JPH04500068A - 敗血症性ショックの治療および予防のための方法および組成物 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 敗血症性ショックの治療および予防の ための方法および組成物 本発明は、血液の細菌感染に起因する敗血症性ショックに罹患しているか、また はその危険性を有する患者の治療に関するものである。より詳細には、本発明は 、初期敗血症性ショックの予防および急性敗血症性ショックに特有の症状の改善 に関するものである。

敗血症性ショックは、しばしば重篤なグラム陰性菌血症、および頻度は低いがグ ラム陽性菌血症に付随する広範な危険な症候群である。最近の研究によると、グ ラム陰性閑による画面症である１００人の患者からなる仮想集団では、代謝合併 症および／ヨソクの発生率は約２５％である。一方、グラム陽性菌血症（とりわ け、Ｓ、　ａｕｒｅｕＳ感染に起因する）に罹患している患者は約１０％がショ ックを起こす。

閉面症性ショックが存在することで、病的状態および死亡率が著しく増加する。

刺激感染が局限化している場合、ショックは５０％の死亡率に結び付く。全身性 菌血症に随伴するフランクなショックは、７０％以上の死亡率を特徴とする。更 に、ショックおよび閉面症の影響からの回復には通常、非常に費用のかかる長期 間の集中治療が必要である。

ＥｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒｉａｃｅａｅおよびＰｓｅｕｄｏｍｏｎａｄｅａｃｅ ａｅの様なグラム陰性かん菌は、免疫抑制治療を受けているか、または重い熱傷 またはその他の重傷、嚢胞性線維症、腎不全、悪性腫瘍性疾患、大手術、または 器官移植の様な重篤な外傷または疾患に罹患している患者の血流に侵入する、消 化管の正常な生育菌である。

従来の敗血症性／ヨソク症候群は主として閉面症によって誘発される事象に由来 し、それは、細胞壁の細菌性物質（グラム陰性菌におけるエンドトキシン、およ びグラム陽性菌におけるペプチドグリカン／ティコイル酸コンプレックス）が、 補体、凝固、キニン、およびＡＣＴＨ／エンドルフィン系を活性化することによ る。この活性化の結果、一連の代謝的事象が起こり、これか最終的にショック状 態へと進行する。

初期敗血症性ショックは、以下によって特徴づけられる；両極端の体温（＞４０ ．６°Ｃの熱または低体温）、精神状態の変化、直立的血圧低下（＞　３０　ｍ ｍＨｇ）、尿排出量の低下、通常、血清アルブミン濃度の低下に付随する説明の つかない浮腫、血中酸素減少に付随する頻呼吸、および／または代謝性アシド− シスの発症、血清中乳酸の増加、白血球減少（顕著な好中球減少）、および点状 出血状皮疹を伴うか伴わない血小板減少症。

閉面性感染症に関連する敗血症性ショックは、２種類の血行力学的状態で進行す る。まず、患者ば、ＡＣＴＨ／エンドルフィン放出、カリクレイン−キニン系の 活性化、および細菌の細胞壁成分または毒素によって誘発されるヒスタミン放出 の後、血管運動効果に特有の症状を示す。これらの症状が現れた時、補体によっ て媒介される白血球凝集および毛細管損傷（主として、毛細管内付着および活性 化多形核白血球の凝集に起因する）は、重篤な毛細管漏出症候群、次いで血管内 面液量の著しい低下、６排出量の低下、および血管内凝固物の散在化を生じる。

敗血症性ショックの危険性を有する患者の早期診断および治療が望ましいことは 、明らかである。現時点では、予防的方法には、感染コントロール法、抗生物質 および静脈内輸液療法を厳密に行なうこと、免疫予防、および顆粒球輸注かある 。

抗−ショック療法は通常、連続的血行力学的監視下で５％アルブミン、等張食塩 水、または乳酸化リンケル溶液の様な血漿増量剤を使用して容量補充することを 包含する。患者のくさび法肺毛細管圧を高い正常範囲にするのにちょうどの液体 を補充する。容量補充が上方でない場合、ドパミン、ドブタミン、ノルエピネフ リン等の様な血管作用化合物を使用する。更に、メチルプレドニゾロンナトリウ ムスクンネ−１・の様な抗炎症剤を大投与！（３０ｍｇ／ｋｇまで）で使用して もよい。抗プロスタグランンンは、活性化された末梢多形核白血球に起因する炎 症性損傷の抑制のために推奨された。

最後に、画面性感染症による死亡率は、閉面症治療のために、主要なまたは補助 の療法として、熱傷表面の細菌の集落形成を阻害するマフェナイド酢酸塩または 銀塩の様な物質を使用すること、および活性な抗菌剤、交感神経作用アミン、フ ルテコステロイド類、抗凝固剤、顆粒球輸注、および利尿剤を使用することによ って低下された。

しかしながら、この様な方法は、エンドトキシンまたは敗血症性７ヨノクに関連 する罹患率および死亡率のコントロールに一部成功したことを示しただけである 。抗生物質療法は、細菌の細胞壁物質および毒素の放出を誘導することによって 初期毒性ンヨ２りを悪化させる可能性がある。昇圧剤は毛細管の損傷を改善せず 、抗炎症剤療法には異論があり、容量補充は最善でも、浮腫および心臓の合併症 を来たす間に合せ療法である。

今までに確認されたトランスフォーミング成長因子−βの分子は、ジスルフィド 結合によって連結された２本の同等の１１２残基ポリペプチド鎖を含有している ２本鎖分子である。これらの２量体の分子量は約２５ｋｄである。生物学的に活 性なＴＧＦ−βは、コファクターとしてＥＧ’ＦまたはＴＧＦ−αを一緒に加え た時、イン・ビトロ細胞培養において標的セルラインまたはラットの線維芽細胞 の足場非依存性成長を誘導し得る分子として定義されている。血小板または胎盤 からＴＧＦ−βを精製するため、それを組換細胞培養中で生産するため、および その活性を測定するための適当な方法は、知られている。例えば、Ｒ，Ｄｅｒｙ ｎｃｋ等、　Ｎａｔｕｒｅ、　３１６：７０１（１９８５）　；ヨーロッパ特許 公開第１２８．８４９号、　１９８４年１２月１９日公開；第２００．３４１号 、　１９８６年１２月１０日公開；第１６９．０１６号、　１９８６年１月２２ 日公開；第２６８．５６１号、１９８８年５月２５日公開；および第２６７、４ ６３号、１９８８年５月１８日公開；英国特許出願第２．１４６．３３５号、　 １９８５年４月１７日公開、米国特許第４．７７４．３２２号ＴＧＦ−βは、広 範な正常および腫瘍両細胞に対して多くの調節作用を有していることか示された 。最近の研究は、免疫系（Ｊ、　ＫｅｈｒｌＢｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　、　２６ ↓：４３３７［１９８６］　；Ｊ、　Ｖａｒｇａ等、　１３．３．１ｉｅｓ、　 Ｃｏｍｌ１１．１３８：X７４［１９ ている。更に、ＴＧＦ−βは、サイトカイン（例えばＴＮＦ−α）生ＴＧＦ−β は、細胞増殖を刺激または阻害し得、分化を刺激または阻害し得、細胞機能中の その他の重要な過程を刺激または阻害し得るので、多機能性である（Ｍ、　５ｐ ｏｒｎ、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２３３：５３２　［１９８６］）【ＴＧＦ−βの 多機能的活性は、ＴＧＦ−βと一緒に存在するその他の成長因子の影響によって 変調される。ＴＧＦ−βは、ＴＧＦ−βと一緒に細胞中で働く、例えばＥＧＦま たはＴＧＦ−αの様な特定の組の成長因子に依存し、足場依存性成長の阻害剤ま たは増強剤によると、ＴＧＦ−βは、ＥＧＦと協調して作用し、正常（しかしり ウマチ様でない）滑脱細胞を増殖および蓄積させることができる。

更に、Ｃｈｕａ等、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　、　２６０：５２１３− ５２１６　［１９８３コは、ＴＧＦ−βがヒト線維芽細胞培養においてコラゲナ ーゼ分泌を誘導したことを報告し、Ａ、　Ｔａ５ｈｊｉａｎ等、　Ｐｒｏｃ、　 Ｎａｔｌ、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　、　Ｕ、　Ｓ、　Ａ、　、　８２：４５３ ５　［P９８ ５］は、ＴＧＦ−βがプロスタグランジンの放出およびカル７ウムの移動を刺激 したことを観察した。ＴＧＦ−βは、内皮の再生を阻害することも報告された（ Ｒ，１１６ｉｍａｒｋ等、５ｃｉｅｎｃｅ、２３３：１０７８　［１９８６］） 。

１９８４年３月２９日公開のＰＣＴ　１０８４１０１１０６は、動物における組 織の修復のためのＴＧＦ−βの使用、とりわけ細胞増殖を刺激することによる傷 の治癒の促進における使用に関するものである。また、５ｐｏｒｎ等、５ｃｉｅ ｎｃｅ、２１９：１３２９−１３３１　（１９８３）および米国特許第４．８１ ０．６９１号および第４．７７４．２２８号は、結合組織の付着を促進するため のＴＧＦ−βの使用を記載している。

１９８８年６月１日公開のヨーロッパ特許公開第２６９．４０８号および米国特 許第４．８０６．５２３号に対応するヨーロッパ特許公開第２１３．７７６号は 、慢性関節リウマチの様な炎症性疾患を治療するための、免疫抑制剤としてのＴ ＧＦ−βの使用を開示している。

敗血症性ショックおよび侵入性感染症は、外因性および内因性両起源の体液性媒 介物質によって惹起される病気であることがわかった。すなわち、腫瘍壊死因子 （ＴＮＦ）、次いでインターロイキン−１（ＩＬ−１）およびインターフェロン −ガンマ（［ＦＮ−γ）の放出が、グラム陰性敗血症で認められる事象に関与し ている。Ｈｅ５ｓｅ等。

８）。

ＴＮＦに対する抗体は、エンドトキシンの致死効果からマウスを保護することが わかった（Ｂｅｕｔｌｅｒ等、　５ｃｉｅｎｃｅ、　２２９：８６９−８７１（ １９８５））。

また、細菌注入の２時間前に抗−カケクチン／ＴＮＦモノクローナル抗体を投与 すると、ヒトを敗血症性／ヨックおよび死から保護した。Ｔｒａｃｅｙ等、　Ｎ ａｔｕｒｅ、　３３０：６６２−６６４　（１９８７）。しかしながら、ＴＮＦ およびＩＬ−１が、腹腔内感染および放射線病に対する非特異的耐性のエンドト キシン−誘発性増大の媒介に関与していることも示唆された。Ｕｒｂａｓｃｈｅ ｋ等、　Ｒｅｖ、１ｎｆｅｃｔ、Ｄｉｓ、、ト５６０７−Ｓ６１５　（１９８７ ）。

エンドトキシンまたはその成分に対するモノクローナル抗体は、グラム陰性敗血 症の免疫療法におけるその有用性について評価された。即ち、例えば、抗−コア リポ多糖類（Ｅ、　ｃｏｌｉ）は、重度の敗血症糖類に対するネズミおよびヒト モノクローナル抗体は、動物をグラ第１８３．８７６号；　１９８６年３月１２ 日公開のヨーロッパ特許公開第１７４．２０４号。リピドＡに対する抗体も、ヒ トにおいて保護効果があった。Ｊａ株に対する抗体は、動物およびヒトで敗血症 性ショックに対して保ンコア糖脂質に対する抗体は、手術患者のグラム陰性菌感 染が重篤エキソエンザイムＳに対するヒトモノクローナル抗体は、この目的のた めに有用であると記載された。それぞれ、１９８７年６月３０日発行の米国特許 第４．６７７、０７０号および１９８７年１０月２８日公開のヨーロッパ特許公 開２４３．１７４号。

抗体を使用するこれらのアプローチの臨床的有用性は評価されているか、これら は、好ましくない動力学、生物学的半減期および治療抗体を中和する抗イデイオ タイプ抗体の生成（ヒト抗体の場合）の可能性の様な幾つかの不都合を招くかも しれないと思われる。また、この免疫療法は、初期エフェクターを制するだけで ある。

モノクローナル抗体療法に依存しない、敗血症性ショックの効果的な治療および 予防のための方法および組成物を提供することが、本発明の目的である。

この目的および他の目的は、当業者には明らかとなろう。

これらの目的は、１態様では、敗血症性／ヨックに罹患しているかまたはその危 険性を有する患者に、薬学的有効量のトランスフォーミング成長因子−ベータ（ ＴＧＦ−β）を投与することからなる方法によって達成される。

別の態様では、本発明は、薬学的有効量のトランスフォーミング成長因子−ベー タ（ＴＧＦ−β）、および酢酸マフェナイド、抗菌剤、交感神経作用アミン、コ ルチフステロイド、抗凝固剤、抗炎症剤、利尿剤、腫瘍壊死因子に対する抗体、 リピドＡに対する抗体、エンドトキシンコア糖脂質に対する抗体、１ｃｏｌｉの Ｊ５変異株に対する抗体、腫瘍壊死因子に対するアンタゴニスト、インターロイ キン−１に対するアンタゴニスト、およびこれらの物質の２またはそれ以上の混 合物からなる群から選択される物質の薬学的有効量を含有している、敗血症性シ ョックの治療および予防のための組成物を提供する。

第１８およびｌｂ図はそれぞれ、ブタおよびヒトＴＧＦ−β３のＣＤＮＡ配列お よび導き出されるアミノ酸配列を示す。成熟ＴＧＦ−β３の１１２アミノ酸配列 （上線を付した）は、前駆体のＣ末端を構成し、４塩基残基（＋）の下流にある 。この前駆体セグメントは４個の、上線を付したＮ−グリコジル化可能な部位を 含有している。全てのシスティン残基には陰影を付す。ｃＤＮＡの３′末端に近 い、ポリアデニル化部位の上流のＡＡＴＡＡＡ（第１ａ図）および関連ＡＧＴΔ ＡＡ（第１ｂ図）配列には下線を付す。第１ｃ図は、ヒト（ｈ）およびブタ（ｐ ）ＴＧＦ−β３前駆体の帰属アミノ酸配列間の相同性を示す。星印は同一残基を 示し、点は保存的アミノ酸置換を示す。成熟ＴＧＦ−β３配列は四角で囲む。

第２図は、選択された形態のＴＧＦ−βのＮ−末端を示す。ｈＳｐおよびｂなる 文字はそれぞれ、ヒト、ブタおよびウシを表わす。ホモローガスでない残基は、 その残基上のピリオドによって示す。

第３図は、エンドトキシンチャレンジに関して、種々の投与量および回数にて組 換ヒ）ＴＧＦ−βまたは組換ヒトＩＬ−１αで治療後の時間について、ＰＢＳ対 照群に対するマウスの累積致死率パーセントを示す。

第４図は、エンドトキシンチャレンジに関して、種々の投与ｍおよび回数にて組 換ヒ）ＴＧＦ−βで治療後の時間について、ＰＢＳ対照群に対するマウスの累積 致死率パーセントに関する、第３図とは別の試験を示す。

第５図は、盲腸の結紮および穿刺手術後、組換ヒトＴＧＦ−βまたは組換ヒｌ− Ｉ　Ｌ　−１αでマウスを治療してからの、ＰＢＳ対照群に対する累積致死率パ ーセントを示す。

本明細書で使用する時、“敗血症性ショック”なる表現は、主としてグラム陰性 菌血性感染によって惹起される患者の症状を意味する。

エントド牛／ンンヨックがサブセットであるこの病理学的症状は、不可逆的心血 管崩壊および重篤な器官不全の様な症状を特徴とする。

また、患者は通常、過剰換気、皮膚の病変および低血圧、およびある場合、熱、 悪寒、尿排出量の低下、循環血小板濃度の低下、黄痕、アンドーンス、出血、お よび低酸素症を経験する。敗血症性ショックの原因となるグラム陰性菌の例には 、例えばＥ、　ｃｏｌ　ｉのＪ５変異株（Ｒｅ変異株に類似した、そのエンドト キシンにコア決定基のみを有する）を包含するＥ、ｃｏｌｉＳＰｓｅｕｄｏｍｏ ｎａｓ　ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、＾ｅｒｏｍｏｎａｓ　ｈｙｄｒｏｐｈｉｌａ、 　Ｙｅｒｓｉｎｉａ　ｐｅｓｔｉｓ、およびＫｌｅｂｓｉｅｌｌａ−Ｅｎｔｅｒ ｏｂａｃｔｅｒ、　Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ、　Ｈｅｍｏｐｈｉｌｕｓ、　Ｐｒｏ ｔｅｕｓ、および５ｅｒｒａｔｉａからの種がある。

各々の種は、患者に種々の症状を呈し得る。

現時点では、５つの非常にホモローガスな形態のＴＧＦ−β、即ちＴＧＦ−β１ 、ＴＧＦ−β２、ＴＧＦ−β３、ＴＧＦ−β４、およびＴＧＦ−β５が確認され ている。これらの形態の最初の３形態についてのＮ末端は、第２図に記載されて いる。本明細書中、ＴＧＦ−βについて言う時、これらが本明細書記載の方法で 有効である限り、これらの確認された形態のいずれかおよび将来確認されるであ ろうその他の形態、そのアレル体、およびその予め決定されたアミノ酸配列変異 体にっての言及であると理解される。

第１ａ−１ａ図かられかる様に、成熟ＴＧＦ−β３アミノ酸配列は多数のシステ ィン残基を含有しており、その少なくとも幾つかは明らかに、天然の供給源から 回収されるホモニ量体ＴＧＦ−βの形成において分子内交差結合に関与している 。前駆体の残部は２個のシスティン残基を含有しているだけである。完全なＴＧ Ｆ−β３前駆体は、更に翻訳後切断を受け、別のポリペプチド物を与えるであろ う数対の塩基残基を含有している。

ブタおよびヒトＴＧＦ−β３前駆体配列の比較（第１ｃ図参照）から、９０％の アミノ酸の同一性がわかる。ヒトおよびブタｃＤＮＡ配列から予想されるアミノ 酸配列はそれぞれ、４１０および４０９アミノ酸長さであり、成熟ＴＧＦ−βに ついて以前に確立された配列に類似したＣ末端配列を有している。Ｃ末端＋１２ アミノ酸配列はブタおよびヒトＴＧＦ−βｌ配列に約８０％の類似性を有し、Ｔ ＧＦ−β２の配列と同程度の相同性を有する。

本発明の方法によると、ＴＧＦ−βを予防的にまたは治療的に、即ち感染か始ま る前、それと同時に、またはその後に投与する。ＴＧＦ−βは、敗血症に罹患し ているか、またはグラム陰性菌血性感染症に罹患する危険性を有する人々を治療 するために受動的に使用することができる。危険を有する患者は、免疫抑制療法 を受けている患者、重篤な熱傷またはその他の重篤な外傷、嚢胞性線維症、腎不 全、または癌に罹患している患者、または広範な外科的方法または器官移植を受 けている患者を包含する。可能な治療の１つは、嚢胞性線繊症患者に特有の慢性 気管史的感染の治療である。

ヒトを治療するために、ヒト以外の動物、例えばブタまたはウシ供給源からのＴ ＧＦ−βを使用することは、本発明の範囲に包含される。また、家畜および農園 動物、およびスポーツ用またはペット用動物の様なその他の哺乳動物種を治療す るのが望ましい場合、ヒ１−ＴＧＦ−β、およびその他の種由来のＴＧＦ−βが 好適に使用される。動物の治療の１例では、エンドトキシンの影響を除去および 中和するためにＴＧＦ−βを使用することによって、乳牛の急性大腸菌型乳腺感 染症が治療される。即ち、本明細書で使用する“患者”なる語句は、ヒトだけで はなく全ての動物を意味する。

非経口的投与、および局在している細菌のために望ましい場合、病巣内投与、好 ましくは非経口的投与を包含するいずれかの適当な方法によって、患者にＴＧＦ −βを投与する。個々の投与方法は、例えば、投与が治療用であるか予防用であ るかによって決まるであろう。即ち、治療上切迫した、必然的な結果であるフラ ンクなショックについては、ＴＧＦ−ベータは、最初の容量増大のために使用さ れる溶液と同時に静脈内注射されるのが好ましい。しかしながら、予防は通常、 例えば筋肉内または皮下投与または動脈内および腹腔的投与、好ましくは静脈内 または腹腔内を包含するその他の非経口的投与によって行われる。

治療において使用されるＴＧＦ−β組成物は、個々の患者の臨床的症状、敗血症 性ノーＪツクの原因、ＴＧＦ−βがフランクなショックの治療のために使用され るかまたは初期敗血症性／ヨソクの予防のために使用されるか、ＴＧＦ−βの投 与部位、投与方法、投与スケジュール、および実施者に既知のその他の因子を考 慮に入れ、良好な医学的方法に従って処方され、投与されるであろう。従って、 本発明の目的のための“有効量”は、この様な考慮によって決定される。

一般的な計画としては、ｌ投与量たり非経口的に投与されるＴＧＦ−βの全薬学 的有効量は、１日当たり患者の体重光たり約１μｇ／ｋｇ〜１　ｍｇ／　ｋｇの 範囲となるが、上記の如く、これは多くの治療的裁量によるであろう。適切な投 与量およびスケジュールの選択に重要な因子は、得られる結果である。比較的高 い投与量は、大きなショックの治療のために、即ち、急性腎不全または呼吸困難 にあるか、または重度の低血圧（約６０ｍｍＨｇ以下の平均動脈圧）を有する患 者のために、初期に必要となり得る。

ＴＧＦ−βは、活性化形態お−よび遅放性製剤のための潜伏性形態で使用される 。例えばＭｉｙａｚｏｎｏ等、　Ｊ、　Ｂｉｏｌ、　Ｃｈｅｍ、　、　２６３　 ：　６４０７−６４１５（１９８８）に記載された様な、酸性または塩基性のｐ Ｈ値、ドデシル硫酸ナトリウム、または高濃度の尿素に接触させる如き方法によ って、ＴＧＦ−βを活性化するのか好ましい。例えば、ＴＧＦ−βを酸にて、６ 以下、好ましくは５．５以下のｐＨで処理するか、または００２％ＳＤＳまたは ８Ｍ尿素と一緒にインキュベ−１・し、活性化する。

非経口的投与のためには、通常、ＴＧＦ−βと生理学的に許容し得る担体、即ち 、使用される投与量および濃度で受容体に非毒性である担体を、所望の純度で、 単位投与注射剤形（溶液、懸濁液、または乳濁液）で混合することによって製剤 化される。担体は、非経口的担体であるのが好ましい。この様な担体ビヒクルの 例には、水、食塩水、リンゲル液、デキストロース溶液、および５％ヒト血清ア ルブミンがある。不揮発性油類およびオレイン酸エチルの様な非水性ビヒクルも 、リポソームと同様に本発明で有用である。通常、担体は、例えば緩衝剤および 保存剤である等優性および化学的安定性を増大する物質、および低分子量（約１ ０残基以下の）ポリペプチド、タンパク、アミノ酸、グルコースまたはデキスト ラン類を包含する炭水化物、Ｅ　Ｄ　′ＦＡの様なキレート剤、またはその他の 賦形剤の様な少量の添加剤を包含し得る。ＴＧＦ−βは通常、この様なビヒクル 中、約０　、１　ｍｇ／　ｍｌ〜Ｉ　ＯＯｍｇ／　ｍｌの濃度、４〜６のｐＨ範 囲で製剤化される。

治療用投与で使用するためのＴＧＦ−βは無菌でなければならない。これは、（ ０，ｚ　ミクロン）メンプランを通す滅菌濾過によって容易に行われる。ＴＧＦ −βの再構成用凍結乾燥製剤は目的に合致するが、これは熱的および酸化的変性 に非常に安定であるため、通常、水性溶液として貯蔵されるであろう。

ＴＧＦ−β治療法または予防法は、敗血症性ショックのための、他の提案された 、または通常の治療法または予防的処置と組み合わせられるのが好ましい。例え ば、火傷の治療のためには、ＴＧＦ−β治療は、別の手段により、火傷表面の細 菌の集落形成を阻害する酢酸マフェナイド、抗生物質または抗菌剤の様なその他 の物質と同時に同じ投与経路によって投与することができる。ＴＧＦ−β治療法 と組み合わせ得るその他の治療法は、主要な治療剤、例えば、Ｐ。

ａｅｒｕｇｉｎｏｓａ、　Ｅｎｔｅｒｏｂａｃｔｅｒ種、インドール−陽性Ｐｒ ｏｔｅｕｓ種、および５ｅｒｒａｔｉａに対して活性なアミノグリコシド類（ア ミカ７ン、トブラマイシン、ネチルマイシンおよびゲンタマイシン等）、セファ ロスポリン、類似ベーターラクタム剤、例えばモキサラクタム、カルボベネム類 、例えばイミベネム、モノバクタム剤、例えば、アズトレオナム、アンピシリン 、および広範スペクトルのベニ７リン類（例エバ、へ二／リナーセ耐性ベニンジ ン類、ウレイドペニシリン類、またはアンチンニートモナルベニ／リン類）を包 含する。

敗血症性ショックの治療における種々の補助薬も、ＴＧＦ−βとの絹み合わせて 使用し得る。これらは、交感神経作用アミン類（血管収縮剤）、例えばノルエピ ネフリン、エピネフリン、イソプロテレノール、ドパミン、およびドブタミン； 抗炎症剤、例えばメチルプレドニゾロン、コルチコステロイド類、例えばベータ メタシン、ハイドロコルチゾン、メチルプレドニゾロン、またはデキサメタシン 、抗凝固剤、例えばヘパリン、またはある種の症状およびスケジュールのための クマジンータイブの薬物；利尿剤、例えばフロセミドまたはエハクリン酸（ｅｈ ａｃｒｙｎｉｃ　ａｃｉｄ）　；アヘン誘導体およびベータエンドルフィン類の アンタゴニスト、例えば、ナロキソン；腫瘍壊死因子またはインターロイキン− １のアンタゴニスト；フェノチアンン類；抗ヒスタミン類；抗炎症剤、例えば、 インドメタシンおよびフェニルブルタゾン；グルカゴン；α−アドレナリン遮断 剤、血管拡張剤；血漿増加剤、濃縮（ｐａｃｋｅｄ）赤血球；血小板；寒冷沈降 剤、新鮮な凍結血漿：クリングマイシン；Ｅ、ｃｏｌｉのＪ５変異株、リビドＡ 、またはエンドトキシンコア糖脂質に対する抗体を包含する。

抗体の製造方法は、前記論文に記載されている。

ＴＧＦ−β投与と組み合わせて使用し得る治療法は、顆粒球輸注および腹部膿瘍 の経皮ドレナージを包含する。また、ＴＧＦ−βと組み合わせて使用し得る予防 法は、例えば、感染性薬物と患者の接触を最小にするためのバリヤー分離、全身 形の予防用抗菌剤の使用、タイプ特異的または交差反応性抗体による能動的また は受動的免疫予防法、予防用顆粒球輸注による宿主顆粒球プールの増大を包含す る。

この様な補助治療薬をＴＧＦ−β組成物自体に含有させることは必要ではないが 、この様な薬物、例えば、ＴＮＦ−αまたはＩＬ−１の活性に対するアンタゴニ スト、または上記中和抗体を同じ投与経路によって投与する場合、これは好都合 であろう。

ＴＧＦ−βと一緒に使用する場合、この様な薬物（抗生物質以外）代表的な組み 合わせ組成物は、約０．５ナノモル、通常約０．０５マイクロモルのＴＧＦ−β 、約０．　ＯＯ０３〜０゜０５マイクロモルの抗リポ多糖類［ｇＧ、および約５ 〜６０マイクログラムのドパミンを、約１０〜１０１００Ｏの好適な静脈内また は腹腔内用液、例えば乳酸化リンゲル液中に含有する。次いで、この組成物をピ ギーバックして、まず、血漿増量のために注入し、ショックをコントロールする ために投与する。

本発明は、以下の実施例を参照することによって、より完全に理解されるであろ う。しかしなから、これらは本発明の範囲を限定するものと理解されるべきでは ない。

実施例１ イン・ビポでのＬＰＳ−誘発性ＴＮＦ−α生産に対するＴＧＦ−βの効果を調へ るために、下記の試験をデザインした。

各群６匹のマウスからなる５群の、６−８週令の雌性ＢＡＬＢ／Ｃマウスを、以 下の様に処置した： Ａ群：　Ｌ　Ｐ　Ｓ　（Ｅ、ｃｏｌｉ　ＬＰＳ　０２６：Ｂ６．　ＳｉｇｉａＣ ｈｅｍｉｃａｌ　Ｃｏ、、　Ｓｔ、Ｌｏｕｉｓ、　ＭＯ）　５μｇ／マウスを、 ５μｍ／マウスで静脈内投与した。

Ｂ群ニリン酸緩衝化食塩水を、０時間（ＬＰＳを投与した時）の４時間前、およ び０時間に投与した。

０群：ＬＰＳ（０時間）投与の４時間前にＴＧＦ−β　１μｇ／マウスを１００ μｌ／マウスで、５μｇ／マウスを１００μｍ／マウスで静脈内投与した。この 試験で使用したＴＧＦ−βは、１９８６年１２月１０日公開のヨーロッパ特許公 開第２００．３４１号の記載に従って組換で入手したヒＩ−ＴＧＦ−β１であっ た。ＴＧＦ−βのために使用した希釈液は２０ｍＭ酢酸ナトリウム緩衝液、ｐＨ ４であった。

１群につき３匹のマウスをＬＰＳ処置の６０分後に殺して瀉血し、１群につき他 の３匹のマウスをＬＰＳ処置の９０分後に殺して瀉血した。マウスからの血清を 集め、−７０°Ｃで貯蔵した。次いで、この血清を、Ｅｓｐｅｖｉｋ等、　Ｊ、 　１ｍｍｕｎｏ１．　Ｍｅｔｈ、　、　９５：９９−１０５（１９８６）によっ て記載されたＶＥＨＩ　１６４クローン１３マウス線維肉腫細胞を使用するＭＴ Ｔテトラゾリウム細胞毒性検定に付すことによって、血清中のＴＮＦ−αの量を 測定した。結果を以下の表に示す：各３試験毎のＴＮＦ−α 試験番号　、％Ｊ’ｌ　」Ｌｐｊ獲ムＵ　平均値（ｐｇ／ｍ１）ｌ　ＬＰＳ　１ １７＋／−２１ ２６０’　ＬＰＳ　４１０＋／−３３２７３＋／−８５３ＬＰＳ　２９３＋／− ４０ ４ＬＰＳ　５２５＋／−４ ５９０°　ＬＰＳ　３１２＋／−０３６９＋／−７８６ＬＰＳ　２７０＋／−１ ０ ７ＰＢＳ　＜０．２ ８６０”　ＰＢＳ　＜０．２ ９　ＰＢＳ　＜０．２ １０　ＰＢＳ　＜０．２ １１９０’　ＰＢＳ　＜０．２ １２　ＰＢＳ　＜０．２ １３　１、ｕｇＴＧＦ−β　７２＋／−６１４６０°　１μｇ　ＴＧＦ−β　４ ０９＋／−１９２３６＋／−９７１５１μｇ　ＴＧＦ−β　２２７＋／−１４１ ６１μｇ　ＴＧＦ−β　９’／＋７−８１７９０’　１μｇ　ＴＧＦ−β　２０ ３＋／−１７２４１＋／−９７１８１μｇ　ＴＧＦ−β　４２３＋／−４７１９ ５μｇ　ＴＧＦ−β　４４３＋／−３０２０６０″　５μｇ　ＴＧＦ−β　３８ ９＋／−２０６４９＋／−２３３２１５μｇ　ＴＧＰ−β　１１１４＋／−７２ ２２５μｇ　ＴＧＦ−β　６０１＋／−２２３９０°　５μｇ　ＴＧＦ−β　３ ７９＋／−４０５６１＋／−３２４２４５μｇ　ＴＧＦ−β　７０５＋／−６８ ２５１Ｏμｇ　ＴＧＦ−β　１０３９＋／−６４２６６０°　１０μｇ　ＴＧＦ −β　４０１＋／−７６７９１＋／−１９７２７１０μｇ　ＴＧＦ−β　９３５ ＋／−６７２８１０μｇ　ＴＧＦ−β　２２９２＋／−２４２９９０°　１０μ ｇ　ＴＧＦ−β　２１１ｇ＋／−８３１８４２＋／−３６５３０１０μｇ　ＴＧ Ｆ−β　１１１８＋／−１３この結果は、ＴＧＦ−βが、低投与量では、エンド トキシンによって誘発されるＴＮＦ−αの生産を阻害し、より高い投与量ではＴ ＮＦ−α生産を有意に高めることを示している。

雌性ＮＭＲＩマウスを使用して同様の試験を行ない、以下のことがわかった：対 照群、およびＴＧＦ−β　５μｇを腹腔内投与した２時間後のマウスではＴＮＦ −αは検出されず、エンドトキシン１０μｇを投与した２時間後には７７０Ｕ／ ａ＋ｌのＴＮＦ−αが検出され、ＴＧＦ−β（５μｇ）をエンドトキシン１０μ ｇと同時に注射した時には２４０Ｕ／ｍｌのＴＮＦ−αが検出された。

実施例２ 第１エンドトキンン耐性モデル 各群１０匹の動物からなる、５群のＮＭＲＩ雌性マウス（体重２８．２＋／−３ ，４ｇ、９−１０退会）を使用した。マウスには自由に餌をとらせた。１群に一 ２４時間に、第２群にエンドトキシン投与時に、第３群に一２４時間および更に エンドトキシン投与時に、ＴＧＦ−β　５βｇを投与し、第４群に一２４時間に 組換ヒト［Ｌ−１α　２０００単位を投与した。第５群は、−２４時間にリン酸 緩衝化食塩水０．５ｍｌで処置したマウスからなる対照群とした。ＴＧＦ−βお よびＩＬ−１の投与は腹腔内であり、エンドトキシンの投与は１回当たり２００ ８ｇまたは０．２ｍｌで静脈内注射した。

この試験で使用したＴＧＦ−βは、実施例１で使用したものと同一であった。精 製後、ＴＧＦ−βをｐＨ５〜５．４の酢酸緩衝液中に処方した。ＩＬ−１は、ロ メディコ博士（（Ｄｒ、　Ｌｏｍｅｄ　１ｃｏ）、口７ユ・ファーマンユーティ カルズ、ナノトレイ、ニューシャーシー）から人手した組換ヒトＩＬ−１αであ った（ＩＬ−１αおよびＩＬ−１βは同じレセプターに結合するので、ＩＬ−１ βを使用して同様のびＢｏｉｖｉｎ等、　Ｒｅｖ、　ｄ’　１ｍｍｕｎｏｌｏｇ ｉｅ＋　１：５５３（１９３５）によって記載された方法によって、Ｅ、ｃｏｌ ｉ　０１１１：Ｂ４（誰でも入手し得る）から抽出された。

マウスの致死率パーセントを、１．２．３および４日後に調べた。

この研究の結果を第１表に示し、マウス各群の日数に対する累積致死率パーセン トのグラフを第３図に示す。図中、クロスはＴＧＦ−βブレ処置群であり、黒丸 はＴＧＦ−βプレ処置／同時処置群であり、黒三角はＴＧＦ−β同時処置群であ り、破線はＩＬ−１処置群であり、星印はＰＢＳ対照群である。

第１表 ＴＧＦ−βを使用した時、致死率パーセントは全ての場合において対照群より低 下した。ＴＧＦ−βを一２４時間に１度投与した時、致死率パーセントは最低で あった。

推λ王／−γ上九乙乙耐性モチ化 １９０μｇ７０．２ｍｌの静脈内投与量のエンドトキシン、１０匹のマウスから なる群、上で使用した種々の腹腔的投与量のＴＧＦ−β（即ち、エントドキン投 与の２４時間前に５μｇ／　Ｏ、’　２５　ｍｌ、エンドトキシン投与と同時に ５μｇ１０．２５ｍ１、エンドトキシン投与と同時に１０μｇ１０．２５ｎｌ） を使用し、上の試験を再び行った。エンドトキシンチャレンジ後１〜４日の累積 致死率パーセントプロファイルを第４図に示す。図中、白四角は対照群であり、 クロスはエンドトキシン投与２４時間前のＴＧＦ−βであり、白丸はエンドトキ シン投与と同時の５βｇＴＧＦ−βであり、黒丸はエンドトキシン投与と同時の １０μｇＴＧＦ−βである。１０μｇ／マウス投与量のＴＧＦ−βは、エンドト キシン投与後の致死率を高めることがわかった。

敗血症／盲腸結紮モデル ＴＧＦ−βは免疫抑制効果を有するので、ＴＧＦ−βが、刺傷を原因とする細菌 感染に対するマウスの罹病率を高めるか否かを調べるために、試験を行った。

ＴＧＦ−βおよびＩＬ−１を、下記の様に、マウスに外科的処置を行う２４時間 前に１回、ＴＧＦ−β　５βｇ投与量およびＩＬ−］２０００単位投与量で別個 に腹腔内投与した。ＰＢＳを０．５ｍｌｍｌ腹腔再投与対照群を使用した。

自由に餌をとらせた７匹の雌性ＮＭＲ，Ｉマウス（体重２８．２＋／−３，４ｇ ）からなる群で、試験を行なった。エーテル麻酔した動物に０．５−ｃｆｆｌ中 線切開を行ない、盲腸を注意深く外面に出した。搾乳器具によって上行結腸から 音腸に糞便を満たし、腸の連続性を維持するために回腸弁のすく下を結紮した。

２０ゲージ針で盲腸を２回穿刺し、次いで軽く圧迫して糞便を表出させた後、盲 腸を腹腔に戻し、切開部分をクランプで閉じた。最後に、手術したマウスに食塩 水１ｍｌを皮下投与した。

次に、マウスの致死率パーセントを、手術後８日間毎日評価した。

結果を第５図に示す。白丸は対照群を示し、黒丸はＩＬ−１を示し、クロスはＴ ＧＦ−βを示す。ＩＬ−１は対照群に比較して致死率を低下することかわかった か、ＴＧＦ−βは対照群に比較して致死率を低下しないかまたは実質」二、上昇 させた。即ち、既知の免疫抑制薬である′ＦＧＦ−βは、マウスの致死率を上昇 させなかった。

実施例３ 最近の証拠は、腫瘍壊死因子−アルファか、抗し難い細菌感染の致死効果の重要 な媒介物質であることを示唆している。逆に、ＴＮＦ−αに対する抗体の投与は 、敗血症性ショックの致死効果から動物を保護する。ＴＧＦ−βは、イン・ビト ロおよびイン・ビボにお１８０−２００ｇのフィノ／ヤー３４４雄性ラットに、 組換ＴＧＦ−β１（０１％重量　容量ヒト血清アルブミンを加えた２０ｍＭ酢酸 ナトリウム、ｐＨ５からなる緩衝液中、実施例１の記載と同様にして調製）、組 換ＴＧＦ−β２（凍結乾燥ペレットとしてアドリアーノ・フォンタナ博士、チュ ーリッヒ、スイスから入手し一１９８８年６月２日公開のＷＯ８８１０３８０７ 参照−１％酢酸中に再懸濁したもの）、または希釈液対Ｍ（０，１％ヒト血清ア ルブミンを加えた２０ｍＭ酢酸ナトリウムの緩衝液からなる）のいずれかｌＯμ ｇを腹腔的投与した。７２時間後、病原性Ｅ、ｃｏｌｉ（１−３Ｘ　１０９）を 投与した。結果を以下に示す。

このラットモデルでは、１−２５μｇのＴＧＦ−β１は希釈液対照に対する致死 率を低下するのに有効であるが、５０μｇ投与量のＴＧＦ−β１は対照に対する 致死率を上昇させることがわかった。

これは、実施例１で報告した実験からの投与量依存性の結果と一致する。

によって記載されたＬ−Ｍイン・ビトロ生物検定により、Ｅ、ｃｏｌｉ注射の２ 時間後、低下した血清中ＴＮＦ−α（およびＩＬ−６）１１度を調へた。血清中 ＴＮＦ−ａ濃度は、２２＋、／’−４，９単位／ｍ１（５匹のラット）に対し、 対照については８７．５＋／−１８，６単位／ｍ１（５匹のラット）、ｐ＜０． ０１であることがわかった。

これらのデータは、イン・ビポでｒＴＧＦ−βでプレ処置すると、Ｅ、ｃｏｌｉ チャレンジに対するビークＴＮＦ−α応答を低下し得、また、敗血症性ショック について観察される致死（率）を遅延および低下し得ることを示唆している。

ｈ、β−τｃｒ　：　入ＬＤＴＮＹＣＦＳＳＴＥ］ＧＪＣＣＶＲＱＬＹよりｍＤ ＬＧＷＸ−Ｗ工ＨΣＰＸＧ’ｉｈ、ｐ−ＴにＴ、　入ＬＤＴＮＹＣＴＲＮＬＥＥ ＮＣＣＶＲ？ＬＹｉＤＴＲＯＤＬＧ譬に−ＷＶＨＥＰＫＧ’ｉｐ、ｐ−ＴＣＦ、 　ＡＬＤＴＮＹＣｒＦｃＮＬＥＥＮＣ口ＶＲＰＬＹよりＴＲＱＤＬＧＷ’に一１ ｐＶＨＥ？ＮＧ’ｉｈ、ｐ−ＴＣＦ、：　ＷＡＮＴＣＬＧ？ＣＰＹ：ＷＳ　；Ｄ Ｔ−−−−ＱＹＳＸＶＬＡＬ−ＹＮＱ−−ＨＮＰＧＡｐ、　β−ＴｃＴ、：　Ｙ ＡＮＦＣ５ＧＰＣＰＹＬＲ５ＡＤＴ−−−−Ｔ）：ＳＳ−：ＬＧＬ−ＹＮＴ−− ＬＮＰＥＡｈ、、＃−ＴＣＦ、：　５ＡＡＰＣ：ＣＶＰＱＡＬＥＰＬＭＶＹＹＶ −ＧＲ）ＣＰＫＶＥＯＬＳＮＭＩＶＰ、５ＣＸＣ５ｈ、β−ＴＣＦ３：　Ｓ入Ｓ ＰＣＣＭＰＱＤＬΣＰＬτ工ＬＹＹＶ−ＧＲＴＰＫＶΣＱＬＳ）Ｊ’ＭＷＫＳＣ ＸＣ５エンドトキシンチャレンジ後の日数 手術後の日数 チャレンジ後の日数 国際調査報告 ＩＩＩ＋−マ酬−＾−喝ム−−１−−１−−６１＋ｐＣ〒７ｉ！（にＲ９）ｎｆ ｆ１につ国際調査報告

Claims (15)

【特許請求の範囲】
1. １．敗血症性ショックに罹患しているか、またはその危険性を有する患者に、薬 学的有効量のトランスフォーミング成長因子−べータ（ＴＧＦ−β）を投与する ことからなる方法。
2. ２．薬学的有効量が患者の体重につき約５μｇ／ｋｇ〜１ｍｇ／ｋｇであり、Ｔ ＧＦ−βが１日当たりを基礎として非経口投与される請求項１に記載の方法。
3. ３．ＴＧＦ−βが、微生物感染症に罹患しているが、まだ敗血症性ショックの症 状を呈していない患者に投与される請求項１に記載の方法。
4. ４．ＴＧＦ−βが静注または腹腔内投与される請求項３に記載の方法。
5. ５．ＴＧＦ−βが、微生物感染症に罹患しているが、まだ敗血症性ショックの症 状を呈していない患者に腹腔内投与される請求項２に記載の方法。
6. ６．ＴＧＦ−βが、酢酸マフェナイド、抗菌剤、交感神経作用アミン、抗炎症剤 、コルチコステロイド、抗凝固剤、利尿剤、腫瘍壊死因子に対する抗体、リピド Ａに対する抗体、エンドトキシンコア糖脂質に対する抗体、Ｅ．ｃｏｌｉのＪ５ 変異株に対する抗体、腫瘍壊死因子に対するアンタゴニスト、インターロイキン −１に対するアンタゴニスト、および２またはそれ以上のこれらの物質の混合物 から選択される物質の薬学的有効量と一緒に投与される請求項１に記載の方法。
7. ７．ＴＧＦ−βがヒトＴＧＦ−βである請求項１に記載の方法。
8. ８．ＴＧＦ−βがＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、またはＴＧＦ−β３である請求 項１に記載の方法。
9. ９．ＴＧＦ−βがＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、またはＴＧＦ−β３である請求 項７に記載の方法。
10. １０．トランスフォーミング成長因子−ベータ（ＴＧＦ−β）の薬学的有効量、 および酢酸マフェナイド、抗菌剤、交感神経作用アミン、コルチコステロイド、 抗炎症剤、抗凝固剤、利尿剤、腫瘍壊死因子に対する抗体、リピドＡに対する抗 体、エンドトキシンコア糖脂質に対する抗体、Ｅ．ｃｏｌｉのＪ５変異株に対す る抗体、腫瘍壊死因子に対するアンタゴニスト、インターロイキン−１に対する アンタゴニスト、および２またはそれ以上のこれらの物質の混合物から選択され る物質の薬学的有効量を含有してなる敗血症性ショックの治療または予防用組成 物。
11. １１．組成物が薬学的に許容し得る担体中に製剤化される請求項１０に記載の組 成物。
12. １２．担体が非経口的である請求項１１に記載の組成物。
13. １３．ＴＧＦ−βがヒトＴＧＦ−βである請求項１１に記載の組成物。
14. １４．ＴＧＦ−βがＴＧＦ−β１、ＴＧＦ−β２、またはＴＧＦ−β３である請 求項１３に記載の組成物。
15. １５．等張性である請求項１０に記載の組成物。