JPH04326316A - 顕微鏡用写真撮影装置 - Google Patents

顕微鏡用写真撮影装置

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JPH04326316A
JPH04326316A JP3097413A JP9741391A JPH04326316A JP H04326316 A JPH04326316 A JP H04326316A JP 3097413 A JP3097413 A JP 3097413A JP 9741391 A JP9741391 A JP 9741391A JP H04326316 A JPH04326316 A JP H04326316A
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JP
Japan
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optical path
shutter
light
fluorescence
illumination
Prior art date
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Withdrawn
Application number
JP3097413A
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English (en)
Inventor
Hiromi Utsunomiya
弘美 宇都宮
Takashi Nagano
長野 隆
Sanenari Kojima
実成 小嶋
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Olympus Corp
Original Assignee
Olympus Optical Co Ltd
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Publication date
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Priority to DE69213300T priority patent/DE69213300T2/de
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    • GPHYSICS
    • G02OPTICS
    • G02BOPTICAL ELEMENTS, SYSTEMS OR APPARATUS
    • G02B21/00Microscopes
    • G02B21/36Microscopes arranged for photographic purposes or projection purposes or digital imaging or video purposes including associated control and data processing arrangements
    • G02B21/365Control or image processing arrangements for digital or video microscopes

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  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Multimedia (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Computer Vision & Pattern Recognition (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Optics & Photonics (AREA)
  • Microscoopes, Condenser (AREA)

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】
【0001】
【産業上の利用分野】本発明は、透過照明用光路と落射
蛍光照明用光路と写真撮影用光路とを備えた顕微鏡の写
真撮影装置に関する。
【0002】
【従来の技術】蛍光顕微鏡は、生物組織や細胞上で蛍光
標識を施した蛋白や遺伝子などを検出するために用いら
れているが、近年では、微弱な蛍光しか発しない物質で
も多重染色などで他の物質との相互位置関係を調べたり
、細胞構造のどの部位に存在するのかを、位相差検鏡法
や微分干渉検鏡法と組合せて調べるという試みがなされ
ている。
【0003】一般に、落射蛍光照明と透過照明を複合し
た顕微鏡写真を撮る場合、両者の検鏡法による明るさの
バランスを取ることは難しく、操作に時間がかかる。そ
のため、操作性が悪いだけでなく、蛍光の褪色が進んで
しまうばかりか、生きた生物標本の場合、標本に与える
損傷が大きくなってしまうという弊害があった。
【0004】本出願人は、特願平2−226275号に
おいて、「透過及び落射同時観察可能な顕微鏡における
自動調光方法」を提案したが、その方法によると、透過
・落射蛍光同時観察時の透過照明と落射蛍光照明の明る
さのバランスを、落射蛍光像の明るさを測定して透過照
明光の明るさを落射蛍光像の明るさレベルに自動的に合
わせるように変化させることによって、取るようにして
いる。しかしながら、この場合、明るさのバランスを取
るためには、先ず落射蛍光照明の下で受光素子による蛍
光の測光を行ない、その測光データに基づいて透過照明
光の光量を調節して同時観察を行うが、透過照明光の調
節中は励起光が標本に当てられたままであるため、その
間に蛍光の褪色が進んでしまう。又、発する蛍光が微量
な場合には落射蛍光撮影時に蛍光が通る光路から透過率
を低下させる光学部材(例えば、微分干渉検鏡を併用す
る場合はアナライザー)を抜き、透過光撮影時には再び
その光学部材を光路中へ挿入するという様なことが行わ
れるが、上記の提案による方法では、それが不可能であ
る。
【0005】
【発明が解決しようとする課題】このように、従来装置
においては、透過光量を調整している時も標本に励起光
が当てられたままであるため蛍光の褪色が進み特に微弱
蛍光検出の場合には問題であり、又透過光と落射蛍光は
標本の種類や蛍光波長特性等の関係で光量バランスを取
るのが難しいため透過光量を設定するのが難しかった。 又シリコンブルーセル等の単一の受光素子でスポット測
光を行う場合には測光部位の位置決めに予め蛍光像を見
なければならないため余分な励起光の照射が必要となり
、又微弱な蛍光を検出するためには微分干渉検鏡用のア
ナライザなど落射蛍光光路を遮る光学部材は少ない方が
よい訳であるが、同時観察の場合は上記のアナライザを
挿入したまま行なわなければならないという不都合があ
った。又透過光量の調節には連続NDフィルタなどの調
節ユニットが必要であり、而もその調整には透過光路内
にある他のフィルタやアナライザの有無に応じて補正の
必要があり、従ってフィルタやアナライザの挿脱に時間
がかかり、その間に蛍光の褪色が進んでしまう等の問題
点があった。
【0006】本発明は、従来技術の有するこのような問
題点に鑑みてなされたものであり、その目的とするとこ
ろは、落射蛍光と透過光との明るさのバランスがとれた
多重露光写真を迅速且つ簡単な操作で撮ることができ、
標本の僅かな蛍光をも検出することが可能で且つ蛍光の
褪色を抑制することのできる、顕微鏡用写真撮影装置を
提供しようとするものである。
【0007】
【課題を解決するための手段】上記目的を達成するため
に、本発明による顕微鏡用写真撮影装置は、落射蛍光と
透過光とによる多重露光写真の撮影時に、落射蛍光光路
中に配置された第一のシャッタを開放して落射蛍光によ
る標本像の明るさを写真撮影用光路上に配置された受光
素子で測定して適正露光値に達した時上記第一のシャッ
タを閉鎖してその測定値を記憶装置に記憶させ、次に透
過光光路中に配置された第二のシャッタを開放するか或
いは光源を点灯するかして透過光による標本像の明るさ
を上記受光素子で測定して上記記憶装置に記憶されてい
る上記測定値に基づいて演算された露光量に達した時上
記第二のシャッタを閉鎖するか或いは上記光源を消灯す
るか或いは上記写真撮影用光路中に配置された第三のシ
ャッタを閉鎖することにより多重露光を終了せしめるよ
うになっている。
【0008】上記第一のシャッタを閉鎖せしめた後落射
蛍光照明光路構成部材と透過光照明光路構成部材が電動
で変換され、その後透過光による露光が開始されるよう
になっている。又、上記受光素子として二次元エリアセ
ンサが用いられ得る。
【0009】
【作用】写真撮影信号により第二のシャッタを閉鎖させ
るか或いは光源を消灯させた後第三のシャッタに続いて
第一のシャッタを開放させて、落射蛍光による露光を開
始させると同時に受光素子により測光を開始させる。測
光値が適正露出値に達した時第一のシャッタを閉鎖させ
、次に第三のシャッタを閉じさせる。続いて落射蛍光照
明光路構成部材と透過光照明光路構成部材とが自動変換
され、第三のシャッタが再び開放される。次に第二のシ
ャッタが開放されるか或いは光源が点灯されて上記受光
素子で測光が行われ、記憶装置に記憶されている先の蛍
光測光データを基に多重露光写真に適したバランスに透
過光の露光量が達した時第二のシャッタが閉鎖されるか
或いは光源が消灯されるか或いは第三のシャッタが閉鎖
され、一回の多重露光が終了せしめられる。第一のシャ
ッタの開閉即ち落射蛍光による写真撮影時の露光量調節
は、ダイオードアレー等による二次元エリアセンサでの
輝度のピーク及びその近傍の測光データに基づいてスポ
ット測光的に行われる。透過光は二次元エリアセンサに
より平均測光されて、蛍光測光データとバランスがとれ
るように演算調節される。
【0010】
【実施例】以下、図示した実施例に基づき本発明を詳細
に説明する。図1において、1は水銀灯等の落射蛍光照
明用光源、2は集光レンズ、3,4はリレーレンズ、5
は励起フィルタ、6はダイクロイックミラーであって、
これらは落射蛍光照明系の一部を構成する。7は対物レ
ンズ、Sは標本、8は落射蛍光観察のための照明光と標
本Sから射出される蛍光とを分離して蛍光のみを透過さ
せる吸収フィルタ、9は鏡筒プリズムである。励起フィ
ルタ5とダイクロイックミラー6と吸収フィルタ9は一
個の蛍光キューブC1 に組み込まれていて、ターレッ
トTにより落射蛍光観察時には図示のように光路中に挿
入されているが、透過光観察時には光路外へ外されるよ
うになっている。
【0011】10はハロゲンランプ等の透過照明用光源
、11は集光用レンズ、12,13はリレーレンズ、1
4は反射ミラー、15はポラライザ、16はウオラスト
ンプリズムの如き微分干渉プリズム、17はコンデンサ
、18は16と同様の微分干渉プリズム、19はアナラ
イザであって、微分干渉プリズム18とアナライザ19
は一個の微分干渉用キューブC2 に組み込まれていて
ターレットTにより光路内に挿入された時、これらは透
過光照明系の一部を構成する。この場合、透過光照明系
は微分干渉検鏡に適するように構成されるが、他の検鏡
法が用いられる場合には、ポラライザ15及び微分干渉
プリズム16は他の光学要素と交換され、又微分干渉プ
リズム18及びアナライザ19はターレットTを回転す
ることにより光路外へ外される。例えば、落射蛍光と透
過位相差検鏡が適用される場合には、対物レンズ7とし
ては位相差リング付きの蛍光位相差対物レンズが使用さ
れ、コンデンサ17としてはリングスリット付きの位相
差用コンデンサが使用される。
【0012】20は写真撮影用接眼レンズ、21は分割
プリズム、22は写真フィルム、23は分割プリズム2
1によって分割された光を受光して露光量を決定するた
めのCCD等による二次元エリアセンサであって、これ
らは写真撮影系を構成する。二次元エリアセンサ23は
、落射蛍光撮影時には輝度のピーク又はその近傍のデー
タをスポット測光的に測定し、又透過光撮影時には平均
測光を行うようになっている。
【0013】SH1 は落射蛍光照明用光路中の例えば
集光レンズ2とリレーレンズ3との間に配置された落射
照明光用シャッタ(第一のシャッタ)、SH2 は透過
照明用光路中の例えば集光レンズ11とリレーレンズ1
2との間に配置された透過照明光用シャッタ(第二のシ
ャッタ)、SH3 は写真撮影用光路中の例えば分割プ
リズム21と写真フィルム22との間に配置された写真
撮影用シャッタ(第三のシャッタ)である。
【0014】24は第一のシャッタSH1 を開閉する
ためのドライバ、25は第二のシャッタSH2 を開閉
するためのドライバ、26は第三のシャッタSH3 を
開閉するためのドライバ、27はターレットTを駆動す
るための駆動モータ、28はモータ27の駆動を制御す
るためのドライバ、29は透過光写真撮影モード,落射
蛍光写真撮影モード及び透過光と落射蛍光との多重光路
写真モードの何れかを選択・指定したり,使用される写
真フィルム22の感度などを入力したり,写真撮影を開
始させたりするための入力部、30は受光素子としての
二次元エリアセンサ23の測定値と比較されるべきデー
タ(使用する写真フィルムの感度毎に必要な露光量)が
記憶されている記憶装置、31は二次元エリアセンサ2
3の測定値と記憶装置30に記憶されているデータとを
比較演算して各シャッタドライバ24,25,26を適
切に駆動させたり,適切なキューブC1 ,C2 ,・
・・・を光路中へ挿入するためターレットドライバ28
を適切に駆動させたり,落射蛍光測光データを一時記憶
してこれと透過光を測光しながら比較演算しシャッタド
ライバー25及び26を適切に駆動させたりするための
各種制御信号を演算出力するCPUである。
【0015】次に上記実施例の作用を説明する。先ず、
電源が投入されると、落射蛍光照明用光源1と透過照明
用光源10とが点灯する。又、電源投入時にはCPU3
1によって装置は透過光観察モードに設定され、シャッ
タSH1 は閉,シャッタSH2 は開,シャッタSH
3 は閉に夫々制御されている。この透過光観察モード
で標本Sのピント合わせ及び観察位置の決定が行われる
【0016】次に、入力部29により透過光と落射蛍光
との多重露光写真撮影モードが設定されると、シャッタ
SH2 が閉に切り換えられる。そして、二次元エリア
センサ23はスポット測光モードとなり、ターレットT
がモータ27により回転せしめられて蛍光キューブC1
 が光路内へ挿入される。次にシャッタSH3 が開と
なり、写真フィルム22の感光面が写真撮影用光路中に
露出される。次にシャッタSH1 が開となって落射蛍
光撮影が開始され、同時に二次元エリアセンサ23での
輝度ピーク或いはその近傍での測光が開始される。記憶
装置30の必要露光量データと比較演算しながら、受光
量がその必要露光量に達したところで、シャッタSH1
 が閉じられる。又、この時の実際の露光データはCP
U31に一時的に記憶され、二次元エリアセンサ23は
平均測光モードに切り換えられる。
【0017】次に、シャッタSH3 が閉となりターレ
ットTが再び駆動されて蛍光キューブC1 が光路から
外され、透過微分干渉光との複合検鏡が行われる場合は
、代わりに透過微分干渉キューブC2 が光路内へ挿入
される。そして、シャッタSH3 が開となり続いてシ
ャッタSH2 が開となって、透過光の露光が開始され
る。同時に二次元エリアセンサ23での平均測光が開始
される。 CPU31にある落射蛍光露光データと比較演算しなが
ら、露光量が必要露光量に達したところで、シャッタS
H2 が閉じられ、続いてシャッタSH3 が閉じられ
て、多重露光写真撮影が終了せしめられる。かくして、
透過光像の明るさと落射光像の明るさのバランスのとれ
た多重写真を得ることができる。
【0018】以上、落射蛍光と透過光による多重露光写
真を撮る場合について説明したが、多重蛍光染色標本に
対応して蛍光の多重複合写真を撮るような場合には、記
憶装置30に一回当たりの必要露光量のデータを記憶さ
せて置き、何回も落射蛍光撮影の行程を繰り返すように
すればよい。
【0019】又、繰り返し操作を行う場合には、各シャ
ッタにその開閉状態をCPU31に知らせるための信号
発生装置を設けて、その制御を円滑に行えるようにする
ことも可能である。
【0020】上記実施例では、第二のシャッタ即ち透過
照明光用シャッタSH2 の開閉をCPU31により適
切に制御するようにしたが、その代わりに透過照明用光
源10とCPU31との間に透過照明用電源装置32を
設けて、CPU31によりこの電源装置32を制御して
透過照明用光源10の点滅を行なわせるようにしてもよ
い。
【0021】
【発明の効果】上述のように、本発明によれば、透過光
及び落射蛍光の多重露光写真を撮影する場合に、透過照
明による標本像の明るさが落射蛍光による標本像の明る
さとバランスするように自動的に調整されるから、観察
モードを切り換えるたびに透過照明光等の微妙な光量調
整を観察者が行う必要がなくなり、操作も簡単に短期間
で行うことができ、また、実際に撮影を行っている蛍光
を測光して露光量を決めたり、二次元エリアセンサを受
光素子に用いてスポット測光的に蛍光を測光するため測
光領域の位置決めを行う必要がなく、撮影時以外に励起
光の照射を行う必要がないことから、標本の蛍光の褪色
を少なくすることができる。また、蛍光撮影と透過光撮
影を分けて行い、それぞれの照明に不必要な光学部材を
光路から自動的に取り除くことが可能であるため、蛍光
撮影時に微弱蛍光も検出でき、より鮮明な多重露光写真
を装置の簡単な開始操作だけで撮影することが可能であ
る。また、透過照明光用シャッタの開閉或いは透過照明
用光源の点滅によって透過照明の調節が行なわれるため
、連続NDフィルタ等の調光部材は不要となる。更に、
写真撮影時に透過光を測光しながら露光時間を決めるよ
うになっているため、CPUに予め透過光路内のフィル
タの有無,絞りの径等の補正データを記憶させ、これを
演算させる必要がない等、きわめて有用な顕微鏡写真撮
影装置を提供することができる。
【図面の簡単な説明】
【図1】本発明に係る顕微鏡用写真撮影装置の一実施の
基本構成を示す図である。
【符号の説明】
1    落射蛍光照明用光源 2,11    集光レンズ 3,4,12,13    リレーレンズ5    励
起フィルタ 6    ダイクロイツクミラー 7    対物レンズ 8    吸収フィルタ 9    鏡筒プリズム 10    透過照明用光源 14    反射ミラー 15    ポラライザ 16,18    微分干渉プリズム 17    コンデンサ 19    アナライザ 20    写真撮影用接眼レンズ 21    分割プリズム 22    写真フィルム 23    二次元エリアセンサ 24,25,26,28    ドライバ27    
駆動モータ 29    入力部 30    記憶装置 31    CPU 32    透過照明用電源装置 C1 ,C 2    キューブ SH1     第一のシャッタ SH2     第二のシャッタ SH3     第三のシャッタ S      標本 T      ターレット

Claims (3)

    【特許請求の範囲】
  1. 【請求項1】  透過照明用光路と、落射蛍光照明用光
    路とを備えた顕微鏡において、落射蛍光と透過光とによ
    る多重露光写真の撮影時に、落射蛍光照明用光路中に配
    置された第一のシャッタを開放して落射蛍光による標本
    像の明るさを写真撮影用光路上に配置された受光素子で
    測定して適正露光量に達した時上記第一のシャッタを閉
    鎖してその測定値を記憶装置に記憶させ、次に透過光の
    光路中に配置された第二のシャッタを開放するか或いは
    光源を点灯するかして透過光による標本像の明るさを上
    記受光素子で測定して上記記憶装置に記憶されている上
    記測定値に基づいて演算された露光量に達した時上記第
    二のシャッタを閉鎖するか或いは上記光源を消灯するか
    或いは上記写真撮影用光路中に配設された第三のシャッ
    タを閉鎖することによって多重露光を終了せしめるよう
    にしたことを特徴とする写真撮影装置。
  2. 【請求項2】  上記第一のシャッタを閉鎖せしめた後
    、落射蛍光照明光路構成部材と透過光照明光路構成部材
    が電動で交換され、その後透過光による露光が開始され
    るようにしたことを特徴とする請求項1に記載の写真撮
    影装置。
  3. 【請求項3】  上記受光素子として二次元エリアセン
    サを用いることを特徴とする、請求項1又は2に記載の
    写真撮影装置。
JP3097413A 1991-04-26 1991-04-26 顕微鏡用写真撮影装置 Withdrawn JPH04326316A (ja)

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