JPH043986B2

JPH043986B2 -

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Publication number: JPH043986B2
Application number: JP58111609A
Authority: JP
Priority date: 1983-06-21
Filing date: 1983-06-21
Publication date: 1992-01-24
Also published as: JPS605165A

Description

【発明の詳細な説明】（発明の技術分野）本発明は、抗腫瘍作用を有する血液処理剤に関
する。

（従来技術とその問題点）グラム陰性菌細胞壁由来のリポ多糖体は菌体内
毒素、エンドトキシンあるいはパイロジエンとも
呼称されている物質であつて、発熱作用、致死毒
性などの有害な作用を示すことで知られている
が、一方、悪性腫瘍に対する抗腫瘍効果を示す物
質としても知られている。

悪性腫瘍に対する特効薬のない現在、抗腫瘍作
用を有する物質は注目に値するが、該リポ多糖体
の場合は、その致死量と最小有効抗腫瘍作用量と
が近いため、安全に使用しえない。

（発明の目的）該リポ多糖体の抗腫瘍作用を生かしつつ、致死
毒性を減弱することおよび該リポ多糖体を無菌的
に保存し、使用に供すること。

（発明の構成）本発明は、不溶性担体に固定化したグラム陰性
菌細胞壁由来のリポ多糖体をγ線照射してなる血
液処理剤に関するものである。

本発明でいうグラム陰性菌細胞壁由来のリポ多
糖体とは、Neisseria gonorrhoeaeで代表される
グラム陰性球菌、Pseudomonas aeruginosa、
Brucella abortus、Bordetella pertussisなどで
代表されるグラム陰性好気性桿菌、Escherichia
Coli、Salmonella typhi、Shigella
dysenteriae、Klebsiella pneumoniae、Serratia
marcescens、Proteus vulgaris、Yersinia
enterocolitica Vibrio choleraeなどで代表され
るグラム陰性通性嫌気性桿菌等のグラム陰性菌の
細胞壁の外層に局在する脂質・多糖体の複合体、
および、脂質・多糖類と少量のタンパク質の複合
体を意味する。該リポ多糖体は、グラム陰性菌か
ら既知の方法により抽出することができる。その
方法の代表例としてフエノール水で抽出する方法
〔Van Otto Westphal et al.，Z.Naturforsch.，
7B：148〜155（1952）およびトリクロル酢酸で抽
出する方法〔A.Boivin and L.Meserobeanu.，
Comp.Rend.Soc.Biol.，1285（1938）〕などをあげ
ることができる。通常、前者の方法ではタンパク
質を0.1〜２％含むリポ多糖体が得られ、後者の
方法ではタンパク質を0.1〜10％含むリポ多糖体
が得られるが、後者のリポ多糖体の方が、固定化
が容易である。該リポ多糖体は会合性があるの
で、その分子量は測定の方法および条件により、
数千〜100万となつて観察される。

本発明でいう不溶性担体とは、使用条件におい
て溶出物が無く、実質上、不溶性であり、かつ、
リポ多糖体を使用条件下において溶出させること
なく固定化できる担体を意味する。

本発明に用いる不溶性担体の一例をあげると、
(1)ポリスチレンまたは架橋ポリスチレンまたはス
チレン・ジビニルベンゼン共重合体にアミノ基、
カルボキシル基、第４級アンモニウム基、活性ハ
ロゲン化アルキル基またはエポキサイド基を有す
る置換基を芳香核置換基として導入したもの、(2)
アクリル酸の不溶性共重合体、(3)アミノ基を有す
る不溶性アクリルアミド共重合体、(4)カルボキシ
ル基を有する不溶化セルロースまたはアガロー
ス、(5)エポキサイド基を有するアガロースゲル、
(6)ブロムシアン化アガロースゲル、(8)ナイロン
６、(9)ナイロン6.6、(10)ポリエチレンテレフタレ
ートなどがあるが、これらのなかでも、ビニルポ
リマを幹ポリマとする担体、とりわけ、スチレン
系ポリマを幹ポリマとする担体が、耐酸・耐アル
カリ性、耐久性、通液性などに富むので、特に好
ましく用いられる。

また、不溶性担体の形状は、適度の表面積を有
し、かつ、使用時の外力に耐えうるに十分な機械
的強度を有するものであるならば特に制限はな
く、通常、粒形状、繊維形状、中空糸形状、膜形
状で用いられるが、とりわけ、繊維状および中空
糸形状のものが大きな表面積と良好な通液特性を
併せ持つので、とくに好ましく用いられる。

本発明における、グラム陰性菌細胞壁由来のリ
ポ多糖体と不溶性担体との結合状態は、使用条件
下において実質上該リポ多糖体の流出がない結合
状態であれば特に制限はなく、(1)アミド結合、エ
ーテル結合、エステル結合、ウレイド結合、尿素
結合あるいはアルキル基などの基を介して結合し
たもの、(2)イオン結合で結合したもののいずれで
も良いが、(1)の方が安定性が高く、より好まし
い。とりわけ、アミド結合で結合している状態
が、安定性が高く好ましい。

本発明における不溶性担体へのリポ多糖体の固
定化密度はあまり小さすぎると多量の担体が必要
になるので、通常、担体表面積１平方メートル当
り、10μｇ以上とりわけ１mg以上であることが好
ましい。

本発明における不溶性担体に固定化したグラム
陰性菌細胞壁由来のリポ多糖体に照射すべきγ線
の線量は、少なすぎると滅菌が不十分になり、本
発明血液処理剤の保存ができなくなり、多すぎる
と担体やリポ多糖体の分解が起つてしまうので、
0.1〜100メガレントゲン、とりわけ、１〜10メガ
レントゲンが好ましい。

本発明の血液処理剤の使用方法としては、体外
循環用のカラムに充填して、全血または血漿と連
続的もしくは断続的に接触せしめる方法のほか、
注射器の内部に充填しておき、その中に全血また
は血漿を吸引したのち、その全血または血漿を体
内に戻す方法などがある。

（発明の効果）本発明の効果は、グラム陰性菌細胞壁由来のリ
ポ多糖体を不溶性担体に固定化したことにより、
致死毒性および発熱毒性を減弱しつつ、抗腫瘍作
用のみを発揮せしめたこと、および、該血液処理
剤をγ線照射したことにより、無菌的な保存を可
能にしたことにある。

以下に実施例を示す。

実施例１ポリプロピレン（三井“ノーブレン”J3HG）
50部を島成分とし、ポリスチレン（“スタイロン”
666）46部、ポリプロピレン（住友“ノーブレン”
WF−727−Ｆ）４部の混合物を海成分とする海
島型複合繊維（島数16、単糸繊度2.6デニール、
引張強度2.9ｇ／ｄ、伸度50％、フイラメント数
42）50ｇを、Ｎ−メチロール−α−クロルアセト
アミド50ｇ、ニトロベンゼン400ｇ、98％硫酸400
ｇおよびパラホルムアルデヒド0.85ｇからなる混
合溶液中に浸し、20℃で１時間反応させた。繊維
を反応液から取り出し、０℃の氷水５中に投じ
て反応停止させたのち、水で洗浄し、次に、繊維
に付着しているニトロベンゼンを抽出除去した。
この繊維を50℃で真空乾燥して、クロルアセトア
ミドメチル化繊維71ｇを得た。次に、この繊維40
ｇを15℃のエチレンジアミン中に浸し、15〜20℃
の温度で24時間反応させて、エチレンジアミノア
セトアミドメチル化繊維を得た。この繊維は1.8
ミリモル／ｇのエチレンジアミノ基を有し、１級
アミノ基と２級アミノ基を持つが、３級および４
級アミノ基を持たない。また、PH7.4における含
水率は乾燥繊維1.0ｇ当り1.0ｇであり、この状態
における単糸の直径は40〜44μmであつた。

上記アミノ基含有ポリスチレン繊維32ｇを300
mlの水中に一昼夜浸して膨潤させたのち、
Escherichia Coli055：B5のリポ多糖体（トリク
ロル酢酸抽出法、デイフコ・ラボラトリーズ社
製）の0.4mg／ml水溶液500mlと混合し、次に、
1N−塩酸および1N−水酸化ナトリウムでPHを
4.5〜6.0に保ちながら、１−エチル−３−（３−
ジメチルアミノプロピル）−カルボジイミド5.0ｇ
を少しづつ加え、溶解した。この混合物を室温で
２日間振とうしたのち、繊維を取り出し、１の
水で３回洗浄した。さらに、この繊維を１の沸
騰水中に30分浸漬する操作を３回行なつたのち、
0.07モルリン酸緩衝液（PH7.4）で洗液のPHが7.4
になるまで洗浄して、リポ多糖体固定化繊維を得
た。上記固定化母液および洗液中のリポ多糖体の
濃度をフエノール・硫酸法（試料１mlと５％フエ
ノール水１mlの混合液に濃硫酸５mlを加え、
485mμの吸光度を測定する）で求め、残存法で固
定化量を求めた。この場合、２回目以降の洗液に
ついては50倍に濃縮したのち、定量に供した。

上記リポ多糖体固定化量は5.0mg／ｇ（45mg／
m²）であつた。

このリポ多糖体固定化繊維2.0ｇを200mlの局方
生理的食塩水と共に硬質ガラス管中に封入後、
60Coのγ線を2.5メガレントゲン照射し、室温で
90日間放置したのち、開封して、充填液の毒性お
よび繊維の活性を調べた。この充填液中のリポ多
糖体量をリムラスプレゲル法で求めたところ、
0.1ng／ml以下であり、また、家兎３匹による発
熱テストの結果はマイナス（日本薬局方、発熱性
物質試験法にもとづく）であつた。また、繊維
0.5ｇを20mlの非動化家兎血清に浸し、37℃で１
時間インキユベートしたのち、この血清５mlずつ
を３匹の家兎（夫々の体重は2.9Kg、2.9Kg、2.8
Kg）に静脈投与したが、３匹とも発熱は全く認め
られなかつた。

上記γ線照射後90日間放置した繊維0.5ｇを
BALB／Ｃマウスの新鮮血清50ml中に浸し、37
℃で１時間インキユベートしたのち、この血清
0.3mlずつを担癌マウス（BALB／Ｃマウスにメ
チルコランスレンを接種させることにより誘発さ
せた繊維肉腫MC−B1の腫瘍細胞を５×10⁵個と
り、BALB／Ｃマウスの背部皮下に接種するこ
とにより調製した）に、腫瘍細胞接種後10日目
（腫瘍直径6.3mm）と12日目および14日目に静脈投
与したところ、腫瘍の大きさに縮少が認められた
ものが13匹中６匹、腫瘍が完全に消失したものが
13匹中２匹であつた。一方、無処置群においては
10匹中10匹とも、腫瘍径の縮小および消失は認め
られなかつた。

Claims

【特許請求の範囲】

１不溶性担体に固定化したグラム陰性菌細胞壁
由来のリポ多糖体をγ線照射してなる血液処理
剤。