JPH0438399B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕 本発明は、アミノ酸のＮ−カルバミル体から微
生物酵素系を利用して相当するＬ−アミノ酸を製
造する方法に関する。 〔従来の技術〕 従来、微生物酵素系を利用したDL−Ｎ−カル
バミルアミノ酸よりのＬ−アミノ酸の製造方法に
ついては、DL−Ｎ−カルバミルメチオニンより
のＬ−メチオニンよりの製造法が知られている
（特公昭55−29678号）。 〔発明が解決しようとする問題点〕 従来の方法では、Ｄ−Ｎ−カルバミルメチオニ
ンはそのまま残存するため、反応生成液からのＬ
−メチオニンとＤ−Ｎ−カルバミルメチオニンと
の分離を必要とする。 本発明の目的は、Ｄ体及びＬ体に関係なくすべ
てのＮ−カルバミルアミノ酸を、微生物酵素系を
利用して相当するＬ−アミノ酸に変換する、Ｌ−
アミノ酸の製造方法を提供することにある。 〔問題点を解決するための手段〕 本発明を概説すれば、本発明はＬ−アミノ酸の
製造方法に関する発明であつて、フエニルアラニ
ン、トリプトフアン、及びチロシンよりなる群か
ら選択したアミノ酸のＮ−カルバミル体のＬ体、
Ｄ体又はDL体に、アリスロバクター属微生物の
培養液、菌体又は菌体処理物を作用させ、生成し
た相当するＬ−フエニルアラニン、Ｌ−トリプト
フアン、又はＬ−チロシンを採取することを特徴
とする。 本発明方法によれば、Ｄ型のＮ−カルバミル体
も、相当するＬ−アミノ酸に変換することができ
る。 本発明方法で使用する原料の例としては、Ｎ−
カルバミルフエニルアラニン、Ｎ−カルバミルト
リプトフアン及びＮ−カルバミルチロシン等が挙
げられる。これらは、Ｄ、Ｌ及びDL体のいずれ
のものであつてよい。 本発明方法の原料は、公知の物質であるか、公
知の方法によつて得ることができるものであり、
例えばDL−Ｎ−カルバミルアミノ酸は、DL−ア
ミノ酸にシアン化カリウム等を反応させる公知の
方法で、またアミノ酸のDL−ヒダントイン誘導
体を適当な条件で加水分解する方法で得ることが
できる。 次に本発明方法で使用するアリスロバクター属
（Arthrobacter）微生物としては、その培養液を
そのまま用いることもできるが、生菌体、凍結菌
体、凍結乾燥菌体又は菌体磨砕物若しくは菌体抽
出物のような菌体処理物を使用してもよい。ま
た、変異処理により性能の向上した変異株など
も、より効果的に使用できることはいうまでもな
い。 上記アリスロバクター属微生物のうちで好適な
例としては、本発明者等が自然界から新たに分離
した新菌種であるアリスロバクター属DK−200
菌株がある。なお、該DK−200菌株は、
Arthrobacter sp.DK−200（アリスロバクター属）
と表示して、工業技術院微生物工業技術研究所
に、微工研菌寄第7472号（FERM Ｐ−7472）と
して寄託されている。 本発明者等は、先に上記アリスロバクター属
DK−200菌株の培養物等を用いて、５−置換ヒ
ダントインから相当するＬ−アミノ酸を製造する
方法を開発した（特願昭59−70906号）。 以下、上記DK−200菌株の菌学的諸性質を示
す。 １ 形態 (1) 細胞の形及び大きさ： 0.3〜0.5×0.8〜5.0μm (2) 多形性の有無： 有 (3) 運動性の有無： 無 (4) 鞭毛の有無、着生状態 無 (5) 胞子の有無： 無 (6) グラム染色性：
陰性〜弱陽性であるがグラム陽性粒子を有する (7) 抗酸性： 無 ２ 各培地での生育状態 (1) 肉汁寒天平板培養 コロニーの色： 淡白色 コロニーの形状： 円形 コロニーの隆起： 凸 コロニーの周縁： 全縁 (2) 肉汁寒天斜面培養 生育状態： 適度 光 沢： 有 形 状： 糸状 (3) 肉汁液体培養 混濁の程度： 均一 沈 殿： 有 液面での生育： 特に無 (4) 肉汁ゼラチン穿刺培養： 液化する ３ 生理学的性質 (1) 硝酸塩の還元： 陰 (2) 脱窒反応： 陽 (3) MRテスト： 陰 (4) VPテスト： 陰 (5) インドールの生成： 陰 (6) 硫化水素の生成： 陰 (7) デンプンの加水分解： 陰 (8) クエン酸の利用：
コーサー（Koser）培地及びクリステンセン
（Christensen）培地共利用しない (9) 無機窒素源の利用： 硝酸塩及びアンモニウム 塩共利用する (10) 色素の生成： 無 （11） ウレアーゼ： 陰 （12） オキシダーゼ： 陰 （13） カタラーゼ： 陽 （14） 酸素に対する態度： 好気性 （15） 生育の範囲 温度： 17.8〜33.2℃ PH： ５〜10 （16） OFテスト： 酸化的（oxidative） （17） 糖類からの酸及びガスの生成の有無

【表】

〔実施例〕

以下、本発明を実施例により更に具体的に説明
するが、本発明はこれらに限定されるものではな
い。なお、特に断わらない限り、各例中の％は重
量％である。 実施例 １ グルコース0.5％、酵母エキス0.2％、リン酸水
素二ナトリウム0.1％、リン酸二水素カリウム
0.05％、硫酸マグネシウム0.05％を含む培地（PH
7.0）５mlを試験管に分注し、120℃で15分間滅菌
した。これに別に殺菌したDL−Ｎ−カルバミル
トリプトフアンを、最終濃度が0.1％になるよう
に添加した後、アリスロバクター属DK−200菌
を接種し、30℃で24時間振とう培養した。この培
養液より菌体を遠心分離して集め、同量の生理食
塩水で洗浄後、各別に下記第１表に記載のＬ−Ｎ
−カルバミルアミノ酸0.1M及び塩化マンガン
0.1mMを含む0.1Mトリス塩酸緩衝液（PH7.5）５
ml中に懸濁させ、35℃で20時間反応させた。目的
生成物をバイオアツセイ〔ラクトバチルス・アラ
ビノザス（Lactobacillus arabinosus）ATCC
8014を用いた〕とHPLCにより定量した結果を第
１表に示す。両分析値が一致したことから、いず
れの場合も、目的生成物は相当するＬ−アミノ酸
と確認した。

【表】 実施例 ２ 培地100mlを含む500ml容の三角フラスコを用い
る以外は実施例１と同様に培養して得た菌体を、
下記第２表に記載のＤ−Ｎ−カルバミルアミノ酸
0.1M、塩化コバルト0.5mM、及び塩化マンガン
1mMを含む0.1Mトリス塩酸緩衝液（PH7.0）100
ml中に懸濁させ、35℃で60時間反応させた。反応
生成液のHPLC分析によれば、反応はほぼ完結し
ていた。遠心分離により除菌後の上清を25mlまで
濃縮し、エタノール約５mlを加え、冷却（５℃）
して結晶を得た。これを再結晶し、乾燥して、
HPLC、TLC、バイオアツセイ、NMR及び旋光
度分析を行つたところ、第２表に示すように、各
相当するＬ−アミノ酸の標品と一致することを確
認した。

【表】 実施例 ３ 実施例２におけるＤ−Ｎ−カルバミルアミノ酸
をDL−Ｎ−カルバミルアミノ酸に変えた以外は
実施例２と同様な操作を行つて、相当するＬ−ア
ミノ酸の結晶を得た。これらの分析結果は、標品
のＬ−アミノ酸と一致した。結果を下記第表３に
示す。

【表】 実施例 ４ 実施例２と同様にして得た洗浄菌体を、塩化コ
バルト0.5mMと塩化マンガン1mMとを含む0.1M
トリス塩酸緩衝液（PH7.0）20ml中に懸濁させた。
この懸濁液を、氷冷下において、20kHzの超音波
で３分間３回処理して、菌体破砕液を調製した。
この液に、DL−Ｎ−カルバミルアミノ酸を0.1M
になるように添加し、30℃で20時間反応させた。
反応後、不溶物を遠心除去して得た上清を、
HLPC及びバイオアツセイした結果、生成物は、
相当するＬ−アミノ酸と確認した。分析結果を、
下記第４表に示す。

【表】 〔発明の効果〕 以上説明したように、本発明によれば、Ｎ−カ
ルバミルアミノ酸から、アリスロバクター属微生
物を使用して、原料がＤ−、Ｌ−又はDL−体で
あることに関係なく、効率良く、相当するＬ−ア
ミノ酸を製造することができるという顕著な効果
が奏せられる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ フエニルアラニン、トリプトフアン、及びチ
   ロシンよりなる群から選択したアミノ酸のＮ−カ
   ルバミル体のＤ体、Ｌ体又はDL体に、アリスロ
   バクター属微生物の培養液、菌体又は菌体処理物
   を作用させ、生成した相当するＬ−フエニルアラ
   ニン、Ｌ−トリプトフアン、又はＬ−チロシンを
   採取することを特徴とするＬ−アミノ酸の製造方
   法。