JPH0472563A - リンパ球の抗原特異的インターロイキン―２反応性の測定法 - Google Patents
リンパ球の抗原特異的インターロイキン―２反応性の測定法Info
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- JPH0472563A JPH0472563A JP18616390A JP18616390A JPH0472563A JP H0472563 A JPH0472563 A JP H0472563A JP 18616390 A JP18616390 A JP 18616390A JP 18616390 A JP18616390 A JP 18616390A JP H0472563 A JPH0472563 A JP H0472563A
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Abstract
(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。
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Description
【発明の詳細な説明】
〔産業上の利用分野〕
本発明はアレルギー性疾患における原因抗原の検索や病
勢の指標として有用なリンパ球の抗原特異的インターロ
イキン−２反応性を簡便かつ迅速に測定する方法に関す
る。
勢の指標として有用なリンパ球の抗原特異的インターロ
イキン−２反応性を簡便かつ迅速に測定する方法に関す
る。
ＩｇＥを主体とする即時型（Ｉ型）アレルギー反応系あ
るいはＴ細胞から分泌されるサイト力インによって惹起
される遅延型（■型）過敏反応系は、抗原刺激によって
活性化されたＴ細胞を介して行なわれる。すなわち、抗
原提示細胞により活性化されたＴＩＢ？は、インターロ
イキン−２（以下Ｉ Ｌ−２という）を吸収することに
よって増殖し、ＩｇＥ産生細胞の分化増殖を促進するＩ
Ｌ４、ＩＬ５などのリンホカインを分泌する。また活性
化Ｔ細胞は、ＩｇＥを結合することによって脱頚粒をひ
きおこし即時型アレルギー反応の原因となる肥満細胞の
増殖を促進するＩＬ３、ＩＬ４のリンホカインを分泌す
る。さらに、同様にして活性化されたＴ細胞は遅延型過
敏反応におけるヘルパーＴ細胞として働き、遅延型過敏
反応を誘導する。このようにアレルゲンによりＩＬ−２
を介して活性化されたＴ細胞は少なくともＩ型あるいは
■型アレルギー反応を促進すると考えられている。
るいはＴ細胞から分泌されるサイト力インによって惹起
される遅延型（■型）過敏反応系は、抗原刺激によって
活性化されたＴ細胞を介して行なわれる。すなわち、抗
原提示細胞により活性化されたＴＩＢ？は、インターロ
イキン−２（以下Ｉ Ｌ−２という）を吸収することに
よって増殖し、ＩｇＥ産生細胞の分化増殖を促進するＩ
Ｌ４、ＩＬ５などのリンホカインを分泌する。また活性
化Ｔ細胞は、ＩｇＥを結合することによって脱頚粒をひ
きおこし即時型アレルギー反応の原因となる肥満細胞の
増殖を促進するＩＬ３、ＩＬ４のリンホカインを分泌す
る。さらに、同様にして活性化されたＴ細胞は遅延型過
敏反応におけるヘルパーＴ細胞として働き、遅延型過敏
反応を誘導する。このようにアレルゲンによりＩＬ−２
を介して活性化されたＴ細胞は少なくともＩ型あるいは
■型アレルギー反応を促進すると考えられている。
一方、臨床的に観ても、アレルギー患者のリンパ球のＩ
Ｌ−２反応性は抗原に特異的であることが知られている
。すなわち、例えば卵白アルブミンを原因抗原とする患
者のリンパ球は、卵白アルブミンで刺激した場合のみＩ
Ｌ−２反応性が誘導され、他の抗原で刺激した場合には
ＩＬ−２反応性は誘導されない。
Ｌ−２反応性は抗原に特異的であることが知られている
。すなわち、例えば卵白アルブミンを原因抗原とする患
者のリンパ球は、卵白アルブミンで刺激した場合のみＩ
Ｌ−２反応性が誘導され、他の抗原で刺激した場合には
ＩＬ−２反応性は誘導されない。
またリンパ球のＩ Ｌ−２反応性はアレルギー性疾患の
病勢とも深い関わりを有している。すなわち、アレルギ
ー疾患患者が自然治癒していくに従ってその患者のリン
パ球のＩＬ−２反応性が減衰していくことから、リンパ
球のＩＬ−２反応性を測定することはアレルギー患者の
病勢を把握し、治療指針を企図するうえでも極めて重要
である〔臨床免疫、 １９ （Ｓｕｐｐｌ、 １２＞
、 １７０ （１９８７）。
病勢とも深い関わりを有している。すなわち、アレルギ
ー疾患患者が自然治癒していくに従ってその患者のリン
パ球のＩＬ−２反応性が減衰していくことから、リンパ
球のＩＬ−２反応性を測定することはアレルギー患者の
病勢を把握し、治療指針を企図するうえでも極めて重要
である〔臨床免疫、 １９ （Ｓｕｐｐｌ、 １２＞
、 １７０ （１９８７）。
アレルギー、３６．１０７５ （１９８７）等］。
このようにアレルギー性疾患における原因抗原の検索や
病勢の指標として有用なリンパ球のＩＬ−２反応性の測
定法としては、被検リンパ球に抗原を反応させ、次いで
該反応液をＩＬ−２を加えて培養し、これにトリバンブ
ルーを加えて生細胞数を血算板を用いて算定する方法が
あった（トリパンブルー法）〔アレルギー、３６．１０
７５（１９８７）等〕。
病勢の指標として有用なリンパ球のＩＬ−２反応性の測
定法としては、被検リンパ球に抗原を反応させ、次いで
該反応液をＩＬ−２を加えて培養し、これにトリバンブ
ルーを加えて生細胞数を血算板を用いて算定する方法が
あった（トリパンブルー法）〔アレルギー、３６．１０
７５（１９８７）等〕。
しかしながら、従来のトリパンブルー法は顕微鏡下で染
色された細胞と非染色細胞を分別して生細胞数を算定す
る方法であることから、その測定には長時間を要し、操
作が煩雑であり、かつ大量の検体を処理することができ
ないという欠点があ従って、簡便かつ迅速なリンパ球の
抗原特異的ＩＬ−２反応性の測定法の開発が望まれてい
た。
色された細胞と非染色細胞を分別して生細胞数を算定す
る方法であることから、その測定には長時間を要し、操
作が煩雑であり、かつ大量の検体を処理することができ
ないという欠点があ従って、簡便かつ迅速なリンパ球の
抗原特異的ＩＬ−２反応性の測定法の開発が望まれてい
た。
かかる実情において、本発明者は種々研究を重ねた結果
、リンパ球、抗原及びＩＬ−２を一定時間反応させた後
の生細胞数を、蛍光色素であるヨウ化プロピジウムを利
用して蛍光色素量として定量すれば、リンパ球の抗原特
異的ＩＬ−２反応性が簡便、迅速かつ正確に測定できる
ことを見出し、本発明を完成した。
、リンパ球、抗原及びＩＬ−２を一定時間反応させた後
の生細胞数を、蛍光色素であるヨウ化プロピジウムを利
用して蛍光色素量として定量すれば、リンパ球の抗原特
異的ＩＬ−２反応性が簡便、迅速かつ正確に測定できる
ことを見出し、本発明を完成した。
すなわち、本発明は被検リンパ球に抗原を反応させ、次
いで該反応液にＩＬ−２を加えて３〜４日間培養し、さ
らにヨウ化プロピジウム含有液を加えた複核培養液の蛍
光色素量を測定することを特徴とする、リンパ球の抗原
特異的ＩＬ−２反応性の測定法を提供するものである。
いで該反応液にＩＬ−２を加えて３〜４日間培養し、さ
らにヨウ化プロピジウム含有液を加えた複核培養液の蛍
光色素量を測定することを特徴とする、リンパ球の抗原
特異的ＩＬ−２反応性の測定法を提供するものである。
本発明を実施するには、まず被検リンパ球に抗原を反応
させるが、用いられるリンパ球としてはヒト末梢血リン
パ球、特に単核球画分が好ましい。
させるが、用いられるリンパ球としてはヒト末梢血リン
パ球、特に単核球画分が好ましい。
反応させる抗原としては、アレルギー性疾患患者の原因
抗原が判明している場合には、その原因抗原を用いれば
よい。一方、原因抗原が不明の場合には、種々のアレル
ゲンが用いられる。通常用いられるアレルゲンとしては
、卵白アルブミン（ＯＶＡ）、カゼイン、ダニ抗原、ス
ギ花粉抗原、ブタフサ抗原、ハウスダスト等が挙げられ
る。被検リンパ球と抗原との反応は、通常被検リンパ球
をヒト保存ＡＢ血清含有ＲＰＭＩ １６４０培地等の培
地に加え、これに抗原を添加して３７℃で５〜６日間培
養することにより行なう。
抗原が判明している場合には、その原因抗原を用いれば
よい。一方、原因抗原が不明の場合には、種々のアレル
ゲンが用いられる。通常用いられるアレルゲンとしては
、卵白アルブミン（ＯＶＡ）、カゼイン、ダニ抗原、ス
ギ花粉抗原、ブタフサ抗原、ハウスダスト等が挙げられ
る。被検リンパ球と抗原との反応は、通常被検リンパ球
をヒト保存ＡＢ血清含有ＲＰＭＩ １６４０培地等の培
地に加え、これに抗原を添加して３７℃で５〜６日間培
養することにより行なう。
次に該反応液にＩＬ−２を加えて３〜４日間培養する。
ここで用いられるＩＬ−２としては、ヒトから抽出され
たものでもよいが遺伝子組み換えＩＬ−２（ｒ−ＩＬ−
２）を用いてもよい。ＩＬ＝２の添加量は、リンパ球に
対するＩＬ−２の反応性がリンパ球２Ｘ１０５個当り０
１単位で平衡に達するた約、これ以上が好ましい。ＩＬ
−２添加後の培養は、リンパ球に対するＩＬ−２の反応
性が培養３日目にピークとなるので、３７℃３日間余と
するのが好ましい。
たものでもよいが遺伝子組み換えＩＬ−２（ｒ−ＩＬ−
２）を用いてもよい。ＩＬ＝２の添加量は、リンパ球に
対するＩＬ−２の反応性がリンパ球２Ｘ１０５個当り０
１単位で平衡に達するた約、これ以上が好ましい。ＩＬ
−２添加後の培養は、リンパ球に対するＩＬ−２の反応
性が培養３日目にピークとなるので、３７℃３日間余と
するのが好ましい。
次に培養液にヨウ化プロピジウム含有液を加えた後、該
培養液の蛍光色素量を測定する。本発明において用いる
ヨウ化プロピジウムは、蛍光色素であり、２末鎖Ｄ Ｎ
Ａに特異的に結合し、１本鎖ＤＮＡには結合しないと
いう特性を有する。一方、生細胞のＤＮＡの多くは２本
鎖であるが、死細胞ではそのほとんどが１本鎮Ｄ Ｎ
Ａとなっている。
培養液の蛍光色素量を測定する。本発明において用いる
ヨウ化プロピジウムは、蛍光色素であり、２末鎖Ｄ Ｎ
Ａに特異的に結合し、１本鎖ＤＮＡには結合しないと
いう特性を有する。一方、生細胞のＤＮＡの多くは２本
鎖であるが、死細胞ではそのほとんどが１本鎮Ｄ Ｎ
Ａとなっている。
従って、２末鎖ＤＮＡに結合した蛍光色素量を測定すれ
ば、生細胞数を容易に定量できる。
ば、生細胞数を容易に定量できる。
ヨウ化プロピジウム含有液には、ヨウ化プロピジウム以
外に細胞膜破壊剤（例えばトリトン−Ｘ）及び色素（例
えばインク）を添加するのが望ましい。細胞膜破壊剤は
細胞膜を破壊してＤＮＡをヨウ化プロピジウムと反応し
やすくするものであり、色素は未反応のヨウ化プロピジ
ウムの蛍光を減量せしとることによりバックグランドと
なる蛍光量を低下させるものである。好ましいヨウ化プ
ロピジウム含有液は、ヨウ化プロピジウム約３〜１５重
量％（好ましくは５〜１０重量％）を含有し、トリトン
−Ｘ及びバックグランド蛍光量を５％以下とする量のイ
ンクを含有するＢＤＴＡ水溶液である。
外に細胞膜破壊剤（例えばトリトン−Ｘ）及び色素（例
えばインク）を添加するのが望ましい。細胞膜破壊剤は
細胞膜を破壊してＤＮＡをヨウ化プロピジウムと反応し
やすくするものであり、色素は未反応のヨウ化プロピジ
ウムの蛍光を減量せしとることによりバックグランドと
なる蛍光量を低下させるものである。好ましいヨウ化プ
ロピジウム含有液は、ヨウ化プロピジウム約３〜１５重
量％（好ましくは５〜１０重量％）を含有し、トリトン
−Ｘ及びバックグランド蛍光量を５％以下とする量のイ
ンクを含有するＢＤＴＡ水溶液である。
ヨウ化プロピジウム含有液を添加後、遠心（例えば１１
０００ｒｐ、５分）して細胞沈渣をつくり、３７℃、約
３０分間静置後蛍光色素量を測定するのが好ましい。蛍
光色素量の測定には顕微光度計を用いるのが好ましい。
０００ｒｐ、５分）して細胞沈渣をつくり、３７℃、約
３０分間静置後蛍光色素量を測定するのが好ましい。蛍
光色素量の測定には顕微光度計を用いるのが好ましい。
得られた蛍光色素量を例えば次式の如くしてＩＬ−２非
添加群と比較することにより、ＩＬ−２反応性（Ｓｌ）
を算出することができる。
添加群と比較することにより、ＩＬ−２反応性（Ｓｌ）
を算出することができる。
ＩＬ−２反応性（ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ １ｎｄｅｘ
：Ｓｌ）〔作用及び発明の効果〕 本発明によれば、リンパ球のＩＬ−２反応性を簡便な操
作で、迅速かつ正確に測定することができる。すなわち
、従来のトリパンブルー法においては生細胞数を顕微鏡
下に直接算定するため、煩雑であるばかりでなく熟練者
が長時間を要し、大量の検体を処理することは困難であ
ったが、本発明方法では蛍光光学計を用い、通常の病院
等でも大量の検体を迅速に処理することができ、アレル
ギー疾患の原因抗原の検索及び病勢の把握が容易となっ
た。
：Ｓｌ）〔作用及び発明の効果〕 本発明によれば、リンパ球のＩＬ−２反応性を簡便な操
作で、迅速かつ正確に測定することができる。すなわち
、従来のトリパンブルー法においては生細胞数を顕微鏡
下に直接算定するため、煩雑であるばかりでなく熟練者
が長時間を要し、大量の検体を処理することは困難であ
ったが、本発明方法では蛍光光学計を用い、通常の病院
等でも大量の検体を迅速に処理することができ、アレル
ギー疾患の原因抗原の検索及び病勢の把握が容易となっ
た。
次に実施例を挙げて本発明の詳細な説明する。
実施例１
リンパ球の抗原特異的ＩＬ−２反応性の測定ヒト末梢血
より比重遠心法［５ｃａｎｄ、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｌ
ａｂ。
より比重遠心法［５ｃａｎｄ、 Ｊ、 Ｃｌ１ｎ、 Ｌ
ａｂ。
Ｉｎｖｅｓｔ、、 ２１． ５１ （１９６８） 〕
にて分離した単核細胞（ＩＸＩＯ’／ｒｒｔｆりに抗原
〔ダニ抗原（Ｏｆ 、 １０μｇ／−１鳥居薬品）〕を
加え、５艷の培養チューブ（Ｆａｌｃｏｎ）を用いて１
０％ヒトブールＡＢ血清加ＲＰＭ１１６４０培地にて、
１０％ＣＤ２条件下５．５日間培養した。培養後再度細
胞数を２ＸＩＯ５／１５０μβ／穴に調整した後、組み
換えＩＬ−２（武田薬品）０．１単位／穴添加し、９６
穴平底マイクロプレートにて前記と同様の条件で３．５
日間培養した。次いでヨウ化プロピジウム含有液５０μ
！〔各種濃度のヨウ化プロピジウム液 １５μｉ （４
，９％ＥＤＴＡ中に１ｍｇ／ｄのヨウ化プロピジウム含
有液（シグマ）を希釈して使用）、トリトンＸ−１００
（８％ｖ／ｖ 、和光紬薬）１．５−１各種濃度のイン
ク （１８１７社のｄｒａｗｉｎｇ ｉｎｋを希釈して
使用）０．１−及びＢＤＴＡ液（４，９％ＥＤＴＡ 。
にて分離した単核細胞（ＩＸＩＯ’／ｒｒｔｆりに抗原
〔ダニ抗原（Ｏｆ 、 １０μｇ／−１鳥居薬品）〕を
加え、５艷の培養チューブ（Ｆａｌｃｏｎ）を用いて１
０％ヒトブールＡＢ血清加ＲＰＭ１１６４０培地にて、
１０％ＣＤ２条件下５．５日間培養した。培養後再度細
胞数を２ＸＩＯ５／１５０μβ／穴に調整した後、組み
換えＩＬ−２（武田薬品）０．１単位／穴添加し、９６
穴平底マイクロプレートにて前記と同様の条件で３．５
日間培養した。次いでヨウ化プロピジウム含有液５０μ
！〔各種濃度のヨウ化プロピジウム液 １５μｉ （４
，９％ＥＤＴＡ中に１ｍｇ／ｄのヨウ化プロピジウム含
有液（シグマ）を希釈して使用）、トリトンＸ−１００
（８％ｖ／ｖ 、和光紬薬）１．５−１各種濃度のイン
ク （１８１７社のｄｒａｗｉｎｇ ｉｎｋを希釈して
使用）０．１−及びＢＤＴＡ液（４，９％ＥＤＴＡ 。
ｐＨ７，０，和光紬薬）７．５証より調製〕を添加し、
遠心（１０００ｒｐｍ、５分）し、３７℃、３０分間静
置した後顕微光度計（ＺＥＩＳＳ 、 ＭＰＭ−０３）
を用いて各穴中の検体の蛍光を測定することにより生細
胞数を定量した。その結果を図１及び図２に示す。その
結果、生細胞数と蛍光色素量との間には直線的正の相関
が得られ、本発明方法が生細胞数を定量するのに良好で
あることが判明した。また、測定光量を一定にして、染
色するヨウ化プロピジウム濃度とインク濃度を変化させ
た時の（図１）、あるいは細胞を添加しない場合の測定
蛍光色素量（バックグランド）を一定（１０）にした時
の（図２）測定蛍光色素量と生細胞数との関係を検討し
たところ、ヨウ化プロピジウム濃度を原液の２倍希釈（
約７重量％）、インク濃度を１０”倍希釈にしたとき、
測定値が一定となりまたその数値が大きかった（図１及
び図２）。また細胞を添加しない場合の測定蛍光色素量
（バックグランド）は全体の５％以下であった。
遠心（１０００ｒｐｍ、５分）し、３７℃、３０分間静
置した後顕微光度計（ＺＥＩＳＳ 、 ＭＰＭ−０３）
を用いて各穴中の検体の蛍光を測定することにより生細
胞数を定量した。その結果を図１及び図２に示す。その
結果、生細胞数と蛍光色素量との間には直線的正の相関
が得られ、本発明方法が生細胞数を定量するのに良好で
あることが判明した。また、測定光量を一定にして、染
色するヨウ化プロピジウム濃度とインク濃度を変化させ
た時の（図１）、あるいは細胞を添加しない場合の測定
蛍光色素量（バックグランド）を一定（１０）にした時
の（図２）測定蛍光色素量と生細胞数との関係を検討し
たところ、ヨウ化プロピジウム濃度を原液の２倍希釈（
約７重量％）、インク濃度を１０”倍希釈にしたとき、
測定値が一定となりまたその数値が大きかった（図１及
び図２）。また細胞を添加しない場合の測定蛍光色素量
（バックグランド）は全体の５％以下であった。
なあ、以下の実施例においてはヨウ化プロピジウム濃度
を原液の２倍希釈、インク濃度を１０”倍希釈とした、
ヨウ化プロピジウム含有液を用いた。
を原液の２倍希釈、インク濃度を１０”倍希釈とした、
ヨウ化プロピジウム含有液を用いた。
実施例２
抗原としてダニ抗原（Ｏｆ）の他に卵白アルブミン（Ｏ
ＶＡ、 １００ μｇ／ｍ１． シグマ）及びコン
カナバリンＡ （ＣｏｎＡ 、 ５ Ａｌ ｇ ／ｒｒ
ｄｉ！、 シグマ）を用い、添加Ｉ Ｌ −２ａ＆ヲ
０．００２５〜１．０．１位／穴１：変化させる以外は
、実施例１と同様にして蛍光を測定した。そして、次式
に従い、ＩＬ−２反応性（Ｓｒ）を算出した。
ＶＡ、 １００ μｇ／ｍ１． シグマ）及びコン
カナバリンＡ （ＣｏｎＡ 、 ５ Ａｌ ｇ ／ｒｒ
ｄｉ！、 シグマ）を用い、添加Ｉ Ｌ −２ａ＆ヲ
０．００２５〜１．０．１位／穴１：変化させる以外は
、実施例１と同様にして蛍光を測定した。そして、次式
に従い、ＩＬ−２反応性（Ｓｒ）を算出した。
ＩＬ−２反応性（Ｓｌ）
その結果、図３から明らかなようにＩＬ−２６度に応じ
て蛍光量が増加し、０．１単位／穴にてほぼ平衡状態に
達した。
て蛍光量が増加し、０．１単位／穴にてほぼ平衡状態に
達した。
よって、以下の実施例ではＩＬ−２濃度を０．１単位／
穴として行なった。
穴として行なった。
実施例３
ＩＬ−２反応性とＩＬ−２添加後の培養期間上の関係
ＩＬ−２添加後の培養期間を変化させる以外は実施例１
と同様にしてＩ Ｌ−２反応性（ＳＪ）を測定した。
と同様にしてＩ Ｌ−２反応性（ＳＪ）を測定した。
その結果、ＩＬ−２添加後３日目において最大の染色色
素量（Ｉ Ｌ−２反応性）を示した（図４）。
素量（Ｉ Ｌ−２反応性）を示した（図４）。
よってＩＬ−２反応性の評価は工Ｌ−２添加後３日目が
適している。
適している。
実施例４
ＩＬ−２非添加時色素量−組胞非添加時色素量各種アレ
ルギー患者のリンパ球を用いて、実施例１と同様にして
ＩＬ−２反応性（Ｓｌ）を測定した。その結果を表１及
び図５に示す。なお、抗原としては、ダニ抗原（Ｄｆ）
、卵白アルブミン（ＯＶＡ）、コンカナバリンＡ （
ＣｏｎＡ）及びカゼイン（αＣａ５ｅｉｎ 、 １００
μｇ／−，シグマ）を用いた。
ルギー患者のリンパ球を用いて、実施例１と同様にして
ＩＬ−２反応性（Ｓｌ）を測定した。その結果を表１及
び図５に示す。なお、抗原としては、ダニ抗原（Ｄｆ）
、卵白アルブミン（ＯＶＡ）、コンカナバリンＡ （
ＣｏｎＡ）及びカゼイン（αＣａ５ｅｉｎ 、 １００
μｇ／−，シグマ）を用いた。
また、表１には抗原特異性を示すＩｇＥ ＲＡＳＴ値も
示した。ＩｇＥ ＲＡＳＴ値は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアレ
ルゲン検索用キット、ＲＡＳＴジオツギアイソトープ試
薬を用いて測定した。
示した。ＩｇＥ ＲＡＳＴ値は、ｉｎ ｖｉｔｒｏアレ
ルゲン検索用キット、ＲＡＳＴジオツギアイソトープ試
薬を用いて測定した。
以下余白
その結果、Ｃｏｎ＾で刺激した場合はＳｌが２．０１±
０．２３ （ＳＥ）（ｎ＝１０）のＩＬ−２反応性が得
られた。
０．２３ （ＳＥ）（ｎ＝１０）のＩＬ−２反応性が得
られた。
卵アレルギー患者末梢血リンパ球を用いてＯＶＡ刺激に
て誘導されるＩＬ−２反応性（Ｓｌ）は、１．９１±０
．１４ （ｎ ＝ ６ ） Ｆアッタ。り＝１．：８
作されている小児気管支喘息児末梢血リンパ球を用いて
０［刺激により誘導されるＩＬ−２反応性（Ｓｒ）は、
１．６９±０．１０（ｎ＝６）であった。これに対し、
健康人のリンパ球ではこれらのＯＶＡ、 Ｏｆで刺激し
た場合ＩＬ−２反応性は１．０５±０．０２ （ＳＥ）
（ｎ＝ｉｏ＞で反応の誘導は認められなかった。
て誘導されるＩＬ−２反応性（Ｓｌ）は、１．９１±０
．１４ （ｎ ＝ ６ ） Ｆアッタ。り＝１．：８
作されている小児気管支喘息児末梢血リンパ球を用いて
０［刺激により誘導されるＩＬ−２反応性（Ｓｒ）は、
１．６９±０．１０（ｎ＝６）であった。これに対し、
健康人のリンパ球ではこれらのＯＶＡ、 Ｏｆで刺激し
た場合ＩＬ−２反応性は１．０５±０．０２ （ＳＥ）
（ｎ＝ｉｏ＞で反応の誘導は認められなかった。
またダニ抗原感作のすすんでいない卵アレルギー患者の
末梢血リンパ球をＯｆで刺激した場合にもＩＬ−２反応
性は誘導されなかった。一方卵に感作されていない気管
支喘息小児ではＯＶＡで刺激した場合ＩＬ−２反応性同
様に誘導されなかった。
末梢血リンパ球をＯｆで刺激した場合にもＩＬ−２反応
性は誘導されなかった。一方卵に感作されていない気管
支喘息小児ではＯＶＡで刺激した場合ＩＬ−２反応性同
様に誘導されなかった。
また牛乳により症状の出現する症例においてもα−ｃａ
ｓｅｉｎで刺激した場合に特異的にＩＬ−２反応性の誘
導が認められた。よって特異抗原刺激リンパ球において
誘導されるＩＬ−２反応性は本発明方法で測定した場合
、抗原特異的である。
ｓｅｉｎで刺激した場合に特異的にＩＬ−２反応性の誘
導が認められた。よって特異抗原刺激リンパ球において
誘導されるＩＬ−２反応性は本発明方法で測定した場合
、抗原特異的である。
比較例
トリバンブルー法を用いたリンパ球のＩＬ−２反応性の
測定 比重遠心法にて分離した単核細胞（ＩＸＩＯ’／−）に
１００μｇ／ｍｆのＯＶＡあるいは１０／−１ｇ／ｒｄ
Ｏｆを添加し、５ｄの培養チューブを用いて１０％ヒ
トブールＡＢ血清加ＲＰＭＩ １６４０にて５日間培養
後、再度細胞数を２Ｘ１０’１０．２ｍｊ！に調製した
のち、組み換えＩＬ−２（式日）を添加し、９６穴平底
マイクロプレート （ヌンク）にて３日間培養後、測定
直前に１％トリパンブルー５０μｌを添加し、よく攪拌
後顕微鏡下に生細胞数を血算板にて算定した（生細胞数
の比率は９０％以上）。ｒＬ−２反応性の評価として、
ＩＬ−２非添加群との比率をＳＩとして求めた。
測定 比重遠心法にて分離した単核細胞（ＩＸＩＯ’／−）に
１００μｇ／ｍｆのＯＶＡあるいは１０／−１ｇ／ｒｄ
Ｏｆを添加し、５ｄの培養チューブを用いて１０％ヒ
トブールＡＢ血清加ＲＰＭＩ １６４０にて５日間培養
後、再度細胞数を２Ｘ１０’１０．２ｍｊ！に調製した
のち、組み換えＩＬ−２（式日）を添加し、９６穴平底
マイクロプレート （ヌンク）にて３日間培養後、測定
直前に１％トリパンブルー５０μｌを添加し、よく攪拌
後顕微鏡下に生細胞数を血算板にて算定した（生細胞数
の比率は９０％以上）。ｒＬ−２反応性の評価として、
ＩＬ−２非添加群との比率をＳＩとして求めた。
図面である。
同一の検体について、本発明方法（実施例１の方法）と
トリバンブルー法にてＩＬ−２反応性を求めた結果を、
図６に示す。その結果、本発明方法とトリバンブルー法
とはその値がよく一致した。
トリバンブルー法にてＩＬ−２反応性を求めた結果を、
図６に示す。その結果、本発明方法とトリバンブルー法
とはその値がよく一致した。
図１は、実施例１においてヨウ化ピリジニウム（Ｐｉ）
及びインク（ｉｎｋ）の濃度を変化させた場合の生細胞
数と蛍光色素量との関係を示す図面である。 図２は実施例１において、細胞を添加しない場合の測定
蛍光色素量（バックグランド）を一定（１０）にしたと
きの生細胞数と蛍光色素量との関係を示す図面である。 図３は添加Ｉ Ｌ−２濃度とＩＬ−２反応性（ＳＩ）と
の関係を示す図面である。
及びインク（ｉｎｋ）の濃度を変化させた場合の生細胞
数と蛍光色素量との関係を示す図面である。 図２は実施例１において、細胞を添加しない場合の測定
蛍光色素量（バックグランド）を一定（１０）にしたと
きの生細胞数と蛍光色素量との関係を示す図面である。 図３は添加Ｉ Ｌ−２濃度とＩＬ−２反応性（ＳＩ）と
の関係を示す図面である。
Claims (1)
- 【特許請求の範囲】 １、被検リンパ球に抗原を反応させ、次いで該反応液に
インターロイキン−２を加えて３〜４日間培養し、さら
にヨウ化プロピジウム含有液を加えた後該培養系の蛍光
色素量を測定することを特徴とする、リンパ球の抗原特
異的インターロイキン−２反応性の測定法。２、ヨウ化
プロピジウム含有液添加後遠心して培養細胞を沈めたの
ち、得られた培養液を約３０分間静置した後蛍光色素量
を測定するものである請求項１記載のリンパ球の抗原特
異的インターロイキン−２反応性の測定法。 ３、インターロイキン−２の添加量が、リンパ球２×１
０＾５個当り０．１単位以上である請求項１記載のリン
パ球の抗原特異的インターロイキン−２反応性の測定法
。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2186163A JP2561170B2 (ja) | 1990-07-13 | 1990-07-13 | リンパ球の抗原特異的インターロイキンー２反応性の測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2186163A JP2561170B2 (ja) | 1990-07-13 | 1990-07-13 | リンパ球の抗原特異的インターロイキンー２反応性の測定法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH0472563A true JPH0472563A (ja) | 1992-03-06 |
| JP2561170B2 JP2561170B2 (ja) | 1996-12-04 |
Family
ID=16183492
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2186163A Expired - Fee Related JP2561170B2 (ja) | 1990-07-13 | 1990-07-13 | リンパ球の抗原特異的インターロイキンー２反応性の測定法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2561170B2 (ja) |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01210863A (ja) * | 1988-01-28 | 1989-08-24 | Innofinance Altalanos Innovacios Penzintezet | 精子細胞計数および生存精子細胞の比率、あるいは、これらいずれか一方の高速定量方法ならびにその装置 |
-
1990
- 1990-07-13 JP JP2186163A patent/JP2561170B2/ja not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH01210863A (ja) * | 1988-01-28 | 1989-08-24 | Innofinance Altalanos Innovacios Penzintezet | 精子細胞計数および生存精子細胞の比率、あるいは、これらいずれか一方の高速定量方法ならびにその装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2561170B2 (ja) | 1996-12-04 |
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
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