JPH0457671B2 - - Google Patents

Description

請求の範囲 １ 一般式 （式中、R₁、R₂およびR₃は水素原子、炭素原
子数１から約４のアシル基およびベンゾイル基か
らなる群から選ばれ、R₄およびR₅はそれぞれ水
素原子を表わすか互に結合して炭素原子と炭素原
子の二重結合を形成する。） を有する化合物。 ２ R₁、R₂およびR₃は水素原子であり、R₄およ
びR₅が水素原子である特許請求の範囲第１項記
載の化合物。 ３ 結晶系である特許請求の範囲第１項記載の化
合物。 ４ R₁、R₂およびR₃は水素原子であり、R₄およ
びR₅が互に結合して炭素原子と炭素原子の二重
結合を形成する特許請求の範囲第１項記載の化合
物。 ５ △²²結合がＥ配置中にある特許請求の範囲第
１項記載の化合物。 技術分野 本発明は新規なビタミンＤ誘導体に関する。 より詳しくは、本発明は26−ホモビタミン類に
関する。 さらにより詳しくは、本発明はヒドロキシル化
された26−ホモビタミン類に関する。 ビタミンＤは動物および人間のカルシウムとリ
ンの代謝を調整するものであることが知られてお
り、現在ではビタミンＤの生物学的効力はそれの
生体内でのヒドロキシル化された誘導体への代謝
転化に依存することが確認されている。すなわ
ち、ビタミンD₃は肝臓において、25−ヒドロキ
シビタミンD₃に生体内ヒドロキシル化され、次
に腎臓において1α，25−ジヒドロキシビタミン
D₃に変えられる。現在ビタミンＤの循環ホルモ
ン形であると認められているのは後者の化合物で
ある。 これらの形のビタミンＤは内臓におけるカルシ
ウムとリンの輸送および骨の流通
（mobilization）とミネラル化を促進するという
生物学的活性のために、種種の骨の疾患の治療用
として著しく適した重要な製薬製品となつてい
る。 背景技術 ビタミンＤ誘導体、それらの製造方法およびそ
の用途については特許および他の文献において多
くの引照により議論されている。例えば米国特許
第3565924号では25−ヒドロキシコレカルシフエ
ロールを、米国特許第3697559号では１，25−ジ
ヒドロキシコレカルシフエロールを、米国特許第
3741996号では1α−ヒドロキシコレカルシフエロ
ールを、米国特許第3786062号では22−デヒドロ
−25−ヒドロキシコレカルシフエロールを、米国
特許第3880894号では１，25−ジヒドロキシエル
ゴカルシフエロールを、米国特許第4201881号で
は24，24−ジフルオロ−1α，25−ジヒドロキシ
コレカルシフエロールを、米国特許第4196133号
では24，24−ジフルオロ−1α，25−ジヒドロキ
シコレカルシフエロールをそれぞれとりあげてい
る。 発明の開示 すぐれたビタミンＤ様の活性を示し、そのため
ビタミンD₃ならびにその種々の誘導体の代替品
として容易に既知の用途、例えば上皮小体機能減
退症、骨異栄養症、骨軟化症および骨粗しよう症
などカルシウムおよびリンの不均衡を表わす種種
の病状の治療用に使用することが可能な新しいビ
タミンD₃誘導体が見いだされた。 これらの誘導体は26−ホモビタミン類であり、
特に1α−25−ジヒドロキシ−22E−デヒドロ−26
−ホモビタミンD₃および1α，25−ジヒドロキシ
−26−ホモビタミンD₃である。 本発明の化合物は都合よく次式により表わすこ
とができる。 （式中、R₁R₂およびR₃は水素原子、炭素原子
数が１から約４のアシル基およびベンゾイル基か
らなる群から選ばれ、R₄およびR₅はそれぞれ水
素原子を表わすかまたは共に結合して炭素と炭素
の二重結合を形成する。） 発明を実施するための最良の形態 本発明の化合物は以下に図式で示す工程および
その工程説明に従つて調製することができる。製
造工程の図式およびその詳細な説明においては、
同じ番号で同じ化合物を識別する。 以下に本発明の工程に従つて説明する。 1α，3β−ジメトキシメトキシ−23，24−ジノ
ルコル−５−エン−22−アールをビニルマグネシ
ウムブロミドと反応させてアリルアルコール(1)に
した。このアルコールをトリメチルオルソ−ｎ−
ブチレートおよび触媒量のプロピオン酸との反応
によつてクライゼン（Clainsen）転位させて好収
率（97％）でエステル（２）を得た。化合物(2)を
ｎ−ブチルリチウムとTHFを用いる処理により
エノラート形に変え、次いで酸素処理した後、ト
リエチル亜リン酸エステルを用いる環元により分
子内のＣ−25位置にヒドロキシル基を導入した。
次に、この27−エステル（３）を順次対応のジオ
ールを得るための水素化アルミニウムリチウムを
用いる処理、メシレートにするためのメタンスル
ホニルクロリドとピリジンを用いる処理および水
素化アルミニウムリチウムを用いる処理に付して
アルコール（４）に変えた。 酸を用いる処理によるMOM基の除去で（22E，
25ξ）−1α，3β，25−トリヒドロキシ−26−ホモ
−コレスタ−５，22−ジエン５を得て、そのアセ
チル化によりジアセテート（６）を得た。（６）
のＮ−ブロモスクシンイミド、次いでテトラ−ｎ
−ブチルアンモニウムフルオリドを用いるアリル
ブロム化により５，７，22−トリエン（７）を得
て、これを照射および加熱異性化処理して
（22E）−デヒドロキシ−ホモビタミンD₃（８）を
得た。 （25ξ）−1α，25−ジヒドロキシ−26−ホモビ
タミンD₃(11)は５，22−ジエン（６）を選択的水
素化によつて５−エン（９）とし、これを５，７
−ジエン(10)に変え、次いで上述のように26−ホモ
ビタミン(11)にすることにより得た。 工程の詳細な説明 下記の本発明の工程の詳細な説明において融点
は熱−ステージ顕微鏡を用いて測定し、未補正の
ままで示した。 ¹H−NMRスペクトルは特にこ
とわらない限り日立Ｒ−24A（60MHz）により内
部規準としてMe₄Siを用いてCDCl₃中で求めた。
質量スペクトルは島津OP−1000質量分光計によ
り70eVで求めた。UVスペクトルは島津UV−
200ダブルビーム分光光度計によりエタノール溶
液中で求めた。カラムクロマトグラフイーはシリ
カゲル（E.メルク社、キーゼルゲル60，70−230
メツシユ）を用いて行つた。分取薄層クロマトグ
ラフイーはシリカゲル（E.メルク社、キーゼルゲ
ル60F₂₅₄、厚さ0.25mm）をプレコートしたプレー
ト上で行つた。常法による仕上げとは水を用いる
希釈、カツコ内で示した有機溶媒を用いる抽出、
中性になるまでの抽出物の洗浄、無水硫酸マグネ
シウムを用いる乾燥、ろ過および減圧下での溶媒
の除去を指す。略語として、THP−テトラヒド
ロピラニル、THF−テトラヒロフラン、エーテ
ル−ジメチルエーテル、MeOH−メタノール、
MOM−メトキシメチル、LDA−リチウムジイ
ソブロピルアミドを用いた。温度は℃である。 （22E，25）−1α，3β−ジメトキシメチルオキ
シ−26−ホモコレスター５，22−ジエン−27−
オイツク酸メチルエステル（２） トルエン（６ml）中のアリル型アルコール
（１）（390mg、0.844ミリモル）、トリメチルオル
ソ−ｎ−ブチレート（0.7ml）およびプロピオン
酸（３滴）をアルゴン雰囲気中で２時間還流処理
した。溶媒の減圧下での除去により得た粗生成物
をシリカゲル（20ｇ）のカラムにかけ、ヘキサン
−酢酸エチル（５：１）を用いる溶離によりエス
テル（２）（446mg、97％）を油状物として得た。
¹H−NMRσ：0.68（3H，ｓ，18−H₃），0.88
（3H，ｔ，Ｊ＝７Hz，−CH₂CＨ ₃），0.98（3H，
ｄ，Ｊ＝６Hz，21−H₃）β.03（3H，ｓ，19−
H₃），3.38（3H，ｓ，−OCH₃），3.43（3H，ｓ，−
OCH₃），3.68（3H，ｓ，−CO₂CH₃），3.76（1H，
ｍ，1β−Ｈ），4.68（2H，ｓ，3β−Ｏ−CH₂−Ｏ
−），4.69（2H，ABq，Ｊ＝７Hz，△AB＝11Hz，
1α−Ｏ−CH₂−Ｏ），5.27（2H，ｍ，22−および
23−Ｈ），および5.56（1H，ｍ，６−Ｈ）． （22E，25ξ）−1α，3β−ジメトキシメチルオキ
シ−25−ヒドロキシ−26−ホモコレスタ−５，
22−ジエン−27−オイツク酸メチルエステル
（３） LDAの溶液（ジイソプロピルアミンを用いて
調製、0.13ml、0.929ミリモル）、1.56モルのｎ−
ブチルリチウム（0.59ml）およびTHF（２ml）へ
THF（５ml）に溶解したエステル（２）（437mg、
0.800ミリモル）を添加し、その混合物をアルゴ
ン雰囲気下、−78℃で30分間撹拌した。この溶液
中へ酸素を気泡で吹きこみ、次いでトリエチレン
亜リン酸エステル（0.14ml、0.817ミリモル）を
添加した。常法による仕上げ（抽出はエーテル）
により得た粗生成物をシリカゲル（25ｇ）のカラ
ムにかけた。ヘキサン−酢酸エチル（５：１）を
用いる溶離によりヒドロキシエステル（３）（303
mg、67％）を油状物として得た。 ¹H−NMRσ：
0.68（3H，ｓ，18−H₃），0.85（3H，ｔ，Ｊ＝７
Hz，−CH₂CＨ ₃），0.98（3H，ｄ，Ｊ＝６Hz，21−
H₃）1.02（3H，ｓ，19−H₃），3.08（1H，bs，
W_1/2＝３Hz，−OH），3.38（3H，ｓ，−OCH₃），
3.42（3H，ｓ，−OCH₃），3.76（3H，ｓ，−
CO₂CH₃），4.68（2H，ｓ，3β−Ｏ−CH₂−Ｏ−），
4.68（2H，ABq，Ｊ＝７Hz，△AB＝11Hz，1α−
Ｏ−CH₂−Ｏ−），5.32（2H，ｍ，22−Ｈおよび
23−Ｈ），5.55（1H，ｍ，６−Ｈ）． （22E，25ξ）−1α，3β−ジメトキシメチルオキ
シ−25−ヒドロキシ−26−ホモコレスター５，
22−ジエン(4) ヒドロキシエステル（３）（294mg、0.539ミリ
モル）のTHF（５ml）溶液中へ水素化リチウムア
ルミニウム（20mg、0.526ミリモル）を添加し、
混合物を室温で30分間撹拌した。常法による仕上
げ（抽出はエーテル）により粗ジオールを得た。
これをメタンスルホニルクロリド（0.04ml、
0.517ミリモル）およびピリジン（15ml）を用い
室温で30分間処理した。常法による仕上げ（抽出
はエーテル）により粗メシラートを得た。粗メシ
ラートのTHF（５ml）溶液へ水素化アルミニウム
リチウム（20mg、0.526ミリモル）を添加し、混
合物を30分間還流処理した。常法による仕上げ
（抽出はエーテル）により得た粗生成物をシリカ
ゲル（20ｇ）カラムにかけた。ヘキサン−酢酸エ
チル（５：１）を用いる溶離によりアルコール(4)
（190mg、70％）を油状物として得た。 ¹H−
NMRσ：0.71（3H，ｓ，18−H₃），0.90（3H，ｔ，
Ｊ＝７Hz，−CH₂CＨ ₃），1.03（3H，ｄ，Ｊ＝６
Hz，21−H₃）1.03（3H，ｓ，19−H₃），1.12（3H，
ｓ，27−H₃），3.36（3H，ｓ，−OCH₃），3.40
（3H，ｓ，−OCH₃），3.74（1H，ｍ，1β−Ｈ），
4.66（2H，ｓ，3β−Ｏ−CH₂−Ｏ−），4.67（2H，
ABq，Ｊ＝７Hz，△AB＝11Hz，1α−Ｏ−CH₂−
Ｏ），5.35（2H，ｍ，22−Ｈおよび23−Ｈ）およ
び5.54（1H，ｍ，６−Ｈ）． （22E，25ξ）−1α，3β，25−トリヒドロキシ−
26−ホモコレスター５，22−ジエン（５） ジメトキシメチルエステル（４）（181mg、
0.349ミリモル）のTHF（５ml）溶液を6N−HCl
（１ml）を用い50℃で1.5時間処理した。常法によ
る仕上げ（抽出は酢酸エチル）により得た粗生成
物をシリカゲル（15ｇ）のカラムにかけた。ヘキ
サン−酢酸エチル（１：２）を用いる溶離により
トリオール（５）（147ｇ、98％）を得た。融点85
〜87％（ヘキサン−ジクロロメタン）。 ¹H−
NMRσ：0.69（3H，ｓ，18−H₃），0.89（3H，ｔ，
Ｊ＝７Hz，−CH₂CＨ ₃），1.02（3H，ｓ，19−H₃），
1.13（3H，ｓ，27−H₃），3.85（1H，ｍ，1β−
Ｈ），3.98（1H，ｍ，3α−Ｈ），5.40（2H，ｍ，22
−Ｈおよび23−Ｈ），および5.60（1H，ｍ，６−
Ｈ）． （22E，25ξ）−1α，3β，25−ジアセトキシ−25
−ヒドロキシ−26−ホモコレスター５，22−ジ
エン（６） トリオール（５）（100mg、0.233ミリモル）の
ピリジン（１ml）溶液を無水酢酸（１ml）を用い
て室温で15時間処理した。常法による仕上げ（抽
出は酢酸エチル）により得た粗生成物をシリカゲ
ル（10ｇ）のカラムにかけた。ヘキサン−酢酸エ
チル（５：１）を用いる溶離によりジアセテート
(6)（101mg、85％）を無定形固体として得た。
¹H−NMRσ：0.68（3H，ｓ，18−H₃），0.88（3H，
ｔ，Ｊ＝７Hz，−CH₂CＨ ₃），0.98（3H，ｄ，Ｊ＝
６Hz，21−H₃），1.08（3H，ｓ，19＝H₃），1.12
（3H，ｓ，27−H₃），2.03（3H，ｓ，アセチル），
2.06（3H，ｓ，アセチル），4.98（1H，ｍ，3β−
Ｈ），5.06（1H，ｍ，1β−Ｈ），5.37（2H，ｍ，22
−Ｈおよび23−Ｈ）および5.53（1H，ｍ，６−
Ｈ）． （22E，25）−1α，3β−25−トリヒドロキシ−
26−ホモコレスター５，７，22−トリエン
（７） ５，22−ジエン（６）（38mg、0.0739ミリモル）
とＮ−ブロモスクシンイミド（19mg、0.107ミリ
モル）の四塩化炭素（３ml）溶液をアルゴン雰囲
気下で20分間還流処理した。０℃に冷却した後、
得られた沈殿物をろ別した。ろ液を40℃以下で濃
縮し、残留物を得た。この残留物のTHF（５ml）
溶液を触媒量のテトラ−ｎ−ブチルアンモニウム
ブロミドを用いて室温で50分間処理した。次に、
混合物をテトラ−ｎ−ブチルアンモニウムフルオ
ライドのTHF（0.3ml、0.3ミリモル）溶液を用い
て室温で30分間処理した。常法による仕上げ（抽
出は酢酸エチル）により粗トリエンを得た。この
トリエンのTHF（５ml）溶液を５％KOH−
MeOH（４ml）を用いて室温で14時間処理した。
常法による仕上げ（抽出は酢酸エチル）により得
た粗生成物を分取薄層クロマトグラフイー（ベン
ゼン−酢酸エチル、１：1.6回展開）にかけた。
Rf値0.45のバンド部分をかきとり酢酸エチルを用
い溶離した。溶媒除去により、５，７，22−トリ
エン（７）（8.7mg、40％）を得た。UVλ^EtOH _nax：
293，282，271nm。 （22E，25ξ）−1α，25−ジヒドロキシ−22−デ
ヒドロ−26−ホモビタミンD₃（８） トリエン（７）（4.4mg、0.0103ミリモル）のベ
ンゼン（90ml）、エタノール（40ml）溶液をアル
ゴン雰囲気下、０℃においてビコール（Vycor）
フイルターを通して中圧水銀ランプを照射した。
反応生成物をアルゴン雰囲気下で１時間還流処理
した。減圧下での溶媒除去により得た粗生成物を
分取薄層クロマトグラフイー（ベンゼン−酢酸エ
チル、１：1.6回展開）にかけた。Rf値0.49のバ
ンド部分をかきとり、酢酸エチルを用いて溶離し
た。溶媒除去によりビタミンD₃類似体（８）
（0.91mg、21％）を得た。UVλ^EtOH _nax：265nm，
λ^EtOH _nax：282nm，MSm／ｚ：428（M⁺），410，392，
374，338，320，287，269，251，141，134，123，
73. ¹H−NMR（400MHz）σ：0.56（3H，ｓ，18
−H₃），0.91（3H，ｔ，Ｊ＝7.6Hz，−CH₂CＨ ₃），
1.04（3H，ｄ，Ｊ＝6.8Hz，21−H₃）1.13（3H，
ｓ，27−H₃），4.23（1H，ｍ，W_1/2＝18.4Hz，3α
−Ｈ），4.43（1H，ｍ，W_1/2＝16.9Hz，1β−Ｈ），
5.00（AH，bs，W_1/2＝3.2Hz，19−Ｈ），5.32（1H，
bs，W_1/2＝3.2Hz，19−Ｈ），5.37（2H，ｍ，22−
Ｈおよび23−Ｈ），6.02（1H，Ｊ−11.5Hz，７−
Ｈ），および6.38（1H，ｄ，Ｊ＝11.5Hz，６−Ｈ）． （25ξ）−1α，3β−ジアセトキシ−25−ヒドロ
キシ−26−ホモコレスタ−５−エン（９） ５，22−ジエン（６）（35mg，0.0681ミリモル）
と10％Pd−Ｃ（４mg）の酢酸エチル（４ml）中混
合物を水素雰囲気下、室温において３時間撹拌し
た。Pd触媒をろ別し、ろ液を残留物が得られる
まで濃縮し、残留物を分取薄層クロマトグラフイ
ー（ヘキサン−酢酸エチル、２：1.1回展開）に
かけた。Rf値0.46のバンド部分をかきとつた。酢
酸エチルを用いる溶離により５−エン（９）（30
mg、85％）を無定形固体として得た。 ¹H−
NMRσ：0.66（3H，ｓ，18−H₃），0.88（3H，ｔ，
Ｊ＝７Hz，−CH₂CＨ ₃），1.08（3H，ｓ，19−H₃），
1.12（3H，ｓ，27−H₃），2.02（3H，ｓ，アセチ
ル），2.04（3H，ｓ，アセチル），4.97（1H，ｍ，
3α−Ｈ），5.04（1H，ｍ，1β−Ｈ），および5.51
（1H，ｍ，６−Ｈ）． （25ξ）−1α，3β，25−トリヒドロキシ−26−
ホモコレスター５，７−ジエン(10) ５−エン（22mg、0.0426ミリモル）を（７）に
記載したとの同様にして５，７−ジエン(10)（6.7
mg、37％）に転化させた。UVλ^EtOH _nax293，282，
271nm。 実施例 １ （25ξ）−1α，25−ジヒドロキシ−26−ホモビ
タミンD₃(11) ジエン(10)（4.8mg、0.0112ミリモル）を（８）
に記載したのと同様にしてビタミンD₃類似体(11)
（1.3mg、27％）に転化させた。UVλ^EtOH _nax：265nm、
λ^EtOH _nax：228nm、MSm／ｚ：430（M⁺）、412，394，
379，376，287，269，251，152，134，116，73，
55。 所望により、本発明の化合物は当業者周知の適
切な溶媒、例えばヘキサン、エーテル、アルコー
ルまたはそれらの混合物を用いる結晶化による結
晶形として容易に得ることができる。 生物学的活性 1α，25−（OH）₂−26−ホモD₃化合物の骨のカ
ルシウム流通活性 乳ばなれした雄のラツトをホルツマン社（ウイ
スコンシン州マデイソン）から購入し、これらに
スダら（ジヤーナル・オブ・ニユートリシヨン
100，1049，1970）の記載と同じ低カルシウム、
ビタミンＤ欠乏食餌および水を無制限に３週間与
えた。次に、これらのラツトを各６匹からなる４
群に分け、それぞれに0.05mlの95％エタノールに
溶解した1α，25−（OH）₂−26−ホモ−D₃、1α，
25−（OH）₂−（22E）△²²−26−ホモ−D₃または
1α，25−（OH）₂D₃を犠性にする７時間前に頚静
脈注射により与えた。コントロールのラツトに
0.05mlの95％エタノールビヒクルを犠性にする７
時間前同様にして与えた。これらのラツトは斬首
により殺害し、血液を集めて遠心分離により血清
を得た。血清中のカルシウム濃度を原子吸光分光
光度計（パーキン・エルマー社、214型）により
0.1％の塩化ランタン存在下で測定した。結果を
下表に示す。

【表】 ＊ 平均からの標準偏差
b)はP0.001でa)に対して有意の差が
ある。
上記のデータから、ビタミンＤ欠乏動物のビタ
ミンＤ応答系において本発明の化合物はビタミン
の循環ホルモン形である1α，25−ヒドロキシビ
タミンD₃と同じ活性を示したと結論することが
できる。 本発明の化合物はそのカルセミツク活性
（Calcemic activity）（血中カルシウム流通活性）
発揮を目的として無菌非経口溶液の形にして注射
または静脈注射により、経口薬の形にして消化器
管に、さらに坐薬または経皮薬として容易に投与
することができる。投与量としてはビタミンＤ様
の活性の生理学的カルシウム平衡応答特性を得る
には１日あたり0.1μｇから約2.5μｇが有効であ
り、維持量としては0.1μｇから約0.5μｇが適して
いる。 最近、1α，25−ジヒドロキシ−ビタミンD₃
（1α，25−（OH）₂D₃）およびその構造類似体であ
る1α−ヒドロキシビタミンD₃（1α−OH−D₃）が
上記のよく知られたカルセミツク活性に加えて強
力な抗ガン活性を示すことが発見された。特に、
上記の化合物は培養液中の白血病細胞ような悪性
人体細胞の非悪性大食細胞への分化を誘発するの
に有効であることおよびこれら化合物の投与によ
り白血病マウスの寿命が（コントロールに比較し
て）延び、かつ人間の白血病患者の状態が顕著に
改善されたことが示されて生体外の細胞への抗ガ
ン活性を生体内における有益な効果と関係ずけ得
ることが明らかにされた。これらの観察に基いて
1α−ヒドロキシル化ビタミンＤ化合物を白血病
の治療薬とすることが提示されている（スダら米
国特許第4391802号）。 しかし、スダら（同上特許）によつて試験され
たこれら既知の1α−ヒドロキシビタミンＤ化合
物、すなわち1α−ヒドロキシビタミンD₃（1α−
OH−D₃）および1α，25−ジヒドロキシビタミン
D₃（1α，25−（OH）₂D₃）は白血病細胞の分化を誘
発するのに実に高度に有効であるけれども、これ
らを抗白血病薬剤として使用するのに重大な欠点
となるのはその固有の従つて不可避の性質である
高度のカルセミツク活性である。すなわち、現在
までに知られている最も強力なビタミン誘導体抗
白血病剤である1α，25−（OH）₂D₃はまた最も強
力なカルセミツク剤であり、かつ1α−OH−D₃の
抗白血病活性は同様にその高カルセミツク活性に
相関している。これらの化合物を抗白血病剤とし
て有効な投薬水準（例えば、スダらの特許の例に
おいて特定されている1μｇ／日）で投与するこ
とは必然的に高度の大いに過剰のカルシウム水準
をまねき、それに伴つて重大な医薬併発症が特に
既に衰弱病にかかつた患者に生じるであろう。既
知の1α−ヒドロキシビタミンＤ化合物はカルシ
ウム水準を上げるのに高度の潜在的能力をもつて
いるので、その抗白血病剤としての使用は阻止す
べきである。 悪性の病状の処置として好ましい方法はカルセ
ミツク活性度に対する抗白血病活性度の比率の高
いことを特徴とする化合物、すなわち血清カルシ
ウム水準を高める能力に比べて白血病細胞の分化
を誘発させる能力が高い化合物を投与することで
あることは明らかである。 本発明の化合物もまた悪性細胞の非悪性細胞へ
の分化を誘発する点、すなわち、白血病細胞の分
化として測定される抗新性細胞活性の点において
好ましく活性であるが、カルシウム流通効果にお
いては1α，25−ジヒドロキシビタミンD₃ほど活
性ではない。本発明の新規な側鎖ホモビタミンＤ
は、その独特かつ予期されなかつた特性の組合せ
の故に白血病および他の新生細胞の治療用として
すぐれた好ましい薬剤となるものである。 培養液中で成育した人間の前骨髄白血病細胞
（HL−60細胞）に投与すると本発明の側鎖ホモ
ビタミンＤはこれら細胞の大食細胞（単球細胞）
への分化を誘発する。分化活性を測定する数種の
標準効力検定においてこれらの化合物は現在まで
に知られている最も活性なビタミンＤ誘導体であ
る1α，25−（OH）₂D₃よりも効果的であることが
示された。これらの検定は下記のようにして行つ
た。 ホモビタミンＤの分化活性効力検定 人間の前骨髄白血病細胞線（HL−60）を10％
（容量比）熱不活性化子牛胎児血清、100μｇ／ml
ペニシリン、100μｇ／mlストレプトマイシンお
よび0.25μｇ／mlフインジゾーンを追加した
RPMI1640培地（ギブゴ社、ニユーヨーク州グラ
ンドアイランド）からなる懸濁培養液中に保持し
た。細胞は５％CO₂を有する加湿気中で培養し
た。細胞の生育性（Viability）は標準検定法、
すなわちトリパンブルー染色排除により検定し
た。形態学的な評価はライト（Wright）着色ス
ライドプレパラート上で行つた。 細胞の種つけは組織培養血中の培地10mlに1.5
〜２×10⁵細胞数／mlになるよううに行つた。20
時間後、２枚ずつの皿を下記の表に示す種々の濃
度の各試験化合物を用いて処理した。化合物は
100％エタノールの溶液として添加したが、各培
養皿の全エタノール濃度が0.2％以上にならない
ようにした。コントロールの培養には同じ濃度の
エタノール処理を行つた。試験化合物を用いる培
養４日（96時間）後に、細胞をそれぞれの培養皿
から取り出し、細胞数および生育性を測定した。
試験したビタミンＤ誘導体により誘発された分化
の程度は単核細胞のフアンコナル（Funchonal）
および酸素マーカー特性を示す細胞の％で示し
た。検定に用いた２種のマーカーはａ）細胞の死
亡酵母を食菌する能力およびｂ）ホルボールエス
テルにより刺激された時の細胞のスーパーオキシ
ドを作る（ニトロテトラゾリウムブルーを還元す
る）能力であつた。 ａ 分化活性の食菌性効力検定： 取り出した細胞はプレパラート中に２×10⁶細
胞数／mlの細胞を含むように20％のAB血清と20
％子牛胎児血清を含有するRPMI培地中に再懸濁
させた。次に、この懸濁液0.5ml（細胞数10⁶）に
トリパンブルーで着色した加熱殺菌、サツカロミ
ケス、セレビシア菌（ビール酵母菌）細胞の懸濁
液（リン酸塩緩衡塩水中）0.5ml（細胞数１×
10⁸）を添加した。この混合物を37℃で１時間培
養後食細胞の数を（細胞内で明らかなトリパンブ
ルーで染色された酵母により）数え、これを可視
全細胞に対する％で表わした。この「食細胞％」
が試験化合物により誘発された分化を％で示すも
のである。結果は第２表にまとめて示す。

【表】 第２表の結果はホモ化合物が１，25（OH）₂D₃
よりも有意に強力であることを示す。すべての濃
度において、ホモ化合物は現在までに知られてい
る最も活性の大きい化合物である。1α，25−
（OH）₂D₃よりも大きい白血病細胞の分化率を達
成している。例えば、10^-8モル濃度においてホモ
化合物の分化率は70％に達しているのに対し、同
濃度の１，25−（OH）₂D₃は分化された細胞が約
47％でしかない。50％の分化率に達するのにホモ
化合物は１×10^-9モルの濃度を要するが、1α，25
−（OH）₂D₃は約１×10^-8モルの濃度を要する。
すなわち、分化能力は約10倍である。 ｂ 分化活性のNBT−還元効力検定： この検定は単球細胞様の白血病細胞が有するホ
ルボールエステルにより刺激された時のニトロブ
ルーテトラゾリウム（NBT）試薬を黒青色の沈
殿物（フオルマザン）に還元する能力に依存する
ものである。検定はエンら（ジヤーナル．オブ．
ザ．セルラー．フイジオロジー118、277（1984））
により示された一般的な方法によつて行つた。細
胞は上記のように取り出し、RPMI培地中に懸濁
させ、この懸濁液（約1.4×10⁶細胞数／mlを含
有）の0.2mlにニトロブルーテトラゾリウム
（NBT）試薬液0.2mlを添加した。（NBT試薬液
は50mgのニトロブルーテトラゾリウムを含有する
リン酸塩緩衡食塩水50mlに0.5mg／mlの4β−ホル
ボール−12−ミリスタート−13−アセトートを含
有するアセトン／水（１：１）溶液1μを添加
混合することにより調整した。）湯浴中に30分放
置後、分化した細胞（すなわち、NBT還元の指
標であるホルマザンブルー沈殿を示す細胞）を血
球計により計数し、可視の全細胞に対する％で示
した。この分析結果を第３表に示す。

【表】 第３表に示す結果もまた、試験したホモ化合物
が生体外で人間の骨髄白血病細胞の正常細胞への
分化を誘発する点で1α，25−（OH）₂D₃よりも活
性であることを確証している。このNBT還元検
定により測定される白血病細胞の60％分化を得る
にはホモ化合物では２×10^-9モルの濃度が必要で
あるのに対して1α，25−（OH）₂D₃により同じ分
化度を得るには3.5×10^-8モルが必要であり、両
者の能力には17倍の差がある。 以上のように、上記２種の効力検定はともにホ
モビタミン化合物の白血病細胞の分化を誘発する
能力が高いことを確認させるものである。その
上、上記の試験結果はこれらホモビタミンＤ化合
物は分化活性度において1α，25−（OH）₂D₃より
も強力であることを示している。 この分化活性度は人間の白血病細胞（HL−
60）の場合について示されているから、これらの
新規化合物を人間を対象とした白血病に対して有
効に使用し得ることは明らかである。同時に、こ
れらの化合物は高いカルセミツク活性を示さず、
その活性度は1α，25−（OH）₂D₃とほぼ同じであ
る。このように、これらホモビタミンＤ化合物は
カルセミツク活性に対する抗新生細胞力の比率が
高いことで特徴づけられる。この新規かつ望まし
い生物学的性質という長所によつてこれら側鎖ホ
モ化合物は悪性の病気のすぐれた治療剤として機
能するであろう。 人間の白血病の治療には、本発明のホモビタミ
ンＤ化合物は白血病細胞の大食細胞への分化を誘
発するのに十分な投与量で人体に投与される。適
切な投与量は１日あたり0.2μｇから5μｇである
が、投与量は当業者周知のように病状もしくは応
答性または人体の状態により調整することができ
ると理解すべきである。 治療を目的とした化合物の投与薬形態は当業者
周知の無毒性で製薬上許容される担体と組合わせ
で調整することができる。それらの担体は固体で
も液体でもよく、例えば、コーンスターチ、乳
糖、しよ糖、落果生油、オリーブ油、ごま油およ
び水をあげることができる。固体の担体を使用す
る場合、本発明の化合物は錠剤、カプセル、粉
末、トローチまたはロレンジの形にすることがで
きる。もし液体の担体を使用する場合は軟ゼラチ
ンカプセル、シロツプまたは懸濁液、乳濁液また
は溶液を投与薬の形態とすることができる。ま
た、投与薬形態として保恒剤、安定剤、加湿剤、
乳化剤、溶解促進剤などの補助剤を含有させるこ
ともできる。また、治療上有効な他の物質を含有
することもできる。 投与量範囲を示したけれども、それぞれの患者
に投与すべき投与量そのものは治療すべきそれぞ
れの病状、それぞれ目標とされる最終結果、患者
の肉体的サイズならびにこの種薬剤を治療に用い
る際当業者周知のその他の因子に応じて変えられ
ると理解すべきである。 本発明の化合物は適切な無菌溶液の注射、静脈
注射または消火管を経る経口投薬の形で有利に投
与することができる。

【特許請求の範囲】

１ 次式 〔式中、Ｒは水素、または炭素原子１から６個ま
でを有する低級アルキルを示し；R₁は水素、ビ
ニール、または炭素原子１から４個までを有する
低級アルキルを示し、そして波線はＲまたはＳ−
配置を示し；R₂，R₃およびR₄は水素、または炭
素原子１から４個までを有する低級アルキルであ
り、あるいはR₂およびR₃は炭素Ｙと一緒になつ
て炭素原子４から６個までを有するシクロアルケ
ニルを形成し、あるいはR₃およびR₄は炭素Ｘお
よびＹと一緒になつて炭素原子４から６個までを
有するシクロアルケニルを形成する。〕の化合物。 ２ 次式