JPH0466092A - ラミナリオリゴ糖の製造方法 - Google Patents
ラミナリオリゴ糖の製造方法Info
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- JPH0466092A JPH0466092A JP2175259A JP17525990A JPH0466092A JP H0466092 A JPH0466092 A JP H0466092A JP 2175259 A JP2175259 A JP 2175259A JP 17525990 A JP17525990 A JP 17525990A JP H0466092 A JPH0466092 A JP H0466092A
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- enzyme
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- oligosaccharide
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- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
- Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
- Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
- Y02P20/52—Improvements relating to the production of bulk chemicals using catalysts, e.g. selective catalysts
Landscapes
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
め要約のデータは記録されません。
Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はラミナリオリゴ糖の新規な製造方法に関する。
ラミナリオリゴ糖はグルコースが２個以上β−１，３結
合しててきる少糖類である。β−１，３結合のポリマー
（β−１，３グルカン）の中には制癌活性のあるものが
知られており、その構成単位であるラミナリオリゴ糖に
も種々の生理活性か期待される。
合しててきる少糖類である。β−１，３結合のポリマー
（β−１，３グルカン）の中には制癌活性のあるものが
知られており、その構成単位であるラミナリオリゴ糖に
も種々の生理活性か期待される。
ラミナリオリゴ糖の製造方法としては、β−１゜３グル
カンの酸部分加水分解による方法しか知られていない。
カンの酸部分加水分解による方法しか知られていない。
従来法によるラミナリオリゴ糖の製造方法におし、）て
は、原料としてβ−１，３グルカンか使用される。しか
しながら、β−１，３グルカンを安価に供給する方法は
なく、そのため製造されるラミナリオリゴ糖は大変高価
なものになることが避けられなかった。
は、原料としてβ−１，３グルカンか使用される。しか
しながら、β−１，３グルカンを安価に供給する方法は
なく、そのため製造されるラミナリオリゴ糖は大変高価
なものになることが避けられなかった。
本発明者らはこの課題を解決するために鋭意研究を進め
た結果、本発明を完成するに至った。
た結果、本発明を完成するに至った。
すなわち本発明は、グルコース−１−リン酸とグルコー
スをラミナリビオースホスホリラーゼ及ヒ／又はβ−１
，３−オリゴグルカンホスホリラーゼにより処理してラ
ミナリオリゴ糖を製造するにあたり、前記グルコースの
初濃度が１ｍＭ以上２Ｍ未満であり、グルコース−１−
リン酸の使用量がグルコース１モルに対して０．１モル
以上、かつ初濃度が１０ｍＭ以上２Ｍ未満であり、反応
時間が１００時間以下であり、製造されるラミナリオリ
ゴ糖の平均重合度が２以上２０以下であることを特徴と
するラミナリオリゴ糖の製造方法に関する。
スをラミナリビオースホスホリラーゼ及ヒ／又はβ−１
，３−オリゴグルカンホスホリラーゼにより処理してラ
ミナリオリゴ糖を製造するにあたり、前記グルコースの
初濃度が１ｍＭ以上２Ｍ未満であり、グルコース−１−
リン酸の使用量がグルコース１モルに対して０．１モル
以上、かつ初濃度が１０ｍＭ以上２Ｍ未満であり、反応
時間が１００時間以下であり、製造されるラミナリオリ
ゴ糖の平均重合度が２以上２０以下であることを特徴と
するラミナリオリゴ糖の製造方法に関する。
本発明においてラミナリオリゴ糖は、グルコース−１−
リン酸とグルコースをラミナリビオースホスホリラーゼ
及び／又はβ−１，３−オリゴグルカンホスホリラーゼ
により処理することによって製造される。
リン酸とグルコースをラミナリビオースホスホリラーゼ
及び／又はβ−１，３−オリゴグルカンホスホリラーゼ
により処理することによって製造される。
ここで、これら２種類の酵素は国際生化学連合酵素委員
会報告によりラミナリビオースホスホリラーゼ（ＥＣ２
，４，１，３１） 、 β−１，３−オリゴグルカン
ホスホリラーゼ（ＥＣ２，４，１，３０）と異なった酵
素番号が与えられているが、これらの酵素はすべてラミ
ナリオリゴ糖を加リン酸分解し、グルコース−１−リン
酸と重合度の１つ少ないラミナリオリゴ糖を生成する本
質的に同一の反応を触媒する。
会報告によりラミナリビオースホスホリラーゼ（ＥＣ２
，４，１，３１） 、 β−１，３−オリゴグルカン
ホスホリラーゼ（ＥＣ２，４，１，３０）と異なった酵
素番号が与えられているが、これらの酵素はすべてラミ
ナリオリゴ糖を加リン酸分解し、グルコース−１−リン
酸と重合度の１つ少ないラミナリオリゴ糖を生成する本
質的に同一の反応を触媒する。
本発明者らは、これらの酵素の触媒する反応が逆方向に
も進行することに注目した。すなわち、グルコースを出
発とし、グルコース−１−リン酸によりこれらの酵素の
作用によってβ−１，３結合を生成することによりラミ
ナオリゴ糖を合成することに成功した。
も進行することに注目した。すなわち、グルコースを出
発とし、グルコース−１−リン酸によりこれらの酵素の
作用によってβ−１，３結合を生成することによりラミ
ナオリゴ糖を合成することに成功した。
本発明による酵素反応は、通常トリス−塩酸緩衝液、イ
ミダゾール−塩酸緩衝液等の適当な溶液中で行われる。
ミダゾール−塩酸緩衝液等の適当な溶液中で行われる。
本発明において、グルコースの初濃度は通常１ｍＭ以上
２Ｍ未満に設定する。グルコースの初濃度が１ｍＭ未満
の場合は、本反応速度か非常に遅くなる。一方、２Ｍを
超える場合は、溶解度の問題で反応が困難になる。また
、他方の原料であるグルコース−１−リン酸の使用量は
、グルコース１モルに対して０．１モル以上、かつ初濃
度１０ｍＭ以上２Ｍ未満に設定する。グルコース−１−
リン酸の使用量がグルコース１モルに対して０．１モル
未満の場合は、反応速度が遅くなるとともに、反応系に
原料であるグルコースが大量に残存する問題か生じる。
２Ｍ未満に設定する。グルコースの初濃度が１ｍＭ未満
の場合は、本反応速度か非常に遅くなる。一方、２Ｍを
超える場合は、溶解度の問題で反応が困難になる。また
、他方の原料であるグルコース−１−リン酸の使用量は
、グルコース１モルに対して０．１モル以上、かつ初濃
度１０ｍＭ以上２Ｍ未満に設定する。グルコース−１−
リン酸の使用量がグルコース１モルに対して０．１モル
未満の場合は、反応速度が遅くなるとともに、反応系に
原料であるグルコースが大量に残存する問題か生じる。
また、初濃度が１０ｍＭ未満では、製造されるラミナリ
オリゴ糖の濃度が薄く実用的でない。一方、初濃度が２
Ｍを超える場合は、溶解度の問題がありやはり実用的で
ない。
オリゴ糖の濃度が薄く実用的でない。一方、初濃度が２
Ｍを超える場合は、溶解度の問題がありやはり実用的で
ない。
反応時間は通常１００時間以内で行われる。反応時間か
１００時間を超える場合は、原料のグルコース−１−リ
ン酸が比較的不安定なため、その一部が分解し、反応の
収率が低くなる。
１００時間を超える場合は、原料のグルコース−１−リ
ン酸が比較的不安定なため、その一部が分解し、反応の
収率が低くなる。
ここで、グルコースとグルコース−１−リン酸の初濃度
の比を変えることによって、製造されるラミナリオリゴ
糖の重合度を変化させることが可能である。すなわち、
グルコースの使用量を減少させるほど、より重合度の大
きいラミナリオリゴ糖が製造される。
の比を変えることによって、製造されるラミナリオリゴ
糖の重合度を変化させることが可能である。すなわち、
グルコースの使用量を減少させるほど、より重合度の大
きいラミナリオリゴ糖が製造される。
酵素処理の反応温度は酵素が失活しない範囲であればよ
く、通常２０〜６０″Ｃの範囲で行われる。
く、通常２０〜６０″Ｃの範囲で行われる。
さらに、反応系のｐＨは用いる酵素の最適ｐＨ付近で行
い、通常５〜８の範囲である。
い、通常５〜８の範囲である。
ここで用いられる酵素は如何なる生物起源のものでも差
し支えないか、両酵素を菌体内に含有していることが知
られているミドリムシ目（Ｅｕｇｌｅｎｉｄａ）の生物
起源のものを用いることが好ましい。また、これらの酵
素は精製品、未精製品、公知の固定化法により固定化さ
れた固定化酵素あるいは該酵素を含む菌体等いずれの状
態で用いても差し支えない。
し支えないか、両酵素を菌体内に含有していることが知
られているミドリムシ目（Ｅｕｇｌｅｎｉｄａ）の生物
起源のものを用いることが好ましい。また、これらの酵
素は精製品、未精製品、公知の固定化法により固定化さ
れた固定化酵素あるいは該酵素を含む菌体等いずれの状
態で用いても差し支えない。
酵素反応終了後、適宜の方法により反応液からラミナリ
オリゴ糖を分離する。例えば、反応液にエタノールを加
えてラミナリオリゴ糖を沈澱させることにより分離する
ことが可能である。また、もし重合度が一定のラミナリ
オリゴ糖が必要であれば、活性炭カラムクロマトあるい
はゲル濾過等の方法によりこれらを得ることが可能であ
る。
オリゴ糖を分離する。例えば、反応液にエタノールを加
えてラミナリオリゴ糖を沈澱させることにより分離する
ことが可能である。また、もし重合度が一定のラミナリ
オリゴ糖が必要であれば、活性炭カラムクロマトあるい
はゲル濾過等の方法によりこれらを得ることが可能であ
る。
以下、本発明を実施例によりさらに詳しく説明する。な
お、各実施例に用いた酵素は以下の方法により調製した
ものである。
お、各実施例に用いた酵素は以下の方法により調製した
ものである。
調製例（酵素液の調製）
ユーグレナ・グラチリス”ｚ株（Ｅｕｇｌｅｎａ ｇｒ
ａｃｉｌｉｓｚ）の培養菌体２ｇ（湿潤重量）を８−の
５０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（１）Ｈ７，Ｏ）に懸濁し
て超音波破砕処理を行った。該処理液を遠心分離し、そ
の上清を酵素液とした。酵素活性は１．１１単位／ｙｄ
であった。
ａｃｉｌｉｓｚ）の培養菌体２ｇ（湿潤重量）を８−の
５０ｍＭ）リス−塩酸緩衝液（１）Ｈ７，Ｏ）に懸濁し
て超音波破砕処理を行った。該処理液を遠心分離し、そ
の上清を酵素液とした。酵素活性は１．１１単位／ｙｄ
であった。
なお、酵素活性の単位は、３７℃、 ｐＨ７，０おいて
１０ｍＭグルコース、１０ｍＭグルコース−１−リン酸
から１分間に１ＭＭのリン酸及び等モルのラミナリビオ
ースを生成する酵素量として定義した。
１０ｍＭグルコース、１０ｍＭグルコース−１−リン酸
から１分間に１ＭＭのリン酸及び等モルのラミナリビオ
ースを生成する酵素量として定義した。
実施例１〜５
５０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）中にグル
コース−１−リン酸１００ｍＭ、 グルコース５〜１
００ｍＭ、酵素０．０８９単位／−になるよう反応液を
調製し、３７℃において４８時間反応を行った。
コース−１−リン酸１００ｍＭ、 グルコース５〜１
００ｍＭ、酵素０．０８９単位／−になるよう反応液を
調製し、３７℃において４８時間反応を行った。
反応後のラミナリオリゴ糖は高速液体クロマトグラフィ
ーを用いて定量した。その結果、表１に示したようなラ
ミナリオリゴ糖が製造された。なお、表１における収率
は、グルコース−１−リン酸に対する収率を表すもので
ある。
ーを用いて定量した。その結果、表１に示したようなラ
ミナリオリゴ糖が製造された。なお、表１における収率
は、グルコース−１−リン酸に対する収率を表すもので
ある。
比較例１
５０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）中にグル
：＋−スー１−リン酸１００ ｍＭ、 グル：ｌ−，
７，０，５ｍＭ、酵素０．０８９単位／−になるよう反
応液を調製し、３７°Ｃにおいて４８時間反応を行った
。
：＋−スー１−リン酸１００ ｍＭ、 グル：ｌ−，
７，０，５ｍＭ、酵素０．０８９単位／−になるよう反
応液を調製し、３７°Ｃにおいて４８時間反応を行った
。
その結果、ラミナリオリゴ糖の生成を高速液体クロマト
グラフィーでは検出できなかった。
グラフィーでは検出できなかった。
比較例２
５０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）中にグル
コース−１−リン酸ＩＭ、 グルコース２．５Ｍ。
コース−１−リン酸ＩＭ、 グルコース２．５Ｍ。
酵素０．０８９単位／−になるような反応液の調製を試
みたが、溶解度の問題で反応液を調製することができな
かった。
みたが、溶解度の問題で反応液を調製することができな
かった。
比較例３
５０ｍＭ ）リス−塩酸緩衝液（ｐ）１７．０）中にグ
ルコース−１−リン酸１０ｍＭ、 グルコース２００
ｍＭ。
ルコース−１−リン酸１０ｍＭ、 グルコース２００
ｍＭ。
酵素０．０８９単位／ ｍｅになるよう反応液を調製し
、３７℃において４８時間反応を行った。その結果、平
均重合度２．１のラミナリオリゴ糖を収率７５％で得た
。しかしながら、反応液中の残存グルコース量が生成し
たラミナリオリゴ糖の１０倍以上であった。
、３７℃において４８時間反応を行った。その結果、平
均重合度２．１のラミナリオリゴ糖を収率７５％で得た
。しかしながら、反応液中の残存グルコース量が生成し
たラミナリオリゴ糖の１０倍以上であった。
比較例４
５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）中にグル
コース−１−リン酸８ ｍＭ、 グルコース２０ｍＭ
、酵素０．０８９単位／ｉｔ’になるよう反応液を調製
し、３７°Ｃにおいて４８時間反応を行った。その結果
、ラミナリオリゴ糖の生成を高速液体クロマトグラフィ
ーでは検出できなかった。
コース−１−リン酸８ ｍＭ、 グルコース２０ｍＭ
、酵素０．０８９単位／ｉｔ’になるよう反応液を調製
し、３７°Ｃにおいて４８時間反応を行った。その結果
、ラミナリオリゴ糖の生成を高速液体クロマトグラフィ
ーでは検出できなかった。
比較例５
５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ７，０）中にグル
コース−１−リン酸２Ｍ、 グルコースＩＭ、酵素０
、０８９単位／ｍｌになるような反応液の調製を試みた
が、溶解度の問題で反応液を調製することができなかっ
た。
コース−１−リン酸２Ｍ、 グルコースＩＭ、酵素０
、０８９単位／ｍｌになるような反応液の調製を試みた
が、溶解度の問題で反応液を調製することができなかっ
た。
比較例６
実施例１の条件において１５０５０時間反応った。その
結果、平均重合度２．７のラミナリオリゴ糖か収率約５
５％て得られた。したがって、この場合は実施例１の結
果と比較して収率か低下していた。
結果、平均重合度２．７のラミナリオリゴ糖か収率約５
５％て得られた。したがって、この場合は実施例１の結
果と比較して収率か低下していた。
表１
〔発明の効果〕
本発明によれば、容易にラミナリオリゴ糖を製造するこ
とか可能である。これは使用した酵素につき知られてい
る性質からは予想し難いことである。しかも、原料の初
濃度比を変化させることによって各種の重合度のラミナ
リオリゴ糖を製造することが可能である。
とか可能である。これは使用した酵素につき知られてい
る性質からは予想し難いことである。しかも、原料の初
濃度比を変化させることによって各種の重合度のラミナ
リオリゴ糖を製造することが可能である。
本発明において得られるラミナリオリゴ糖は、医薬品原
料あるいは食品分野等において有用なものである。
料あるいは食品分野等において有用なものである。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、グルコース−１−リン酸とグルコースをラミナリビ
オースホスホリラーゼ及び／又はβ−１、３−オリゴグ
ルカンホスホリラーゼにより処理してラミナリオリゴ糖
を製造するにあたり、前記グルコースの初濃度が１ｍＭ
以上２Ｍ未満であり、グルコース−１−リン酸の使用量
がグルコース１モルに対して０．１モル以上、かつ初濃
度が１０ｍＭ以上２Ｍ未満であり、反応時間が１００時
間以下であり、製造されるラミナリオリゴ糖の平均重合
度が２以上２０以下であることを特徴とするラミナリオ
リゴ糖の製造方法。 ２、酵素がミドリムシ目（Ｅｕｇｌｅｎｉｄａ）に属す
る生物由来のものである請求項１記載の製造方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2175259A JP2955590B2 (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ラミナリオリゴ糖の製造方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2175259A JP2955590B2 (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ラミナリオリゴ糖の製造方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0466092A true JPH0466092A (ja) | 1992-03-02 |
| JP2955590B2 JP2955590B2 (ja) | 1999-10-04 |
Family
ID=15993035
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2175259A Expired - Lifetime JP2955590B2 (ja) | 1990-07-04 | 1990-07-04 | ラミナリオリゴ糖の製造方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2955590B2 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001079475A1 (en) * | 2000-04-19 | 2001-10-25 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Laminaribiose phosphorylase, process for producing the same and process for producing laminarioligosaccharide by using the enzyme |
| WO2010092997A1 (ja) | 2009-02-11 | 2010-08-19 | 国立大学法人三重大学 | β1,3-グルカンの製造方法 |
-
1990
- 1990-07-04 JP JP2175259A patent/JP2955590B2/ja not_active Expired - Lifetime
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001079475A1 (en) * | 2000-04-19 | 2001-10-25 | Showa Sangyo Co., Ltd. | Laminaribiose phosphorylase, process for producing the same and process for producing laminarioligosaccharide by using the enzyme |
| WO2010092997A1 (ja) | 2009-02-11 | 2010-08-19 | 国立大学法人三重大学 | β1,3-グルカンの製造方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2955590B2 (ja) | 1999-10-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| S111 | Request for change of ownership or part of ownership |
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