JPH0440888A - 高分子化セレン含有菌体の製造法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〈産業上の利用分野〉 本発明は、高分子化セレン含有菌体の製造法に関し、本
発明で得られる高分子化セレン含有菌体は動物用飼料、
餌料または食品等に添加せしめることによりヒトまたは
動物のセレン欠乏症の予防等に利用できる。

〈従来の技術〉 セレンは原子番号３４、原子量７９の元素であり、以前
は元素としては単に生体に有害なものとしてのみ知られ
ていたが、１９５７年にＳｃｈｗａｒｚらが初めてセレ
ン（以下、セレンとは元素セレンを示す）に生理的な役
割があることを発表しくＪ、Ａｍ、Ｃｈｅｓ、Ｓｏｃ、
、７９：３２９２，１９５７）、有毒であるとともに使
用法によっては生体内の有効成分になることが判明した
。それ以来セレンの生体内における有用性が注目されて
きており、その後Ｓｃ。

１１らの研究によりビタミンＥの欠乏による家畜の障害
である子牛等の白筋症、豚の肝臓ネフローゼ、筋肉の発
育異常等の防止にセレンが有効であることが認められ（
Ｆｅｅｄｓｔｕｆｆｓ、２９，４１．２０（１９５７）
）、１９６９年にはＴｈｏｍｐｓｏｎと５ｃｏｔｔらに
よりセレンそのものが動物にとって必須の元素であるこ
とが証明され（Ｊ、Ｎｕｔｒ、、９７：３３５，１９６
９　）、ヒトでも必須元素であることは間違いないとさ
れた。

現在までに多くの種でセレン欠乏症が知られておりオー
ストラリアやニューシーラントではセレンを鉱物塩また
は肥料に加えるか配合飼料の補助剤として用いている。

また、セレン単独またはセレンとビタミンの混合物とし
ては世界中のセレン欠乏地域において広範に使用されて
おり、その後も１９７２年にはセレンがグルタチオンパ
ーオキシダーゼの構成成分であることが発表され、１９
７４年末国ＦＤＡでセレンの飼料添加が認可される等、
セレンの生理学的な研究がより活発になされてきている
。

一方、供給源を無機セレンとしてではなく有機化したセ
レンとする報告としては、セレンとアミノ酸の結合体に
関する報告やセレンを含有する微生物の供給に関する報
告がされている。例えば米国特許第４５３０８４６号の
セレン酵母の製造法等が挙げられ、また、日本国内では
安全性の面から飼料１食品等へ無機セレンのまま添加す
ることは認可されていない状況下、いくつかの有機化セ
レンに関する報告がされている。例えば特公昭５５−３
６３１４号は、予め微生物の生育を著しく阻害しない水
溶性無機セレン化合物を添加した培地で、セレンを菌体
内に蓄積することのできる微生物を培養・増殖させるこ
とにより有機化されたセレン含有微生物菌体を得る製造
法であり、さらに特開昭５７−１７４０９８号はセレン
化合物を添加した培地で培養して得たセレン含有酵母菌
体から生理活性含セレン蛋白多糖体を得る方法であり、
特開昭６０−１８０５８２号はセレン化合物を含有する
培地で培養することによりＬ−セレノンステインを蓄積
できる細菌を報告している。また、その他にも合成法に
よるセレン結合蛋白質の製造法等も報告されている。さ
らに特開昭６０２２４４５１号は、予め無機セレンを添
加した培地で微生物を培養・増殖させることにより得た
有機化セレン含有微生物菌体を家畜・家禽用飼料に添加
した飼料組成物を報告している。

〈発明が解決しようとする問題点〉 上述の、供給源を無機セレンとしてではなく有機化した
セレンとする方法は、いづれも予め無機セレンを添加さ
せた培地で微生物を培養・増殖せしめることにより有機
化セレン含有菌体を得ている。この場合、菌体にセレン
を取込ませるに当たって無機セレンの存在下に微生物の
増殖をも行わせてセレンを有機化するが、添加するセレ
ンが無機セレンであることから微生物の生育が無機セレ
ンの毒性により生育阻害を受けるため、無機セレン濃度
は該微生物の生育を著しく阻害しない最低限度量に当然
制限されなければならない。また、添加するセレン濃度
を微生物の生育を著しく阻害しない最低限度量にしても
、やはり何らセレンを添加しない通常の培地で培養・増
殖させる場合に比べると菌体増殖に長時間を要し増殖率
も極めて悪く、また菌体のセレン取込み効率も悪く、し
たがって有機化セレン含を菌体の収率は掻めて低くなる
。さらに、微生物の生育を阻害しない最低限度量である
低濃度のセレン添加に制限されることにより、培地中の
セレン濃度を常に測定しつつ目的濃度まで複数回に渡っ
て添加しなければならないという繁雑な培養工程を行う
必要性もあり、そのように培養を行っても、菌体濃度に
限界があることから菌体内に取込まれずに培養上清に残
存する無機セレン濃度が高くなり、廃液処理時に培養上
清に残存する無機セレンを除去する作業が必要となる。

しかし、培養上清中には他にも種々成分が混在すること
から、無機セレンを除去するためには極めて煩雑な操作
が必要であり、したがってコストアップにもつながって
いた。

〈問題点を解決するための手段〉 本発明者らは、上記の問題点を解決すべく鋭意研究を行
ったところ、有機化されたセレン、即ち高分子化セレン
を菌体内に蓄積することのできる微生物を、予め実質的
にセレンを添加しない培地で適宜培養・増殖させ、その
後菌体を集菌し、必要に応して水洗して培養培地成分を
除去した後、菌体の培養・増殖を必要としない条件、好
ましくは菌体濃度をハイロジカルスペース以上に調製し
、該菌体をセレンの高分子化基質となり得る有機化合物
である糖および／またはアミノ酸と必要に応しリン酸塩
ならびに水溶性セレン化合物を含有する水溶液に分散せ
しめることにより、意外にも実質的に菌体の培養・増殖
を必要とせずにセレンが効率的に菌体内に取り込まれ蛋
白質等と結合されて高分子化セレンとなり、菌体内に安
定に多量の高分子化セレンを蓄積せしめることが可能で
あることを見出し、以上から新規な高分子化セレン含有
菌体の製造法を確立するに至った。

本発明は上記の知見に基づいて完成されたもので、即ち
、高分子化セレンを菌体内に蓄積することのできる微生
物を培養して得た菌体をバイオロジカルスペース以上の
菌体濃度とし、該菌体をセレンの高分子化基質である有
機化合物および水溶性セレン化合物を含有する水溶液に
分散せしめることにより、該菌体に高分子化セレンを蓄
積せしめることを特徴とする高分子化セレン含有国体の
製造法である。

本発明において、菌体をセレンの高分子化基質となり得
る有機化合物および水溶性セレン化合物を含有する水溶
液（以下、反応液ということがある）に分散せしめるこ
とにより菌体に高分子化セレンが蓄積される過程を推定
すれば、まずセレンの高分子化基質となり得るとした有
機化合物である糖および／またはアミノ酸等が、菌体の
培養・増殖を必要としない状態、好ましくはバイオロジ
カルスペース濃度以上に調製されて分散された菌体に接
触して菌体内でエネルギーを発生させる基質となり、水
溶性無機セレン化合物中のセレンを菌体内に取込む現象
を活性化させるためのエネルギー源を与えると推測され
る。言い換えれば、菌体が反応液に分散されて反応液中
の糖やアミノ酸等のエネルギー基質を基に菌体内反応機
構である高エネルギーリン酸化合物合成機構が働くこと
により生成されるエネルギーを利用して、菌体内にセレ
ンを取込ませる反応を触発せしめると推測される。高エ
ネルギーリン酸化合物にはアデノシンニリン酸（ＡＴＰ
）、　　ウラノシル三リン酸（ＵＴＰ）、グアノシル三
リン酸（ＧＴＰ）、　　シトシル三リン酸（ＣＴＰ）が
あるが、本発明で利用されているエネルギーは上記のい
づれであってもよい。

主に糖および／またはアミノ酸を基質として菌体内で合
成されたそれらは、まずセレンが菌体細胞膜を透過する
ために利用され、さらに細胞膜を透過したセレンが菌体
内に取り込まれて菌体内蛋白質と結合して高分子セレン
に変換される迄の反応を通して有効に利用されると推測
するが、本発明は何らこれらによって限定されるもので
はない。

本発明の製造法の目的は、予めセレンを添加しない実質
的にセレンを含有しない培地で菌体を培養・増殖させる
ため、培養時にセレンによる生育阻害が無く、従来技術
にある予めセレンを添加させた培地で培養・増殖させる
場合に比すと菌体の増殖速度が早く、また増殖率も優れ
ている方法を提供する。

また、本発明は菌体を培地で充分培養・増殖させ、集菌
後に反応液へ該菌体を分散させるため、菌体を濃縮化す
ることが可能であることがら反応系を小さくでき、した
がって反応後の廃液を少量化することができ、また、反
応液中にセレン以外の金属を含まないため廃液処理を簡
便にする方法を提供する。

さらに、本発明は菌体を適宜増殖させ、集菌後に水洗し
て培養培地成分を除去した後菌体羞度を好ましくはバイ
ロジカルスペース以上に調製して培養・増殖を停止させ
、次いで反応液へ該菌体を分散させるため、当然反応せ
しめる際には菌体増殖の必要は無く、菌体増殖阻害を生
ずるセレンを反応液中で高濃度にすることが可能であり
、かつ菌体内に取込ませ蓄積できる高分子化セレン濃度
も高く、高濃度の高分子化セレンを含有した菌体を製造
することを提供する。

以下に本発明の詳細な説明する。

まず、使用する微生物菌体に関しては、菌体内にセレン
を透過・吸収して高分子化セレンを蓄積し、高分子化セ
レン含有菌体となりうることが可能な微生物国体であれ
ば広く対象とすることができる。このような菌体は、セ
レンの高分子化基質である有機化合物および水溶性セレ
ン化合物を含有する水溶液の条件下にてセレンを菌体内
に取込み蛋白質等と結合させ、菌体内反応機構により無
機セレンを高分子セレンに変換し得るものと推測される
。また、特に本発明で得られるセレン含有菌体は、動物
用飼料や餌料に添加して動物に給与したり、食品への添
加することが主に期待されるため、使用する微生物菌体
は可食性であることが好ましい。

上記の微生物に該当するものとしては、酵母細菌５カビ
、単細胞緑藻等が挙げられる。酵母では各種の食品製造
に用いられ安全性が認められているものとしてビール酵
母９日本酒用酵母、パン酵母、アルコール酵母、ワイン
酵母等で知られている例えばサツカロミセス属に属する
酵母が挙げられ、特に好ましくはサンカロミセス・セレ
ビシェ（Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｃｅｒｅｖｉｓ
ｉａｅ）に属する酵母であり、また、みそ・醤油等に用
いられるものして例えばす、７カロミセス・ロキシ（Ｓ
ａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓｒｏｕｘｉｉ）やチゴサッカ
ロミセス・エスピー（Ｚｙｇ。

ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ　ｓｐ、）に属する酵母等
、その他にもハンセヌラ（）ｆａｎｓｅｎｕｌａ）　Ｊ
ｉｇ、キャンディダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、トルラスポ
ラ（Ｔｏｒｕｌａｓｕｐｏｒａ　）属、トルロプシス（
Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）属、ミコトルラ（Ｍｙｃｏｔｏ
ｒｕｌａ）属に属する幅広い範囲の可食性酵母が本発明
に使用できる。

細菌としては、乳酸菌として知られるラクトバチルス・
カゼイ　（Ｌａｃｔｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ　ｃａｓｅｉ
）　＝　ラクトバチルス　アシドフィラス（Ｌａｃｔｏ
ｂａｃｉｌｌｕｓ　ａｃｉｄｐｈｉｌｕｓ）等、また納
豆菌として知られるバチルス゛ナツト（Ｂａｃｉｌｌｕ
ｓ　ｎａｔｔｏ）等広範囲の可食性の細菌、カビとして
はアスペルギルス・ニガー（Ａｓｐｅｒｕｇｉ目ｏｓｅ
　ｎｉｇａｒ）やアスペルギルス・アワモリ（Ａｓｐｅ
ｒｕｇｉｌｌｏｓｅ　ａｗａｍｏｒｉ）に属するものが
ごく一部として例示され、他にも広範囲の可食性のカビ
が使用できる。

また、可食性の単細胞緑藻であるクロレラとしてクロレ
ラ・ブルガリスやスピルリナも本発明に有効に使用でき
る。

このような高分子化セレンを蓄積することのできる微生
物菌体は、予め適当な方法に従って調製された培地また
は媒体で適宜培養・増殖したものを用いればよい。培養
に当たっては、上記に例示した対象とする微生物菌体の
それぞれを、通常培養する場合に使用されている培養培
地組成例えば炭素源、窒素源、無機等または培養媒体組
成を用い、好適培養温度にて培養すればよく、必要に応
し予備培地または媒体で種菌培養した後各培養培地また
は媒体で適宜培養・増殖せしめればよい。

培養を停止し培養菌体を集菌する時期としては、単に菌
体増殖曲線における対数増殖期後期から定常期後期まで
の適宜な培養を行って通常の遠心分離等の手段により集
菌すればよい。例えば水溶性セレン化合物として亜セレ
ン酸を用いる場合、好ましくは一般に菌体増殖曲線にお
ける亜セレン酸還元酵素が生成される前段階である対数
増殖期後期から定常期初期の段階まで適宜培養して集菌
すれば、増殖菌体数が多く好適であるとともシュ、該菌
体を用いて実質的に菌体増殖を必要としない条件、好ま
しくはバイオロジカルスペース以上の菌体濃度に調製し
て亜セレン酸を含有する反応液と反応せしめた場合、セ
レンが菌体に取込まれても亜セレン酸還元酵素の作用を
受けないことから実質的に無機セレンの生成を防止でき
、良好な高分子セレン含有菌体を得ることができる。

例えば菌体として酵母を用いた場合は、例えばＹＰＧ培
地等で種菌培養した後糖蜜培地で通常２５°Ｃ〜３５°
Ｃで１２時間〜２４時間特に好ましくは１８時間〜２０
時間培養・増殖させた後培養菌体を集菌するのが好まし
い、細菌として乳酸菌を用いた場合は例えばロイコノス
トック培地等で通常２５℃〜３５°Ｃで１５時間〜３０
時間特に好ましくは２０時間〜２４時間培養・増殖させ
た集菌すればよく、カビを用いた場合は例えばＹＭ培地
で通常２０゛Ｃ〜３０°Ｃで３０時間〜５０時間特に好
ましくは３５時間〜４０時間培養・増殖させた集菌すれ
ばよく、単細胞緑藻を用いた場合は例えば水を媒体とす
るかもしくは実施例２２に示した培地で通常２５“０〜
３３°Ｃで２４時間〜４８時間特に好ましくは３０時間
〜４０時間培養・増殖させて集面すればよい。

次いで、該集菌した菌体から培養・増殖に用いた培養培
地または媒体を水等で数回洗浄して洗い流して除去し、
さらに、該菌体をセレンの高分子化基質および／または
水溶性セレン化合物を含有する水溶液に分散せしめてセ
レンを高分子化セレンとして菌体内に蓄積せしめるが、
この反応をせしめる際、該菌体をバイオロジカルスペー
ス以上の菌体濃度に調製して菌体増殖によるセレンの高
分子化基質の消費を完全に停止させ、セレンの高分子基
質の消費を専ら高分子化の反応用に向けさせることが必
要である。このバイオロジカルスペース以上の菌体濃度
に調製するとは、菌体懸濁液（反応液）が本質的には該
面体の増殖を許す成分を含んでいても、懸濁液の一定容
積中に菌体が実質的にそれ以上増殖することのできない
状態、即ち菌体増殖曲線における定常状態の菌体濃度以
上の濃度の状況下に調製することを意味する。例えば、
酵母では１０９コ／ｍ１以上、乳酸菌では１０８コ／　
ｍ　ｉ、　、クロレラでは１０９コ／　ｍ　１２以上で
あるので、反応に際しては酵母では１〜５×１０ｑコ／
　ｍ　１２　、乳酸菌では１〜５×１０８コ／ｍ！、ク
ロレラでは１〜５Ｘ１０’コ／　ｍ　Ｅの菌体濃度で行
えばよく、実用上はこれら微生物の懸濁液における菌体
濃度の測定は分光光度計によるＯＤ値で行うことから、
対象菌体の増殖曲線の定常期状態における菌体濃度時点
とする場合のＯＤ値の測定誤差を±１０％とすればよい
。また、カビの場合はＯＤによる測定が不可能であるの
で培養液量より少ない反応液に菌体を懸濁して使用すれ
ばよい。

次いで、該菌体をセレンの高分子化基質となり得る有機
化合物および／または水溶性セレン化合物を含有する水
溶液に分散せしめて、菌体内に高分子化セレンを蓄積せ
しめる。

反応液中でセレンの高分子化基質となり得る有機化合物
および水溶性セレン化合物を含有する水？８液は、両方
を混合した水溶液にして上述のバイオロジカルスペース
以上の菌体濃度に調製された菌体を該水溶液に同時に分
散させても、または逐次にまず該菌体を有機化合物水溶
液に分散させてから水溶性セレン化合物水溶液に分散さ
せても、または分散する順序を逆としてもいづれの過程
を経ていてもかまわず、バイオロジカルスペース以上の
菌体濃度に調製された菌体を上記の反応液に分散・接触
せしめる過程であればいづれでもかまわない。

まず、セレンの高分子化基質となり得る有機化合物とは
、菌体内反応機構である高エネルギーリン酸化合物合成
機構、例えば解糖系反応機構やＴＣＡ回路反応機構を作
動させるに不可欠な成分であり、即ち菌体にとってエネ
ルギー基質となり得る有機化合物であればよ＜、糖およ
び／またはアミノ酸が挙げられる。糖としては、例えば
、グルコース　フルクトース、ガラクトース、シュクロ
ース、マルトース、トレハロースが挙ケラれ、特に好ま
しくはグルコースである。アミノ酸としては、例えばロ
イシン、イソロイシン、セリン等のゲルコゲニックアミ
ノ酸系であればよく、特に好ましくはロイシンまたはイ
ソロイシンである。反応液である該有機化合物水溶液に
は少なくとも上記糖および／またはアミノ酸と、必要に
応し緩衝液としてリン酸塩等を含有する水溶液であるの
が好ましい。

さらに、必要に応じ高エネルギーリン酸化合物の補給源
となりうるちのとして、アデニン、アデノシンを上記系
に添加すると、より有効に高分子化セレンが菌体内に蓄
積される。

上記、有機化合物水溶液の反応に用いる際、該水溶液の
ｐＨはｐＨ４〜７特にｐＨ５〜６に調製するのが好まし
い。リン酸塩等緩衝液を用いた場合には該緩衝液を好ま
しいｐＨに調製すればよい。

有機化合物水溶液の各々の成分の量的関係については、
有機化合物水溶液全量に対し、糖とアミノ酸は単独かま
たは併用してもよく、糖は０．３％〜２％を含有させる
のが好ましく、アミノ酸は０゜３％〜２％、また必要に
応し緩衝液であるリン酸塩は０．ＯＩＭ〜０．３Ｍ用い
ればよく、また、アデニン、アデノシンを加える場合に
は、０．００１％〜０゜０２％を用いればよい。

次いで、本発明に使用できるセレンの供給源である水溶
性セレン化合物は、対象菌体の細胞膜を透過し、菌体内
で蛋白質と結合して高分子化セレンと変換されうる適当
な水溶性のセレン化合物であればよく、例えば亜セレン
酸（Ｈ，ＳｅＯユ）、二酸化セレン（ＳｅＯｚ）、セレ
ン酸（ＨｚＳｅＯ４）等の無機セレンが挙げられるが、
特に亜セレン酸を用いるのが好ましい。反応に用いる量
としては反応液中のセレン濃度が２ＰＰｍ以上、好まし
くは１０〜１１００ＰＰとなるように水溶性セレン化合
物の添加量を調製ればよい。

上述のとうり、反応液へ菌体を同時または逐次に分散し
、振盪させて反応せしめるが、反応における反応温度は
２０℃〜４０°Ｃ特に好ましくは２５°Ｃ〜３５°Ｃで
、反応時間は４時間以上特に８〜２０時間反応せしめる
のが好ましい。

反応後、遠心分離等の手段で集菌し、さらに回収菌体を
水で数回洗浄することにより高分子化されたセレンを含
有する微生物菌体が得られる。また得られた高分子化セ
レン含有菌体は必要に応し凍結乾燥等をして保存すれば
よい。

本発明は、以上のようにして効率的で安定な高分子化セ
レン含有微生物菌体を得る方法を提供する。

〈実施例〉 以下、実施例を挙げて本発明を具体的に説明するが、本
発明はこれらによって何ら限定されるものではない。

実施例１ｆＩＩ母の培養と増殖曲線の作成ｐＨ５に調製
したＹＰＧ培地（グルコース４％、ペプトン１％、イー
ストエキス０．５％、リン酸カリウム０．５％、硫酸マ
グネシウム０．２％）　１００　ｍｌを５００ｍ１容三
角フラスコに分注し１２１°Ｃで１５分殺菌した後、サ
ツカロミセス・セレビシェＦＴＹ−３（ＦＥＲＭ　　Ｂ
Ｐ−２３２６）を１白金耳植付け、３０℃で２４時間振
盪培養し、種菌とした。その後、ｐＨ５に調製した糖蜜
培地（糖蜜１０％（蔗糖として４％含有）、尿素０．５
％、７５％リン酸０．１％、硫酸亜鉛０．０００３％）
１００ｒｒ＋ｊ！に種菌５ｍｌを植え付け、３０°Ｃで
３０時間培養して増殖速度を求め、増殖曲線を第１図に
示した。

このように、培地中に実質的にセレンを含有しないこと
から菌体増殖は極めて良好であった。

実施例２　培養時間と反応（振盪）時間によるセレン取
込みへの影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３の菌体を、培養時間８，１２１６　２０　２４
．２８時間口毎に各々遠心分離して（３００Ｏｒｐｍ、
　１５分間）集菌し、１００ｍｆの水で３回洗浄した後
、菌体濃度を１〜１．６Ｘ１０９コ／　ｍ　ｌに調製し
てバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、
該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（
ｐＨ６）５０ｍｆ！に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ　（セ
レン濃度として６０ｐｐｍ）を加えて３０°Ｃで振盪し
て反応せしめた。

振盪（反応）時間２，４，１６．２４時間口毎に各々菌
体濃度を測定して遠心分離にて集菌し、さらに菌体を１
００ｍｆの水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取
込まれたセレン濃度を測定した。

その結果を第１表に示す。

尚、菌体濃度の測定は反応液を水で適宜希釈し、６６０
ｎｍで吸光度を測定したものであり、また菌体内に取込
まれたセレン濃度の測定は、乾燥菌体約１００ｍｇを秤
量し湿式灰化した後原子吸光法にて測定したものであり
、以下の実施例における菌体濃度および菌体内に取込ま
れたセレン濃度の測定はすべて同様の方法にて行った。

影響 糖蜜培地１００ｍｊ２に予め亜セレン酸５ｍｇ　（セレ
ン濃度として３０ｐｐｍ）を加え、実施例１のＹＰＧ培
地で培養したサツカロミセス・セレビシェＦＴＹ−３の
種菌５ｍｆ！、を植付け、３０”Ｃで３０時間培養し、
１６，２０，２４．３０時間目毎に菌体濃度を測定し、
遠心分離にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２
回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取込まれたセレン濃
度を測定した。その結果を第２表に示す、尚、３０時間
培養後の乾燥菌体量は６９０ｍｇであった。

以上から、反応時間経過における菌体増殖はほとんど認
められないものの、各培養時間における菌体ともセレン
取込み濃度は反応時間とともに増加し、サツカロミセス
・セレビシェを用いた場合、培養８〜２０時間程時間項
養菌体を用いて反応せしめることが最も好適であった。

参考例　　予め亜セレン酸を添加した培地で培養した場
合のセレン取込みへの 以上から、予め亜セレン酸壱添加した培地で培養しなか
らセレンを面体に取込ませた場合は、本発明よりも菌体
のセレン取込み率が極めて低いことがわかった。

実施例３　二酸化セレンを用いた場合のセレン取込みへ
の影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで１６時間培養し、培養１１００ｍ
ｆより得られた菌体を１００ｍ１の水で３回洗浄した後
、菌体濃度を１．５Ｘ１０９コ／ｍ２に調製してバイオ
ロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、該菌体を
１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）
５０ｍｊ！のに懸濁し、水に溶解した二酸化セレン４．
１５ｍｇ　（セレン濃度として５０ｐｐｍ）を加えて３
０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集
菌し、さらに菌体を１００ｍｊ！の水で２回洗浄した後
凍結乾燥し、乾燥菌体１．１９ｇ　（菌体内セレン濃度
１４２ＱＰＰｍ）を得た（取込み率５１．２％）。

実施例４　セレン酸を用いた場合のセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで１６時間培養し、培養ｉ！１００
ｍｊ２より得られた菌体を１００ｍｊ！の水で３回洗浄
した後、菌体濃度を１．５Ｘ１０’コ／ｍ！ニ調製して
バイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、該
菌体を１％グルコースを含む０．１　Ｍリン酸緩衝１（
ｐＨ５）５０ｍｆの二こ懸濁し、水に溶解したセレン酸
３．７ｍｇ（セレン濃度として４０ｐｐｍ）を加えて３
０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集
菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄した後凍
結乾燥し、乾燥菌体１．１１ｇ　（菌体内セレン濃度１
４４０ｐ　ｐ　ｍ　）を得た（取込み率８０％）。

実施例５　リン酸無添加によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで１６時間培養し、培養液１００ｍ
ｊ！より得られた菌体を１００ｍｊ！の水で３回洗浄し
た後、菌体濃度を１．５Ｘ１０’コ／ｍｌに調製してバ
イオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、該菌
体を０．５％、１％、２％の各々の濃度のグルコース５
０ｍ１に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ　（セレン濃度とし
て６０ｐｐｍ）を各々加え、３０°Ｃで１８時間振盪し
て反応せしめ、菌体濃度を測定して遠心分離にて集菌し
、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄した後凍結乾
燥し、菌体内に取込まれたセレン濃度を測定した。その
結果を第３表に示す 第３表 菌体濃度（ＯＤｂｈｏ）と菌体内セレン濃度（ｐｐｍ）
養液１００ｍ１より得られた菌体を１００ｍｆの水で３
回洗浄した後、菌体濃度を１．６Ｘ１０’コ／ｍｌに調
製してバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態と
し、該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５）５０ｍｆに懸濁し、アデノシン、アデニン
を各々０．０２％および無添加のものを調製し、亜セレ
ン酸５ｍｇ　（セレン濃度として６０ｐｐｍ）を各々に
加え、３０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、菌体濃
度を測定して遠心分離にて集菌し、さらに菌体を１００
ｍ／！の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取り
込まれたセレン濃度を測定した。その結果を第４表に示
す。

以上から、リン酸を添加しなくとも、良好にセレンが菌
体内に取り込まれた。

実施例６　アデニン、アデノシンの添加によるセレン取
込みへの影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで２０時間培養し、培以上の通り、
アデニン、アデノシンの添加によリセレンの菌体内への
取込みはより有効であった。

実施例７　セレン濃度によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件です、カロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで２０時間培養し、培養液１００ｍ
ｊｌ！より得られた菌体を１００ｍｆの水で３回洗浄し
た後、菌体濃度を１．７Ｘ１０ｑコ／ｍｌに調製してバ
イオロジカルスペースの菌体濃度の状態とし、該菌体を
１％グルコースを含む０１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５
０ｍｌに懸濁し、亜セレン酸Ｏｇ（セレン濃度としてＯ
ｐｐｍ）、　　１ｍｇ（セレン濃度として１２．５ｐｐ
ｍ）、　　２ｍｇ　（セレン濃度として２５ｐｐ＋＊　
）　、　　４　ｍｇ　（セレン濃度として５０ｐｐ＋ｉ
　）、　　６ｍｇ　（セレン濃度として７５ｐｐｍ　）
　、　　８ｍｇ（セレン濃度として１００　ｐｐｍ　）
を各々加えて調製し、３０°Ｃで１６時間振盪して反応
せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに面体を１００ｍＡ
の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体量と菌体内
に取り込まれたセレン濃度を測定した。その結果を第５
表に示す。

第５表 以上から、反応液へ添加する亜セレン酸は、１ｍｇ〜８
ｍｇ（セレン濃度として１２ＰＰｍ〜１０１００ｐｐを
使用することにより良好に菌体にセレンが取り込まれた
。

実施例８　反応液のＰＨによるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件です、カロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養を行い、培養液１
００ｍｊ！より得られた菌体を１００ｍ１の水で３回洗
浄した後、菌体濃度を１．８ＸＩＯ９コ／ｍｌに調製し
てバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、
該菌体を１％グルコースを含むｐＨ３，４，５，６，７
，８の範囲の各々に調製した０、１　Ｍリン酸緩衝液５
０ｍ１に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ　（セレン濃度とし
て６０ｐｐｍ）を加え、３０°Ｃで２０時間振盪し反応
せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を１００＋ｎ
１の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体内に取り込ま
れたセレン濃度を各々測定した。その結果を第６表に示
す。

第６表 以上から、反応液のｐＨは、ｐＨ４〜６に調製すること
により、良好に菌体内にセレンが取込まれた。

実施例９　　反応（振盪）温度によるセレン取込みへの
影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について５本のフラスコ培１を行い、培養液１
００ｒｒ＋１より得られた菌体を１００ｍ１の水で３回
洗浄した後、菌体濃度を１．５Ｘ１０’コ／ｍｌに調製
してバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし
、該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ５）５０ｍｊ２に懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ　（
セレン濃度として６０ｐｐｍ）を加え、２０℃、２５℃
、３０℃、３５°Ｃ９４０°Ｃの各々の温度範囲で２０
時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに
菌体を１００ｍｊ！の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、
菌体内に取り込まれたセレン濃度を各々測定した。その
結果を第７表に示す。

第７表 以上から、反応せしめる際の反応（振盪）温度は、２５
℃〜３５℃であることにより良好に菌体内にセレンが取
込まれた。

実施例１０　アデニン添加濃度によるセレン取込みへの
影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養を行い、培養ｉｆ
ｆｌｌｏｏｍｊ！より得られた菌体を１００ｍ１の水で
３回洗浄した後、菌体濃度を１．５Ｘ１０９コ／　ｍ　
ｊ２に調製してバイオロジカルスペース以上の菌体濃度
の状態とし、該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍリ
ン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｆに懸濁し、アデニンを０
％、　０．００１％、　０．００３％０．０１％、　０
．０３％、０．１％の範囲の各々に調製して添加し、亜
セレン酸６ｍｇ　（セレン濃度として７２ｐｐｍ）を加
え、３０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離
にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄し
た後凍結乾燥し、菌体内に取り込まれたセレン濃度を各
々測定した。その結果を第８表に示す。

（以　下　余　白　） 第８表 以上から、反応液にアデニンを添加する場合、使用濃度
は、０．００３％〜０．１％に調製することにより良好
に菌体内にセレンが取込まれた。

実施例１１　リン酸添加濃度によるセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件です、カロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３について６本のフラスコ培養ヲ行い、培養液１
００ｍｊ２より得られた菌体を１００　ｍｌの水で３回
洗浄した後、菌体濃度を１．６Ｘ１０’コ／　ｍ　１に
調製してバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態
とし、該国体を１％グルコースを含むＯＭ　　０．００
３　Ｍ、　０．ＯＬＭ　　０．０３Ｍ、　０．１　Ｍ、
　０．３　Ｍの各々に調製したリン酸緩衝液（ｐＨ５）
５０ｍｊｌ！に懸濁し、各々亜セレン酸５ｍｇ　（セレ
ン濃度として６０ｐｐｍ）を加え、３０°Ｃで２０時間
振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに国体
を１００ｍｊ２の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、菌体
内に取り込まれたセレン濃度を各々測定した。その結果
を第９表に示す。

第９表 以上から、反応液にリン酸緩衝液を添加する場合、リン
酸の濃度は０．００３　Ｍ〜０．３Ｍに調製することに
より良好に菌体内にセレンが取り込まれた。

実施例１２ 実施例１と同様の条件でＹＰＧ培地で２４時間フラスコ
培養したサツカロミセス・セレビシェＦＴＹ−３の種菌
各々５００ｍｆを３０Ａ容ジャーファーメンタ−４基を
用い、ｐＨ５に調製して１２０°Ｃで３０分加熱滅菌し
た糖蜜培地２ＯＮに植付け、３２°Ｃ１通気置３０１／
分、撹拌速度３００ｒｐｍで１６時間培養した。連続遠
心機を使用して集菌しく１２０１７時間）、約２０２の
水を加えて菌体を懸濁し、遠心分離して菌体を洗浄した
。この操作を３回繰り返した後、菌体濃度を２．５Ｘ１
０９コ／ｍｊ２に調製してバイオロジカルスペース以上
の菌体濃度の状態とし、０．５％グルコースを含む０゜
０３Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５ｆに懸濁し、亜セレン
酸０．４　ｇ　（セレン濃度として４８ｐｐｍ）を加え
て通気量１０！／分、撹拌速度２００ｒｐｍ、振盪（反
応）温度３０″Ｃで反応せしめた。１８時間後、遠心分
離して集菌し、さらに２ＯＮの水で３回洗浄し、湿菌体
３．５Ｋｇを得た。その後、７！の水を加えて撹拌、分
散した後、９０°Ｃで１５分加熱し、コチワ式スプレー
ドライヤーを用い、送風１４０℃、排風６０°Ｃ５送液
４４２／時間の条件でスプレードライし、乾燥粉末１．
１Ｋｇを得た（水分４゜１％、菌体内セレン濃度１９１
０ｐｐｍ）。

参考例 実施例１２で得られた菌体５ｇを５０ｍｆの水に懸濁し
、ＩＮ苛性ソーダでＰＨ７に調製した後、ポジトロン破
砕機で菌体を破砕し、さらに９５°Ｃで１０分加熱した
後、１００００ｒｐ＋ｎで１５分間遠心分離し、上清３
８ｍｌを得た（セレン濃度１７４ＰＰｍ）。上滑１０ｍ
ｊ２を凍結乾燥した後、２ｍｆの水に溶解し、その内１
ｍｆを用いてセファデックスＧ５０の１００ｍ４２カラ
ム（２Ｘ３２ｃｓ＋）による溶出パターンとセレンの分
布を調べた。その結果、第２図の如く、８５％以上のセ
レンが高分子分画に存在した。

実施例１３　グルコース濃度と、反応（振盪）時間によ
るセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ３を３０’Ｃで１６時間培養して得た培養液６００
ｍ／！を遠心分離して集菌しく３００Ｏｒｐ―、１５分
間）、５００ｍｊ２の水で３回洗浄した後、菌体濃度を
１．４Ｘ１０’コ／　ｍ　ｌに調製してバイオロジカル
スペースの菌体濃度の状態とし、０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ５）に懸濁して３００ｍｊ２にメスアンプし、そ
の内５０ｍｊ！を５００ｍｆ！容三角フラスコに分注し
、亜セレン酸４．１ｍｇ（セレン濃度として５０ｐｐｍ
）とグルコースＯ％、０．１％０．３％、１％１２％、
３％、５％の各々を加えて３０°Ｃで振盪し反応せしめ
た。その後、４，１６２４時間目の各々で菌体濃度を測
定し、遠心分離して集菌し、さらに菌体を１００ｍｊ！
の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体内に取込ま
れたセレン濃度を測定した。その結果を第１０表に示す
。

以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てグルコースを使用した場合、添加濃度は０．３％以上
であることが好ましかった。

実施例１４　ｔＲ＃Ｉの種類によるセレン取込みへの影
響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０”Ｃで１６時間培養し、培養液１００ｍ
ｆｆ１から得られた菌体を１００ｍｆの水で３回洗浄し
た後、菌体濃度を１．８Ｘ１０”コ／ｍ２に調製してバ
イオロジカルスペースの菌体濃度の状態とし、該菌体を
１％のグルコース、フラクトース、ガラクトース、シェ
ークロース　マルトース、トレハロースを各々含む０．
１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ５）５０ｍｆｆｉに懸濁し、各
々亜セレン酸５ｍｇ　（セレン濃度として６０ｐｐｍ）
！加えて３０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心
分離にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗
浄した後凍結乾燥し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれ
たセレン濃度を各々測定した。その結果を第１Ｉ表に示
す。

（以　下　余　白） 第１１表 以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てグルコース以外にもフラクトース、シュクロース　マ
ルトース、トレハロースヲ使用スることにより良好に菌
体内にセレンを取込ませることができた。

実施例１５　アミノ酸添加によるセレン取込みへの影響 実施例１と同様の条件でサツカロミセス・セレビシェＦ
ＴＹ−３を３０°Ｃで１６時間培養し、培養液１００ｍ
ｊ！から得られた菌体を１００ｍ１の水で３回洗浄した
後、菌体濃度を１．８ＸＩＯ”コ／ｍ２に調製してバイ
オロジカルスペース以上の菌体濃度の状態とし、該菌体
を０．５％のロイシン、イソロイシン、セリン、グルタ
ミン酸、アスパラギンを各々含む０．１　Ｍリン酸緩衝
液（ｐＨ５）５０ｍｌに懸濁し、各々亜セレン酸５ｍ、
ｇ（セレン濃度として６０ｐｐｍ）を加えて３０°Ｃで
２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さ
らに菌体を１００ｍｆｆの水で２回洗浄した後凍結乾燥
し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を各
々測定した。その結果を第１２表に示す。

第　　１２　表 以上から、セレンの高分子化基質である有機化合物とし
てロイシン、イソロイシンを使用することにより良好に
菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１６　微生物をキャンディダ・クルゼイとした場
合 キャンディダ・クルゼイ（Ｃａｎｄｉｄａ　ｋｒｕｓｅ
ｉ）　　１５６−”２５Ａ（ＩＦ○−０８４１）をＹＰ
Ｇ培地で３０°Ｃで２０時間培養し、培養液１００ｍｊ
！から得みれた菌体を１００ｒｒ＋１の水で３回洗浄し
た後、菌体濃度を１．２Ｘ１０’コ／　ｍ　ｌに調製し
てバイオロジカルスペースの菌体濃度の状態とし、該菌
体を１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ
６）２５ｍＡに懸濁し、亜セレン酸１．３ｍｇ（セレン
濃度として３０ｐｐｍ）を加えて、３０″Ｃで２０時間
振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さらに菌体
を１００ｍ１の水で２回洗浄した後凍結乾燥し、乾燥菌
体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を測定した。そ
の結果を第１３表に示す。

第１３表 以上から、キャンディダ属の酵母を使用した場合も良好
に菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１７　微生物をトルラスポラ・デルブレラキイと
した場合 トルラスポラ・デルブレノキイ（Ｔｏｒｕｌａｓｕｐｏ
ｒａｄｅｌｂｒｕｅｃｋｉｉ）　　１５４−ＣＡ　（Ｉ
　ＦＯ−１１２９）をＹＰＧ培地で３０°Ｃで２０時間
培養し、培養液１００ｍｆから得られた菌体を１００ｍ
ｆの水で３回洗浄した後、菌体濃度を１．８Ｘ１０”コ
／　ｍ　１に調製してバイオロジカルスペースの菌体濃
度の状態とし１、該菌体を１％グルコースを含む０．１
　Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）２５ｍ／！に懸濁し、亜セ
レン酸１．３ｍｇ（セレン濃度として３０ｐｐｍ）を加
えて、３０°Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心分
離にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄
した後凍結乾燥し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれた
セレン濃度を測定した。その結果を第１４表に示す。

第１４表 以上から、トルラスポラ属の酵母を使用した場合も良好
に菌体にセレンを取込ませることができ実施例１８　微
生物をラクトバチルス・カゼイとした場合 ラクトバチルス・カゼイ（Ｌａｃｔｏｂａｃｉｌｌｕｓ
　ｃａｓｅｉ）Ｂ　　１０４５　（ＩＦＯ３４２５）を
ｐＨ７に調製したロイコノストック培地（２％グルコー
ス０．５％　イーストエキス、０．５％ペプトン：１２
０°Ｃで１５分殺菌）で３０°Ｃで２０時間培養し、培
養液１００ｍｆから得られた菌体を１００ｍｊ！の水で
３回洗浄した後、菌体濃度を１．２Ｘ１０”コ／ｍ！に
調製してバイオロジカルスペース以上の菌体濃度の状態
とし、該菌体を１％グルコースを含む０．１　Ｍリン酸
緩衝液（ｐＨ６）２５ｍＡに懸濁し、亜セレン酸１．３
ｍｇ（セレン濃度として３０ｐｐｍ）を加えて、３０°
Ｃで２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し
、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄した後凍結乾
燥し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を
測定した。

その結果を第１５表に示す。

（以　下　余　白） 第　　１５　表 以上から、微生物として乳酸菌を使用した場合も良好に
菌体にセレンを取込ませることができた。

実施例１９　微生物をラクトバチルス　アンドフィラス
とした場合 ラクトバチルス・アンドフィラス（Ｌａｃｔｏｂａｃｉ
ｌＩｕｓ　ａｃｉｄｐｈｉｌｕｓ）　Ｂ　−１０５］　
　（ｌ　ＦＯ−３９５３）をｐＨ７に調製したロイコノ
ストック培地で３０°Ｃで２０時間培養し、培養液１０
０ｍｆがら得られた菌体を１００ｍ１の水で３回洗浄し
た後、菌体濃度を１．１ＸＩＯ”　コ／　ｍ　ｎに調製
してバイオロジカルスペース以上の菌体感度の状態とし
、該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液
（ｐＨ６）２５ｍｊ！に懸濁し、亜セレン酸１．３ｍｇ
（セレン濃度として３０ｐｐｍ）を加えて、３０°Ｃで
２０時間振盪して反応せしめ、遠心分離にて集菌し、さ
らに面体を１００ｍｊ！の水で２回洗浄した後凍結乾燥
し、乾燥菌体量と菌体内に取り込まれたセレン濃度を測
定した。その結果を第１６表に示す。

第　　１６　　表 実施例２０　微生物をアスペルギルス・ニガーとした場
合 アスペルギルス゛ニガー（Ａｓｕｐｅｒｕｇｉｌｌｏｓ
ｓ　ｎｉｇｅｒ）Ｓ７（ＩＦＯ−６３４１）をｐＨ７に
調製したＹＭ培地（１％グルコース、０５％ペプトン、
０．３％イーストエキス、０．３％マルトエキス：１２
０°Ｃで１５分殺菌）で２５°Ｃで３０時間培養し、培
養液１００ｍｆから得られた菌体を１００ｍｆの水で３
回洗浄した後、該菌体を１％グルコースを含む０．１Ｍ
リン酸緩衝液（ｐＨ６）１５ｍｆｆに懸濁し、亜セレン
酸１．２５ｍｇ（セレン濃度として５０ｐｐｍ）を加え
て、３０°Ｃで１８時間振盪して反応せしめ、遠心分離
にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水で２回洗浄し
た後凍結乾燥し、乾燥菌体０．４８ｇを得た。菌体内に
取込まれたセレン濃度は９２０ｐｐｍ（取込み率４６％
）であった。

実施例２１　微生物をアスペルギルス・アワモリとした
場合 アスペルギルス゛アワモリ（Ａｓｕρｅｒｕｇｉｌｌｏ
ｓｅ　ａｗａｌｌｏｒｉ）　Ｎ０４Ａ　（ＩＦＯ−４０
３３）をｐＨ７に調製したＹＭ培地で２５°Ｃで３０時
間培養し、培養液１００ｍ１から得られた菌体を１００
ｍｊ！の水で３回洗浄した後、該菌体を１％グルコース
を含む０．１Ｍリン酸緩衝１（ｐＨ６）２５ｍｊ！に懸
濁し、亜セレン酸２．５ｍｇ（セレン濃度として６０Ｐ
ｐｍ）を加えて、３０’Ｃで１８時間振盪して反応せし
め、遠心分離にて集菌し、さらに菌体を１００ｍ１の水
で２回洗浄巳た後凍結乾燥し、乾燥菌体０．６２ｇを得
た。菌体内に取込まれたセレン濃度は、２２３０ｐｐｍ
　（取込み率７０％）であった。

以上から、微生物としてカビを使用した場合も良好に菌
体にセレンを取込ませることができた。

実施例２２　微生物をクロレラ・ブルガリスとした場合 クロレラ・ブルガリス（Ｃｈｒｏｒｅｌｌａ　ｂｕｒＢ
ａｌｌｉｓ）Ｅ−２５を２％グルコース、０．４％尿素
、０．１％リン酸塩、０．１％硫酸マグネシウム、０．
０３％硫酸第一鉄、０．１％塩化カルシウムを含む培地
で３０°Ｃで３０時間培養し、培養液１００ｍｊ！から
得られた菌体を１００ｍ／！の水で３回洗浄した後、菌
体濃度を２Ｘ１０’コ／　ｍ　ｌに調製してバイオロジ
カルスペース以上の菌体濃度の状態とし、該菌体を０．
５％グルコースを含む０．１Ｍリン酸緩衝液（ｐＨ６）
２５ｍｆに懸濁し、亜セレン酸５ｍｇ　（セレン濃度と
して１２０ｐｐｍ）を加えて、３０°Ｃで１８時間振盪
して反応せしめ、菌体濃度を測定して遠心分離にて集菌
し、さらに菌体を１００ｍｊ２の水で２回洗浄した後凍
結乾燥し、菌体内に取り込まれたセレン濃度を測定した
。その結果を第１７表に示す。

（以　下　余　白） 第　　１７　　表 以上かち、微生物として単細胞緑藻を使用した場合も良
好に菌体にセレンを取込ませることができた。

〈発明の効果〉 本発明の製造法の目的は、予めセレンを添加しない実質
的にセレンを含有しない培地で菌体を培養・増殖させる
ため、培養時にセレンによる生育阻害が無く、従来技術
にある予めセレンを添加させた培地で培養・増殖させる
場合−二比すと菌体の増殖速度が早く、また増殖率も優
れている方法を提供する。

また、本発明は国体を培地で充分培養・増殖さゼ、集菌
後に反応液へ該菌体を分散させるため、菌体を４縮化す
ることが可能であることから反応系を小さくでき、した
がって反応後の廃液を少量化することができ、また、反
応液中にセレン以外の金属を含まないため廃液処理を簡
便にする方法を提供する。

さらに、本発明は菌体を適宜増殖させせ、集菌後に水洗
して培養培地成分を除去した後菌体濃度を好ましくはバ
イロジカルスペース以上にＩＩして培養・増殖を停止−
させ、次いで反応液へ該菌体を分散させるため、当然反
応せしめる際には菌体増殖の必要は無く、菌体増殖阻害
を生ずるセレンを反応液中で高濃度にすることが可能で
あり、かつ、菌体内に取込ませ蓄積できる高分子化セレ
ン濃度も高く、高濃度の高分子化セレンを含有した菌体
を製造することを提供する。

【図面の簡単な説明】

第１図は実施例１で求めた菌体の増殖曲線を示し、第２
図は実施例１２参考例で求めた溶出パターンとセレンの
分布を示す。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 中高分子化セレンを菌体内に蓄積することのできる微生
   物を培養して得た菌体をバイオロジカルスペース以上の
   菌体濃度とし、該菌体をセレンの高分子化基質である有
   機化合物および水溶性セレン化合物を含有する水溶液に
   分散せしめることにより、該菌体に高分子化セレンを蓄
   積せしめることを特徴とする高分子化セレン含有菌体の
   製造法。 （２）高分子化セレンを菌体内に蓄積することのできる
   微生物が可食性の酵母、細菌、カビまたは単細胞緑藻で
   ある請求項第１項記載の製造法。 （３）可食性の酵母がサッカロミセス（Ｓａｃｃｈａｒ
   ｏｍｙｃｅｓ）属、トルラスポラ（Ｔｏｒｕｌａｓｕｐ
   ｏｒａ）属、トルロプシス（Ｔｏｒｕｌｏｐｓｉｓ）属
   、ミコトルラ（Ｍｙｃｏｔｏｒｕｌａ）属、キャンディ
   ダ（Ｃａｎｄｉｄａ）属、ハンセヌラ（Ｈａｎｓｅｎｕ
   ｌａ）属に属する酵母である請求項第２項記載の製造法
   。 （４）水溶性セレン化合物が亜セレン酸、二酸化セレン
   またはセレン酸である請求項第１項記載の製造法。 （５）セレンの高分子化基質である有機化合物が糖およ
   び／またはアミノ酸である請求項第１項記載の製造法。 （６）糖がグルコース、フラクトース、シュクロース、
   マルトースまたはトレハロースであり、アミノ酸がロイ
   シンまたはイソロイシンである請求項第５項記載の製造
   法。 （７）セレンの高分子化基質である有機化合物水溶液が
   少なくとも糖および／またはアミノ酸およびリン酸塩を
   含有してなる請求項第５項記載の製造法。