JPH04503683A

JPH04503683A - 凝血塊を溶解するための薬剤学的製剤およびその製造方法

Info

Publication number: JPH04503683A
Application number: JP3502062A
Authority: JP
Inventors: コーネルト，ウルリッヒ; ルードルフ，ライナー
Original assignee: ベーリンガー　マンハイム　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフツング
Priority date: 1989-12-20
Filing date: 1990-12-19
Publication date: 1992-07-02
Anticipated expiration: 2009-08-10
Also published as: HU216793B; NO913238L; KR920700681A; AU625307B2; DK0458950T3; FI95999C; DE3942141A1; HU912738D0; JPH0660108B2; DE59002760D1; ATE94408T1; AU7044391A; EP0458950A1; ES2060357T3; CA2046861A1; HUT59318A; FI95999B; NO913238D0; WO1991008765A1; NO305585B1

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるため要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】に２Ｐ　ｐｒｏの安定化ヒトの組織プラスミノーゲン活性化物質（ｔ−ＰＡ）は、たとえば心筋梗塞の際、凝血を溶解する場合に治療上極めて重要である。ｔ−ＦＡは、プラスミノーゲンをプラスミンに活性化することにより凝血の溶解を惹起する。プラスミンが、凝血した血液のタンパク質基質の主成分たるフィブリンを溶解する。

天然のｔ−ＰＡは、幾つかの機能的ドメインＦ、Ｅ、Ｋｌ、に２およびＰから構成されている。ドメインＰは、プラスミンへのプラスミノーゲンの分解を惹起するタンパク分解活性中心を内包する。ｔ−ＰＡまたはドメインＦ、Ｅ、Ｋｌおよびに２の若干が失火されたｔ−ＰＡ変異体を、真核および原核細胞中で遺伝子工学的に製造することは既に公知である。この場合、原核からのｔ−ＰＡ誘導体は天然のｔ−ＰＡとは異なり、グリコジル化された形では合成されない。

さらに、糖成分はタンパク質の溶解度および凝集に対して著しい影響を有することも公知である（Ｊ、　Ｂｉｏｌ。

Ｃｈｅｔ　、第２６３巻（１９８８年）、第８８３２頁〜第８８３７頁）。ところで、ドメイン組成ＫＰ２を有する非グリコジル化ｔ−ＰＡ−突然変異体は若干グリコジル化されたｔ−ＰＡ誘導体よりも著しく悪い溶解度を有することが確認され友。この非グリコジル化ｔ−ＦＡ誘導体は、通常タンパク質の可溶化のために使用される緩衝液、たとえばクエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ｌ。

−６、リン酸塩緩衝液５０　ｍｍｏｌ　／　ｌまたは生理的食塩塩水に僅かな徨度しか溶解しなり、しかし、治療的作用物質として使用するためには、少なくとも１．４Ｍ［７／１、とくに１．４Ｍσ／　ａｊ　ｙｈ　ｕし１０ＭＵ／ａｊｏ１ＭラカＩＣ高匹酵素活性を有する非グリコジル化ｔ−ＰＡｔＩ＃導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏが存在すべきである。

ヨーロッパ特許Ａ−０２１７３７９号から、原核からのｔ　−Ｐ　Ａ　（ｔ　− Ｐ　Ａ　ｐｒｏ　）の溶解度を中性または弱アルカリ性アルザニン製剤によって高めることは公知である。しかし、この方法の欠点は、ｔ−ＰＡｐｒ。

の良好な溶解度が非常に高いアルｊｌ’ニン濃度で達成しつるにすぎないことである。さらに、高濃度ｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの安定性は中性まｔは偶アルカリ性条件下では僅かである。

従って、本発明の課題は、少なくとも１．、ｄＭＵ／ｉｄの酵素活性を有する非グリコジル化ｔ−ＰＡ誘導体に２Ｐ　ｐｒｏ　ｆ含有する製剤を開発することであり、その際ｔ−ＰＡ誘導体の安定性は長い期間にわたって維持されるべきである。

本発明による課題は、少なくともｉ　、４　ＭＵ　／　ｙｄの酵素活性および４．５〜６．５の一価を有する非グリコジル化ｔ−ＦＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの薬剤学的製剤によって解決され、その際この組成物はクエン酸塩、およびａ）アスコルビン酸、ｂ）　ｇＤＴＡ。

Ｃ）式％式％〔式中Ｘ−８０３Ｈ％　ＣＨ（ＮＨＩ）−ＣＯ２Ｈｑ　Ｃ０２Ｈ，Ｂｓ　ＮＦ１２ま九はＯＨであり、ＲｓｗＣｔ〜Ｃ９アルキレン、とくにＣ４〜Ｃワアルキレン、Ｃ５〜Ｃ６シクロアルキレンまたはベンジリデンであり　Ｒ１およびＲ２は互いに独立に■またはＣ１〜Ｃ３アルキルである〕で示されるアミノ化合物、Ｈ２Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｚ〔式中Ｙ　−Ｈ２Ｎ＋ま几は０であり、Ｚ−Ｈま几は（ＣＨ２）ｍＶ　ｓ　（Ｃ ’Ｅｌ　ｇ　）ｍＣＨ（ＮＨ２）　−ＣＯ２Ｈ１ＣＨ（ＣＯ２”）　−（”　２　）ｍＣＯ２Ｈであり、Ｖ　−ＮＨ，ま友はＣ０２Ｈであり、ｍ陶１〜４である〕で示されるグアニジン類似化合物、ｅ）　１個または数個のヒドロキシル基、ケト基または／およびさらにカルボキシル基で置換され九カルざン酸、ｆ）ジメチルビグアニド、ｇ）ピリミジンヌクレオシドおよびピリミジンヌクレオチド、ｈ）トレハロース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルカミ　ン　、からなる群からの少なくとも１つの化合物を含有する。

本発明によるＫ　２．　Ｐ　ｐｒｏとは、クリンｒル２−トメミノ酸１７４〜１８０で始まり、アミノ酸５２７で終るｔ−ＦＡ誘導体を表わす。付加的に、Ｋ２ＰｐｒＯはなお部分的ま几は全部アミノ酸−３（Ｇｌｙ）ないし＋５（ＩＩｓ）　ｔ″含有して込てもよい。この場合、アミノ酸１７６で始まり、場合によｒ） −３ないし＋５の範囲からなおアミノ酸８ｅｒ、　Ｔｙｒ、　Ｇｉｎ　ｆ前接して含有するタンパク質が望ましい。この表示は、ハＩＪ−（Ｔ、Ｊ、Ｒ，。

Ｈａｒｒｉｓ　）の５プロテイン　エンジニアリング（ＰｒｏｔｅｉｎＲｎｇｉｎｓｅｒｉｎｇ　）　”、第１巻（１９８７年）、第４４９頁〜第４５８頁１ｃｔ−ＰＡＫつき記載され几命名法による。このようなｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　’ｌ　Ｐ　ｐｒｏの製造は、ヨーロッパ特許（Ａ）第０３８２１７４号に記載されている。Ｋ　２Ｐ　ｐｒｏの酵素活性は、ｔ−ＰＡに対するｗ′Ｈｏの定義による標準単位Ｕとして記載されている。

活性の定量は、グル（Ｂ、　Ｌｉ１ｌ　）　（Ｄ　”　ＺＧＩＭＡＬ″″４２（１９８７年）、第４７８頁〜第４８６頁に従って行なわれる。

Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの可溶化には、クエン酸塩緩衝液がとくに適当であることが立証されｔ、クエン酸塩濃度は、九とえば５　ｍｍｏｌ　／　ｔ　、とくに５〜１０　Ｑ　ｍｍｏｌ　／　ｌ。

殊に望ましくは５　ｍｍｏｌ　／　ｔであるべきである。−値は、添加された化合物の塩基性度によらずに、ＨＣｌま几は元とえばＮａＯＨま友はＫＯＨのような塩基で調節される。

意外なＣとに、同じイオン強度および同じ一価の場合、他の緩衝液系に対する非グリコジル化Ｋ　２　ｐｒｏの溶解度は著しく僅かであることが確認され几。アルカリ性クエン酸塩溶液の一値？　ＨＣｌで調節する、つまり組成が付加的になお塩化物イオンを含有するのが適当であることが立証され念。即ち、塩化物イオンの存在においては、意外なことに非グリコジル化Ｋ　２Ｐ　ｐｒ。

の高濃度溶液は、ｔとえばリン酸塩イオンの存在におけるよりも著しく安定である。酸性クエンＷｉ壇溶液の一価は通常ＮａＯＨで調節される。

本発明による薬剤学的製剤には、４．５〜６．５の一価、望ましくは５〜６の一価が適当である。意外なことに、通常未変性のｔ−ＦＡに使用される一価＞７ｔ −有する製剤の場合、溶液中の非グリコジル化ｔ−ＦＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの安定性は著しく減少する。単鎖形のに２Ｐｐｒｏはアルｅニン緩衝液中では室温ま九はより高い温度では数日しか安定でない。

本発明による薬剤学的製剤は、０．１〜１ｍｏｌ　／　４　ｓ　とくに望ましくは肌２〜０．３　ｍｏｌ　／　ｔのアスコルビン酸を含有する。

ＥＤＴｋの濃度は、とくにｔ　〜２００　ｍｍｏｌ　／　ｌ、殊に望ましくは１０〜１００　ｍｍｏｌ／　ｌであるべきである。

とくに、本発明による組成物は、アミノ化合物としてタウリン、Ｃ−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、リシン、オルニチン、δ−アミノ吉箪酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、８−アミノオクタン醸、または／および７−アミツヘグタン酸が使用される。とくに望ましいのは、Ｃ−アミノカプロン酸、８−アミノオクタン震、トラネキサム酸ま之は／およびリシンの使用である。望ましい濃度は０．５〜’ｌ　Ｑ　ｍｍｏＬ　／　ｌ　、であり、殊に望ましくは１〜１０　ｍｍｏｌ　／　１である。

４−アミノブタノール、５−アミノペンタノール−１，６−アミノへキサノール −１，１，９−ジアミノノナン、１．８−ジアミノオクタン、１．７−ジアミノへブタン、１，６−シアミツヘキサン、１．５−ジアミノペンタン、１，４〜ジアミノデタンま友は／および１．３−シアミノプロパンも同様に適当である。

本発明による製剤に適当なα、ω−ジアミンおよびα。

ω−アミノアルコールのｆｌＮｌハ、ト＜に１０〜１００ｍｍｏｌ　／　ｔである。

タウリンおよび類似化合物は、とくに０．１〜Ｑ、５ｍｏｌ／１．とくに望ましくは０−１〜０．３　ｍｏｌ　／　ｔ　テ使用さ化合物として、とくに尿素、グアニジノ酪酸ま几は／およびアルイニンが使用される。尿素の濃度はとくに０− １〜４　ｍｏｌ　／　ｌ、殊に望ましｂのは肌５〜２　ｍＯ１／ｌである。他のグアニジン類似化合物に対する濃度は、とくに１０〜２００　ｍｍｏｌ／　ｔ、殊に望ましくは５０〜１００ｍｍｏｌ／／、である。

ヒドロキシ基、ケト基または／および他のカルざキシル基でｆｋ換されて込るカルざン酸としては、たとえばリンゴ酸、乳酸、フマル酸または／訃よび２−オキシグルタル酸が適当である。その濃度は、とくに肌００１〜１ｍｏｌ　／　６％殊に望ましくは０．０１〜０．５　ｍｏｌ　／　１である。

ジメチルビグアニドは、望ましくは５０〜４００ｍｍｏｌ／ｌの濃度、殊に望ましくは１００〜５　Ｑ　Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌで使用される。

ピリミジンヌクレオシドｌｆはピリミジンヌクレオチドとしては、たとえばチミジン、シトシンおよびウリジンないしは相応するヌク、レオチドが適当である。

これらの物質は、望ましくは１〜３００　ｍｍｏｌ　／　ｔ、殊に望ましくは１０〜５００　ｍｍｏｌ　／　ｌの濃度で使用される。

トレハロース、グルコサミンおよびＮ−メチルグルカミンは、望ましくは１〜５００　ｍｍｏｌ　／　ｌの濃度、殊に望ましくは１０〜Ｓ　００　ｍｍｏｌ　／　ｔで使用される。

さらに、付加的に１種または数種のα−アミノカルざン酸、殊にヒスチジン金含有する本発明による組成物も本発明の対象である。

次に、本発明による一連のとくに望ましい製剤が記載されている。１つの展剤は、クエン酸Ｎａ　５　Ｑｍｍｏ１７’ｔ７ｎｃｔ％ｐ）１６、尿素２　ｍｏｌ　／　ｔ　ｔ−含有する。もう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　Ｉｓ　ｖｋ１６およびグアニジン０．５　ｍｏｌ　／　ｔ　〜１　ｍｏｌ　／　ｔ　ｋ含有する。

さらにもう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ＡｓＦｌ）＋６およびタウリン０．３　ｍｏｌ　／　ｌ’を含有する。さらにもう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ｔ、　ｐＨ６およびアスコルビン酸０．２　ｍｏｌ　／　ｔ　すいシ０−３　ｍｏｌ　／ｌを含有する。さらにもう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　Ｌ　／　ＨｃＬ　％ｐｉ（６、ジメチルビグアニド３００　ｍｍｏｌ　／　ｌを含有する。もう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５　Ｑ　ｍｍｏｌ　／　ｌ　／　ＨＣＩ　ｓ　ｐＨ６およびチミジン、ウリジンまたはシトシン１０〜３００　ｍｍｏｌ　／　Ｌないしは上記の α、ω−ジアミンの１種または上記のα。

ω−アミノアルコールの１種１０〜１００ｍｍｏｌ／Ｌを含有する。もう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ｌ　／　ＨＣ６ＸＦＪ’（６、トレハロース、グルコサミンまたはＮ−メチルグルカミン１０〜３００　ｍｍｏｌ／　１を含有する。

さらにとくに望ましい本発明罠よる製剤は、クエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ｔ　／　ＨＣｌ、　ｐＨ６およびＣ−アミノカプロン酸、δ−アミノ吉草宜、７−アミツヘブタン酸、δ−アミノオクタン酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、Ｌ −リシン、オルニチンまたはトラネキサム酸１ｍｍｏｌ／ｌ〜１Ｑ　ｍｍｏｌ　／　ｌを含有する。これらの物質は、意外なことに、既に小モル過剰量（１０〜４０倍〕で、Ｋ　２Ｐ　ｐｒｏのすぐれた溶解度を惹起する。

さらに、クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ　／　ｌ　／　ＨＣｌ　％　ｐ）ｉ　６およびグアニジン類似化合物、殊にアルザ二ンおよびグアニジノ酪酸を５０〜１００ｍｍｏｌ／４の濃度で含有する製剤も望ましい。もう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ５　Ｑ　−ｏｌ　／　Ｌ％粛６およびリンゴ酸、乳隈、フマル酸または２ −オキシグルタル酸１０〜５００ｍｍｏｌ／ｌを含有する。さらにもう１つの製剤は、クエン酸Ｎａ。

５　Ｑ　ｍｍｏｌ　／　Ｌ、　ｐＨ６およびｇＤＴＡ　１０〜１００　ｍｔｏｏｌ／ｌを含有する。

実施例から明らかなように、上記化合物の幾つかからなる組合せもクエン酸塩でＫ　２　Ｐ　ｐｒｏの極めて良好な溶解度を惹起する。九とえばりシンとアルイニン、オルニチン、グルコサミンま几は／およびチミジンの組合せ、ｆ几はＫＤＴＡとＣ−アミノカプロン酸、リシン、アルｌエン、グルコサミンまたは／およびチミジンの組合せも適当である。しかし、上記化合物の少なくとも２欅とクエン酸との他の組合せも同様に適当である。

最後に、作用物質としてＫ　２　Ｐ　ｐｒｏ　全主剤とし、記載した物質および場合によりなお他の薬学的に許容しうる添加物、助剤、担体および充てん剤を有する、溶液または凍結乾燥物の形の医薬も本発明の対象である。

本発明による薬剤学的製剤は、とくに注射液および注入液として使用される。これは、本発明による組成物を有する注射可能溶液ヲ使用することによって行なうことができる。しかし、凍結乾燥物の形の薬剤学的製剤全利用することも可能である。次いで、このものは自体公知の、注射の目的に適し九薬剤または溶液で再構成される。注射用媒体としてはとくに水が使用され、この水は注射液に２いて常用の、安定剤、溶解助剤、緩衝剤および等張渡加物、九とえば生理的食塩水のような添加剤全含有する。このような添加剤はたとえばマンニット、自石酸塩ま几はクエン酸塩緩衝剤、エタノール、錯生成剤、九とえばエチレンジアミンテトラ酢酸およびその無毒性塩、ならびに粘度調節のための液状ポリエチレンオキシドのような高分子ポリマーである。注射液用の液体担体は無菌でなければならず、とくにアングルに充填される。

余後に、本発明は、本発明による医薬製剤の＄１ｉ造の之めＫ　２　Ｐ　ｐｒｏの使用をも内容として包含する。

次の例は、本発明の具体的実施形をさらに説明するものである。

例　１ドメイン組成に２Ｐｔ−有する非グリコジル化ｔ−ＰＡ突然変異体の溶解度に対する尿素の影響本例では、ｐＨ６，０のクエン酸塩緩衝液に対するに２Ｐｐｒｏ　（ヨーロッパ特許（Ａ）第０３８２１７４号により製造）の溶解度に対する尿素の影響全記載する。第１表がら認められるように、Ｋ２ｐｐｒｏは−６，０のクエン酸塩緩衝液５　Ｑ　ｍｍｏｌ　／　ｌには制限され几溶鮮度しか有しない。尿素の添加は、溶解度を著しく改善することができる。この場合、最適値はほぼ尿素２ｍｏｌ／を精製しｆｌ−Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏ　（０，５ｍｏｌ　／　ｔアルイニン／Ｈ３Ｐ０．　ｌ　ｐＨ７，２に溶解）ｊ７Ｑｍを、アミコン（層− ＹＭｌＱ−メンブレンに通す限外濾過によって濃縮する。濃縮液（活性度５．８ＭＵ　／　Ｍｔ）それぞれ１１を、第１表に記載し几緩衝液に対して透析する。

試料の遠心分離後、室間な上置み液中の酵素活性を測定する。

酵素活性は、体積活性としてＭＵ　／　ｄで記載され、全活性としてＭＵで記載されている。゛この場合、Ｋ２Ｐ活性の測定は、通常のように、色原体基質の分裂によって決定することができる（Ｈ，Ｌｉ１ｌ。

２；ＧＩＭＡｔ、第４２巻（，１９８７年）、ＩＫ４７Ｂ頁〜第４８６Ｎ）。単位σは、ｗＨｏの生物学的標準および対照のための国際研究所（Ｎａｔｉｏｎａｌ　Ｉｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｆｏｒ　ＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＳｔａｎｄａｒｄｓ　ａｎｄ　Ｃｏｎｔｒｏｌ　）の定義によるｔ−ＰＡの活性の単位である。

第　１　表活　性　゛緩衝液　Ｍ［７ＺｄＭσ クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＦｌＣ２，、ｐＪ（６，０１，０３１−２４尿素　１３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５’Ｏｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣ６ｓ　ｐ）１６．０　２−７６　３．５９尿素　６　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｕ′ＨＣ２，ｐＪ（６，０５，４６４，６７尿素　／１　ｍｏｌ／４クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／ＨＣ４Ｆ）（６−ＯＡ−２０５，６７尿素　２ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｚ／ＨＣ６，ｐ）１６．０　２．６２　３．２７尿累　１ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ａ／ＨＣ２，ＰＨ６，００，３２０，９３例　２Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対する種々の物質の影響本例では、…６のクエン酸塩緩衝液におけるに２Ｐｐｒｏの溶解度に対する種々の物質の影響を記載する。

卓越した溶解度（〉２Ｍσ／ｄ）は、タウリン、アスコルビン醗、リシン、トラネキサム醗、ジメチルビグアニド、グルコサミン、トレハロース、Ｎ−メチルグルカミン、ウリジン、シチジン、ｐ−アミノメチル安息香酸、フマル酸およびオキソグルタル酸で得られる。

さらに、クエン酸塩緩衝液は同じモル濃度で、ＮＨ４ＨＣＯ３緩衝液、トリス緩衝液ま几はリン酸塩緩衝液よりも良好な！−ＰＡ誘導体の溶解度を惹起することが認めら例１参照濃縮物：活性：　５．８　ＭＵ　／ａｄ第　２　表クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏ１／ｂ１ｃｚ％　ｐＪ４６．０　１−９２　２．ｊ１オルニチン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／４クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＮａＯＨ，ｐＨ６，０２，６７４，００タウリ：／　Ｑ、３　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５［］　ｍｍｏｌ／諺ａ○■、ｐ）１６．ＯＡ、００　ｄ、２０アスコルビン酸　０．３韮０１／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＦＩＣ２，ｐＨ６，０３，８８５−８０５− ８ＯＩＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／ＦＩＣ２％ｐＨ６，０２，４６３，３２Ｌ −リシン　ｌＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／／／ＢＣｔ、　ｐ）１６．０　５．５４　７．３６トラネキサム酸　１０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｂ侶Ｃｔ、　Ｐ）１６．０　２．９６　３．４０ゾメチルビグアニド　Ｑ、３　ｍｘｎｏＭｌトリス　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｂ１ＣＡ、　ｐｌ’（７，２０，０４０，０６ＮＨ４Ｆ１ＣＯ３５０ｍｍｏｌ／１Ｏ− １２０−１９Ｎａ２ＨＰＯ４ｓｏ　ｍｍｏ１／ｌ／Ｈ３ＰＯ３、ｐＨ７，２０，１５０，２３クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＬＡＩＣ４ｐＨ６，００，３２０ −９３クエン酸ＮＩＬ　５０　ｍｍｏｌ／＆ｌ１ｉＣｔ、　Ａ６　２−０２　２ −０２グルコサミンＱ、３　ｍｏｌ／Ｚクエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／ＨＣＡ、　Ｐ）１６　３−５２　５−１７トレハロース３．３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｂ１Ｃｔ、　ＰＨ（５１−５７１，８８チミジン　Ｑ、１ｍｏｌ／４クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣ２，ＦＪ（６６−３２７，５８ウリジン　Ｑ、３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／／／ＨＣ４，ＰＨ（Ｓ　３．８　４−９４シトシン　３Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｖＨＣ６，ＰＨ６３，４６５，０！ｉｐ−アミノメチル安息香醗クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／Ｎａ０Ｂ、　Ｐ）１６　１．５３　１．６８リンヒ酸　Ｑ、３　ｍｏｌ／ｊクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＮａＯＨ，Ｐ）１６　１−５９　１−９８乳酸　Ｑ、３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／′ＮａＯＨ，ｐＨ６４，３２５，１６フマル酸　Ｑ、３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／Ｎａ０Ｈｓ　Ａ６　Ａ、２４　４．６６２ −オキソグルタル酸［］、３　ｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｖＨＣ６，ｐＨ６３−３６３，７ＯＮ−メチルグルカミン例　３Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するＣ−アミノカプロン酸（ｗＡｃｈ　）の影響冥ｍ：例１参照濃縮物：活性：６．３■／ＷＬｔ第３表クエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／／／ＨＣ２，ｐ）（６，００，３４０，１８クエン酸Ｎａ５０　ｍｍｏｌ／／／ＨＣ２，ｐＪ（６，０３，８１４，５７ＥＡＣＡ　１０　ｍｍｏｌ／Ｚクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣ２，ｐＨ６−０３，５２４，８６ＥＡＣＡ　５　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｚ／ＨＣ１％ｐ）１６．０　２．７０　り、８３ＲＡＣＡ　１　ｍｍｏｌ／ｊクエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ／／／ＥＩＣｔ、　ｐＨ６−００，５８０−７５ＲＡＣＡ　Ｏ，１ｍｍｏｌ／Ｚ第３表は、ＥＡＣＡは１〜ｉ　Ｑ　ｍｍｏｌ　／　ｔの濃度（Ｋ２Ｐｐｒｏに比べて１０〜４０倍モル過剰）で既に、ｐ）１６．０のクエン酸塩緩衝液に対する溶解度の著しい改善を惹起することを示す。

例　４Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するアスコルビン酸の影響実ｍ：例１参照濃縮物：活性：６．３■／ＩＬｔ第４表クエｙｌ！Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＨＣｔ、　Ｆ８６　０，３１　０．４８クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｊ７ＮａＯＨ，ｐＨ＜５．０　４．０４　ｊ、２４アスコルビン酸　Ｄ、５　ｒｎｏ１／１クエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＮａＯＨ，ｐＪ’１６−０　２．４０　２−９３アスコルビン酸　０．２　ｍｏｌ／２第４表の結果は、クエン酸塩緩衝液に対するに２Ｐｐｒｏの溶解度はアスコルビン酸の添加によってさらに向上することを示す。

例　５アルｅニン含有溶液中でのＫ　２Ｐ　ｐｒｏの安定性の一依存性精製したＫ　Ｚ　Ｐ　ｐｒｏを、第５表に記載し九アルヤニンＯ−５ｍｏｌ　／　ｔ／　Ｈ３ＰＯ４緩衝液に対して透析し、分割して一２０℃、２５℃および３７℃で貯蔵する。３日、７日、１４日および２１日後に、それぞれ１つの試料を、活性およびフィブリンの添加による刺戟性を検査し、５Ｄ１３電気泳動により分析する（出発値：活性：１．３ＭＵ／ａｊ、刺戟性：２８）。第５表にまとめたデータは、ｐＨ８およびｐＨ７，２で貯蔵した試料は、３７℃で３日な匹しは７日貯麓後に活性の明らかな増加と同が減少する。次いで、１４ないし２１日後に、活性の減少も観察される。

第５表時間　活性（Ｍσ／ｄ）／刺戟性 −２０℃　２５℃　６７℃ ｐＨ８，０３日　１．２２／３６　１．４７／２４　Ｌ４５／１５７　日　１．２５／Ａ４　１．８７／１５　２．５８／１３１４　日　１．３７７５５　２．０８／　９　１．１　／１０２１　日　１．３７／　−２，１４／１０　１．０　／　７ＰＨ７，２３日　１．１２／３９　１．５／２７　１゜７　／２０７　日　１．１６／、！１５　１．７／２１　２．１　／１３１４　日　１．３８／３２　１．７／９　１．９／９２１　日　１．２２／２５　１．７／１１　１．５２／８ＦＪ（６，０３日　０．９３／３．ｄ　１．４．３／３１　１．５Ａ／３Ａ７　日　１．０５／４６　１．２７／１２　１．５８／３（Ｓ１４　日　１．２３／３９　１．０４／２０　１．４５／１４２１　日　１．４３／２６　０．９５／１６　１．００／８ｐ）１　５．５６　日　０．８５／３２　’＋、Ａ７／４０　ＬＯ８／３９７　日　１．４　／４７　１．５３／６８　１．５４／４８１４　日　１．２　／３２　１．３　／２６　１．３　／２４２１　日　１．３６／２．！Ｓ　Ｏ，９５／２５　０．９５／２１これらの変化と平行に、Ｋ２Ｐｐｒｏの分子量の減少（５Ｄ８−ＰＡＧＩＥを用いる電気泳動）が観察される。

例　６アルヤニン（Ａｒｇ　）含有溶液中でのＫ　２Ｐ　ｐｒｏの安定性に対する塩化物イオンおよびリン酸塩イオンの影響精製したＫ　Ｚ　Ｐ　ｐｒｏを、下記に記載したアルクエン含有緩衝液に対して透析し、分割し一２０℃、２５℃および３７℃で貯蔵する。２日、７日および１４日後に、それぞれ１試料をＳＤＢ電気泳動により分析する。

塩化物イオンの存在では単釧形はリン酸塩イオンの存在におけるより４に著しく安定であることが明らかになる。塩化物イオン含有溶液中では−７，２および８で３７℃で７日の貯蔵後にはじめて試料の１０％〜２０チが分解したが、リン酸塩緩衝溶液中では分解し文物質の割合は６０〜９０％である。

緩衝液：Ａｒｇ　Ｏ，５ｍｏｌ　／　ｔ　／　Ｈ３Ｐ０．、ｐｉ（８，０Ａｒｇ　Ｏ，５ｍｏｌ　／　ｌ　／　ＨＣｌ　％ｐ）（８，０Ａｒｇ　Ｏ，５ｍｏｌ　／　ｌ　／　Ｈ３ＰＯ４、Ｐ）（７，２Ａｒｇ　Ｏ，５ｍｏｌ　／　ｔ　／　Ｈｃｔ　、ｐＨ７，２例　７クエン酸塩およびリン酸塩緩衝液におけるＫ　２Ｐ　ｐｒ。

の溶解度に対するＣ−アミツカグロン酸の影響精製し７ｔＫ　２Ｐ　ｐｒｏ　ｔ −限外濾過によって４．２Ｍσ／―ＶｃＳａｔ、、第８表に記載し九緩衝液に対して透析し、遠心分離する。試料の遠心分離後、ｆＪＩＦ！Ａな上置み液中で活性を測定する。

第６表緩衝液　ＭＵ／）１７　ＭＵクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＥＣｔ、ＰＨ６０−５２０−９３Ｎａ２ＨＰＯ４ｓｏ　ｍｍｏ１／ｌ／Ｅ３ＰＯ４、ｐＨ６０，０７０，１０クエン酸Ｎａ　５０　ｚｍｏｌ／ｌ／ＨＣ４ＳｐＨ６３，３０４，６０ｇＡｃＡ　２　ｍｍｏｌ／１Ｎａ２ＨＰＯ４５０ｍｍｏ１／Ｚ／Ｈ３ＰＯ４、ｐＨ６０，９０１，３９−ｇＡｃＡ　２　ｍｍｏｌ／ｌりｚ７醸Ｎａ　ｓｏ　ｍｔｏｏｌ／ｖＨＣｔ、ｐＨ６２−４５３−５２ＫＡＣＡ　２ｍｎｏｏｌ／ＺＮａＣ１Ｏ，１５ｍｏｌ／ＺＮａ２１’１ＰＯ４５０ｍｔｏｏｌ／ｊ／Ｈ３ＰＯ４，４６１，０８１，５７ＫＡＣＡ　２　ｕｘｎｏｏｌ／ｌＮ＆Ｃ１Ｏ，１５ｍｏｌ／を第６表は、クエン酸塩緩衝液中でのＥｅＡＣＡによる溶解度の改善はリン酸塩緩衝溶液中よりも著しく良好であることを示す。

例　８Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するトラネキサム酸（ＴＥＳ）の影響実施；例１参照濃縮物：活性：４．２ＭＵ／ゴ第　７　表活性緩衝液　ＭＵ／＋１１７　ＭＵクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ＵＨＣｔ％　Ａ　６　２．６６　５．６０ＴＥＳ　１０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣ４，ｐＨ６２，５４３−３０ＴＥＢ　５　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／／！／ＨＣ４，ｐ！（６２−３５３−２９ＴＥＳ　ｌ　ｍｍｏｌ／を結果は、トラネキサム＠　（ＴＥＳ戸では、ｇＡｃＡ　Ｉｃ　！ると同様の、Ｋ２ＰｐｒＯの溶解度が得られることを示す。

１）トランス−４−アミノメチルシフ・ヘキサンカルボン酸例　９Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するω−アミノカルボン醗の影響例１参照活性；４．２■／ｗＬｔ８８表活性緩衝液　ＭＵＡｔＭσ クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／ＥＩＣｔ％Ａ　６　０．３２　０．９３クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｕ１’ｌＣ２，ｐＨ６３，１２４，０５８−アミノオクタン酸　１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｔ、ＦＪ（６３，５４４，４２７−アミノへブタン酸　ｌＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／＆ＨＣｔＳｐＨ６４，２２２，９０ＥＡＣＡ　１０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＴ３ＣＡ、ｐＨ６１，８３２，４７δ−アミノ吉草酸　１０　ｍｍｏｌ／Ｚ例１０Ｋ　’ｌ　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するグアニジン類似体の影響実施：例１参照濃縮物：活性：　４．２ＭＵ　／　Ｍｌ第９表緩衝液　ＭＵ／１１７　ＭＵクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／υｖｃｔ、ＦＪ（６１，４２２，０６アルザニン　５０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｈａ　５０　ｍｒｏｌ／／／Ｈ（４ＳｐＨ６２，２１３，０８グアニジノ酪酸　５０　ｍｍｏｌ／１結果は、グアニジノ基でＫ　２Ｐ　ｐｒｏの溶解度は明らかに改善姑れることを示す。

例１１Ｋ　２Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するＥＤＴＡの影響例１参照＊　１０表活　性緩衝液　ＭＵ〜　Ｍσ ｇＤＴＡ　１０ｍｍｏｌ／Ｚ／ＮａＯＲ，Ｐ）（６０，０２０−０３ＥＤＴＡ　Ｏ，３ｍｏｌ／／、／ＮａＯＨ、ｐＨ６１，９５１−９５クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／４／ＮａＯＨ、ｐＨ６１，８０２−２５ＥＤＴＡ　５０　ｍｍｏｌ／Ｚクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＮａＯＨ％ｐＨ６６，５６４，０３１００ｍｍｏ　Ｌ／ｌ　（７）　ＥＤＴＡクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＨＣＡ　、ｐＨ６０，３２０−９５第１０表は、ｇＤＴＡとクエン酸塩との組合せはに２Ｐｐｒｏの溶解度に対して相加的以上の効果を有することを示す。

例１２Ｋ　２Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するアミノ酸単独または組合せの影響実施：例１参照第１１表クエン酸Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／ｂ１Ｃ２，ｐＪ（６１，ｄ２　２．０６アル＝ｌ＋’ニン　５０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ／ＦＩＣｔ、ＦＪ（６２，８１３，９４Ｌ−リシン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／４クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／１ｆＨＣ２％ｐ）（６２，００２，６Ｌ−リシン　１ｍｍｏｌ／Ｚクエン虚Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／υＨＣ２％　ＰＪ（６２，５６３，８４Ｌ−リシン　ＩＱ　ｍｍｏｌ／ｌアルヤニン　１０玉０１／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｔ、ｐＨ６３−２７４−９リシン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌアルイニン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｊクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／υｖｃｔ％　Ｘ６　３．１８　４．１３リシン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚアルプニン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚオルニチン　ｌＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｌ／ＢＣ１，ｐＨ６２，７０３，７８リシン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌアルイニン　５０　ｍｍｏｌ／４オルニチン　１０　ｍｍｏｌＪＬクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ＵＦＩＣ２％ｐｋ４６　５．５４　Ａ−５０リシン　１０閣０１／ｌアルイニン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚオルニチン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／を例１３Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するω−アミノアルコールの影響実施：例１参照第　１２　表クエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏＬ／Ｌ’ＨＣｔ％ＰＨ６１，８４２，４ｔ−アミノブタノール−１５０ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／２／ＨＣＡ％ｐＨ６２，５４３，５５５−アミノペンタノール−１５０ｍｍｏｌ／Ｚ例１４Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対する種々の物質組合せの影響冥ｔＩａ：例１参照第　１３　表クエン酸Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／／　、ｐ）（６Ａ−２Ａ　５．０８ＥＤＴＡ　５０ｍｍｏｌ／１ＥＤＣＡ　ｌ　ｍｍｏｌ／１グルコサミン５０　ｍｍｏｌｙ’Ｚクエン＠Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、ＦＪ（６５，６５５，０８ＥＤＴＡ　１０　ｍｍｏｌ／１ＥＡＣＡ　１　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／Ｚ、　ｐｉｅ　６　３．７０　５．１４ＥＤＴＡ　１０　ｍｍｏｌ／ＺＥＡＣＡ　１　ｍｍｏｌ／Ｚグルコサミン１０　ｍｍｏｌ／１チミジン　５０　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、ＰＨ６４，００５，４０ＥＤＴＡ　５０　ｍｍｏｌ／Ｚリシン　１ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン５０ｍｍ０１／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、ｐ）ｌ　６　３．０４　３．９５ＥＤＴ入　５０　ｍｍｏｌ／ｌリシン　１ｍｍｏｌ／ｌグルコサミンｉ［］　ｍｍｏｌ／Ｚクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏ１／ｌ、ｐ）ｉ　６　！１．１２　４．５２ＢＤＴＡ　１０　ｍｍｏｌ／Ｚリシン　ｌ　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１０　ｍｍｏｌ／ｌチミジン　ｉＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／／、Ｐ）（６２，６０３，７７ＥＤＴＡ　１［］　ｍｍｏｌ／Ｚリシン　１　ｍｍｏｌ／ｌアルｅ　ニン　１０　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌチミジン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／／、ｐＨ６２，９４４，１２ＥＤＴＡ　１０　ｍｍｏｌ／ｌリシン　１ｍｍｏｌ／ｌアルｅニン２５　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１０ｍｍ０１／ｌチミジン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏＬ／ｌ、ｐＨ６２，８０５−６４リシン　１　ｍｍｏｌ／ｌアルぞニン　１Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１［１ｍｍｏｌ／Ｚチミジン　ｉＱ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚ％ｐＨ６３，２Ｇ　４．３２ＥＤＴＡ　１０　ｍｍｏｌ／ｌリシン　１ｍｍｏｌ／ｌアルイニン　２５　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１０コｍｏｌ／ｌチミジン　２５　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌ、ＦＪ（６Ａ、５６　５．９０ＥＤ’ｒＡ　１０　ｍｍｏｌ／ｌリシン　１ｍｍｏｌ／ｌアルイニン　２５　ｍｍｏｌ／Ｚグルコサミン１０　ｍｍｏｌ／ｌチミジン　５０　ｍｍｏ　Ｍｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、　ｔＡ　６　３．２４　４．５４リジン　１ｍｍｏｌ／ｌアルヤニン　２５　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン１Ｑ　ｍｍｏｌ／Ｚチミジン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６３，５４４，９５ｊ　ｍｍｏｌ／ｌリシン２５　ｍｍｏＬ／ｌアルイニンｉＱ　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン２５　ｍｍｏｌ／ｌチミジンクエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏｌ／４ＳｐＨ６！１−６０　Ａ−６８１ｍｍｏｌ／ｌリシン２５　ｍｍｏｌ／ｌアルヤニン５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌグルコサミン２５　ｍｍｏｌ／ｌチミジンクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｌ、ＰＪ’（６５，８５５，８５１ｍｍｏｌ／７ｔリクン２５　ｍｍｏｌ／ｌアルイニン１００　ｍｍｏｌ／Ｚグルコサミン２５　ｍｍｏｌ／ｌチミジン例１５Ｋ　２Ｐ　ｐｒｏの溶解度に対するα、ω−ジアミンの影響実施：例１参照活性：　４．９　ＭＵ　／ａｊ第　１４　表緩衝液　Ｍ［７／１１７　Ｍσ ｌクエン酸Ｎａ５０　ｍｍｏｌ／１Ａ３Ｃ２％ｐｋ４６　３．１２　４．０５１．９−ジアミノノナン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／ｌ／′ＨＣｔ、ｐＨ６２，８０３，６Ａ１．８−シアミノオクタｙ　５Ｑ　ｍｍｏＬ／ｌりｚｙ＠Ｎａ　ｓｏ　ｍｍｏｌ／ｂ１Ｃｔ、ｐｋ４６　３．４２　４．！５１．６−シアミツヘキサン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｈａ　５０　ｍｍｏ１／Ｌ’ＢＣｔ％ｔＨ６！１．５２　４．ｄｏｌ、５−ジアミノペンタン　５Ｑ　ｍｍｏｌ／ｌクエン酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／ｂ１Ｃｔ、４６　５−９６　５ −１５１．４−ジアミノブタン　５０　ｍｍｏｌ／ｌクエ７酸Ｎａ　５０　ｍｍｏｌ／１ｌＨＣ４，ｐＨ６５−５５４−２５１，５−ジアミノプロパン　５０　ｍｘｎｏ１／１要　約　書クエン酸塩およびａ）　アスコルビン酸ｂ’ｌ　ＥＤＴＡＣ）式％式％［式中ｘ　＝　５Ｏ３Ｈ１ＣＩｌ（ＮＯ３）　−ＣＯ２［１、ｃｏ２ｔｔ、■、ＮＯ３またはＯＨであり、Ｒ＝Ｃ，〜Ｃ９アルキレン、とくに０４〜Ｃ７アルキレン、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキレンまたはベンジリデンであり、Ｒ１およびＲ２は互いに独立にＨまたは０１〜Ｃ３アルキルである］で示されるアミノ化合物、Ｈ２Ｎ−Ｃ−Ｎ−Ｚ［式中Ｙ＝Ｈ２Ｎ＋または０であり、Ｚ＝Ｈまたは（ＣＨ２）ｍＶ、　（ＣＨ２）ｍｃＨ（ＮＯ３）−ＣＯ２Ｈ，ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）　−（ＣＨ２）ｍｃＯ２■であり、Ｖ　＝　ＮＯ３またはＣ０２ｔｌであり、ｍ＝１〜４である］で示されるグアニジン類似化合物。

ｅ）　１個または数個のヒドロキシル基、ケト基および／またはさらにカルボキシル基で置換されたカルボン酸、ｆ）　ジメチルビグアニド、ｇ）　ピリミジンヌクレオシドおよびビリミジンヌクレオチドｈ）　トレハロース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルカミンからなる群からの少なくとも１つの化合物を含有する、少なくとも１．４ＭＵ／ｍＪの酵素活性および４．５〜６．５のｐＨ値を有する非グリコジル化ｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの薬剤学的製剤ならびに作用物質としてｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏを主剤とする医薬およびその製造方法。

１、事件の表示２、発明の名称凝血塊を溶解するための薬剤学的製剤およびその製造方法３、補正をする者事件との関係　特許出願人名　称　ベーリンガー　マンハイム　ゲゼルシャフト　ミツト　ベシュレンクテル　ハフラング４、代理人住所　〒１００　東京都千代田区丸の内３丁目３番１号新東京とルヂング　５５３号　電話（３２１６）５０３１−５番５、補正により増加する請求項の数　０解するための薬剤学的製剤およびその製造方法」と補正する。

（２）同第２頁第２５行のｒｔ−ＰＡ誘導体に２ｐ　ｐｒｏの薬剤学的製剤」をｒｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏを含有する、凝血塊を溶解するための薬剤学的製剤」と補正する。

（３）請求の範囲を別紙のとおり補正する。

請　求　の　範　囲１、　少なくとも１．４ＭＵ／ｍ／の酵素活性および４．５〜６．５のｐＨ値を有する非グリコジル化ｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏの薬剤学的製剤において、クエン酸塩および［式中Ｘ　＝　５Ｏ３Ｈ，Ｃ１１（Ｎｌ２）　Ｃ０２Ｈ１ＣＯ２Ｈ，■、Ｎｌ２またはＯＨであり、Ｒ＝Ｃ１〜Ｃ９アルキレン、とくにＣ４〜Ｃ７アルキレン、０３〜Ｃ６シクロアルキレンまたはベンジリデンであり、Ｒ１およびＲ２は互いに独立にＨまたはｃ　１−　ｃ　３アルキルである］で示されるアミノ化合物、［式中Ｙ　＝　Ｈ２Ｎ＋またはＯであり、Ｚ＝Ｈまｔ：、、　ハ（ＣＨ２）ＩＩＩＶ、　（ＣＩ’［２）ＩｃＨ（Ｎｌ２）　−Ｃ０２Ｈ，ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）　（ＣＨ２）ＩＤＣＯ２Ｈテあり、Ｖ　＝　Ｎｌ２またはｃｏ２■テあり、ｍ＝１〜４である］で示されるグアニジン類似化合物。

ｅ）　１個または数個のヒドロキシル基、ケト基および／またはさらにカルボキシル基で置換されたカルボン酸、ｆ）　ジメチルビグアニド、ｇ）　ピリミジンヌクレオシドおよびピリミジンヌクレオチドｈ）　トレハロース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルカミンからなる群からの少なくとも１つの化合物を含２、７ミノ化合物が、タウリン、 ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、リジン、オルニチン、δ−アミノ吉草酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、４−アミノブタノール−１，５−アミノペンタノール−１，６−アミノへキサノール−１，１，９−ジアミノノナン、１．８− ジアミノオクタン、１．７−ジアミノペンタン、１．６−シアミツヘキサン、１．５−ジアミノペンタン、１．４−ジアミノブタン、１，３−ジアミノプロパン、δ−アミノオクタン酸または／および７−ジアミノへブタン酸であることを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

３、　グアニジン類似化合物が尿素、グアニジノ酪酸または／およびアルギニンであることを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

４、　置換カルボン酸がリンゴ酸、乳酸、フマル酸または／および２−オキソグルタル酸であることを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤５、　付加的に１種または数種のα−アミノカルボン酸、とくにヒスチジンを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

６、　クエン酸塩の濃度が５〜１００ｍｍｏｌ／　Ｑ、とくに５９　ｍｍｏｌ／　Ｑであることを特徴とする請求項１から５までのいずれか１項記載の薬剤学的製剤。

７、　付加的に塩化物イオンを含有することを特徴とする請求項１から６までのいずれか１項記載の薬剤学的製剤８、　クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／（２ＳｐＨ６およびアスコルビン酸０．１〜１ｍｏｌ／１２．とくに０．２〜０　、３　ｍｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

９、　クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ＱＳｐＨ５およびＥＤＴＡＩ〜２００ｍｍｏＡ’／１２．とくに１０〜１０Ｑ　ｍｍｏＡ’／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１０、クエン酸Ｎ　ａ　５　ＱｍｍｏＡ’／　Ｑ、　ｐＨ６およびタウリン０．１〜０．５ｍｏＡ’／Ｑ、とくに０．１〜０、３　ｍｏｆ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１１、クエン酸Ｎ　ａ　５０　ｍｍｏＡ’／　Ｑ　／ＨＣｌ５ｐ　Ｈ６およびε −アミノカプロン酸、δ−アミノ吉草酸、リシン、オルニチン、トラネキサム酸、ｐ　−アミノメチル安息香酸、７−アミノオクタン酸または８−アミノオクタン酸０．５”２０ｍａ＋ｏｌ／Ｑ、とくに１〜１０　ｍｍｏＡ’／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１２、クエン酸Ｎａ５０ａ＋ｍｏｌ／ｅ／ＨＣｌ５ｐＨ６および４−アミノブタノール−１，５−アミノペンタノール−１，６−アミノブタノールー１．１．９ −ジアミノノナン、１，８−ジアミノオクタン、１，７−ジアミノへブタン、１．６−シアミツヘキサン、１．５−ジアミノペンタン、１，４−ジアミノブタンまたは１，３−ジアミノプロパン１０〜１００ｍｍｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１３、クエン酸Ｎ　ａ　５０１１１ｍｏＡ’／　Ｑ　／ＨＣＩ、　ｐ　Ｈ６および尿素０．１〜４ｍｏｌ／Ｑ、とくに０．５〜２ｍｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１４、クエン酸Ｎ　ａ　５０　ｍｎ＋ｏＩ！／　Ｑ　／ＨＣｌ５ｐ　Ｈ６、グアニジノ酪酸またはアルギニン１０〜２００ｍｒｎｏｌ／　Ｑ　１とくに５０〜１００１１０１ＯＡ’／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１５、クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ＱＳｐＨ５およびリンゴ酸、乳酸、フマル酸または２−オキソグルタル酸０．００１〜１ｍｏｌ／　Ｑ、とくに０．０１〜０　、５　ｒｔｈｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。

１６、クエン酸Ｎ　ａ　５０ｍｍｏｌ／　Ｑ　／ＨＣ１，ｐ　Ｈ６およびジメチルビグアニド５０〜４００ｍＩＩｌｏｌ／Ｑ、とくに１００〜３００ｍｍｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤１７、クエン酸Ｎ　ａ　５０ｍｍｏｌ／　Ｑ／ＨＣ１，ｐ　Ｈ６、チミジン、シトシンまたはウリジン１〜３００ｍｍｏＡ’／　Ｑ　％とくに１０〜３００ｍｍｏ！！／　Ｑを含有することを特徴とする請求的製剤。

１８。クエン酸Ｎ　ａ　５　０　ｍｍｏ／／　Ｑ　／　ＨＣＣ　ｐ　Ｈ　６およびトレハロース、グルコサミンまたはＮ−メチルグルカミン１〜５００ｍＩＩＩＯｌ／Ｑ、とくに１０〜３　０　０　ｍｍｏｌ／　Ｑを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。

１９、クエン酸Ｎａ　５０ｍｍｏｌ／ＱＳｐＨ６および請求項１記載の群ａ）〜ｈ）からの化合物の組合せを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。

２０、請求項１から１９までのいずれか１項記載の組成物を場合により慣用の薬学的添加剤、助剤または／および担持物質と一緒に含有することを特徴とする、作用物質としてｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏを主剤とする薬剤学的製剤。

２１、ｔ−ＰＡ誘導体Ｋ　２　Ｐ　ｐｒｏを、請求項１記載の群ａ）〜ｈ）からの少なくとも１種の物質と一緒に適当な薬剤学的投与形に変えることを特２２、薬剤学的投与形が注射液または凍結乾燥物であることを特徴とする請求項２１記載の方法。

国際調査報告国際調査報告

Claims

【特許請求の範囲】

１．少なくとも１．４ＭＵ／ｍｌの酵素活性および４．５〜６．５のｐＨ値を有する非グリコシル化ｔ−ＰＡ誘導体Ｋ２Ｐｐｒｏの薬剤学的製剤において、クエン酸塩およびａ）　アスコルビン酸ｂ）　ＥＤＴＡｃ）式Ｒ１Ｒ２Ｎ−Ｒ−Ｘ〔式中Ｘ＝ＳＯ３Ｈ、ＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ２Ｈ、ＣＯ２Ｈ、Ｈ、ＮＨ２またはＯＨであり、Ｒ＝Ｃ１〜Ｃ９アルキレン、とくにＣ４〜Ｃ７アルキレン、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキレンまたはベンジリデンであり、Ｒ１およびＲ２は互いに独立にＨまたはＣ１〜Ｃ３アルキルである〕で示されるアミノ化合物、ｄ）式 ▲数式、化学式、表等があります▼ 〔式中Ｙ＝Ｈ２Ｎ＋またはＯであり、Ｚ＝Ｈまたは（ＣＨ２）ｍＶ、（ＣＨ２）ｍＣＨ（ＮＨ２）−ＣＯ２Ｈ、ＣＨ（ＣＯ２Ｈ）−（ＣＨ２）ｍＣＯ２Ｈであり、Ｖ＝ＮＨ２またはＣＯ２Ｈであり、ｍ＝１〜４である〕で示されるグアニジン類似化合物ｅ）１個または数個のヒドロキシル基、ケト基および／またはさらにカルボキシル基で置換されたカルボン酸、ｆ）ジメチルビグアニド、ｇ）ピリミジンヌクレオシドおよびピリミジンヌクレオチドｈ）トレハロース、グルコサミン、Ｎ−メチルグルカミンからなる群からの少なくとも１つの化合物を含有することを特徴とする薬剤学的製剤。
２．アミノ化合物が、タウリン、ε−アミノカプロン酸、トラネキサム酸、リシン、オルニチン、δ−アミノ吉草酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、４−アミノプタノール−１、５−アミノペンタノール−１、６−アミノヘキサノール−１、１，９−ジアミノノナン、１，８−ジアミノオクタン、１，７−ジアミノヘプタン、１，６−ジアミノヘキサン、１，５−ジアミノペンタン、１，４−ジアミノブタン、１，３−ジアミノプロパン、δ−アミノオクタン酸または／および７−アミノヘプタン酸であることを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
３．グアニジン類似化合物が尿素、グアニジノ酪酸または／およびアルギニンであることを特徴とする請求項１記載の薬剤学的製剤。
４．置換カルボン酸がリンゴ酸、乳酸、フマル酸または／および２−オキソグルタル酸であることを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
５．付加的に１種または数種のα−アミノカルボン酸、とくにヒスチジンを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
６．クエン酸塩の濃度が５〜１００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに５０ｍｍｏｌ／ｌであることを特徴とする、請求項１から５までのいずれか１項記載の薬剤学的製剤。
７．付加的に塩化物イオンを含有することを特徴とする、請求項１から６までのいずれか１項記載の薬剤学的製剤。
８．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６およびアスコルビン酸０．１〜１ｍｏｌ／ｌ、とくに０．２〜０．３ｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
９．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６およびＥＤＴＡ１〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに１０〜１００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１０．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏ１／ｌ、ｐＨ６およびタウリン０．１〜０．５ｍｏｌ／ｌ、とくに０．１〜０．３ｍｏ１／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１１．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６およびε−アミノカプロン酸、δ−アミノ吉草酸、リシン、オルニチン、トラネキサム酸、ｐ−アミノメチル安息香酸、７−アミノヘプタン酸または８−アミノオクタン酸０．５〜２０ｍｍｏｌ／ｌ、とくに１〜１０ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１２．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６および４−アミノプタノール−１、５−アミノペンタノール−１、６−アミノヘキサノール−１、１，９ −ジアミノノナン、１，８−ジアミノオクタン、１，７−ジアミノヘプタン、１，６−ジアミノヘキサン、１，５−ジアミノペンタン、１，４−ジアミノブタンまたは１，３−ジアミノプロパン１０〜１００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１３．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６および尿素０．１、４ｍｏｌ／ｌ、とくに０．５〜２ｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１４．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６、グア　ニジノ酪酸またはアルギニン１０〜２００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに５０〜１００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１５．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６およびリンゴ酸、乳酸、フマル酸または２−オキソグルタル酸０．００１〜１ｍｏｌ／ｌ、とくに０．０１〜０．５ｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１６．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣＬ、ｐＨ６およびジメチルビグアニド５０〜４００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに１００〜３００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１７．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６、チミジン、シトシンまたはウリジン１〜３００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに１０〜３００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１８．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ／ＨＣｌ、ｐＨ６およびトレハロース、グルコサミンまたはＮ−メチルグルカミン１〜５００ｍｍｏｌ／ｌ、とくに１０〜３００ｍｍｏｌ／ｌを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
１９．クエン酸Ｎａ５０ｍｍｏｌ／ｌ、ｐＨ６および請求項１記載の群ａ）〜ｈ）からの化合物の組合せを含有することを特徴とする、請求項１記載の薬剤学的製剤。
２０．請求項１から１９までのいずれか１項記載の組成物を場合により慣用の薬学的添加剤、助剤または／および担持物質と一緒に含有することを特徴とする、作用物質としてｔ−ＰＡ誘導体Ｋ２Ｐｐｒｏを主剤とする薬剤学的製剤。
２１．ｔ−ＰＡ誘導体こＫ２Ｐｐｒｏを、請求項１記載の群ａ）〜ｈ）からの少なくとも１種の物質と一緒に適当な薬剤学的投与形に変えることを特徴とする薬剤学的製剤の製造方法。
２２．薬剤学的投与形が注射液または凍結乾燥物であることを特徴とする請求項２１記載の方法。