JPH09140378A - Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物およびグルコース測定用試薬組成物 - Google Patents
Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物およびグルコース測定用試薬組成物Info
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- JPH09140378A JPH09140378A JP7304331A JP30433195A JPH09140378A JP H09140378 A JPH09140378 A JP H09140378A JP 7304331 A JP7304331 A JP 7304331A JP 30433195 A JP30433195 A JP 30433195A JP H09140378 A JPH09140378 A JP H09140378A
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Abstract
(57)【要約】
【目的】ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼを安
定化させる。 【構成】（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、
および（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンか
らなる群から選択されたアミノ酸を含有するＰＱＱ依存
性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物ならびに、さらに
電子受容体および緩衝液を含有するグルコース測定用試
薬組成物。
定化させる。 【構成】（１）カルシウムイオンまたはカルシウム塩、
および（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリジンか
らなる群から選択されたアミノ酸を含有するＰＱＱ依存
性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物ならびに、さらに
電子受容体および緩衝液を含有するグルコース測定用試
薬組成物。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は安定化されたＰＱＱ依存
性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物および該組成物を
使用するグルコース測定用試薬組成物に関するものであ
る。
性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物および該組成物を
使用するグルコース測定用試薬組成物に関するものであ
る。
【０００２】
【従来の技術】血清、尿などの検体中のグルコース測定
法としては、従来から化学法と酵素法が存在するが、一
般的に特異性、安全性の面で酵素法が優れているとされ
ている。酵素法としては、グルコースオキシダーゼ・ペ
ルオキシダーゼ系、ヘキソキナーゼ・グルコース−６−
リン酸デヒドロゲナーゼ系が主に使用されているが、両
測定系とも、複数の酵素を用いるため簡便な反応系では
ない。更に前者（グルコースオキシダーゼ・ペルオキシ
ダーゼ系）は、過酸化水素が共存物質の影響を受けやす
く、溶存酸素が律速のときには使用するのが困難にな
る。後者（ヘキソキナーゼ・グルコース−６−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ系）では補酵素としてＮＡＤ + が必要で
あり、更に平衡反応が含まれているため、微量のグルコ
ースを測定しにくい欠点が存在する。
法としては、従来から化学法と酵素法が存在するが、一
般的に特異性、安全性の面で酵素法が優れているとされ
ている。酵素法としては、グルコースオキシダーゼ・ペ
ルオキシダーゼ系、ヘキソキナーゼ・グルコース−６−
リン酸デヒドロゲナーゼ系が主に使用されているが、両
測定系とも、複数の酵素を用いるため簡便な反応系では
ない。更に前者（グルコースオキシダーゼ・ペルオキシ
ダーゼ系）は、過酸化水素が共存物質の影響を受けやす
く、溶存酸素が律速のときには使用するのが困難にな
る。後者（ヘキソキナーゼ・グルコース−６−リン酸デ
ヒドロゲナーゼ系）では補酵素としてＮＡＤ + が必要で
あり、更に平衡反応が含まれているため、微量のグルコ
ースを測定しにくい欠点が存在する。
【０００３】補酵素として、ＰＱＱを必要とするＰＱＱ
依存性グルコースデヒドロゲナーゼをグルコース測定系
に使用することは、上記他の酵素を使用する問題点を解
決する一つの方法である。特にグルコースを電気センサ
ーを使用して測定することを考えた場合、グルコースオ
キシダーゼを用いる系では、酸素濃度の影響を受ける
が、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼでは影響
を受けない利点を有する。何故なら、該酵素は下記の反
応を触媒し、グルコースより得た電子を電子受容体に受
け渡す反応を触媒する酵素であるから。
依存性グルコースデヒドロゲナーゼをグルコース測定系
に使用することは、上記他の酵素を使用する問題点を解
決する一つの方法である。特にグルコースを電気センサ
ーを使用して測定することを考えた場合、グルコースオ
キシダーゼを用いる系では、酸素濃度の影響を受ける
が、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼでは影響
を受けない利点を有する。何故なら、該酵素は下記の反
応を触媒し、グルコースより得た電子を電子受容体に受
け渡す反応を触媒する酵素であるから。
【０００４】グルコース ＋ 電子受容体 → グルコ
ノラクトン ＋ 還元型電子受容体
ノラクトン ＋ 還元型電子受容体
【０００５】ここで、電子受容体としては、フェリシア
ニド、電子キャリアと２，６−ジクロロフェノールイン
ドフェノールの組み合わせ、電子キャリアとテトラゾリ
ウム塩の組み合わせなどが挙げられる。
ニド、電子キャリアと２，６−ジクロロフェノールイン
ドフェノールの組み合わせ、電子キャリアとテトラゾリ
ウム塩の組み合わせなどが挙げられる。
【０００６】本発明に使用するＰＱＱ依存性グルコース
デヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを必要と
する酵素であり、例えばアシネトバクター・カルコアセ
ティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩＢ１１
５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス(Acine
tobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、ＩＦＯ１
３００６などから生産される。
デヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを必要と
する酵素であり、例えばアシネトバクター・カルコアセ
ティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩＢ１１
５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス(Acine
tobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、ＩＦＯ１
３００６などから生産される。
【０００７】該酵素を利用するグルコースの定量は、た
とえば Methods in Enzymology, Vol.89 (1982) p20(Ac
ademic Press,Inc) などに記載されている。検体中のグ
ルコースに電子受容体の存在下にＰＱＱ依存性グルコー
スデヒドロゲナーゼを作用させ、生成する還元型電子受
容体を測定する方法である。
とえば Methods in Enzymology, Vol.89 (1982) p20(Ac
ademic Press,Inc) などに記載されている。検体中のグ
ルコースに電子受容体の存在下にＰＱＱ依存性グルコー
スデヒドロゲナーゼを作用させ、生成する還元型電子受
容体を測定する方法である。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】このようなＰＱＱ依存
性グルコースデヒドロゲナーゼの有する問題点は、グル
コースオキシダーゼやヘキソキナーゼと比較すると、そ
の安定性にあり、精製した酵素標品を臨床検査薬に添加
しても、酵素の失活が著しく、試薬の劣化が激しいため
保存が困難であると同時に測定値への影響も大きく実用
上問題となっていた。また該酵素の安定化剤としては、
ＰＱＱを添加することが効果があるとされている（Arc
h. Biochem. Biophys., 218, 623-625 (1982)) が、Ｐ
ＱＱは非常に高価であり、産業上、その添加は難しい。
性グルコースデヒドロゲナーゼの有する問題点は、グル
コースオキシダーゼやヘキソキナーゼと比較すると、そ
の安定性にあり、精製した酵素標品を臨床検査薬に添加
しても、酵素の失活が著しく、試薬の劣化が激しいため
保存が困難であると同時に測定値への影響も大きく実用
上問題となっていた。また該酵素の安定化剤としては、
ＰＱＱを添加することが効果があるとされている（Arc
h. Biochem. Biophys., 218, 623-625 (1982)) が、Ｐ
ＱＱは非常に高価であり、産業上、その添加は難しい。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者等はＰＱＱ依存
性グルコースデヒドロゲナーゼの安定化剤について、種
々鋭意検討したところ、カルシウムイオンと特定のアミ
ノ酸を併用すると安定化効果が高いことを見いだし、本
発明に達した。
性グルコースデヒドロゲナーゼの安定化剤について、種
々鋭意検討したところ、カルシウムイオンと特定のアミ
ノ酸を併用すると安定化効果が高いことを見いだし、本
発明に達した。
【００１０】すなわち、本発明はカルシウムイオンまた
はカルシウム塩、およびグルタミン酸、グルタミンおよ
びリジンからなる群から選択されたアミノ酸を含有する
ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物であ
る。
はカルシウム塩、およびグルタミン酸、グルタミンおよ
びリジンからなる群から選択されたアミノ酸を含有する
ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物であ
る。
【００１１】また本発明は、ＰＱＱ依存性グルコースデ
ヒドロゲナーゼ、カルシウムイオンまたはカルシウム塩
およびグルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる
群から選択されたアミノ酸、さらに電子受容体および緩
衝液を含有するグルコース測定用試薬組成物である。
ヒドロゲナーゼ、カルシウムイオンまたはカルシウム塩
およびグルタミン酸、グルタミンおよびリジンからなる
群から選択されたアミノ酸、さらに電子受容体および緩
衝液を含有するグルコース測定用試薬組成物である。
【００１２】
【発明の実施態様】本発明において、ＰＱＱ依存性グル
コースデヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを
必要とする酵素であり、例えばアシネトバクター・カル
コアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩ
Ｂ１１５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス
(Acinetobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、Ｉ
ＦＯ１３００６などから生産される。
コースデヒドロゲナーゼとは、補酵素として、ＰＱＱを
必要とする酵素であり、例えばアシネトバクター・カル
コアセティカス（Acinetobacter calcoaceticus)ＮＣＩ
Ｂ１１５１７、アシネトバクター・カルコアセティカス
(Acinetobacter calcoaceticus) ＩＦＯ１２５５２、Ｉ
ＦＯ１３００６などから生産される。
【００１３】この酵素の１つとして、理化学的性質が、
例えば分子量：約５５，０００（ゲル濾過法）、Ｋｍ
値：７．９×１０-2Ｍ（Ｄ−グルコース）、至適ｐＨ：
ｐＨ６〜７、至適温度：３７℃、ｐＨ安定性：ｐＨ６〜
７、熱安定性：３０℃以下であるものが例示される。
例えば分子量：約５５，０００（ゲル濾過法）、Ｋｍ
値：７．９×１０-2Ｍ（Ｄ−グルコース）、至適ｐＨ：
ｐＨ６〜７、至適温度：３７℃、ｐＨ安定性：ｐＨ６〜
７、熱安定性：３０℃以下であるものが例示される。
【００１４】本発明では、上記酵素に（１）カルシウム
イオンまたはカルシウム塩、および（２）グルタミン
酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択された
アミノ酸を含有させる。本発明の酵素組成物は、これら
の安定化剤を含有するものであれば、水性組成物、凍結
乾燥物を問わない。
イオンまたはカルシウム塩、および（２）グルタミン
酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択された
アミノ酸を含有させる。本発明の酵素組成物は、これら
の安定化剤を含有するものであれば、水性組成物、凍結
乾燥物を問わない。
【００１５】カルシウムイオンの供給形態としては、塩
化カルシウム、酢酸カルシウム、クエン酸カルシウム等
の無機酸または有機酸のカルシウム塩を挙げることがで
きる。また、水性組成物において、カルシウムイオンの
含有量は、１×１０-4〜１×１０-2Ｍであることが好ま
しい。
化カルシウム、酢酸カルシウム、クエン酸カルシウム等
の無機酸または有機酸のカルシウム塩を挙げることがで
きる。また、水性組成物において、カルシウムイオンの
含有量は、１×１０-4〜１×１０-2Ｍであることが好ま
しい。
【００１６】グルタミン酸、グルタミンおよびリジンか
らなる群から選択されるアミノ酸は、１種または２種以
上であってもよい。前記の水性組成物において、グルタ
ミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択さ
れたアミノ酸の含有量は、０．０１〜０．２重量％であ
ることが好ましい。また前記の水性組成物に血清アルブ
ミンを添加する場合、その含有量は０．０５〜０．５重
量％であることが好ましい。
らなる群から選択されるアミノ酸は、１種または２種以
上であってもよい。前記の水性組成物において、グルタ
ミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択さ
れたアミノ酸の含有量は、０．０１〜０．２重量％であ
ることが好ましい。また前記の水性組成物に血清アルブ
ミンを添加する場合、その含有量は０．０５〜０．５重
量％であることが好ましい。
【００１７】本発明ではカルシウムイオンまたはカルシ
ウム塩のみを含有させた場合、安定性にわずかな効果が
見られるが、上記アミノ酸を含有させることにより、グ
ルコースデヒドロゲナーゼの安定性が２倍以上に上昇す
る。
ウム塩のみを含有させた場合、安定性にわずかな効果が
見られるが、上記アミノ酸を含有させることにより、グ
ルコースデヒドロゲナーゼの安定性が２倍以上に上昇す
る。
【００１８】緩衝剤としては、通常のものが使用され、
通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。
具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いら
れるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液は
すべて使用できる。
通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。
具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いら
れるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液は
すべて使用できる。
【００１９】前記の水性組成物には、必要により他の成
分、例えば界面活性剤、安定化剤、賦形剤などを添加し
ても良い。
分、例えば界面活性剤、安定化剤、賦形剤などを添加し
ても良い。
【００２０】水性組成物を調製する場合、緩衝液への各
安定剤の添加順序は、特に制限されない。本発明の凍結
乾燥物は、通常の方法に従い、前記水性組成物を凍結乾
燥して得る。
安定剤の添加順序は、特に制限されない。本発明の凍結
乾燥物は、通常の方法に従い、前記水性組成物を凍結乾
燥して得る。
【００２１】なお、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲ
ナーゼ活性の測定は、次の方法に従った。５０ｍＭ Ｐ
ＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．５ ２５．５ｍｌ、３．０ｍ
Ｍ ＰＭＳ ２．０ｍｌ、６．６ｍＭ ＮＴＢ １．０
ｍｌおよび１Ｍ グルコースを含む６．３％ Ｔｒｉｔ
ｏｎＸ−１００ ０．９ｍｌを混合する。この混合液を
３７℃で５分間インキュベートした後、酵素液を０．１
ｍｌ添加し、混和後、水を対照に３７℃に制御された分
光光度計で５７０ｎｍの吸光度変化を４〜５分間記録
し、その初期直線部分から１分間当たりの吸光度変化を
求める。１分間に１マイクロモルのグルコースを酸化す
る酵素量を１単位（Ｕ）とする。
ナーゼ活性の測定は、次の方法に従った。５０ｍＭ Ｐ
ＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ６．５ ２５．５ｍｌ、３．０ｍ
Ｍ ＰＭＳ ２．０ｍｌ、６．６ｍＭ ＮＴＢ １．０
ｍｌおよび１Ｍ グルコースを含む６．３％ Ｔｒｉｔ
ｏｎＸ−１００ ０．９ｍｌを混合する。この混合液を
３７℃で５分間インキュベートした後、酵素液を０．１
ｍｌ添加し、混和後、水を対照に３７℃に制御された分
光光度計で５７０ｎｍの吸光度変化を４〜５分間記録
し、その初期直線部分から１分間当たりの吸光度変化を
求める。１分間に１マイクロモルのグルコースを酸化す
る酵素量を１単位（Ｕ）とする。
【００２２】本発明のグルコース測定用試薬とは、ＰＱ
Ｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼとカルシウムまた
はカルシウム塩およびグルタミン酸、グルタミンおよび
リジンからなる群から選択されたアミノ酸、さらに電子
受容体および緩衝液を含有するものである。電子受容体
としては、フェリシアニド、電子キャリアと２，６−ジ
クロロフェノールインドフェノールの組み合わせ、電子
キャリアとテトラゾリウム塩の組み合わせなどが挙げら
れる。また、緩衝液としては、通常のものが使用され、
通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。
具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いら
れるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液は
すべて使用できる。
Ｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼとカルシウムまた
はカルシウム塩およびグルタミン酸、グルタミンおよび
リジンからなる群から選択されたアミノ酸、さらに電子
受容体および緩衝液を含有するものである。電子受容体
としては、フェリシアニド、電子キャリアと２，６−ジ
クロロフェノールインドフェノールの組み合わせ、電子
キャリアとテトラゾリウム塩の組み合わせなどが挙げら
れる。また、緩衝液としては、通常のものが使用され、
通常、組成物のｐＨを５〜１０とするものが好ましい。
具体的にはトリス塩酸、ホウ酸、グッド緩衝液が用いら
れるが、カルシウムと不溶性の塩を形成しない緩衝液は
すべて使用できる。
【００２３】本発明のグルコース測定用試薬を用いて、
検体中のグルコースを測定する方法としては、検体を本
発明のグルコース測定用試薬と接触させ、生成した還元
型電子受容体を比色法、電気センサー等で検出する方法
などがある。
検体中のグルコースを測定する方法としては、検体を本
発明のグルコース測定用試薬と接触させ、生成した還元
型電子受容体を比色法、電気センサー等で検出する方法
などがある。
【００２４】
【実施例】以下、実施例を挙げて本発明を具体的に示
す。実施例１ 下記成分を水道水６Ｌに溶解し、ｐＨを７．０に調整し
た後、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌して、
培地を得た。 グルコース ６０ｇ ポリペプトン １８０ｇ 酵母エキス ３０ｇ ＮａＣｌ ６０ｇ 上記培地の入った１０Ｌジャーファーメンターに、アシ
ネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter ca
lcoaceticus)ＮＣＩＢ１１５１７（National Collectio
n of Industrial Bacteria, Abadeen Scotland) を接種
し、３０℃で２０時間通気攪拌培養後、遠心分離して菌
体を取得した。得られた菌体をダイノミルにより破砕
し、ＰＥＩ処理、硫安分画、フェニルセファロースクロ
マトグラフィーおよびＤＥＡＥ−セファロースクロマト
グラフィーにより精製し、６００ＵのＰＱＱ−グルコー
スデヒドロゲナーゼを得た。
す。実施例１ 下記成分を水道水６Ｌに溶解し、ｐＨを７．０に調整し
た後、オートクレーブで１２１℃、２０分間滅菌して、
培地を得た。 グルコース ６０ｇ ポリペプトン １８０ｇ 酵母エキス ３０ｇ ＮａＣｌ ６０ｇ 上記培地の入った１０Ｌジャーファーメンターに、アシ
ネトバクター・カルコアセティカス（Acinetobacter ca
lcoaceticus)ＮＣＩＢ１１５１７（National Collectio
n of Industrial Bacteria, Abadeen Scotland) を接種
し、３０℃で２０時間通気攪拌培養後、遠心分離して菌
体を取得した。得られた菌体をダイノミルにより破砕
し、ＰＥＩ処理、硫安分画、フェニルセファロースクロ
マトグラフィーおよびＤＥＡＥ−セファロースクロマト
グラフィーにより精製し、６００ＵのＰＱＱ−グルコー
スデヒドロゲナーゼを得た。
【００２５】得られた酵素を下記化合物を含む５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中に保存して、３０
℃、４日間保存し、その残存活性を調べた。得られた結
果を表１に示す。
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中に保存して、３０
℃、４日間保存し、その残存活性を調べた。得られた結
果を表１に示す。
【００２６】
【表１】
【００２７】１ｍＭ ＣａＣｌ2 の存在下、リジン、グ
ルタミンまたはグルタミン酸の添加により、本発明の安
定性が著しく向上した。しかしながら、ＭｇＣｌ2 の共
存下では、これらのアミノ酸の安定化効果は小さかっ
た。
ルタミンまたはグルタミン酸の添加により、本発明の安
定性が著しく向上した。しかしながら、ＭｇＣｌ2 の共
存下では、これらのアミノ酸の安定化効果は小さかっ
た。
【００２８】実施例２ 実施例１で得た酵素組成物を下記添加物を含む５０ｍＭ
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中で３０℃、４日間保
存し、残存活性を測定した。実施例１で効果があったア
ミノ酸を組み合わせて添加すると、それぞれ単独で使用
するより、更に安定化効果があった。特に１ｍＭ Ｃａ
Ｃｌ2 共存下、グルタミン酸、グルタミンまたはリジン
を組み合わせて使用すると、高価なＰＱＱの使用で得ら
れる安定化効果とほぼ同等な効果が得られることが判明
した。その結果を表２に示す。
トリス塩酸緩衝液、ｐＨ７．５中で３０℃、４日間保
存し、残存活性を測定した。実施例１で効果があったア
ミノ酸を組み合わせて添加すると、それぞれ単独で使用
するより、更に安定化効果があった。特に１ｍＭ Ｃａ
Ｃｌ2 共存下、グルタミン酸、グルタミンまたはリジン
を組み合わせて使用すると、高価なＰＱＱの使用で得ら
れる安定化効果とほぼ同等な効果が得られることが判明
した。その結果を表２に示す。
【００２９】
【表２】
【００３０】実施例３ ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼを(1) ５０ｍ
Ｍ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５ (2) １０ｍＭ Ｃ
ａＣｌ2 および０．２％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ ＰＩ
ＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、(3) １０ｍＭ ＣａＣ
ｌ2 、０．０５％グルタミン、０．０５％ グルタミン
酸、０．０５％ リジン、０．２％およびＢＳＡを含む
５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液中、ｐＨ７．５で保存し
て、その熱安定性を比較した。その結果は図１に示す通
りであり、(3) の条件、すなわちＣａＣｌ2 共存下、グ
ルタミン、グルタミン酸、リジンにＢＳＡを組み合わせ
た緩衝液中で、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナー
ゼは最も安定であった。
Ｍ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５ (2) １０ｍＭ Ｃ
ａＣｌ2 および０．２％ ＢＳＡを含む５０ｍＭ ＰＩ
ＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５、(3) １０ｍＭ ＣａＣ
ｌ2 、０．０５％グルタミン、０．０５％ グルタミン
酸、０．０５％ リジン、０．２％およびＢＳＡを含む
５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液中、ｐＨ７．５で保存し
て、その熱安定性を比較した。その結果は図１に示す通
りであり、(3) の条件、すなわちＣａＣｌ2 共存下、グ
ルタミン、グルタミン酸、リジンにＢＳＡを組み合わせ
た緩衝液中で、ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナー
ゼは最も安定であった。
【００３１】実施例４ 実施例１のＰＱＱグルコースデヒドロゲナーゼ５Ｕ／ｍ
ｌ、１−メトキシ−５−フェナゾリウムメチルサルフェ
ート２９．５ｍＭ、ＭＴＴ０．６ｍＭ、ＮａＮ 3 ０．２
ｍＭ、１０ｍＭ ＣａＣｌ2 、０．０５％グルタミン、
０．０５％グルタミン酸、０．０５％リジン、０．２％
ＢＳＡ、５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５を混
合して、グルコース測定用試薬組成物とした。該試薬組
成物を使用して、血清中のグルコースを測定した。その
結果は、図２に示す通りである。グルコース濃度の従っ
て、吸光度が直線的に上昇した。
ｌ、１−メトキシ−５−フェナゾリウムメチルサルフェ
ート２９．５ｍＭ、ＭＴＴ０．６ｍＭ、ＮａＮ 3 ０．２
ｍＭ、１０ｍＭ ＣａＣｌ2 、０．０５％グルタミン、
０．０５％グルタミン酸、０．０５％リジン、０．２％
ＢＳＡ、５０ｍＭ ＰＩＰＥＳ緩衝液、ｐＨ７．５を混
合して、グルコース測定用試薬組成物とした。該試薬組
成物を使用して、血清中のグルコースを測定した。その
結果は、図２に示す通りである。グルコース濃度の従っ
て、吸光度が直線的に上昇した。
【００３２】
【発明の効果】本発明ではより安価で、安定性に優れた
ＰＱＱグルコースデヒドロゲナーゼ組成物を得ることが
できる。また、この組成物を使用して、グルコース測定
を溶存酸素の制約を受けずに、正確に測定することがで
きる。
ＰＱＱグルコースデヒドロゲナーゼ組成物を得ることが
できる。また、この組成物を使用して、グルコース測定
を溶存酸素の制約を受けずに、正確に測定することがで
きる。
【図１】ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼの熱
安定性を示すグラフである。
安定性を示すグラフである。
【図２】グルコースの検量線を示すグラフである。
フロントページの続き (72)発明者 川村 良久 福井県敦賀市東洋町10番24号 東洋紡績株 式会社敦賀バイオ研究所内
Claims (8)
- 【請求項１】 （１）カルシウムイオンまたはカルシウ
ム塩、および（２）グルタミン酸、グルタミンおよびリ
ジンからなる群から選択されたアミノ酸を含有するＰＱ
Ｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物。 - 【請求項２】 カルシウム塩が、塩化カルシウムまたは
酢酸カルシウムもしくはクエン酸カルシウムである請求
項１記載のＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組
成物。 - 【請求項３】 ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナー
ゼが、アセトバクター・カルコアセティカス由来のＰＱ
Ｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼである請求項１記
載のＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物。 - 【請求項４】 さらに血清アルブミンを含有する請求項
１記載のＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成
物。 - 【請求項５】 ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナー
ゼ、カルシウムイオンまたはカルシウム塩およびグルタ
ミン酸、グルタミンおよびリジンからなる群から選択さ
れたアミノ酸、さらに電子受容体および緩衝液を含有す
るグルコース測定用試薬組成物。 - 【請求項６】 カルシウム塩が、塩化カルシウムまたは
酢酸カルシウムもしくはクエン酸カルシウムである請求
項５記載のグルコース測定用試薬組成物。 - 【請求項７】 ＰＱＱ依存性グルコースデヒドロゲナー
ゼが、アセトバクター・カルコアセティカス由来のＰＱ
Ｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼである請求項５記
載のグルコース測定用試薬組成物。 - 【請求項８】 さらに血清アルブミンを含有する請求項
５記載のグルコース測定用試薬組成物。
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|---|---|---|---|
| JP30433195A JP3775518B2 (ja) | 1995-11-22 | 1995-11-22 | Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物およびグルコース測定用試薬組成物 |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30433195A JP3775518B2 (ja) | 1995-11-22 | 1995-11-22 | Ｐｑｑ依存性グルコースデヒドロゲナーゼ組成物およびグルコース測定用試薬組成物 |
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| JP3775518B2 JP3775518B2 (ja) | 2006-05-17 |
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Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
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| CN117535191A (zh) * | 2023-11-13 | 2024-02-09 | 湖南省蔬菜研究所 | 一株醋酸钙不动杆菌及其应用 |
-
1995
- 1995-11-22 JP JP30433195A patent/JP3775518B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (6)
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|---|---|---|---|---|
| US6773564B1 (en) * | 1998-09-29 | 2004-08-10 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Glucose sensor |
| US7005048B1 (en) | 1999-10-05 | 2006-02-28 | Matsushita Electric Industrial Co., Ltd. | Glucose sensor |
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