖ま
たは配糖体を生成し得るものであればよい。具体的には
、例えばラクトース，キシロース，ガラクトースなどが
適している。
転移酵素の酵素反応により生成するフラクトースを受容
する分子体としては、上記フラクトース含有オリゴ糖ま
たは配糖体を生成し得るものであればよい。具体的には
、例えばラクトース，キシロース，ガラクトースなどが
適している。
【００１３】受容体としてラクトースの代わりにキシロ
ースやガラクトースを用いた場合でも酵素反応は進行す
る（特開平３─２７２８５号公報）。
ースやガラクトースを用いた場合でも酵素反応は進行す
る（特開平３─２７２８５号公報）。
【００１４】本発明で用いるフラクトシル基転移酵素は
、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ） 等の微生物が生産するレバンスクラーゼまた
はアルスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ ｓｐ．）等の微生物が生産するβ─フラクトフラ
ノシダーゼの中のいずれかであればよく、具体的にはバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ） の生産するレバンシュクラーゼ、アスペルギル
ス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ），
ペニシリウム・オキザリクム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｏｘａｌｉｃｕｍ）， ペニシリウム・フリクエンタ
ンス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｒｅｑｕｅｎｔａｎ
ｓ），ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍｓｐ．） Ｋ２５などのかびが生産するβ─フラクト
フラノシダーゼ、アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔ
ｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｋ─１（特開平３─２７
２８５号公報）の生産するβ─フラクトフラノシダーゼ
などである。
、バチルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉ
ｌｉｓ） 等の微生物が生産するレバンスクラーゼまた
はアルスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔ
ｅｒ ｓｐ．）等の微生物が生産するβ─フラクトフラ
ノシダーゼの中のいずれかであればよく、具体的にはバ
チルス・ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓ ｓｕｂｔｉｌ
ｉｓ） の生産するレバンシュクラーゼ、アスペルギル
ス・ニガー（Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｕｓ ｎｉｇｅｒ），
ペニシリウム・オキザリクム（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ
ｏｘａｌｉｃｕｍ）， ペニシリウム・フリクエンタ
ンス（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ ｆｒｅｑｕｅｎｔａｎ
ｓ），ペニシリウム・エスピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕ
ｍｓｐ．） Ｋ２５などのかびが生産するβ─フラクト
フラノシダーゼ、アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔ
ｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．）Ｋ─１（特開平３─２７
２８５号公報）の生産するβ─フラクトフラノシダーゼ
などである。
【００１５】上記フラクトシル基転移酵素の酵素反応で
生成したグルコースを資化するインベルターゼ欠損酵母
はキシロースを資化せず、さらにはグルコースの存在下
ではガラクトースも資化しないため、より一層酵素反応
を促進し、フラクトース含有オリゴ糖または配糖体を大
量に製造することができる。本発明に好適に使用するイ
ンベルターゼ欠損酵母としては、市販のものを用いるこ
とができる。例えばＬＳ−Ｙ（オリエンタル酵母工業株
式会社製）を挙げることができる。以下に、ＬＳ−Ｙの
特徴を示す。
生成したグルコースを資化するインベルターゼ欠損酵母
はキシロースを資化せず、さらにはグルコースの存在下
ではガラクトースも資化しないため、より一層酵素反応
を促進し、フラクトース含有オリゴ糖または配糖体を大
量に製造することができる。本発明に好適に使用するイ
ンベルターゼ欠損酵母としては、市販のものを用いるこ
とができる。例えばＬＳ−Ｙ（オリエンタル酵母工業株
式会社製）を挙げることができる。以下に、ＬＳ−Ｙの
特徴を示す。
【００１６】
１）単糖類の資化性能
グルコースの資化性→７２０ｍｇグルコース／ｈ／ｇ
ｗｅｔ ｙｅａｓｔ以上 ２）スクロースの分解性 スクロースの資化性および発酵性→なしインベルターゼ
活性 ０ユニット３）最適資化温度 ３０±２℃が最適で、この温度領域を超えると、資化活
性は著しく低下する。
ｗｅｔ ｙｅａｓｔ以上 ２）スクロースの分解性 スクロースの資化性および発酵性→なしインベルターゼ
活性 ０ユニット３）最適資化温度 ３０±２℃が最適で、この温度領域を超えると、資化活
性は著しく低下する。
【００１７】目的とするフラクトース含有オリゴ糖また
は配糖体を生成させるためには、スクロース（フラクト
ース供与体）とフラクトース受容体とを共存せしめた基
質溶液に、フラクトシル基転移酵素およびインベルター
ゼ欠損酵母を作用させればよい。フラクトシル基転移酵
素およびインベルターゼ欠損酵母を作用させるにあたっ
ては、フラクトシル基転移酵素反応終了後、酵素を失活
した反応液にインベルターゼ欠損酵母を添加し作用させ
てもよいし、あるいはフラクトシル基転移酵素とインベ
ルターゼ欠損酵母を上記基質溶液に同時に添加して作用
させてもよい。
は配糖体を生成させるためには、スクロース（フラクト
ース供与体）とフラクトース受容体とを共存せしめた基
質溶液に、フラクトシル基転移酵素およびインベルター
ゼ欠損酵母を作用させればよい。フラクトシル基転移酵
素およびインベルターゼ欠損酵母を作用させるにあたっ
ては、フラクトシル基転移酵素反応終了後、酵素を失活
した反応液にインベルターゼ欠損酵母を添加し作用させ
てもよいし、あるいはフラクトシル基転移酵素とインベ
ルターゼ欠損酵母を上記基質溶液に同時に添加して作用
させてもよい。
【００１８】具体的には、前者の場合には基質濃度は好
ましくは４０％（ｗ／ｗ）とし、これにフラクトシル基
転移酵素を７．５〜１０単位／ｇスクロース添加し、５
０℃〜６０℃，ｐＨ６．５〜７．０にて９〜２４時間反
応させた後、熱にて酵素を失活させる。次いで、インベ
ルターゼ欠損酵母を仕込み重量当たり２％以上添加し、
作用させる。このとき、反応温度は反応速度を考慮し３
０℃が好ましい。また、反応時のｐＨは３〜７の範囲内
であればかまわない。反応時間はインベルターゼ欠損酵
母添加量によって異なる。一方、後者の場合には基質濃
度は好ましくは３０〜４０％（ｗ／ｗ）とし、これにフ
ラクトシル基転移酵素を１５〜４０単位／ｇスクロース
添加し、インベルターゼ欠損酵母を仕込み重量当たり２
％以上添加して反応させる。反応時の温度は、酵素の至
適温度が３５℃以上であれば３５℃が良く、３５℃未満
であれば酵素の至適温度が適当である。また、反応時の
ｐＨは酵素の至適ｐＨが３〜７であれば酵素の至適ｐＨ
が好ましく、その範囲から外れるものは酸性側であれば
ｐＨ３とし、アルカリ性側であればｐＨ７とするのが好
ましい。反応時間は６〜３０時間とすればよい。
ましくは４０％（ｗ／ｗ）とし、これにフラクトシル基
転移酵素を７．５〜１０単位／ｇスクロース添加し、５
０℃〜６０℃，ｐＨ６．５〜７．０にて９〜２４時間反
応させた後、熱にて酵素を失活させる。次いで、インベ
ルターゼ欠損酵母を仕込み重量当たり２％以上添加し、
作用させる。このとき、反応温度は反応速度を考慮し３
０℃が好ましい。また、反応時のｐＨは３〜７の範囲内
であればかまわない。反応時間はインベルターゼ欠損酵
母添加量によって異なる。一方、後者の場合には基質濃
度は好ましくは３０〜４０％（ｗ／ｗ）とし、これにフ
ラクトシル基転移酵素を１５〜４０単位／ｇスクロース
添加し、インベルターゼ欠損酵母を仕込み重量当たり２
％以上添加して反応させる。反応時の温度は、酵素の至
適温度が３５℃以上であれば３５℃が良く、３５℃未満
であれば酵素の至適温度が適当である。また、反応時の
ｐＨは酵素の至適ｐＨが３〜７であれば酵素の至適ｐＨ
が好ましく、その範囲から外れるものは酸性側であれば
ｐＨ３とし、アルカリ性側であればｐＨ７とするのが好
ましい。反応時間は６〜３０時間とすればよい。
【００１９】このようにして得られたフラクトース含有
オリゴ糖または配糖体を含む反応液は、硅藻土ろ過など
の方法によりインベルターゼ欠損酵母を除去した後、酵
素を加熱失活させ、活性炭脱色，イオン交換樹脂を用い
て脱塩，脱色し、さらに活性炭カラムクトマトグラフィ
ーなどのクロマト操作により高純度に精製して目的とす
るフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を得ることが
できる。
オリゴ糖または配糖体を含む反応液は、硅藻土ろ過など
の方法によりインベルターゼ欠損酵母を除去した後、酵
素を加熱失活させ、活性炭脱色，イオン交換樹脂を用い
て脱塩，脱色し、さらに活性炭カラムクトマトグラフィ
ーなどのクロマト操作により高純度に精製して目的とす
るフラクトース含有オリゴ糖または配糖体を得ることが
できる。
【００２０】また、本発明では基質溶液中のスクロース
と受容体の比率を変えることによって、粉末品および液
状品に適した糖組成に調整できる。例えば製品のスクロ
ース含量が高い場合は粉末化が困難であるため、基質溶
液中のスクロース含量を抑えるようにスクロースと受容
体の比率を変えればよく、一方製品のラクトース（受容
体）の含量が高い液状の場合は、ラクトースの結晶が析
出してくるので基質溶液中のラクトース含量を抑えるよ
うにスクロースと受容体の比率を変えればよい。
と受容体の比率を変えることによって、粉末品および液
状品に適した糖組成に調整できる。例えば製品のスクロ
ース含量が高い場合は粉末化が困難であるため、基質溶
液中のスクロース含量を抑えるようにスクロースと受容
体の比率を変えればよく、一方製品のラクトース（受容
体）の含量が高い液状の場合は、ラクトースの結晶が析
出してくるので基質溶液中のラクトース含量を抑えるよ
うにスクロースと受容体の比率を変えればよい。
【００２１】
【実施例】次に、本発明を実施例により説明する。
【００２２】実施例１
ラクトシルフラクトシド（以下、ＬＳと略記する。）製
造におけるインベルターゼ欠損酵母 ＬＳ−Ｙ（オリ
エンタル酵母工業株式会社製）添加の影響を検討した。 試験方法は以下に示す通りである。ＬＳ−Ｙを添加しな
い方法では、スクロース５０．０ｇ，ラクトース５１．
６ｇを最終濃度４０％（ｗ／ｗ）になるように溶解し、
アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｓｐ．）Ｋ─１の生産するβ─フラクトフラノシダ
ーゼ（以下、Ｋ−１酵素と略記する。）をスクロース重
量（ｇ）当たり７．５単位添加し、ｐＨ６．５，温度５
５℃で２０時間反応させた。一方、ＬＳ−Ｙを添加した
方法では、スクロース５０．０ｇ，ラクトース５１．６
ｇを最終濃度３０％（ｗ／ｗ）になるように溶解し、Ｋ
−１酵素をスクロース重量（ｇ）当たり２５単位添加し
、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加してｐＨ６．
５〜７．０，温度３５℃で２０時間反応させた。ここで
、酵素活性は１分間に１μｍｏｌ のフラクトースを転
移する酵素量を１単位とした。ＬＳ生成量の経時変化を
図２に示す。なお、ＬＳ生成量は高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。以下の実施例に
ついても同様である。ＨＰＬＣの条件を以下に示す。
造におけるインベルターゼ欠損酵母 ＬＳ−Ｙ（オリ
エンタル酵母工業株式会社製）添加の影響を検討した。 試験方法は以下に示す通りである。ＬＳ−Ｙを添加しな
い方法では、スクロース５０．０ｇ，ラクトース５１．
６ｇを最終濃度４０％（ｗ／ｗ）になるように溶解し、
アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅ
ｒ ｓｐ．）Ｋ─１の生産するβ─フラクトフラノシダ
ーゼ（以下、Ｋ−１酵素と略記する。）をスクロース重
量（ｇ）当たり７．５単位添加し、ｐＨ６．５，温度５
５℃で２０時間反応させた。一方、ＬＳ−Ｙを添加した
方法では、スクロース５０．０ｇ，ラクトース５１．６
ｇを最終濃度３０％（ｗ／ｗ）になるように溶解し、Ｋ
−１酵素をスクロース重量（ｇ）当たり２５単位添加し
、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加してｐＨ６．
５〜７．０，温度３５℃で２０時間反応させた。ここで
、酵素活性は１分間に１μｍｏｌ のフラクトースを転
移する酵素量を１単位とした。ＬＳ生成量の経時変化を
図２に示す。なお、ＬＳ生成量は高速液体クロマトグラ
フィー（ＨＰＬＣ）を用いて測定した。以下の実施例に
ついても同様である。ＨＰＬＣの条件を以下に示す。
【００２３】カラム：ＴＯＳＯＨ ＴＳＫ−ＧＥＬ
Ａｍｉｄｅ−８０ 移動相：７０％アセトニトリル 流速 ：１ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ：３５℃ 検出器：示差屈折計
Ａｍｉｄｅ−８０ 移動相：７０％アセトニトリル 流速 ：１ｍｌ／ｍｉｎ 温度 ：３５℃ 検出器：示差屈折計
【００２４】図２より明らかなように、基質濃度，酵素
添加量，反応温度が異なるものの、ＬＳ−Ｙを用いた場
合には明らかに酵素の反応平衡がくずれ、ＬＳの増収が
確認できる。
添加量，反応温度が異なるものの、ＬＳ−Ｙを用いた場
合には明らかに酵素の反応平衡がくずれ、ＬＳの増収が
確認できる。
【００２５】実施例２
スクロース１５ｋｇ，ラクトース１５ｋｇを最終濃度４
０％（ｗ／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−１酵
素をスクロース重量（ｇ）当たり７．５単位添加し、ｐ
Ｈ６．５，温度５０℃で１８時間反応させた。次いで、
温度を３０℃に冷却し、濃度を３０％（ｗ／ｗ）に希釈
し、ＬＳ−Ｙを仕込み重量の５％になるように添加し、
３０℃で１８時間反応させた。反応終了後、ＬＳ−Ｙを
硅藻土ろ過により除去し、９５℃で１時間活性炭処理後
、イオン交換樹脂（ＩＲＡ−４００，ＩＲ−１２０Ｂ）
で精製した。これを濃縮後、スプレードライして２２．
５ｋｇの粉末品を得た。転移反応時，酵母反応時および
粉末品の糖組成を表１に示す。
０％（ｗ／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−１酵
素をスクロース重量（ｇ）当たり７．５単位添加し、ｐ
Ｈ６．５，温度５０℃で１８時間反応させた。次いで、
温度を３０℃に冷却し、濃度を３０％（ｗ／ｗ）に希釈
し、ＬＳ−Ｙを仕込み重量の５％になるように添加し、
３０℃で１８時間反応させた。反応終了後、ＬＳ−Ｙを
硅藻土ろ過により除去し、９５℃で１時間活性炭処理後
、イオン交換樹脂（ＩＲＡ−４００，ＩＲ−１２０Ｂ）
で精製した。これを濃縮後、スプレードライして２２．
５ｋｇの粉末品を得た。転移反応時，酵母反応時および
粉末品の糖組成を表１に示す。
【００２６】
表１─────
─────────────────────────
────── 糖組成
単糖 スクロース ラクトース
ＬＳ ──────────────────
────────────────── 転移反
応時 １７．０ ２３．０
２６．０ ３４．０ 酵母反応時
── ３１．３
３１．３ ４１．０ 粉末品
２．０ ２６．１
３２．３ ３９．６───────────
─────────────────────────
＊表中の数値は固形分中の含量（％）を表す。
─────────────────────────
────── 糖組成
単糖 スクロース ラクトース
ＬＳ ──────────────────
────────────────── 転移反
応時 １７．０ ２３．０
２６．０ ３４．０ 酵母反応時
── ３１．３
３１．３ ４１．０ 粉末品
２．０ ２６．１
３２．３ ３９．６───────────
─────────────────────────
＊表中の数値は固形分中の含量（％）を表す。
【００２７】実施例３
スクロースおよびラクトースを０．１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ６．５）に最終濃度が４０％（ｗ／ｗ）になるよう
に等量混合溶解し、Ｋ−１酵素をスクロース重量（ｇ）
当たり４０単位添加し、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の
２％添加して３０℃で７２時間反応させた。糖組成の経
時変化を図３に示す。
ｐＨ６．５）に最終濃度が４０％（ｗ／ｗ）になるよう
に等量混合溶解し、Ｋ−１酵素をスクロース重量（ｇ）
当たり４０単位添加し、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の
２％添加して３０℃で７２時間反応させた。糖組成の経
時変化を図３に示す。
【００２８】図３より明らかなように、酵素と同時にＬ
Ｓ−Ｙを作用させると、酵素の反応平衡がくずれＬＳが
増収される。また、糖中のＬＳの含量も６５％と高いも
のであった。
Ｓ−Ｙを作用させると、酵素の反応平衡がくずれＬＳが
増収される。また、糖中のＬＳの含量も６５％と高いも
のであった。
【００２９】実施例４
スクロース４５．０ｇ，ラクトース５６．８ｇを最終濃
度３０％（ｗ／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−
１酵素をスクロース重量（ｇ）当たり１５単位になるよ
うに添加し、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加し
た。温度３５℃で２８時間反応させた。ｐＨは６．５〜
７．０の範囲に入るようにＮａＯＨを用いて調整した。 糖組成の経時変化を図４に示す。
度３０％（ｗ／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−
１酵素をスクロース重量（ｇ）当たり１５単位になるよ
うに添加し、同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加し
た。温度３５℃で２８時間反応させた。ｐＨは６．５〜
７．０の範囲に入るようにＮａＯＨを用いて調整した。 糖組成の経時変化を図４に示す。
【００３０】図４より明らかなように、Ｋ−１酵素の量
はスクロース重量（ｇ）当たり１５単位で十分なもので
あることがわかった。
はスクロース重量（ｇ）当たり１５単位で十分なもので
あることがわかった。
【００３１】実施例５
スクロース（水分０．０３％）１５００ｋｇ，ラクトー
ス（水分３．１％）１８５０Ｋｇを最終濃度３０％（ｗ
／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−１酵素をスク
ロース重量（ｇ）当たり２５単位になるように添加し、
同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加した。温度３５
℃で、ｐＨは６．５〜７．０の範囲に入るようにＮａＯ
Ｈを用いて調整して反応させた。反応２２時間後、仕込
み重量の１％に相当する活性炭を添加して常温にて硅藻
土ろ過を行い、ＬＳ−Ｙを除去した。次いで、活性炭を
仕込み重量の２％添加し９５℃に３０分間保った後、７
０℃に冷却してから再び硅藻土ろ過を行った。さらに、
３５℃に冷却してイオン交換樹脂で脱塩脱色を行った。 これをエバポレータで濃度５５％（ｗ／ｗ）に濃縮し、
スプレードライにて２３６０ｋｇの粉末品を得た。得ら
れた粉末品の糖組成を表２に示す。
ス（水分３．１％）１８５０Ｋｇを最終濃度３０％（ｗ
／ｗ）になるように水道水に溶解し、Ｋ−１酵素をスク
ロース重量（ｇ）当たり２５単位になるように添加し、
同時にＬＳ−Ｙを仕込み重量の３％添加した。温度３５
℃で、ｐＨは６．５〜７．０の範囲に入るようにＮａＯ
Ｈを用いて調整して反応させた。反応２２時間後、仕込
み重量の１％に相当する活性炭を添加して常温にて硅藻
土ろ過を行い、ＬＳ−Ｙを除去した。次いで、活性炭を
仕込み重量の２％添加し９５℃に３０分間保った後、７
０℃に冷却してから再び硅藻土ろ過を行った。さらに、
３５℃に冷却してイオン交換樹脂で脱塩脱色を行った。 これをエバポレータで濃度５５％（ｗ／ｗ）に濃縮し、
スプレードライにて２３６０ｋｇの粉末品を得た。得ら
れた粉末品の糖組成を表２に示す。
【００３２】
表２───
─────────────────────────
──────── 糖組成
単糖 スクロース ラクトース
ＬＳ ────────────────
────────────────────
粉末品 ３．５ ７．
１ ２２．０ ５７．５────
─────────────────────────
───────＊表中の数値は固形分中の含量（％）を
表す。
─────────────────────────
──────── 糖組成
単糖 スクロース ラクトース
ＬＳ ────────────────
────────────────────
粉末品 ３．５ ７．
１ ２２．０ ５７．５────
─────────────────────────
───────＊表中の数値は固形分中の含量（％）を
表す。
【００３３】
【発明の効果】本発明によれば、低コストで効率よくフ
ラクトース含有オリゴ糖または配糖体を工業的に製造す
ることができる。本発明により得られるフラクトース含
有オリゴ糖または配糖体は、抗う蝕性，ビフィズス菌増
殖活性を有するので、医薬品や食品の分野で有用である
。
ラクトース含有オリゴ糖または配糖体を工業的に製造す
ることができる。本発明により得られるフラクトース含
有オリゴ糖または配糖体は、抗う蝕性，ビフィズス菌増
殖活性を有するので、医薬品や食品の分野で有用である
。
【００３４】
【図１】 ラクトシルフラクトシドの構造を示すもの
である。
である。
【図２】 実施例１におけるＬＳ生成量の経時変化を
示すものである。
示すものである。
【図３】 実施例３における糖組成の経時変化を示す
ものである。
ものである。
【図４】 実施例４における糖組成の経時変化を示す
ものである。
ものである。
Claims (4)
- 【請求項１】 受容体の存在下、スクロースにフラク
トシル基転移酵素およびインベルターゼ欠損酵母を作用
させることを特徴とするフラクトース含有オリゴ糖また
は配糖体の製造方法。 - 【請求項２】 フラクトース含有オリゴ糖がキシロシ
ルフラクトシド，ガラクトシルフラクトシド，ラクトシ
ルフラクトシド，ソルボシルフラクトシド，フコシルフ
ラクトシド，ケストース，スタキオース，エルロース，
ラフィノース，イソマルトシルフラクトシド，キシロビ
オシルフラクトシドおよびアラビノシルフラクトシドの
中のいずれかである請求項１記載のフラクトース含有オ
リゴ糖の製造方法。 - 【請求項３】 フラクトース含有配糖体がフラクトシ
ルステビオサイド，フラクトシルルブソサイドおよびフ
ラクトシルレバウディオサイドの中のいずれかである請
求項１記載のフラクトース含有配糖体の製造方法。 - 【請求項４】 フラクトシル基転移酵素がバチルス・
ズブチリス（Ｂａｃｉｌｌｕｓｓｕｂｔｉｌｉｓ） 等
の微生物が生産するレバンスクラーゼまたはアルスロバ
クター・エスピー（Ａｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ ｓｐ．
）等の微生物が生産するβ─フラクトフラノシダーゼの
中のいずれかである請求項１記載のフラクトース含有オ
リゴ糖または配糖体の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3081337A JPH04293494A (ja) | 1991-03-22 | 1991-03-22 | フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP3081337A JPH04293494A (ja) | 1991-03-22 | 1991-03-22 | フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04293494A true JPH04293494A (ja) | 1992-10-19 |
Family
ID=13743559
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP3081337A Pending JPH04293494A (ja) | 1991-03-22 | 1991-03-22 | フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04293494A (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100337144B1 (ko) * | 2000-01-26 | 2002-05-18 | 서진호 | 올리고당과 과당이 생성되는 김치의 제조방법 |
| WO2006011301A1 (ja) * | 2004-07-29 | 2006-02-02 | Ensuiko Sugar Refining Co., Ltd. | 結晶ラクトスクロースまたはそれを含有する含蜜結晶とその用途 |
| KR20190047624A (ko) * | 2017-10-27 | 2019-05-08 | 씨제이제일제당 (주) | 아스로박터 속 미생물을 이용하여 과당전이 스테비올 배당체를 제조하는 방법 |
| KR20210111721A (ko) * | 2019-04-19 | 2021-09-13 | 씨제이제일제당 (주) | 과당전이 스테비올 배당체를 포함하는 조성물 |
| WO2023031625A1 (en) * | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Optibiotix Limited | Sweetener compositions and methods of production thereof |
| EP4357352A1 (en) * | 2022-10-21 | 2024-04-24 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Oligosaccharides derived from rare sugars with low caloric power and prebiotic properties |
| WO2025012190A1 (en) * | 2023-07-07 | 2025-01-16 | Tiense Suikerraffinaderij Nv | Method of preparing a sugar syrup composition |
-
1991
- 1991-03-22 JP JP3081337A patent/JPH04293494A/ja active Pending
Cited By (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| WO2019083309A3 (ko) * | 2017-10-27 | 2019-06-27 | 씨제이제일제당 (주) | 아스로박터 속 미생물을 이용하여 과당전이 스테비올 배당체를 제조하는 방법 |
| CN111511909A (zh) * | 2017-10-27 | 2020-08-07 | Cj第一制糖株式会社 | 应用节杆菌属微生物制备转果糖基甜菊苷的方法 |
| US11332770B2 (en) | 2017-10-27 | 2022-05-17 | Cj Cheiljedang Corporation | Method for preparing transfructosylated steviol glycoside using microorganism of genus arthrobacter |
| KR20210111721A (ko) * | 2019-04-19 | 2021-09-13 | 씨제이제일제당 (주) | 과당전이 스테비올 배당체를 포함하는 조성물 |
| WO2023031625A1 (en) * | 2021-09-03 | 2023-03-09 | Optibiotix Limited | Sweetener compositions and methods of production thereof |
| EP4357352A1 (en) * | 2022-10-21 | 2024-04-24 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Oligosaccharides derived from rare sugars with low caloric power and prebiotic properties |
| WO2024083491A1 (en) * | 2022-10-21 | 2024-04-25 | Consejo Superior De Investigaciones Científicas | Oligosaccharides derived from rare sugars with low caloric power and prebiotic properties |
| WO2025012190A1 (en) * | 2023-07-07 | 2025-01-16 | Tiense Suikerraffinaderij Nv | Method of preparing a sugar syrup composition |
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