JPH0535155B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明は特定の有機溶媒を含む媒体に存在する
ガングリオシドを取得する方法に関するものであ
る。ガングリオシドは人及び動物の脳に多く含ま
れている糖脂質の１種で、その構成成分の一つで
あるシアン酸の結合数及び結合位置によつて多数
の分子種があり、ガングリオシドとはそれらの総
称である。

近年、ガングリオシドの生体内での作用の解明
が進歩しており、医薬品として中枢および末梢神
経系の刺激伝達障害の治療に利用されている。

従来技術 これまでガングリオシドの抽出、精製方法につ
いて種々報告がなされている。例えばSvenner−
holmらの方法（Biochim、Biophys、acta、617
巻（1980）97〜109頁）によれば、組織からクロ
ロホルム、メタノール及び水の混合溶液によつて
抽出し、フオルチの分配（J.Folch、J.Biol.
Chem.226巻（1957）497−509頁）によつてガン
グリオシドを水性溶液として分離し、消泡剤を添
加しながら蒸発乾固し、粗製のガングリオシドを
得ている。また医薬品に応用する目的で別の抽出
法が特許出願されている。（フイデイーア、ソシ
エタ、ペル、アチオニ、特開昭52−34912）この
方法では動物の脳からガングリオシドをテトラヒ
ドロフランにより抽出し、エーテルと水を加えて
分配し、下層の水性溶液をイオン交換カラムクロ
マトグラフイーで精製し、水酸化バリウムで沈澱
として分離し、これを塩酸水溶液に溶解して透析
したのち蒸発乾固し、前述のフオルチの分配によ
り水性溶液として凍結乾燥して製品としている。

解決しようとする問題点 このようにガングリオシドを含む大量の水性溶
液からガングリオシドを単離する方法は、発泡を
抑えながら蒸発乾固するか、水酸化バリウムによ
り不溶性塩を生成し塩酸で塩を脱離し透析したの
ち凍結乾燥するか、あるいはイオン交換カラム
へ、吸、脱着する方法であり、いづれも大量のガ
ングリオシドを調製することを非常に困難にして
いる。

問題解決の手段 本発明者らは大量のガングリオシドを効率的に
精製取得する方法について研究を重ねた結果、動
物の脳から抽出したガングリオシドのメタノール
する溶液をそのまゝ冷却するとガングリオシドが
析出ことを見出し特許出願した（特願昭59−
35303）。さらに研究の結果ガングリオシドの水溶
液あるいは有機溶媒を含んだ水溶液に多量の低級
アルコールを加えて冷却するとガングリオシドが
析出することを見出した。そしてさらにいづれの
場合も特にアルカリ金属水酸化物又はアンモニア
の存在下ではガングリオシドの回収が量的にも質
的にも著しく改善されることを見出して本発明を
完成した。

本発明に言う低級アルコールを含有する溶媒と
は、特にメタノールおよびエタノールを含有する
溶媒であり、ｎ−又はiso−プロパノールを含む
ものであつても良い。そしてこの溶媒の系には通
常は水が存在する。更にこの溶媒系には少量のテ
トラヒドロフラン、クロロホルムあるいはエーテ
ル等が存在していてもよい。例えば前述したフオ
ルチの分配によつて生た上層あるいはテトラヒド
ロフラン、エーテルおよび水の分配によつて生じ
た下層等の低級アルコールを添加したものがこれ
に当る。

また低級アルコールの含有率は約20％以上、好
ましくは70％以上がよく、水溶液あるいは低級ア
ルコールの含有率の小さい溶液には、メタノー
ル、エタノール、ｎ−プロパノールあるいはiso
−プロパノール等の低級アルコールを単独または
混合して追加するのが良い。低級アルコールの含
有率が小さく、含水率が大きいとガングリオシド
の回収率が低下する。

添加するアルカリ金属水酸化物としては水酸化
ナトリウム、水酸化カリウムおよび水酸化リチウ
ムがあり、その他アンモニア水でも良い。これら
の効果はガングリオシドの回収率を著して向上さ
せることにある。そしてアルカリ金属水酸化物あ
るいはアンモニアの存在する系を一旦30〜60℃の
温度に維持することは、粗製ガングリオシド中に
共存するリン脂質を加水分解して除去することに
より取得されたガングリオシドの純度を高いもの
とする効果がある。アルカリ金属水酸化物あるい
はアンモニアの使用量は溶媒中に存在するガング
リオシドの構成分子であるシアル酸と当量以上が
好ましく、通常はガングリオシドと同量ないし10
倍量程度使用される。この処理方法としてはガン
グリオシドを含んだ溶液に低級アルコールとアル
カリ金属水酸化物あるいはアンモニアを加え、リ
ン脂質を分解する場合にはこれが消失するまで40
〜60℃で加熱撹拌したのち充分冷却して析出物を
取する。低級アルコールの添加はリン脂質を分
解したあとでも良い。

発明の効果 本明の方法によれば、従来、非常に困難であつ
た強発泡性のガングリオシド水性溶液の濃縮によ
るガングリオシドの回収が、アルカリ処理と過
といつた簡単な操作のみとすることができる。ガ
ングリオシドの回収率はアルカリ金属水酸化物あ
るいはアンモニアが存在しない場合には約50％程
度であるが本発明の方法によれば90〜95％に達す
る。さら本発明のもう一つの特徴は夾雑している
蛋白質の大部分が液に移行して除去されること
である。したがつて前述したフオルチの上層から
本発明の方法で得たガングリオシドは60〜70％の
純度をもち、若干の硫糖脂質、中性糖脂質を含
み、蛋白質、リン脂質をほとんど含んでいない。
このガングリオシドをシリカゲルカラムクロマト
グラフイーで処理することにより、容易に精製し
て医薬用に供しうる。

本発明をさらに具体的に説明するために実施例
を示す。

実施例 １ アセトンで脱脂、脱水した牛脳からメタノール
で抽出したガングリオシドをクロロホルム、メタ
ノールおよび水で分配した上層の水性溶液500ml
（シアン酸1.79ｇ、ガングリオシド換算5.73ｇ含
有、水約240mlを含む）にメタノール700mlと水酸
化ナトリウム23ｇを加え、50℃で１時間撹拌し
た。反応後０〜５℃に冷却して析出物を吸引過
し、冷メタノール100mlで洗浄した。減圧乾燥し
て8.2ｇのガングリオシドを得た。シアル酸分析
によるとガングリオシドの純度は64.3％で回収率
は92％であつた。

このガングリオシドは薄層クロマトグラフイー
で展開し、レゾルシノールで発色させてガングリ
オシドの各分子種の組成をしらべたが、原料とし
た水性溶液中の組成と変化がなかつた。オルシノ
ールで発色させると硫糖脂質および中性糖脂質の
存在が確認された。モリブデン酸、およびニンヒ
ドリンによる発色はほとんど無かつた。同様に
液を検査したところ、ニンヒドリンの発色が強
く、レゾルシノールの発色は弱く、他の発色はほ
とんど無かつた。

実施例 ２ 実施例１と同様に処理したガングリオシドの水
性溶液310ml（ガングリオシドとして6.98mg／ml
含む、水約135ml）に水酸化カリウム10ｇをメタ
ノール100mlに溶解して加え、40℃で１時間撹拌
したのちメタノール250mlを加え、次いで氷冷し、
析出物を吸引過し冷メタノール50mlで洗浄し、
減圧乾燥してガングリオシド3.4ｇ回収した。純
度59.5％回収率93.6％であつた。

実施例 ３ 実施例１と同様に処理したガングリオシドの水
溶液100ml（ガングリオシドとして2.5ｇ含む、水
50ml）に水酸化ナトリウム10ｇを加え40℃で１時
間処理したちエタノール200mlを加え次いで０〜
５℃に冷却し析出物を吸引過して冷エタノール
100mlで洗浄し、減圧乾燥してガングリオシド3.8
ｇを回収した。純度62.5％回収率95％であつた。

実施例 ４ 粗ガングリオシド2.0ｇ（シアル酸18.8％含む、
ガングリオシドとして1.2ｇ）をメタノール100ml
に加温溶解し、少量の不溶物を過して除去し
た。この溶液に10％カセイソーダのメタノール溶
液12mlを加え、冷却して析出物を取し、冷メタ
ノール20mlで洗浄した。乾燥して結晶1.6ｇを得
た（シアル酸21.6％を含む、ガングリオシドとし
て1.1ｇ）回収率92％であつた。

実施例 ５ 実施例４と同様のガングリオシドのメタノール
溶液を用いて、カセイソーダのメタノール溶液に
かえて、濃アンモニア水５mlを加えて結晶1.7ｇ
を得た。（シアル酸20.3％を含む、ガングリオシ
ドとして1.1ｇ）回収率は92％であつた。

Claims (1)

1. 【特許請求の範囲】 １ 低級アルコールを含有する溶媒中に溶解して
   いるガングリオシドを、アルカリ金属水酸化物又
   はアンモニアの存在下に析出物として取得する方
   法。 ２ 低級アルコールがメタノール又はエタノール
   であることを特徴とする特許請求の範囲第１項に
   記載の方法。 ３ アルカリ金属水酸化物又はアンモニアの存在
   する系を一旦40〜60℃の温度に維持して行なうこ
   とを特徴とする特許請求の範囲第１項又は第２項
   に記載の方法。