JPH0430834B2 - - Google Patents
Info
- Publication number
- JPH0430834B2 JPH0430834B2 JP62096072A JP9607287A JPH0430834B2 JP H0430834 B2 JPH0430834 B2 JP H0430834B2 JP 62096072 A JP62096072 A JP 62096072A JP 9607287 A JP9607287 A JP 9607287A JP H0430834 B2 JPH0430834 B2 JP H0430834B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- gpo
- solution
- added
- freeze
- present
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
Links
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明は安定化されたグリセロリン酸オキシダ
ーゼ組成物に関するものである。 近年、Ｌ−α−グリセロリン酸を酸化してジヒ
ドロキシアセトンリン酸と過酸化水素を生成する
Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼ（以下
GPOと略称する）は診断用試薬として使用され、
その重要性がますます増加してきた。ところが
GPOは不安定であり、特にGPOを水溶液にした
場合、該水溶液中のGPO濃度が１mg／ml以下の
低濃度では極端に不安定である。さらにGPOを
含有する組成物は凍結乾燥に極めて敏感で弱く、
GPO活性は凍結乾燥の間、あるいは凍結乾燥後、
相当低下する。したがつて、低濃度のGPO水溶
液では長時間に亘る品質の維持が困難である。こ
のような理由からGPOを用いる利点が失われる
場合が多い。 本発明者等はこのような欠点を有しない安定な
GPO含有組成物を得るべく、種々鋭意検討した
結果、安定化剤として、フラビンアデニンジヌク
レオチドを使用すると所期の目的を達成すること
を見出し、本発明に到達した。すなわち本発明は
フラビンアデニンジヌクレオチドとGPOから本
質的になる凍結乾燥物であることを特徴とする安
定化されたグリセロリン酸オキシダーゼ組成物で
ある。 本発明では、上記安定剤を使用することによ
り、凍結乾燥によつてもGPOの活性低下が見ら
れない。さらに、安定化効果は長期間に亘つて、
持続することができる。 本発明の凍結乾燥物はまず緩衝液にGPOとフ
ラビンアデニンジヌクレオチドを含有させた水性
組成物を得る。緩衝剤としては通常のものが使用
され、該水性組成物のPHを通常５〜10とするもの
が好ましい。 前記の水性組成物には必要により、他の成分を
添加してもよい。 前記の水性組成物において、フラビンアデニン
ジヌクレオチドの含有量は１×10-6〜１×10-2M
である。 水性組成物を調整する場合、緩衝液への各物質
の添加順序は特に制限されない。 本発明の凍結乾燥物は通常の方法に従い、前記
水性組成物を凍結乾燥して得る。 本発明では凍結乾燥状態（凍結乾燥物）である
場合に、GPOの安定性は著しく高く、長期間に
亘つて安定性が維持される。 次に本発明を実施例により説明する。 なおGPOの酵素活性の測定は次の方法に従つ
た。0.2Mトリス塩酸緩衝液（PH8.0）0.2ml、パー
オキシダーゼ（340単位／ml）0.1ml、４−アミノ
アンチピリン（0.3％水溶液）0.1ml、フエノール
（0.2％水溶液）0.1ml、グリセロール−３−リン
酸（0.5MPH8.0）0.2ml、トリトンＸ−100（0.5％
水溶液）0.1mlおよび水0.2mlを混合し、37℃で５
分間加温した後、20μの酵素溶解液を加え、37
℃で10分間加温した。 次いで１％ラウリルイベンゼンスルホン酸ソー
ダ水溶液0.5mlを加えて反応を停止させ、さらに
水1.5mlを加えて500nｍの吸光度を測定した。 比活性（Ｕ／mg）＝ΔA／10／13.3×１／２ ×0.03／0.02×１／Ｘ Ｘ：酵素溶解液中の酵素濃度 ΔA：AS−AC AS：酵素溶解液を用いたときの吸光度 AC：酵素溶解液に代えて水を用いたときの吸光
度 実施例 １ ペデイオコツカス属由来のGPOを0.05Mリン酸
緩衝液（PH7.0）に溶解した。溶液中のGPO濃度
は0.5mg／mlであつた。下記表の添加物を該溶液
に加え、凍結乾燥し、安定性を検討した。その結
果を第１表に示す。溶液調製直後の酵素活性を
100％とした。
ーゼ組成物に関するものである。 近年、Ｌ−α−グリセロリン酸を酸化してジヒ
ドロキシアセトンリン酸と過酸化水素を生成する
Ｌ−α−グリセロリン酸オキシダーゼ（以下
GPOと略称する）は診断用試薬として使用され、
その重要性がますます増加してきた。ところが
GPOは不安定であり、特にGPOを水溶液にした
場合、該水溶液中のGPO濃度が１mg／ml以下の
低濃度では極端に不安定である。さらにGPOを
含有する組成物は凍結乾燥に極めて敏感で弱く、
GPO活性は凍結乾燥の間、あるいは凍結乾燥後、
相当低下する。したがつて、低濃度のGPO水溶
液では長時間に亘る品質の維持が困難である。こ
のような理由からGPOを用いる利点が失われる
場合が多い。 本発明者等はこのような欠点を有しない安定な
GPO含有組成物を得るべく、種々鋭意検討した
結果、安定化剤として、フラビンアデニンジヌク
レオチドを使用すると所期の目的を達成すること
を見出し、本発明に到達した。すなわち本発明は
フラビンアデニンジヌクレオチドとGPOから本
質的になる凍結乾燥物であることを特徴とする安
定化されたグリセロリン酸オキシダーゼ組成物で
ある。 本発明では、上記安定剤を使用することによ
り、凍結乾燥によつてもGPOの活性低下が見ら
れない。さらに、安定化効果は長期間に亘つて、
持続することができる。 本発明の凍結乾燥物はまず緩衝液にGPOとフ
ラビンアデニンジヌクレオチドを含有させた水性
組成物を得る。緩衝剤としては通常のものが使用
され、該水性組成物のPHを通常５〜10とするもの
が好ましい。 前記の水性組成物には必要により、他の成分を
添加してもよい。 前記の水性組成物において、フラビンアデニン
ジヌクレオチドの含有量は１×10-6〜１×10-2M
である。 水性組成物を調整する場合、緩衝液への各物質
の添加順序は特に制限されない。 本発明の凍結乾燥物は通常の方法に従い、前記
水性組成物を凍結乾燥して得る。 本発明では凍結乾燥状態（凍結乾燥物）である
場合に、GPOの安定性は著しく高く、長期間に
亘つて安定性が維持される。 次に本発明を実施例により説明する。 なおGPOの酵素活性の測定は次の方法に従つ
た。0.2Mトリス塩酸緩衝液（PH8.0）0.2ml、パー
オキシダーゼ（340単位／ml）0.1ml、４−アミノ
アンチピリン（0.3％水溶液）0.1ml、フエノール
（0.2％水溶液）0.1ml、グリセロール−３−リン
酸（0.5MPH8.0）0.2ml、トリトンＸ−100（0.5％
水溶液）0.1mlおよび水0.2mlを混合し、37℃で５
分間加温した後、20μの酵素溶解液を加え、37
℃で10分間加温した。 次いで１％ラウリルイベンゼンスルホン酸ソー
ダ水溶液0.5mlを加えて反応を停止させ、さらに
水1.5mlを加えて500nｍの吸光度を測定した。 比活性（Ｕ／mg）＝ΔA／10／13.3×１／２ ×0.03／0.02×１／Ｘ Ｘ：酵素溶解液中の酵素濃度 ΔA：AS−AC AS：酵素溶解液を用いたときの吸光度 AC：酵素溶解液に代えて水を用いたときの吸光
度 実施例 １ ペデイオコツカス属由来のGPOを0.05Mリン酸
緩衝液（PH7.0）に溶解した。溶液中のGPO濃度
は0.5mg／mlであつた。下記表の添加物を該溶液
に加え、凍結乾燥し、安定性を検討した。その結
果を第１表に示す。溶液調製直後の酵素活性を
100％とした。
【表】
【表】
上記表のごとく、フラビン含有物質を添加して
凍結乾燥した場合、無添加に比較して著しく失活
が少ない。 実施例 ２ 下記表の添加物を加えたペデイオコツカス属由
来のGPO溶液を凍結乾燥した凍結乾燥品の、40
℃、１週間での安定性を検討した。その結果を第
２表に示す。凍結乾燥直後の酵素活性を100％と
した。
凍結乾燥した場合、無添加に比較して著しく失活
が少ない。 実施例 ２ 下記表の添加物を加えたペデイオコツカス属由
来のGPO溶液を凍結乾燥した凍結乾燥品の、40
℃、１週間での安定性を検討した。その結果を第
２表に示す。凍結乾燥直後の酵素活性を100％と
した。
【表】
【表】
フラビン含有物質を添加した凍結乾燥品は無添
加に比べ著しく安定化された。
加に比べ著しく安定化された。
Claims (1)
- １ フラビンアデニンジヌクレオチドとグリセロ
リン酸オキシダーゼから本質的になる凍結乾燥物
であることを特徴とする安定化されたグリセロリ
ン酸オキシダーゼ組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9607287A JPS63263082A (ja) | 1987-04-17 | 1987-04-17 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP9607287A JPS63263082A (ja) | 1987-04-17 | 1987-04-17 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ |
Related Parent Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP14588180A Division JPS5768788A (en) | 1980-10-17 | 1980-10-17 | Stablized glycerophosphate oxidase composition |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS63263082A JPS63263082A (ja) | 1988-10-31 |
| JPH0430834B2 true JPH0430834B2 (ja) | 1992-05-22 |
Family
ID=14155205
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP9607287A Granted JPS63263082A (ja) | 1987-04-17 | 1987-04-17 | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS63263082A (ja) |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS5768788A (en) * | 1980-10-17 | 1982-04-27 | Toyobo Co Ltd | Stablized glycerophosphate oxidase composition |
-
1987
- 1987-04-17 JP JP9607287A patent/JPS63263082A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS63263082A (ja) | 1988-10-31 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP3219181B2 (ja) | コレステロールオキシダーゼの安定化法 | |
| DE69128196T3 (de) | Enzymstabilisierung | |
| EP0244315B1 (fr) | Procédé de préparation d'une solution pharmaceutique aqueuse d'un principe actif constitué par un acide organique | |
| JPS6123995B2 (ja) | ||
| Raiha et al. | Effect of ethanol oxidation on levels of pyridine nucleotides in liver and yeast. | |
| Foster | Preparation and properties of a soluble trypsin-dextran conjugate | |
| Heredia et al. | Nitrate reductase and related enzymes in Escherichia coli | |
| JPH0430834B2 (ja) | ||
| JPS60156386A (ja) | 安定化されたグリセロリン酸オキシダ−ゼ組成物 | |
| Sprengers et al. | Mitochondrial and cytosolic hexokinase from rat brain: one and the same enzyme? | |
| Schnaitman et al. | Localization of oligomycin-sensitive ADP-ATP exchange activity in rat liver mitochondria | |
| Koritz | Inhibition of corticoid production in rat-adrenal homogenates by diphosphopyridine nucleotide and its reversal by ascorbate and other substances | |
| Hidaka et al. | Occurrence of a serotonin sulphotransferase in the brain | |
| JPS6112675B2 (ja) | ||
| JPS62228272A (ja) | 安定なペルオキシダ−ゼ製剤 | |
| Spitsberg et al. | Isolation and comparative studies of mitochondrial F1-ATPase from Morris hepatoma and rat liver | |
| Chung | Nicotinamide adenine dinucleotide kinase from Azotobacter vinelandii cells. Reversible inactivation of the enzyme | |
| JPH09140378A (ja) | Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物およびグルコース測定用試薬組成物 | |
| Gahr et al. | Glucose‐6‐Phosphate Dehydrogenase (G‐6‐PD) Hamburg, a New Variant with Chronic Nonspherocytic Haemolytic Anaemia | |
| Hommes et al. | The development of DT-diaphorase in rat liver and its induction by benzo (a) pyrene | |
| Palmieri et al. | Effects of proteins and polynucleotides on the activity of various hydrolases | |
| Halkerston et al. | Effect of lytic enzymes upon the responsivity of rat adrenals in vitro. I. Effect of trypsin upon the steroidogenic action of reduced triphosphopyridine nucleotide | |
| EP0065800B1 (en) | Enzyme solutions and method for the preparation thereof | |
| JPH0231954B2 (ja) | Kosonoanteikazaioyobikosohozonhoho | |
| Hochman et al. | Brain mitochondrial hexokinase: solubilization by adenine nucleotides and in coupled respiration |