JPH04320687A - タンパク質ルフィンをコ−ドする遺伝子 - Google Patents
タンパク質ルフィンをコ−ドする遺伝子Info
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- JPH04320687A JPH04320687A JP8685791A JP8685791A JPH04320687A JP H04320687 A JPH04320687 A JP H04320687A JP 8685791 A JP8685791 A JP 8685791A JP 8685791 A JP8685791 A JP 8685791A JP H04320687 A JPH04320687 A JP H04320687A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【０００１】
【産業上の利用分野】この発明は、試験管内タンパク質
合成阻害活性を有する塩基性タンパク質であるルフィン
をコ−ドする遺伝子に関する。
合成阻害活性を有する塩基性タンパク質であるルフィン
をコ−ドする遺伝子に関する。
【０００２】
【従来の技術】従来、癌の治療に種々の治療法が用いら
れているが、近年ミサイル療法と呼ばれる新たな治療法
が開発され、注目されている。この方法は、癌細胞のみ
を認識する抗体に強い細胞毒性を有する物質を結合し、
癌細胞のみを殺そうとするものである。現在、このミサ
イル療法に用いられる細胞毒性を有する物質として、強
い試験管内タンパク質合成阻害活性を有するリシンが使
用されているが、より強い細胞毒性を有する物質が求め
られている。
れているが、近年ミサイル療法と呼ばれる新たな治療法
が開発され、注目されている。この方法は、癌細胞のみ
を認識する抗体に強い細胞毒性を有する物質を結合し、
癌細胞のみを殺そうとするものである。現在、このミサ
イル療法に用いられる細胞毒性を有する物質として、強
い試験管内タンパク質合成阻害活性を有するリシンが使
用されているが、より強い細胞毒性を有する物質が求め
られている。
【０００３】一方、ヘチマ属植物の組織から得られるル
フィンは、リシンの約１０倍という強い試験管内タンパ
ク質合成阻害活性を有することが従来より知られており
、強い細胞毒性を有する物質としてミサイル療法への利
用が期待されている。また、その強いタンパク質合成阻
害活性から、農業および園芸などの分野において、ウイ
ルス病の防除を目的とした利用も期待されている。
フィンは、リシンの約１０倍という強い試験管内タンパ
ク質合成阻害活性を有することが従来より知られており
、強い細胞毒性を有する物質としてミサイル療法への利
用が期待されている。また、その強いタンパク質合成阻
害活性から、農業および園芸などの分野において、ウイ
ルス病の防除を目的とした利用も期待されている。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】しかしながら、現在、
ルフィンは主としてヘチマの種子より単離精製されてお
り、大量に、かつ安定に供給することが困難である。す
なわち、原料となるヘチマは畑を耕作することにより得
られている状態であり、その供給量は季節や天候に左右
される。また、ヘチマの種子は実の網目状の繊維中に組
み込まれており、分取することが困難である。
ルフィンは主としてヘチマの種子より単離精製されてお
り、大量に、かつ安定に供給することが困難である。す
なわち、原料となるヘチマは畑を耕作することにより得
られている状態であり、その供給量は季節や天候に左右
される。また、ヘチマの種子は実の網目状の繊維中に組
み込まれており、分取することが困難である。
【０００５】したがって、この発明は、ルフィンを大腸
菌等の微生物に安定に産生させることを可能にする、ル
フィンをコ−ドする遺伝子を提供することを目的とする
。
菌等の微生物に安定に産生させることを可能にする、ル
フィンをコ−ドする遺伝子を提供することを目的とする
。
【０００６】
【課題を解決するための手段】この発明のルフィンをコ
−ドする遺伝子は、後掲の配列表における配列番号１ま
たは配列番号２で表わされる塩基配列を有する。
−ドする遺伝子は、後掲の配列表における配列番号１ま
たは配列番号２で表わされる塩基配列を有する。
【０００７】本発明者らは、上記目的を達成するため、
まず、ウリ科のヘチマ属植物の未熟種子に含まれるｍＲ
ＮＡを抽出し、次いでこれを鋳型として、すでに知られ
ているルフィン −ａのアミノ酸配列を基に作製した合
成プライマ−を用い、ポリメラ−ゼ・チェイン・リアク
ション（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃ
ｔｉｏｎ ；以下、ＰＣＲと略記する）により部分ｃＤ
ＮＡを合成した。さらに、得られたｃＤＮＡをプロ−ブ
としてヘチマのｃＤＮＡライブラリ−よりルフィンをコ
−ドする遺伝子を単離し、全塩基配列を決定した。
まず、ウリ科のヘチマ属植物の未熟種子に含まれるｍＲ
ＮＡを抽出し、次いでこれを鋳型として、すでに知られ
ているルフィン −ａのアミノ酸配列を基に作製した合
成プライマ−を用い、ポリメラ−ゼ・チェイン・リアク
ション（Ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅ Ｃｈａｉｎ Ｒｅａｃ
ｔｉｏｎ ；以下、ＰＣＲと略記する）により部分ｃＤ
ＮＡを合成した。さらに、得られたｃＤＮＡをプロ−ブ
としてヘチマのｃＤＮＡライブラリ−よりルフィンをコ
−ドする遺伝子を単離し、全塩基配列を決定した。
【０００８】以下、この手順を詳細に説明する。
【０００９】ルフィンのｍＲＮＡを含む全ＲＮＡは、ヘ
チマ属植物の組織（未熟種子）から得た。全ＲＮＡの抽
出は常法によればよく、例えば、フェノ−ル抽出、チオ
シアン酸グアニジン溶液中での抽出、塩化セシウム抽出
等の操作を単独で、あるいは適宜併用すればよい。本発
明者らは、以下の手順で全ＲＮＡを抽出した。まず、ヘ
チマ属植物の未熟種子にチオシアン酸グアニジンを含む
トリス緩衝液を加えてホモジナイザ−等で磨砕し、遠心
分離して液体分画を得た。次いで、この液体分画を塩化
セシウムを含有する緩衝液に重層し、超遠心分離により
全ＲＮＡを得た。
チマ属植物の組織（未熟種子）から得た。全ＲＮＡの抽
出は常法によればよく、例えば、フェノ−ル抽出、チオ
シアン酸グアニジン溶液中での抽出、塩化セシウム抽出
等の操作を単独で、あるいは適宜併用すればよい。本発
明者らは、以下の手順で全ＲＮＡを抽出した。まず、ヘ
チマ属植物の未熟種子にチオシアン酸グアニジンを含む
トリス緩衝液を加えてホモジナイザ−等で磨砕し、遠心
分離して液体分画を得た。次いで、この液体分画を塩化
セシウムを含有する緩衝液に重層し、超遠心分離により
全ＲＮＡを得た。
【００１０】得られた全ＲＮＡは常法に従って精製した
。これは、例えば、オリゴｄＴセルロ−スカラムやオリ
ゴｄＴ固定粒状樹脂を用いて行なうことができる。
。これは、例えば、オリゴｄＴセルロ−スカラムやオリ
ゴｄＴ固定粒状樹脂を用いて行なうことができる。
【００１１】次に、得られた全ＲＮＡを鋳型として、オ
リゴｄＴプライマ−の存在下で逆転写酵素により第一鎖
ｃＤＮＡを合成した。このｃＤＮＡの合成は常法により
行なうことができる。
リゴｄＴプライマ−の存在下で逆転写酵素により第一鎖
ｃＤＮＡを合成した。このｃＤＮＡの合成は常法により
行なうことができる。
【００１２】この第一鎖ｃＤＮＡを、プライマ−として
既に知られているルフィン −ａのアミノ酸配列を基に
作製した合成プライマ−を用いるＰＣＲに供し、特定の
塩基配列（ルフィン −ａのアミノ酸配列の一部）を有
するｃＤＮＡを増幅した。得られた反応生成物をプラス
ミドベクタ−にクロ−ニングして５個の独立クロ−ンを
得、それぞれのクロ−ンの全塩基配列を決定した。これ
らの塩基配列をコンピュ−タを用いて解析することによ
り、ルフィン −ａのアミノ酸配列と高い相同性を示す
アミノ酸配列を有するタンパク質をコ−ドする２個のＤ
ＮＡ断片（すなわち、部分ルフィンｃＤＮＡ）を得た。
既に知られているルフィン −ａのアミノ酸配列を基に
作製した合成プライマ−を用いるＰＣＲに供し、特定の
塩基配列（ルフィン −ａのアミノ酸配列の一部）を有
するｃＤＮＡを増幅した。得られた反応生成物をプラス
ミドベクタ−にクロ−ニングして５個の独立クロ−ンを
得、それぞれのクロ−ンの全塩基配列を決定した。これ
らの塩基配列をコンピュ−タを用いて解析することによ
り、ルフィン −ａのアミノ酸配列と高い相同性を示す
アミノ酸配列を有するタンパク質をコ−ドする２個のＤ
ＮＡ断片（すなわち、部分ルフィンｃＤＮＡ）を得た。
【００１３】これとは別に、得られた第一鎖ｃＤＮＡを
基に、ＲＮａｓｅ ＨおよびＤＮＡポリメラ−ゼを用い
て第二鎖ｃＤＮＡを合成し、二本鎖ｃＤＮＡを調製した
。この二本鎖ｃＤＮＡを精製した後、ＥｃｏＲＩ アダ
プタ−を付加し、クロ−ニングベクタ−λ ｇｔ１０
に組み込んだ。この組換えλ ｇｔ１０ ＤＮＡを試験
管内でパッケ−ジングした後、宿主大腸菌 Ｃ６００ｈ
ｆｌ− に感染させた。この感染大腸菌をソフト寒天に
包埋した後寒天培地にまき、一晩培養することにより多
数の組換えファ−ジ（すなわち、ｃＤＮＡライブラリ−
）を得た。
基に、ＲＮａｓｅ ＨおよびＤＮＡポリメラ−ゼを用い
て第二鎖ｃＤＮＡを合成し、二本鎖ｃＤＮＡを調製した
。この二本鎖ｃＤＮＡを精製した後、ＥｃｏＲＩ アダ
プタ−を付加し、クロ−ニングベクタ−λ ｇｔ１０
に組み込んだ。この組換えλ ｇｔ１０ ＤＮＡを試験
管内でパッケ−ジングした後、宿主大腸菌 Ｃ６００ｈ
ｆｌ− に感染させた。この感染大腸菌をソフト寒天に
包埋した後寒天培地にまき、一晩培養することにより多
数の組換えファ−ジ（すなわち、ｃＤＮＡライブラリ−
）を得た。
【００１４】得られた組換えファ−ジを用い、ＰＣＲに
より得られた部分ルフィンｃＤＮＡをプロ−ブとして、
常法によりプラ−クハイブリダイゼ−ションを行ない、
プロ−ブとハイブリダイズする１２個の独立した組換え
ファ−ジを得た。これらのファ−ジは、さらにプラ−ク
ハイブリダイゼ−ションを繰り返すことにより単一のフ
ァ−ジに精製した。精製したファ−ジは大腸菌 Ｃ６０
０ｈｆｌ− に感染させて液体培養により増殖させ、常
法により組換えファ−ジＤＮＡを抽出した。
より得られた部分ルフィンｃＤＮＡをプロ−ブとして、
常法によりプラ−クハイブリダイゼ−ションを行ない、
プロ−ブとハイブリダイズする１２個の独立した組換え
ファ−ジを得た。これらのファ−ジは、さらにプラ−ク
ハイブリダイゼ−ションを繰り返すことにより単一のフ
ァ−ジに精製した。精製したファ−ジは大腸菌 Ｃ６０
０ｈｆｌ− に感染させて液体培養により増殖させ、常
法により組換えファ−ジＤＮＡを抽出した。
【００１５】得られた組換えファ−ジＤＮＡを制限酵素
ＢａｍＨＩで切断することにより、組み込まれたｃＤ
ＮＡをベクタ−ファ−ジＤＮＡより切り離し、アガロ−
ス電気泳動により分離した。目的とするｃＤＮＡを含む
アガロ−スゲルを切り取り、常法によりゲル中からＤＮ
Ａを分離・精製した。
ＢａｍＨＩで切断することにより、組み込まれたｃＤ
ＮＡをベクタ−ファ−ジＤＮＡより切り離し、アガロ−
ス電気泳動により分離した。目的とするｃＤＮＡを含む
アガロ−スゲルを切り取り、常法によりゲル中からＤＮ
Ａを分離・精製した。
【００１６】得られたＤＮＡはプラスミドベクタ−の
ＢａｍＨＩサイトにクロ−ニングし、シデオキシ法によ
り全塩基配列を決定した。決定した全塩基配列をコンピ
ュ−タを用いて解析したところ、後掲の配列表において
配列番号５および６に示す２種の塩基配列が認められた
。この２種のＤＮＡのうち、配列番号５で示すＤＮＡが
コ−ドするタンパク質はルフィン −ａと非常に高い相
同性を有しており、他方の配列番号６で示すＤＮＡがコ
−ドするタンパク質はルフィン −ｂと高い相同性を有
していた。 ルフィン −ａと高い相同性を有するタンパク質をルフ
ィン −ｆ、ルフィン −ｂと高い相同性を有するタン
パク質をルフィン −ｇとした。このルフィン −ｆお
よびルフィン −ｇには、成熟ルフィンタンパク質には
存在しない、比較的短いペプチドが存在する。これは、
シグナルペプチドであると予想される。
ＢａｍＨＩサイトにクロ−ニングし、シデオキシ法によ
り全塩基配列を決定した。決定した全塩基配列をコンピ
ュ−タを用いて解析したところ、後掲の配列表において
配列番号５および６に示す２種の塩基配列が認められた
。この２種のＤＮＡのうち、配列番号５で示すＤＮＡが
コ−ドするタンパク質はルフィン −ａと非常に高い相
同性を有しており、他方の配列番号６で示すＤＮＡがコ
−ドするタンパク質はルフィン −ｂと高い相同性を有
していた。 ルフィン −ａと高い相同性を有するタンパク質をルフ
ィン −ｆ、ルフィン −ｂと高い相同性を有するタン
パク質をルフィン −ｇとした。このルフィン −ｆお
よびルフィン −ｇには、成熟ルフィンタンパク質には
存在しない、比較的短いペプチドが存在する。これは、
シグナルペプチドであると予想される。
【００１７】
【実施例】以下、実施例により、この発明をさらに具体
的に説明する。
的に説明する。
【００１８】実施例１
（ａ）全ＲＮＡの精製
ヘチマの種子 ９ｇを液体窒素で急速凍結した後、粉砕
器を使用して粉状にした。これを ４Ｍグアニジン酸チ
オシアネ−ト、 ０．５％サルコシン、 ０．１％ ２
− メルカプトエタノ−ルを含有する ２５ｍＭクエン
酸緩衝液（ｐＨ ７．０）中において、ホモジナイザ−
（ポリトロン社製）を用いて磨砕した。得られた磨砕液
を ７，０００×ｇで１５分間遠心分離し、上清を回収
した。回収した上清を、 ５．７Ｍ塩化セシウムを含有
する ２５ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ ７．０）に重層
し、１２℃において、２８，０００ ｒｐｍで１５時間
超遠心分離した。これにより全ＲＮＡを沈殿物として回
収し、さらに １ｍｌ の滅菌水に溶解した。全ＲＮＡ
の純度および濃度は、分光光度計を用いて測定した。
器を使用して粉状にした。これを ４Ｍグアニジン酸チ
オシアネ−ト、 ０．５％サルコシン、 ０．１％ ２
− メルカプトエタノ−ルを含有する ２５ｍＭクエン
酸緩衝液（ｐＨ ７．０）中において、ホモジナイザ−
（ポリトロン社製）を用いて磨砕した。得られた磨砕液
を ７，０００×ｇで１５分間遠心分離し、上清を回収
した。回収した上清を、 ５．７Ｍ塩化セシウムを含有
する ２５ｍＭクエン酸緩衝液（ｐＨ ７．０）に重層
し、１２℃において、２８，０００ ｒｐｍで１５時間
超遠心分離した。これにより全ＲＮＡを沈殿物として回
収し、さらに １ｍｌ の滅菌水に溶解した。全ＲＮＡ
の純度および濃度は、分光光度計を用いて測定した。
【００１９】（ｂ）全ｍＲＮＡの精製
全ＲＮＡ ３０ｕｌ に、蒸留水 ６０ｕｌ および緩
衝液 １０ｕｌ （１００ｍＭトリス（ｐＨ ７．５）
、 １０ｍＭ ＥＤＴＡ、１ ％ＳＤＳ）を添加した
。これに等量のオリゴテックスｄＴ−３０（日本合成ゴ
ム株式会社製）を加え、６５℃で ５分間加熱した後氷
中で急冷した。次いで、これに ５Ｍ塩化ナトリウム
２０ｕｌ を添加し、３７℃で１０分間加熱した。これ
を卓上遠心器により １５，０００ ｒｐｍ で１０分
間遠心分離した後、上清を除去した。得られた沈殿物を
滅菌水 １００ｕｌに懸濁してよく分散し、６５℃で
５分間加熱した。これを卓上遠心器によりさらに １５
，０００ ｒｐｍ で１０分間遠心分離して上清を得た
。得られた上清に １０ Ｍ塩化リチウム １０ｕｌ
およびエタノ−ル ２５０ｕｌを添加して−８０℃で３
０分間冷却した後、卓上遠心器により １５，０００
ｒｐｍ で１０分間遠心分離して沈殿物として全ｍＲＮ
Ａを回収した。
衝液 １０ｕｌ （１００ｍＭトリス（ｐＨ ７．５）
、 １０ｍＭ ＥＤＴＡ、１ ％ＳＤＳ）を添加した
。これに等量のオリゴテックスｄＴ−３０（日本合成ゴ
ム株式会社製）を加え、６５℃で ５分間加熱した後氷
中で急冷した。次いで、これに ５Ｍ塩化ナトリウム
２０ｕｌ を添加し、３７℃で１０分間加熱した。これ
を卓上遠心器により １５，０００ ｒｐｍ で１０分
間遠心分離した後、上清を除去した。得られた沈殿物を
滅菌水 １００ｕｌに懸濁してよく分散し、６５℃で
５分間加熱した。これを卓上遠心器によりさらに １５
，０００ ｒｐｍ で１０分間遠心分離して上清を得た
。得られた上清に １０ Ｍ塩化リチウム １０ｕｌ
およびエタノ−ル ２５０ｕｌを添加して−８０℃で３
０分間冷却した後、卓上遠心器により １５，０００
ｒｐｍ で１０分間遠心分離して沈殿物として全ｍＲＮ
Ａを回収した。
【００２０】（ｃ）ＰＣＲによる部分ルフィンｃＤＮＡ
の合成 工程（ｂ）で得られた全ｍＲＮＡを、オリゴｄＴプライ
マ−、４種のデオキシヌクレオチド、ＲＮａｓｅ 阻害
剤および逆転写酵素の存在下において、４２℃で６０分
間インキュベ−トすることにより第一鎖ｃＤＮＡを合成
した。この第一鎖ｃＤＮＡを、フェノ−ル抽出の後エタ
ノ−ル沈殿することにより精製し、滅菌水に溶解した。
の合成 工程（ｂ）で得られた全ｍＲＮＡを、オリゴｄＴプライ
マ−、４種のデオキシヌクレオチド、ＲＮａｓｅ 阻害
剤および逆転写酵素の存在下において、４２℃で６０分
間インキュベ−トすることにより第一鎖ｃＤＮＡを合成
した。この第一鎖ｃＤＮＡを、フェノ−ル抽出の後エタ
ノ−ル沈殿することにより精製し、滅菌水に溶解した。
【００２１】この第一鎖ｃＤＮＡを鋳型とし、４種のデ
オキシヌクレオチド、合成ＤＮＡプライマ−、オリゴｄ
Ｔプライマ−および耐熱性ＤＮＡポリメラ−ゼを用いて
、 １．５ ｍＭ ＭｇＣｌ２ の存在下でＰＣＲを
行なった。この反応では、９５℃で １．５分間加熱後
、４２℃で ２．５分間インキュベ−トし、さらに７２
℃で ３．５分間反応させて１サイクルとし、このサイ
クルを２５回行なった。なお、ここで用いた合成ＤＮＡ
プライマ−は後掲の配列表において配列番号３で示され
る塩基配列を有している。 この配列は、ルフィン −ａの５４番目から６０番目ま
でのアミノ酸配列から類推したものである。
オキシヌクレオチド、合成ＤＮＡプライマ−、オリゴｄ
Ｔプライマ−および耐熱性ＤＮＡポリメラ−ゼを用いて
、 １．５ ｍＭ ＭｇＣｌ２ の存在下でＰＣＲを
行なった。この反応では、９５℃で １．５分間加熱後
、４２℃で ２．５分間インキュベ−トし、さらに７２
℃で ３．５分間反応させて１サイクルとし、このサイ
クルを２５回行なった。なお、ここで用いた合成ＤＮＡ
プライマ−は後掲の配列表において配列番号３で示され
る塩基配列を有している。 この配列は、ルフィン −ａの５４番目から６０番目ま
でのアミノ酸配列から類推したものである。
【００２２】このＰＣＲにより得られた反応生成物の一
部を取り、これを鋳型として、さらにＰＣＲを行なった
。この際、上述のオリゴｄＴプライマ−の代わりに、後
掲の配列表において配列番号４で示される塩基配列を有
する合成プライマ−を用いた他は、上記と同一の条件で
行なった。配列番号４に示される配列は、ルフィン −
ａの ２４２番目から ２４８番目までのアミノ酸配列
より類推される塩基配列に相補的なものである。得られ
た反応生成物の一部を取り、アガロ−スゲル電気泳動に
より解析したところ、そのサイズは約 ６００塩基対程
度であった。 得られたＤＮＡは、クロロホルム抽出後エタノ−ル沈殿
させることにより精製した。
部を取り、これを鋳型として、さらにＰＣＲを行なった
。この際、上述のオリゴｄＴプライマ−の代わりに、後
掲の配列表において配列番号４で示される塩基配列を有
する合成プライマ−を用いた他は、上記と同一の条件で
行なった。配列番号４に示される配列は、ルフィン −
ａの ２４２番目から ２４８番目までのアミノ酸配列
より類推される塩基配列に相補的なものである。得られ
た反応生成物の一部を取り、アガロ−スゲル電気泳動に
より解析したところ、そのサイズは約 ６００塩基対程
度であった。 得られたＤＮＡは、クロロホルム抽出後エタノ−ル沈殿
させることにより精製した。
【００２３】次に、精製ＤＮＡの末端を、トリス緩衝液
中において、４種のデオキシヌクレオチドの存在下で、
ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメントを用いて修復
した。このＤＮＡを、制限酵素 ＥｃｏＲＶで予め切断
したプラスミドベクタ− ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ
Ｓ（−）（ストラタジ−ン社製）と混合し、Ｔ４ ＤＮ
Ａリガ−ゼを用いて、１ｍＭＡＴＰの存在下において１
４℃で２０時間インキュベ−トすることにより組換えＤ
ＮＡを作製した。
中において、４種のデオキシヌクレオチドの存在下で、
ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメントを用いて修復
した。このＤＮＡを、制限酵素 ＥｃｏＲＶで予め切断
したプラスミドベクタ− ｐＢｌｕｅｓｃｒｉｐｔ Ｋ
Ｓ（−）（ストラタジ−ン社製）と混合し、Ｔ４ ＤＮ
Ａリガ−ゼを用いて、１ｍＭＡＴＰの存在下において１
４℃で２０時間インキュベ−トすることにより組換えＤ
ＮＡを作製した。
【００２４】この組換えＤＮＡを宿主大腸菌ＪＭ１０９
に導入し、一晩寒天培地上で培養することにより５つ
のプラ−ク（形質転換体）を得た。これらの形質転換体
からアルカリ− ＳＤＳ法によりそれぞれ組換えプラス
ミドを調製し、ジデオキシ・チェイン・タ−ミネ−ショ
ン法により全塩基配列を決定した。この塩基配列を、マ
イクロジェニ−ＤＮＡ解析システム（ベックマン社製）
を用いて解析したところ、２つのＤＮＡ断片がコ−ドす
るタンパク質のアミノ酸配列がルフィン −ａと非常に
高い相同性を有することが明らかとなった。すなわち、
この２つのＤＮＡ断片は、ルフィン −ａまたはその類
似タンパク質をコ−ドする遺伝子の一部である。
に導入し、一晩寒天培地上で培養することにより５つ
のプラ−ク（形質転換体）を得た。これらの形質転換体
からアルカリ− ＳＤＳ法によりそれぞれ組換えプラス
ミドを調製し、ジデオキシ・チェイン・タ−ミネ−ショ
ン法により全塩基配列を決定した。この塩基配列を、マ
イクロジェニ−ＤＮＡ解析システム（ベックマン社製）
を用いて解析したところ、２つのＤＮＡ断片がコ−ドす
るタンパク質のアミノ酸配列がルフィン −ａと非常に
高い相同性を有することが明らかとなった。すなわち、
この２つのＤＮＡ断片は、ルフィン −ａまたはその類
似タンパク質をコ−ドする遺伝子の一部である。
【００２５】（ｄ）ヘチマのｃＤＮＡライブラリ−の作
製 まず、工程（ｃ）と同一の条件で、工程（ｂ）において
得られたｍＲＮＡから第一鎖ｃＤＮＡを合成した。次い
で、この第一鎖ｃＤＮＡにＲＮａｓｅ Ｈおよび大腸菌
ＤＮＡポリメラ−ゼを加え、１２℃で６０分間、続いて
２２℃で６０分間加熱することにより第二鎖ｃＤＮＡを
合成した。第二鎖ｃＤＮＡを含有する反応液を６５℃で
１０分間加熱して液中に含まれる酵素を失活させた後、
ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメントを添加して３
７℃で３０分間加熱することにより、二本鎖ｃＤＮＡの
末端を修復して平滑末端とした。この反応液を等量のフ
ェノ−ル：クロロホルム（ １：１ ）と混合し、遠心
分離によって二層に分離した後、上層の水相を回収した
。回収した水相に酢酸ナトリウムおよびエタノ−ルを添
加し、−８０℃で３０分間急冷した後、遠心分離を行な
ってｃＤＮＡを沈殿物として回収した。得られたｃＤＮ
Ａは滅菌水に溶解した。
製 まず、工程（ｃ）と同一の条件で、工程（ｂ）において
得られたｍＲＮＡから第一鎖ｃＤＮＡを合成した。次い
で、この第一鎖ｃＤＮＡにＲＮａｓｅ Ｈおよび大腸菌
ＤＮＡポリメラ−ゼを加え、１２℃で６０分間、続いて
２２℃で６０分間加熱することにより第二鎖ｃＤＮＡを
合成した。第二鎖ｃＤＮＡを含有する反応液を６５℃で
１０分間加熱して液中に含まれる酵素を失活させた後、
ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメントを添加して３
７℃で３０分間加熱することにより、二本鎖ｃＤＮＡの
末端を修復して平滑末端とした。この反応液を等量のフ
ェノ−ル：クロロホルム（ １：１ ）と混合し、遠心
分離によって二層に分離した後、上層の水相を回収した
。回収した水相に酢酸ナトリウムおよびエタノ−ルを添
加し、−８０℃で３０分間急冷した後、遠心分離を行な
ってｃＤＮＡを沈殿物として回収した。得られたｃＤＮ
Ａは滅菌水に溶解した。
【００２６】得られたｃＤＮＡおよび内部に制限酵素
ＢａｍＨＩによる認識部位を有する ＥｃｏＲＩ用アダ
プタ−を、ＡＴＰを含有するトリス緩衝液中において、
Ｔ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて１２℃で２０時間インキ
ュベ−トすることにより、ｃＤＮＡにアダプタ−を付加
した。得られた反応液は、セファデックスＧ−５０ カ
ラムを用いて精製した。 精製したｃＤＮＡは、カラムからの溶出液よりエタノ−
ル沈殿によって沈殿物として回収し、その後滅菌水に溶
解した。
ＢａｍＨＩによる認識部位を有する ＥｃｏＲＩ用アダ
プタ−を、ＡＴＰを含有するトリス緩衝液中において、
Ｔ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて１２℃で２０時間インキ
ュベ−トすることにより、ｃＤＮＡにアダプタ−を付加
した。得られた反応液は、セファデックスＧ−５０ カ
ラムを用いて精製した。 精製したｃＤＮＡは、カラムからの溶出液よりエタノ−
ル沈殿によって沈殿物として回収し、その後滅菌水に溶
解した。
【００２７】精製したｃＤＮＡを、Ｔ４ ＤＮＡキナ−
ゼを用いてＡＴＰの存在下において３７℃で３０分間加
熱することにより、アダプタ−の５´末端にリンを付加
した。 その後、得られた反応液を等量のフェノ−ル：クロロホ
ルム（ １：１ ）と混合し、遠心分離によって二層に
分離した後、上層の水相を回収した。この水相に酢酸ナ
トリウムおよびエタノ−ルを添加し、−８０℃で３０分
間急冷した後、遠心分離を行なってｃＤＮＡを沈殿物と
して回収した。回収したｃＤＮＡは、滅菌水に溶解した
。
ゼを用いてＡＴＰの存在下において３７℃で３０分間加
熱することにより、アダプタ−の５´末端にリンを付加
した。 その後、得られた反応液を等量のフェノ−ル：クロロホ
ルム（ １：１ ）と混合し、遠心分離によって二層に
分離した後、上層の水相を回収した。この水相に酢酸ナ
トリウムおよびエタノ−ルを添加し、−８０℃で３０分
間急冷した後、遠心分離を行なってｃＤＮＡを沈殿物と
して回収した。回収したｃＤＮＡは、滅菌水に溶解した
。
【００２８】得られたｃＤＮＡを、ＡＴＰを含有するト
リス緩衝液中においてＴ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて１
２℃で２０時間インキュベ−トすることにより、 Ｅｃ
ｏＲＩで切断され、 ５´末端のリンが除去されたクロ
−ニングベクタ−λ ｇｔ１０ と接続した。得られた
反応液をインビトロパッケ−ジング溶液に加え、室温で
２時間インキュベ−トすることにより組換えファ−ジ
を作製した。この組換えファ−ジにファ−ジ懸濁液 ５
００ｕｌおよびクロロホルム ２０ｕｌ を添加して混
合した後、遠心分離することにより組換えファ−ジを含
む懸濁液を得た。
リス緩衝液中においてＴ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて１
２℃で２０時間インキュベ−トすることにより、 Ｅｃ
ｏＲＩで切断され、 ５´末端のリンが除去されたクロ
−ニングベクタ−λ ｇｔ１０ と接続した。得られた
反応液をインビトロパッケ−ジング溶液に加え、室温で
２時間インキュベ−トすることにより組換えファ−ジ
を作製した。この組換えファ−ジにファ−ジ懸濁液 ５
００ｕｌおよびクロロホルム ２０ｕｌ を添加して混
合した後、遠心分離することにより組換えファ−ジを含
む懸濁液を得た。
【００２９】この組換えファ−ジの宿主大腸菌 Ｃ６０
０ｈｆｌ− を、０．２％マルト−スおよび １０ｍＭ
ＭｇＳＯ４ を含有するＬＢ培地 ２０ｍｌ 中に
おいて一晩培養し、そのうちの １ｍｌを同培地に接種
してさらに ６時間培養した。この培養液を ３，００
０ｒｐｍで１０分間遠心分離して菌体を回収し、これを
１０ｍＭ ＭｇＳＯ４ １０ｍｌ に懸濁した。
０ｈｆｌ− を、０．２％マルト−スおよび １０ｍＭ
ＭｇＳＯ４ を含有するＬＢ培地 ２０ｍｌ 中に
おいて一晩培養し、そのうちの １ｍｌを同培地に接種
してさらに ６時間培養した。この培養液を ３，００
０ｒｐｍで１０分間遠心分離して菌体を回収し、これを
１０ｍＭ ＭｇＳＯ４ １０ｍｌ に懸濁した。
【００３０】上で得られた大腸菌懸濁液 １ｍｌおよび
ファ−ジ懸濁液 １００ｕｌを混合し、３７℃で１５分
間インキュベ−トした。この混合液を、 ７．５ｍｌの
０．８％アガロ−スを含むＮＺＹ培地に懸濁し、さら
に １．５％寒天を含むＮＺＹ寒天培地上に広げて３７
℃で１２時間培養してｃＤＮＡライブラリ−を作製した
。
ファ−ジ懸濁液 １００ｕｌを混合し、３７℃で１５分
間インキュベ−トした。この混合液を、 ７．５ｍｌの
０．８％アガロ−スを含むＮＺＹ培地に懸濁し、さら
に １．５％寒天を含むＮＺＹ寒天培地上に広げて３７
℃で１２時間培養してｃＤＮＡライブラリ−を作製した
。
【００３１】（ｅ）プラ−クハイブリダイゼ−ションに
よるルフィン遺伝子の単離 工程（ｄ）において作製した寒天培地上のｃＤＮＡライ
ブラリ−上に、ナイロン膜（商品名バイオダインＡ、ポ
−ル社製）をのせて ２分間放置することにより、寒天
培地上の各ファ−ジの一部をナイロン膜に移した。次い
で、このナイロン膜を、ファ−ジを吸着した面を上にし
て １．５Ｍ ＮａＣｌおよび０．５Ｍ ＮａＯＨ
からなる変性液の上にのせて ５分間放置することによ
り、ファ−ジ粒子とその中に含まれる組換えＤＮＡを変
性させた。その後、このナイロン膜を、 ３Ｍ酢酸ナト
リウムからなる中和液の上に ５分間のせて中和した。 中和したナイロン膜は、室温で３０分間風乾した後、乾
燥機を用いて８０℃で ２時間焼付けを行なった。
よるルフィン遺伝子の単離 工程（ｄ）において作製した寒天培地上のｃＤＮＡライ
ブラリ−上に、ナイロン膜（商品名バイオダインＡ、ポ
−ル社製）をのせて ２分間放置することにより、寒天
培地上の各ファ−ジの一部をナイロン膜に移した。次い
で、このナイロン膜を、ファ−ジを吸着した面を上にし
て １．５Ｍ ＮａＣｌおよび０．５Ｍ ＮａＯＨ
からなる変性液の上にのせて ５分間放置することによ
り、ファ−ジ粒子とその中に含まれる組換えＤＮＡを変
性させた。その後、このナイロン膜を、 ３Ｍ酢酸ナト
リウムからなる中和液の上に ５分間のせて中和した。 中和したナイロン膜は、室温で３０分間風乾した後、乾
燥機を用いて８０℃で ２時間焼付けを行なった。
【００３２】これとは別に、工程（ｃ）において得られ
た組換えＤＮＡを、制限酵素 ＢａｍＨＩおよび Ｈｉ
ｎｄＩＩＩを用いて、３７℃で ２時間インキュベ−ト
することにより切断した。これをアガロ−スゲル電気泳
動により分離し、ルフィンｃＤＮＡを含むアガロ−ス断
片を切り出し、ＤＮＡを回収した。回収したＤＮＡの一
部を、３種のデオキシヌクレオチド（ｄＡＴＰ、ｄＧＴ
ＰおよびｄＴＴＰ）、ランダムな塩基配列を有するヘキ
サヌクレオチド、および（ａ−３２Ｐ）ｄＣＴＰの存在
下において、ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメント
を用いてラジオアイソト−プ標識した。標識したＤＮＡ
は、セファデックスＧ−５０ カラムを用いて精製し、
ハイブリダイゼ−ションプロ−ブとして使用した。
た組換えＤＮＡを、制限酵素 ＢａｍＨＩおよび Ｈｉ
ｎｄＩＩＩを用いて、３７℃で ２時間インキュベ−ト
することにより切断した。これをアガロ−スゲル電気泳
動により分離し、ルフィンｃＤＮＡを含むアガロ−ス断
片を切り出し、ＤＮＡを回収した。回収したＤＮＡの一
部を、３種のデオキシヌクレオチド（ｄＡＴＰ、ｄＧＴ
ＰおよびｄＴＴＰ）、ランダムな塩基配列を有するヘキ
サヌクレオチド、および（ａ−３２Ｐ）ｄＣＴＰの存在
下において、ＤＮＡポリメラ−ゼクレノウフラグメント
を用いてラジオアイソト−プ標識した。標識したＤＮＡ
は、セファデックスＧ−５０ カラムを用いて精製し、
ハイブリダイゼ−ションプロ−ブとして使用した。
【００３３】焼付けの終了したナイロン膜を、 ５×Ｓ
ＳＣ、 ５×デンハルト液、 ０．２％ＳＤＳ、および
熱変性した ５ｍｇ／ｍｌウシ胸腺ＤＮＡからなるハイ
ブリダイゼ−ション液中において、穏やかに振とうしな
がら６５℃で ２時間反応させることによりプレハイブ
リダイゼ−ションを行なった。次いで、ハイブリダイゼ
−ション液を新たなものに入れ替えた。次に、このハイ
ブリダイゼ−ション液に上述のハイブリダイゼ−ション
プロ−ブを加え、穏やかに振とうしながら６５℃で１５
時間反応させることによりハイブリダイゼ−ションを行
なった。ハイブリダイゼ−ション終了後、ナイロン膜を
取り出し、 １０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ７．０）、
０．２％ＳＤＳ、および １ ｍＭ ＥＤＴＡから
なる洗浄液中において、室温で３０分間激しく振とうす
ることにより洗浄した。この洗浄操作を２回繰り返し、
非特異的に吸着したプロ−ブを除去した。
ＳＣ、 ５×デンハルト液、 ０．２％ＳＤＳ、および
熱変性した ５ｍｇ／ｍｌウシ胸腺ＤＮＡからなるハイ
ブリダイゼ−ション液中において、穏やかに振とうしな
がら６５℃で ２時間反応させることによりプレハイブ
リダイゼ−ションを行なった。次いで、ハイブリダイゼ
−ション液を新たなものに入れ替えた。次に、このハイ
ブリダイゼ−ション液に上述のハイブリダイゼ−ション
プロ−ブを加え、穏やかに振とうしながら６５℃で１５
時間反応させることによりハイブリダイゼ−ションを行
なった。ハイブリダイゼ−ション終了後、ナイロン膜を
取り出し、 １０ｍＭリン酸緩衝液（ｐＨ ７．０）、
０．２％ＳＤＳ、および １ ｍＭ ＥＤＴＡから
なる洗浄液中において、室温で３０分間激しく振とうす
ることにより洗浄した。この洗浄操作を２回繰り返し、
非特異的に吸着したプロ−ブを除去した。
【００３４】このナイロン膜をバイオイメ−ジアナライ
ザ−もしくはＸ線フィルムを用いたオ−トラジオグラフ
フィによって解析することにより、プロ−ブとハイブリ
ダイズした組換えＤＮＡを含むファ−ジの存在する位置
をプレ−ト上に同定した。この解析により同定された目
的領域を含む、直径 １ｃｍ程度の領域に存在するファ
−ジを、ソフトアガ−ごと寒天培地より掻き取り、ファ
−ジ懸濁液 １ｍｌに懸濁した。次いで、このファ−ジ
懸濁液 １ｕｌを新たなファ−ジ懸濁液 １，０００ｕ
ｌで希釈し、その １ｕｌをさらにファ−ジ懸濁液 １
，０００ｕｌで希釈した。得られた希釈ファ−ジ懸濁液
のそれぞれ １ｕｌ、５０ｕｌ、および １５０ｕｌを
用いて、宿主大腸菌 Ｃ６００ｈｆｌ− を感染させ、
溶解したソフトアガ−に加えた後寒天培地上にまいた。 これを前記と同様の条件で培養し、培地上に形成された
プラ−クに対して前記と同様の条件でハイブリダイゼ−
ションを行ない、プロ−ブとハイブリダイズした目的の
組換えファ−ジを回収した。この操作を繰り返すことに
より、寒天培地上にまかれた全てのファ−ジがプロ−ブ
とハイブリダイズするようにし、最終的に１２個の独立
したファ−ジを得た。
ザ−もしくはＸ線フィルムを用いたオ−トラジオグラフ
フィによって解析することにより、プロ−ブとハイブリ
ダイズした組換えＤＮＡを含むファ−ジの存在する位置
をプレ−ト上に同定した。この解析により同定された目
的領域を含む、直径 １ｃｍ程度の領域に存在するファ
−ジを、ソフトアガ−ごと寒天培地より掻き取り、ファ
−ジ懸濁液 １ｍｌに懸濁した。次いで、このファ−ジ
懸濁液 １ｕｌを新たなファ−ジ懸濁液 １，０００ｕ
ｌで希釈し、その １ｕｌをさらにファ−ジ懸濁液 １
，０００ｕｌで希釈した。得られた希釈ファ−ジ懸濁液
のそれぞれ １ｕｌ、５０ｕｌ、および １５０ｕｌを
用いて、宿主大腸菌 Ｃ６００ｈｆｌ− を感染させ、
溶解したソフトアガ−に加えた後寒天培地上にまいた。 これを前記と同様の条件で培養し、培地上に形成された
プラ−クに対して前記と同様の条件でハイブリダイゼ−
ションを行ない、プロ−ブとハイブリダイズした目的の
組換えファ−ジを回収した。この操作を繰り返すことに
より、寒天培地上にまかれた全てのファ−ジがプロ−ブ
とハイブリダイズするようにし、最終的に１２個の独立
したファ−ジを得た。
【００３５】（ｆ）ルフィンｃＤＮＡの塩基配列の決定
工程（ｅ）において得られた１２個のファ−ジを爪楊枝
で突き刺し、それぞれを宿主大腸菌 Ｃ６００ｈｆｌ−
懸濁液 １５０ｕｌに加え、３７℃で１５分間インキ
ュベ−トすることにより大腸菌を感染させた。この大腸
菌を、 １０ｍＭ ＭｇＳＯ４ を含むＬＢ培地 ５
ｍｌに移し、３７℃で ６時間激しく振とうした。次い
で、この培地にクロロホルム ２０ｕｌ を加え、さら
に１５分間振とうすることにより大腸菌を溶菌した。
工程（ｅ）において得られた１２個のファ−ジを爪楊枝
で突き刺し、それぞれを宿主大腸菌 Ｃ６００ｈｆｌ−
懸濁液 １５０ｕｌに加え、３７℃で１５分間インキ
ュベ−トすることにより大腸菌を感染させた。この大腸
菌を、 １０ｍＭ ＭｇＳＯ４ を含むＬＢ培地 ５
ｍｌに移し、３７℃で ６時間激しく振とうした。次い
で、この培地にクロロホルム ２０ｕｌ を加え、さら
に１５分間振とうすることにより大腸菌を溶菌した。
【００３６】溶菌後の培養液を １０，０００ ｒｐｍ
で２０分間遠心分離して菌の残渣を除き、その上清を
回収した。次に、この上清に ２ＭＮａＣｌおよび２０
％ＰＥＧ６０００の混合液５ｍｌを添加して混合し、
４℃で一晩放置した後 １０，０００ ｒｐｍ で２０
分間遠心分離することにより、ファ−ジ粒子を含む沈殿
物を得た。
で２０分間遠心分離して菌の残渣を除き、その上清を
回収した。次に、この上清に ２ＭＮａＣｌおよび２０
％ＰＥＧ６０００の混合液５ｍｌを添加して混合し、
４℃で一晩放置した後 １０，０００ ｒｐｍ で２０
分間遠心分離することにより、ファ−ジ粒子を含む沈殿
物を得た。
【００３７】得られた沈殿物は、ＤＮＡ分解酵素および
ＲＮＡ分解酵素を含有するファ−ジ懸濁液 ２ｍｌに懸
濁した。この懸濁液を、３７℃で３０分間インキュベ−
トし、ＥＤＴＡおよびＳＤＳをそれぞれ終濃度 ５ ｍ
Ｍおよび ０．２％となるように添加した後、６５℃で
１５分間加熱した。その後、この反応液を、フェノ−ル
クロロホルム抽出およびエタノ−ル沈殿処理することに
より組換えファ−ジＤＮＡを精製した。
ＲＮＡ分解酵素を含有するファ−ジ懸濁液 ２ｍｌに懸
濁した。この懸濁液を、３７℃で３０分間インキュベ−
トし、ＥＤＴＡおよびＳＤＳをそれぞれ終濃度 ５ ｍ
Ｍおよび ０．２％となるように添加した後、６５℃で
１５分間加熱した。その後、この反応液を、フェノ−ル
クロロホルム抽出およびエタノ−ル沈殿処理することに
より組換えファ−ジＤＮＡを精製した。
【００３８】得られた組換えファ−ジＤＮＡの一部を制
限酵素 ＢａｍＨＩで切断して、ベクタ−であるλ ｇ
ｔ１０ から挿入されたｃＤＮＡを切り離し、アガロ−
スゲル電気泳動により分離した。その後、ｃＤＮＡを含
むアガロ−ス断片を切り出し、ミリカップ（ミリポア社
製）を用いてｃＤＮＡを精製した。
限酵素 ＢａｍＨＩで切断して、ベクタ−であるλ ｇ
ｔ１０ から挿入されたｃＤＮＡを切り離し、アガロ−
スゲル電気泳動により分離した。その後、ｃＤＮＡを含
むアガロ−ス断片を切り出し、ミリカップ（ミリポア社
製）を用いてｃＤＮＡを精製した。
【００３９】このｃＤＮＡと、予め制限酵素 ＢａｍＨ
Ｉで切断されたプラスミドベクタ− ｐＢｌｕｅｓｃｒ
ｉｐｔ ＫＳ（−）とを、ＡＴＰを含有する緩衝液中に
おいて、Ｔ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて接続し、組換え
プラスミドを作成した。
Ｉで切断されたプラスミドベクタ− ｐＢｌｕｅｓｃｒ
ｉｐｔ ＫＳ（−）とを、ＡＴＰを含有する緩衝液中に
おいて、Ｔ４ ＤＮＡリガ−ゼを用いて接続し、組換え
プラスミドを作成した。
【００４０】この組換えプラスミドを宿主大腸菌ＪＭ１
０９ に導入して抗生物質アンピシリンを含むＬＢ寒天
培地上にまき、３７℃で１５時間培養することにより組
換えプラスミドを有する大腸菌を得た。得られた大腸菌
は、抗生物質アンピシリンを含むＬＢ液体培地中におい
て３７℃で１２時間さらに培養し、次いで遠心分離する
ことにより菌体を得た。得られた菌体を緩衝液（５０
ｍＭグルコ−ス、２５ ｍＭトリス（ｐＨ ８．０）お
よび １０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ ８．０））に懸濁
し、ＳＤＳを含有するアルカリ溶液を添加して室温で
５分間放置することにより溶菌した。この溶液に酢酸カ
リウムを添加して室温で１５分間放置することにより中
和し、遠心分離により残渣を除去してその上清を回収し
た。得られた上清にイソプロパノ−ルを添加し、冷却し
た後、遠心分離により核酸を沈殿物として回収した。回
収した沈殿物を滅菌水に懸濁し、これに酢酸アンモニウ
ムを終濃度 ２．５Ｍとなるように添加して ４℃で３
０分間冷却した。その後、遠心分離により不溶化物を沈
殿させ、その上清を回収した。得られた上清に ２．５
倍量のエタノ−ルを添加し、−８０℃で３０分間冷却し
た後、遠心分離により組換えプラスミドＤＮＡを精製し
た。
０９ に導入して抗生物質アンピシリンを含むＬＢ寒天
培地上にまき、３７℃で１５時間培養することにより組
換えプラスミドを有する大腸菌を得た。得られた大腸菌
は、抗生物質アンピシリンを含むＬＢ液体培地中におい
て３７℃で１２時間さらに培養し、次いで遠心分離する
ことにより菌体を得た。得られた菌体を緩衝液（５０
ｍＭグルコ−ス、２５ ｍＭトリス（ｐＨ ８．０）お
よび １０ｍＭ ＥＤＴＡ（ｐＨ ８．０））に懸濁
し、ＳＤＳを含有するアルカリ溶液を添加して室温で
５分間放置することにより溶菌した。この溶液に酢酸カ
リウムを添加して室温で１５分間放置することにより中
和し、遠心分離により残渣を除去してその上清を回収し
た。得られた上清にイソプロパノ−ルを添加し、冷却し
た後、遠心分離により核酸を沈殿物として回収した。回
収した沈殿物を滅菌水に懸濁し、これに酢酸アンモニウ
ムを終濃度 ２．５Ｍとなるように添加して ４℃で３
０分間冷却した。その後、遠心分離により不溶化物を沈
殿させ、その上清を回収した。得られた上清に ２．５
倍量のエタノ−ルを添加し、−８０℃で３０分間冷却し
た後、遠心分離により組換えプラスミドＤＮＡを精製し
た。
【００４１】精製したＤＮＡの一部を、 １ ｍＭ
ＥＤＴＡを含有する０．２Ｎ ＮａＯＨ中において３
７℃で１０分間加熱することにより、二本鎖ＤＮＡを一
本鎖ＤＮＡに変性した。その後、この一本鎖ＤＮＡに酢
酸アンモニウムおよびエタノ−ルを添加し、−８０℃で
３０分間冷却した後、遠心分離により一本鎖ＤＮＡを回
収した。回収したＤＮＡとシ−クエンシングプライマ−
とをトリス緩衝液中において４２℃で３０分間加熱する
ことにより両者をアニ−リングし、その後室温に戻した
。この反応液に、３種のデオキシヌクレオチド（ｄＡＴ
Ｐ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ）、（ａ−３２Ｐ）ｄＣＴ
Ｐ、およびＴ７ ＤＮＡポリメラ−ゼを添加し、室温で
５分間加熱した。加熱後の反応液の一部を、４種類の
デオキシヌクレオチドのうちのそれぞれ異なる１種がジ
デオキシヌクレオチドである（すなわち、１種のジデオ
キシヌクレオチドと３種のデオキシヌクレオチドを含有
する）４種類の反応停止液に添加した。これを３７℃で
５分間加熱することにより、各ジデオキシヌクレオチ
ドに特異的にポリメラ−ゼの反応を停止させた。
ＥＤＴＡを含有する０．２Ｎ ＮａＯＨ中において３
７℃で１０分間加熱することにより、二本鎖ＤＮＡを一
本鎖ＤＮＡに変性した。その後、この一本鎖ＤＮＡに酢
酸アンモニウムおよびエタノ−ルを添加し、−８０℃で
３０分間冷却した後、遠心分離により一本鎖ＤＮＡを回
収した。回収したＤＮＡとシ−クエンシングプライマ−
とをトリス緩衝液中において４２℃で３０分間加熱する
ことにより両者をアニ−リングし、その後室温に戻した
。この反応液に、３種のデオキシヌクレオチド（ｄＡＴ
Ｐ、ｄＧＴＰおよびｄＴＴＰ）、（ａ−３２Ｐ）ｄＣＴ
Ｐ、およびＴ７ ＤＮＡポリメラ−ゼを添加し、室温で
５分間加熱した。加熱後の反応液の一部を、４種類の
デオキシヌクレオチドのうちのそれぞれ異なる１種がジ
デオキシヌクレオチドである（すなわち、１種のジデオ
キシヌクレオチドと３種のデオキシヌクレオチドを含有
する）４種類の反応停止液に添加した。これを３７℃で
５分間加熱することにより、各ジデオキシヌクレオチ
ドに特異的にポリメラ−ゼの反応を停止させた。
【００４２】これらの反応液に、 ０．１％ブロムフェ
ノ−ルブル−および ０．１％キシレンシアノ−ルを含
有する、９５％ホルムアミドをそれぞれ等量添加し、９
５℃で ２分間加熱した後氷上で急冷した。この４種類
の反応液の一部をそれぞれ隣り合わせになるように、
６Ｍ尿素を含む複数枚の ６％アクリアミドゲル中に電
気泳動し、時間をずらしながら泳動を停止させた。その
後、ゲルをろ紙に移し取り、スラブゲル乾燥機において
減圧加熱することによりゲルを乾燥させた。乾燥したゲ
ルをＸ線フィルムと密着させ、室温で１２時間放置する
ことによってオ−トラジオグラフィを行なった後、フィ
ルムを現像した。このオ−トラジオグラフィの結果から
各鋳型ＤＮＡの塩基配列を読み取り、その結果をコンピ
ュ−タに入力して解析することにより１２種のルフィン
ｃＤＮＡの塩基配列を決定した。
ノ−ルブル−および ０．１％キシレンシアノ−ルを含
有する、９５％ホルムアミドをそれぞれ等量添加し、９
５℃で ２分間加熱した後氷上で急冷した。この４種類
の反応液の一部をそれぞれ隣り合わせになるように、
６Ｍ尿素を含む複数枚の ６％アクリアミドゲル中に電
気泳動し、時間をずらしながら泳動を停止させた。その
後、ゲルをろ紙に移し取り、スラブゲル乾燥機において
減圧加熱することによりゲルを乾燥させた。乾燥したゲ
ルをＸ線フィルムと密着させ、室温で１２時間放置する
ことによってオ−トラジオグラフィを行なった後、フィ
ルムを現像した。このオ−トラジオグラフィの結果から
各鋳型ＤＮＡの塩基配列を読み取り、その結果をコンピ
ュ−タに入力して解析することにより１２種のルフィン
ｃＤＮＡの塩基配列を決定した。
【００４３】その結果、後掲の配列表において配列番号
５および配列番号６で示す２種の塩基配列が認められた
。配列番号５で示す塩基配列を有する遺伝子がコ−ドす
るタンパク質は、ルフィン −ａと高い相同性を有して
いた。これに対して、配列番号６で示す塩基配列を有す
る遺伝子がコ−ドするタンパク質の、ルフィン −ａに
対する相同性は、やや低いものであったが、ルフィン
−ｂとは高い相同性を有していた。この２種の遺伝子が
コ−ドするタンパク質を、それぞれルフィン −ｆおよ
びルフィン −ｇとした。ルフィン−ｆとルフィン −
ａとで相違するアミノ酸およびルフィン −ｇとルフィ
ン −ｂとで相違するアミノ酸を以下に示す。
５および配列番号６で示す２種の塩基配列が認められた
。配列番号５で示す塩基配列を有する遺伝子がコ−ドす
るタンパク質は、ルフィン −ａと高い相同性を有して
いた。これに対して、配列番号６で示す塩基配列を有す
る遺伝子がコ−ドするタンパク質の、ルフィン −ａに
対する相同性は、やや低いものであったが、ルフィン
−ｂとは高い相同性を有していた。この２種の遺伝子が
コ−ドするタンパク質を、それぞれルフィン −ｆおよ
びルフィン −ｇとした。ルフィン−ｆとルフィン −
ａとで相違するアミノ酸およびルフィン −ｇとルフィ
ン −ｂとで相違するアミノ酸を以下に示す。
【００４４】
ルフィン −ｆとルフィン −ａとで相違する
アミノ酸 アミノ酸の位置
ルフィン −ｆ ルフィン −ａ
３４
Ｉｌｅ Ｌｅｕ
３６
Ｌｅｕ
Ｉｌｅ ６７
Ｔｈｒ
Ｓｅｒ ６８
Ａｓｎ
Ｇｌｎ
６９ Ｖａｌ
Ｌｅｕ
１３５ Ｉｌ
ｅ Ｌｅｕ
１３８
Ｌｅｕ Ｉｌｅ
１５４
Ｉｌｅ Ｌ
ｅｕ １９０
Ｇｌｕ
Ｓｅｒ・Ｌｕｅ ルフィン −ｇとルフィン
−ｂとで相違するアミノ酸 アミノ酸
の位置 ルフィン −ｇ ルフィ
ン −ｂ ８４
Ｐｈｅ
Ａｌａ １０２
Ｉｌｅ
Ｌｅｕ
１０５ Ｌｅｕ
Ｉｌｅ
１２１ Ｖ
ａｌ Ｉｌｅ
１３２
Ｐｈｅ Ｌｅｕ
１３６
Ｉｌｅ
Ｌｅｕ １３９
Ｌｅｕ
Ｉｌｅ １４９
Ｇｌｙ
Ａｌａ １
５５ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ
１９１−１９２ −
Ａｌａ（インサ−ション）
１９４
Ａｌａ Ｌｅｕ
２２６
Ｌｙｓ
Ｔｈｒ ２２７
Ａｓｐ
Ａｓｎ ２２８
Ｖａｌ
Ｌｅｕ
２２９ Ａｓｎ
Ａｌａ
２３３ Ｖ
ａｌ Ｇｌｎ
２３４
Ｔｈｒ Ｉｌｅ
２３５
Ａｓｎ
Ｌｙｓ ２３６
Ａｓｎ
Ａｓｐ ２３７
Ｉｌｅ
Ｖａｌ ２
３８ Ｌｙｓ
Ａｓｎ
２３８−２３９ −
Ｓｅｒ・Ｌｙｓ （インサ−ション）こ
のルフィン −ｆおよびルフィン −ｇには、成熟ルフ
ィンタンパク質には存在しない比較的短いペプチドが存
在しており、これはシグナルペプチドであると予想され
る。
アミノ酸 アミノ酸の位置
ルフィン −ｆ ルフィン −ａ
３４
Ｉｌｅ Ｌｅｕ
３６
Ｌｅｕ
Ｉｌｅ ６７
Ｔｈｒ
Ｓｅｒ ６８
Ａｓｎ
Ｇｌｎ
６９ Ｖａｌ
Ｌｅｕ
１３５ Ｉｌ
ｅ Ｌｅｕ
１３８
Ｌｅｕ Ｉｌｅ
１５４
Ｉｌｅ Ｌ
ｅｕ １９０
Ｇｌｕ
Ｓｅｒ・Ｌｕｅ ルフィン −ｇとルフィン
−ｂとで相違するアミノ酸 アミノ酸
の位置 ルフィン −ｇ ルフィ
ン −ｂ ８４
Ｐｈｅ
Ａｌａ １０２
Ｉｌｅ
Ｌｅｕ
１０５ Ｌｅｕ
Ｉｌｅ
１２１ Ｖ
ａｌ Ｉｌｅ
１３２
Ｐｈｅ Ｌｅｕ
１３６
Ｉｌｅ
Ｌｅｕ １３９
Ｌｅｕ
Ｉｌｅ １４９
Ｇｌｙ
Ａｌａ １
５５ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ
１９１−１９２ −
Ａｌａ（インサ−ション）
１９４
Ａｌａ Ｌｅｕ
２２６
Ｌｙｓ
Ｔｈｒ ２２７
Ａｓｐ
Ａｓｎ ２２８
Ｖａｌ
Ｌｅｕ
２２９ Ａｓｎ
Ａｌａ
２３３ Ｖ
ａｌ Ｇｌｎ
２３４
Ｔｈｒ Ｉｌｅ
２３５
Ａｓｎ
Ｌｙｓ ２３６
Ａｓｎ
Ａｓｐ ２３７
Ｉｌｅ
Ｖａｌ ２
３８ Ｌｙｓ
Ａｓｎ
２３８−２３９ −
Ｓｅｒ・Ｌｙｓ （インサ−ション）こ
のルフィン −ｆおよびルフィン −ｇには、成熟ルフ
ィンタンパク質には存在しない比較的短いペプチドが存
在しており、これはシグナルペプチドであると予想され
る。
【００４５】
【発明の効果】以上のように、この発明によると、強い
試験管内タンパク質合成阻害活性を有し、ミサイル療法
における細胞毒性を有する物質として利用したり、農業
等の分野におけるウィルス病の防除に利用することがで
きるルフィンをコ−ドする遺伝子が提供される。この遺
伝子を、大腸菌等の微生物に導入することにより、ルフ
ィンを安定に産生させることができる。
試験管内タンパク質合成阻害活性を有し、ミサイル療法
における細胞毒性を有する物質として利用したり、農業
等の分野におけるウィルス病の防除に利用することがで
きるルフィンをコ−ドする遺伝子が提供される。この遺
伝子を、大腸菌等の微生物に導入することにより、ルフ
ィンを安定に産生させることができる。
【００４６】［配列表］
配列番号：１
配列の長さ：８３４
配列の型：核酸
鎖の数：二本鎖
トポロジ−：直鎖状
配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘチマ 配列の特徴 存在位置： １−６０ シグナルペプチドコ−ド領域６１
−８０１ 成熟型ルフィン −ｆコ−ド領域８０
２−８３４ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ド領域
特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡ ＴＴＴ ＡＣＡ ＧＴＧ Ｃ
ＴＡ ＡＴＴ ＣＴＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＴＴＣ ＧＴ
Ｔ ＧＣＡ ＧＣＴ ４５Ｍｅｔ Ｌ
ｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｉｌ
ｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ −２０
−１５ −１０ Ｔ
ＣＡ ＡＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＣＣ ＧＡＴ ＧＴ
Ｇ ＡＧＧ ＴＴＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ
ＴＣＴ ＴＣＣ ９０Ｓｅｒ Ｔｈ
ｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ
Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ｓｅｒ −５
１ ５
１０ ＴＣＣ ＡＣＡ ＴＣＴ
ＴＡＴ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＧＧＡ
ＧＡＴ ＣＴＧ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＣＡ ＣＴＴ
１３５Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ
Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｌ
ｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ
１５
２０
２５ ＣＣＡ ＴＣＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＡＣＡ Ｇ
ＴＣ ＴＡＣ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＴ ＣＴＣ ＴＴ
Ａ ＣＴＣ ＴＣＣ ＴＣＴ １８０Ｐ
ｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙ
ｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ
３０ ３５
４０ ＧＣＴ ＴＣ
Ｇ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＡＣＴ
ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＴ
ＴＡＣ ２２５Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ
４５
５０
５５ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＡＡ ＧＣＣ
ＡＴＣ ＡＣＧ ＧＴＴ ＧＣＴ ＧＴＡ ＧＡＴ Ｇ
ＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＡＣ
２７０Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔ
ｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｙｒ
６０
６５ ７０ Ａ
ＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＡ
Ｔ ＴＣＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ
ＡＡＣ ＧＡＧ ３１５Ｉｌｅ Ｍｅ
ｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ
Ｇｌｕ ７５
８０
８５ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＣＴ
ＡＡＡ ＴＴＡ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡＡ ＴＡＣ
ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＡＣＣ
３６０Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
９０
９５
１００ ＡＴＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＣＴＴ ＣＣＡ Ｔ
ＡＴ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＡ ＡＡ
Ｇ ＣＴＴ ＣＡＡ ＡＣＴ ４０５Ｉ
ｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ
１０５ １１０
１１５ ＧＣＴ ＧＣ
Ａ ＧＧＣ ＡＡＧ ＡＴＡ ＡＧＡ ＧＡＧ ＡＡＧ
ＡＴＴ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＴＣ ＣＣＡ
ＧＣＴ ４５０Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ
Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｌａ
１２０
１２５
１３０ ＴＴＧ ＧＡＣ ＡＧＴ ＧＣＧ
ＡＴＴ ＡＣＣ ＡＣＣ ＴＴＧ ＴＴＴ ＣＡＴ Ｔ
ＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ ＡＣＧ ＧＣＴ
４９５Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔ
ｈｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓ
ｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ
１３５
１４０ １４５ Ｇ
ＣＴ ＧＣＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＴＴＣ ＣＴＣ ＧＴ
Ａ ＡＴＣ ＡＴＴ ＣＡＧ ＡＣＣ ＡＣＴ ＧＣＴ
ＧＡＧ ＧＣＴ ５４０Ａｌａ Ａｌ
ａ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ａｌａ １５０
１５５
１６０ ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ
ＡＡＧ ＴＡＴ ＡＴＣ ＧＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ
ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧＡ ＡＴＴ ＴＣＧ
５８５Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｉ
ｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
１６５
１７０
１７５ ＡＡＡ ＡＡＣ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ Ａ
ＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＧＴ ＴＴ
Ａ ＧＡＡ ＡＡＣ ＧＡＡ ６３０Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ｇｌｕ
１８０ １８５
１９０ ＴＧＧ ＴＣ
Ｔ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＴ
ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＣＡ ＣＡＧ ＡＣＧ ＡＡＴ
ＡＡＣ ６７５Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｓｎ
１９５
２００
２０５ ＧＧＡ ＡＣＧ ＴＴＴ ＡＡＡ
ＡＣＴ ＣＣＣ ＧＴＴ ＧＴＧ ＡＴＡ ＡＣＧ Ｇ
ＡＣ ＧＡＴ ＡＡＡ ＧＧＣ ＣＡＡ
７２０Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐ
ｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓ
ｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
２１０
２１５ ２２０ Ｃ
ＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ ＡＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴ
Ｔ ＡＣＧ ＴＣＧ ＡＡＡ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ
ＡＡＧ ＡＡＣ ７６５Ａｒｇ Ｖａ
ｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｙｓ
Ａｓｎ ２２５
２３０
２３５ ＡＴＣ ＣＡＡ ＴＴＧ
ＣＴＴ ＣＴＡ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ
ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＣＧ ＧＣＴ ＴＴＴ ＧＡＣ
８１０Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｖ
ａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ
２４０
２４５
２５０ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＣＡ Ａ
ＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ
８３４Ｇ
ｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｈｉ
ｓ ＥＮＤ ２５５
配列番号：２ 配列の長さ：８３７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘリマ 配列の特徴 存在位置： １−５３ ジグナルペプチドコ−ド領域７１−８
０４ 成熟型ルフィン −ｇコ−ド領域８０５−８３
７ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ト領域特徴を決定し
た方法：Ｅ 配列 ＡＴＧ ＡＡＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＣＡ ＴＴＴ Ｃ
ＴＣ ＴＣＴ ＴＴＧ ＣＴＡ ＡＴＡ ＡＴＴ ＣＴ
Ｃ ＡＴＴ ＧＣＴ ４５ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ −２
０ −１５
−１０
ＴＴＣ ＴＴＴ Ａ
ＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＧＴ ＧＣＴ ＡＡＴ ＧＴ
Ｇ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＧ ＧＧＧ
９０ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
−５
１
５
ＧＣＴ ＧＡＴ ＴＣＣ ＡＡＡ ＴＣ
Ｃ ＴＡＣ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＡＣＡ
ＧＣＴ ＣＴＧ ＡＧＧ ＡＡＧ １
３５ Ａｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔ
ｙｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｌ
ａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ
１０ １５
２０
ＧＣ
Ｔ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＣＴ ＡＡＧ ＧＡＧ ＡＡＡ
ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＡＴ ＡＴＡ ＣＣＴ ＣＴＡ
ＴＴＧ ＣＴＴ １８０ Ａｌａ Ｌ
ｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｖａ
ｌ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ ２５
３０
３５
ＣＣＡ ＴＣＣ ＧＣＴ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＧＴ ＣＧＣ ＴＡＣ
ＡＴＡ ＣＴＡ ＡＴＧ ＣＡＡ ＣＴＣ ＴＣＣ
２２５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ
４０
４５ ５
０
ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＧＣＣ ＡＡＡ
ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＣＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＡＴＡ Ｇ
ＡＴ ＧＴＡ ＡＣＡ ＡＡＣ ２７０
Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｌａ
Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｐ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｎ
５５ ６０
６５
ＧＴＴ
ＴＡＣ ＡＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ＣＴＴ Ｇ
ＴＣ ＡＡＴ ＴＣＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴ
Ｔ ＴＴＣ ３１５ Ｖａｌ Ｔｙｒ
Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐ
ｈｅ ７０
７５
８０
ＡＡＣ ＧＡＧ ＴＣＴ Ｇ
ＡＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＣＴＡ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡ
Ａ ＴＡＣ ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＴ
３６０ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔ
ｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ
８５
９０ ９５
ＡＧＴ ＡＣＣ ＡＴＣ ＧＴＴ ＡＣＡ ＣＴ
Ｔ ＣＣＡ ＴＡＴ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ
ＧＡＡ ＡＧＧ ＣＴＴ ４０５
Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐ
ｒｏ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌ
ｕ Ａｒｇ Ｌｅｕ １００
１０５
１１０
ＣＡＡ ＡＡ
Ｔ ＧＣＴ ＧＣＡ ＧＧＣ ＡＡＡ ＧＴＧ ＡＧＡ
ＧＡＡ ＡＡＡ ＡＴＴ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ
ＴＴＣ ４５０ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａ
ｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｇｌ
ｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
１１５
１２０
１２５
ＣＧＡ ＧＣＴ ＴＴＣ ＧＡＣ
ＡＧＴ ＧＣＡ ＡＴＴ ＡＣＣ ＴＣＣ ＴＴＧ
ＴＴＴ ＣＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ
４９５ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｓｅ
ｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ
Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ
１３０ １
３５ １４０
ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＧＧ ＧＣＡ
ＴＴＴ ＣＴＣ ＧＴＡ ＡＴＣ ＡＴＴ ＣＡＧ Ａ
ＣＣ ＡＣＴ ＧＣＴ ５４０ Ｔｈ
ｒ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ
Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ １４５
１５０
１５５
ＧＡＧ ＧＣＴ
ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＡＧ ＴＡＣ ＡＴＴ Ｇ
ＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧ
Ａ ５８５ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ
１６０
１６５
１７０
ＡＴＴ ＣＣＣ ＡＡＡ ＡＡＣ Ｇ
ＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＣＡ ＧＣＧ ＧＣ
Ｔ ＣＴＡ ＡＧＴ ＴＴＡ ＧＡＡ
６３０ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｌ
ｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
１７５ １８０
１８５
Ａ
ＡＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＴＣＴ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣ
Ｃ ＡＡＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＣＡＡ ＴＴＡ ＧＣＡ
ＣＡＡ ＡＣＴ ６７５ Ａｓｎ
Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌ
ｎ Ｔｈｒ １９０
１９５
２００
ＡＡＣ ＡＡＣ ＧＧ
Ａ ＧＣＧ ＴＴＴ ＡＧＡ ＡＣＴ ＣＣＣ ＧＴＴ
ＧＴＧ ＡＴＴ ＡＴＡ ＧＡＣ ＡＡＴ ＡＡＡ
７２０ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａ
ｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｌｙｓ
２０５
２１０ ２
１５
ＧＧＣ ＣＡＡ ＣＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ
ＡＴＡ ＡＡＧ ＧＡＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＴＣＡ
ＡＡＡ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ７６
５ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌ
ｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｖａｌ Ｔｈｒ
２２０ ２２５
２３０
ＡＡＣ
ＡＡＣ ＡＴＣ ＡＡＧ ＴＴＧ ＣＴＴ ＣＴＡ
ＡＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＡＴ ＡＴＴ ＧＣＡ Ｇ
ＣＴ ＴＴＴ ８１０ Ａｓｎ Ａｓ
ｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｌａ
Ｐｈｅ ２３５
２４０
２４５
ＧＡＣ ＧＡＴ ＧＧＴ
ＡＴＴ ＣＣＴ ＡＣＡ ＡＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ
８３７ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｅｎｄ ２５０
２５５ 配列番号：
３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジ−：直線状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列の特徴 特徴を決定した方法：Ｓ 他の情報：ルフィン −ａの５４番目から６０番目まで
のアミノ酸配列より類推される塩基配列 配列 ＡＡＹＴＡＹＧＡＹＧ ＧＮＡＡＲＧＣＮＡＴ
２０配列番号：４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ ハイポセティカル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｙｅｓ 配列の特徴：ルフィン −ａの ２４２番目から ２４
８番目までのアミノ酸配列より類推される塩基配列に相
補的な塩基配列 配列 ＧＣＮＡＣＲＴＴＹＴ ＧＹＴＴＲＴＡＲＴＴ
２０配列番号：５ 配列の長さ：１０２６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘチマ 配列の特徴 存在位置： １−７ ５´末端非翻訳領域８−６７
シグナルペプチドコ−ド領域６８−８０８
成熟型ルフィン −ｆコ−ド領域８０９−８４１
Ｃ末端エクストラペプチドコ−ド領域８４２−１０
２６ ３´末端非翻訳領域特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＧＧＧＡＡＡＧ ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡ ＴＴＴ Ａ
ＣＡ ＧＴＧ ＣＴＡ ＡＴＴ ＣＴＣ ＧＣＣ ＡＴ
Ｃ ＴＴＣ ＧＴＴ ＧＣＡ ４９
Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｐｈｅ
Ｖａｌ Ａｌａ −２０
−１５
−１０ ＧＣＴ ＴＣＡ ＡＣＴ ＧＴ
Ｔ ＧＡＡ ＧＣＣ ＧＡＴ ＧＴＧ ＡＧＧ ＴＴＣ
ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＴＣＴ ＴＣＣ
９７Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
−５ １
５
１０ ＴＣＣ ＡＣＡ ＴＣＴ ＴＡＴ
ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＧＧＡ ＧＡＴ Ｃ
ＴＧ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＣＡ ＣＴＴ ＣＣＡ
１４５Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｒ
ｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｒｏ
１５
２０
２５ ＴＣＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＡＣＡ ＧＴＣ ＴＡ
Ｃ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＴ ＣＴＣ ＴＴＡ ＣＴＣ
ＴＣＣ ＴＣＴ ＧＣＴ ＴＣＧ １９３Ｓｅ
ｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｎ
Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ
Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ
３０ ３５
４０ ＧＧＣ ＧＣＡ
ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＡＣＴ ＣＴＣ ＡＴＧ
ＡＣＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ Ｇ
ＧＣ ＡＡＡ ２４１Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌ
ｅｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙ
ｓ ４５
５０
５５ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＣＧ ＧＴＴ ＧＣＴ Ｇ
ＴＡ ＧＡＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＡ
Ｃ ＡＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ２８９Ａ
ｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓ
ｐ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ ６０
６５
７０ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＡＴ ＴＣ
Ａ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＡＡＣ
ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＴＴＡ
３３７Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ７５
８０
８５
９０ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡＡ ＴＡＣ
ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＡＣＣ Ａ
ＴＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＡＴ
３８５Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａ
ｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ
９５
１００ １
０５ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＡ ＡＡ
Ｇ ＣＴＴ ＣＡＡ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＡ ＧＧＣ
ＡＡＧ ＡＴＡ ＡＧＡ ＧＡＧ ４３３Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｙｓ
Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｕ １
１０ １１５
１２０ ＡＡＧ ＡＴＴ
ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＴＣ ＣＣＡ ＧＣＴ
ＴＴＧ ＧＡＣ ＡＧＴ ＧＣＧ ＡＴＴ ＡＣＣ Ａ
ＣＣ ＴＴＧ ４８１Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａ
ｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｅ
ｕ １２５
１３０
１３５ ＴＴＴ ＣＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ Ａ
ＣＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＴＴ
Ｃ ＣＴＣ ＧＴＡ ＡＴＣ ＡＴＴ ５２９Ｐ
ｈｅ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌ
ａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ １４０
１４５
１５０ ＣＡＧ ＡＣＣ ＡＣＴ ＧＣ
Ｔ ＧＡＧ ＧＣＴ ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＡＧ
ＴＡＴ ＡＴＣ ＧＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ ＡＴＴ
５７７Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ １５５
１６０
１６５
１７０ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧＡ ＡＴＴ
ＴＣＧ ＡＡＡ ＡＡＣ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ Ａ
ＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＧＴ
６２５Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
１７５
１８０ １
８５ ＴＴＡ ＧＡＡ ＡＡＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＴＣ
Ｔ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＴ
ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＣＡ ＣＡＧ ６７３Ｌｅ
ｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ １
９０ １９５
２００ ＡＣＧ ＡＡＴ
ＡＡＣ ＧＧＡ ＡＣＧ ＴＴＴ ＡＡＡ ＡＣＴ
ＣＣＣ ＧＴＴ ＧＴＧ ＡＴＡ ＡＣＧ ＧＡＣ Ｇ
ＡＴ ＡＡＡ ７２１Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖ
ａｌ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｌｙ
ｓ ２０５
２１０
２１５ ＧＧＣ ＣＡＡ ＣＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ Ａ
ＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＡＣＧ ＴＣＧ ＡＡ
Ａ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＡＧ ７６９Ｇ
ｌｙ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｈ
ｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ２２０
２２５
２３０ ＡＡＣ ＡＴＣ ＣＡＡ ＴＴ
Ｇ ＣＴＴ ＣＴＡ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ
ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＣＧ ＧＣＴ ＴＴＴ ＧＡＣ
８１７Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ
Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ ２３５
２４０
２４５
２５０ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＣＴ
ＧＣＡ ＡＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ ＧＡＧＣＣＴＣＧＧ
Ａ ＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧ ＴＧＴＡＴＴＧＧＧＡ
８７１Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌ
ｙｓ Ｈｉｓ ＥＮＤ
２５５ ＧＴＴＴＡＡＴＧＣＴ ＣＴＴＧＴＣＡＡ
ＡＡ ＴＡＡＡＡＧＣＡＴＧ ＴＴＣＡＴＧＴＧＡＴ
ＣＴＡＡＣＴＡＣＧＴ ＧＡＧＴＧＣＴＣＴＧ
９３１ＴＡＴＣＴＣＴＧＴＴ ＴＴＧＴＴＴＣＴＴＴ
ＡＡＡＡＡＡＴＣＡＡ ＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣ ＴＴＡ
ＧＡＡＡＡＴＧ ＴＴＣＡＴＣＴＣＴＣ ９９１
ＴＣＴＴＡＴＡＴＡＴ ＡＴＡＴＡＴＡＴＣＡ ＧＴＴ
ＣＴＴＴＣＴＴ ＴＧＴＴＣ−−−ｐｏｌｙ（Ａ）
１０２６配列番
号：６ 配列の長さ：９１４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘリマ 配列の特徴 存在位置： １−７ ５´末端非翻訳領域 ８−７０ ジグナルペプチドコ−ド領域７１−８
１１ 成熟型ルフィン −ｇコ−ド領域８１２−８４
４ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ト領域８４５−９１
４ ３´末端非翻訳領域 特徴を決定した方法：Ｅ 配列
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘチマ 配列の特徴 存在位置： １−６０ シグナルペプチドコ−ド領域６１
−８０１ 成熟型ルフィン −ｆコ−ド領域８０
２−８３４ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ド領域
特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡ ＴＴＴ ＡＣＡ ＧＴＧ Ｃ
ＴＡ ＡＴＴ ＣＴＣ ＧＣＣ ＡＴＣ ＴＴＣ ＧＴ
Ｔ ＧＣＡ ＧＣＴ ４５Ｍｅｔ Ｌ
ｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ｉｌ
ｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｐｈｅ Ｖａｌ Ａｌａ
Ａｌａ −２０
−１５ −１０ Ｔ
ＣＡ ＡＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＣＣ ＧＡＴ ＧＴ
Ｇ ＡＧＧ ＴＴＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ
ＴＣＴ ＴＣＣ ９０Ｓｅｒ Ｔｈ
ｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ
Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ
Ｓｅｒ −５
１ ５
１０ ＴＣＣ ＡＣＡ ＴＣＴ
ＴＡＴ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＧＧＡ
ＧＡＴ ＣＴＧ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＣＡ ＣＴＴ
１３５Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ
Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｌ
ｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ
１５
２０
２５ ＣＣＡ ＴＣＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＡＣＡ Ｇ
ＴＣ ＴＡＣ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＴ ＣＴＣ ＴＴ
Ａ ＣＴＣ ＴＣＣ ＴＣＴ １８０Ｐ
ｒｏ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙ
ｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｓｅｒ
３０ ３５
４０ ＧＣＴ ＴＣ
Ｇ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＡＣＴ
ＣＴＣ ＡＴＧ ＡＣＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＴ
ＴＡＣ ２２５Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ
Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ
４５
５０
５５ ＧＡＣ ＧＧＣ ＡＡＡ ＧＣＣ
ＡＴＣ ＡＣＧ ＧＴＴ ＧＣＴ ＧＴＡ ＧＡＴ Ｇ
ＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＡＣ
２７０Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔ
ｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｔｈ
ｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｙｒ
６０
６５ ７０ Ａ
ＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＡ
Ｔ ＴＣＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ
ＡＡＣ ＧＡＧ ３１５Ｉｌｅ Ｍｅ
ｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ
Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ
Ｇｌｕ ７５
８０
８５ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＣＴ
ＡＡＡ ＴＴＡ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡＡ ＴＡＣ
ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＡＣＣ
３６０Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
９０
９５
１００ ＡＴＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＣＴＴ ＣＣＡ Ｔ
ＡＴ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＡ ＡＡ
Ｇ ＣＴＴ ＣＡＡ ＡＣＴ ４０５Ｉ
ｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ
１０５ １１０
１１５ ＧＣＴ ＧＣ
Ａ ＧＧＣ ＡＡＧ ＡＴＡ ＡＧＡ ＧＡＧ ＡＡＧ
ＡＴＴ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＴＣ ＣＣＡ
ＧＣＴ ４５０Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ
Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ
Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｌａ
１２０
１２５
１３０ ＴＴＧ ＧＡＣ ＡＧＴ ＧＣＧ
ＡＴＴ ＡＣＣ ＡＣＣ ＴＴＧ ＴＴＴ ＣＡＴ Ｔ
ＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ ＡＣＧ ＧＣＴ
４９５Ｌｅｕ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔ
ｈｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓ
ｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌａ
１３５
１４０ １４５ Ｇ
ＣＴ ＧＣＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＴＴＣ ＣＴＣ ＧＴ
Ａ ＡＴＣ ＡＴＴ ＣＡＧ ＡＣＣ ＡＣＴ ＧＣＴ
ＧＡＧ ＧＣＴ ５４０Ａｌａ Ａｌ
ａ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ
Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ａｌａ １５０
１５５
１６０ ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ
ＡＡＧ ＴＡＴ ＡＴＣ ＧＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ
ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧＡ ＡＴＴ ＴＣＧ
５８５Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ
Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｉ
ｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
１６５
１７０
１７５ ＡＡＡ ＡＡＣ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ Ａ
ＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＧＴ ＴＴ
Ａ ＧＡＡ ＡＡＣ ＧＡＡ ６３０Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
Ａｓｎ Ｇｌｕ
１８０ １８５
１９０ ＴＧＧ ＴＣ
Ｔ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＴ
ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＣＡ ＣＡＧ ＡＣＧ ＡＡＴ
ＡＡＣ ６７５Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｓｎ
１９５
２００
２０５ ＧＧＡ ＡＣＧ ＴＴＴ ＡＡＡ
ＡＣＴ ＣＣＣ ＧＴＴ ＧＴＧ ＡＴＡ ＡＣＧ Ｇ
ＡＣ ＧＡＴ ＡＡＡ ＧＧＣ ＣＡＡ
７２０Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐ
ｒｏ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓ
ｐ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｇｌｎ
２１０
２１５ ２２０ Ｃ
ＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ ＡＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴ
Ｔ ＡＣＧ ＴＣＧ ＡＡＡ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ
ＡＡＧ ＡＡＣ ７６５Ａｒｇ Ｖａ
ｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ
Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｙｓ
Ａｓｎ ２２５
２３０
２３５ ＡＴＣ ＣＡＡ ＴＴＧ
ＣＴＴ ＣＴＡ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ
ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＣＧ ＧＣＴ ＴＴＴ ＧＡＣ
８１０Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｖ
ａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ
２４０
２４５
２５０ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＣＴ ＧＣＡ Ａ
ＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ
８３４Ｇ
ｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｈｉ
ｓ ＥＮＤ ２５５
配列番号：２ 配列の長さ：８３７ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘリマ 配列の特徴 存在位置： １−５３ ジグナルペプチドコ−ド領域７１−８
０４ 成熟型ルフィン −ｇコ−ド領域８０５−８３
７ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ト領域特徴を決定し
た方法：Ｅ 配列 ＡＴＧ ＡＡＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＣＡ ＴＴＴ Ｃ
ＴＣ ＴＣＴ ＴＴＧ ＣＴＡ ＡＴＡ ＡＴＴ ＣＴ
Ｃ ＡＴＴ ＧＣＴ ４５ Ｍｅｔ
Ａｓｎ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ｉ
ｌｅ Ａｌａ −２
０ −１５
−１０
ＴＴＣ ＴＴＴ Ａ
ＣＴ ＧＴＴ ＧＡＡ ＧＧＴ ＧＣＴ ＡＡＴ ＧＴ
Ｇ ＡＧＣ ＴＴＣ ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＧ ＧＧＧ
９０ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ｔｈｒ
Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ａｌａ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｓ
ｅｒ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ
−５
１
５
ＧＣＴ ＧＡＴ ＴＣＣ ＡＡＡ ＴＣ
Ｃ ＴＡＣ ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＡＣＡ
ＧＣＴ ＣＴＧ ＡＧＧ ＡＡＧ １
３５ Ａｌａ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｓｅｒ Ｔ
ｙｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｌ
ａ Ｌｅｕ Ａｒｇ Ｌｙｓ
１０ １５
２０
ＧＣ
Ｔ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＣＴ ＡＡＧ ＧＡＧ ＡＡＡ
ＧＴＧ ＴＣＣ ＡＡＴ ＡＴＡ ＣＣＴ ＣＴＡ
ＴＴＧ ＣＴＴ １８０ Ａｌａ Ｌ
ｅｕ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｖａ
ｌ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ ２５
３０
３５
ＣＣＡ ＴＣＣ ＧＣＴ
ＴＣＣ ＧＧＣ ＧＣＡ ＡＧＴ ＣＧＣ ＴＡＣ
ＡＴＡ ＣＴＡ ＡＴＧ ＣＡＡ ＣＴＣ ＴＣＣ
２２５ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｓｅｒ
４０
４５ ５
０
ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＧＣＣ ＡＡＡ
ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＣＡ ＡＴＧ ＧＣＴ ＡＴＡ Ｇ
ＡＴ ＧＴＡ ＡＣＡ ＡＡＣ ２７０
Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ａｌａ
Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｍｅｔ Ａｌａ Ｉｌｅ Ａｓｐ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｎ
５５ ６０
６５
ＧＴＴ
ＴＡＣ ＡＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ＣＴＴ Ｇ
ＴＣ ＡＡＴ ＴＣＡ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴ
Ｔ ＴＴＣ ３１５ Ｖａｌ Ｔｙｒ
Ｉｌｅ Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ
Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐ
ｈｅ ７０
７５
８０
ＡＡＣ ＧＡＧ ＴＣＴ Ｇ
ＡＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＣＴＡ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡ
Ａ ＴＡＣ ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＴ
３６０ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｓｅｒ Ａｓｐ
Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔ
ｙｒ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ
８５
９０ ９５
ＡＧＴ ＡＣＣ ＡＴＣ ＧＴＴ ＡＣＡ ＣＴ
Ｔ ＣＣＡ ＴＡＴ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ
ＧＡＡ ＡＧＧ ＣＴＴ ４０５
Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐ
ｒｏ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌ
ｕ Ａｒｇ Ｌｅｕ １００
１０５
１１０
ＣＡＡ ＡＡ
Ｔ ＧＣＴ ＧＣＡ ＧＧＣ ＡＡＡ ＧＴＧ ＡＧＡ
ＧＡＡ ＡＡＡ ＡＴＴ ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ
ＴＴＣ ４５０ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ａ
ｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｙｓ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｇｌ
ｕ Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ
１１５
１２０
１２５
ＣＧＡ ＧＣＴ ＴＴＣ ＧＡＣ
ＡＧＴ ＧＣＡ ＡＴＴ ＡＣＣ ＴＣＣ ＴＴＧ
ＴＴＴ ＣＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ
４９５ Ａｒｇ Ａｌａ Ｐｈｅ Ａｓｐ Ｓｅ
ｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｐｈｅ
Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ
１３０ １
３５ １４０
ＡＣＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＧＧ ＧＣＡ
ＴＴＴ ＣＴＣ ＧＴＡ ＡＴＣ ＡＴＴ ＣＡＧ Ａ
ＣＣ ＡＣＴ ＧＣＴ ５４０ Ｔｈ
ｒ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ａｌａ Ｐｈｅ
Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｔｈｒ
Ｔｈｒ Ａｌａ １４５
１５０
１５５
ＧＡＧ ＧＣＴ
ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＡＧ ＴＡＣ ＡＴＴ Ｇ
ＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧ
Ａ ５８５ Ｇｌｕ Ａｌａ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ｇｌｕ
Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ
１６０
１６５
１７０
ＡＴＴ ＣＣＣ ＡＡＡ ＡＡＣ Ｇ
ＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ ＡＧＴ ＣＣＡ ＧＣＧ ＧＣ
Ｔ ＣＴＡ ＡＧＴ ＴＴＡ ＧＡＡ
６３０ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ｌｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｐｒｏ Ａｌａ Ａｌａ Ｌ
ｅｕ Ｓｅｒ Ｌｅｕ Ｇｌｕ
１７５ １８０
１８５
Ａ
ＡＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＴＣＴ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣ
Ｃ ＡＡＡ ＣＡＧ ＡＴＴ ＣＡＡ ＴＴＡ ＧＣＡ
ＣＡＡ ＡＣＴ ６７５ Ａｓｎ
Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌ
ｎ Ｔｈｒ １９０
１９５
２００
ＡＡＣ ＡＡＣ ＧＧ
Ａ ＧＣＧ ＴＴＴ ＡＧＡ ＡＣＴ ＣＣＣ ＧＴＴ
ＧＴＧ ＡＴＴ ＡＴＡ ＧＡＣ ＡＡＴ ＡＡＡ
７２０ Ａｓｎ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ａ
ｌａ Ｐｈｅ Ａｒｇ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖａｌ Ｖａ
ｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ Ａｓｐ Ａｓｎ Ｌｙｓ
２０５
２１０ ２
１５
ＧＧＣ ＣＡＡ ＣＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ
ＡＴＡ ＡＡＧ ＧＡＣ ＧＴＴ ＡＡＴ ＴＣＡ
ＡＡＡ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ７６
５ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌ
ｅ Ｌｙｓ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｌｙｓ
Ｖａｌ Ｖａｌ Ｔｈｒ
２２０ ２２５
２３０
ＡＡＣ
ＡＡＣ ＡＴＣ ＡＡＧ ＴＴＧ ＣＴＴ ＣＴＡ
ＡＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＡＴ ＡＴＴ ＧＣＡ Ｇ
ＣＴ ＴＴＴ ８１０ Ａｓｎ Ａｓ
ｎ Ｉｌｅ Ｌｙｓ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ Ｉｌｅ Ａｌａ Ａｌａ
Ｐｈｅ ２３５
２４０
２４５
ＧＡＣ ＧＡＴ ＧＧＴ
ＡＴＴ ＣＣＴ ＡＣＡ ＡＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ
８３７ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｉｌｅ
Ｐｒｏ Ｔｈｒ Ｌｙｓ Ｈｉｓ Ｅｎｄ ２５０
２５５ 配列番号：
３ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジ−：直線状 配列の種類：合成ＤＮＡ 配列の特徴 特徴を決定した方法：Ｓ 他の情報：ルフィン −ａの５４番目から６０番目まで
のアミノ酸配列より類推される塩基配列 配列 ＡＡＹＴＡＹＧＡＹＧ ＧＮＡＡＲＧＣＮＡＴ
２０配列番号：４ 配列の長さ：２０ 配列の型：核酸 鎖の数：一本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：合成ＤＮＡ ハイポセティカル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｙｅｓ 配列の特徴：ルフィン −ａの ２４２番目から ２４
８番目までのアミノ酸配列より類推される塩基配列に相
補的な塩基配列 配列 ＧＣＮＡＣＲＴＴＹＴ ＧＹＴＴＲＴＡＲＴＴ
２０配列番号：５ 配列の長さ：１０２６ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘチマ 配列の特徴 存在位置： １−７ ５´末端非翻訳領域８−６７
シグナルペプチドコ−ド領域６８−８０８
成熟型ルフィン −ｆコ−ド領域８０９−８４１
Ｃ末端エクストラペプチドコ−ド領域８４２−１０
２６ ３´末端非翻訳領域特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＧＧＧＡＡＡＧ ＡＴＧ ＡＡＧ ＡＧＡ ＴＴＴ Ａ
ＣＡ ＧＴＧ ＣＴＡ ＡＴＴ ＣＴＣ ＧＣＣ ＡＴ
Ｃ ＴＴＣ ＧＴＴ ＧＣＡ ４９
Ｍｅｔ Ｌｙｓ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｔｈｒ Ｖａ
ｌ Ｌｅｕ Ｉｌｅ Ｌｅｕ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｐｈｅ
Ｖａｌ Ａｌａ −２０
−１５
−１０ ＧＣＴ ＴＣＡ ＡＣＴ ＧＴ
Ｔ ＧＡＡ ＧＣＣ ＧＡＴ ＧＴＧ ＡＧＧ ＴＴＣ
ＡＧＴ ＴＴＧ ＴＣＡ ＧＧＴ ＴＣＴ ＴＣＣ
９７Ａｌａ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ａｓｐ Ｖａｌ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｓｅｒ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｓｅｒ
−５ １
５
１０ ＴＣＣ ＡＣＡ ＴＣＴ ＴＡＴ
ＡＧＣ ＡＡＧ ＴＴＣ ＡＴＣ ＧＧＡ ＧＡＴ Ｃ
ＴＧ ＡＧＧ ＡＡＡ ＧＣＡ ＣＴＴ ＣＣＡ
１４５Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ｐｈｅ Ｉｌｅ Ｇｌｙ Ａｓｐ Ｌｅｕ Ａｒ
ｇ Ｌｙｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｐｒｏ
１５
２０
２５ ＴＣＴ ＡＡＴ ＧＧＧ ＡＣＡ ＧＴＣ ＴＡ
Ｃ ＡＡＣ ＡＴＡ ＡＣＴ ＣＴＣ ＴＴＡ ＣＴＣ
ＴＣＣ ＴＣＴ ＧＣＴ ＴＣＧ １９３Ｓｅ
ｒ Ａｓｎ Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ａｓｎ
Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｌｅｕ Ｓｅｒ
Ｓｅｒ Ａｌａ Ｓｅｒ
３０ ３５
４０ ＧＧＣ ＧＣＡ
ＡＧＣ ＣＧＣ ＴＡＣ ＡＣＴ ＣＴＣ ＡＴＧ
ＡＣＡ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ Ｇ
ＧＣ ＡＡＡ ２４１Ｇｌｙ Ａｌａ Ｓｅｒ
Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｍｅｔ Ｔｈｒ Ｌ
ｅｕ Ｓｅｒ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｇｌｙ Ｌｙ
ｓ ４５
５０
５５ ＧＣＣ ＡＴＣ ＡＣＧ ＧＴＴ ＧＣＴ Ｇ
ＴＡ ＧＡＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＴＡ
Ｃ ＡＴＴ ＡＴＧ ＧＧＣ ＴＡＴ ２８９Ａ
ｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ａｓ
ｐ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｙｒ Ｉｌｅ
Ｍｅｔ Ｇｌｙ Ｔｙｒ ６０
６５
７０ ＣＴＣ ＧＴＣ ＡＡＴ ＴＣ
Ａ ＡＣＡ ＴＣＣ ＴＡＣ ＴＴＣ ＴＴＣ ＡＡＣ
ＧＡＧ ＴＣＴ ＧＡＴ ＧＣＴ ＡＡＡ ＴＴＡ
３３７Ｌｅｕ Ｖａｌ Ａｓｎ Ｓｅｒ Ｔｈｒ
Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｐｈｅ Ｐｈｅ Ａｓｎ Ｇｌｕ
Ｓｅｒ Ａｓｐ Ａｌａ Ｌｙｓ Ｌｅｕ ７５
８０
８５
９０ ＧＣＴ ＴＣＴ ＣＡＡ ＴＡＣ
ＧＴＡ ＴＴＣ ＡＡＡ ＧＧＣ ＡＧＴ ＡＣＣ Ａ
ＴＣ ＧＴＣ ＡＣＧ ＣＴＴ ＣＣＡ ＴＡＴ
３８５Ａｌａ Ｓｅｒ Ｇｌｎ Ｔｙｒ Ｖａｌ Ｐ
ｈｅ Ｌｙｓ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｖａ
ｌ Ｔｈｒ Ｌｅｕ Ｐｒｏ Ｔｙｒ
９５
１００ １
０５ ＴＣＴ ＧＧＣ ＡＡＴ ＴＡＣ ＧＡＡ ＡＡ
Ｇ ＣＴＴ ＣＡＡ ＡＣＴ ＧＣＴ ＧＣＡ ＧＧＣ
ＡＡＧ ＡＴＡ ＡＧＡ ＧＡＧ ４３３Ｓｅ
ｒ Ｇｌｙ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｇｌｕ Ｌｙｓ Ｌｅｕ
Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ａｌａ Ａｌａ Ｇｌｙ Ｌｙｓ
Ｉｌｅ Ａｒｇ Ｇｌｕ １
１０ １１５
１２０ ＡＡＧ ＡＴＴ
ＣＣＡ ＣＴＴ ＧＧＡ ＴＴＣ ＣＣＡ ＧＣＴ
ＴＴＧ ＧＡＣ ＡＧＴ ＧＣＧ ＡＴＴ ＡＣＣ Ａ
ＣＣ ＴＴＧ ４８１Ｌｙｓ Ｉｌｅ Ｐｒｏ
Ｌｅｕ Ｇｌｙ Ｐｈｅ Ｐｒｏ Ａｌａ Ｌｅｕ Ａ
ｓｐ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ｌｅ
ｕ １２５
１３０
１３５ ＴＴＴ ＣＡＴ ＴＡＣ ＧＡＣ ＴＣＣ Ａ
ＣＧ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＴ ＧＣＧ ＧＣＡ ＴＴ
Ｃ ＣＴＣ ＧＴＡ ＡＴＣ ＡＴＴ ５２９Ｐ
ｈｅ Ｈｉｓ Ｔｙｒ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｔｈｒ Ａｌ
ａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ａｌａ Ｐｈｅ Ｌｅｕ
Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｉｌｅ １４０
１４５
１５０ ＣＡＧ ＡＣＣ ＡＣＴ ＧＣ
Ｔ ＧＡＧ ＧＣＴ ＴＣＣ ＡＧＡ ＴＴＣ ＡＡＧ
ＴＡＴ ＡＴＣ ＧＡＧ ＧＧＡ ＣＡＧ ＡＴＴ
５７７Ｇｌｎ Ｔｈｒ Ｔｈｒ Ａｌａ Ｇｌｕ
Ａｌａ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｙｒ
Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ｇｌｙ Ｇｌｎ Ｉｌｅ １５５
１６０
１６５
１７０ ＡＴＴ ＧＡＧ ＡＧＡ ＡＴＴ
ＴＣＧ ＡＡＡ ＡＡＣ ＣＡＧ ＧＴＧ ＣＣＧ Ａ
ＧＴ ＣＴＧ ＧＣＧ ＡＣＴ ＡＴＡ ＡＧＴ
６２５Ｉｌｅ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｉｌｅ Ｓｅｒ Ｌ
ｙｓ Ａｓｎ Ｇｌｎ Ｖａｌ Ｐｒｏ Ｓｅｒ Ｌｅ
ｕ Ａｌａ Ｔｈｒ Ｉｌｅ Ｓｅｒ
１７５
１８０ １
８５ ＴＴＡ ＧＡＡ ＡＡＣ ＧＡＡ ＴＧＧ ＴＣ
Ｔ ＧＣＴ ＣＴＣ ＴＣＣ ＡＡＡ ＣＡＡ ＡＴＴ
ＣＡＧ ＴＴＧ ＧＣＡ ＣＡＧ ６７３Ｌｅ
ｕ Ｇｌｕ Ａｓｎ Ｇｌｕ Ｔｒｐ Ｓｅｒ Ａｌａ
Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ
Ｌｅｕ Ａｌａ Ｇｌｎ １
９０ １９５
２００ ＡＣＧ ＡＡＴ
ＡＡＣ ＧＧＡ ＡＣＧ ＴＴＴ ＡＡＡ ＡＣＴ
ＣＣＣ ＧＴＴ ＧＴＧ ＡＴＡ ＡＣＧ ＧＡＣ Ｇ
ＡＴ ＡＡＡ ７２１Ｔｈｒ Ａｓｎ Ａｓｎ
Ｇｌｙ Ｔｈｒ Ｐｈｅ Ｌｙｓ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｖ
ａｌ Ｖａｌ Ｉｌｅ Ｔｈｒ Ａｓｐ Ａｓｐ Ｌｙ
ｓ ２０５
２１０
２１５ ＧＧＣ ＣＡＡ ＣＧＡ ＧＴＴ ＧＡＡ Ａ
ＴＡ ＡＣＣ ＡＡＣ ＧＴＴ ＡＣＧ ＴＣＧ ＡＡ
Ａ ＧＴＴ ＧＴＡ ＡＣＣ ＡＡＧ ７６９Ｇ
ｌｙ Ｇｌｎ Ａｒｇ Ｖａｌ Ｇｌｕ Ｉｌｅ Ｔｈ
ｒ Ａｓｎ Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｓｅｒ Ｌｙｓ Ｖａｌ
Ｖａｌ Ｔｈｒ Ｌｙｓ ２２０
２２５
２３０ ＡＡＣ ＡＴＣ ＣＡＡ ＴＴ
Ｇ ＣＴＴ ＣＴＡ ＡＡＴ ＴＡＣ ＡＡＡ ＣＡＡ
ＡＡＴ ＧＴＴ ＧＣＧ ＧＣＴ ＴＴＴ ＧＡＣ
８１７Ａｓｎ Ｉｌｅ Ｇｌｎ Ｌｅｕ Ｌｅｕ
Ｌｅｕ Ａｓｎ Ｔｙｒ Ｌｙｓ Ｇｌｎ Ａｓｎ
Ｖａｌ Ａｌａ Ｖａｌ Ｐｈｅ Ａｓｐ ２３５
２４０
２４５
２５０ ＧＡＧ ＧＡＴ ＧＴＴ ＴＣＴ
ＧＣＡ ＡＡＡ ＣＡＣ ＴＧＡ ＧＡＧＣＣＴＣＧＧ
Ａ ＧＴＣＴＧＴＴＧＴＧ ＴＧＴＡＴＴＧＧＧＡ
８７１Ｇｌｕ Ａｓｐ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ａｌａ Ｌ
ｙｓ Ｈｉｓ ＥＮＤ
２５５ ＧＴＴＴＡＡＴＧＣＴ ＣＴＴＧＴＣＡＡ
ＡＡ ＴＡＡＡＡＧＣＡＴＧ ＴＴＣＡＴＧＴＧＡＴ
ＣＴＡＡＣＴＡＣＧＴ ＧＡＧＴＧＣＴＣＴＧ
９３１ＴＡＴＣＴＣＴＧＴＴ ＴＴＧＴＴＴＣＴＴＴ
ＡＡＡＡＡＡＴＣＡＡ ＧＴＧＴＧＧＡＧＴＣ ＴＴＡ
ＧＡＡＡＡＴＧ ＴＴＣＡＴＣＴＣＴＣ ９９１
ＴＣＴＴＡＴＡＴＡＴ ＡＴＡＴＡＴＡＴＣＡ ＧＴＴ
ＣＴＴＴＣＴＴ ＴＧＴＴＣ−−−ｐｏｌｙ（Ａ）
１０２６配列番
号：６ 配列の長さ：９１４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジ−：直鎖状 配列の種類：ｃＤＮＡ ｔｏ ｍＲＮＡハイポセティカ
ル配列：Ｎｏ アンチセンス：Ｎｏ 起源 生物名：ルファ・シリンドリカ（Ｌｕｆｆａ ｃｙｌｉ
ｎｄｒｉｃａ）個体・単離生物名：ヘリマ 配列の特徴 存在位置： １−７ ５´末端非翻訳領域 ８−７０ ジグナルペプチドコ−ド領域７１−８
１１ 成熟型ルフィン −ｇコ−ド領域８１２−８４
４ Ｃ末端エクストラペプチドコ−ト領域８４５−９１
４ ３´末端非翻訳領域 特徴を決定した方法：Ｅ 配列
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8685791A JPH04320687A (ja) | 1991-04-18 | 1991-04-18 | タンパク質ルフィンをコ−ドする遺伝子 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP8685791A JPH04320687A (ja) | 1991-04-18 | 1991-04-18 | タンパク質ルフィンをコ−ドする遺伝子 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04320687A true JPH04320687A (ja) | 1992-11-11 |
Family
ID=13898488
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP8685791A Pending JPH04320687A (ja) | 1991-04-18 | 1991-04-18 | タンパク質ルフィンをコ−ドする遺伝子 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPH04320687A (ja) |
-
1991
- 1991-04-18 JP JP8685791A patent/JPH04320687A/ja active Pending
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