JPH0456840B2

JPH0456840B2 -

Info

Publication number: JPH0456840B2
Application number: JP59153899A
Authority: JP
Inventors: Riin Marino Emu
Original assignee: MEDEIKARU RISAACHI FUAUNDEISHON OBU OREGON
Current assignee: MEDEIKARU RISAACHI FUAUNDEISHON OBU OREGON
Priority date: 1984-04-20
Filing date: 1984-07-23
Publication date: 1992-09-09
Also published as: DK166213B; NO842990L; EP0159431A3; EP0159431A2; ES534553A0; DK361084A; FI842935L; FI82253B; DK361084D0; AU580005B2; EP0159431B1; NZ208961A; FI82253C; ES8601233A1; AU3097784A; JPS60224697A; DK165839C; FI87792B; DK14892A; DK166213C

Description

【発明の詳細な説明】

〔産業上の利用分野〕この発明は、チゴゲニンセロビオシド、チゴゲ
ニンセロビオシドヘプタアセテート並びにコレス
テロールの吸収を阻害のための処置前者の化合物
の使用に関するものである。〔従来の技術〕先の出願（米国特許出願第379098号、出願中）
には、温血動物のコレステロール消化吸収の減少
に役立つものとしてある種の化合物が開示されて
いる。これらの化合物中で、チゴゲニンセロビオ
シドは新規であつて、公知のコレステロール吸収
阻害剤であるコレスチルアミンおよびその他の既
知近縁グリコシド類に比較して、ある種の試験で
予期されないすぐれた性質を示す。フランス特許第2425859号および米国特許第
4260603号には、プロスタグランジンシンセター
ゼ阻害活性を有するものとしてある種のステロー
ルグリコシド類およびスピロケタール・ステロイ
ドグルコシド類が記載されている。チゴゲニン・α−Ｌ−ラムピラノシドおよびチ
ゴゲニル・β−マルトシドの溶血活性は、J.
Pharm.Sci.67巻11号1589頁（1978年）に記載さ
れている。ネオチゴゲニンジグルコシドは、低コレステロ
ール活性を有することが、Khim.Farm.Zh.15巻
９号55−60頁（1981年）に示されている。〔発明の開示〕この発明は、式（式中、Ｒは水素または−Ｃ(O)CH₃を意味す
る）で示される化合物のαもしくはβ−アノマー
またはその混合物を提供するものである。Ｒが−
Ｃ(O)CH₃の化合物は、ＲがＨの化合物を製造する
中間体として用いられる。また、この発明は、処置を必要とする対象に式
(A)においてＲが水素の化合物を投与することによ
る、コレステロールの吸収を阻害するための処置
（治療・予防）方法を提供するものである。さらに、この発明は、式(A)においてＲが水素の
化合物を投与することによる、コレステロールの
吸収を阻害する処置（治療・予防）のための医薬
組成物を提供するものである。さらに、この発明は、式(A)においてＲが水素の
化合物の治療有効量と適正な製薬上許容される賦
形剤を混合してなる、医薬組成物を提供するもの
である。ＲがＣ(O)CH₃の化合物はこの形態で投与された
としても体内でＨへと変換することによりＲがＨ
の化合物として効果を示すと考えられ、ＲがＣ(O)
CH₃の化合物も同種の効果を示すがＲがＨの化合
物より効果は小さい。そのほか、この発明は、上記この発明の化合物
の製造法、特にαまたはβ−アノマーの製造法を
提供するものである。（定義）式(A)中の波線は、ステロイドが結合する６員環
平面に関して上側または下側でステロイドとセロ
ビオシド部分が結合することを示す。「α−アノマー」は、６員環平面の下側でステ
ロイドが結合することを示す。「β−アノマー」は、６員環平面の上側でステ
ロイドが結合することを示す。「処置」は、哺乳類、特にひとの疾病のあらゆ
る処置を含み、 (i) 疾病の素因を有するかも知れないがまだ疾病
と診断されていない対象の疾病発生を予防する
こと、 (ii) 疾病の阻止、すなわち疾病の発展を抑止する
こと、 (iii) 疾病の救済、すなわち疾病の退行を起させる
こと、を包含する。「高コレステロール血症」
（hypercholesteremia）は、hypercholesteremia
またはhypercholesterinemiaとしても知られ、循
環血液中の血球（cell）および血漿中に異常に大
量のコレステロールが存在する状態を意味する。「動脈硬化症」は、管壁の硬化および肥大化で
特徴づけられる退行性動脈硬化を意味する。一般
に認められる動脈硬化症の類型は、アテローム性
動脈硬化症、モンカーバーグ動脈硬化症、高血圧
性動脈硬化症細動脈性動脈硬化症または老人性動
脈硬化症である。（好ましい実施態様）前記のように、この発明は式（式中、Ｒは水素または−Ｃ(O)CH₃を意味す
る）で示される化合物、すなわちチゴゲニンセロ
ビオシドまたはチゴゲニンセロビオシドヘプタア
セテートの個々のα−アノマー、β−アノマーま
たはその混合物を提供する。そのうち好ましい化合物は、Ｒが水素のもの、
すなわちα−チゴゲニンセロビオシド、β−チゴ
ゲニセロビオシド、またはαおよびβ−チゴゲニ
ンセロビオシド混合物である。（製造法）反応式１は、チゴゲニンセロビオシド(A)の製造
法を示す。式(A)および以下の記載において、チゴ
ゲニンセロビオシドの語は、チゴゲニンセロビオ
シドのαおよびβ−アノマー混合物、または個々
のα−アノマーもしくはβ−アノマーを含むもの
とする。反応式１において、式（）の化合物における
ＸはORまたはBrを意味し、式（）中のＲは−
Ｃ(O)CH₃であり、式(A)中のＲは水素である。反応式１は、個別α−アノマー、個別β−アノ
マー、およびその両者の未分割混合物の製造法を
示す。出発混合物は、セロビオースオクタアセテ
ート（式（）においてＸが−OC(O)CH₃）また
はブロモセロビオースヘプタアセテート（式
（）においてＸがBr）、並びにチゴゲニン（）
である。Ｘが−OC(O)CH₃である場合の３方法は
すべて中間体としてチゴゲニンセロビオシドヘプ
タアセテート（）を通り、同一の最終化合物(A)
をもたらす。異なる出発物質および反応条件を用いることに
より、個別αおよびβ−アノマー（方法１および
２）または両者の混合物（方法３）が得られる。（方法１）異なる溶媒を用いることにより、αまたはβ−
アノマーが得られる。Tetrahedron Letters28巻
1379頁（1984年）の論文に、このような溶媒誘発
立体化学的修飾が記載されている。この場合、ア
セトニトリルを用いるとα−アノマーを生ずる。
他方、メチレンクロライドを用いるとβ−アノマ
ーを生ずる。工程１工程１は、セロビオシドヘプタアセテート
（）の製造法を示す。出発原料のセロビオースオクタアセテートおよ
びチゴゲニンは、アルドリツチ・リサーチ・プラ
スまたは他の社から市販されている。セロビオースオクタアセテート（式（）にお
いてＸは−OC(O)CH₃）を、チゴゲニンと、有機
溶媒（α−アノマーの製造にはアセトニトリル、
β−アノマーの製造にはメチレンクロライドが好
ましい）中、ほぼ65：200：5000（重量：重量：容
量）の量で反応させる。金属クロライド、好まし
くは塩化第２錫を、１−５分間、好ましくは２分
間かかつて加える。反応混合物を50−75℃、好ま
しくは65℃または混合物が均一になる温度まで加
温する。この温度を10−60分、好ましくは約20分
間保ち、次いで20−40℃、好ましくは30℃に冷却
する。次に、混合物を公知の方法で精製工程にか
け、使用した溶媒によりαまたはβ−チゴゲニン
セロビオシドヘプタアセテート（）を得る。工程２工程２は、化合物（）の加水分解によるチゴ
ゲニンセロビオシド(A)の製造法を示す。化合物（）を、水および、有機溶媒（好まし
くはメチレンクロライド）、トリエチルアミン、
メタノールの混合物と、ほぼ４：10：６：12：24
（重量：容量：容量：容量：容量）の量で反応さ
せる。反応は20−80℃、好ましくは還流温度で、
約２−10時間、好ましくは６時間行なう。次い
で、反応混合物を一夜15−30℃、好ましくは室温
で撹拌する。反応物を濃縮し、公知方法で分離精
製すると、工程２でチゴゲニンセロビオシドヘプ
タアセテートの何れの異性体を用いたかにより、
αまたはβ−チゴゲニンセロビオシド(A)を得る。（方法２）これは個別αおよびβ−アノマー製造法の別法
である。工程１ブロモセロビオシドヘプタアセテート（式
（）においてＸがBr）は、ほぼ等モル量のセロ
ビオースオクタアセテートと４臭化チタンのよう
なブロモ化剤を、塩素化炭化水素特に１，２−ジ
クロロエタンのような非極性有機溶媒中、一般に
使用溶媒の沸点より低い弱加熱温度、例えば60−
65℃で反応させて製造する。反応は約10時間以
内、一般に約５時間以内に完結する。公知の精製
法を用いて、式（）においてＸがBrの化合物
を得る。次いでこの化合物を、ほぼ等モルのチゴ
ゲニンと、シアン化第２水銀のような重金属塩か
らなる反応促進剤の存在下に反応させる。これ
は、ケーニツヒス・クノール反応と呼ばれる。生
成物はβ−チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテ
ートである。チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテートのα
−アノマーは、１モル過剰のブロモセロビオース
とチゴゲニン（約２：１モル比）を、メチレンク
ロライドのような適当なハロゲン化炭化水素中で
ジイソプロピルアミンおよびテトラエチルアンモ
ニウムブロマイドの存在下に反応させて製造す
る。反応は、約10−40℃、好ましくは20−25℃
で、数時間ないし数日間、一般には約２日以内の
間行なう。α−アノマーは、公知の精製法で採取
する。工程２ αまたはβ−チゴゲニンセロビオシドヘプタア
セテートの加水分解は、方法１の工程２で述べた
方法にしたがつて行なう。（方法３）方法３は、β−チゴゲニンセロビオシドが優勢
な混合物の製造法を示す。工程１チゴゲニン（）およびセロビオースオクタア
セテート（）の両者を有機溶媒、好ましくはメ
チレンクロライドに、それぞれ４：80（重量／容
量）および14：80（重量／容量）の量で溶解する。
金属塩、好ましくは４塩化錫のセロビオースオク
タアセテートとほぼ同量を、セロビオースオクタ
アセテートに加える。得られる溶液をチゴゲニン
溶液に加え、１−８時間、好ましくは３時間、15
−30℃、好ましくは室温で反応させる。混合物を
緩衝液、好ましくは重炭酸塩で洗浄し、反応中発
生するガスを除く。混合物をTLCのような公知
方法で分離精製工程にかけ、αおよびβ−チゴゲ
ニンセロビオシドヘプタアセテート（）混合物
を得る。工程２有機溶媒／水の混合物、好ましくはトリエチル
アミン／メタノール／メチレンクロライド／水、
および上で得たヘプタアセテート（）の溶液
を、定常撹拌下、約６−24時間、好ましくは一
夜、15−30℃、好ましくは室温で反応させる。溶
媒を除き、残渣を公知方法で分離精製工程にかけ
る。精製混合物を傾斜透折器（実施例３に記載）
で１−４日、好ましくは３日間透析する。混合物
を別の精製手段で処理し、ソツクスレーの装置中
で有機溶媒、好ましくはヘプタンで抽出する。得
られる残渣を15−30℃、好ましくは室温で１−４
日、好ましくは３日間乾燥し、β−チゴゲニンセ
ロビオシドが優勢な混合物を得る。 αおよびβ−チゴゲニンセロビオシド混合物
は、個別αおよびβ−アノマーの比例量を混合し
て得られる。化合物および中間体の単離精製は、所望によ
り、例えば過、抽出、結晶化、カラムクロマト
グラフイー、薄層または厚層クロマトグラフイ
ー、またはこれらの組合わせのような任意の適当
な分離精製法により行なうことができる。適当な
分離法および単離法の個々の説明は、後記実施例
により行なう。勿論、これらと均等な分離法およ
び単離法も用い得る。〔効果〕この発明の化合物であるグリコシド類は、コレ
ステロール吸収の強力な阻害剤であり、したがつ
て１次的に高コレステロール血症の処置に有用で
ある。高コレステロール血症は、全身性の、心臓
血管、脳血管または末梢血管障害の発生に密接な
関係があるので、これらの化合物は２次的に動脈
硬化症の発生を予防する。体内主血漿脂質に属するコレステロールは、脂
肪に易溶であるが水には難溶である。また、脂肪
酸とエステルを作ることができ、血漿中に存在す
るコレステロールの70％はコレステロールエステ
ルの形をとつている。体内に存在するコレステロールには、体内性と
体外性のものがある。体外性コレステロールは、
食品中に存在し、消化管からゆつくり腸リンパ管
に吸収される。体内性コレステロールは、かなり
大量であり、体内細胞で生産される。基本的に
は、血漿リポ蛋白中で循環する全ての体内性コレ
ステロールは肝臓で作られるが、他の体細胞もす
べて少なくとも多少はコレステロールを作る。コレステロールを含む主血漿脂質は、遊離の状
態で血漿中を循環せず、蛋白と結合合してリポ蛋
白と呼ばれる巨大分子錯体の形で輸送される。血漿リポ蛋白は４つの主要群に分類される。キロミクロン超低密度リポ蛋白（VLDL）低密度リポ蛋白（LDL）高密度リポ蛋白（HDL）脂質と蛋白の比率が変化することにより、リポ
蛋白の密度が異なる。リポ蛋白は、超遠心分離ま
たは電気泳動により分離できる。この発明の方法
で処置できる病的な高リポ蛋白血症は、リポ蛋白
異常のパターンにより分類される。血漿リポ蛋白パターンにより、患者を３つの型
の高脂血症の異常、すなわち高コレステロール血
症、複合高脂血症、高トリグリセリド血症に分類
することができる。高コレステロール血症、複合高脂血症、および
高トリグリセリド血症は、広く発生し、２種のリ
ポ蛋白（VLDLおよびLDL）が関係しているが、
これについては血漿濃度とアテローム性動脈硬化
症との間に正の相関性がある。これについての参考文献としては、ガイトン、
メデイカル・バイオロジー、５版926−927頁
（1976年）、ザ・メルク・インデツクス、13版381
−383頁（1977年）およびグツドマン、ギルマン、
ザ・フアーマコロジカル・ベーシス・オブ・セラ
ピユテイツクス、５版744−747頁（1975年）参
照。この発明の化合物によるコレステロール吸収の
阻害は、さるを用いてJ.Clin.Invest.67巻156頁
（1981年）のスクリーニング試験法で行なつた。
この発明の化合物の阻害活性を公知の抗リポ蛋白
血症剤であるコレスチルアミンと比較し、５倍強
力なことが判明した。すなわち、２％コレスチル
アミンで得られるのと同じ結果が、0.4％チゴゲ
ニンセロビオシドで得られた。現在行なわれてい
る高コレステロール血症の処置には莫大な日用量
を必要とすることが周知であるから、この発見の
意義は極めて大きい。例えば、コレスチルアミン
の推奨成人用量は４ｇを１日３−４回であり、総
用量としてコレスチルアミン12−16ｇを賦形剤15
−20ｇと混合して用いる。１日に投与される薬の
総量は27−36ｇになる。他方、同一の効果が、こ
の発明によると、日用量僅か0.8ｇを１日３−４
回、総用量2.4−3.2ｇと賦形剤３−４ｇの混合、
すなわち１日に投与される薬の総量5.4−7.2ｇ／
日で得られる。ラツトにおけるコレステロール吸収の％は、
Am.J.Clin.Nutr.30巻2061頁（1977年）記載の試
験法で行なつた。構造的に関連性があるジオスゲ
ニンセロビオシド、チゴゲニングルコシド、ジオ
スゲニングルコシドまたはアルフアルフアサポニ
ンのような他の合成グルコシドと比較すると、こ
の発明の化合物はコレステロール吸収％が低く、
したがつて血漿中のコレステロール除去効果が大
きかつた。（投与法）チゴゲニンセロビオシドの投与は、高コレステ
ロール血症および動脈硬化症の処置に適した方法
として許容される任意の方法によつて行なうこと
ができる。このような方法には、経口投与、静
脈、皮下、皮内、筋肉内等の非経口投与、および
例えば坐剤等の他の全身投与が含まれる。投与するチゴゲニンセロビオシド量は、勿論、
処置対象の苦痛の苛烈さ、投与法および指示医の
判断により異なる。しかし、一般に有効量は７−
115mg／Kg／日、好ましくは28−57mg／Kg／日で
ある。体重70Kgのひとでは、これは0.5−８ｇ／
日、好ましくは２−４ｇ／日、最も好ましくは
2.4−3.2ｇ／日になる。経口投与が好適であるが、その場合、医薬組成
物は溶液、けんだく液、錠剤、丸剤、カプセル、
散剤、徐放性製剤等の形態をとる。非経口投与は、皮ふまたは粘膜の１層またはそ
れ以上を通す注射による患者への投薬法である。
非経口投与は、患者が自分で医薬を服用できない
ような緊急事態に用いるのが好ましい。坐剤による全身投与は、チゴゲニンセロビオシ
ドと適当な製薬用賦形剤で作られた、固体ではあ
るが容易に容融する円錐または円柱形投与用薬剤
である。坐剤は、体内通路または凹陥部に挿入す
るに適した形態でなければならず、通常直腸に挿
入される。この投与法は、反復嘔吐のような重い
食物摂取障害にある患者に適する。（医薬組成物）組成物は、所望の投与法に応じて、固体、半固
体または液体の投与形、例えば錠剤、坐剤、丸
剤、カプセル、散剤、液剤、けんだく剤等の、好
ましくは個々の用量の１回投与に適した単位投与
形態とすることができる。組成物は、常用の製薬
用担体または賦形剤、および有効成分としてチゴ
ゲニンセロビオシドを含有する。さらに、他の医
薬、薬剤、担体、補佐薬等を含むことができる。医薬組成物は、チゴゲニンセロビオシドを0.1
−95％、好ましくは１−70％含有することができ
る。何れの場合にも、投薬用組成物または製剤
は、被処置患者の症状すなわち高コレステロール
血症または動脈硬化症を緩解するに有効な量のチ
ゴゲニンセロビオシドを含むものとする。固体医薬組成物用の慣用非毒性固体担体には、
例えば製薬用品質のマンニトール、ラクトース、
でんぷん、ステアリン酸マグネシウム、サツカリ
ンナトリウム、タルク、セルロース、グルコー
ス、シユクロース、炭酸マグネシウム等が含まれ
る。液体医薬組成物は、チゴゲニンを溶解、分散、
またはその他の製剤処理に付し、所望により、例
えば水、食塩水、水性デキストロース、グリセリ
ン、エタノール等の担体中で製薬用補助剤と混合
して、溶液またはけんだく液を作ることにより製
造される。例えば静脈注射のような非経口投与には、チゴ
ゲニンセロビオシドを媒質に溶解する。媒質は、
例えば注射用食塩水、リンゲル注射液、デキスト
ロース注射液等の水性媒質、液体エチルアルコー
ル、ポリエチレングリコールまたはプロピレング
リコールのような水混和性媒質、またはコーン
油、ピーナツ油またはごま油のような非水媒質で
あつてよい。媒質は溶液を化学分解に対して安定
化するために適当なPHに緩衝され、注射用等張性
となるように製剤される。抗微生物剤または抗酸
化剤のような他の物質も添加される。最近考案された非経口投与では、一定水準の用
量が維持される遅延放出性または持続放出性製剤
の植込みが行なわれる。例えば米国特許第
3710795号参照。坐剤による全身投与では、チゴゲニンセロビオ
シドが例えばポリアルキレングリコールまたはト
リグリセドのような伝統的結合剤および担体を用
いて製剤される。このような坐剤は、チゴゲニン
セロビオシドを0.5−10％、好ましくは１−２％
含む混合物から製剤される。一定量の有効成分を含む種々の医薬組成物の製
造法は、当業界で公知または自明である。例え
ば、レミントンス・フアーマシユーテイカル・サ
イエンシズ（マツク・パブリツシング・カンパニ
ー、ペンシルバニア州イーストン）第15版（1975
年）参照。実施例１ α−チゴゲニンセロビオシドの製造。 (1) α−チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテー
トの製造。撹拌器と500ml滴下漏斗を備えた12リツトル
の三頚丸底フラスコを窒素置換し、これにセロ
ビオースオクタアセテート650ｇ（0.96モル）、
チゴゲニン200ｇ（0.48モル）、およびアセトニ
トリル５リツトルを仕込んだ。次いで、全量
250ｇ（0.96モル）の塩化第２錫を、２分間要
して滴下漏斗から加えた。反応混合物を蒸気浴
で均一になるまで（65℃）加温した。65℃の温
度を20分間保ち、次いで混合物を30℃に冷却し
た。飽和炭酸水素ナトリウム水溶液４リツトル
を注意深く加え、混合物を90分間激しく撹拌し
た。分層し、水層をメチレンクロライド４リツ
トルで抽出した。有機層を合わせ、硫酸マグネ
シウムで乾燥し、減圧濃縮してゴム状物を得
た。ゴム状物をシリカゲルカラム（1.5Kg）に
かけ、25％メチレンクロライド／ヘキサン（容
量／容量）で溶離した。得られたフラクシヨン
を減圧濃縮した。残留物をエタノールから結晶
化して、α−チゴゲニンセロビオシドヘプタア
セテート120ｇ（理論値の24％）を得た。 (2) α−チゴゲニンセロビオシドの製造。メチレンクロライド60ml中α−チゴゲニンセ
ロビオシドヘプタアセテート38.2ｇ、メタノー
ル240ml、トリエチルアミン120ml、および水
100mlの混合物を、６時間還流し、次いで室温
で一夜撹拌した。反応混合物を粘稠な糊状にな
るまで減圧濃縮し、水、ヘキサンで洗浄し乾燥
した。得られる物質をシリカゲル３Kgのカラム
でクロマトグラフイーに付し、10％メタノー
ル／メチレンクロライドで目的物質を溶離し
た。α−チゴゲニンセロビオシド含有フラクシ
ヨンを濃縮し、残留物を沸騰イソプロパノール
中で撹拌し、冷却し捕集してα−チゴゲニンセ
ロビオシド13.9ｇを得た。 αおよびβ−チゴゲニンセロビオシドのNMR
データを実施例３の後の第１表に示す。実施例２ β−チゴゲニンセロビオシドの製造。 (1) β−チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテー
トの製造。撹拌器と40ml滴下漏斗を備えた12リツトルの
三頚丸底フラスコを窒素置換し、これにセロビ
オースオクタアセテート650ｇ（0.96モル）、チ
ゴゲニン200ｇ（0.48モル）、およびメチレンク
ロライド500mlを仕込んだ。次いで、全量250ｇ
（0.96モル）の塩化第２錫を、２分間を要して
滴加漏斗から加えた。反応混合物を蒸気浴で加
温し、20分間還流し、次いで30℃に冷却した。
飽和炭酸水素ナトリウム水溶液４リツトルを注
意深く加え、混合物を90分間激しく撹拌した。
分層し、水層をメチレンクロライド４リツトル
で抽出した。有機層を合わせ、硫酸マグネシウ
ムで乾燥し、減圧濃縮してゴム状物を得た。ゴ
ム状物をシリカゲルカラム（1.5Kg）にかけ、
25％メチレンクロライド／ヘキサン（容量／容
量）で溶離した。β−チゴゲニンセロビオシド
を含むフラクシヨンを減圧濃縮した。残留物を
エタノールから結晶化して、β−チゴゲニンセ
ロビオシドヘプタアセテートを得た。 (2) β−チゴゲニンセロビオシドの製造。メチレンクロライド60ml中β−チゴゲニンセ
ロビオシドヘプタアセテート38.2ｇ、メタノー
ル240ml、トリエチルアミン120ml、および水
100mlの混合物を、６時間還流し、次いで室温
で一夜撹拌した。反応混合物を粘稠な糊状にな
るまで減圧濃縮し、水、ヘキサンで洗浄し乾燥
した。得られる物質をシリカゲル３Kgのカラム
でクロマトグラフイーに付し、10％メタノー
ル／メチレンクロライドで目的物質を溶離し
た。適当なフラクシヨンを濃縮し、残留物を沸
騰イソプロパノール中で撹拌し、冷却し捕集し
てα−チゴゲニンセロビオシド13.9ｇを得た。実施例３ β−チゴゲニンセロビオシドの製造。（一般情報および方法）チゴゲニンは、リサーチ・プラスから入手し
た。セロビオースオクタアセテートは、アルドリ
ツチから入手した。チルチング透析器チルチング（tilting）透析器は、サイホンを備
えた大形容器を用い、水面が連続的に上昇および
下降するように組立てた。透析袋は、上・下水面
の中間で垂直な金属棒に結びつけた。チルチング
袋は粉末材料を動かしそれと水との接触を増し
た。（実験方法）チゴゲニン：チゴゲニン41.9ｇ（100ミリモル）
を水不含のメチレンクロライド800mlに溶かし
た。水不含のメチレンクロライド：水不含のメチレ
ンクロライドは、市販のメチレンクロライドに
MgCl₂を加えて製造した。溶液に30分間撹拌し
過した。セロビオースオクタアセテート：セロビオース
オクタアセテート135ｇ（200ミリモル）を水不
含のメチレンクロライド800mlに溶かし、４塩
化錫25ml（200ミリモル）を加えた。混合物を
10分間撹拌した。上で得たセロビオースオクタアセテート混合物
を分液漏斗に入れ、上で得たチゴゲニン溶液に約
150ml／分の速度で加えた。混合物を３時間撹拌
した。得られる溶液を、メチレンクロライドを飽
和した飽和炭酸水素ナトリウム水溶液500mlを含
む４リツトルの分液漏斗に注入した。メチレンク
ロライドを飽和した水500mlを加え、ガスを逃が
した。溶液を反転混合し、有機層と水層を分離し
た。下層を分液漏斗に移し、メチレンクロライド
を飽和した水で２回洗浄し、分離後上層を吸引除
去した。残留層を水250mlで２回洗浄し、分離し、
再び上層を捨てた。下層は２回水洗し、分離し、
再び下層を取り、窒素中約50℃で激しく撹拌しな
がら100−200mlまで濃縮し、β−チゴゲニンセロ
ビオシドヘプタアセテートが優勢な物質を得た。トリエチレンアミン／メタノール／水（１：
２：１）を含む混合物を、上記チゴゲニンセロビ
オシドヘプタアセテート溶液に、定常撹拌下徐々
に加えた。混合物を一夜撹拌した。メチレンクロ
ライドを30℃で減圧留去した。水３リツトルを加
え、冷蔵庫に１ないし２時間放置した。その後、
混合物を400rpmで20分間遠心分離し、沈殿を室
温で乾燥し、破砕し、少量のメタノールおよび水
に溶かし、チルチング透析器で流水により３日間
透析した。得られる混合物を過し、室温で乾燥
し、微粉状に破砕し、ヘプタンで３日間ソツクス
レー抽出（ジヤケツト40゜）を行なつた。筒
（thimble）に残つたβ−チゴゲニンセロビオシ
ドを取出し、室温で２−３日乾燥してヘプタンを
除いた。この方法により、β−チゴゲニンセロビ
オシド30−40％を得た。 1′αおよび1′β−チゴゲニンセロビオシドの¹H−
NMRを、ブルカーWM300フーリエ変換NMRス
ペクトロメータにより、内部標準としてテトラメ
チルシランを用い、d₆−DMSO溶液で測定した。

【表】実施例５（試験例）ラツトにおけるコレステロール腸管吸収に対す
る合成グリコシドの効果この実施例は、チゴゲニンセロビオシドおよび
他の合成グリコシドで処理したラツトにおけるコ
レステロール腸管吸収の比較を示す。この実験に
用いた方法はマリナウ等、Am.J.Clin.Nutr.30巻
2061頁（1977年）に記載されている。（実験方法）４〔¹⁴C〕コレステロール２mgの丸薬をラツトに
胃内投与した。糞を72時間集め、ラベル中性ステ
ロイドの糞中排泄量を測定した。ラツトは、３つのグループ−に分けた。グループおよびでは、動物をラツト６匹の
サブグループに分けた。第１のサブグループは対
照とし、処理をしなかつた。第２および第３のサ
ブグループは、この発明の化合物または他の近縁
化合物で処理した。すなわち、グループおよび
では、ラツトをチゴゲニンセロビオシド、ジオ
スゲニンセロビオシド、チゴゲニングルコシド、
ジオスゲニングルコシドで処理した。表Ｂに要約する結果から、チゴゲニンセロビオ
シドが、構造的に類似した化合物であるジオスゲ
ニンセロビオシド、チゴゲニングルコシド、ジオ
スゲニングルコシドに較べて、より著しくコレス
テロールの腸管吸収を抑制することが確かめられ
た。チゴゲニンセロビオシドは、近縁ジオスゲニ
ンセロビオシドより有意に有効であつた。（グル
ープ、サブグループ２および３参照）。対照に
較べると、チゴゲニンセロビオシドはコレステロ
ール吸収をほぼ50％（有意度0.001）減少させた。
またチゴゲニンセロビオシドは、チゴゲニングル
コシドおよびジオスゲニングルコシドより有効で
あつた（グループ、サブグループ２および３参
照。またグループおよびを比較）。グループは、各12匹のサブグループを２つも
つ。チゴゲニンセロビオシドで処理したラツトの
コレステロール吸収抑制を、非処理対照のコレス
テロール吸収抑制と比較した。チゴゲニンセロビオシド処理でコレステロール
吸収が47％（N_p＝６）抑制されたグループと
同様、グループでチゴゲニンセロビオシド処理
でコレステロール吸収が41.5％（N_p＝12）抑制さ
れた。また、グループの実験ラツトのコレステ
ロール吸収は対照のコレステロール吸収の僅か53
％で、グループのコレステロール吸収は僅か58
％であつた。

【表】実施例６チゴゲニンセロビオシドβ−アノマーの製造セロビオースオクタアセテート10.2ｇ（15ミリ
当量）と12−エチレンジクロライド（モレキユラ
ーシーブ乾燥）150mlの混合物に、無水条件下で
４臭化チタン5.5ｇ（15ミリ当量）を移入した。
混合物を60−65℃の油浴で５時間撹拌加熱した。
混合物を氷浴で室温に冷やし、氷水50ml、冷飽和
NaHCO₃50mlで連続洗浄した。得られる洗浄混
合物をMgSO₄で乾燥し、過し、温水浴で濃縮
し、ロータリーエバポレータで真空濃縮した。固
体残渣11ｇを得た。この残渣にチゴゲニン2.9ｇ（7.3ミリ当量）、
アセトニトリル100mlおよびシアン化第２水銀7.6
ｇ（30ミリ当量）を加え、混合物をN₂中60−65
℃の油浴で激しく撹拌しつつ1.5時間加熱し（30
分後に混合物は均質になる）、その後一夜加熱し
た。反応混合物からロータリーエバポレータで溶
媒を除き、得られる物質をジクロロメタンに溶か
し、不溶物を去した。有機溶液を飽和
KHCO₃30％KI溶液および水で連続洗浄した。水
抽出液を合わせてジクロロメタンで逆抽出した。
有機層を合わせ、MgSO₄で乾燥し、濃縮した。
β−チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテートの
結晶4.9ｇが、エタノールからの再結晶で得られ
た。エタノールから再結晶し、β−アノマーの結
晶3.9ｇが得られた。得られたβ−チゴゲニンセロビオシドヘプタア
セテートは、実施例２の(2)にしたがつて加水分解
し、実施例３の第１表と基本的に同一のNMRス
ペクトルを示すβ−チゴゲニンセロビオシドを得
た。実施例７チゴゲニンセロビオシドα−アノマーの製造。この反応は、レミユー等、J.Am.Chem.Soc.97
巻4056頁（1975年）の変法である。ブロモセロビオースヘプタアセテート（実施例
６で製造）10.7ｇ（15ミリモル）、ジイソプロピ
ルアミン1.95ｇ（15ミリモル）、テトラエチルア
ンモニウムブロマイド3.15ｇ（15ミリモル）およ
びチゴゲニン3.0ｇ（7.5ミリモル）のメチレンク
ロライド100ml中混合物を、室温で２日間撹拌し
た。次いで反応混合物を水および1N−HClで続
けて洗い、硫酸ナトリウムで乾燥した。過およ
び溶媒の減圧留去後、残留物をエタノールから再
結晶して精製し、チゴゲニンセロビオシドヘプタ
アセテートのα−アノマーを得、次いでこれを実
施例２の方法で加水分解し、実施例３の第１表と
基本的に同一のNMRスペクトルを示すチゴゲニ
ンセロビオシドのα−アノマーを得た。実施例８チゴゲニンセロビオシドヘプタアセテートのα
およびβ−アノマーの分離。 αおよびβ−アノマー混合物を、各異性体の等
モル混合またはチゴゲニンセロビオシドαおよび
β−アノマー混合物と適当なアセチル化剤の反応
で製造した。チゴゲニンセロビオシドヘプタアセ
テートのαおよびβ−アノマーは、シリカゲル上
で酢酸エチルとヘキサンの60：40混合物を用いる
マイクロTLC法で分離した。アノマー分離後、
TLC板から各アノマーを抽出した。

Claims

【特許請求の範囲】１式(A) （式中、Ｒは水素または−Ｃ(O)CH₃を意味す
る）で示される化合物。２Ｒが水素、化合物がα−アノマーである、す
なわちα−チゴゲニンセロビオシドである、特許
請求の範囲第１項記載の化合物。３Ｒが水素、化合物がβ−アノマーである、す
なわちβ−チゴゲニンセロビオシドである、特許
請求の範囲第２項記載の化合物。４Ｒが−Ｃ(O)CH₃、化合物がα−アノマーであ
る、すなわちα−チゴゲニンセロビオシドヘプタ
アテートである、特許請求の範囲第１項記載の化
合物。５Ｒが−Ｃ(O)CH₃、化合物がβ−アノマーであ
る、すなわちβ−チゴゲニンセロビオシドヘプタ
アセテートである、特許請求の範囲第１項記載の
化合物。６式(A) （式中、Ｒは水素または−Ｃ(O)CH₃を意味す
る）で示される化合物の医薬有効量と製薬上許容
される担体からなる、哺乳類のコレステロール吸
収阻害処置用医薬組成物。７式(A)においてＲが水素、化合物がα−アノマ
ーである、すなわちα−チゴゲニンセロビオシド
である、特許請求の範囲第６項記載の化合物。８式(A)においてＲが水素、化合物がβ−アノマ
ーである、すなわちβ−チゴゲニンセロビオシド
である、特許請求の範囲第６項記載の組成物。９式(A) （式中、Ｒは水素を意味する）で示される化合物のαおよびβ−アノマー混合物
または個々のα−アノマー−もしくはβ−アノマ
ーの製造法において、式(A)（式中、Ｒは−Ｃ(O)
CH₃を意味する）で示される化合物を有機溶媒中
で水と反応させて式(A)（式中、Ｒは水素を意味す
る）で示される化合物を生成させる方法。１０式(A) （式中、Ｒは−Ｃ(O)CH₃を意味する）で示される化合物のαおよびβ−アノマー混合物
または個々のα−アノマー−もしくはβ−アノマ
ーの製造法において、セロビオースオクタアセテ
ートまたはブロモセロビオースヘプタアセテート
を有機溶媒中金属塩の存在下にチゴゲニンと反応
させる方法。