JPH0468284B2 - - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

イ 発明の目的 産業上の利用分野 リン脂質を水溶液に懸濁すると、脂質二重層膜
からなるリポソームとよばれる小胞体ができる。
このリポソームの内部に含まれる水層に薬物を含
有させて、生体に投与すれば、リポソームを薬物
担体として利用することができる。本発明はこの
薬物含有リポソーム製剤の製法に関する。 従来の技術 リポソーム製剤を安定に貯蔵しておくためにリ
ン脂質、薬物およびアジユバントより調製したリ
ポソーム組成物を凍結乾燥品とするリポソーム製
剤の製法が特開昭53−142514号公報に示されてい
る。 有機溶媒を用いずにリポソーム凍結乾燥品を製
造し、同乾燥品を水性媒体もしくは薬剤含有水性
媒体に分散させて有機溶媒を含まない安全性の高
いリポソーム製剤を製造する方法が特開昭57−
82310号公報および特開昭57−82311号公報に開示
されている。 一方、特開昭58−152812号公報には、特定のリ
ン脂質をPH値が限定された水性媒体中に分散する
ことによりSUV（Small unilamella vesicles、小
さな一枚膜リポソーム）またはLUV（Large
unillamella vesicles、大きな一枚膜リポソーム）
を製造する方法が記載されている。 発明が解決しようとする問題点 特開昭58−152812号に記載されるように特定の
条件下でリポソーム製剤を製造するのでなけれ
ば、一般的な手法である水和法により製造された
リポソームは脂質層と水性媒体が多重にかさなる
MLV（Multilamella vesicle、多重層リポソー
ム）であり、このMLVの凍結乾燥品を水性媒体
として一般に用いられている食塩水や緩衝溶液に
分散させた場合、この乾燥リポソームはやはり
MLVとして再生される。MLVはLUVに比べて
リン脂質当りに包含される水性媒体の比率が小さ
く、したがつて内包容積も小さく薬物の取り込み
率も低い。 本発明者はリポソームの凍結乾燥品を水性媒体
に分散させてリポソーム製剤を製造する際に内包
容積が大きく、内包される薬物の取り込み率が高
いLUVまたはLOV（Large oligolamella
vesicle、大きな数枚膜リポソーム）に再生する
ことを目的としてその条件を研究した。 ロ 発明の構成 問題点を解決するための手段 MLVまたはSUVの凍結乾燥品を水性媒体に分
散させるにあたり、水性媒体中に一定濃度の二価
陽イオンが存在すると、リポソームはLUVまた
はLOVとして再生される。先に、本発明者はこ
の再生の際に一価陽イオンがイオン強度0.05以下
である場合はLUVまたはLOVが再生されること
を発見した（特開昭61−50912号）。これは、逆に
一価イオン強度が0.05以上であればLUVまたは
LOVが生成せず、MLVが再生されることを意味
するが、この現象も水性媒体中に二価陽イオンを
一定量存在させることにより阻止することがで
き、所望のLUVまたはLOVを得ることができ
る。 本発明においては、リポソームを形成するリン
脂質として、レシチンすなわち飽和または不飽和
のホスフアチジルコリンを用いる。これらレシチ
ンはホスフアチジルセリン、ホスフアチジルエタ
ノールアミン、ホスフアチジルイノシトール、ジ
ホスフアチジルグリコロール、ホスフアチデート
（phosphatidate）、スフインゴミエリンなどを含
んでいてもよく、更にコレステロールや荷電物質
（例、ステアリルアミン、ジセチルホスフエイト）
を含んでもよい。具体例としては、卵黄、大豆、
その他の動植物より得たレシチン類およびそれら
の水素添加物ならびに合成レシチンを単独または
組合せて用いる。例えば、ジパルミトイル・ホス
フアチジルコリン、ジステアロイル・ホスフアチ
ジルコリン、１−パルミトイル−２−ステアロイ
ル・ホスフアチジルコリン、１−ステアロイル−
２−パルミトイル・ホスフアチジルコリンなどを
単独でまたは混合して使用する。 本発明方法で用いるリポソームの凍結乾燥品は
公知の方法により製造された凍結乾燥MLVまた
はSUVであり、いかなる凍結乾燥方法で製造さ
れたものであつてもよい。 内包される薬物としては、２−フルオロウラシ
ル、ネオマイシン、ブレオマイシンなどの制がん
剤、クロラムフエニコール、テトラサイクリン、
セフアレキシン、ラタモキセフなどの抗生物質、
ウロキナーゼなどの酵素類、インターフエロン、
インターロイキン、グロブリン、インシユリンな
どのペプチド系薬物、DNA、RNAなどの核酸
類、スルフアメトキサゾール、フエノバルビター
ルなどの一般薬物、ビタミン類、その他が例示さ
れる。 内包させる薬物は、リポソームの凍結乾燥時
に加えてもよいし、リポソームの凍結乾燥品に
混和してもよく、これらを適当に二価イオンを含
有する水性媒体に分散させリポソームを再生す
る。またはリポソームの凍結乾燥品を分散させ
る水性媒体に薬物を溶解または分散させ、これで
リポソーム凍結乾燥品を再生する。 リポソームの凍結乾燥品を分散させる水性媒体
としては、得られるリポソーム製剤の用途に応じ
て、水、食塩水（例、生理食塩水）、緩衝液（例、
リン酸塩緩衝液、トリスアミノメタン緩衝液）な
どを用いうる。 本発明の二価陽イオンとは金属イオンで、カル
シウム、マグネシウム、亜鉛、マンガン、鉄、コ
バルト、ニツケルなどを包含し、特にカルシウ
ム、マンガン、マグネシウムなどが著しい効果を
もたらす。これらの二価金属イオンを含有する水
性媒体にSUVまたはMLV凍結乾燥品を分散する
と、リポソームはLUVまたはLOVとして再生さ
れるのであるが、これら二価金属イオンの至適濃
度は各金属イオンにより異なる。例えば、カルシ
ウムイオンの場合は約３×10^-3〜１×10^-1M、マ
グネシウムイオンの場合は約４×10^-3〜１×
10^-1M、マンガンイオンの場合は約８×10^-4〜１
×10^-1Mであり、リポソーム製剤の使用目的に応
じて、金属イオンとその濃度を選択する。 なお、前記特願昭59−171265号に記載のよう
に、合成レシチンで調製したリポソームの凍結乾
燥品を再生する場合は、用いたレシチンのゲル／
液晶相転移温度（Tc）以上に加温しなければリ
ポソームは再生されない。したがつて、同リポソ
ーム凍結乾燥品について本発明方法を実施する場
合には同温度以上に加温することに留意しなけれ
ばならない。 かくして得られたリポソーム製剤は分散液のま
まで投与対象に経口または非経口で投与してもよ
いし、遠心分離、限外過、ゲル過などの方法
で内包されなかつた薬剤を除去したのち使用して
もよい。 実施例 次に実施例により本発明の実施態様を示すが、
これら実施例は何ら本発明を限定するものでな
い。 実施例 １ 市販の卵黄レシチン（メルク社）を、更にシリ
カゲルによるカラムクロマトで精製したもの354
mgをクロロホルム溶液として200mlのナスフラス
コに加え、ロータリーエバポレーターを用いて、
クロロホルムを除去しながら、フラスコの内壁に
リン脂質の薄膜を形成させた。これを十分乾燥さ
せた後、これに1.5倍量のマンニトールを含む水
溶液30mlを加えて、手で振盪しながらMLVの懸
濁液を調製した。次に、このものを、ドライアイ
ス・アセトンで凍結し、真空ポンプで凍結乾燥を
おこなつた。この凍結乾燥試料25mg（レシチン10
mg）当りに、塩化ナトリウム（NaCl0.05M）お
よび／または塩化カルシウム（CaCl₂，0.03M）
を含む１％のヒト血清アルブミン（HSA）水溶
液0.4mlを室温で加え、ときどき適当に振盪しな
がら１時間放置した後、NaCl等張水溶液を５ml
加え、次に超遠心分離機（85000ｇ×60分間）に
より外液とリポソームを分離した。分離したリポ
ソームを、更にNaCl等張水溶液５mlに再分散し
て、再び遠心分離をおこなつた。このようにして
分離して外液中のHSAの総量を定量することに
より、リポソーム再生時に取り込まれるHSAの
取り込み率を求めた（表１）。 表１は、内包容積の大きなリポソーム形成に対
するカルシウムイオンの促進効果とナトリウムイ
オンの阻害作用を示している。 HSAの定量はLowryの方法（新実験化学講座
20−Ｉ、p130丸善）によつた。

【表】 ※ この内包容積の値は、リポソーム膜に吸
着したHSAの量(取り込み率で6.2％)を差し
引いて算出したものである。
実施例 ２ 水添した卵黄レシチン（ヨウ素価３、旭化成工
業）262mgを用いて実施例１と同様にナスフラス
コの内壁に薄膜を形成させた後、精製水20mlを加
えてMLVの懸濁液を調製した。 次に、これを凍結乾燥し、粉末化した。得られ
た凍結乾燥試料から10mgずつを秤取して、これに
NaCl（0.05M）および／またはCaCl₂（0.03M）を
含む５−フルオロウラシル（5FU，10mg／ml）水
溶液0.4mlずつを加え、約１時間放置後、60℃で
５分間加温した。そして、更に約１時間室温で放
置した後、これにNaCl等張水溶液５mlを加えて
混合した。次にこのリポソームの懸濁液を遠心分
離機（85000G×60分間）にかけ、得られた沈澱
リポソームをNaCl等張水溶液５mlに再分散して、
再度、遠心機（85000G×60分間）で分離をおこ
なつた。最後に、この洗滌、分離したリポソーム
をトリトン（Triton）Ｘ−100で破壊し、解放さ
れた5FUを高速液体クロマトグラフイー（カラ
ム：Nucleosil₁₀C₁₈、溶媒：0.01M KH₂PO₄）に
よつて定量した。

【表】 測定結果（表２）は、水添卵黄レシチンのよう
な半合成リン脂質の場合も、天然（卵黄レシチ
ン）や合成品（例DPPC）の場合と同様に、凍結
乾燥リポソームを再生する際、共存するカルシウ
ムイオンが内包容積の大きなリポソームとして再
生するように作用することを示している。 実施例 ３ ジパルミトイルホスフアチジルコリン
（DPPC）を用いて実施例１と同様の方法でMLV
を調製し凍結乾燥した。凍結乾燥MLV各10mgを、
0.03M CaCl₂を含む19mMラタモキセフ
（Latamoxef）水溶液およびCaCl₂を含まない同
液各0.4mlに分散し、50℃で５分間加温する。ラ
タモキセフの取り込み率および再生リポソームの
内包容積は表３に示すとおりである。

【表】 実施例 ４ 実施例３で調製したDPPCのMLV凍結乾燥品
各10mgを、表４〜表７に示される塩を含有する
0.25％5FU水溶液0.4mlに加えて50℃で５分間加
温する。再生リポソームの5FU取り込み率および
内包容積を表４〜表７に示す。

【表】

【表】

【表】

【表】 ハ 発明の効果 本発明方法で調製したリポソーム製剤は薬物取
り込み率が高く、用いた薬物を効率よく内包して
いる。また、内包容積が大きいため、脂質当りの
内包薬物量が多く、リポソーム製剤を投与する際
に生じるリン脂質による毒性、その他のトラブル
を回避できる。 さらに本発明によれば内包させる薬物はリポソ
ームの凍結乾燥品を再生させる際に混和すること
が可能であるため、リポソームおよび薬物を各々
安定に保存することができる。

Claims (1)

【特許請求の範囲】
1. １ 凍結乾燥したMLVまたはSUVを薬物および
   二価陽イオン存在下に水性媒体に分散し、薬物包
   含LUVまたはLOVに再生することを特徴とする
   リポソーム製剤の製法。