JPH0458881A - アルスロバクター・エスピーｋ―１ - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 〔産業上の利用分野〕 本発明は、アルスロバクター・エスピー（Ａｒｔｈｒ。

ｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、）　Ｋ　−１に関し、さらに詳細
には受容体特異性が広く転移活性の強いβ−フラクトフ
ラノシダーゼ産生能を有するアルスロバクター・エスピ
ー　Ｋ−１に関する。

〔従来の技術、発明が解決しようとする課題〕近年、健
康志向の増大にともない、グルコシル基あるいはフラク
トシル基転移酵素を用いた種々の生理活性を有するオリ
ゴ糖、有用配糖体の合成等の研究か盛んに行なわれてい
る。カップリングシュゴー６．フラクトオリゴ糖、パラ
チノース。

α−グルコシルステビオサイドなとか虫歯にならない、
またビフィズス菌増殖因子等の性質をもつものとして実
用化された例である。

現在、フラクトシル基転移酵素としてはバチルス・ズブ
チリス（Ｂａｃｉ　ｆｌｕｓ　５ｕｂｔｉｌｉｓ）の生
産するレバンシュクラーゼおよびアスペルギルス・ニガ
シリウム−１スピー（Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ、
）Ｋ−２５などかびの生産するβ−フラクトフラノシダ
ーゼが知られている。このうちレバンシュクラーゼの糖
転移作用を利用して合成されるキシロシルフラクトシド
、イソマルトシルフラクトシドは抗う触性の性質を有し
、さらにラクトシルフラクトシドはビフィズス菌増殖因
子としての活性を有していることより、これらのオリゴ
糖は有用な機能性糖質として実用化される可能性を秘め
ている。しかし、これらのオリゴ糖の生産に用いられて
いるレバンシュクラーゼはショ糖によって誘導されるた
め、培地にショ糖の添加か不可欠であり、このため培養
液中にレバンを作り粘度か高くなるため扱いにくい。ま
た、酵素の生産性も低く、さらに耐熱性が低いなどの問
題点か指摘されている。一方、従来のかびの生産するβ
−フラクトフラノシダーゼは菌体内酵素であり、また受
容体特異性も狭い。

これらの酵素はショ糖によく転移するため、受容体とし
て他の糖を加えてもショ糖に転移しケスドース類を生成
してしまい目的とするヘテロオリコ糖の生成率を低下さ
せてしまうという欠点を持っている。

〔課題を解決するための手段〕

本発明者らは、上記の課題を解決するためショ糖からよ
り付加価値の高い糖質を合成し得る耐熱性の高い酵素を
菌体外に生産する微生物を検索してきた。その結果、ア
ルスロバクタ−属に属する微生物を栄養培地で培養する
ことにより目的とする受容体特異性の幅広い、かつ糖転
移活性の強いβ−フラクトフラノシダーゼを菌体外に生
産することを見出し、本発明を完成するに至った。

すなわち本発明は、４１℃で生育し、澱粉を加水分解せ
ず、硝酸塩を還元しない、フラクトースから酸を生成し
、グルコースおよびマルトースから酸の生成が微弱であ
る、細胞壁の主要ジアミノ酸かりジンであり、ＧＣ含量
が７３．２〜７４．９ｍｏｌ％であるアルスロバクター
・エスピー・Ｋ−１に関する。

上記特性を有する本菌は、５％シヨ糖、ｏ、３％Ｎ　ａ
　ＮＯ３，０，１％に２ＨＰＯ，，０，０５％ＭｇＳＯ
４−７Ｈ２０，０，０２％Ｍｎ　Ｃｌ　２”４８２０か
らなる培地に少量の土壌を加え、３０℃で２〜３日培養
することによって得られ、上記培地を含む寒天培地上で
本菌を単離した。

以下にアルスロバクター・エスピー・Ｋ−１の菌学的性
質を記載する。

■　形態学的性質 ａ　細胞形態 肉汁寒天培地では２４時間培養する間に若い細胞ては桿
状で大きさは０．３〜０．５　Ｘｏ、　６〜６μｍであ
り、古い細胞では球状（０，３〜０．５μｍ）も存在し
、生育段階により変化する。

ｂ　多形性 肉汁寒天培地ではＴ字型、Ｙ字型の細胞を観察すること
ができる。

Ｃ運動性、鞭毛 鞭毛はなく、運動性も示さない。

ｄ　胞子 胞子は形成しない。

ｅ　グラム染色 若い細胞では陽性であり古い細胞では陰性となり成育段
階により変化する。

ｆ　抗酸性 陰性 尚、上記の形態はＬａｂ　Ｍ肉汁寒天培地における生育
状態について観察されたものである。

■　培養的性質 以下は０．０２％の酵母エキスを含む肉汁を基本培地と
したものであり２５℃で培養した結果である。

ａ　肉汁寒天平板培養 発育は良好であり、集落は直径２ｍｍの円形で、周囲は
なだらかであり、不透明であるが、光沢を有するロー・
コンペックラス状（ｌｏｗ　ｃｏｎｖｅｘ）となる。集
落の色は黄色で拡散性の色素は産生じない。

ｂ　肉汁寒天斜面培養 発育は良好で、線状に生育し、光沢を有する。

集落の色は黄色で拡散性の色素は産生しない。

Ｃ肉汁液体培地 表面発育において菌膜を形成しないか、もしくは形成し
ても非常にうすい。その培養液は一様に懸濁後沈澱を生
じる。

ｄ　肉汁ゼラチン穿刺培養 表面のみに発育し、その発育は良好である。

ｇ　リドマスミルク 発育は弱く、２週間位でペプトン化する。軟らかい凝固
またはアルカリ化する場合もある。リドマスは還元しな
い。

■　生理的性質 硝酸塩の還元 脱窒反応 ＭＲ試験 ＶＰ試験 インドールの生成 硫化水素の生成 澱粉の分解 クエン酸の利用 無機窒素源の利用 アンモニウム塩。

色素の生成 ウレアーゼ カタラーゼ オキシダーゼ セルラーゼ Ｎａ５ｅ β−ガラクトシダーゼ サイトクロムオキシダーゼ アルギニンデハイドロラーゼ 硝酸塩ともに利用できる。

黄色の色素を生成する。

陰性 陽性 陰性 陰性 陽性 陽性 陰性。

陰性 陰性 陽性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 陰性 Ｓ　生育の範囲 ｐＨ５，５〜９．５で生育し、生育の最適用は７付近で
ある。また、１０〜４１℃で生育し、生育最適温度は３
７℃付近である。

ｔ　酸素に対する態度　　　　　好気性ｕｏ−Ｆテスト グルコースを用いた場合、微弱であるか発酵により酸を
生成する。

■　糖類からの酸及びガスの生成 フラクトース、キシロース、ショ糖より酸を生成し、グ
ルコース２マルトースでは微弱である。

澱粉、ラクトースでは生成しない。また、前記いずれの
糖類からもガスの生成は認められない。

■　化学的分析 ａ　細胞壁成分 ミコール酸　　　　　　　陰性 ジアミノ酸　　　リジン（主要構成成分）ｂ　脂肪酸組
成 イソＣ１５：０　　　　　　　　　１．８５　　％アン
チイソＣ１５：０　　　　　　　　６０．６８イソＣ１
６：０　　　　　　　　　４．２１イソＣ１７：０　　
　　　　　　　　０．４７アンテイソＣ１７：０　　　
　　　　　　３１．５４ｃ　　ＧＣ含量　７３．２〜７
４．９　ｍａ１％（平均７３．７ｍｏ１％）以上の性質
を示す本菌株は、バーシース・マニュアル・才ブ・デタ
ミネイティブ・バクテリオロジー（Ｂｅｒｇｅｙ’ｓ　
Ｍａｎｕａｌ　ｏｆ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｖｅ　Ｂ
ａｃｔｅｒｉｏｌｏｇｙ）第８版（１９７４）およびザ
・ジャーナル・オブ・ゼネラル・アンド・アプライド・
マイクロバイオロジー（Ｔｈｅ　　Ｊｏｕｒｎａｌ　　
ｏｆ　　Ｇｅｎｅｒａｌ　　ａｎｄ　　Ａｐｐｌｉｅｄ
　　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ）第１８巻、第４１７頁
（１９７２）によれば、アルスロバクタ−属に分類され
る。本菌をアルスロバクタ−属に属する既知の類縁菌と
比較すると、以下の通りである。

第１表 第１表（続き） 第１表（続き） 十二反応陽性、糖より酸の産生の糖反応の場合は１週間
以内で陽性のものを示す。

（＋）：反応弱陽性、糖反応の場合は１週間以上で陽性
のものを示す。

一：反応陰性 Ｓ−Ｒ：桿状１球状、Ｔ字型、Ｙ字型のものが観察され
るもの。

ｄ：菌株により反応か異なる。

・：不明 （１）本菌 （２）アルスロバクタ−・シンプレックス（Ａ、　ｓ　
ｉｍｐ　１ｅｘ）（３）アルスロバクタ−・グロビホル
ミス（Ａ、　ｇｌｏｂｉｆｏｒｍｉｓ）（４）アルスロ
バクタ−・シテレウス（Ａ、　ｃｉｔｅｒｅｕｓ）（５
）アルスロバクタ−・ラメラセンス（Ａ、　ｔｕｍｅｓ
ｃｅｎｓ）（６）アルスロバクタ−・テレゲンス（Ａ、
　ｔｅｒｒｅｇｅｎｓ）（７）アルスロバクタ−・デュ
オデカディス（Ａ、　ｄｕｏｄｅｃａｄｉｓ） （８）アルスロバクタ−・フラベッセンス（Ａ、　ｆ　
１ａｖｅｓｃｅｎｓ） 上表から明らかなように、本菌は類縁菌とは諸性質が異
なっている。したかって、本菌は新菌であると考えられ
、本発明者らは本菌をアルスロバクター−エスピー（Ａ
ｒｔｈｒｏｂａｃｔｅｒ　ｓｐ、　）Ｋ　−１と命名し
た。本菌株は工業技術院微生物工業技術研究所に寄託さ
れており、その寄託番号はＦＥＲＭ　Ｐ−１０７３６で
ある。

本発明の微生物は、転移活性の強い新規なβ−フラクト
フラノシダーゼを生産する能力を有している。本酵素生
産のための微生物の培養条件について検討した。まず、
基本培地として１．０％ポリペプトン、０．２％硝酸ア
ンモニウム、０．１％硫酸マグネシウムおよび炭素源を
含むものを用い、炭素源については第２表に示した各種
物質を１％の濃度で使用した。

この培地にアルスロバクター・エスピーに−１を植菌し
、３０℃で２日振盪培養した。このときの活性比率（可
溶性澱粉を１００としたときの値）を第２表に示す。

表から明らかなように、本酵素はショ糖によって誘導さ
れるのではなく、グルコースのように発酵性の高いもの
以外は使用可能であり、炭素源としては可溶性澱粉が最
良である。

第２表 活性（ｕ／ｍｊ）　　　活性比率 ショ糖　　　　　０．１８　　　　　３９グルコース　
　　　００ マルトース　　　　０．１９　　　　　４１ラクトース
　　　　０．３３．　　　　　７２フスマ　　　　　　
０．１４　　　　　３０可溶性澱粉　　　　０．４６　
　　　　１００粉飴　　　　　　　０．１６　　　　　
３５次に、有機窒素源について検討するため、１．０％
可溶性澱粉、０．２％硝酸アンモニウム、０．１％硫酸
マグネシウムおよび１％有機窒素源を含む培地にアルス
ロバクター・エスピーに−１を植菌し、３０℃で２日間
振盪培養した。このときの活性比率（０，５％ポリペプ
トン＋０．５％酵母エキスを１００としたときの値）を
第３表に示す。

表から明らかなように、酵母エキスを用いた場合に、 高い活性を示している。

第３表 無添加 ポリペプトン コーンステイープリカ 活性（ｕ／ｍｊ’） ０．１１ ０．３５ ２．２９ 肉エキス　　　　　０．３２　　　　　７脱脂大豆粉末
　　　ＯＯ 魚肉エキス　　　　０．４２　　　　　１０さらに、培
地組成について検討した結果、最適の培地組成は１．２
％酵母エキス、０．８％ポリペプトン、４％可溶性澱粉
、０．４％（ＮＨ４）２ＨＰＯ。

およびＯ，１％Ｍ　ｇ　Ｓ　Ｏ４・７　Ｈ２Ｏ（ｐＨ７
，０）を含むものであった。したかって、培養に用いる
培地としては、上記知見を参考とし、供試菌株が目的と
する酵素を大量に生産し得る組成を選定すべきである。

本発明のβ−フラクトフラノシダーゼを生産するために
は、選定した培地に、上記微生物を植菌し、ｐＨを中性
ないし微アルカリ性、温度２０℃から４５℃１好ましく
は３０から４０℃に保ちつつ、１０時間から５日間振盪
あるいは通気攪拌培養すればよい。

以上の様にして得られた培養物より酵素は常法により採
取、精製できる。たとえば培養物より遠心分離し、菌体
を除いた上清液を粗酵素液として使用できる。さらに、
必要に応じて、既知の方法を適当に組合せて精製して使
用できる。

酵素の精製は各種方法により行なうことかできるが、そ
の１例を示すと次の通りである。

５℃の低温下、粗酵素液に固形の硫酸アンモニウムを加
え０．６飽和で沈澱する画分を集め、１０ｍＭリン酸緩
衝液（ｐＨ７，０）に溶解し、同緩衝液に対して一晩透
析したものについて以後の操作を行なう。尚、この硫安
塩析での回収率は約９０％である。次に、ＤＥＡＥ−）
ヨパール６５０によるイオン交換クロマトグラフィー、
ブチルトヨバール６５０による疎水クロマトグラフィー
、ウルトロゲルＡｃＡ４４を用いたゲル濾過、ヒドロキ
シアパタイトによる吸着クロマトグラフィー等により精
製され、ディスクゲル電気泳動的に単一バンドを示す二
つの標品（フラクションＡ、　　Ｂ）を得ることができ
る。尚、この標品の回収率はそれぞれ１５％、１４％で
ある。

フラクションＡの精製酵素を用いて性質を検討した。以
下に結果を示す。

（１）作用 （イ）　５％ショ糖に作用し、グルコースとフラクトー
スに分解する。ショ糖分子間での転移反応は起りにくく
転移オリゴ糖の生成は極めて少ない。

第１図に示すように、５０％という高濃度で反応させて
もｌ−ケスドースの生成率は２０％にすぎない。

（ロ）中性の単糖及びオリゴ糖についてはイス型のコン
ホメーション（’Ｃ＋）をとったときＣ２゜Ｃ３のＯＨ
がｅｑｕａｔｏｒｉａ１位にある糖質の存在下、本酵素
をショ糖に作用させると、還元末端のＣ１位の水酸基に
フラクトシル基を転移し、アルドシルフラクトシドを生
成する。たとえばＤ−キシロース、Ｄ−ガラクトース、
Ｄ＝およびＬ−フコース、Ｌ−ソルボース、マルトオリ
ゴ糖、イソマルトオリゴ糖、キシロオリゴ糖、ラクトー
ス等によくフラクトシル基を転移し、キシロシルフラク
トシド、ガラクトシルフラクトシド、フコシルフラクト
シド、ソルボシルフラクトシド、マルトオリゴシルフラ
クトシド、イソマルトシルフラクトシド、キシロオリゴ
シルフラクトシド、ラクトシルフラクトシドを生成する
。

第２図にキシロース存在下、等量のショ糖からなる５０
％基質に本酵素を４０℃て作用させたときのキシロシル
フラクトシドの生成率の経時変化を示す。第２図から明
らかなように、用いたショ糖の７０％に相当する生成率
を示す。

（ハ）　メチル−α−グルコシド、メチル−β−グルコ
シド、メチル−α−ガラクトシド、フェニル−α−グル
コシド、フェニル−α−ガラクトシド、ｐ−ニトロフェ
ニル−α−グルコシド、ｐ−ニトロフェニル−β−ガラ
クトシドのような配糖体の存在下、ショ糖に作用させる
と、フラクトシル基をこれら配糖体に転移する。

（ニ）　Ｄ−キシリトール、Ｄ−リビトール、Ｄ−ガラ
クチトール、Ｄ−ソルビトール、Ｄ−マルチトール、Ｄ
−エリスリトール等の糖アルコールの存在下、ショ糖に
作用させると、フラクトシル基を糖アルコールに転移す
る。

（ホ）　メタノール、エタノール、プロパツールなとの
炭素数ｌＯまでの１級のアルキルアルコールの存在下、
ショ糖に作用させると、フラクトシル基をアルキルアル
コールに転移し、アルキルフラクトシドを生成する。ま
た、２級のアルコールの場合でも、水酸基か隣接した１
、２−プロパンジオール、１．２−ブタンジオール、２
，３−ブタンジオール、１，２−シクロヘキサンジオー
ルにフラクトシル基を転移する。

（へ）　リボフラビン、ルチン、エスクリンの様な配糖
体ビタミンやピリドキシンの様な水酸基を持つビタミン
の存在下、ショ糖に作用させると、ビタミンにフラクト
シル基を転移する。

（ト）アデノシン、イノシンの様なヌクレオシドの存在
下、ショ糖に作用させると、ヌクレオシドにフラクトシ
ル基を転移する。

（チ）ステビオシト、ルブソシドのような配糖体の存在
下、ショ糖に作用させると、フラクトシル基を配糖体に
転移する。

（２）基質特異性 本酵素はショ糖以外にエルロース、キシロシルフラクト
シド、ラフィノース、ネオケスドース。

ラクトシルフラクトシド、スタキオースを良く分解する
が、１−ケスドース、ニスドース、イヌ口ビオース、レ
バンビオースには作用しにくい。

（３）活性測定法 ４０％キシロースを含む２０％ショ糖溶液（５０ｍＭ　
　リン酸緩衝液　ｐＨ６，５）　５００ｕｌ！に適宜希
釈した酵素液２００μｌを加え、４０℃，ｔ。

分間作用させた後、反応液の一部を沸騰水に入れ、酵素
を熱失活させ、次いてＦキットで遊離するグルコース及
びフラクトース量を求め、グルコース量からフラクトー
ス量を差し引き、転移したフラクトース量を算出する。

１単位は１分間に１μｍｏｌのフラクトシル基を転移さ
せる酵素量とした。

（４）至適ｐＨと安定ｐＨ 作用至適ｐＨは酵素０．１ｍｌに０．０５Ｍ緩衝液（ｐ
Ｈ３〜８．マツキーベン緩衝液、８．０〜１１コルソフ
緩衝液）０．９ｍｊ’を加え、この内０．２ｍρを２０
％シヨ糖、４０％キシロース溶液０．２７７１ｊ’と混
合し、活性を測定した。ｐＨ安定性は酵素０．１ｍｌに
０．１Ｍの同緩衝液０．４ｍｌを加え、４０℃に２時間
保った後、１．０ｍｌのｐＨ６，５の０．１Ｍリン酸緩
衝液を加え、その２００μｌを用いて残存活性を測定し
た。

第３図に示すごとく、至適ｐＨは６．５〜６．８付近で
あり、この処理てはｐＨ５から１０の範囲で安定である
。

（５）至適温度と温度安定性 至適温度は各温度で１０分間反応させ活性を測定した。

温度安定性は酵素液を各温度に３０分間保持し、次いて
１０分間冷却後、残存活性を測定した。第４図に示すご
とく、本酵素の至適温度は５５℃付近であり、６０℃で
も７２％の残存活性を有する。

（６）阻害、活性化 本酵素は１ｍＭの銀、水銀、銅の存在で９０％以上阻害
され、１ｍＭの亜鉛、錫の存在で４０〜５０％阻害を受
ける。その他のｌｏｍＭのカルシウム。

バリウム、マグネシウム、マンガン、ストロンチウム、
ＩｍＭのニッケル、カドミニウム、鉄の存在では殆ど阻
害は受けなかった。また、１０ｍＭラウリル硫酸ナトリ
ウム、２００ｍＭリボースで９０％以上阻害される。シ
スティン残基に特異的に作用する０、１ｍＭのｐ−クロ
ロマーキュリ安息香酸の存在下では阻害されない。

本酵素は本酵素の有効な受容体となるキシロースやガラ
クトースの存在により活性化される。

ＳＨ還元試薬であるジチオスレイトール、還元型グルタ
チオンは本酵素の安定化に効果はなかった。また、カル
シウム、マグネシウムにも安定性を高める効果は見られ
ない。

（７）分子量 ５ＤＳ−ディスクゲル電気泳動およびゲル濾過法により
測定したところ、分子量は５２，０００±２．５００で
あった。

（８）等電点 アンホライン電気泳動法により調べた結果、等電点は４
．３であった。

（９）結晶構造および元素分析 本酵素については未た結晶標品が得られていないか、電
気泳動て単一なバンドを示す標品をそれぞれ得ている。

第４表にこれまで報告されているかびのβ−フラクトフ
ラノシダーゼの基質特異性をショ糖の分解速度を１００
としたときの相対速度で示す。第５表にレバンシュクラ
ーゼおよびかびのβ−フラクトフラノシダーゼの受容体
特異性を示す。

第４表に示すように、本酵素はラフィノースを良く分解
するが、■−ケスドースを分解しにくいこと、これまで
に報告されているかびの酵素とは異なりショ糖間でのフ
ラクトシル基転移反応を触媒しにくいこと、第５表に示
すように、受容体特異性か幅広くガラクトース、ラクト
ース等にフラクトシル基を転移する。

以上のことより本酵素は従来執告されているβ−フラク
トフラノシダーゼとは明らかに異なる新規なβ−フラク
トフラノシダーゼである。

尚、フラクションＢの部分精製品についても酵素の安定
性、金属塩の影響、基質特異性および受容体特異性など
を調べた結果、フラクションＡとほぼ同じ結果が得られ
ている。

ショ糖 ラフィノース スタキオース ネオケストース １−ケストース ニストース ツラノース 第４表 本酵素 ６７．７ １５．６ ５３、５Ｄ Ｏ１引 Ｎ、Ｄ Ｎ、Ｄ Ｎ、Ｄ Ｎ、Ｄ ０．０２ Ｎ、Ｄ Ｎ、Ｄ ０．０１ Ｂ：Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓｐ、　Ｋ−２５由来の
酵素、Ｃ：Ａｓｐｅｒｇｉｌｌｓ　ｎｉｇｅｒ　ＡＴＣ
Ｃ２０６１１由来の酵素ラクトースの転移活性） Ｎ、Ｄ：データなし くフ ／ ショ糖 ｌ−ケスドース ラフィノース Ｄ−グルコース 叶ラクトース トガラクトース Ｄ−キシロース Ｌ−アラビノース し−ソルボース し−ラムノース Ｄ−ソルビトール Ｄ−マンニトール 叶キシリトール マルトース イソマルトース ラクトース メタノール エタノール 十 ＋ 十 十 ＋ 士、転移生成物を生成、−二転移生成物を生成せずＮ、
Ｄ：データなし Ａ：Ｐｅｎ１ｃｉｌｌｉｕｎ＋　ｆｒｅｑｕｅｎｔａｎ
ｓ　Ｔ−１由来の酵素Ｂ：Ｐｅｎｉｃｉｌｌｉｕｍ　ｓ
ｐ、　Ｋ−２５由来の酵素なお、本酵素は菌体外酵素て
あり、培養液に酵素を蓄積する。また、ショ糖による誘
導酵素ではなく、培地にショ糖を添加することなく、他
の炭素源を用いて培養か可能である。さらに、レバンシ
ュクラーゼと異なり培養液中にレバンを生産することか
ないことから酵素の回収は容易であり、実用的にも有用
である。

〔実施例〕

次に、実施例により本発明を詳しく述べる。

実施例１ 普通寒天斜面培地にアルスロバクター・エスピーに−１
（ＦＥＲＭ　　Ｐ−１０７３６）を接種し、３７℃て２
日間培養後、その１白金耳をとり、１．２％酵母エキス
、０．８％ポリペプトン、４％可溶性澱粉。

０．４％（ＮＨ４）２ＨＰ０４．０．１％Ｍ　ｇ　Ｓ　
Ｏ４・７Ｈ２０（ｐｆ４７．０）の組成からなる液体培
地Ｃ６０ｍ１培地／　５００　ｍｌ肩付きフラスコ）に
植菌し、３７℃で２日間通気振盪培養した。これを種菌
とし、同組成からなる液体培地に分注し、３７℃で５日
間通気振盪培養した。培養液を遠心分離し、上清（粗酵
素液）を約１．１　ｆ得た。本液には３０単位／艷のβ
−フラクトフラノシダーゼを含有していた。

実施例２ １．２％酵母エキス、０．８％ポリペプトン、４％ラク
トース、０．４％（ＮＨ４）２ＨＰＯ４，０，１％Ｍ　
ｇ　Ｓ　０４・７　Ｈ２Ｏ（ｐＨ７，０）を培地とし、
５００ｍ１容坂ロフラスコに６０ｍ１分注し、これに同
培地で２日間前培養した種菌を４ｍｌづつ植菌し、３７
℃で２日間前培養した。これを種菌とし、１２１の５％
コーン・ステイープリカー、３％シヨ糖、０．４％（Ｎ
Ｈ４）２ＨＰＯ４，ｏ、１％ＭｇＳ○、・７　Ｈ２Ｏ（
ｐＨ７，０）からなる培地に植菌し、ｐＨを７に調整し
ながら、２５時間通気攪拌培養した。培養液は遠心分離
で菌体を除去し、粗酵素液１２１を得た。この液の活性
は１４０単位／ｒｎｌであった。

応用例１ ラクトース５ｋｇとショ糖５ｋｇを予め水に溶かし、ｐ
Ｈを６．５とし、実施例２の粗酵素液をショ糖１ｇあた
り５単位加え、固形分濃度を４０％として５０℃で５時
間反応せしめ、ラクトシルフラクトシドを３０％含む反
応液を得た。

〔発明の効果〕

本発明によれば、新規な転移活性の強いβ−フラクトフ
ラノシダーゼを効率よく得ることかてきる。

さらに、この酵素を用いることによってフラクトースを
含むヘテロオリゴ糖や配糖体を効率よく安価に製造する
ことができる。

キシロシルフラクトシド、イソマルトシルフラクトシド
は抗う触性の性質を有し、さらにラクトシルフラクトシ
ドはビフィズス菌増殖因子としての活性を有しているこ
とにより、これらフラクトースを含むヘテロオリゴ糖は
有用な機能性糖質としての実用化が期待される。

したがって、転移活性の強いβ−フラクトフラノシダー
ゼを効率よく生産する本発明は産業上極めて有用である
。

【図面の簡単な説明】

第１図はβ−フラクトフラノシダーゼの反応経過（５０
％シヨ糖、ＩＯＵ／ｇ基質）を示すグラフ、第２図は受
容体として２５％キシロース存在下の本酵素の反応経過
（２５％シヨ糖、ＩＯＵ／ｇ基質）を示すグラフ、第３
図は本酵素の至適ｐＨ及びｐＨ安定性を示すグラフ、第
４図は本酵素の至適温度及び温度安定性を示すグラフで
ある。 ｉＩ鴫Ｕ酬　次 ＩＱ Ｉ！　（Ｉ４りｌす■ミ 賢叔）１すＪ　次 寸 苛叔四■次

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. ４１℃で生育し、澱粉を加水分解せず、硝酸塩を還元し
   ない、フラクトースから酸を生成し、グルコースおよび
   マルトースから酸の生成が微弱であり、細胞壁の主要ジ
   アミノ酸がリジンであり、ＧＣ含量が７３．２〜７４．
   ９ｍｏｌ％であるアルスロバクター・エスピーＫ−１。