JPH0349693A - Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 - Google Patents
Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法Info
- Publication number
- JPH0349693A JPH0349693A JP18491989A JP18491989A JPH0349693A JP H0349693 A JPH0349693 A JP H0349693A JP 18491989 A JP18491989 A JP 18491989A JP 18491989 A JP18491989 A JP 18491989A JP H0349693 A JPH0349693 A JP H0349693A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- acetyllactosamine
- acetylglucosamine
- galactosidase
- lactose
- reaction solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Landscapes
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
（産業上の利用分野〉
本発明は、大乳オリゴ糖や複合糖質の糖鎖中に含まれる
Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法に関するものである
． （従来の技術） Ｎ−アセチルラクトサミンは、血液型糖蛋白質の分解物
から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ一ｌ．４結合したアミノ２糖で、人乳才リ
ゴ糖や，ノボ多糖，各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要な才リゴ糖である．ま
た、腸肉細閑の一つビフィズス菌の発育因子としてち知
られ、機能性食品素材としても有用な物質である． 従来、Ｎ−アセチルラクトサミンの製造は一化学合成も
しくは高エネルギー化合物ＬＩＤＰ−ガラクトースとＮ
−アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成
酵素により合成されることが知られているが、これらの
方法は，工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ
難点の多い製造法である。一方，簡便な方法として、ラ
クトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質として、ラ
クトバシラスビフィダス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｉｆｉｄｕｓｌ やスボロボロミセス シングラリ
ス（Ｓ ｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅ−ｓ 扛鳳虱トＢ）の
生菌体を用いた報告［Ｊ．Ｂｉ−ｏｌ．ｃｈｅｍ． ．
２１７．７９（１９５５） ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．
，４２，２３０７ （１９６４１ ］や、ラクトバシ
ラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダーゼを作
用させた報告［ Ｊ． Ｒｉｏｔ． Ｃｈｅｍ． ．
２０８， ２９９ （１９５４） ］などがある．又、
最近ではガラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基
質としてエシエリシア コリ（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）の生産するβ一ガラクトシダーゼを作用
させ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサミン生
産の報告［第ｌＯ回糖質シンポジウム講演要旨集，ｐｉ
ｏ７＋ｔｃ＋ａ７） ］ち示されている． 〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしながら、いずれの製造法もＮ−アセチルラクトサ
ミンの生成量が非常に少ない欠点がある．そこで本発明
者らは、前述の欠点を解決すべく種々検討した結果，ラ
クトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質とし、β−
ガラクトシダーゼを塩析剤存在下で作用させることによ
り、Ｎ−アセチルラクトサミンの生成量が増加すること
を見い出し，本発明を完成するに至った． 〈問題を解決するための手段） 本発明は、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基
質とし、β−ガラクトシダーゼを虐析剤存在下で作用さ
せ、ガラクトース転移反応により、Ｎ−アセチルラクト
サミンを効率よく製造する方法を提供することを目的と
する． 本発明に用いるβ−ガラクトシダーゼとし−ａｃｉｌｌ
ｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓを起源とするものが例示でき
、これら市販されている酵素を使用することができる． 本発明の塩析剤としては、硫酸アンモニウム、硫酸ナト
リウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム，クエン酸
ナトリウム，塩化ナトリウムが挙げられ、これらのうち
１種または２種以上を用いることができ、濃度としては
、５〜３０％が好ましい．反応に用いるラクトースとＮ
−アセチルグルコサミンの量は，モル比でｌ：１−１：
５とし、全基質濃度として２０〜７０％とするのが好ま
しい．また、本発明に用いるβ−ガラクトシダーゼは、
反応系において０． ５０／ｎ＋氾〜５０／ｍ Ｑとな
るように添加し、ＰＨ４〜９、温度５℃〜５０℃に保持
し，２時間〜５０時間作用させるのが好ましい。
Ｎ−アセチルラクトサミンの製造法に関するものである
． （従来の技術） Ｎ−アセチルラクトサミンは、血液型糖蛋白質の分解物
から最初に単離されたガラクトースとＮ−アセチルグル
コサミンがβ一ｌ．４結合したアミノ２糖で、人乳才リ
ゴ糖や，ノボ多糖，各種の糖蛋白質及び糖脂質の糖鎖中
に存在する生化学的に非常に重要な才リゴ糖である．ま
た、腸肉細閑の一つビフィズス菌の発育因子としてち知
られ、機能性食品素材としても有用な物質である． 従来、Ｎ−アセチルラクトサミンの製造は一化学合成も
しくは高エネルギー化合物ＬＩＤＰ−ガラクトースとＮ
−アセチルグルコサミンを基質として、ラクトース合成
酵素により合成されることが知られているが、これらの
方法は，工程が複雑でしかも高価となり工業的にはまだ
難点の多い製造法である。一方，簡便な方法として、ラ
クトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質として、ラ
クトバシラスビフィダス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
ｂｉｆｉｄｕｓｌ やスボロボロミセス シングラリ
ス（Ｓ ｏｒｏｂｏｌｏｍｙｃｅ−ｓ 扛鳳虱トＢ）の
生菌体を用いた報告［Ｊ．Ｂｉ−ｏｌ．ｃｈｅｍ． ．
２１７．７９（１９５５） ．Ｃａｎ．Ｊ．Ｃｈｅｍ．
，４２，２３０７ （１９６４１ ］や、ラクトバシ
ラス ビフィダスの生産するβ−ガラクトシダーゼを作
用させた報告［ Ｊ． Ｒｉｏｔ． Ｃｈｅｍ． ．
２０８， ２９９ （１９５４） ］などがある．又、
最近ではガラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基
質としてエシエリシア コリ（ Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉ
ａ ｃｏｌｉ）の生産するβ一ガラクトシダーゼを作用
させ、脱水縮合反応によるＮ−アセチルラクトサミン生
産の報告［第ｌＯ回糖質シンポジウム講演要旨集，ｐｉ
ｏ７＋ｔｃ＋ａ７） ］ち示されている． 〈発明が解決しようとする問題点〉 しかしながら、いずれの製造法もＮ−アセチルラクトサ
ミンの生成量が非常に少ない欠点がある．そこで本発明
者らは、前述の欠点を解決すべく種々検討した結果，ラ
クトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質とし、β−
ガラクトシダーゼを塩析剤存在下で作用させることによ
り、Ｎ−アセチルラクトサミンの生成量が増加すること
を見い出し，本発明を完成するに至った． 〈問題を解決するための手段） 本発明は、ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基
質とし、β−ガラクトシダーゼを虐析剤存在下で作用さ
せ、ガラクトース転移反応により、Ｎ−アセチルラクト
サミンを効率よく製造する方法を提供することを目的と
する． 本発明に用いるβ−ガラクトシダーゼとし−ａｃｉｌｌ
ｕｓ ｃｉｒｃｕｌａｎｓを起源とするものが例示でき
、これら市販されている酵素を使用することができる． 本発明の塩析剤としては、硫酸アンモニウム、硫酸ナト
リウム、リン酸カリウム、硫酸マグネシウム，クエン酸
ナトリウム，塩化ナトリウムが挙げられ、これらのうち
１種または２種以上を用いることができ、濃度としては
、５〜３０％が好ましい．反応に用いるラクトースとＮ
−アセチルグルコサミンの量は，モル比でｌ：１−１：
５とし、全基質濃度として２０〜７０％とするのが好ま
しい．また、本発明に用いるβ−ガラクトシダーゼは、
反応系において０． ５０／ｎ＋氾〜５０／ｍ Ｑとな
るように添加し、ＰＨ４〜９、温度５℃〜５０℃に保持
し，２時間〜５０時間作用させるのが好ましい。
上記のようにして得られた反応液は、加熱により反応を
停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要に
応じて活性炭カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、高
速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精製
することができる． 〈実施例〉 以下に、本発明の実、施例について、さらに具体的に説
明するが、かかる説明によって本発明が何ら限定されな
いことは勿論である．２０％硫酸アンモニウムを含む０
．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０１ にラクトース０．
９ｇとＮ−アセチルグルコサミンｌ．ｌｇ （モル比１
：２）を溶解した５１１Ｒの溶液に、市販β−ガラクト
シダーゼ（ケイアイ化成＠：ラクターゼＳ）を１２Ｕ添
加し、３０℃で３６時間反応させた．次に反応液は、５
分間の煮沸により反応を停止させ、Ｎ−アセチルラクト
サミンの生成量を高速液体クロマトグラフィーにより測
定した．本反応により、１１０ａ＋ｇのＮ−アセチルラ
クトサミンが製造された． （比較例〉 本発明による実施例と同様の反応を硫酸アンモニウムを
含まない系で行い、Ｎ−アセチルラクトサミンの生成量
の変化を高速液体クロマトグラフィーにより測定し比較
した．その測定結果は図に示したとおりで、Ｎ−アセチ
ルラクトサミンの生成量が、約１．５倍になっているこ
とがわかる． β−ガラクトシダーゼの酵素活性の測定１０ｍ ＭのＯ
ＮＰ−Ｇａｌ （才ルトーニトロフェニルガラクトシド
）溶液０．２ｍｆｆと０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
） ０．７ｇ＋．ｅを混合し、適当濃度に希釈した酵素
液０．１ｏｆｆを加え、３０゜Ｃで反応を行った．
ｌ Ｍ Ｎ ａｇｃ Ｏｓ２ｆｆＩ１２を加え、反応停
止後、才ルトーニトロフェノールの吸収である４２０ｎ
ｍの吸光度を測定した。酵素活性ＩＵは、１分間にｌｕ
ｎｏｌｅのオルトーニト口フェノールを遊離する酵素量
と定義した．Ｎ−アセチルラクトサミンの分析 実施例で得られた反応液は、次の高速液体クロマトグラ
フィーの条件で測定した．カラム： ＹＭＣ−Ｐａｃ
ｋ ＰＡ−０３ （４．６ ｘ ２５０ｍｓ＋１移動層
： アセトニトリル：水＝８０：２０流 速： ０．
８ｍｆｆ ／ ｎ＋ｉｎ．温 度：２５℃ 検 出： Ｕ Ｖ ｍｌｌｌａｍ 試 料： ｌＯμ １
停止させ、生成したＮ−アセチルラクトサミンを必要に
応じて活性炭カラムクロマトグラフィー、ゲル濾過、高
速液体クロマトグラフィー等の手段を組み合わせて精製
することができる． 〈実施例〉 以下に、本発明の実、施例について、さらに具体的に説
明するが、かかる説明によって本発明が何ら限定されな
いことは勿論である．２０％硫酸アンモニウムを含む０
．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７．０１ にラクトース０．
９ｇとＮ−アセチルグルコサミンｌ．ｌｇ （モル比１
：２）を溶解した５１１Ｒの溶液に、市販β−ガラクト
シダーゼ（ケイアイ化成＠：ラクターゼＳ）を１２Ｕ添
加し、３０℃で３６時間反応させた．次に反応液は、５
分間の煮沸により反応を停止させ、Ｎ−アセチルラクト
サミンの生成量を高速液体クロマトグラフィーにより測
定した．本反応により、１１０ａ＋ｇのＮ−アセチルラ
クトサミンが製造された． （比較例〉 本発明による実施例と同様の反応を硫酸アンモニウムを
含まない系で行い、Ｎ−アセチルラクトサミンの生成量
の変化を高速液体クロマトグラフィーにより測定し比較
した．その測定結果は図に示したとおりで、Ｎ−アセチ
ルラクトサミンの生成量が、約１．５倍になっているこ
とがわかる． β−ガラクトシダーゼの酵素活性の測定１０ｍ ＭのＯ
ＮＰ−Ｇａｌ （才ルトーニトロフェニルガラクトシド
）溶液０．２ｍｆｆと０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ７
） ０．７ｇ＋．ｅを混合し、適当濃度に希釈した酵素
液０．１ｏｆｆを加え、３０゜Ｃで反応を行った．
ｌ Ｍ Ｎ ａｇｃ Ｏｓ２ｆｆＩ１２を加え、反応停
止後、才ルトーニトロフェノールの吸収である４２０ｎ
ｍの吸光度を測定した。酵素活性ＩＵは、１分間にｌｕ
ｎｏｌｅのオルトーニト口フェノールを遊離する酵素量
と定義した．Ｎ−アセチルラクトサミンの分析 実施例で得られた反応液は、次の高速液体クロマトグラ
フィーの条件で測定した．カラム： ＹＭＣ−Ｐａｃ
ｋ ＰＡ−０３ （４．６ ｘ ２５０ｍｓ＋１移動層
： アセトニトリル：水＝８０：２０流 速： ０．
８ｍｆｆ ／ ｎ＋ｉｎ．温 度：２５℃ 検 出： Ｕ Ｖ ｍｌｌｌａｍ 試 料： ｌＯμ １
図面は本発明による塩析剤の添加効果を示したものであ
る． 特許
る． 特許
Claims (3)
- （１）ラクトースとＮ−アセチルグルコサミンを基質と
し、β−ガラクトシダーゼを塩析剤存在下で作用させる
ことを特徴とするＮ−アセチルラクトサミンの製造方法
。 - （２）塩析剤が硫酸アンモニウム、硫酸ナトリウム、リ
ン酸カリウム、硫酸マグネシウム、クエン酸ナトリウム
、塩化ナトリウムのうち、１種又は２種以上を用いる、
請求項１記載のＮ−アセチルラクトサミンの製造方法。 - （３）塩析剤の濃度が、５〜３０％である請求項１記載
のＮ−アセチルラクトサミンの製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491989A JP2819313B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP18491989A JP2819313B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0349693A true JPH0349693A (ja) | 1991-03-04 |
| JP2819313B2 JP2819313B2 (ja) | 1998-10-30 |
Family
ID=16161629
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP18491989A Expired - Fee Related JP2819313B2 (ja) | 1989-07-18 | 1989-07-18 | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2819313B2 (ja) |
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001292791A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2001292792A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルグルコサミンの回収方法 |
| JP2006223268A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Yakult Honsha Co Ltd | ガラクトシル２糖類の製造法 |
| US7883874B2 (en) | 2003-06-30 | 2011-02-08 | Clasado Inc. | Galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| US8030049B2 (en) | 2006-01-31 | 2011-10-04 | Clasado Inc. | Galactosidase with α-galactosyltransferase activity |
| US8058047B2 (en) | 2005-12-20 | 2011-11-15 | Clasado, Inc. | α-galactosidase with transgalactosylating activity |
| US8168414B2 (en) | 2006-03-28 | 2012-05-01 | Clasado Inc. | Beta-galactosidase with transgalactosylating activity |
-
1989
- 1989-07-18 JP JP18491989A patent/JP2819313B2/ja not_active Expired - Fee Related
Cited By (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2001292791A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 |
| JP2001292792A (ja) * | 2000-04-13 | 2001-10-23 | Seikagaku Kogyo Co Ltd | Ｎ−アセチルグルコサミンの回収方法 |
| US7883874B2 (en) | 2003-06-30 | 2011-02-08 | Clasado Inc. | Galactooligosaccharide composition and the preparation thereof |
| JP2006223268A (ja) * | 2005-02-21 | 2006-08-31 | Yakult Honsha Co Ltd | ガラクトシル２糖類の製造法 |
| US8058047B2 (en) | 2005-12-20 | 2011-11-15 | Clasado, Inc. | α-galactosidase with transgalactosylating activity |
| US8030049B2 (en) | 2006-01-31 | 2011-10-04 | Clasado Inc. | Galactosidase with α-galactosyltransferase activity |
| US8168414B2 (en) | 2006-03-28 | 2012-05-01 | Clasado Inc. | Beta-galactosidase with transgalactosylating activity |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2819313B2 (ja) | 1998-10-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP3041945B1 (en) | Production of galacto-oligosaccharides | |
| Akiyama et al. | Production of galactooligosaccharides from lactose using a β-glucosidase from Thermus sp. Z-1 | |
| JPH0349693A (ja) | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造方法 | |
| JPH0349692A (ja) | Ｎ―アセチルラクトサミンの製造法 | |
| JPH08289786A (ja) | グルコサミン−６−ホスフェートデアミナーゼ | |
| JPH04293494A (ja) | フラクトース含有オリゴ糖または配糖体の製造方法 | |
| JPH06253878A (ja) | ラクト−Ｎ−ビオースＩ及び２−アセトアミド−２−デオキシ−３−Ｏ−β−Ｄ−ガラクトピラノシル−Ｄ−ガラクトピラノースの製造法 | |
| Wolfe et al. | Glucosamine degradation by Escherichia coli. II. The isomeric conversion of glucosamine 6-PO4 to fructose 6-PO4 and ammonia | |
| JP3831075B2 (ja) | β−ガラクトシダーゼの改質方法 | |
| JP2001112496A (ja) | セロオリゴ糖の製造法 | |
| JP2970932B2 (ja) | 新規耐熱性β―ガラクトシル基転移酵素、その製造法及びその用途 | |
| KR960003643B1 (ko) | 갈락토올리고당의 제조방법 | |
| JP2001245690A (ja) | グリコシドまたはオリゴ糖の製造方法 | |
| JP2860489B2 (ja) | 食品素材、ビフイズス菌増殖促進剤およびそれらの製造方法 | |
| JP2927845B2 (ja) | オリゴ糖組成物及びその製造法 | |
| JP2001292791A (ja) | Ｎ−アセチルラクトサミンの製造方法 | |
| JP4109343B2 (ja) | β−１，４−ガラクトシル−マルトースの製造方法 | |
| JPS58190388A (ja) | ビフイドバクテリウム菌の増殖促進物質の製造法 | |
| Kelstrup et al. | Enzyme Reactions in Dental Plaque Matrix Modification of Velocity by the Presence of Polymers | |
| JP3630378B2 (ja) | ガラクトシルグリセロール類の製造方法 | |
| JPH01153693A (ja) | 大豆オリゴ糖の改質法 | |
| EP4617370A1 (en) | N-acetyllactosamine production method and n-acetyllactosamine-containing composition | |
| JPH0354559B2 (ja) | ||
| Copa-Patino et al. | Polarimetry and 13C nmr show that the hydrolyses of β-d-glucopyranosyl fluoride by β (1→ 3)-glucanases from Phanerochaete chrysosporium and Sporotrichum dimorphosporum have opposite stereochemistries | |
| JPS61289856A (ja) | ガラクトオリゴ糖を含む甘味料の製造法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| R250 | Receipt of annual fees |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: R250 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20070828 Year of fee payment: 9 |
|
| FPAY | Renewal fee payment (event date is renewal date of database) |
Free format text: PAYMENT UNTIL: 20080828 Year of fee payment: 10 |
|
| LAPS | Cancellation because of no payment of annual fees |