JPH045679B2 - - Google Patents
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- Publication number
- JPH045679B2 JPH045679B2 JP59035303A JP3530384A JPH045679B2 JP H045679 B2 JPH045679 B2 JP H045679B2 JP 59035303 A JP59035303 A JP 59035303A JP 3530384 A JP3530384 A JP 3530384A JP H045679 B2 JPH045679 B2 JP H045679B2
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- methanol
- gangliosides
- extraction
- brain
- dried
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Lifetime
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- Saccharide Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Description
【発明の詳細な説明】
本発明はガングリオシドを動物の脳から抽出す
る方法に関する。ガングリオシドは動物の全身に
存在するが特に脳に多く含まれている糖脂質の１
種で、その構成々分であるＮ−アセチルノイラミ
ン酸の結合数および結合配置によつて多数の同族
体があり、ガングリオシドとはそれらの総称であ
る。
る方法に関する。ガングリオシドは動物の全身に
存在するが特に脳に多く含まれている糖脂質の１
種で、その構成々分であるＮ−アセチルノイラミ
ン酸の結合数および結合配置によつて多数の同族
体があり、ガングリオシドとはそれらの総称であ
る。
近年ガングリオシドの生理的作用の解明が著し
く進歩しており、同時に治療面の応用でもヒトの
中枢神経系および末梢神経系の神経刺激伝達障害
に有効であることが明らかになつて来た。
く進歩しており、同時に治療面の応用でもヒトの
中枢神経系および末梢神経系の神経刺激伝達障害
に有効であることが明らかになつて来た。
従来ガングリオシドの抽出方法は種々研究され
ており、例えばJ.Folchらの方法〔J.Biol.Chem.，
226巻497頁〜（1957）〕、この改良法としてのL.
Svennerholmらのクロロホルム−メタノール混
合液による方法〔Biochim，Biophs.Acta 617巻
97頁〜（1980）〕、あるいはG.Tettamantiらのテ
トラヒドロキシフランによる方法〔Biochim.
Biophs.Acta296巻160頁〜（1973）〕などが代表
的な方法である。しかしこれらの方法はいずれも
高価な、あるいは毒性の高い有機溶媒をしかも大
量に使用しており、かつ抽出後のガングリオシド
の回収にもかなりの手間を必要とし、例えばL.
Svennerholmの方法では脳500ｇを処理するに２
回抽出操作を行ない、有機溶媒の使用量の合計は
クロロホルム5.4とメタノール8.2の大量であ
り、かつ、水を加えて所謂Folchの分配〔J.Folch
らJ.Biol.Chem.，226巻497頁〜（1957）〕を行な
い、極めて大量の上澄液約10にトルエンや各種
アルコール（例えばブタノールやイソブタノー
ル）を加えて発泡を防ぎながら減圧下濃縮乾涸す
る方法である。しかし発泡を防ぐことは容易でな
く、極めて長時間を要し、この間に物質の分解
（シアル酸の切断）もきたしかねない。
ており、例えばJ.Folchらの方法〔J.Biol.Chem.，
226巻497頁〜（1957）〕、この改良法としてのL.
Svennerholmらのクロロホルム−メタノール混
合液による方法〔Biochim，Biophs.Acta 617巻
97頁〜（1980）〕、あるいはG.Tettamantiらのテ
トラヒドロキシフランによる方法〔Biochim.
Biophs.Acta296巻160頁〜（1973）〕などが代表
的な方法である。しかしこれらの方法はいずれも
高価な、あるいは毒性の高い有機溶媒をしかも大
量に使用しており、かつ抽出後のガングリオシド
の回収にもかなりの手間を必要とし、例えばL.
Svennerholmの方法では脳500ｇを処理するに２
回抽出操作を行ない、有機溶媒の使用量の合計は
クロロホルム5.4とメタノール8.2の大量であ
り、かつ、水を加えて所謂Folchの分配〔J.Folch
らJ.Biol.Chem.，226巻497頁〜（1957）〕を行な
い、極めて大量の上澄液約10にトルエンや各種
アルコール（例えばブタノールやイソブタノー
ル）を加えて発泡を防ぎながら減圧下濃縮乾涸す
る方法である。しかし発泡を防ぐことは容易でな
く、極めて長時間を要し、この間に物質の分解
（シアル酸の切断）もきたしかねない。
これに対して本発明によれば実施例に記述する
ように脳500ｇ処理するに必要な有機溶媒は僅か
にメタノール1.65とクロロホルム70mlにすぎ
ず、Folchの分配上澄液は85mlとなり、前法と比
較するとおよそクロロホルムは１／800、メタノ
ールは１／５、濃縮乾涸すべき分配上澄液は実に
１／100以下の少量である。
ように脳500ｇ処理するに必要な有機溶媒は僅か
にメタノール1.65とクロロホルム70mlにすぎ
ず、Folchの分配上澄液は85mlとなり、前法と比
較するとおよそクロロホルムは１／800、メタノ
ールは１／５、濃縮乾涸すべき分配上澄液は実に
１／100以下の少量である。
本発明者等は上述の如く、従来法の欠点を改善
するために鋭意研究の結果、低水分条件下ではガ
ングリオシドのメタノールに対する溶解性は温度
依存性が著しく高いことを見い出した。即ち、至
適の高温では極めて容易に組織よりガングリオシ
ドが抽出される。抽出の際は加温下で撹拌、過
し、液を冷却すると、ガングリオシドが容易に
析出するので取するのみで回収出来ることにな
る。具体的には原料の動物の脳は凍結乾燥したも
の、あるいはアセトンで脱脂脱水したものを用
い、メタノールを乾燥脳１部に５〜20部使用し、
20〜60℃で、好ましくは30〜50℃で２〜４時間撹
拌するとガングリオシドの抽出率（Ｎ−アセチル
ノイラミン酸の定量値から算出、以下同様）は90
〜100％に達する、一方抽出時の水分の存在は抽
出率を大きく左右し、乾燥脳中の水分が20％以上
であるか、あるいは抽出に使用するメタノールに
含有される水分が５％以上になると著しく抽出が
困難になる。
するために鋭意研究の結果、低水分条件下ではガ
ングリオシドのメタノールに対する溶解性は温度
依存性が著しく高いことを見い出した。即ち、至
適の高温では極めて容易に組織よりガングリオシ
ドが抽出される。抽出の際は加温下で撹拌、過
し、液を冷却すると、ガングリオシドが容易に
析出するので取するのみで回収出来ることにな
る。具体的には原料の動物の脳は凍結乾燥したも
の、あるいはアセトンで脱脂脱水したものを用
い、メタノールを乾燥脳１部に５〜20部使用し、
20〜60℃で、好ましくは30〜50℃で２〜４時間撹
拌するとガングリオシドの抽出率（Ｎ−アセチル
ノイラミン酸の定量値から算出、以下同様）は90
〜100％に達する、一方抽出時の水分の存在は抽
出率を大きく左右し、乾燥脳中の水分が20％以上
であるか、あるいは抽出に使用するメタノールに
含有される水分が５％以上になると著しく抽出が
困難になる。
他方抽出液からガングリオシドを析出させるに
は、ゆるやかに撹拌しながら０−10℃まで冷却す
るとガングリオシドの約90％が析出する。
は、ゆるやかに撹拌しながら０−10℃まで冷却す
るとガングリオシドの約90％が析出する。
析出したガングリオシドはクロロホルム−メタ
ノール−水系の所謂Folchの分配を行ない濃縮乾
涸すると少量のリン脂質や蛋白質を含む粗製ガン
グリオシドが得られる。更にこれを分画し精製す
るにはイオン交換樹脂またはシリカゲルカラムク
ロマトグラフによつてなされる。
ノール−水系の所謂Folchの分配を行ない濃縮乾
涸すると少量のリン脂質や蛋白質を含む粗製ガン
グリオシドが得られる。更にこれを分画し精製す
るにはイオン交換樹脂またはシリカゲルカラムク
ロマトグラフによつてなされる。
文献〔K.Sazuki J.Neurochem.，12巻 629頁
〜（1965）によれば100％メタノールではガング
リオシドの抽出は低下すると述べている。しかし
これは未乾燥脳または乾燥不充分な脳、即ち水分
の過度の存在下あるいは抽出温度が低温の場合に
当てはまることで、本発明のように抽出条件を整
えると高収率でガングリオシドを抽出、回収する
ことが出来る。
〜（1965）によれば100％メタノールではガング
リオシドの抽出は低下すると述べている。しかし
これは未乾燥脳または乾燥不充分な脳、即ち水分
の過度の存在下あるいは抽出温度が低温の場合に
当てはまることで、本発明のように抽出条件を整
えると高収率でガングリオシドを抽出、回収する
ことが出来る。
本発明の実施には、動物は牛、豚、馬、羊、鯨
などのほ乳類、ニワトリ、アヒル、七面鳥などの
鳥類、マグロ、サケ、マス、イワシなどの魚類等
が原料となり得、その全脳を摘出して凍結乾燥あ
るいはアセトンによる脱脂脱水処理したものから
ガングリオシドを80％以上の収率で抽出、回収す
ることが出来る。
などのほ乳類、ニワトリ、アヒル、七面鳥などの
鳥類、マグロ、サケ、マス、イワシなどの魚類等
が原料となり得、その全脳を摘出して凍結乾燥あ
るいはアセトンによる脱脂脱水処理したものから
ガングリオシドを80％以上の収率で抽出、回収す
ることが出来る。
参考例１ 抽出温度と抽出率の関係
凍結乾燥した牛脳（水分7.8％）各100ｇにメタ
ノール各１を加え、所定温度で２時間撹拌後
過して液中のＮ−アセチルノイラミン酸をレゾ
ルシン比色法で定量し抽出率を求めた。結果を第
１図に示した。
ノール各１を加え、所定温度で２時間撹拌後
過して液中のＮ−アセチルノイラミン酸をレゾ
ルシン比色法で定量し抽出率を求めた。結果を第
１図に示した。
参考例２ メタノール中の水分と抽出率の関係
凍結乾燥した牛脳（水分7.8％）各100ｇに所定
水分含量のメタノール各１を加え40℃２時間撹
拌したのち参考例１と同様にして抽出率を求め
た。結果を第２図に示す。
水分含量のメタノール各１を加え40℃２時間撹
拌したのち参考例１と同様にして抽出率を求め
た。結果を第２図に示す。
参考例３ 冷却温度と回収率
参考例１における抽出温度40℃の液を100ml
宛に分割し、それぞれ所定温度の水槽中で３時間
ゆるやかに撹拌しながら冷却したのち、析出結晶
を取、Ｎ−アセチルノイラミン酸の回収率を求
めた。結果を第３図に示す。
宛に分割し、それぞれ所定温度の水槽中で３時間
ゆるやかに撹拌しながら冷却したのち、析出結晶
を取、Ｎ−アセチルノイラミン酸の回収率を求
めた。結果を第３図に示す。
実施例
牛の全脳500ｇを約１cm厚さにスライスし、凍
結乾燥して、水分6.3％、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸0.247％を含有する粉末105ｇを得る。その粉
末を無水メタノール１に加え35℃±２℃加温下
撹拌する。３時間後、過、残渣を0.5のメタ
ノールで洗滌する。液と洗液を合わせゆるやか
に撹拌しながら０℃に冷却する。２時間後析出し
た白色結晶を取し、冷メタノール0.1で洗滌
したのちクロロホルム70ml、メタノール30mlおよ
び水20mlを加えて撹拌溶解して静置すると二層に
分離する。分液して下層にメタノール20mlおよび
水20mlを加え再び撹拌静置して分液する。上層を
合わせて85mlを減圧下濃縮乾涸するとＮ−アセチ
ルノイラミン酸を12.4％含有する粗製ガングリオ
シドを1.8ｇ得る。Ｎ−アセチルノイラミン酸の
回収率86.1％、濃縮率50.2倍である。
結乾燥して、水分6.3％、Ｎ−アセチルノイラミ
ン酸0.247％を含有する粉末105ｇを得る。その粉
末を無水メタノール１に加え35℃±２℃加温下
撹拌する。３時間後、過、残渣を0.5のメタ
ノールで洗滌する。液と洗液を合わせゆるやか
に撹拌しながら０℃に冷却する。２時間後析出し
た白色結晶を取し、冷メタノール0.1で洗滌
したのちクロロホルム70ml、メタノール30mlおよ
び水20mlを加えて撹拌溶解して静置すると二層に
分離する。分液して下層にメタノール20mlおよび
水20mlを加え再び撹拌静置して分液する。上層を
合わせて85mlを減圧下濃縮乾涸するとＮ−アセチ
ルノイラミン酸を12.4％含有する粗製ガングリオ
シドを1.8ｇ得る。Ｎ−アセチルノイラミン酸の
回収率86.1％、濃縮率50.2倍である。
第１図は参考例１の抽出温度と抽出率の関係を
第２図は参考例２のメタノール中の水分と抽出率
の関係を第３図は参考例３の冷却温度と回収率の
関係を各々表わしたものである。
第２図は参考例２のメタノール中の水分と抽出率
の関係を第３図は参考例３の冷却温度と回収率の
関係を各々表わしたものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １ 乾燥した動物の脳をメタノールによつて抽出
し、該抽出液を冷却してガングリオシドを析出さ
せることを特徴とするガングリオシドの抽出方
法。 ２ メタノールの水分含有率が５％以下であるこ
とを特徴とする特許請求の範囲第１項記載の方
法。 ３ 抽出の温度が20℃以上60℃以下である特許請
求の範囲第１項記載の方法。 ４ 抽出液の冷却温度が10℃以下である特許請求
の範囲第１項記載の方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035303A JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP59035303A JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPS60181019A JPS60181019A (ja) | 1985-09-14 |
| JPH045679B2 true JPH045679B2 (ja) | 1992-02-03 |
Family
ID=12438010
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP59035303A Granted JPS60181019A (ja) | 1984-02-28 | 1984-02-28 | ガングリオシドの抽出方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS60181019A (ja) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IN171530B (ja) * | 1989-11-17 | 1992-11-07 | Fidia Spa | |
| JP3929085B2 (ja) * | 1996-04-26 | 2007-06-13 | 雪印乳業株式会社 | ガングリオシド高含有組成物の製造法 |
| CN105111253B (zh) * | 2015-09-18 | 2018-01-12 | 重庆寰瑞生物技术有限公司 | 一种提取分离神经节苷脂的方法 |
| CN109320566B (zh) * | 2018-08-14 | 2022-03-15 | 四川兴杰象药业有限公司 | 一种从猪脑髓中提取神经节苷脂的分离纯化制备方法 |
| CN109705176A (zh) * | 2019-01-23 | 2019-05-03 | 苏州纳微科技股份有限公司 | 一种猪神经节苷脂的分离纯化方法 |
-
1984
- 1984-02-28 JP JP59035303A patent/JPS60181019A/ja active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPS60181019A (ja) | 1985-09-14 |
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