JPS6112675B2 - - Google Patents
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- JPS6112675B2 JPS6112675B2 JP10206680A JP10206680A JPS6112675B2 JP S6112675 B2 JPS6112675 B2 JP S6112675B2 JP 10206680 A JP10206680 A JP 10206680A JP 10206680 A JP10206680 A JP 10206680A JP S6112675 B2 JPS6112675 B2 JP S6112675B2
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Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Description
本発明はアスコルビン酸酸化酵素
〔EC1.1033〕（以下ASOと略する）の安定化法に
関する。 ASOは古くから種々の高等植物に所在するこ
とが知られており、特に該酵素含量の高いキウリ
やカボチヤ等のウリ科植物の果実皮を給源にして
の研究が盛んに行われ、これ迄、ASOの性質に
関して詳細に検討され、報告されている。近年、
その精製品は臨床検査分野において、アスコルビ
ン酸の定量に、あるいは検体中のアスコルビン酸
が測定系に影響を与える場合に、かかる系に
ASOを供存せしめ、アスコルビン酸を酸化分解
して、その防害を排除する手法が一般化されてい
る。しかしながらASOは乾燥した製剤状態にお
いて不安定であることから、該酵素の安定な市販
製剤の開発が強く望まれている。 本発明者等はかかる難点を解決し、充分に貯蔵
安定である安定化ASO製剤を得るべく種々検討
を行つた。その結果、アルギニン、リジン、ヒス
チジンおよびホウ酸塩から選ばれた１種もしくは
２種以上の化合物をASO製剤中に含有せしめる
ことにより、著しくは安定性が向上することを見
出し、本発明を完成するに到つた。すなわち、本
発明はASO製剤にアルギニン、リジン、ヒスチ
ジンおよびホウ酸塩からなる群から選ばれた１種
もしくは２種以上の化合物を含有させることを特
徴とするASOの安定化法である。 本発明におけるASO製剤とはキウリあるいは
カボチヤなどから分離され、乾燥された固体状の
ASOを意味する。このASO製剤は高度に精製さ
れたものに限定されない。 本発明の安定化剤はアルギニン、リジン、ヒス
チジンおよびホウ酸塩からなる群から選ばれた１
種もしくは２種以上の化合物であり、ホウ酸塩は
ホウ酸のナトリウム、カリウムなどのアルカリ金
属塩などを意味する。 安定化剤の配合割合はASO製剤100重量部当り
10〜1000重量部である。 安定化剤を含有するASO製剤を得るには、
ASO溶液と安定化剤を配合する工程と、この混
合物を乾燥する工程とからなる。ASO溶液は、
ASOと緩衝液に溶解させた、好ましくは濃度0.5
〜５重量％、PH6.5〜9.5の溶液である。安定化剤
はこのASO溶液に直接に、あるいは緩衝液もし
くは水に溶解して配合させる。この混合物を乾燥
して製剤化する手段は常法に従う。例えば凍結乾
燥あるいは噴霧乾燥などを行う。 本発明の安定化法に従えば、ASOを製剤化す
るときの安定化が極めて大きく、また得られた
ASO製剤は長期間に亘つて安定である。 なお本発明で使用するASOの酵素活性は以下
の方法で測定する。 (1) 反応液の組成 1mMアスコルビン酸溶液（0.2Mリン酸１カ
リウム及び1mMエチレンジアミンテトラ酢
酸・２ナトリウム塩を含む） 0.5m1 0.01Mリン酸２ナトリウム溶液 0.5m1 酵素液（0.04〜0.3単位／mlに0.05％牛血清ア
ルブミンを含む0.01Mリン酸２ナトリウム溶
液で希釈） 0.1ml (2) 反応条件及び酵素力価 30℃、５分間反応する。反応停止は0.2N塩
酸、3.0m1添加で行い、分解されたアスコルビ
ン酸量を245nmの吸光度の減少量から求める。
即ち、アスコルビン酸の上記条件下における
245nmでの分子吸光係数として（ε−10×
10-3）を用い、反応時の245nmにおける吸光度
の減少量から分解されたアスコルビン酸量を求
め、これをもとにして試料中の酵素力価を算出
する。 酵素力価の表示は、上記条件下で１分間に１
μモルのアスコルビン酸が分解される酵素量を
１単位として行う。 以下実施例により本発明を詳細に説明する。 実施例 １ キウリ及びカボチヤ由来のASO〔キウリ由来
（比活性（単位／OD280）：910）、カボチヤ由来
（比活性（単位／OD280）：500）〕を各々0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.0）で１ml当りの固形分を20mg
になる様に調整した。第１表に示される化合物を
同じ緩衝液で２％（Ｗ／Ｖ）溶液となしたものを
上記酵素液に１mlずつ添加して、５ml容バイアル
瓶にて凍結乾燥した。乾燥直後および更にその乾
燥製品を40℃で４日間保存した場合の酵素活性の
残存率を測定した。その結果を第１表に示す。 第１表から明らかなように、いずれのASO製
剤も無添加に比べ、アルギニン、リジン、ヒスチ
ジンあるいはホウ酸ナトリウムの添加で、凍結乾
燥収率およびその後の保存安定性のいずれもが著
しく向上した。
〔EC1.1033〕（以下ASOと略する）の安定化法に
関する。 ASOは古くから種々の高等植物に所在するこ
とが知られており、特に該酵素含量の高いキウリ
やカボチヤ等のウリ科植物の果実皮を給源にして
の研究が盛んに行われ、これ迄、ASOの性質に
関して詳細に検討され、報告されている。近年、
その精製品は臨床検査分野において、アスコルビ
ン酸の定量に、あるいは検体中のアスコルビン酸
が測定系に影響を与える場合に、かかる系に
ASOを供存せしめ、アスコルビン酸を酸化分解
して、その防害を排除する手法が一般化されてい
る。しかしながらASOは乾燥した製剤状態にお
いて不安定であることから、該酵素の安定な市販
製剤の開発が強く望まれている。 本発明者等はかかる難点を解決し、充分に貯蔵
安定である安定化ASO製剤を得るべく種々検討
を行つた。その結果、アルギニン、リジン、ヒス
チジンおよびホウ酸塩から選ばれた１種もしくは
２種以上の化合物をASO製剤中に含有せしめる
ことにより、著しくは安定性が向上することを見
出し、本発明を完成するに到つた。すなわち、本
発明はASO製剤にアルギニン、リジン、ヒスチ
ジンおよびホウ酸塩からなる群から選ばれた１種
もしくは２種以上の化合物を含有させることを特
徴とするASOの安定化法である。 本発明におけるASO製剤とはキウリあるいは
カボチヤなどから分離され、乾燥された固体状の
ASOを意味する。このASO製剤は高度に精製さ
れたものに限定されない。 本発明の安定化剤はアルギニン、リジン、ヒス
チジンおよびホウ酸塩からなる群から選ばれた１
種もしくは２種以上の化合物であり、ホウ酸塩は
ホウ酸のナトリウム、カリウムなどのアルカリ金
属塩などを意味する。 安定化剤の配合割合はASO製剤100重量部当り
10〜1000重量部である。 安定化剤を含有するASO製剤を得るには、
ASO溶液と安定化剤を配合する工程と、この混
合物を乾燥する工程とからなる。ASO溶液は、
ASOと緩衝液に溶解させた、好ましくは濃度0.5
〜５重量％、PH6.5〜9.5の溶液である。安定化剤
はこのASO溶液に直接に、あるいは緩衝液もし
くは水に溶解して配合させる。この混合物を乾燥
して製剤化する手段は常法に従う。例えば凍結乾
燥あるいは噴霧乾燥などを行う。 本発明の安定化法に従えば、ASOを製剤化す
るときの安定化が極めて大きく、また得られた
ASO製剤は長期間に亘つて安定である。 なお本発明で使用するASOの酵素活性は以下
の方法で測定する。 (1) 反応液の組成 1mMアスコルビン酸溶液（0.2Mリン酸１カ
リウム及び1mMエチレンジアミンテトラ酢
酸・２ナトリウム塩を含む） 0.5m1 0.01Mリン酸２ナトリウム溶液 0.5m1 酵素液（0.04〜0.3単位／mlに0.05％牛血清ア
ルブミンを含む0.01Mリン酸２ナトリウム溶
液で希釈） 0.1ml (2) 反応条件及び酵素力価 30℃、５分間反応する。反応停止は0.2N塩
酸、3.0m1添加で行い、分解されたアスコルビ
ン酸量を245nmの吸光度の減少量から求める。
即ち、アスコルビン酸の上記条件下における
245nmでの分子吸光係数として（ε−10×
10-3）を用い、反応時の245nmにおける吸光度
の減少量から分解されたアスコルビン酸量を求
め、これをもとにして試料中の酵素力価を算出
する。 酵素力価の表示は、上記条件下で１分間に１
μモルのアスコルビン酸が分解される酵素量を
１単位として行う。 以下実施例により本発明を詳細に説明する。 実施例 １ キウリ及びカボチヤ由来のASO〔キウリ由来
（比活性（単位／OD280）：910）、カボチヤ由来
（比活性（単位／OD280）：500）〕を各々0.01Mリ
ン酸緩衝液（PH8.0）で１ml当りの固形分を20mg
になる様に調整した。第１表に示される化合物を
同じ緩衝液で２％（Ｗ／Ｖ）溶液となしたものを
上記酵素液に１mlずつ添加して、５ml容バイアル
瓶にて凍結乾燥した。乾燥直後および更にその乾
燥製品を40℃で４日間保存した場合の酵素活性の
残存率を測定した。その結果を第１表に示す。 第１表から明らかなように、いずれのASO製
剤も無添加に比べ、アルギニン、リジン、ヒスチ
ジンあるいはホウ酸ナトリウムの添加で、凍結乾
燥収率およびその後の保存安定性のいずれもが著
しく向上した。
【表】
実施例 ２
キウリ由来のASO〔比活性（単位／OD280）：
910〕を用いて、更に実施例１と同様に操作して
凍結乾燥品を調製し、アルギニン、リジン、ヒス
チジンあるいはホウ酸塩の添加濃度水準およびそ
れらの組み合せ併用による安定化効果の検討を行
つた。その結果を第２表に示す。 第２表から明らかなように、いずれの添加物も
少なくとも10〜90重量％の添加で著しい安定化効
果を示した。また、それらの添加物の組み合せ併
用においても各々の添加物単独の場合と同様に著
しい保存安定性の向上が認められた。
910〕を用いて、更に実施例１と同様に操作して
凍結乾燥品を調製し、アルギニン、リジン、ヒス
チジンあるいはホウ酸塩の添加濃度水準およびそ
れらの組み合せ併用による安定化効果の検討を行
つた。その結果を第２表に示す。 第２表から明らかなように、いずれの添加物も
少なくとも10〜90重量％の添加で著しい安定化効
果を示した。また、それらの添加物の組み合せ併
用においても各々の添加物単独の場合と同様に著
しい保存安定性の向上が認められた。
【表】
【表】
凍結乾燥品重量
Claims (1)
- １ アスコルビン酸酸化酵素製剤にアルギニン、
リジン、ヒスチジンおよびホウ酸塩からなる群か
ら選ばれた１種もしくは２種以上の化合物を含有
させることを特徴とするアスコルビン酸酸化酵素
の安定化法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10206680A JPS5726587A (en) | 1980-07-24 | 1980-07-24 | Stabilization of ascorbic acid oxidase |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10206680A JPS5726587A (en) | 1980-07-24 | 1980-07-24 | Stabilization of ascorbic acid oxidase |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS5726587A JPS5726587A (en) | 1982-02-12 |
| JPS6112675B2 true JPS6112675B2 (ja) | 1986-04-09 |
Family
ID=14317385
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10206680A Granted JPS5726587A (en) | 1980-07-24 | 1980-07-24 | Stabilization of ascorbic acid oxidase |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS5726587A (ja) |
Families Citing this family (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS61242579A (ja) * | 1985-04-22 | 1986-10-28 | Amano Pharmaceut Co Ltd | 安定なアスコルビン酸酸化酵素組成物 |
| JP2558450B2 (ja) * | 1986-03-13 | 1996-11-27 | 和光純薬工業株式会社 | キサンチンオキシダ−ゼの安定化方法 |
| US5405767A (en) * | 1992-04-08 | 1995-04-11 | Solvay Enzymes, Inc. | Purified enzyme concentrate and method of preparation |
| JPH05244948A (ja) * | 1992-08-07 | 1993-09-24 | Amano Pharmaceut Co Ltd | アスコルビン酸酸化酵素の安定化方法 |
| US5656730A (en) * | 1995-04-07 | 1997-08-12 | Enzon, Inc. | Stabilized monomeric protein compositions |
| JP3708212B2 (ja) * | 1996-04-17 | 2005-10-19 | 三井化学株式会社 | アクリルアミド水溶液の濃縮方法 |
-
1980
- 1980-07-24 JP JP10206680A patent/JPS5726587A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS5726587A (en) | 1982-02-12 |
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